KR20140031048A - 어류의 스쿠티카충 및 병원성 세균 구제용 조성물 및 이들의 구제방법 - Google Patents
어류의 스쿠티카충 및 병원성 세균 구제용 조성물 및 이들의 구제방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 클로라민-티(chloramine-T) 및 과산화수소(hydrogen peroxide)로 구성되며, 상기 클로라민-티 및 과산화수소는 투여순서와 무관하게 순차적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균 구제용 조성물, 및 클로라민-티 및 과산화수소를 함유하는 약액에 순서와 무관하게 순차적으로 어류를 약욕시키는 것을 특징으로 하는 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균의 구제방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 조성물 및 구제방법은 어류의 스쿠티카충 및 주요 어병세균의 구제효과가 매우 우수하며, 어류에 부작용이 없이 안전하고, 환경에 악영향을 끼치지 않기 때문에 해양산업, 특히 양식업계에서 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 클로라민-티(Chloramine-T) 및 과산화수소(Hydrogen peroxide)로 구성되며, 상기 클로라민-티 및 과산화수소는 투여순서와 무관하게 순차적으로 투여되는 것을 특징으로 하는, 어류의 스쿠티카충 및 병원세균 구제용 조성물에 관한 것이다.
정부의 기르는 어업 육성정책의 지속적 추진 결과, 현재 양식어업에 의한 수산물 생산량은 급속히 증가하였고 양식어류의 품종 또한 매우 다양해졌다. 양식 어종 중에서도 넙치는 성장이 빠르고 맛이 좋아 양식이 매우 활성화되어 현재 전체 양식 어류 생산량에 있어서 많은 부분을 차지하고 있다. 국내 넙치 양식장은 제주도, 남해안의 완도, 거제도 일부, 부산 그리고 동해안의 경주 감포 지역에 분포되어 있으며, 특히 제주도에 대부분의 넙치 양식장이 밀집되어 있다.
그러나, 기르는 어업의 활성화와 더불어 최근, 양식어업으로 인한 연안 수질 악화 등의 환경오염, 양식어장 노화, 과밀사육, 및 품종의 열성화 등으로 양식 생물의 항병력이 저하되어 각종 질병에 의한 폐사량이 매년 증가되고, 생산성이 저하되고 있으며, 질병에 의한 양식 생물 폐사량은 전체 양식 생물 생산량의 10∼20%를 차지하고 있다.
양식 어류 중 에서도 양식 넙치에 감염하여 피해를 주는 질병으로 대량 폐사를 일으키거나 만성적으로 고질적인 병해를 유발하는 질병에는 스쿠티카충증, 에드워드병, 연쇄상구균증, 활주세균증 등을 들 수 있다.
특히, 스쿠티카충은 치어, 성어 등 크기에 상관없이 감염되고 연중 계속 발생하여, 이로 인한 폐사를 지속적으로 발생시키므로 스쿠티카충의 퇴치는 넙치 양식 산업의 중요한 과제이다. 스쿠티카충은 치어의 대량 폐사와 더불어 2차 감염 및 누적 폐사량을 증가시킴으로써 양어장에 막대한 경제적 손실을 야기한다.
넙치 스쿠티카충증은 30~40 ㎛의 스쿠티카 섬모충에 의해 발생되며 넙치의 인공종묘 및 양성어에 감염되고, 감염부위도 체표의 피부와 지느러미 뿐만 아니라, 심부의 간장, 혈관 및 뇌조직에까지 이른다. 스쿠티카충은 대부분 소성결합조직의 파괴를 통하여 넙치를 대량 폐사시킨다. 스쿠티카 섬모충은 다른 어류의 기생충과는 달리 혈관을 통하여 뇌조직까지 침입하여 기생하기 때문에 감염시 치료가 어려운 질병이다.
그람 음성 간균인 에드워드시엘라 타다(Edwardsiella tarda)에 의한 에드워드병은 세균성질병으로 연령에 관계없이 5-11월 경에 주로 발생하며, 감염 어류는 머리, 꼬리 등의 체표나 지느러미 부레 등에 농양, 복부팽만, 또는 장의 돌출 등이 생기는 것이 특징이며 국내에서는 만성적으로 발생하여 많은 피해를 주고 있다. 특히 고수온이 지속되는 해에는 감염이 장기화되어 양식 어류의 폐사율이 수십 퍼센트에 이르기도 한다.
그람 음성간균인 활주세균(Flexibacter maritimus)에 의한 활주세균증은 참돔 등의 어린 치어에서 주로 발생하며, 피부 궤양이나, 입 끝을 흰색 또는 황백색으로 부식시키는 것이 특징이며, 만성으로 진행되는 질병으로 종묘 생산과정 중에 큰 피해를 입히므로 수산양식산업에서 매우 중요한 질병이다.
그람 양성구균인 연쇄상구균(Streptococcus sp.)에 의한 연쇄상구균증은 여름부터 가을까지의 고 수온기에 발생하는 전염병으로 안구돌출 및 출혈, 지느러미 발적 및 신장, 비장의 종창을 일으키고, 폐사율이 매우 높은(0.1-8%) 전염병이다.
