KR20150017777A

KR20150017777A - 안정성이 강화된 약학 조성물

Info

Publication number: KR20150017777A
Application number: KR1020157002423A
Authority: KR
Inventors: 유화 리; 벤자민 치엔
Original assignee: 포시에이서 파마슈티컬스 인코포레이티드
Priority date: 2006-01-18
Filing date: 2007-01-16
Publication date: 2015-02-17
Also published as: HK1126975A1; CN101400363B; US20190231881A1; MX2008009125A; CA2637569C; US20170119842A1; EP1984009A2; RU2427383C2; US9744207B2; JP5242415B2; US10251956B2; ES2397712T3; SI1984009T1; KR101728868B1; US20070196416A1; JP2009523798A; CA2637569A1; US9572857B2; RU2008129201A; EP1984009B1

Abstract

본 발명은 펩타이드 약제용 조절 방출 전달계로서 유용한 안정화된 생분해성 중합체 조성물을 제공한다. 본 발명의 상기 조성물은 a) 유기 용액 중에서 상기 펩타이드 약제 및 중합체간의 상호 작용/반응을 최소화 또는 방지하는 강산을 사용하여 형성시킨 펩타이드 약제의 유익한 염, b) 생분해성 중합체, c) 약학적으로 허용되는 유기 용매 및 d) 필요에 따라, 1종 이상의 부형제를 함유한다. 본 발명은 상기 조성물의 제조 방법 및 사용 방법에도 역시 관련이 있다.

Description

안정성이 강화된 약학 조성물 {PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS WITH ENHANCED STABILITY}

최근 수 년 동안, 다수의 다양한 펩타이드, 올리고펩타이드, 폴리펩타이드 등의 펩타이드 약제 및 단백질이 발견되었고, 약물 후보로서 큰 주목을 받아 왔다. 그러나, 다수의 펩타이드 약제는 생체내에서 효소에 의하여 쉽게 가수 분해 또는 분해되기 때문에 불안정하고, 그 결과 순환 반감기가 매우 짧다. 그러므로, 펩타이드 의약의 대부분은 주사에 의하여 일반적으로 1 일 수 회 투여되어 왔다.

그러나, 주사 투여는 고통스럽고 매우 고비용이며 불편하다. 대개의 경우에, 환자의 수용(受容) 상태는 매우 힘든 일이다. 다수의 펩타이드 약제, 특히 호르몬제에 있어서, 상기 약물은 장기간에 걸쳐 조절된 속도로 지속적으로 전달될 필요가 있고, 따라서 조절 방출 전달계가 요망된다. 이러한 전달계는 상기 펩타이드 약제를 생분해성 및 생체 적합성인 중합체 기질에 혼입시킴으로써 제공될 수 있다. 한 가지 접근에 있어서, 상기 중합체를 유기 용매에 용해시킨 다음, 상기 펩타이드 약제와 혼합하고 상기 유기 용매를 제거함으로써 마이크로 캡슐형, 미세 과립형 또는 체내 삽입형 막대형으로 제조한다. 상기 펩타이드 약제는 상기 중합체 기질 내부에 포획된다. 생분해성 중합체를 마이크로 입자형 또는 고체의 막대 삽입물형으로 사용함으로써 루프론 (Lupron), 졸라덱스 (Zoladex), 트립토렐린 (Triptorelin) 등의 몇 가지 제품이 성공적으로 개발되었다. 이들 제품이 효율적인 것처럼 보이지만, 마이크로 입자를 위한 큰 부피의 현탁액, 고체 삽입물의 외과 수술 삽입 등의 단점 및 한계가 있다. 이들 제품은 그다지 환자 친화적이지 못하다. 그 밖에, 무균성 및 재현성 제품을 생산하는 제조 공정이 복잡하여서, 그 결과 높은 제조 비용이 발생한다. 조성물을 용이하게 제조 및 사용할 수 있도록 하는 것이 강하게 요망된다.

또 다른 접근 방식에 있어서, 상기 생분해성 중합체 및 펩타이드 약제는 생체 적합성 유기 용매에 용해되어서 액체 조성물을 형성한다. 이 액체 조성물이 체내에 주사되는 경우, 상기 용매는 주변의 수용성 환경으로 방산(放散)되고, 상기 중합체는 고체 또는 겔 데포 (depot)를 형성하는데, 이 데포로부터 생체 활성 약제가 장기간에 걸쳐 방출된다. 다음의 참고 문헌, 미국 특허 제6,565,874호, 제6,528,080호, 제RE37, 950호, 제6,461,631호, 제6,395,293호, 제6,355,657호, 제6,261,583호, 제6,143,314호, 제5,990,194호, 제5,945,115호, 제5,792,469호, 제5,780,044호, 제5,759,563호, 제5,744,153호, 제5,739,176호, 제5,736,152호, 제5,733,950호, 제5,702,716호, 제5,681,873호, 제5,599,552호, 제5,487,897호, 제5,340,849호, 제5,324,519호, 제5,278,202호, 제5,278,201호 및 제4,938,763호는 이 분야에서 대표적인 것으로 믿어지고 있으며, 이는 본 명세서에 참고 문헌으로서 포함된다. 약간의 성공에도 불구하고, 상기 방법은 그러한 접근 방식에 의하여 효율적으로 전달될 수도 있는 대다수의 펩타이드 약제에 대하여 전적으로 만족스럽지는 못하였다.

염기성 작용기를 함유하는 생체 활성 약제는 생분해성 중합체와 상호 반응하여 상기 중합체의 분해를 촉진 (또는 진척)시키고 상기 중합체 및/또는 그의 분해 생성물과 접합체를 형성한다는 사실은 이 기술 분야에서 충분히 인식되고 있다. 상기 염기성의 생체 활성 약제 및 중합체 담체간의 상호 작용/반응은 1) 마이크로 캡슐화, 사출 성형, 압출 성형, 유기 용매 중에서 중합체 용액과의 혼합 등과 같이, 상기 염기성의 생체 활성 약제를 상기 중합체 담체 중에 배합하는 제제화 중, 2) 보관 중 및 3) 생체내에서의 생분해 과정 및 생체 활성 약제의 방출 중에 일어난다.

펩타이드 약제와 생분해성 중합체의 분해 및 이들간의 반응은 일반적으로 건조, 고체 상태 중에서보다 용액 중에서 훨씬 신속하게 일어난다는 사실이 알려져 있다. 생체 활성 약제 및 중합체를 비극성 유기 용매 중으로 용해/분산시키는 용매 증발법/추출법을 사용하는 상기 마이크로 입자 제조 공정 중의 염기성 작용기, 즉 아민을 함유하는 생체 활성 약제와 중합체간의 상호 작용/반응이 개시되어 있다 [Krishnan M. and Flanagan DR ., J Control Release . 2000 Nov 3; 69(2): 273-81]. 상당량의 아미드 모이어티가 형성되었다. 생분해성 중합체 약물 전달계의 제조를 위하여 일반적으로 사용되는 용매는 생체 활성 약제와 중합체 간의 신속한 반응을 허용한다는 사실은 분명하게 나타났다. 또 다른 발명에 있어서, 극성의 양성자성 유기 용매 (예컨대, 메탄올) 중에서 유기 아민에 의하여 중합체의 분해가 가속된다는 사실도 역시 보고되었다 [Lin WJ , Flanagan DR , Linhardt RJ . Pharm Res . 1994 Jul;11(7):1030-4 ].

상기 조절 방출 전달계는 일반적으로 펩타이드 약제를 유기 용매 중의 중합체 용액으로 용해/분산시키는 단계를 포함하는 공정을 통하여 제조되기 때문에, 이 공정에서 상기 조성물의 모든 성분을 안정화시키는 것이 매우 중요한 제제상의 도전 과제이다. 용액 상태 또는 현탁액 상태의 펩타이드 약제 및 생분해성 중합체의 제조 및 저장 안정성에 대한 도전을 극복하는 데 사용되어 온 한 가지 일반적인 접근 방식은 상기 펩타이드 약제 및 중합체 용액을 2개의 분리된 용기에 유지시키고 사용 직전에 이들을 혼합하는 것이다. 이는 상기 유기 용매가 상기 펩타이드 약제 및 중합체 용액의 혼합 후에 확산, 추출 또는 증발을 통하여 중합체 기질로부터 신속하게 분리될 수 있다는 것을 전제로 한다. 전립선암 치료용으로 시판되고 있는 제품 엘리가드 (Eligard^®)와 관련이 있는 아세트산류프롤리드의 중합체 전달 제제를 설명하고 있는 미국 특허 제6,565,874호 및 제6,773,714호에 그 예가 개시되어 있다. 상기 제제의 안정성을 유지시키기 위하여, 이 제품은 별도의 주사기 중에 공급되고 그 주사기 중의 내용물은 사용 직전에 혼합된다. 그러나, 상기 중합체 제제의 점성 특성 때문에, 대다수의 경우에 최종 사용자가 2개의 분리된 주사기 중의 내용물을 혼합하는 것은 곤란하다. 상기 제제를 최종 소비자가 제조하는 경우에, 그 균일성은 현저하게 가변적이고 오염도 역시 발생하여서, 치료의 질이 심각하게 손상될 수 있다. 그 밖에, 이 접근법은 혼합 및 투여 중에 일어나는 상기 펩타이드 약제 및 중합체간의 상호 작용을 방지하지 못하게 된다. 미국 출원 제20060034923 A1호에 개시되어 있는 바와 같이, 아세트산옥트레오티드를 NMP 중에서 폴리락티드-코-글리콜리드 용액과 혼합하는 경우, 40% 이상의 옥트레오티드가 5 시간 내에 아실화되었다. 이러한 펩타이드의 개질은 활성의 현저한 손실 또는 면역원성(免疫原性)의 변화를 초래할 수 있다. 동일한 기간 내에 상기 중합체의 분자량도 역시 현저하게 감소되었다.

펩타이드 및 중합체의 이러한 신속한 분해로 인하여 펩타이드의 방출 특성이 변화되고, 그 결과 치료 결과가 손상되게 된다. 그러므로, 상기 조제 공정 및 시간에 있어서 정밀한 제어가 중요하고, 이로 인하여 최종 사용자에게 어려움이 현저하게 증가한다. 더욱이, 주사용 중합체 조성물로부터의 삽입물의 생체내 형성은 즉각적이지 않다. 일반적으로 사용되는 용매에 따라서 용매 방산 과정에 수 시간 내지 수 일이 소요될 수 있다. 이 기간 중에, 유기 용매의 존재로 인하여 상기 펩타이드 약제와 중합체간의 상호 작용/반응이 진척될 수도 있다. 그러므로, 유기 용액 중에서 상기 펩타이드와 중합체간의 상호 작용/반응을 최소화 또는 방지할 수 있는 약학 조성물을 개발할 필요가 있다. 또한, 저장 수명이 만족스러운 안정한 약학 조성물을 즉석 사용 가능한 제품 형태로 개발할 필요가 있다.

발명의 요약

놀랍게도, 펩타이드 약제를 강산(예컨대, 염산)을 사용하여 형성시킨 염의 형태로 함유하는 주사용 생분해성 중합체 조성물이 약산 (예컨대, 아세트산)을 사용하여 형성시킨 염의 형태 또는 유리 염기의 형태의 것들보다 훨씬 더 높은 안정성을 나타낸다는 사실이 발견되었다. 펩타이드 약제의 이들 유익한 염은 그 펩타이드 약제의 어떠한 염기성 기를 강산을 사용하여 중성화시킴으로써 형성될 수 있다. 강산을 사용하여 형성시킨 펩타이드 약제의 이들 유익한 염이 주사용의 생분해성 중합체 조성물로 제제되는 경우, 상기 펩타이드 약제와 중합체간의 상호 작용/반응은 최소화 또는 방지된다. 강산을 사용하여 형성시킨 펩타이드 약제의 이들 유익한 염을 사용하면 즉석 사용 가능한 형태의 단일의 주사기 중에 미리 충전되어도 만족스러운 저장 안정성을 나타내는 안정화된 주사용 조성물의 제조가 가능하게 된다. 상기 주사용 중합체 조성물의 안정성을 증진시키기 위한 본 발명의 강산을 사용하여 형성시킨 펩타이드 약제의 염을 사용하는 것은 선행 기술에 의하여 예상되지 않는다.

따라서, 본 발명은 펩타이드 약제의 경제적, 실용적 및 효율적인 조절 방출 전달계를 위한 안정화된 주사용 생분해성 중합체 조성물을 제공한다. 본 발명은 상기 조성물의 제조 방법 및 사용 방법도 역시 제공한다. 본 발명에 따르면, 상기 약물 전달계는 쉽게 제조되어서 포유류 또는 인간 등의 개체에게 간편하게 전달된다. 상기 조성물은 치료량의 펩타이드 약제를 목적하는 장기간, 좋기로는 수 주 내지 1 년에 걸쳐 방출한다. 상기 조성물은 생체 적합성 및 생분해성이어서 투여량의 펩타이드 약제를 전달한 후 무해하게 소멸된다.

