[go: up one dir, main page]

KR20130125833A - 항체-약물 접합체 - Google Patents

항체-약물 접합체 Download PDF

Info

Publication number
KR20130125833A
KR20130125833A KR1020137025712A KR20137025712A KR20130125833A KR 20130125833 A KR20130125833 A KR 20130125833A KR 1020137025712 A KR1020137025712 A KR 1020137025712A KR 20137025712 A KR20137025712 A KR 20137025712A KR 20130125833 A KR20130125833 A KR 20130125833A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
antibody
val
leu
thr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
KR1020137025712A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101529810B1 (ko
Inventor
한스-피터 거버
존 프랜시스 디조셉
키란 마노하르 칸드케
킴벌리 앤 마켓
푸자 사프라
루드밀라 제나디에브나 치스티아코바
Original Assignee
와이어쓰 엘엘씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 와이어쓰 엘엘씨 filed Critical 와이어쓰 엘엘씨
Publication of KR20130125833A publication Critical patent/KR20130125833A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101529810B1 publication Critical patent/KR101529810B1/ko
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 발명은 항-5T4 항체 약물 접합체 및 이를 제조 및 사용하는 방법을 개시한다.

Description

항체-약물 접합체 {ANTIBODY-DRUG CONJUGATES}
본 발명은 일반적으로 암 치료용 항-5T4 항체-약물 접합체에 관한 것이다.
항체-약물 접합체 (ADC)는 단일클론 항체의 결합 특이성을 화학요법제의 효능과 조합한 것이다. 종양 관련 표적 분자에 대한 단일클론 항체 개발, 효과가 더욱 큰 세포독성제의 용도, 및 이들 성분에 공유 결합하는 화학 링커의 디자인과 관련된 기술은 최근 빠르게 진보되었다 (문헌 [Ducry L., et al. Bioconjugate Chemistry, 21:5-13, 2010]).
유망한 ADC, 예컨대 SGN-75 (US2009/148942) 및 트라스트주맙-DM1 (US2009/0226465)은 현재 임상 시험 중에 있다. 그러나, 다른 종양 관련 항원이 표적으로 고려되고 있는 바, 많은 도전 과제들이 남아있다. 각각의 단일클론 항체는 별개로 특징 규명되어야 하고, 적절한 링커는 디자인되어야 하며, 종양 세포로의 전달시 그의 효능을 보유하는 적합한 세포독성제의 확인이 이루어져야 한다. 암 표적 상의 항원 밀도, 및 정상 조직이 표적 항원을 발현하는지 여부를 고려하여야 한다. 다른 고려 사항으로는 전체 ADC가 표적과의 결합시 내재화되는지 여부; 가능한 정상 조직 노출 및/또는 치료되는 암의 유형 및 병기를 고려할 때, 세포 증식 억제 약물 또는 세포독성 약물이 바람직한지 여부; 및 항체를 약물 페이로드에 연결하는 링커가 절단가능한 연결부인지 또는 절단불가능한 연결부인지 여부를 포함한다. 추가로, 항체 대 약물 모이어티 접합 비는 항체의 결합 활성 및/또는 약물의 효능을 손상시키지 않는, 충분한 비여야 한다. ADC는 복합 생물 작용제(complex biologics)이며, 효과적인 ADC를 개발하고자 하는 도전은 여전히 중요한 과제로 남아있다는 것은 명확한 일이다.
인간 5T4 종양 관련 항원이 본 발명의 표적 항원이다. 5T4 항원은 종양-개시 세포로도 불리는, 특정의 고도로 종양형성성인 세포 상에서 고수준으로 발현되는 것으로 최근에 밝혀졌다 (WO2010/111659). 종양-개시 세포는 표준 요법에 대해 내성을 보이며, 이것이 종양 재발 및 전이의 원인이 되는 것으로 여겨지고 있으므로, ADC 개발에 있어 추가의 또 다른 장애가 되고 있다.