기존에는 넙치 스쿠티카충 살충을 위해서 포르말린 등을 주기적, 반복적으로 약욕하는 것에 의존하여 왔다. 그러나 포르말린의 주기적, 반복적인 약욕은 넙치의 스트레스를 가중시켜 생산성을 저하시킬 뿐만 아니라, 포르말린은 유해물질로서 양식환경에서의 사용이 규제되고 있다.
또한, 어류에서 문제를 일으키는 병원성 세균인 활주세균, 에드워드균, 연쇄상구균 등은 기존에는 항생제, 포르말린 등을 이용하여 치료 또는 예방하여 왔으나, 최근 이들의 사용에 따른 어육위생, 내성균 발생, 환경유해성 등이 문제되고 있으며, 이들에 대한 백신이 개발되어 사용되고는 있으나 병원성 균주가 다양하고, 불활화백신의 예방효율이 불완전하며, 치어에는 백신의 접종이 어렵다는 한계가 존재한다.
따라서, 기존의 포르말린 또는 항생제를 대체하여 스쿠티카충 및 어류의 병원성 세균에 대한 구제효과가 뛰어나면서도, 어류에 안전하고 식품위생에 해를 끼치지 않는, 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균의 구제를 위한 새로운 스쿠티카충 구제제의 개발이 절실히 요구되고 있는 실정이다.
본 발명자들은 어류의 스쿠티카충 및 주요 병원성 세균의 구제제로서 항생제 및 포르말린 사용에 따른 내성균 확산, 유해성 등의 문제점을 해결, 보완하고자 예의 노력한 결과, 클로라민-티와 과산화수소를 순차적으로 복합 사용했을 때, 각각을 단일제로 사용했을 때보다 어류에서 스쿠티카충과 병원성 세균을 구제하는 효과가 뛰어남을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명은 클로라민-티(chloramine-T) 및 과산화수소(hydrogen peroxide)로 구성되며, 상기 클로라민-티 및 과산화수소는 투여순서와 무관하게 순차적으로 투여되는 것을 특징으로 하는, 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균 구제용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 클로라민-티 및 과산화수소를 함유하는 약액에 순서와 무관하게 순차적으로 어류를 약욕시키는 것을 특징으로 하는 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균의 구제방법을 제공한다.
본 발명은 클로라민-티(chloramine-T) 및 과산화수소(hydrogen peroxide)로 구성되며, 상기 클로라민-티 및 과산화수소는 투여순서와 무관하게 순차적으로 투여되는 것을 특징으로 하는, 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균 구제용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 클로라민-티 및 과산화수소를 함유하는 약액에 순서와 무관하게 순차적으로 어류를 약욕시키는 것을 특징으로 하는, 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균의 구제방법을 제공한다.
본 발명에 따른 조성물 및 구제 방법은 어류의 스쿠티카충 및 주요 어병세균의 구제효과가 매우 우수하며, 어류에 부작용이 없이 안전하고, 환경에 악영향을 끼치지 않기 때문에 해양산업, 특히 양식업계에서 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 클로라민-티 또는 과산화수소의 스쿠티카충에 대한 구제효과의 양성판별 기준을 나타낸 도이다.
도 2는 클로라민-티와 과산화수소를 단일 또는 순차적 복합처리 농도에 따른 스쿠티카충의 구제효과를 나타낸 도이다(2a:단일처리시, 2b: 순차적 복합처리시).
도 3은 어류의 병원성 세균인 에드워드시엘라 타다(Edwardsiella tarda ) 균에 대한 클로라민-티와 과산화수소 복합처리 농도에 따른 항균효과를 나타낸 도이다.
도 4는 어류의 병원성 세균인 스트렙토코쿠스 이니애(Streptococcus iniae ) 균에 대한 클로라민-티와 과산화수소 복합처리 농도에 따른 항균효과를 나타낸 도이다.
도 2는 클로라민-티와 과산화수소를 단일 또는 순차적 복합처리 농도에 따른 스쿠티카충의 구제효과를 나타낸 도이다(2a:단일처리시, 2b: 순차적 복합처리시).
도 3은 어류의 병원성 세균인 에드워드시엘라 타다(Edwardsiella tarda ) 균에 대한 클로라민-티와 과산화수소 복합처리 농도에 따른 항균효과를 나타낸 도이다.
도 4는 어류의 병원성 세균인 스트렙토코쿠스 이니애(Streptococcus iniae ) 균에 대한 클로라민-티와 과산화수소 복합처리 농도에 따른 항균효과를 나타낸 도이다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 클로라민-티(chloramine-T) 및 과산화수소(hydrogen peroxide)로 구성되며, 상기 클로라민-티 및 과산화수소는 투여순서와 무관하게 순차적으로 투여되는 것을 특징으로 하는, 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균 구제용 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
또한, 본 발명은 클로라민-티 및 과산화수소를 함유하는 약액에 순서와 무관하게 순차적으로 어류를 약욕시키는 것을 특징으로 하는 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균의 구제방법을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 조성물의 유효성분인 클로라민-티(chloramine-T) 및 과산화수소(hydrogen peroxide)는 시판되는 것을 구입하여 사용할 수 있다.