본 발명에 따른 상기 조성물은 a) 강산을 사용하여 형성시킨 펩타이드 약제의 유익한 염으로서, 유기 용액 중에서 상기 펩타이드 약제와 중합체간의 상호 작용/반응을 최소화 또는 방지하는 펩타이드 약제의 유익한 염, b) 생분해성 중합체, c) 약학적으로 허용 가능한 유기 용매를 함유한다. 본 발명에 따르면, 상기 약학 조성물은 필요에 따라 상기 펩타이드 약제의 최적의 전달을 달성하기 위하여 부형제를 함유할 수 있다. 상기 약학 조성물은 점성 또는 비점성의 액체형, 겔형 또는 유체로서 이동하는 반고체형이어서 주사기를 사용하여 주입될 수 있다. 상기 약학 조성물은 1개의 주사기에 미리 충전되어서 즉석 사용 가능한 형태의 제품을 형성할 수 있다.

본 발명의 상기 펩타이드 약제는 1종 이상의 염기성 기를 함유한다. 상기 펩타이드 약제는 동물 또는 인간에 있어서 생물학적, 생리학적 또는 치료적 효과를 제공할 수 있는 임의의 펩타이드, 올리고펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질일 수 있다. 상기 펩타이드 약제는 본 명세서에 인용되어 있는 임의의 문헌 중에 승인되어 있거나 또는 이 기술 분야에서 승인되어 있는 기지의 생물학적으로 활성인 펩타이드, 올리고펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질 중의 어느 1종 이상일 수 있다. 상기 펩타이드 약제는 면역성 또는 면역학적 반응을 자극하는 것을 비롯하여 (이에 한정되는 것은 아니다) 동물 또는 인간 내부에서 목적하는 생물학적 또는 생리학적 활성을 자극 또는 억제할 수 있는 것이다.

본 발명의 한 가지 실시 상태에 따르면, 상기 펩타이드 약제는 1차 아민이 아닌 N-말단을 함유한다 (예컨대, 류프로렐린, 고세렐린 등의 LHRH 작용제, 세트로렐릭스, 엔푸비르티드, 티모신 α1, 아바렐릭스 등의 LHRH 길항제 등). 본 발명의 또 다른 실시 상태에 있어서, 상기 펩타이드 약제는 PEG화, 아실화 등을 통하여 형성될 수 있는 친수성 및/또는 지용성 부분들에 의하여 공유적으로 개질된 N-말단의 1차 아민기 또는 측쇄의 1차 아민기 중의 어느 하나를 함유한다. 그 밖에, 상기 펩타이드 약제의 N-말단의 1차 아민기 및 측쇄의 1차 아민기의 양자는 모두 PEG화, 아실화 등을 통한 친수성 및/또는 지용성 부분들에 의하여 동시에 공유적으로 개질될 수도 있다.

상기 강산은 물에서 pKa가 3 이하, 좋기로는 0 이하, 더 좋기로는 -3 이하인 임의의 산일 수 있다. 예를 들면, 강산은 염산, 브롬화수소산, 황산, 유기 황산, 탄소 원자가 1~40개인 알킬 황산, 질산, 크롬산, 메탄 술폰산, 트리플루오로메탄 술폰산, 유기 술폰산, 트리클로로아세트산, 디클로로아세트산, 브로모아세트산, 클로로아세트산, 시아노아세트산, 2-클로로프로피온산, 2-옥소부탄산, 2-클로로부티르산, 4-시아노부티르산, 과염소산, 인산, 요오드화수소 등으로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 생분해성 중합체는 임의의 생체 적합성 및 약학적으로 허용 가능한 중합체일 수 있다. 상기 생분해성 중합체는 열가소성이어서 가열시 용융되고 냉각시 응고될 수 있다. 본 발명의 생분해성 중합체는 수용액 또는 체액 중에서는 실질적으로 불용성이지만 물과 혼화성인 유기 용매 중에서 실질적으로 용해 또는 분산되어 용액 또는 현탁액을 형성하는 것이 가능하다. 수용성 유체와 접촉시, 상기 물과 혼화성인 유기 용매는 본 발명의 조성물로부터 확산/방산되어서 상기 중합체의 응고를 유발하고, 상기 펩타이드 약제를 포획하는 겔 또는 고체의 기질이 형성된다. 본 발명의 조성물에 적합한 상기 중합체의 예로서는 폴리락티드류, 폴리글리콜리드류, 폴리카프로락톤류, 폴리안히드라이드류, 폴리우레탄류, 폴리에스테르아미드류, 폴리오르토에스테르류, 폴리디옥사논류, 폴리아세탈류, 폴리케탈류, 폴리카르보네이트류, 폴리오르토카르보네이트류, 폴리포스파젠류, 폴리히드록시부트레이트류, 폴리히드록시발레레이트류, 폴리알킬렌 옥살레이트류, 폴리알킬렌 숙시네이트류, 폴리(말산), 폴리(말레산 무수물) 및 공중합체류, 삼량체류, 또는 이들의 배합물 또는 혼합물을 들 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다. 락트산류의 중합체 및 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드) 및 폴리(L-락티드-코-글리콜리드)를 비롯한 락트산과 글리콜산의 공중합체 (PLGA)는 본 발명에서 양호하게 사용된다. 몇 가지 실시 상태에 있어서, 상기 PLGA 중합체는 무게 평균 분자량이 약 2.000 내지 약 100,000이고 락트산:글리콜산의 단량체 비율이 약 50:50 내지 약 100:0 범위이다.

상기 약학적으로 허용 가능한 유기 용매는 N-메틸-2-피롤리돈, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 알콕시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 에스테르, 글리코푸롤, 글리세롤 포르말, 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 메틸 에틸 케톤, 디메틸포르마미드, 디메틸 술폭사이드, 테트라히드로푸란, 카프로락탐, 데실메틸술폭사이드, 벤질 벤조에이트, 에틸 벤조에이트, 트리아세틴, 디아세틴, 트리부티린, 트리에틸 시트레이트, 트리부틸 시트레이트, 아세틸 트리에틸 시트레이트, 아세틸 트리부틸 시트레이트, 트리에틸글리세리드, 트리에틸포스페이트, 디에틸 프탈레이트, 디에틸 타르트레이트, 에틸 락테이트, 프로필렌 카르보네이트, 에틸렌 카르보네이트, 부티로락톤 및 1-도데실아자시클로-헵탄-2-온 및 이들의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명에 따르면, 본 발명의 조성물에 1종 이상의 부형제를 배합하여 상기 펩타이드 약제를 최적하게 전달할 수 있다. 적절한 부형제로서는 방출 속도 조절제, 급방출 효과 저하 물질, 완충 물질, 항산화제 등을 들 수 있다.

본 발명에 따르면, 적절한 방출 속도 조절제에는 알칸카르복시산, 올레산, 알킬 알코올, 극성 지질, 표면 활성제, 폴리에틸렌글리콜과 폴리락티드의 공중합체 또는 폴리(락티드-코-글리콜리드), 폴록사머, 폴리비닐피롤리돈, 폴리소르베이트 등의 양친매성 화합물 또는 공중합체; 2-에톡시에틸 아세테이트, 트리에틸 시트레이트, 아세틸 트리부틸 시트레이트, 아세틸 트리에틸 시트레이트, 글리세롤 트리아세테이트, 디(n-부틸) 세베케이트 등의 모노-, 디- 및 트리카르복시산의 에스테르; 폴리에틸렌 글리콜, 소르비톨 등의 폴리히드록시 알코올; 지방산; 트리글리세리드, 중사슬 트리글리세리드 예컨대, 미글리올 (MIGLYOL) 810, 812, 818, 829, 840 등의 글리세롤의 트리에스테르가 포함되는데, 이에 한정되는 것은 아니다. 속도 조절제의 혼합물도 역시 본 발명의 중합체계에 사용될 수 있다.

본 발명에 따르면, 적절한 완충제로서는 탄산칼슘, 수산화칼슘, 미리스트산칼슘, 올레산칼슘, 팔미트산칼슘, 스테아르산칼슘, 인산칼슘, 탄산마그네슘, 수산화마그네슘, 인산마그네슘, 미리스트산마그네슘 올레산마그네슘, 팔미트산마그네슘, 스테아르산마그네슘, 탄산아연, 수산화아연, 미리스트산아연, 올레산아연, 팔미트산아연, 스테아르산아연, 인산아연 및 이들의 혼합물을 비롯한 무기염 및 유기염을 들 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 따르면, 적절한 항산화제로서는 d-알파 토코페롤 아세테이트, 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니돌, 부틸화 히드록시아니솔, 부틸화 히드록시퀴논, 히드록시코마린, 부틸화 히드록시톨루엔, 에틸 갈레이트, 프로필 갈레이트, 옥틸 갈레이트, 라우릴 갈레이트, 프로필히드록시벤조에이트, 트리히드록시부틸로페논, 비타민 E, PEG화 비타민 E, 또는 비타민 E-TPGS 등을 들 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 상기 조성물의 제조 방법 및 사용 방법도 역시 제공한다. 예를 들면, 상기 조성물의 제조 방법은 펩타이드 약제의 염기성 아민기를 중성화시켜서 상기 염기성 아민기가 중합체와 상호 작용/반응하는 것을 최소화 또는 방지하는 유익한 염을 형성하는 공정과 상기 유익한 염을 기타의 화합물, 필요에 따라 1종 이상의 부형제와 혼합하는 공정을 포함한다. 좋기로는, 상기 펩타이드 약제의 유익한 염을 먼저 형성시킨 다음, 이를 유기 용매에 용해되어 있는 중합체와 배합한다. 상기 조성물은 마이크로 입자 형성 또는 기타의 삽입형 기질 형성 등의 조절 전달계의 제조 공정 전 및 공정 도중에 이화학적으로 안정하다. 좋기로는, 상기 주사용 조성물은 제조, 보관 및 후속되는 개체에 대한 투여 중에 이화학적으로 안정하고 조직 부위에 투여시 일관되고 조절된 방출 삽입물을 형성한다.

본 발명은 일관되고 조절된 방출 데포계를 형성하는 주사용 조성물 투여용 키트도 역시 제공하는데, 이 키트에는 약학적으로 허용 가능한 용매 중에 용해되어 있는 생분해성 중합체, 중합체 비히클 중에 용해 또는 분산되어 있는 강산을 사용하여 형성시킨 1종 이상의 염기성 아민기를 함유하는 펩타이드 약제의 유익한 염 및 필요에 따라 1종 이상의 부형제가 포함되어 있다. 상기 모든 성분의 균일 혼합물은 1개의 용기에 포장된다. 상기 용기는 주사기인 것이 좋다. 따라서, 본 발명은 주사기를 상기 조성물로 충전하여 즉석 사용 가능한 형태의 안정한 제품을 제조하는 공정을 포함하는 방법도 역시 제공한다.

본 발명은 개체 중에서 상기 펩타이드 약제의 조절 방출 전달계로서 작용할 수 있는 삽입물을 정위치에 형성시키는 방법을 더 제공한다. 상기 펩타이드 약제는 좋기로는 정위치에 형성된 삽입물에 혼입되고, 이어서 상기 중합체가 분해됨에 따라 주위의 조직액 및 관련 신체 조직 또는 기관으로 방출된다. 이 방법은 액체를 주입하는 적절한 임의의 방법, 예컨대 주사, 침, 삽입관, 카테터, 압력 인가 장치 등의 수단에 의하여 본 발명의 주사용 조성물을 삽입물 부위로 투여하는 공정을 포함한다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 펩타이드 약제에 대한 경제적, 실용적 및 효율적인 조절 방출 전달계를 형성하기 위한 안정화된 주사용 생분해성 중합체 조성물을 제공한다. 본 발명은 상기 조성물의 제조 방법 및 사용 방법도 역시 제공한다.

본 발명의 조성물은 a) 유기 용액 중에서 펩타이드 약제와 중합체가 상호 작용/반응하는 것을 최소화 또는 방지하는, 강산을 사용하여 형성시킨 펩타이드 약제의 유익한 염, b) 생분해성 중합체 및 c) 약학적으로 허용 가능한 유기 용매를 함유한다. 본 발명에 따르면, 상기 약학 조성물은 펩타이드 약제의 최적의 전달을 달성하기 위하여 필요에 따라 1종 이상의 부형제를 포함할 수 있다. 본 발명의 주사용 중합체 조성물은 점성 또는 비점성 액체형, 겔형 또는 유체로서 이동하는 반고체형이어서 주사기를 사용하여 주입할 수 있다. 상기 주사용 중합체 조성물은 1개의 주사기에 미리 충전되어서 즉석 사용 가능한 형태의 제품 키트를 형성할 수 있다.

본 발명의 조절 방출 전달계는 생체내 삽입형 중합체 기질로서 형성될 수 있고, 또는 별법으로서, 겔형 또는 고체 삽입물형으로 정위치에 형성될 수 있다. 개체에 투입되는 경우, 상기 펩타이드 약제의 조절 방출은 상기 삽입물의 조성에 의존하여 목적하는 시간 동안 유지될 수 있다. 상기 생분해성 중합체 및 기타 성분의 선택에 따라 상기 펩타이드 약제의 방출 지속 기간이 수 주 내지 1 년의 기간으로 조절될 수 있다.