본 발명의 신규 항-5T4 ADC는 ADC 기술과 관련된 도전 과제들을 극복하고, 5T4 항원을 발현하는 종양 세포에 결합하여, 그 세포에 충분한 세포독성 약물을 전달하는 고도로 특이적이고 효능이 있는 ADC를 제공하는 바, 이로써 혁신적이고 효과적인 암 치료를 제공할 수 있게 되었다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항체-약물 접합체는 하기 식: Ab-(LU-D)p 또는 그의 제약상 허용되는 염을 가지는데, 상기 식에서 Ab는 서열 번호 5에 제시된 바와 같은 VH CDR1 영역, 서열 번호 6에 제시된 바와 같은 VH CDR2 영역, 및 서열 번호 7에 제시된 바와 같은 VH CDR3 영역을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항-5T4 항체 또는 그의 항원 결합 부분이고; LU는 말레이미도카프로일 및 말레이미도카프로일-Val-Cit-PABA로 이루어진 군으로부터 선택되는 링커 단위이고; p는 정수 약 1 내지 약 8이고; D는 MMAE, MMAF, 및 MMAD로 이루어진 군으로부터 선택되는 약물 단위이다.
본 발명은 추가로 상기 항-5T4 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 (a) 서열 번호 5에 제시된 바와 같은 VH CDR1 영역, (b) 서열 번호 6에 제시된 바와 같은 VH CDR2 영역, 및 (c) 서열 번호 7에 제시된 바와 같은 VH CDR3 영역을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항-5T4 항체-약물 접합체를 제공한다.
본 발명은 추가로 상기 항-5T4 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 (a) 서열 번호 8에 제시된 바와 같은 VL CDR1 영역, (b) 서열 번호 9에 제시된 바와 같은 VL CDR2 영역, 및 (c) 서열 번호 10에 제시된 바와 같은 VL CDR3 영역을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항-5T4 항체-약물 접합체를 제공한다.
본 발명은 추가로 상기 항-5T4 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 (a) 서열 번호 5에 제시된 바와 같은 VH CDR1 영역, (b) 서열 번호 6에 제시된 바와 같은 VH CDR2 영역, 및 (c) 서열 번호 7에 제시된 바와 같은 VH CDR3 영역을 가지는 중쇄 가변 영역, 및 (a) 서열 번호 8에 제시된 바와 같은 VL CDR1 영역, (b) 서열 번호 9에 제시된 바와 같은 VL CDR2 영역, 및 (c) 서열 번호 10에 제시된 바와 같은 VL CDR3 영역을 가지는 경쇄 가변 영역을 추가로 포함하는 것인 항-5T4 항체-약물 접합체를 제공한다.
본 발명은 추가로 상기 항-5T4 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 서열 번호 3의 VH 영역 및 서열 번호 4의 VL 영역을 포함하는 것인 항-5T4 항체-약물 접합체를 제공한다.
본 발명은 추가로 상기 항-5T4 항체가 서열 번호 1을 가지는 중쇄 및 서열 번호 2를 가지는 경쇄로 구성된 것인 항-5T4 항체-약물 접합체를 제공한다.
본 발명은 추가로
(a) 상기 항-5T4 항체는 서열 번호 1을 가지는 중쇄 및 서열 번호 2를 가지는 경쇄로 구성되고, (b) 상기 LU는 말레이미도카프로일이고, (c) 상기 약물은 MMAF이고, (d) p는 정수 약 4인 항-5T4 항체-약물 접합체를 제공한다.
본 발명은 추가로
(a) 상기 항-5T4 항체는 서열 번호 1을 가지는 중쇄 및 서열 번호 2를 가지는 경쇄로 구성되고, (b) 상기 LU는 말레이미도카프로일-Val-Cit-PABA이고, (c) 상기 약물은 MMAE이고, (d) p는 정수 약 4인 항-5T4 항체-약물 접합체를 제공한다.
본 발명은 추가로
(a) 상기 항-5T4 항체는 서열 번호 1을 가지는 중쇄 및 서열 번호 2를 가지는 경쇄로 구성되고, (b) 상기 LU는 말레이미도카프로일-Val-Cit-PABA이고, (c) 상기 약물은 MMAD이고, (d) p는 정수 약 1 내지 약 8인 항-5T4 항체-약물 접합체를 제공한다.