상기 클로라민-티(Chloramine-T)는 C7H7CINO2S.Na(3H2O)의 분자구조를 갖고 있는 분자량 227.64g/mol의 흰색분말이며 물에 녹인 상태에서는 안정성이 낮아진다. 클로라민-티는 우수한 소독효과와 높은 안전성을 지닌 소독제로 미국 등 선진국에서 음용수 소독제, 수영장 소독 등에 70년 이상 사용되어 왔다.
또한, 상기 과산화수소(hydrogen peroxide)는 H2O2의 분자구조를 갖는 분자량 34.0147g/mol의 무색의 강산성 액체이며 일반적으로 28-35% 농도의 용액으로 시판된다. 과산화수소는 피부소독 및 표백제 등으로 널리 사용되고 있으며, 분해를 막기 위해 주석염이나 인산염과 같은 안정제를 첨가하기도 한다.
상기 클로라민-티(Chloramine-T)와 과산화수소(Hydrogen peroxide)는 분말 형태 또는 용액상태로 사용할 수 있고, 순서에 무관하게 순차적으로 투여할 수 있다.
본 발명의 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균의 구제용 조성물 및 구제방법의 대상이 되는 어류는 스쿠티카충 및 어류의 병원성 세균(에드워드균, 연쇄상구균, 활주세균 등)의 감염증이 발생하는 어류이고, 바람직하게는 양식되는 경우가 많은 넙치, 터보트(turbot), 돔, 복어, 농어, 조피볼락일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 어류의 병원성 세균의 구제용 조성물 및 구제방법의 대상이 되는 병원성 세균은 바람직하게는 에드워드균(Edwardsiella tarda), 활주세균(Tenacibaculum maritimum), 연쇄상구균(Streptococcus iniae, S. parauberis)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 균일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 산제 또는 액제의 형태로 제형화가 가능하며, 다양한 방법으로 투여가 가능하나, 일반적인 투여방법은 유효농도의 약액을 제조하여 스쿠티카충 또는 병원성 세균으로 인한 병변을 가진 어류를 침지하여 약욕시키는 것이다. 이 때 본 조성물의 투여량은 피처리 어류의 중량, 건강상태, 투여시간, 질환의 중등도에 따라 그 범위를 달리할 수 있다.
본 발명의 조성물 및 구제방법에서의 클로라민-티 및 과산화수소의 바람직한 투여 농도는 각각 1~100 ppm 및 12.5~100 ppm, 더욱 바람직하게는 1.8~25 ppm 및 12.5~50 ppm, 가장 바람직하게는 2.5~5 ppm 및 12.5~25 ppm의 범위일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 조성물 또는 구제방법에서의 일일 약욕시간은 1일 1~4시간, 바람직하게는 1일 1~2시간이나, 증상의 중등도에 따라 증감이 가능하다.
본 발명의 조성물 및 구제방법은 스쿠티카충 또는 어류의 병원성 세균의 구제를 위하여 단독으로, 또는 기타 약물치료 및 생물학적 반응조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예 1. 스쿠티카충 및 어류 병원성 세균의 배양
1-1. 스쿠티카충의 배양
본 발명에서 사용된 스쿠티카충은 Philasterides dicentrarchi (syn. Miamiensis avidus) (부경대학교 수산생명의학과 어패류기생충학실험실에서 분양)를 사용하였으며, 스쿠티카충을 배양하기 위한 세포주는 CHSE-214 (치누크 연어 배아 :Chinook salmon embryo, 부경대학교 수산생명의학과 어패류기생충학실험실에서 분양)를 사용하였다.
먼저, CHSE-214 세포를 페니실린-스트렙토마이신 용액(penicillin- streptomycin solution) 1%, 비동화 FBS 10%가 첨가된 MEM(Modified Eagle's Medium)을 이용하여 3~4일에 한번씩 계대하며 20℃에서 배양하였다. CHSE-214 세포를 먹이로 하여 스쿠티카를 배양하며 3~4일에 한번씩 새로운 세포로 옮겨주었다.
스쿠티카를 새로운 세포로 옮기고 3~4일 후, 세포가 모두 없어지고 스쿠티카의 개체수가 충분히 늘어났을때 500×g 에서 5분 동안 원심분리하여 스쿠티카를 수집한 뒤, HBSS(Hank's balanced salt solution)로 2회 세척하였다. 수집된 스쿠티카는 0.2 ㎛ 크기의 주사용 여과기 (syringe filter)로 여과한 해수에 옮겨 20℃에서 하루 동안 배양하였다.
1-2. 어류 병원성 세균의 배양
본 발명에서 공시한 4종의 어류의 병원성 세균은 활주세균(Flexibacter maritimus), 에드워드균(Edwardsiella tarda), 2종의 연쇄상 구균(Streptococcus iniae, S. parauberis)으로, 제주도 해양수산자원연구원으로부터 분양받은 균주를 사용하였다. 상기 균주들은 TSB(Tryptic soy broth)에서 25oC 하에 24시간 동안 배양한 후, 30%의 농도로 글리세린을 첨가하고, -20oC 하에서 냉동보관하였다. 시험전날 균들은 1.5% NaCl을 첨가한 TSB에 배양하고 TSA(Tryptic soy agar)에 계대 배양하여 시험에 사용하였다.