본 명세서에 사용되는 "1개"라는 용어는 "1개 또는 그 이상" 및 "최소한 1개"로 해석되는 것을 의미한다.

본 명세서에 사용되는 "안정화"라는 용어는 생존 가능한 제품을 개발하는 데 요구되는 안정한 상태를 달성하기 위하여 필요한, 상기 주사용 중합체 조성물 중의 성분의 안정성에 있어서의 상당한 개선을 의미한다. "안정화 주사용 중합체 조성물"이라는 용어는, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 상기 구성 성분, 예컨대 상기 조성물의 중합체 및 펩타이드 약제가 적절한 조건하에 제조 공정 중에 그리고 장기간, 예컨대 수 개월 내지 수 년, 좋기로는 12 개월 이상의 보관 후에 그들의 원래 분자량, 구조 및/또는 생물학적 활성을 80% 이상, 좋기로는 90% 이상 유지하는 것을 의미한다.

본 명세서에서 사용되는 "조절 방출 전달"이라는 용어는 투여 후의 목적하는 연장된 기간, 좋기로는 최소한 수 주 내지 1 년에 걸친 생체내에서의 펩타이드 약제의 전달을 의미하려는 것이다.

본 명세서에서 사용되는 "펩타이드 약제"라는 용어는 본 명세서에서 호환적으로 사용되고 있는 "펩타이드", "올리고펩타이드" 및 "폴리펩타이드" 또는 "단백질"로서 일반적으로 언급되는 폴리(아미노산)을 포함하는 의미이다. 이 용어는 펩타이드 약제의 유사체, 유도체, 아실화 유도체, 당화(糖化) 유도체, PEG화 유도체, 융합 단백질 등도 역시 포함한다. 상기 "염기성 펩타이드 약제"는 염기성 아미노산, 예를 들어 아르기닌 또는 리신의 존재로부터 발생하는, 또는 상기 펩타이드 약제의 N-말단으로부터 발생하는 천연 상태에서 염기성 펩타이드, 또는 필요에 따라 1종 이상의 산성 아미노산 군의 존재 중에 단순히, 1종 이상의 염기성 기를 함유하고 있는 펩타이드 약제이다. 이 용어는 염기성 작용기가 있는 비천연의 아미노산 또는 도입된 염기성의 임의의 기타 형태인 펩타이드의 합성 유사체도 역시 포함한다.

"펩타이드 약제"라는 용어는 항대사제, 항진균제, 항염증제, 항암제, 항감염제 항생제, 영양제, 작용제 및 길항제 특성을 비롯하여, 이에 한정되는 것은 아닌 진단 및/또는 치료 특성을 나타내는 임의의 펩타이드 약제를 포함하는 것을 의미한다.

명확하게 말하자면, 본 발명의 펩타이드 약제는 강산을 사용하여 유익한 염을 형성할 수 있는 임의의 펩타이드, 특히 염기성 질소 원자 등의 전자 공여 염기성기, 예컨대, 아민, 이민 또는 고리 질소를 함유하는 펩타이드 약제일 수 있다. 상기 펩타이드 약제는 1종 이상의 노출된 양자성 아민 작용기를 함유하는 것이 좋다. 본 발명의 조성물의 제조에 유용한 펩타이드 약제로서는 옥시토신, 바소프레신, 부신 피질 자극 호르몬 (ACTH), 표피 성장 인자 (EGF), 혈소판 유래 성장 인자 (PDGF), 프로락틴, 황체 형성 호르몬, 황체 형성 호르몬 방출 호르몬 (LHRH), LHRH 작용제, LHRH 길항제, 성장 호르몬 (인간, 돼지 및 소를 포함), 성장 호르몬 방출 인자, 인슐린, 적혈구 생성소 (적혈구 생성소 활성을 나타내는 모든 단백질을 포함), 소마토스타틴, 글루카곤, 인터류킨 (IL-2, IL-11, IL-12 등을 포함), 인터페론-알파, 인터페론-베타, 인터페론-감마, 가스트린, 테트라가스트린, 펜타가스트린, 우로가스트론, 세크레틴, 칼시토닌, 엔케팔린류, 엔돌핀류, 안지오텐신류, 갑상샘 자극 호르몬 분비 호르몬 (TRH), 종양 괴사 인자 (TNF), 부갑상샘 호르몬 (PTH), 신경 성장 인자 (NGF), 과립구 집락 자극 인자 (G-CSF), 과립구 대식 세포 집락 자극 인자 (GM-CSF), 대식 세포 집락 자극 인자 (M-CSF), 헤파린 분해 효소, 혈관 내피 성장 인자 (VEG-F), 골 형성 단백질 (BMP), hANP, 글루카곤 유사 펩타이드 (GLP-1), 이그제나티드, 펩타이드 YY (PYY), 레닌, 브라디키닌, 바시트라신류, 폴리믹신류, 콜리스틴류, 티로시딘, 그라미시딘류, 시클로스포린류 (합성 유사체 및 이들의 약리학적 활성 단편을 포함), 효소류, 시토킨류, 항체류, 백신류, 항생제류, 당단백질, 난포 자극 호르몬, 쿄토르핀, 타프트신, 타이모포이에틴, 타이모신, 타이모스티물린, 흉선 체액 인자, 혈청 흉선 인자, 집락 자극 인자류, 모틸린, 봄베신, 디노르핀, 뉴로텐신, 세룰레인, 우로키나아제, 칼리크레인, 물질 P 유사체류와 길항체류, 안지오텐신 II, 혈액 응고 인자 Ⅶ과 Ⅸ, 그래미시딘류, 멜라닌 세포 자극 호르몬, 갑상선 호르몬 분비 호르몬, 갑상선 자극 호르몬, 판크레오지민, 콜레시스토키닌, 태반 젖샘 자극 호르몬, 태반성 성선 자극 호르몬, 단백질 합성 자극 펩타이드, 위 억제 펩타이드, 혈관 작용 소장 펩타이드, 혈소판 유래 성장 인자 및 합성 유사체류와 변형체류 및 이들의 약리학적 활성 단편으을 들 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용되는 양호한 펩타이드 약제에는 1차 아민이 아닌 N-말단을 함유하는 펩타이드 약제가 포함된다. 예를 들면, 상기 펩타이드 약제의 N-말단은 피로글루탐산, 예컨대 류프로렐린, 부세렐린, 고나도렐린, 데스로렐린, 페르티렐린, 히스트렐린, 루트렐린, 고세렐린, 나파렐린, 트립토렐린 등의 LHRH 및 LHRH 작용제일 수 있다. 별법으로서, 상기 N-말단의 아민기는 캡핑 또는 아실화될 수 있고, 예로서는 세트로렐릭스, 엔푸비르티드, 티모신 α1, 아바렐릭스 등이 있다.

본 명세서에서 사용되는 양호한 펩타이드 약제에는 N-말단의 1차 아민이 예컨대 PEG화, 아실화 등을 통한 친수성 및/또는 지용성 부분들에 의하여 공유적으로 개질된 펩타이드 약제가 포함된다. 본 명세서에서 사용되는 펩타이드 약제에는 측쇄의 1차 아민(들)이 예컨대 PEG화, 아실화 등을 통한 친수성 및/또는 지용성 부분들에 의하여 공유적으로 개질된 것인 펩타이드 약제도 역시 포함된다. 본 명세서에서 사용되는 양호한 펩타이드 약제에는 N-말단의 1차 아민과 측쇄의 1차 아민기의 양자가 모두 예컨대 PEG화, 아실화 등을 통한 친수성 및/또는 지용성 부분들에 의하여 동시에 공유적으로 개질된 것인 펩타이드 약제도 역시 포함된다.

"친수성 부분"이라는 용어는 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜을 비롯한 (이에 한정되는 것은 아니다) 임의의 수용성 선형 또는 분지형 올리고머 또는 중합체와 이와 유사한 선형 및 분지형 중합체를 의미한다. 상기 중합체의 분자량은 약 500 달톤 내지 약 50,000 달톤 범위인 것이 좋다. 본 발명에 사용하기 위한 친수성 중합체에는 아민기, 카르복실기, 히드록실기 또는 티올기를 통한 당해 펩타이드 약제에 대한 부착용으로 포함된 반응성기가 있을 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 "PEG화"라는 용어는 상기 펩타이드 약제에 가용성 폴리에틸렌 글리콜을 공유 공액 결합 (covalent conjugation)하는 것을 의미한다. 폴리에틸렌 글리콜은 한쪽 말단을 메톡시기로 캡핑하고, 반대쪽 말단을 펩타이드 약제의 활성기에 대한 손쉬운 접합을 위하여 활성화시키는 표준 방법에 따라서 제조될 수 있다. 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜의 여러 가지 제조 방법 및 이들의 PEG화를 위한 용도는 관련 기술 분야, 예컨대 전부가 본 명세서에 참고로 포함되는 문헌 [Roberts MJ, Bentley MD, Harris JM, Chemistry for peptide and protein PEGylation. Adv Drug Deliv Rev. 2002 Jun 17; 54(4): 459-76. Veronese FM. Peptide and protein PEGylation: a review of problems and solutions. Biomaterials. 2001 Mar; 22(5): 405-17 및 미국 특허 제6,113,906호; 제5,446,090호; 제5,880,255호]에 설명되어 있다.

"지용성 부분"이라는 용어는 20℃의 물에서 5 ㎎/㎖ 이하, 좋기로는 0.5 ㎎/㎖, 더 좋기로는 0.1 ㎎/㎖ 이하의 용해도를 나타내는 임의의 분자를 의미한다.이들 지용성 부분은 C₂ _~39-알킬, C₂ _~39-알케닐, C₂ _~39-알카디에닐 및 스테로이드성 잔기로부터 선택되는 것이 좋다. "C₂ _~39-알킬, C₂ _~39-알케닐, C₂ _~39-알카디에닐"이라는 용어는 직쇄 및 분지쇄, 좋기로는 탄소 원자수가 2~39개인 직쇄의 포화, 일불포화 및 이불포화의 탄화 수소를 총칭하려는 것이다.

펩타이드 약제에 지용성 부분을 공유적으로 도입하면 본래의 분자에 비하여 치료 효과가 향상된 것일 수 있는 지용성으로 개질된 펩타이드가 형성된다. 이는 일반적으로 펩타이드 약제 중의 아민기를 지용성 분자 중의 산성 또는 기타의 반응성기와 반응시킴으로서 수행된다. 별법으로서, 펩타이드 약제와 지용성 분자간의 접합은 분해성 또는 비분해성일 수 있는 브릿지, 스페이서 또는 연결 부분 등의 추가의 부분으로 통하여 달성된다. 몇 가지 예가 관련 선행 기술 분야, 예컨대 문헌 [Hashimoto, M., et al., Pharmaceutical Research, 6:171-176 (1989), and Lindsay, D. G., et al., Biochemical J. 121:737-745 (1971), 미국 특허 제5,693,609호, 국제 공보 제95/07931호, 미국 특허 제5,750,497호와 국제 공보 제96/29342. 국제 공보 제98/08871호, 국제 공보 제98/08872호 및 국제 공보 제99/43708]에 개시되어 있다. 이들 문헌은 지용성으로 개질된 펩타이드를 설명하고 이들의 제조를 가능하게 하기 위하여 본 명세서에 참고 문헌으로서 분명하게 포함된다.

"강산"이라는 용어는 본 명세서에서 정의되는 바와 같이, pKa가 3 이하, 좋기로는 0 이하, 더 좋기로는 -3 이하인 임의의 산을 포함하는 것이다. 본 발명에 적합한 상기 강산은 염산, 브롬화수소산, 질산, 크롬산, 황산, 메탄술폰산, 트리플루오로메탄 술폰산, 트리클로로아세트산, 디클로로아세트산, 브로모아세트산, 클로로아세트산, 시아노아세트산, 2-클로로프로피온산, 2-옥소부티르산, 2-클로로부티르산, 4-시아노부티르산, 파모산, 과염소산, 인산, 요오드화수소 등으로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 "강산"이라는 용어는 탄소 원자가 1~40개, 좋기로는 18개 이하, 더 좋기로는 6개 이하인 알킬, 아릴 또는 알킬아릴 황산 등의 임의의 유기 황산 및 탄소 원자가 1~40개, 좋기로는 18개 이하, 더 좋기로는 6개 이하인 알칸, 아릴알칸, 아렌 또는 알켄 술폰산 등의 유기 술폰산도 역시 포함한다.