본 발명은 추가로
(a) 상기 항-5T4 항체는 서열 번호 15를 가지는 중쇄 및 서열 번호 2를 가지는 경쇄로 구성되고, (b) 상기 LU는 말레이미도카프로일-Val-Cit-PABA이고, (c) 상기 약물은 MMAE이고, (d) p는 정수 약 1 내지 약 8인 항-5T4 항체-약물 접합체를 제공한다.
본 발명은 항체가 인간 5T4 항원 상의 에피토프를 인식하고, 여기서 상기 에피토프는 서열 번호 11의 아미노산 서열의 아미노산 잔기 173-258 및 282-361을 포함하는 것인 항-5T4 항체-약물 접합체를 제공한다.
본 발명은 상기 명시된 항체-약물 접합체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 추가로 5T4-양성 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 상기 명시된 항체-약물 접합체를 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 5T4-양성 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 추가로 방광암종, 유방암종, 자궁경부암종, 결장암종, 자궁내막암종, 신장암종, 폐암종, 식도암종, 난소암종, 전립선암종, 췌장암종, 간암종, 피부암종, 위암종, 및 고환암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 5T4-양성 암을 치료하는 방법을 제공한다.
더욱 바람직하게, 본 발명은 결장직장암종, 유방암종, 췌장암종, 및 비-소세포폐암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 5T4-양성 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 추가로 요법에서 사용하기 위한 상기 명시된 항체-약물 접합체를 제공한다.
본 발명은 추가로 의약의 제조를 위한 상기 명시된 항체-약물 접합체의 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로 용도가 5T4-양성 암의 치료를 위한 것이고, 여기서 상기 암은 방광암종, 유방암종, 자궁경부암종, 자궁내막암종, 신장암종, 폐암종, 식도암종, 난소암종, 전립선암종, 췌장암종, 피부암종, 위암종, 및 고환암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 상기 명시된 용도를 제공한다.
더욱 바람직하게, 본 발명은 추가로 용도가 5T4-양성 암의 치료를 위한 것이고, 여기서 상기 암은 결장직장암종, 유방암종, 췌장암종, 및 비-소세포폐암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 상기 명시된 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로 항-5T4 항체를 코딩하는 핵산, 상기 핵산을 포함하는 벡터, 및 상기 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
본 발명은 추가로 상기 언급된 벡터를 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계 및 세포 배양물로부터 항-5T4 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 항-5T4 항체를 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명은 추가로 (a) 세포 배양물로부터 회수된 항체를 취하는 단계, (b) 말레이미도카프로일 또는 말레이미도카프로일-Val-Cit로 이루어진 군으로부터 선택되는 링커 단위를 통해 상기 항체를, MMAE, MMAD, 또는 MMAF로 이루어진 군으로부터 선택되는 약물 단위에 화학적으로 연결시키는 단계, 및 (c) 항체-약물 접합체를 정제하는 단계를 포함하는, 항-5T4 항체-약물 접합체를 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명은 암 치료용 항-5T4 항체-약물 접합체를 제공한다. 본 발명을 보다 쉽게 이해할 수 있도록 하기 위해, 먼저 특정 용어를 정의한다.
본 개시내용에서 사용되는 아미노산 약칭은 모두 37 C.F.R. § 1.822 (B)(I)에 기술되어 있는 바와 같이, 미국 특허청(United States Patent and Trademark Office) 승인을 받은 것이다.
5T4는 42 kDa 비-당화된 코어를 포함하는, 72 kDa의 고도로 당화된 막횡단 당단백질인, 5T4 종양 태아성 항원을 지칭한다 (US 5,869,053 참조). 인간 5T4는 방광암종, 유방암종, 자궁경부암종, 결장암종, 자궁내막암종, 신장암종, 폐암종, 식도암종, 난소암종, 전립선암종, 췌장암종, 간암종, 피부암종, 위암종, 및 고환암종을 비롯한, 다수의 암 유형에서 발현된다. 암 줄기 세포 또는 종양-개시 세포로도 불리는, 고도로 종양형성성인 세포에서는 5T4가 고수준으로 발현되는 것으로 밝혀졌다 (WO2010/111659). 본 발명의 항-5T4 항체는 인간 5T4 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다 (US 2007/0231333 참조).