실시예 2. 본 발명의 클로라민-티 및 과산화수소의 순차적 처리에 의한 스쿠티카충 또는 어류의 병원성 세균에 대한 구제효과
2-1. 본 발명의
클로라민
-티 또는 과산화수소의 단일 처리 또는 순차적 복합처리 물질의
스쿠티카충
구제효과
상기 실시예 1에서 해수에 하루 배양한 스쿠티카충을 96-웰 세포 배양 플레이트 (96 well cell culture plate) 에 90㎕씩 옮기고, 스쿠티카충 구제제 후보물질들을 한 웰 (well)당 희석배수별로 10㎕씩 첨가하였다.
본 발명에서 사용된 스쿠티카 구제제 후보물질들은 하기 표 1에 나타내었다.
| 후보물질 |
| 클로라민-티(Chloramine-T) |
| 과산화수소 (28%) |
| 양성대조군 : 포르말린(formalin) |
실험군으로는 클로라민-티 와 과산화수소를 사용하였고, 양성 대조군으로는 현재 스쿠티카충의 구제제로 사용되고 있는 37%의 포르말린(Formalin) 용액을 사용하였다. 본 발명에 따른 스쿠티카충 구제물질을 처리한 후 시간별로 관찰한 스쿠티카충의 생존여부는 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이, 스쿠티카의 정상적 형태인 물방울 형태가 후보물질들과 반응 후 운동성이 없는 구형에 가까운 형태로 변했을 때 효능이 있는 것으로 하였으며, 스쿠티카가 100% 구제되었을 때는 +++, 50% 이상 구제되었을 때는 ++, 50% 미만 구제되었을 때 + 로, 효과가 없을 때 - 로 표시하였다.
(1) 단일 처리 물질의 스쿠티카충 구제효과
클로라민-티는 10배의 증류수에 용해(10% 액)하여 사용하였으며 이것의 200배 희석액을 스쿠티카충 배양액의 10%(50ppm)가 되도록 첨가하여 1시간 동안 처리하였다. 같은 방법으로 400배(25ppm), 800배(12.5ppm), 1,000배(10ppm), 2,000배(5ppm), 4,000배(2.5ppm), 6,000배(1.8ppm), 8,000배(1.25ppm)로 희석하여 시험하였다.
또한, 과산화수소(28% 원액)도 증류수로 10% 희석한 용액의 100배 희석액을 스쿠티카충 배양액의 10%(100ppm)가 되도록 첨가하여 1시간 또는 2시간 동안 처리하였다. 같은 방법으로 200배(50ppm), 400배(25ppm), 800배(12.5ppm)로 희석하여 시험하였다.
결과는 도 2a 및 표 2에 나타내었다.
| 공 시 물 질 | 처 리 시 간 | |||
| 1 시간 | 2 시간 | |||
| 클로라민-티(10%) 100배 | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 클로라민-티(10%) 200배 | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 클로라민-티(10%) 400배 | ++ | ++ | ++ | ++ |
| 클로라민-티(10%) 800배 | - | - | - | - |
| 클로라민-티(10%) 1000배 | - | - | - | - |
| 클로라민-티(10%) 2000배 | - | - | - | - |
| 클로라민-티(10%) 4000배 | - | - | - | - |
| 클로라민-티(10%) 6000배 | - | - | - | - |
| 클로라민-티(10%) 8000배 | - | - | - | - |
| H2O2(10%) 100배 | ++ | ++ | +++ | ++ |
| H2O2(10%) 200배 | ++ | ++ | +++ | ++ |
| H2O2(10%) 400배 | ++ | ++ | ++ | ++ |
| H2O2(10%) 800배 | + | + | - | - |
| Formalin(100ppm): 양성 대조군 | +++ | +++ | +++ | +++ |
| Formalin(100ppm) | +++ | +++ | +++ | +++ |
단일 처리 물질의 스쿠티카충 구제효과
* +++; 스쿠치카충 100% 사멸, ++; 50% 사멸, +; 25% 사멸, -; 100% 생존.
도 2a에 나타낸 바와 같이, 클로라민-티(10%액) 단일제의 경우, 스쿠티카충을 100% 살충하는 효과는 100배(100ppm)와 200배(50ppm) 희석농도이었으며, 50% 살충효과는 400배(25ppm) 희석농도에서 확인할 수 있었으나 800배(12.5ppm), 1,000배(10ppm), 2,000배(5ppm), 4,000배(2.5ppm), 8,000배(1.25ppm) 희석농도에서는 스쿠티카충의 살충효과가 나타나지 않았다.
과산화수소(10%액) 단일제의 경우, 100배 희석농도에서 1시간 처리시에는 50%의 살충효과를 나타내었으나 2시간 처리 후에는 100% 살충효과를 나타냄을 확인할 수 있었다. 200배(50ppm)와 400배(25ppm) 희석농도에서는 1시간과 2시간 처리 후에 모두 50%의 살충효과를 보였으나 800배(12.5ppm) 희석농도에서는 살충효과가 나타나지 않았다.
(2) 복합 처리 물질의 스쿠티카충 구제효과
클로라민-티 100ppm, 50ppm, 25ppm, 12.5ppm, 10ppm, 5ppm, 2.5ppm, 1.8ppm, 1.2ppm과 과산화수소 100ppm, 50ppm, 25ppm, 12.5ppm의 각 조합으로 복합처리 물질을 구성하고, 각 조합별로 클로라민-티를 먼저 첨가한 후 과산화수소를 첨가하여 복합처리 하였으며, 처리시간은 각각 1시간 및 2시간 동안 처리하여 스쿠티카충 구제효과를 확인하였다.