"펩타이드 약제의 유익한 염"이라는 용어는 본 명세서에서 정의되는 바와 같이, 강산을 사용하여 형성시킨 펩타이드 약제의 임의의 염을 포함하는 의미이다. 상기 펩타이드 약제의 유익한 염은 단순한 산 염기 적정법 또는 중화법에 의하여 제조될 수 있다. 상기 펩타이드 약제의 유익한 염은 합성 공정 및 정제 공정 중에 제조될 수 있다. 별법으로서, 이들은 유리 염기 형태의 펩타이드 약제로부터 제조될 수 있다. 이 유리 염기는 적절한 액체 매질에 용해된다. 이 펩타이드 약제의 용액을 강산의 용액과 혼합하고 여과 또는 동결 건조 등의 적절한 수단을 통하여 용매를 제거함으로써 유익한 염을 형성시킬 수 있다. 상기 펩타이드 약제가 일반적으로 시판되고 있는 약산 (즉, pKa>3)을 사용하여 형성시킨 염의 형태인 경우, 동결 건조, 침전 또는 이 기술 분야에 알려져 있는 기타의 방법 등의 통상적인 이온 교환법을 통하여 상기 약산을 강산으로 교체할 수 있다. 예를 들면, 아세트산류프롤리드를 적절한 액체 매체, 예컨대 물에 용해시킨다. 이 펩타이드 약제 용액을 염산 등의 강산 수용액과 혼합시킨다. 상기 펩타이드 아세테이트와 염산 등의 강산이 물에 용해되는 경우, 강산인 HCl이 약산인 카르복실 아세트산을 대체함에 따라, 상기 펩타이드는 염소 이온과 결합하게 된다. 상기 용매 및 유리된 아세트산 (또는 기타의 약산이지만 휘발성인 카르복시산)을 진공하에서 제거시킬 수 있다. 그 결과, 상기 혼합물 용액을 냉동 건조시키고 물과 약산을 제거시켜서 상기 유익한 염이 형성된다. 상기 펩타이드 약제가 낮은 pH하에서 안정하지 않은 경우, 상기 펩타이드 약제의 유익한 염은 매우 낮은 농도의 강산에 대한 대규모 투석을 통하여 제조될 수 있다.

본 발명의 주사용 중합체 조성물은 펩타이드 약제를 0.01 중량% 내지 40 중량%의 양으로 함유하는 것이 좋다. 일반적으로, 최적의 약물 적재량은 목적하는 방출 기간 및 상기 펩타이드 약제의 효능에 따라 달라지게 된다. 분명한 것은, 펩타이드 약제의 효능이 낮고 목적하는 방출 기간이 길어질수록 더 높은 함량이 요구될 수 있다는 점이다.

"생분해성"이라는 용어는 원래 점진적으로 분해, 용해, 가수 분해 및/또는 부식되는 물질을 말한다. 일반적으로, 본 명세서 중의 상기 "생분해성 중합체"라는 용어는 가수 분해성이거나, 또는 원래 주로 가수 분해 및/또는 가효소 분해에 의하여 생체 부식되는 중합체이다.

본 명세서에서 사용되는 "생분해성 중합체"라는 용어는 중합체가 수용성 매질 또는 체액 중에서 적어도 실질적으로 불용성인 경우, 생체내에서 사용될 수 있는 생체 적합성 및/또는 생분해성의 합성 중합체와 천연 중합체를 포함하는 의미이다. 본 명세서에서 사용되는 "실질적으로 불용성"이라는 용어는 중합체의 불용성이 수용성 매체 또는 체액 중에서 중합체의 침전을 초래하기에 충분하여야 한다는 것을 말한다. 상기 중합체의 용해도는 좋기로는 1 중량% 이하, 더 좋기로는 0.1 중량% 이하이다. 물과 혼화성이거나 분산성인 유기 용매 중의 중합체 용액을 수용액과 혼합하는 경우, 상기 유기 용매는 방산되고 그에 따라 상기 중합체는 침전하여 고체형 또는 겔형의 기질을 형성하게 된다. 적절한 생분해성 중합체는 예컨대, 미국 특허 제4,938,763호, 제5,278,201호, 제5,278,2012호, 제5,324,519호, 제5,702,716호, 제5,744,153호, 제5,990,194호 및 제6,773,714호에 개시되어 있다. 상기 중합체의 몇 가지 예는 폴리락티드류, 폴리글리콜리드류, 폴리카프로락톤류, 폴리디옥사논류, 폴리카르보네이트류, 폴리히드록시부티레이트류, 폴리알킬렌 옥살레이트류, 폴리안히드라이드류, 폴리에스테르아미드류, 폴리우레탄류, 폴리아세탈류, 폴리오르토카르보네이트류, 폴리포스파젠류, 폴리히드록시발레레이트류, 폴리알킬렌 숙시네이트류, 폴리(말산) 및 폴리오르토에스테르류 및 공중합체, 블록 공중합체, 분지형 공중합체, 삼량체 및 이들의 배합물과 혼합물이 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 블록 공중합체에는 A-B-A 블록 공중합체, B-A-B 블록 공중합체 및/또는 A-B 블록 공중합체 및/또는 분지형 공중합체가 포함된다. 양호한 블록 공중합체로서는 A 블록이 소수성 중합체, B 블록이 친수성 중합체로 이루어진 것이 있다. 특히, 전술한 블록 공중합체 중의 한 가지를 사용하는 경우, 가장 양호한 중합체 기질은 상기 A 블록이 폴리락티드류, 폴리글리콜리드류, 폴리(락티드-코-글리콜리드)류, 폴리안히드라이드류, 폴리(올소 에스테를)류, 폴리에테르에스테르류, 폴리카프로락톤류, 폴리에스테르아미드류, 폴리(ε-카프로락톤)류, 폴리(히드록시부티르산)류 및 이들의 혼합물과 공중합체류로 이루어지는 군으로부터 선택되는 생분해성 중합체이고, B 블록은 폴리에틸렌 글리콜 또는 메톡시 폴리에틸렌 글리콜 등의 일작용기성으로 유도된 폴리에틸렌 글리콜이다. 이들 조합 중 다수가 허용 가능한 열가역성 겔을 형성할 수 있다.

중합체에 있어서 적절한 분자량은 이 기술 분야의 평균적인 숙련자에 의하여 결정될 수 있다. 분자량을 결정하는 경우, 고려 대상인 요인으로서는 목적하는 중합체 분해 속도, 기계적 강도 및 유기 용매 중에서 중합체의 용해 속도가 포함된다. 일반적으로, 중합체의 무게 평균 분자량 범위는 기타 여러 가지 요인들 중에서 어느 중합체를 사용하기로 선택하는지에 따라, 1.1 내지 2.5의 다분산성을 나타내는 약 2,000 달톤 내지 약 100,000 달톤이 적절하다.

본 발명의 주사용 중합체 조성물은 생분해성 중합체를 10 중량% 내지 70 중량%의 양으로 함유할 수 있다. 본 발명의 주사용 조성물의 점도는 사용되는 중합체의 분자량 및 유기 용매에 좌우된다. 일반적으로, 동일한 용매를 사용하는 경우, 중합체의 분자량과 농도가 높을수록 상기 점도가 높아진다. 상기 조성물 중의 중합체의 농도는 70 중량% 이하인 것이 좋다. 상기 조성물 중의 중합체의 농도는 30 중량% 내지 60 중량%인 것이 더 좋다.

좋기로는, 폴리(락트산)과 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드) 및 폴리(L-락티드-코-글리콜리드)를 비롯한 락트산과 글리콜산의 공중합체 (PLGA)가 본 발명에 사용된다. 상기 중합체 (또는 열가소성 폴리에스테르)는 락트산:글리콜산의 단량체 비율이 약 50:50 내지 약 100:0의 범위이고, 무게 평균 분자량은 약 2,000 내지 약 100,000 범위이다. 상기 생분해성인 열가소성 폴리에스테르는 이 기술 분야에 알려져 있는 방법, 예컨대 중축합법 및 고리 개방 중합법 (예컨대, 전부가 본 명세서에 참고로 포함되는 미국 특허 제4,443,340호, 제5,242,910호 및 제5,310,865호)을 사용하여 제조될 수 있다. 상기 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드)의 말단기는 중합법에 의존하여 히드록실기, 카르복실기 또는 에스테르기 중의 한 가지일 수 있다. 적절한 중합체로서는 일작용기성 알코올 또는 폴리올 잔기를 들 수 있고, 카르복시산 말단을 나타나지 않을 수 있다. 일작용기성 알코올의 예로서는 메탄올, 에탄올 또는 1-도데칸올이 있다. 상기 폴리올은 에틸렌 글리콜, 1,6-헥산디올, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤, 사카라이드류, 소르비톨 등의 환원 사카라이드류 등을 비롯한 디올, 트리올, 테트라올, 펜타올 및 헥사올일 수 있다.

다수의 적절한 PLGA가 시판되고 있고, 특정 조성의 PLGA도 선행 기술에 따라서 용이하게 제조될 수 있다. 단량체 비율과 분자량이 다양한 PLGA를 보에링거-인겔하임 (Boehringer-Ingelheim, Petersburg, Va, USA), 레이크쇼어 바이오머터리얼스 (Lakeshore Biomaterials, Birmingham, AL, USA) 및 듀렉트 코포레이션 (DURECT Coporation, Pelham, AL)로부터 구득할 수 있다.

상기 조성물 중에 존재하는 생분해성 중합체의 종류, 분자량 및 양은 상기 조절 방출 삽입물로부터 펩타이드 약제가 방출되는 시간의 길이에 영향을 미친다. 상기 조절 방출 삽입물의 목적하는 특성을 달성하기 위한 상기 조성물 중에 존재하는 생분해성 중합체의 종류, 분자량 및 양의 선택은 단순한 실험에 의하여 결정될 수 있다.

본 발명의 한 가지 양호한 실시 상태에 있어서, 상기 액체 조성물은 류프롤리드 염산염용의 조절 방출 전달계를 제제하는 데 사용될 수 있다. 이들 실시 상태에 있어서, 상기 생분해성의 열가소성 폴리에스테르는 좋기로는, 히드록실 말단기 및 라우릴 에스테르 말단을 함유하는 85/15 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드)일 수 있고, 상기 조성물의 약 30 중량% 내지 약 60 중량%의 양으로 존재할 수 있으며, 평균 분자량은 약 15,000 내지 약 50,000일 수 있다.

본 발명의 또 다른 양호한 실시 상태에 있어서, 상기 액체 조성물은 류프롤리드 염산염용의 조절 방출 전달계를 제제하는 데 사용될 수 있다. 이들 실시 상태에 있어서, 상기 생분해성의 열가소성 폴리에스테르는 좋기로는, 2개의 히드록실 말단기를 함유하는 85/15 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드)일 수 있고, 상기 조성물의 약 30 중량% 내지 약 60 중량%의 양으로 존재할 수 있으며, 평균 분자량은 약 15,000 내지 약 50,000일 수 있다.

본 발명의 또 다른 양호한 실시 상태에 있어서, 상기 액체 조성물은 류프롤리드 염산염용의 조절 방출 전달계를 제제하는 데 사용될 수 있다. 이들 실시 상태에 있어서, 상기 생분해성의 열가소성 폴리에스테르는 좋기로는, 카르복시산 말단기를 함유하는 85/15 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드)일 수 있고, 상기 조성물의 약 30 중량% 내지 약 60 중량%의 양으로 존재할 수 있으며, 평균 분자량은 약 15,000 내지 약 50,000일 수 있다.

본 발명의 또 다른 양호한 실시 상태에 있어서, 상기 조성물은 류프롤리드의 조절 방출 전달계를 제제하는 데 사용될 수 있다. 이들 실시 상태에 있어서, 상기 생분해성 중합체는 좋기로는, 카르복시산의 말단기가 있는/없는 100/0 폴리(D,L-락티드)일 수 있고, 상기 조성물의 약 40 중량% 내지 약 60 중량%의 양으로 존재할 수 있으며, 평균 분자량은 약 8,000 내지 약 50,000일 수 있다.

"약학적으로 허용 가능한 유기 용매"라는 용어는 수용액 또는 체액과 혼화성또는 분산성인 임의의 생체 적합성 유기 용매를 포함하는 의미이다. 상기 "분산성"이라는 용어는 그 용매가 물에 부분적으로 용해 또는 혼화된다는 것을 의미한다. 좋기로는, 단일 용매 또는 용매 혼합물은 물 중에서 0.1 중량% 이상의 용해도 또는 혼화도를 나타낸다. 더 좋기로는, 상기 용매는 물 중에서 3 중량% 이상의 용해도 또는 혼화도를 나타낸다. 가장 좋기로는, 상기 용매는 물 중에서 7 중량% 이상의 용해도 또는 혼화도를 나타낸다. 상기 적절한 유기 용매는 체액으로 확산되어서 상기 액체 조성물을 응고 또는 고화시킬 수 있어야 한다. 단일 용매 또는 용매 혼합물이 사용될 수 있는데, 이들 용매의 적절성은 간단한 실험에 의하여 용이하게 측정될 수 있다.

약학적으로 허용 가능한 유기 용매의 예로서는 N-메틸-2-피롤리돈, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 알콕시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 에스테르류, 글리코푸롤, 글리세롤 포르말, 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 메틸 에틸 케톤, 디메틸포름아미드, 디메틸 술폭사이드, 테트라히드로푸란, 카르포락탐, 데실메틸술폭사이드, 벤질 벤조에이트, 에틸 벤조에이트, 트리아세틴, 디아세틴, 트리부티린, 트리에틸 시트레이트, 트리부틸 시트레이트, 아세틸 트리에틸 시트레이트, 아세틸 트리부틸 시트레이트, 트리에틸글리세리드류, 트리에틸 포스페이트, 디에틸 프탈레이트, 디에틸 타르트레이트, 에틸 락테이트, 프로필렌 카르보네이트, 에틸렌 카르보네이트, 부티로락톤 및 1-도데실아자시클로-헵탄-2-온과 이들은 혼합물을 들 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다.