"항체"는 면역글로불린 분자의 가변 영역에 위치하는 1개 이상의 항원 인식 부위를 통해 표적, 예컨대 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질, 폴리펩티드 등에 특이적으로 결합할 수 있는 면역글로불린 분자이다. 본원에서 사용되는 바, "항체"라는 용어는 온전한 다중클론 또는 단일클론 항체 뿐만 아니라, 그의 임의의 항원 결합 단편 (즉, "항원 결합 부분") 또는 단일 쇄, 항체를 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 배열을 포함하며, 이는 예를 들어, 제한 없이, Fab, Fab', F(ab')2, VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편, 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, 단리된 상보성 결정 영역 (CDR), scFv, 단일 도메인 항체 (예컨대, 상어 및 카멜리드 항체), 맥시바디, 미니바디, 인트라바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, v-NAR 및 비스-scFv를 포함한다.
항체는 임의의 부류의 항체, 예컨대 IgG, IgA, 또는 IgM (또는 그의 서브부류)을 포함하고, 항체가 어느 특정 부류일 필요는 없다. 면역글로불린은 그의 중쇄의 불변 영역의 항체 아미노산 서열에 따라, 상이한 부류로 지정될 수 있다. 5가지의 주요 면역글로불린 부류: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM이 존재하며, 이중 수개는 서브부류 (이소타입), 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 분류될 수 있다. 상이한 부류의 면역글로불린에 상응하는 중쇄 불변 영역은 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤로 불린다. 상이한 부류의 면역글로불린의 서브유니트 구조 및 3차원 배열은 주지되어 있다.
항체의 "가변 영역"이란 단독으로 또는 조합된 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역을 지칭한다. 당업계에 공지되어 있는 바와 같이, 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각 초가변 영역으로도 알려져 있는 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)에 의해 연결되어 있는 4개의 골격 영역 (FR)으로 구성되고, 이는 항체의 항원 결합 부위를 형성하는 데 기여한다. 대상 가변 영역의 변이체가 바람직한 경우, 특히, CDR 영역 바깥쪽 (즉, 골격 영역내) 아미노산 잔기 치환을 가지는 것이 바람직한 경우, 대상 가변 영역과 동일한 정규 부류 중 CDR1 및 CDR2 서열을 포함하는 다른 항체의 가변 영역과 대상 가변 영역을 비교함으로써 적절한 아미노산 치환, 바람직하게, 보존적 아미노산 치환을 확인할 수 있다 (문헌 [Chothia and Lesk, J Mol Biol 196(4): 901-917, 1987]). 대상 CDR 측면에 위치하는 FR을 선택할 때, 예컨대 항체를 인간화하거나, 최적화시킬 때, 동일한 정규 부류 중 CDR1 및 CDR2 서열을 포함하는 항체로부터의 FR이 바람직하다.