결과는 도 2b 및 표 3에 나타내었다.
| 공 시 물 질 | 처 리 시 간 | ||||
| 1 시간 | 2 시간 | ||||
| 클로라민-티(10%) 100배(100ppm) |
H2O2(10%) 100배 (100ppm) |
+++ | +++ | +++ | +++ |
| H2O2(10%) 200배 (50ppm) |
+++ | +++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 400배 (25ppm) |
+++ | +++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 800배 (12.5ppm) |
+++ | +++ | +++ | +++ | |
| 클로라민-티(10%) 200배(50ppm) |
H2O2(10%) 100배 | +++ | +++ | +++ | +++ |
| H2O2(10%) 200배 | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 400배 | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 800배 | ++ | ++ | +++ | +++ | |
| 클로라민-티(10%) 400배(25ppm) |
H2O2(10%) 100배 | +++ | +++ | +++ | +++ |
| H2O2(10%) 200배 | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 400배 | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 800배 | + | + | ++ | ++ | |
| 클로라민-티(10%) 800배(12.5ppm) |
H2O2(10%) 100배 | +++ | +++ | +++ | +++ |
| H2O2(10%) 200배 | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 400배 | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 800배 | - | - | - | - | |
| 클로라민-티(10%) 1000배(10ppm) |
H2O2(10%) 100배 | +++ | +++ | +++ | +++ |
| H2O2(10%) 200배 | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 400배 | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 800배 | - | - | - | - | |
| 클로라민-티(10%) 2000배(5ppm) |
H2O2(10%) 100배 | +++ | +++ | +++ | +++ |
| H2O2(10%) 200배 | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 400배 | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 800배 | - | - | - | - | |
| 클로라민-티(10%) 4000배(2.5ppm) |
H2O2(10%) 100배 | ++ | ++ | +++ | +++ |
| H2O2(10%) 200배 | ++ | ++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 400배 | ++ | ++ | +++ | +++ | |
| H2O2(10%) 800배 | - | - | - | - | |
| 클로라민-티(10%) 6000배(1.8ppm) |
H2O2(10%) 100배 | ++ | ++ | ++ | ++ |
| H2O2(10%) 200배 | ++ | ++ | ++ | ++ | |
| H2O2(10%) 400배 | ++ | ++ | ++ | ++ | |
| H2O2(10%) 800배 | - | - | - | - | |
| 클로라민-티(10%) 8000배(1.2ppm) |
H2O2(10%) 100배 | ++ | ++ | ++ | ++ |
| H2O2(10%) 200배 | ++ | ++ | ++ | ++ | |
| H2O2(10%) 400배 | ++ | ++ | ++ | ++ | |
| H2O2(10%) 800배 | - | - | - | - | |
순차적 복합처리 물질의 스쿠티카충 구제효과
* +++; 스쿠치카충 100% 사멸, ++; 50% 사멸, +; 25% 사멸, -; 100% 생존.
도 2b 및 표3에 나타낸 바와 같이, 두 물질을 순차적 복합처리 시에 100% 살충효과를 나타낸 농도는, 클로라민-티(10%액) 100배액(100ppm)과 200배액(50ppm)을 과산화수소(10%액) 100배(100ppm), 200배(50ppm), 400배(25ppm), 800배(12.5ppm)와 각기 복합하여 순차적으로 처리한 경우, 클로라민-티(10%액) 400배(25ppm), 800배(12.5ppm), 1,000배(10ppm), 2,000배액(5ppm)과 과산화수소(10%액) 100배(100ppm), 200배(50ppm), 400배(25ppm)와 각기 복합하여 순차적으로 처리한 경우에 볼 수 있었다.
2-2. 본 발명의 클로라민-티 또는 과산화수소수의 단일 처리 또는 순차적 복합처리 물질의 어류 병원성 세균의 항균효과
본 발명의 클로라민-티 또는 과산화수소수의 4종 어류 병원균에 대한 항균활성은, 1.5% NaCl을 첨가한 TSA(tryptic soy agar)에서 배양하여 PBS(phosphate buffered saline, pH 7.2)로 수집하고 균 탁도를 McFarland standard 0.5(배양균액 1x108CFU/ml)로 조정한 균액 20㎕를, 희석배수별 클로라민-티와 과산화수소액 50㎕와 혼합하여 실온에서 1시간 동안 처리한 다음, TSA(tryptic soy agar, 1.5% NaCl 첨가) 평판에 20㎕씩 접종하고 37oC에서 24시간 동안 배양하여 균 발육 여부로 항균효과를 판독하였다. 균이 발육한 것은 +, 균이 발육하지 않은 것은 - 로 표시하였다
(1) 단일 처리 물질의 어류 병원성 세균의 항균효과
클로라민-티 또는 과산화수소의 단일제의 어류의 주요 병원성 세균인 활주세균(Tenacibaculum maritimum), 에드워드균(Edwardsiella tarda), 2종의 연쇄상구균(Streptococcus iniae, S. parauberis)에 대한 항균효과는 표 4에 나타내었다.