여러 가지 약학적으로 허용 가능한 유기 용매들 중에서의 상기 생분해성 중합체의 용해도는 그 중합체의 특성 및 이들의 여러 가지 유기 용매와의 상용성에 따라 달라지게 된다. 따라서, 동일한 중합체라 하더라도 상이한 용매 중에서는 동일한 정도로 용해되지 않는다. 예를 들면, PLGA는 트리아세틴 중에서보다 N-메틸-2-피롤리돈 (NMP) 중에서의 용해도가 더 높다. 그러나, NMP 중의 PLGA 용액이 수용액과 접촉하는 경우, NMP는 물과의 혼화도가 높기 때문에 매우 신속하게 방산되어서, 고체의 중합체 기질을 형성하게 된다. 상기 용매의 빠른 확산 속도로 인하여 고체의 삽입물이 신속하게 형성될 수 있지만, 이로 인하여 높은 초기 급방출이 초래되기도 한다. 트리아세틴 중의 PLGA 용액이 수용액과 접촉하는 경우, 트리아세틴은 물과의 혼화도가 낮기 때문에 매우 저속으로 방산된다. 상기 용매의 저속 확산으로 인하여 점성 액체를 고체 기질로 전환시키는 데 장시간이 소요될 수 있다. 상기 용매의 확산 방출 및 펩타이드 약제를 포획하는 상기 중합체의 응집에 최적의 균형점이 있을 수 있다. 그러므로, 목적하는 전달계를 얻는 데는 상이한 용매를 혼합하는 것이 유리할 수 있다. 상기 중합체의 용해도를 향상시키고, 상기 조성물의 점도를 변형하며, 상기 확산 속도를 최적화하고, 초기 급방출을 감소시키기 위하여 물과 혼화성이 높은 용매와 낮은 용매를 혼합하여도 좋다.

본 발명의 상기 주사용 중합체 조성물들은 일반적으로 유기 용매를 30 중량% 내지 80 중량%의 양으로 함유한다. 본 발명의 상기 주사용 조성물의 점도는 사용되는 중합체의 분자량과 유기 용매에 의존한다. 좋기로는, 상기 조성물들 중의 중합체의 농도는 70 중량% 이하이다. 더 좋기로는, 용액 중의 중합체의 농도는 30 중량% 내지 60 중량%이다.

본 명세서에서 사용되는 "부형제"라는 용어는 상기 조성물을 형성하는 데 사용되는 상기 펩타이드 약제 또는 상기 생분해성 중합체들 이외에 상기 조성물 중의 임의의 유용한 성분을 포함하는 의미이다. 적절한 부형제로서는 방출 속도 조절제, 급방출 효과 저하 물질, 완충 물질, 항산화제 등이 있다.

본 발명에 따르면, 적절한 방출 속도 조절제에는 알칸카르복시산, 올레산, 알킬 알코올, 극성 지질, 표면 활성제, 폴리에틸렌글리콜과 폴리락티드의 공중합체 또는 폴리(락티드-코-글리콜리드), 폴록사머, 폴리비닐피롤리돈, 폴리소르베이트 등의 양친매성 화합물 또는 공중합체; 2-에톡시에틸 아세테이트, 트리에틸 시트레이트, 아세틸 트리부틸 시트레이트, 아세틸 트리에틸 시트레이트, 글리세롤 트리아세테이트, 디(n-부틸) 세베케이트 등의 모노-, 디- 및 트리카르복시산의 에스테르; 폴리에틸렌 글리콜, 소르비톨 등의 폴리히드록시 알코올; 지방산; 트리글리세리드, 중쇄 트리글리세리드, 예컨대 미글리올 (MIGLYOL) 810, 812, 818, 829, 840 등의 글리세롤의 트리에스테르가 포함되는데, 이에 한정되는 것은 아니다. 속도 조절제의 혼합물들도 역시 본 발명의 중합체계에 사용될 수 있다.

상기 방출 속도 조절제는 상기 주사용 중합체 조성물 중에 삽입 후 최초 24 시간 동안 상기 중합체 조성물로부터 방출되는 펩타이드 약제의 초기 급방출을 감소시키는 데 효율적은 양으로 존재할 수 있다. 상기 중합체 조성물은 좋기로는, 약 1 중량% 내지 약 50 중량%, 더 좋기로는, 약 2 중량% 및 약 20 중량%의 방출 속도 조절제를 함유한다.

본 발명에 따르면, 완충제로서는 탄산칼슘, 수산화칼슘, 미리스트산칼슘, 올레산칼슘, 팔미트산칼슘, 스테아르산칼슘, 인산칼슘, 탄산마그네슘, 수산화마그네슘, 인산마그네슘, 미리스트산마그네슘, 올레산마그네슘, 팔미트산마그네슘, 스테아르산마그네슘, 탄산아연, 수산화아연, 미리스트산아연, 올레산아연, 팔미트산아연, 스테아르산아연, 인산아연 및 이들의 혼합물을 비롯한 무기염 및 유기염을 들 수 있는데, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 완충제는 상기 주사용 중합체 조성물 중에 분해 과정 동안 상기 삽입물 내부의 pH를 안정화시키는 데 효율적은 양으로 존재할 수 있다. 상기 중합체 조성물은 좋기로는, 약 1 중량% 내지 약 30 중량%, 더 좋기로는, 약 2 중량% 및 약 15 중량%의 완충제를 함유한다.

상기 항산화제는 상기 주사용 중합체 조성물 중에 상기 삽입물 내부에 생성되는 임의의 라디칼 또는 과산화물을 포착하는 데 효율적인 양으로 존재할 수 있다. 상기 중합체 조성물은 좋기로는, 약 1 중량% 내지 약 30 중량%, 더 좋기로는, 약 3 중량% 및 약 15 중량%의 항산화제를 함유한다.

한 가지 측면에 있어서, 본 발명은 펩타이드 약제의 경제적, 실용적 및 효율적인 조절 방출 전달계를 형성하기 위한 것으로서, a) 강산을 사용하여 형성시키는, 유기 용액 중에서 상기 펩타이드 약제 및 중합체간의 상호 작용/반응을 최소화 또는 방지하는 펩타이드 약제의 유익한 염, b) 생분해성 중합체, c) 약학적으로 허용되는 유기 용매 및 d) 필요에 따라, 상기 펩타이드 약제의 최적의 전달을 달성하기 위한 1종 이상의 부형제를 함유하는 안정화된 주사용 생분해성 중합체 조성물을 제공한다. 좋기로는, 상기 주사용 조성물은 그 조성물을 즉석 사용 가능한 형태의 주사기에 충전시키는 공정을 포함하여 키트에 포장한다. 이 키트 중의 조성물은 조절된 보관 조건하에서 적절한 저장 수명을 나타내기 위하여 적당한 기간, 좋기로는 1년 이상 안정하다. 상기 조성물은 좋기로는 개체에 주사되어서 정위치에 삽입물을 형성시키고, 이 삽입물로부터 상기 펩타이드 약제가 목적하는 장기간에 걸쳐 치료에 효율적인 양으로 방출된다.

본 발명의 상기 안정화된 주사용 생분해성 중합체 조성물은 펩타이드 약제의 유익한 염, 생분해성 중합체, 약학적으로 허용 가능한 유기 용매 및 필요에 따라 부형제를 적절하게 배합시킴으로써 제조될 수 있다. 상기 투여용 조성물은 간편하게 투여 유닛 형태로 존재할 수 있고, 관련 약학 분야에 알려져 있는 방법들 중의 어느 하나의 방법에 의하여 제조될 수 있다. 본 발명의 조성물의 한 가지 양호한 제조 방법은 첫번째로 생분해성 중합체 및/또는 부형제를 약학적으로 허용 가능한 유기 용매에 용해시켜서 균일한 중합체 용액/현탁액을 얻는 것이다. 이어서, 상기 펩타이드 약제의 유익한 염을 상기 용액/현탁액에 가한다. 상기 성분들을 적절한 방법을 사용하여 완전히 혼합시켜서 균일한 용액 또는 현탁액을 얻는다. 그 다음, 상기 용액 또는 현탁액의 적절한 양을 주사기로 옮겨서 즉석 사용 가능한 제품을 얻는다.

본 발명의 상기 조성물 중의 상기 유익한 염과 중합체의 양은 상기 펩타이드 약제 성분의 효능, 상기 약제의 목적하는 전달 기간, 상기 용매 중에서 상기 중합체의 용해도 및 투여를 희망하는 상기 주사용 조성물의 부피와 점도에 따라서 당연히 달라지게 된다.

본 발명의 어떠한 양호한 실시 상태에 있어서, 펩타이드 약제의 경제적, 실용적 및 효율적인 조절 방출 전달계를 형성하기 위한 상기 주사용 생분해성 중합체 조성물은 상기 펩타이드 약제의 유익한 염 약 0.01 중량% 내지 약 40 중량% 및 폴리(락티드-코-글리콜리드) 중합체 약 10 중량% 내지 약 70 중량%를 함유한다. 상기 조성물은 약학적으로 허용 가능한 유기 용매 약 30 중량% 내지 약 70 중량%를 더 함유한다.

본 발명의 양호한 실시 상태에 있어서, 상기 조성물은 위에서 정의한 방출 속도 조절제, 급방출 효과 저하 물질, 완충 물질 항산화제, 조직 수송제 등을 비롯한 적절한 부형제를 약 1 중량% 내지 약 40 중량% 더 함유한다.

본 발명에 따르면, 상기 주사용 조성물은 주사 투여용으로 적절한 무균 용기, 예컨대 주사기로 이송된다. 상기 용기는 보관을 위하여 포장되고 상기 조성물의 성분들은 제조 및 저장 공정 도중 또는 동물 또는 인간 등의 개체에게 투여하기 전에 그들의 원래의 분자량, 구조 및/또는 생물학적 활성을 80% 이상, 좋기로는 90% 이상 보유한다.

따라서, 본 발명에 따르면, 상기 안정화된 조성물은 펩타이드 약제의 조절 방출 정달이 필요한 개체에게 투여될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 상기 "개체"라는 용어는 온혈(溫血) 동물, 좋기로는 포유류, 가장 좋기로는 인간을 포함하려는 것이다.

본 명세서에서 사용되는 "개체에 투여(한)"라는 용어는 상기 조성물을 개체 중의 목적하는 부위에 전달하기에 적절한 임의의 경로에 의하여 개체에게 조성물 (예컨대, 약학 제제)을 분배, 전달 또는 도포하는 것을 말하려는 것이다. 좋기로는, 본 발명의 상기 조성물은 피하, 근육내, 복강내 또는 진피내에 주사 및/또는 삽입함으로써 투여되어 펩타이드 약제를 사용하여 각종 의학 병태를 치료하기 위한 기지의 파라미터에 근거하여 목적하는 투여량을 제공할 수 있다.

"조절 방출 전달"이라는 용어는 본 명세서에 정의되어 있는 바와 같이, 투여 후 장기간, 좋기로는 최소한 수 주 내지 1 년에 걸친 생체내에서 상기 약제의 지속방출을 의미하려는 것이다. 상기 약제의 지속 방출 전달은 예를 들면, 상기 약제의 시간에 대한 연속적인 치료 효과에 의하여 증명될 수 있다 (예컨대, LHRH 유사체의 경우, 이 유사체의 지속 방출은 시간에 대한 테스토스테론 합성의 연속적인 억제에 의하여 증명될 수 있다). 별법으로서, 상기 펩타이드 약제의 지속 전달은 시간에 대한 상기 약제의 생체내 존재를 검출함으로써 증명될 수 있다.

상기 주사용 약제의 투여량은 일반적으로 조절 방출 삽입물의 목적하는 특성에 의존하게 된다. 예를 들면, 상기 주사용 조성물의 양은 상기 조절 방출 삽입물로부터 펩타이드 약제가 방출되는 시간의 길이에 영향을 미칠 수 있다.

양호한 실시 상태에 있어서, 개체에게 주사되는 본 발명의 주사용 중합체 조성물의 부피는 0.1 ㎖ 내지 2.0 ㎖, 좋기로는 0.2 ㎖ 내지 1.0 ㎖ 및 더 좋기로는 0.3 ㎖ 내지 0.5 ㎖의 범위이다.

본 발명은 a) 유기 용액 중에서 상기 펩타이드 약제 및 중합체간의 상호 작용/반응을 최소화 또는 방지하는, 강산을 사용하여 형성시킨 펩타이드 약제의 유익한 염, b) 생분해성 중합체, c) 약학적으로 허용 가능한 유기 용매 및 d) 필요에 따라, 상기 펩타이드 약제의 최적의 전달을 달성하기 위한 1종 이상의 부형제를 함유하는 주사용 조성물을 유효량으로 개체에게 투여하는 공정 및 상기 용매가 주위의 수용성 환경으로 방산되도록하여 상분리(相分離)에 의하여 상기 액체 조성물을 데포로 변환시키는 공정으로 이루어진 것을 특징으로 하는 개체 내의 정위치에 삽입물을 형성시키는 방법을 더 제공한다. 상기 데포는 점성의 겔형, 반고체형 또는 고체형 기질일 수 있다. 또한, 상기 데포는 다공성이거나 비다공성일 수 있다. 상기 데포는 상기 펩타이드 약제가 목적하는 연장된 기간에 걸쳐 방출되는 전달계로서의 역할을 수행한다.