가변 도메인의 "CDR"은 카바트(Kabat) 정의, 코티아(Chothia) 정의, 카바트 및 코티아 둘 모두의 누적 정의, AbM, 접촉, 및/또는 입체형태 정의 또는 당업계에 주지된 임의의 CDR 결정 방법에 따라 확인되는 가변 영역 내의 아미노산 잔기이다. 항체 원래 CDR은 카바트 등에 의해 정의된 초가변 영역으로서 확인될 수 있다. 예컨대, 문헌 [Kabat et al., 1992, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, NIH, Washington, D.C]를 참조할 수 있다. CDR의 위치는 또한 원래 코티아 등에 의해 기술된 구조적 루프 구조로서 확인할 수 있다. 예컨대, 문헌 [Chothia et al., 1989, Nature 342:877-883]을 참조할 수 있다. CDR을 확인하는 다른 접근법으로는 카바트와 코티아의 절충안으로서, 옥스포드 몰레큘라(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어 (현 액셀리스(Accelrys)®를 이용하여 유도된 "AbM 정의", 또는 문헌 [MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 262:732-745]에 기술되어 있는, 관찰된 항원 접촉에 기초한 CDR의 "접촉 정의"를 포함한다. 본원에서 CDR의 "입체형태 정의"로서 지칭되는 또 다른 접근법에서, CDR의 위치는 엔탈피에 의해 항원 결합에 기여하는 잔기로서 확인될 수 있다. 예컨대, 문헌 [Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry, 283: 1156-1166]을 참조할 수 있다. 추가의 다른 CDR 경계 정의는 상기 접근법 중 하나를 엄격하게 따르지는 않지만, 그럼에도 불구하고, 비록 특정 잔기 또는 잔기 군, 또는 심지어는 전체 CDR이 항원 결합에 유의적인 영향을 주지 않는다는 실험상의 관찰 결과 또는 예측을 고려하여 단축되거나, 연장될 수 있지만, 카바트 CDR의 적어도 일부와는 중복되는 점이 있을 것이다. 본원에서 사용되는 바, CDR은 접근법들의 조합을 비롯한, 당업계에 공지된 임의의 접근법에 의해 정의된 CDR을 의미할 수 있다. 본원에서 사용되는 방법은 이들 접근법 중 임의의 것에 따라 정의된 CDR을 사용할 수 있다. 1개 초과의 CDR을 함유하는 것에 대한 임의의 주어진 실시양태의 경우, CDR은 카바트, 코티아, 확장형, AbM, 접촉, 및/또는 입체형태 정의 중 임의의 것에 따라 정의될 수 있다.
"단일클론 항체" (Mab)라는 용어는 그를 제조하는 방법이 아닌, 예컨대 임의의 진핵, 원핵, 또는 파지 클론을 비롯한, 단일 카피 또는 클론으로부터 유래된 항체를 의미한다. 바람직하게, 본 발명의 단일클론 항체는 균질성 또는 실질적으로 균질성 집단으로 존재한다.
"인간화된" 항체는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 서열을 최소로 함유하는, 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄, 또는 그의 단편 (예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 항원 결합 서브서열)인 비-인간 (예컨대, 뮤린) 항체 형태를 의미한다. 바람직하게, 인간화된 항체는 수용자의 상보성 결정 영역 (CDR)으로부터의 잔기가 비-인간 종 (공여자 항체), 예컨대 마우스, 래트, 또는 토끼로부터의 잔기로 대체되고, 원하는 특이성, 친화성, 및 능력을 가지는 인간 면역글로불린 (수용자 항체)이다.
"키메라 항체"라는 용어는 가변 영역 서열이 한 종으로부터 유래된 것이고, 불변 영역 서열이 또 다른 종으로부터 유래된 것인 항체, 예컨대 가변 영역 서열은 마우스 항체로부터 유래된 것이고, 불변 영역 서열은 인간 항체로부터 유래된 것인 항체를 의미하는 것으로 한다.
본 발명의 항체는 당업계에 주지된 기술, 예컨대 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술 또는 상기 기술들의 조합 또는 당업계에게 쉽게 알 수 있는 다른 기술을 사용하여 제조될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Jayasena, S.D., Clin. Chem., 45: 1628-50 (1999)] 및 [Fellouse, F.A., et al., J. Mol. Biol., 373(4):924-40 (2007)] 참조).
하기 표 1 및 2에는 본 발명의 항체에 대해 바람직한 CDR이 기술되어 있다.
Figure pct00001
Figure pct00002
본 발명은
a) i) 서열 번호 8 및 17로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 LCDR1;
ii) 서열 번호 9 및 18로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 LCDR2; 및
iii) 서열 번호 10 및 19로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및
b) i) 서열 번호 5 및 22로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 HCDR1;
ii) 서열 번호 6 및 23으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 HCDR2; 및
iii) 서열 번호 7 및 24로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 포함한다.