| 공 시 물 질 | 활주세균 (1주) |
에드워드균 (5주) |
연쇄구균(S. iniae, 2주) |
연쇄구균(S. parauberis,5주) |
| 클로라민-티(10%) 100배 (100ppm) |
- | ----- | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 200배 (50ppm) |
- | ----- | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 400배 (25ppm) |
- | ----- | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 800배 (12.5ppm) |
- | ----- | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 1000배 (10ppm) |
- | ----- | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 2000배 (5ppm) |
+ | +++++ | __ | ----- |
| 클로라민-티(10%) 4000배 (2.5ppm) |
+ | +++++ | ++ | ----- |
| 클로라민-티(10%) 6000배 (1.6ppm) |
+ | +++++ | ++ | ++++- |
| 클로라민-티(10%) 8000배 (1.25ppm) |
+ | +++++ | ++ | +++++ |
| 과산화수소(10%) 100배 (100ppm) |
- | ----- | -- | ----- |
| 과산화수소(10%) 200배 (50ppm) |
+ | +++++ | -- | ++--- |
| 과산화수소(10%) 400배 (25ppm) |
+ | +++++ | +- | ++++- |
| 과산화수소(10%) 800배 (12.5ppm) |
+ | +++++ | ++ | +++++ |
단일 처리 물질의 4종 어병세균에 대한 항균효과
* + ; 균 증식(항균효과 없음), - : 균 비 증식(항균효과 있음)
클로라민-티(10%액) 단일제의 경우, 100배(100ppm), 200배(50ppm), 400배(25ppm), 800배(12.5ppm), 1,000배(10ppm) 희석농도에서 4종 어병세균의 증식을 모두 억제하였으나 2,000배(5ppm) 희석농도에서는 2종의 연쇄구균(Streptococcus iniae, S. parauberis)만 증식을 억제하였고 4,000배(2.5ppm) 희석농도에서는 1종의 연쇄구균(Streptococcus parauberis)만 억제하였으며 6,000배(1.8ppm) 이상의 희석농도에서는 공시한 4종 균 모두의 증식을 억제하지 못하였다.
과산화수소(10%액) 단일제의 경우, 100배(100ppm) 희석농도에서 4종균 모두의 증식을 억제하였으나 200배(50ppm) 희석농도에서는 Streptococcus iniae와 일부(공시한 5균주 중 2균주) Streptococcus parauberis균의 증식을 억제하였고 400배(25ppm) 이상의 희석농도에서는 공시한 대부분의 균 증식을 억제하지 못하였다.
(2) 복합 처리 물질의 어류 병원성 세균의 항균효과
클로라민-티 또는 과산화수소의 순차적 복합제의 어류의 주요 병원성 세균인 활주세균(Tenacibaculum maritimum), 에드워드균(Edwardsiella tarda), 2종의 연쇄상구균(Streptococcus iniae , S. parauberis)에 대한 항균효과를 조사하기 위하여, 클로라민-티(10%액) 2000배(5ppm), 4000배(2,5ppm), 6000배(1.8ppm)와, 과산화수소(10%액) 100배(100ppm), 200배(50ppm), 400배(25ppm), 800배(12.5ppm) 액을 조합하여 각각 동량으로 혼합한 후, 균 탁도를 McFarland standard 0.5(배양균액 1x108CFU/ml)로 조정한 균액 20㎕와, 각 조합별 클로라민-티와 과산화수소액 50㎕와 혼합하여 실온에서 1시간 동안 처리한 다음, TSA(tryptic soy agar, 1.5% NaCl 첨가) 평판에 20㎕씩 접종하고 37oC에서 24시간 동안 배양하여 균 발육 여부로 항균효과를 판독하였다.
결과는 도 3 및 표 5에 나타내었다.
| 공 시 물 질 | 활주세균 (1주) |
에드워드균 (5주) |
연쇄구균(S. iniae, 2주) |
연쇄구균(S. parauberis,5주) |
| 클로라민-티(10%) 2000배 + 과산화수소(10%) 100배 |
+ | +++++ | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 2000배 + 과산화수소(10%) 200배 |
+ | +++++ | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 2000배 + 과산화수소(10%) 400배 |
+ | +++++ | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 2000배 + 과산화수소(10%) 800배 |
+ | +++++ | +- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 4000배 + 과산화수소(10%) 100배 |
+ | +++++ | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 4000배 + 과산화수소(10%) 200배 |
+ | +++++ | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 4000배 + 과산화수소(10%) 400배 |
+ | +++++ | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 4000배 + 과산화수소(10%) 800배 |
+ | +++++ | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 6000배 + 과산화수소(10%) 100배 |
+ | +++++ | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 6000배 + 과산화수소(10%) 200배 |
+ | +++++ | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 6000배 + 과산화수소(10%) 400배 |
+ | +++++ | -- | ----- |
| 클로라민-티(10%) 6000배 + 과산화수소(10%) 800배 |
+ | +++++ | -- | ----- |
순차적 복합처리물질의 4종 어병세균에 대한 항균효과
* + ; 균 증식(항균효과 없음), - : 균 비 증식(항균효과 있음)
도 3 및 표 5에 나타낸 바와 같이, 순차적인 복합처리 물질의 항균효과에서는, 클로라민-티(10%액) 2,000배(5ppm), 4,000배(2.5ppm), 6,000배(1.8ppm)와 과산화수소(10%액) 100배(100ppm), 200배(50ppm), 400배(25ppm), 800배(12.5ppm) 각각의 희석농도에서 활주세균과 에드워드균에는 억제활성을 보이지 않았으나 2종의 연쇄구균(Streptococcus iniae , S. parauberis)의 증식을 억제하였다.