또 다른 양호한 실시 상태에 있어서, 본 발명의 상기 주사용 조성물은 체강(體腔)에 맞도록 투여되어서 데포계를 형성할 수 있다. 그러한 체강으로서는 수술 후에 형성된 체강 또는 질(膣), 항문 등의 원래의 체강이 있다.

또 다른 관점에 있어서, 본 발명은 펩타이드 약제의 경제적, 실용적 및 효율적인 조절 방출 전달계를 형성하기 위한 것으로서, a) 유기 용액 중에서 상기 펩타이드 약제 및 중합체간의 상호 작용/반응을 최소화 또는 방지하는 강산을 사용하여 형성시킨 펩타이드 약제의 유익한 염, b) 생분해성 중합체, c) 유기 용매 및 d) 필요에 따라, 상기 펩타이드 약제의 최적의 전달을 달성하기 위한 1종 이상의 부형제를 함유하는 안정화된 액체의 생분해성 중합체 조성물을 제공한다. 상기 액체의 생분해성 중합체 조성물은 삽입형 중합체 기질로 형성될 수 있다. 상기 액체의 생분해성 중합체 조성물은 상기 형성 공정 전과 도중에 본래의 분자량, 구조 및/또는 생물학적 활성의 90% 이상, 좋기로는 95% 이상 보유한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "삽입형 중합체 기질"이라는 용어는 입자, 막, 펠릿 (pellet), 원주, 디스크 (disc), 마이크로 캡슐, 마이크로 구체, 나노 구체, 마이크로 입자, 웨이퍼 (wafer) 및 약물 전달용으로 사용되는 기타의 기지의 중합체 형태를 포함하려는 것이다.

여러 가지 약학적으로 허용 가능한 중합체 담체의 형성 방법은 이 기술 분야에서 잘 알려져 있다. 예를 들면, 다양한 방법과 재료들이 미국 특허 제6,410,044호, 제5,698,213호, 제6,312,679호, 제5,410,016호, 제5.529,914호, 제5,501,863호 및 PCT 공보 제WO 93/16687호, 제4.938,763호, 제5,278,201호, 제5,278,202호와 유럽 특허 제0,058,481호에 기재되어 있고, 이 문헌들은 모두 본 명세서에 참고 문헌으로 포함된다.

본 발명에 따르면, 상기 마이크로 구체형의 삽입형 중합체 기질은 상기 펩타이드 약제의 유익한 염을 상기 중합체로 캡슐화합으로서 제조된다. 상기 펩타이드 약제의 유익한 염은 상이한 생물학적 환경으로 전달되거나 특정 기능에 영향을 미치는 데 적합한 독특한 특성을 나타내는 여러 가지 생체 적합성 및/또는 생분해성 중합체를 사용하여 캡슐화시킬 수 있다. 용해 속도 및 그에 따른 펩타이드 약제의 전달 속도는 특정 캡슐화법, 중합체의 조성, 중합체의 가교 결합, 중합체의 두께, 중합체의 용해도, 생물학적 활성 화합물/다중 음이온 착물의 규격 및 용해도에 의하여 결정된다.

캡슐화시키고자 하는 상기 펩타이드 약제의 유익한 염은 유기 용매의 중합체 용액 중에 용해 또는 현탁된다. 상기 중합체 용액은 상기 유익한 염이 상기 용액에 첨가된 후에 상기 유익한 염이 완전히 피복되기에 충분할 정도로 농축되어야 한다. 그러한 양은 약 0.01 내지 약 50, 좋기로는 약 0.1 내지 약 30 사이의 중합체에 대한 펩타이드 약제의 유익한 염의 중량비를 제공하는 것이다. 상기 펩타이드 약제의 유익한 염은 이들이 상기 중합체와 접촉함으로써 피복되는 도중에 부유된 상태를 유지하고 응집되지 않아야 한다.

그러므로, 상기 펩타이드 약제의 유익한 염의 중합체 용액에는 분무 건조법, 분무 응고법, 에멀젼법 및 용매 기화 에멀젼법을 비롯한 여러 가지 마이크로 캡슐화법이 수행될 수 있다.

본 발명의 한 가지 실시 상태에 따르면, 상기 펩타이드 약제의 유익한 염은 유기 용매의 중합체 용액 중에 용해 또는 현탁된다. 이 용액 또는 현탁액은 유화제를 함유하는 부피가 더 큰 수용액에 옮긴다. 상기 수용액 중에서, 유기층을 유화시키고 유기 용매를 상기 중합체로부터 증발 또는 확산시켜서 제거한다. 그 결과 얻은 고체형 중합체는 상기 펩타이드 약제의 유익한 염을 캡슐화하는 중합체 기질을 형성한다. 상기 유화제는 상기 공정 중의 경화 공정 중에 상기 계 중의 성분의 여러 가지 층 사이의 계면의 표면 장력 감소를 촉진한다. 별법으로서, 상기 캡슐형 중합체가 본질적으로 표면 활성을 나타내는 경우, 별도의 표면 활성제를 첨가할 필요가 없을 수 있다.

본 발명에 따른 펩타이드 약제의 유익한 염의 캡슐형을 제조하는 데 유용한 유화제로서는 본 명세서에 예시되어 있는 폴록사머와 폴리비닐 알코올, 표면 활성제 및 펩타이드 약제의 유익한 염을 캡슐화시키는 중합체와 상기 용액간의 표면 장력을 감소시킬 수 있는 기타의 표면 활성 화합물이 있다.

본 발명의 마이크로 구체를 제조하는 데 유용한 유기 용매로서는 아세트산, 아세톤, 염화메틸렌, 아세트산에틸, 클로로포름 및 기타의 무독성 용매가 있고, 이는 상기 중합체의 특성에 의존하게 된다. 용매는 상기 중합체를 용해시키는 것으로 선택되어야 하고 종국적으로 무독성이다.

따라서, 본 발명에 따르면, 이들 삽입형 중합체 기질은 펩타이드 약제의 지속적인 조절 방출 전달을 필요로 하는 개체에게 투여될 수 있다. 좋기로는, 본 발명의 상기 삽입형 중합체 기질은 피하, 근육내, 복강내 또는 진피내에 주사 및/또는 삽입함으로써 투여되어 펩타이드 약제를 사용하는 각종 의학 병태의 치료를 위한 기지의 파라미터를 기초로 하여 목적하는 투여량을 제공할 수 있다.

본 명세서에 언급되어 있는 모든 서적, 논문 및 특허 문헌은 전체가 참고로서 포함된다.

도 1. 4℃에서 16 개월 후 제제 중의 LA의 안정성
도 2. 4℃에서 16 개월 후 제제 중의 PLGA의 분자량
도 3. 류프롤리드의 방출에 대한 종류 및 농도의 영향
도 4. 주사용 조성물로부터의 LA의 방출에 대한 비타민 E의 영향
도 5. 주사용 조성물로부터의 LA의 방출에 대한 미글리올 812의 영향
도 6. 쥐에 SC 투여 후 주사용 중합체 조성물로부터의 LA의 방출 특성

다음의 실시예들은 본 발명의 조성물 및 방법을 설명한다. 다음의 실시예들은 본 발명을 한정하는 것으로 간주되어서는 아니되고, 단지 유용한 조절 방출 약물 전달계 조성물의 제조 방법을 교시하는 것이다.

실시예 1. 강산을 사용하여 형성시킨 펩타이드 약제 및 펩타이드 유도체의 유익한 염의 조제

1종 이상의 염기성 작용기를 함유하는 펩타이드 약제 또는 펩타이드 유도체를 물에 용해시킨다. 화학량론적 양의 강산을 상기 펩타이드 약제의 수용액에 첨가하여, 펩타이드 약제 중의 염기성 기를 중화시킨다. 침전, 여과 및/또는 동결 건조에 의하여 염을 얻는다.

실시예 2. 류프롤리드 염산염의 조제

류프롤리드는 9개의 아미노산 잔기와 2개의 염기성 작용기 (1개의 히스티딘기와 1개의 아르기닌기)를 함유하는 황체 형성 호르몬 분비 호르몬 (LHRH) 작용제이다. 상기 류프롤리드의 N-말단에 위치한 아민은 피로글루탐산의 형태로 블록시켰다. 이는 전립선 암과 자궁 내막증의 치료에 사용되어 왔다. 아세트산류프롤리드 (LA-Ac)는 폴리펩타이드 라바라토리즈사 (Polypeptide Laboratories, Inc)로부터 구득하였다 (PPL Lot#PPL-LEUP0401A). 류프롤리드 염산염 (LA-HCl)은 이온 교환 공정 및 동결 건조 공정을 통하여 아세트산을 염산으로 대체함으로써 조제되었다. 일반적으로, 아세트산류프롤리드 1000 ㎎을 물 30 ㎖ 중에 용해시켰다. 0.5 N의 HCl 3.19 ㎖ (HCl:LA - 2.2:1)을 첨가하여 완전히 혼합하였다. 그 용액을 72 시간 동결 건조시켜서 아세트산을 제거하였다. 그 결과 생성된 건조 분말을 물에 재용해 시키고 다시 동결 건조시켰다.

실시예 3. 류프롤리드 메실레이트의 조제

아세트산류프롤리드 (PPL Lot#PPL-LEUP0401A) 343.5 ㎎을 물 20 ㎖ 중에 용해시켰다. 메탄술폰산 32 ㎖를 가하여 완전히 혼합하였다 (메탄술폰산에 대한 아세트산류프롤리드의 몰비 - 1:2). 그 결과 생성된 용액을 72 시간 동결 건조시켜서 아세트산을 제거하였다. 이 건조된 분말을 물에 재용해하고 다시 동결 건조시켰다.

실시예 4. 고세렐린 염산염의 조제

아세트산고세렐린 (PPL Lot#0603-219) 766 ㎎을 물 20 ㎖ 중에 용해시켰다. 0.5 N의 HCl 2.12 ㎖ (HCl:아세트산고세렐린의 몰비 - 2.2:1)을 첨가하여 완전히 혼합하였다. 이 용액을 72 시간 동결 건조시켜서 아세트산을 제거하였다. 그 결과 생성된 건조 분말을 물에 재용해 시키고 다시 동결 건조하였다.

실시예 5. 팔미토일-옥트레오티드 (PAL-OCT)의 조제

아세트산옥트레오티드 50 ㎎을 TEA 100 ㎕를 함유하는 무수 DMSO 1000 ㎕ 중에 용해시켰다. 팔미트산 N-히드록시숙신이미드 에스테르 (Mw 353.50) 17.1 ㎎을 무수 DMSO 3 ㎖ 중에 용해시키고 이를 직접 주사에 의하여 상기 펩타이드 용액에 첨가하였다. 이 반응을 실온에서 철야 진행시켰다. 그 결과 얻은 혼합물을 디에틸 에테르에 주가하여 팔미토일화 옥트레오티드를 침전시켰다. 이 침전물을 디에틸 에테르로 2회 세척한 다음, 진공하에서 건조하였다. 그 결과 생성된 아실화 펩타이드는 백색의 분말 형태이었다. 강산을 사용하여 잔류하는 염기성 아민기를 중화시킴으로써 아실화 펩타이드의 상기 유익한 염을 얻었다.

실시예 6. 데카날-옥트레오티드 (DCL-OCT)의 조제

옥트레오티드 50 ㎎을 pH 5에서 0.1 M의 아세트산염 완충액 중의 20 mM의 시아노붕수소화나트륨 (Mw 62.84, NaCNBH₃) (2.51 ㎎) 용액 2 ㎖ 중에 용해시켰다. 데카날 (Mw 156.27) (OCT:DCL = 1:2) 13.7 ㎎을 직접 주사에 의하여 펩타이드 용액에 첨가하였다. 이 반응을 4℃에서 철야 진행시켰다. 그 결과 생성된 혼합물을 원심 분리법에 의하여 분리시켰다. 침전된 PAL-OCT를 냉동 건조시켰다. 강산을 사용하여 잔류하는 염기성 아민기를 중화시켜 아실화 펩타이드의 유익한 염을 형성시켰다.

*실시예 7. PEG화 옥트레오티드의 조제

아세트산옥트레오티드 수용액 (10 ㎎/㎖)을 pH 7.4에서 0.1 M 인산염 완충액 중의 숙신이미딜 프로피오네이트 모노메톡시 PEG (SPA-mPEG, Mw 2000 달톤) 2 몰 당량을 함유하는 바이알에 첨가하였다. 이 반응이 교반하에 4℃에서 철야 진행시켰다. 그 다음, 반응 결과 얻은 혼합물을 C-18 (YMC ODS-A 4.6x250 mm, 5 ㎛, 워터스사 (Waters Corportion))에 대한 역상 HPLC (RP-HPLC)를 사용하여 분리시켰다. 그 결과, 이동상은 물 중에 0.1% TFA (A) 및 0.1% TFA를 함유하는 CAN (B)로 이루어졌다. 상기 이동상을 1 ㎖/min의 유속에서 30% 내지 60%의 직선 기울기로 20 분간 용리액 B에 흐르게 하고, 상기 용출물의 자외선 흡수도를 215 nm에서 관찰하였다. 각각의 피크에 대응하는 상기 용출 분획을 별도로 수집하고, 질소로 정화하여 동결 건조하였다.