본 발명의 바람직한 항체 또는 그의 항원 결합 부분은
a) 서열 번호 8의 LCDR1, 서열 번호 9의 LCDR2, 및 서열 번호 10의 LCDR3을 포함하는 LCVR; 및
b) 서열 번호 5의 HCDR1, 서열 번호 6의 HCDR2, 및 서열 번호 7의 HCDR3을 포함하는 HCVR을 포함한다.
본 발명의 바람직한 단일클론 항체는 본원에서 A1 (인간화된 항-5T4 IgG1 항체); A1-IgG4 (인간화된 항-5T4 IgG4 항체); A3 (마우스/인간 키메라 항체); 및 A3hu (인간화된 항-5T4 IgG1 항체)로 지칭된다. Mab A1, A1-IgG4 및 A3을 코딩하는 아미노산 서열의 서열 번호는 하기 표 3에 제공되어 있다:
Figure pct00003
"항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"라는 어구는 본원에서 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"라는 용어와 함께 상호교환적으로 사용된다.
항-5T4 항체-약물 접합체는 본원에 기술되어 있는 바와 같이, 링커 단위 분자 (LU)를 통해 세포독성 약물 모이어티 (D)에 연결되어 있는 항-5T4 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 의미한다.
링커 단위 (LU): LU는 항체를 약물에 연결시키는 직접 또는 간접 연결부를 기술한다. 링커를 mAb에 부착시키는 것은 다양한 방법으로, 예컨대 표면 리신을 통해, 산화된 탄수화물로의 환원적 커플링, 및 쇄간 이황화물 연결부 환원에 의해 유리된 시스테인 잔기를 통해 달성될 수 있다. 히드라존-, 이황화물- 및 펩티드-기반 연결부를 비롯한 다양한 ADC 연결부 시스템이 당업계에 공지되어 있다.
약물 (D): 약물은 생물학적 또는 검출가능한 활성을 가지는 임의의 물질, 예를 들어, 치료제, 검출가능한 표지, 결합제 등, 및 생체내에서 활성제로 대사되는 프로드럭이다. 약물 및 페이로드라는 용어는 상호교환적으로 사용된다. 일부 실시양태에서, 약물은 아우리스타틴, 예컨대 아우리스타틴 E (이는 또한 당업계에서 돌라스타틴-10의 유도체로도 알려져 있다) 또는 그의 유도체이다. 아우리스타틴은 예를 들어, 아우리스타틴 E와 케토산 사이에 형성된 에스테르일 수 있다. 예를 들어, 아우리스타틴 E를 파라아세틸 벤조산 또는 벤조일발레르산과 반응시켜 각각 AEB 및 AEVB를 수득할 수 있다. 다른 전형적인 아우리스타틴으로는 AFP, MMAF, 및 MMAE를 포함한다. 예시적인 아우리스타틴의 합성법 및 구조는 미국 특허 번호 제6,884,869호, 제7,098,308호, 제7,256,257호, 제7,423,116호, 제7,498,298호, 및 제7,745,394호 (이들은 그 전문이 모든 목적을 위해 본원에 참고로 포함된다)에 기술되어 있다.
아우리스타틴은 미세소관 동적 작용, 및 핵 및 세포 분열을 방해하고, 항암 활성을 가지는 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 아우리스타틴은 튜불린에 결합하고, 5T4를 발현하는 세포 또는 세포주에 대해 세포독성 또는 세포 증식 억제 효과를 발휘할 수 있다. 아우리스타틴 또는 생성된 항체-약물 접합체가 원하는 세포 또는 세포주에 대해 세포 증식 억제 또는 세포독성 효과를 발휘하는지 여부를 측정하기 위해 사용될 수 있는 다수의 상이한 검정법이 당업계에 공지되어 있다. 화합물이 튜불린에 결합하는지 여부를 측정하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Muller et al., Anal. Chem 2006, 78, 4390-4397]; [Hamel et al., Molecular Pharmacology, 1995 47: 965-976]; 및 [Hamel et al., The Journal of Biological Chemistry, 1990 265:28, 17141-17149]를 참조할 수 있다.