2-3. 본 발명의
클로라민
-티 또는 과산화수소수 순차적 복합처리 물질의
스쿠티카
충 또는 어류 병원성 세균 구제의 상승효과
(1) 순차적 복합처리 물질의 스쿠티카충에 대한 살충 상승효과
상기 실시예 2-1에서 수행한 순차적 복합처리 물질의 스쿠티카충 구제효과 실험에서, 복합처리 물질의 단일 처리 물질에 대한 상승효과를 비교하였다.
결과는 표 6에 나타내었다.
| 단일제 효과 | 순차적 복합처리의 상승효과 |
| 클로라민-티(10%) 200배 +++ 클로라민-티(10%) 400배 ++ 클로라민-티(10%) 800배 - |
클로라민-티(10%) 400배/과산화수소(10%) 100배 +++ 클로라민-티(10%) 400배/과산화수소(10%) 200배 +++ 클로라민-티(10%) 400배/과산화수소(10%) 400배 +++ 클로라민-티(10%) 800배/과산화수소(10%) 100배 +++ 클로라민-티(10%) 800배/과산화수소(10%) 200배 +++ 클로라민-티(10%) 800배/과산화수소(10%) 400배 +++ 클로라민-티(10%) 1000배/과산화수소(10%) 100배 +++ 클로라민-티(10%) 1000배/과산화수소(10%) 200배 +++ 클로라민-티(10%) 1000배/과산화수소(10%) 400배 +++ 클로라민-티(10%) 2000배/과산화수소(10%) 100배 +++ 클로라민-티(10%) 2000배/과산화수소(10%) 200배 +++ 클로라민-티(10%) 2000배/과산화수소(10%) 400배 +++ |
| 과산화수소(10%) 100배 ++ 과산화수소(10%) 200배 ++ 과산화수소(10%) 400배 ++ 과산화수소(10%) 800배 - |
스쿠티카충에 대한 살충 상승효과
* +++ ; 100% 살충, ++ ; 50% 살충, + ; 25% 살충, 0 ; 비 살충
표 6에 나타낸 바와 같이, 단일제 처리에서 클로라민-티(10%액) 400배(25ppm)와 과산화수소(10%액) 100배액(100ppm)은 50%의 스쿠치카충 살충효과를 나타내었으나, 클로라민-티(10%액) 400배(25ppm), 800배(12.5ppm), 1,000배(10ppm), 2,000배(5ppm)와 과산화수소(10%액) 100배(100ppm), 200배(50ppm), 400배(25ppm)와 각각 순차적 복합처리한 경우에는 100%의 살충효과를 나타내어 두 물질간의 상승효과를 볼 수 있었다.
(2) 순차적 복합처리 물질의 어류 병원성 세균에 대한 항균 상승효과
상기 실시예 2-2에서 수행한 순차적 복합처리 물질의 어류 병원성 세균의 항균효과 실험에서, 복합처리 물질의 단일 처리 물질에 대한 상승효과를 비교하였다.
결과는 표 7에 나타내었다.
| 공 시 물 질 | 활주세균 (1주) |
에드워드균 (5주) |
연쇄구균(S. iniae, 2주) | 연쇄구균(S. parauberis,5주) |
| o 단일제 클로라민-티(10%) 1,000배 클로라민-티(10%) 2,000배 클로라민-티(10%) 4,000배 클로라민-티(10%) 6,000배 과산화수소(10%) 100배 과산화수소(10%) 200배 과산화수소(10%) 400배 과산화수소(10%) 800배 |
- + + + - + + + |
----- +++++ +++++ +++++ ----- +++++ +++++ +++++ |
-- -- ++ ++ -- -- +- ++ |
----- ----- ----- ++++- ----- ++--- ++++- +++++ |
| o 복합처리제 클로라민-티(10%) 4,000배/ 과산화수소(10%) 200배 클로라민-티(10%) 4,000배/ 과산화수소(10%) 400배 클로라민-티(10%) 4,000배/ 과산화수소(10%) 800배 클로라민-티(10%) 6,000배/ 과산화수소(10%) 200배 클로라민-티(10%) 6,000배/ 과산화수소(10%) 400배 클로라민-티(10%) 6,000배/ 과산화수소(10%) 800배 |
+ + + + + + |
+++++ +++++ +++++ +++++ +++++ +++++ |
-- -- -- -- -- -- |
----- ----- ----- ----- ----- ----- |
* + ; 균 증식(항균효과 없음), - ; 균 미 증식(항균효과 있음)
표 7에 나타낸 바와 같이, 단일제 처리에서 클로라민-티(10%액)는 1,000배(10ppm) 희석농도에서 공시한 4종균의 증식을 억제하였고 2,000배(5ppm)에서는 2종의 연쇄구균만을, 4,000배(2.5ppm)에서는 1종의 연쇄구균(Streptococcus parauberis)만을 억제하였으며, 과산화수소(10%액)의 경우, 100배(100ppm) 희석농도에서 공시한 4종균의 증식을 억제하였고 200배(50ppm) 희석농도에서는 1종의 연쇄구균(S. iniae)만을 억제하였으나, 두 물질을 순차적으로 복합투약, 처리하였을 경우, 활주세균과 에드워드균에는 상승효과가 없었으나 2종의 연쇄구균에는 클로라민-티(10%액) 4,000배(2.5ppm), 6,000배(1.8ppm)와 과산화수소(10%액) 200배(50ppm), 400배(25ppm), 8,00배(12.5ppm) 각각을 조합하여 순차적 투약함으로써 상승된 발육억제 효과를 나타내었다.