별법으로서, 옥트레오티드의 부위 특정 PEG화를 얻을 수 있다. 20 mM의 시아노붕수소화나트륨 (NaCNBH₃) 중의 아세트산옥트레오티드 (10 ㎎/㎖) 용액과 pH 5의 0.1 M 아세트산염 완충액을 모노메톡시 PEG-프로피온알데히드 (ALD-mPEG, Mw 2000 달톤)의 3 M의 동등량을 물 중에 함유하는 바이알에 가하였다. 이 반응을 교반하에 4℃에서 철야 진행시켰다. 이어서, 반응 결과 얻은 혼합물을 C-18 (YMC ODS-A 4.6x250 mm, 5 ㎛, 워터스사 (Waters Corportion))에 대한 역상 HPLC (RP-HPLC)를 사용하여 분리시켰다. 그 결과, 이동상은 물 중의 0.1% TFA (A) 및 0.1% TFA를 함유하는 CAN (B)로 이루어졌다. 상기 이동상을 1 ㎖/min의 유속에서 30% 내지 60%의 직선형 기울기로 20분간 용리액 B에 흐르게 하고, 상기 용출물의 자외선 흡수도를 215 nm에서 관찰하였다. 각각의 피크에 대응하는 상기 용출 분획을 별도로 수집하고, 질소로 정화하여 동결 건조하였다. 강산을 사용하여 잔류하는 염기성 아민기를 중화시킴으로써 PEG화 펩타이드의 유익한 염을 형성시켰다.

실시예 8. 주사용 중합체 조성물 중에서의 펩타이드 약제와 생분해성 중합체의 안정성

라우릴 에스테르의 말단기를 함유하는 락티드:글리콜리드의 비가 85/15 (DLPLG85/15, Ⅳ:0.28)인 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드) (PLGA)를 N-메틸-2-피롤리돈 (NMP) 중에 용해시켜서 50 중량%의 용액을 얻었다. 이 류프롤리드염을 상기 NMP 중의 PLGA 용액과 혼합하여 표 1에 나타나 있는 비율에서 균일한 주사용 조성물을 얻었다. 상기 주사용 조성물을 루어-록 팁 (luer-lock tip)이 구비된 1.2 ㎖의 폴리프로필렌 주사기에 충전시켰다. 이어서, 상기 미리 충전시킨 주사기를 루어-록 캡을 사용하여 밀봉하였다. 캡으로 밀봉된 주사기를 용기 중에 포장하고 진공하에서 가방 중에 밀봉한 다음, 4℃에서 그리고 실온에서 (~22℃) 최대 18 개월간 보관하였다. 상기 주사용 조성물을 24 시간, 1, 2, 3, 6, 12 및 18 개월의 시점에서 시료 채취하였다. 이 시료 중의 류프롤리드의 순도를 HPLC에 의하여 측정하였다. 상기 중합체의 분자량을 분자량이 알려져 있는 폴리스티렌 표준 물질을 사용하는 겔 투과 크로마토그래피 (GPC)에 의하여 측정하였다.

피시험 주사용 중합체 제제

시료	류프롤리드염 (mg)	DLPLG 8515/ NMP (mg)	약물 적재량 (%, w/w)
블랭크	0	1000	0
LA-Ac	50	890	5.3
LA-MS	54	960	5.3
LA-HCl-1	106	940	10.1
LA-HCl-2	41	730	5.3

놀랍게도, 류프롤리드의 아세트산염 대신, 염산염 및 메실레이트염을 사용하면 4℃ 및 실온의 양온도에서 모두 시간에 따른 NMP 중의 PLGA 용액 중의 류프롤리드 및 중합체의 분해가 감소된다는 사실이 발견되었다. 표 2와 표 3은 각각 4℃ 및 실온에서 시간에 따른 NMP 중의 PLGA 용액 형태의 류프롤리드의 분해를 나타내고 있다. 4℃에서, 18 개월 후에 아세트산류프롤리드를 함유하는 상기 중합체 조성물에 있어서 최대 23%의 류프롤리드가 분해되는 반면, 류프롤리드 염산염 및 류프롤리드 메실레이트를 함유하는 이들 제제에 있어서 2% 이하의 류프롤리드가 분해되었다. 상온에서, 12 개월 후에 아세트산류프롤리드 제제에 있어서, 35% 이상의 류프롤리드 분해가 관찰되는 반면, 류프롤리드 염산염 및 류프롤리드 메실레이트 제제에 있어서 약 11%만이 분해되었다. 그 밖에, 실온에서, 색상 변화 (우유색으로부터 황색 내지 적갈색) 및 상분리가 관찰되었다. 이 상분리 결과, 불균질의 제제들 및 상기 제제 중에서 상기 펩타이드 및 중합체의 고르지 않은 분해가 일어났다. 상기 제제의 불균일도는 다양한 시점에서 얻은 결과들의 변동의 원인일 수 있다.

4℃에서 PLGA/NMP 제제 중의 류프롤리드의 안정성

시간 (분)	LA-AC	LA-HCl-1	LA-MS
0	100.0	100.0	100.0
1	89.3	100.0	100.0
3	100.0	100.0	100.0
6	94.1	100.0	100.0
12	88.2	100.0	98.9
18	76.9	98.5	98.3

실온에서 PLGA/NMP 제제 중의 류프롤리드의 안정성

시간 (분)	LA-AC	LA-HCl-1	LA-HCl-2	LA-MS
0	100	100	100	100
1	75	99	100	95
2	78	98	97	97
3	86	100	100	100
6	87	99	100	99
12	65	89	89	89

표 4와 표 5는 상이한 제제에 있어서 중합체의 분자량 변화를 나타내고 있다. 블랭크 대조군과 비교해 보면, 아세트산류프롤리드 제제 중의 PLGA의 분자량은 6 개월 후에 4℃에서 10% 이상, 실온에서 90% 이상 감소되었다. 류프롤리드 염산염 및 류프롤리드 메실레이트 제제 중의 PLGA의 분자량은 12 개월 후에 4℃ 및 실온에서 블랭크 대조군의 것과 동일하였다. 그러나, 12 개월 후, 블랭크 대조군 제제 및 염산프롤리드 및 류프롤리드 메실레이트 제제의 양자로부터의 중합체의 90% 이상이 분해되었다. 그 결과로, HCl 및 메탄술폰산 등의 강산을 사용하여 형성시킨 류프롤리드염은 용액 중에서 상기 펩타이드와 PLGA간의 상호 작용/반응을 완전히 방지한다는 사실이 나타났다. 반면에, 아세트산 등의 약산은 용액 중에서 상기 펩타이드 및 PLGA간의 해로운 상호 작용/반응을 예방하지 못한다. 따라서, 강산을 사용하여 형성시킨 상기 펩타이드의 염을 사용함으로써 상기 제제의 안정성의 향상은 1 년 이상의 만족스러운 보관 안정성을 나타내는 즉석 사용 가능한 주사용 조성물의 제조를 가능하게 한다.

4℃에서 시간에 대한 상이한 제제 중의 PLGA의 분자량

시간 (분)	블랭크	LA-AC	LA-HCl-1	LA-MS
0	24655	23842	24369	24556
1	25214	24282	25203	24574
3	24567	22775	24833	24833
6	23935	21957	24661	24034
12	23905	18906	23837	23393
18	22178	16107	22802	22227

실온에서 시간에 대한 상이한 제제 중의 PLGA의 분자량

시간 (분)	블랭크	LA-AC	LA-HCl-1	LA-HCl-2	LA-MS
0	24655.0	24282	24567	24468	24468
1	24282.2	20526	25022	25022	24832
2	22969.3	15459	23230	23230	22969
3	23227.7	11073	23228	23311	21872
6	ND	3409	18998	17952	15114
12	3112.3	380	4236	3388	2531

실시예 9. 주사용 중합체 조성물 중의 류프롤리드 및 중합체의 안정성

라우릴 에스테르의 말단기를 함유하는 락티드:글리콜리드의 비가 85/15 (DLPLG85/15, Ⅳ:0.28)인 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드) (PLGA)를 디메틸술폭사이드 (DMSO) 중에 용해시켜서 50 중량%의 용액을 얻었다. 이 류프롤리드염을 상기 DMSO 중의 PLGA 용액과 혼합하여 표 6에 나타나 있는 비율의 균일한 주사용 조성물을 얻었다. 상기 주사용 조성물을 루어-록 팁 (luer-lock tip)을 구비한 1.2 ㎖의 폴리프로필렌 주사기에 충전시켰다. 이어서, 상기 미리 충전된 주사기를 루어-록 캡을 사용하여 밀봉하였다. 캡으로 밀봉된 주사기를 용기 중에 포장하고 진공하에서 가방 중에 밀봉한 다음, 4℃에서 그리고 실온에서 (~22℃) 최대 16 개월간 보관하였다. 상기 주사용 조성물을 소정의 시점에서 시료 채취하였다. 이 시료 중의 류프롤리드의 순도를 HPLC에 의하여 측정하였다. 상기 중합체의 분자량을 분자량이 알려져 있는 폴리스티렌 표준법을 사용하는 겔 투과 크로마토그래피 (GPC)에 의하여 측정하였다.

피시험 주사용 중합체 조성물

시료	류프롤리드염 (mg)	DMSO 중의 DLPLG 8515 (mg)	약물 적재량 (%, w/w)
블랭크	0	4000	0
LAAc	200.4	4788	4
LAMS-3	200.0	4806	4
LAHCl-3	202.8	4810	4

놀랍게도, 류프롤리드의 아세트산염 대신, 염산염 및 메실레이트염을 사용하면 4℃에서 시간에 따른 DMSO에 녹인 PLGA 용액 중의 류프롤리드 및 중합체의 분해가 현저하게 감소된다는 사실이 발견되었다. 도 1과 도 2는 각각 4℃에서 시간에 따른 DMSO 중의 PLGA 용액 중의 류프롤리드의 분해를 나타내고 있다. 16 개월 후, 아세트산류프롤리드의 경우에 있어서 최대 약 20%의 류프롤리드가 분해되는 반면, 류프롤리드 염산염 및 류프롤리드 메실레이트 제제의 경우에는 5% 이하의 류프롤리드가 분해되었다. 도 5는 상이한 제제들에 있어서 PLGA 분자량의 변화를 도시하였다. 블랭크 대조군과 비교하여 보면, 아세트산류프롤리드 제제 중의 PLGA의 분자량은 4℃에서 16 개월 후에 약 40% 감소되었다. 이 결과는, HCl 및 메탄술폰산 등의 강산을 사용하여 형성시킨 류프롤리드염은 DMSO 용액 중에서 상기 펩타이드와 PLGA간의 상호 작용/반응을 거의 완전히 방지한다는 사실을 나타낸다. 반면에, 아세트산 등의 약산은 DMSO 용액 중에서 상기 펩타이드와 PLGA간의 유해한 상호 작용/반응을 방지하지 못한다.

실시예 10. 주사용 중합체 제제로부터의 류프롤리드의 시험관내 방출

3종의 중합체 비히클 용액들을 다음과 같이 조제하였다. 라우릴 에스테르 말단기를 함유하는 PLG 85/15 (0.28 Ⅳ)를 50 중량% 및 55 중량%의 NMP 중에 용해시키고 카르복시산의 말단기를 나타내는 RG503 (0.42 Ⅳ)를 50 중량%의 NMP 중에 용해시켰다. 이어서, 적당한 양의 류프롤리드 염산염 (LAHCl) 및 류프롤리드 메실레이트 (LAMS)를 각각 6 중량%의 중합체 용액과 혼합하였다. 상기 제제들을 완전히 혼합시켜서 균질 제제를 얻었다.

상기 제제 현탁액의 분취량 (약 100 ㎎)을 37℃에서 0.1%의 아지드화나트륨을 함유하는 pH 7.4의 인산염 완충 식염수 3 ㎖ 중에 주사하였다. 상기 주사액을 선택된 시점에서 금방 조제한 완충 용액으로 교체하고, pH 7.4의 인산염 완충액으로 2배 희석시킨 상기 제거된 완충 용액을 HPLC에 의하여 약물 농도를 분석하였다. 각각의 시점에서 방출된 양을 계산하였다. 도 3은 상이한 약제에 대하여 시간에 따른 류프롤리드의 누적 방출을 나타내고 있다.