약물 또는 페이로드의 예는 DM1 (메이탄신, N2'-데아세틸-N2'-(3-머캅토-1-옥소프로필)- 또는 N2'-데아세틸-N2'-(3-머캅토-1-옥소프로필)-메이탄신), mc-MMAD (6-말레이미도카프로일-모노메틸아우리스타틴-D 또는 N-메틸-L-발릴-N-[(1S,2R)-2-메톡시-4-[(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-[[(1S)-2-페닐-1-(2-티아졸릴)에틸]아미노]프로필]-1-피롤리디닐]-1-[(1S)-1-메틸프로필]-4-옥소부틸]-N-메틸-(9CI)-L-발린아미드), mc-MMAF (말레이미도카프로일-모노메틸아우리스타틴 F 또는 N-[6-(2,5-디히드로-2,5-디옥소-1H-피롤-1-일)-1-옥소헥실]-N-메틸-L-발릴-L-발릴-(3R,4S,5S)-3-메톡시-5-메틸-4-(메틸아미노)헵타노일-(αR,βR,2S)-β-메톡시-α-메틸-2-피롤리딘프로파노일-L-페닐알라닌) 및 mc-Val-Cit-PABA-MMAE (6-말레이미도카프로일-ValcCit-(p-아미노벤질옥시카르보닐)-모노메틸아우리스타틴 E 또는 N-[[[4-[[N-[6-(2,5-디히드로-2,5-디옥소-1H-피롤-1-일)-1-옥소헥실]-L-발릴-N5-(아미노카르보닐)-L-오르니틸]아미노]페닐]메톡시]카르보닐]-N-메틸-L-발릴-N-[(1S,2R)-4-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1R,2S)-2-히드록시-1-메틸-2-페닐에틸]아미노]-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]-1-피롤리디닐]-2-메톡시-1-[(1S)-1-메틸프로필]-4-옥소부틸]-N-메틸-L-발린아미드)로 이루어진 군으로부터 선택된다. DM1은 튜불린 억제제인 메이탄신의 유도체인 반면, MMAD, MMAE, 및 MMAF는 아우리스타틴 유도체이다. 본 발명의 바람직한 페이로드는 mc-MMAF 및 mc-Val-Cit-PABA-MMAE로 이루어진 군으로부터 선택된다.
"에피토프"라는 용어는 하나 이상의 항체의 항원 결합 영역에서 항체에 의해 인식되고, 항체에 의해 결합이 이루어질 수 있는 분자의 일부를 의미한다. 에피토프는 대개 분자, 예컨대 아미노산 또는 당 측쇄로 된 화학상 계면 활성기로 이루어져 있고, 특이적인 3차원 구조적 특징 뿐만 아니라, 특이적인 전하 특징을 가진다. 본원에서 사용되는 바, "항원성 에피토프"라는 용어는 당업계에 주지된 임의의 방법, 예를 들어, 종래 면역검정법에 의해 측정되는 바, 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 폴리펩티드의 일부로서 정의된다. "비선형 에피토프" 또는 "입체형태 에피토프"는 에피토프에 특이적인 항체가 결합하는 항원성 단백질 내의 비연속된 폴리펩티드 (또는 아미노산)를 포함한다.
본원에서 사용되는 바, "결합 친화도 (KD)"라는 용어는 특정 항원-항체 상호작용의 해리 속도를 의미하는 것으로 한다. KD는 회합 속도, 또는 "온-속도(k온)"에 대한 "오프-속도 (k오프)"로도 불리는 해리 속도의 비이다. 따라서, KD는 k오프/k온과 같고, 이는 몰 농도 (M)로 표현된다. KD가 작을수록, 결합 친화성은 강해진다는 것을 따른다. 그러므로, KD=1 nM인 것과 비교하여 KD=1 μM인 것은 결합 친화성이 약하다는 것을 나타낸다. 항체에 대한 KD 값은 당업계에 잘 확립되어 있는 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 항체의 KD를 측정하기 위한 한가지 방법은 표면 플라스몬 공명 (SPR)을 사용하여, 전형적으로는, 바이오센서 시스템, 예컨대 비아코어(Biacore)® 시스템을 사용하여 이루어진다.