실시예 3. 본 발명의 클로라민-티 및 과산화수소의 순차적 복합 처리시 넙치에서의 안전성 여부
클로라민-티 및 과산화수소를, 해수 1ℓ에 상기 실시예 2에서 상승효과가 확인된 유효농도와 동일한 비율로 첨가한 약액에, 넙치(10㎝)를 3마리씩 넣고 24시간 동안 넙치의 행동을 관찰하여 안전성을 확인하였다.
결과는 표 8에 나타내었다.
| 물질의 농도 | 안전성(폐사 및 이상반응) | ||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 24시간 | |
| 1. 클로라민-티(10%)/1000배+과산화수소(25%)/500배 2. 클로라민-티(10%)/1000배+과산화수소(25%)/200배 3. 클로라민-티(10%)/1000배+과산화수소(25%)/100배 4. 클로라민-티(10%)/500배+과산화수소(25%)/500배 5. 클로라민-티(10%)/500배+과산화수소(25%)/200배 6. 클로라민-티(10%)/500배+과산화수소(25%)/100배 7. 클로라민-티(10%)/100배+과산화수소(25%)/500배 8. 클로라민-티(10%)/100배+과산화수소(25%)/200배 9. 클로라민-티(10%)/100배+과산화수소(25%)/100배 |
- - - - - - - - - |
- - - - - - - - -/+ |
- - - - - - - - - |
- - - - - - - - - |
- - - - - - - - - |
순차적 복합투약에 따른 클로라민-티 및 과산화수소의 순차적 복합 처리시 넙치에서의 안전성
표 8에 나타낸 바와 같이, 1~8번 처리농도에서는 24시간까지 넙치에 안전함을 확인하였다. 다만, 실사용 농도보다 월등히 높은 고농도 처리구인 9번에서는 1/3수가 처리 2시간 후부터 호흡이 가빠지는 증상을 보이다가 폐사 없이 회복되었다. 따라서, 상기 표 8과 같이 최종적으로 클로라민-티(10%액) 2,000배(5ppm)와 과산화수소(10%액) 400배(25ppm)를 순차적으로 투약, 처리하면 두 물질이 넙치에 안전하면서 스쿠티카충과 4종 어병세균(활주세균/Tenacibaculum maritimum, 에드워드균/Edwardsiella tarda, 연쇄구균/Streptococcus iniae , S. parauberis)을 100% 구제할 수 있는 효능이 있음을 확인할 수 있었다.
Claims (9)
- 하기 화학식 1로 표시되는 클로라민-티(chloramine-T) 및 과산화수소(hydrogen peroxide)로 구성되며, 상기 클로라민-티 및 과산화수소는 투여순서와 무관하게 순차적으로 투여되는 것을 특징으로 하는, 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균 구제용 조성물.
[화학식 1]
- 제1항에 있어서, 상기 클로라민-티는 1~100ppm, 과산화수소는 12.5~100ppm의 농도인 것을 특징으로 하는, 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균 구제용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 병원성 세균은 에드워드균(Edwardsiella tarda), 활주세균(Tenacibaculum maritimum), 연쇄상구균(Streptococcus iniae, S. parauberis)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 균인 것을 특징으로 하는, 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균 구제용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 어류는 넙치, 터보트(turbot), 돔, 복어, 농어, 조피볼락으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균 구제용 조성물.
- 클로라민-티 및 과산화수소를 함유하는 약액에 순서와 무관하게 순차적으로 어류를 약욕시키는 것을 특징으로 하는, 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균의 구제방법.
- 제5항에 있어서, 상기 클로라민-티는 1~100ppm, 과산화수소는 12.5~100ppm의 농도인 것을 특징으로 하는, 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균의 구제방법.
- 제5항에 있어서, 상기 약욕시간이 1일 1~24시간인 것을 특징으로 하는 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균의 구제방법.
- 제5항에 있어서, 상기 병원성 세균은 에드워드균(Edwardsiella tarda), 활주세균(Tenacibaculum maritimum), 연쇄상구균(Streptococcus iniae, S. parauberis)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 균인 것을 특징으로 하는, 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균의 구제방법.
- 제5항에 있어서, 상기 어류는 넙치, 터보트(turbot), 돔, 복어, 농어, 조피볼락으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 어류의 스쿠티카충 또는 병원성 세균의 구제방법.
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Comment text: Registration of Establishment Patent event date: 20140820 Patent event code: PR07011E01D |
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