도 3에 도시되어 있는 바와 같이, LAHCl과 LAMS간의 류프롤리드 방출에 있어서 현저한 차이는 없다. 그러나, PLGA의 종류와 농도는 류프롤리드의 방출에 상당한 영향을 미치는 것으로 보인다. RG503H 제제로부터의 류프롤리드의 방출 속도는 PLG85/15 제제들로부터의 방출 속도보다 훨씬 빨랐다. 따라서, RG503H는 류프롤리드의 단기 방출에 적절한 반면, PLG85/15는 상기 펩타이드 약제의 장기 방출용으로 유용할 수 있다. 상기 펩타이드 약제의 방출 속도는 상기 PLGA의 농도를 변화시킴으로써 역시 더 변화시킬 수도 있다. PLG85/15의 농도가 50%에서 55%로 증가됨에 따라, 상기 류프롤리드의 초기 방출 속도는 현저하게 감소되었다. 따라서, 목적하는 방출 특성을 달성하기 위한 펩타이드 약제용의 특정 제제에 대한 파라미터들은 단순한 실험에 의하여 용이하게 얻을 수 있다.

실시예 11. 류프롤리드의 시험관내 방출에 대한 부형제의 영향

부형제를 함유하거나 함유하지 않는 중합체 비히클 용액들을 다음과 같이 조제하였다. 라우릴 에스테르 말단기가 있는 PLA 100DLPL (0.26 Ⅳ, 알라바마주, 레이크쇼어)와 비타민 E TPGS를 표 7에 따른 적정량으로 NMP 중에 용해시켰다. 이어서, 적정량의 류프롤리드 염산염 (LAHCl)을 15 중량%의 중합체 용액과 혼합하였다. 상기 제제들을 완전히 혼합하여 균일 제제들을 얻었다.

류프롤리드의 시험관내 방출에 대한 부형제의 영향

시료	PLA 100DLPL (%)	NMP (%)	비타민 E TPGS (%)	LAHCl (%)
제제-1	47	38	0	15
제제-2	44.5	36.4	4.2	15

상기 제제 현탁액의 분취량 (약 100 ㎎)을 37℃에서 0.1%의 아지드화나트륨을 함유하는 pH 7.4의 인산염 완충 식염수 3 ㎖ 중에 주사하였다. 상기 주사액을 선택된 시점에서 금방 조제한 완충 용액으로 교체하고, pH 7.4의 PBS로 10배 희석시킨 상기 제거된 완충 용액을 HPLC에 의하여 약물 농도를 분석하였다. 각 시점에서의 방출량을 계산하였다. 도 4는 상이한 약제에 대하여 시간에 따른 류프롤리드의 누적 방출을 나타내고 있다.

도 4에 도시되어 있는 바와 같이, 비타민 E TPGS의 배합은 초기의 급방출에 영향을 미치지는 않으나, 그 후의 단계에서의 류프롤리드의 방출 속도를 저하시키는 것으로 나타났다. 따라서, 비타민 E TPGS는 상기 펩타이드의 전달을 연장하고 또한 항산화제로서 작용하는 데 유용할 수 있다.

실시예 12. 류프롤리드의 시험관내 방출에 대한 부형제의 영향

부형제를 함유하거나 함유하지 않는 상기 중합체 비히클 용액들을 다음과 같이 조제하였다. 라우릴 에스테르 말단기를 함유하는 PLA 100D040 (0.34 Ⅳ, 두렉, CA)와 중쇄의 트리글리세리드 미글리올 812를 표 8에 따른 적정량에서 NMP 중에 용해시켰다. 이어서, 적정량의 류프롤리드 염산염 (LAHCl)을 15 중량%의 중합체 용액과 혼합하였다. 상기 제제들을 완전히 혼합하여 균일 제제들을 얻었다.

류프롤리드의 시험관내 방출에 대한 부형제들의 영향

시료	PLA 100D040 (%)	NMP (%)	Miglyol 812 (%)	LAHCl (%)
제제-1	42.5	42.5	0	15
제제-2	42.5	38.3	4.2	15

상기 제제 현탁액의 분취량 (약 100 ㎎)을 37℃에서 0.1%의 아지드화나트륨을 함유하는 pH 7.4의 인산염 완충 식염수 3 ㎖를 함유하는 바이알 중에 주사하였다. 상기 주사액을 선택된 시점에서 금방 조제한 완충 용액으로 교체하고, pH 7.4의 PBS로 10배 희석시킨 상기 제거된 완충 용액을 HPLC에 의하여 약물 농도를 분석하였다. 각 시점에서의 방출량을 표준 곡선을 사용하여 역계산하였다. 도 5는 상이한 약제에 대하여 시간에 대한 류프롤리드의 누적 방출을 나타내고 있다.

도 5에 도시되어 있는 바와 같이, 미글리올 812의 혼입으로 인하여 류프롤리드의 초기 급방출이 현저하게 감소되고 나중 단계에서 류프롤리드의 방출 속도를 유지되는 것으로 나타났다. 따라서, 미글리올 812는 상기 펩타이드의 전달을 연장하는 데 유용할 수 있다. 실시예 11의 결과와 비교해 보면, 상기 중합체의 분자량도 역시 류프롤리드의 초기 급방출에 현저하게 영향을 미치는 것으로 보인다. PLA의 분자량이 작을수록 류프롤리드의 초기 급방출 속도가 더 작아지는 것으로 보인다.

실시예 13. 류프롤리드의 생체내 방출

라우릴 에스테르의 말단기를 함유하는 락티드:글리콜리드의 비가 85/15 (DLPLG85/15, Ⅳ:0.28)인 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드)를 N-메틸-2-피롤리돈 (NMP) 중에 용해시켜서 55 중량%의 용액을 얻었다. 이 류프롤리드염, 즉 류프롤리드 메실레이트 또는 류프롤리드 HCl을 상기 NMP 중의 PLGA 용액과 혼합하여 약물 적재량이 약 12%인 균일한 주사용 조성물을 얻었다. 상기 주사용 제제를 루어-록 팁 (luer-lock tip) 및 19 게이지 박막 바늘이 부착된 1.2 ㎖의 폴리프로필렌 주사기에 옮겼다. 이어서, 상기 각 제제를 약 100 ㎕의 양으로 1군당 6 마리인 쥐에게 피하 주사하였다. 그 결과 얻은 혈청 시료들을 각 동물로부터 투여 후 3 시간, 1, 3, 7, 14, 28, 42, 56 및 70 일에서 수집하였다. 페닌술라 라바라토리스사로부터 구득 가능한 키트를 사용하는 엘리사 (ELISA)에 의하여 상기 혈청 시료를 류프롤리드 농도에 대하여 분석하였다. 다양한 시점에서 상기 삽입물 중에 잔류하는 상기 류프롤리드를 HPLC에 의하여 분석하였다.

도 6은 최대 70일간 2종의 상이한 제제로부터의 류프롤리드의 방출 특성을 나타내고 있다. 양자의 제제는 모두 류프롤리드의 초기 급방출을 나타내었다. LAHCl을 함유하는 제제는 3 시간에서 661.6 ng/㎖의 C_max에 도달하고, LAMS를 함유하는 상기 제제도 역시 3 시간에서 370.6 ng/㎖의 C_max에 도달하였다. 양자의 제제는 모두 장기간에 걸친 류프롤리드의 지속적인 방출을 나타내었다. LAMS를 함유하는 상기 제제는 LAHCl을 함유하는 제제로부터 얻는 것보다 더 일정한 류프롤리드의 혈청 농도를 나타내었다.

실시예 14. 류프롤리드의 생체내 방출

1,6-헥산디올 부분을 함유하는 락티드:글리콜리드의 비가 85/15 (DLPLG85/15, Ⅳ:0.27)인 폴리(D,L-락티드-코-글리콜리드)를 N-메틸-2-피롤리돈 (NMP) 중에 용해시켜서 50 중량%의 용액을 얻었다. 이 류프롤리드염, 즉 아세트산류프롤리드 또는 류프롤리드 HCl을 상기 NMP 중의 PLGA 용액과 혼합하여 약물 적재량이 약 12%인 균일한 주사용 조성물을 얻었다. 상기 주사용 제제를 루어-록 팁 및 19 게이지 박막 바늘이 부착된 1.2 ㎖의 폴리프로필렌 주사기에 옮겼다. 이어서, 약 100 ㎕의 양으로 1군당 6 마리인 쥐에게 피하 주사하였다. 그 결과 얻은 혈청 시료들을 각 동물로부터 투여 후 3 시간, 1, 3, 7, 14, 28, 42, 56, 70, 91, 112, 133, 154, 175 및 206 일에서 수집하였다. 페닌술라 라바라토리스사로부터 구득 가능한 키트를 사용하는 엘리사 (ELISA)에 의하여 상기 혈청 시료를 류프롤리드 농도에 대하여 분석하고, LC/MS/MS에 의하여 테스토스테론 농도에 대하여 분석하였다. 다양한 시점에서의 상기 삽입물 중에 잔류하는 류프롤리드를 HPLC에 의하여 분석하였다.

부세렐린, 데스로렐린, 페르티렐린, 히스트렐린, 루트렐린, 고세렐린, 나파렐린, 트립토렐린, 세트로렐릭스, 아바렐릭스 및 GLP-1, PYY 등의 기타의 펩타이드 등의 기타의 LHRH 유사체와 기타의 중합체 및 용매를 사용하여 이와 유사한 실험을 설계 및 수행할 수 있다.

실시예 15. 안정화 주사용 중합체 조성물의 용도

안정화 주사용 중합체 조성물의 환자에 대한 투여는 여러 가지 방법으로 수행될 수 있다. 생분해성 삽입물을 정위치에 형성시키기 위하여 중합체 조성물을 피하 또는 근육내 주사하거나, 경피성 크림으로서 도포하거나, 또한 항문 좌약 또는 질 좌약으로서 환자에게 도입시킬 수 있다.

실시예 16. LAHCl을 함유하는 중합체 마이크로 구체의 조제

유중수(油中水; O/W)의 단일 에멀젼 기법에 의하여 폴리(락티드-코-글리콜리드) (PLGA) 마이크로 구체를 조제하였다. PLGA를 염화메틸렌 (DMC) 중에 용해시킨다. LAHCl을 캡슐화히기 위하여, 상기 약물을 DCM 중의 PLGA 용액과 혼합하였다. 그 결과 얻은 혼합 용액 또는 현탁액을 4℃의 냉장고에서 미리 냉각시킨 0.5~1% (w/v)의 PVA (PVA, 88% 가수 분해, 평균 분자량은 31,000~50,000, Sigma-Aldrich) 용액 500 ㎖ 중에 에멀젼화시킨다. 이 에멀젼을 실온에서 3 시간 연속하여 교반하여 상기 DCM을 증발시킨다. 그 결과 경화된 마이크로 구체를 수집하고, 이를 탈이온수로 3회 세척한 다음, 동결 건조한다.

실시예 17. 삽입형 중합체 기질을 제조하기 위한 상기 안정화 액체 중합체 조성물의 용도

RG503H (Boehringer Ingelheim Chemicals, Inc. USA) 등의 락트드 대 글리콜리드의 비율이 50:50 내지 100:0인 폴리(락트산-코-글리콜산)으로 구성되는 상기 생분해성 중합체를 아세트산에틸 또는 염화메틸렌 등의 휘발성 유기 용매 중에 용해시킨다. 본 명세서에 정의되어 있는 유익한 염, 예컨대 고세렐린 메실레이트의 적정량 (상기 중합체에 비하여 0.01 중량%~30 중량%)을 상기 중합체 용액 중에 용해/분산시킨다. 상기 용액을 완전히 혼합하여 균일한 용액 또는 현탁액을 얻는다. 상기 혼합이 종료된 후, 상기 용매를 증발시켜 제거한다. 이는 주사용의 균일한 소형 입자를 형성시키는 분무 건조 공정에 의하여 수행된다. 이는 삽입물을 형성시키기 위한 주형법으로도 역시 수행될 수 있다. 그 결과 얻은 중합체 기질은 분쇄하여 분말로 만들 수 있고 주사용 현탁액으로서 제제될 수도 있다.

이와 같이 하여 얻은 고체 투여형은 피하 또는 근육내 주사될 수 있고, 또는 피부 밑에 삽입물의 형태로 외과 수술에 의하여 위치되거나 또는 펩타이드 약제용 경구 전달계의 일부로서 경구 공급될 수도 있다. 상기 고체의 마이크로 구체들은 현탁액 또는 비수용성 용액으로서 제조될 수도 있는데, 상기 현탁액 또는 비수용성 용액은 폐 약물 전달의 위하여, 흡입을 통하여 환자에게 투여될 수도 있다. 또한, 상기 마이크로 구체를 오일 중에 현탁시켜서 항문 좌약 또는 질 좌약으로서 환자에게 도입시킬 수도 있다.

Claims

주사용 중합체 조성물로서,
a) 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 질산, 크롬산, 메탄술폰산, 트리플루오로메탄 술폰산, 트리클로로아세트산, 디클로로아세트산, 브로모아세트산, 클로로아세트산, 시아노아세트산, 2-클로로프로피온산, 2-옥소부티르산, 2-클로로부티르산, 4-시아노부티르산, 과염소산 및 인산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 강산으로 형성시킨 펩타이드 약제의 염과,
b) 생분해성 중합체와,
c) 생분해성 중합체를 용해하고 수용성 또는 생물학적 유체 중에 혼화성 또는 분산성인 약학적으로 허용 가능한 유기 용매와,
d) 필요에 따라, 1종 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 함유하는 주사용 중합체 조성물.