본원에서 사용되는 바, 항체와 5T4 항원 사이의 결합과 관련하여 "특이적으로 결합한다"라는 용어는 25℃에서 SPR에 의해 측정되는 바, 항체가 약 30 nM 미만인 KD로 5T4 항원에 결합한다는 것이다.
본원에서 사용되는 바, 제약상 허용되는 염이란 분자 또는 거대분자의 제약상 허용되는 유기염 또는 무기염을 의미한다.
"효능"이라는 용어는 생물학적 활성의 척도이며, 이는 실시예 3에 기술되어 있는 바와 같이, IC50, 또는 5T4 양성 세포주의 성장을 50% 억제시키는 데 필요한 항체의 유효 농도로서 표시될 수 있다. 별법으로, 효능은 실시예 4에 제시되어 있는 바와 같이, 생체내 종양 이종이식 모델에서 측정되는 바, 항-종양 활성을 의미할 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산 분자"라는 용어는 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함하는 것으로 한다. 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있지만, 바람직하게는 이중 가닥 DNA이다.
본 발명의 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 하기를 포함할 수 있다: 오직 변이체에 대한 코딩 서열만, 변이체에 대한 코딩 서열 및 추가의 코딩 서열, 예컨대 기능적 폴리펩티드, 또는 신호 또는 분비 서열 또는 프로단백질 서열; 항체에 대한 코딩 서열 및 비-코딩 서열, 예컨대 항체에 대한 코딩 서열의 인트론 또는 비-코딩 서열 5' 및/또는 3'. "항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드"라는 용어는 변이체에 대한 추가의 코딩 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 뿐만 아니라, 추가의 코딩 및/또는 비-코딩 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드도 포함한다. 특이 숙주 세포/발현 시스템에 대해 최적화된 폴리뉴클레오티드 서열은 원하는 단백질의 아미노산 서열로부터 수득될 수 있다는 것이 당업계에 공지되어 있다 (진아트® 아게(GENEART® AG: 독일 레겐스부르크) 참조).
본 발명의 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 전형적으로 당업계에 공지되어 있는, 천연적으로 회합된 프로모터 또는 이종성 프로모터를 비롯한, 항체 코딩 서열에 작동가능하게 연결되어 있는 발현 제어 폴리뉴클레오티드 서열을 포함할 것이다. 바람직하게, 발현 제어 서열은 진핵 숙주 세포를 형질전환 또는 형질감염시킬 수 있는 벡터내 진핵 프로모터 시스템이지만, 원핵 숙주에 대한 제어 서열 또한 사용될 수 있다. 일단 벡터가 적절한 숙주 세포주 내로 도입되고 나면, 숙주 세포는 뉴클레오티드 서열을 발현하는 데, 및 원하는 경우, 항체의 수집 및 정제에 적합한 조건하에서 증식된다. 바람직한 진핵 세포주로는 CHO 세포주, 각종 COS 세포주, HeLa 세포, 골수종 세포주, 형질전환된 B-세포, 또는 인간 배아 신장 세포주를 포함한다. 가장 바람직한 숙주 세포는 CHO 세포주이다.
본 발명은 5T4 항원 상의 특이적인 에피토프에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 포함한다. 확인된 에피토프는 아미노산 잔기 173 내지 252 사이의 인간 5T4 항원 (서열 번호 11)을 포함하는 제1 접촉부를 포함하고, 아미노산 잔기 276 내지 355 사이의 제2 접촉부를 포함하는 비선형 또는 입체형태 에피토프이다 (실시예 7 참조). 따라서, 본원에 기술된 CDR 및 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 전장의 항체 뿐만 아니라, 상기 언급된 5T4 항원의 에피토프에 특이적인 CDR을 사용하여 단백질의 결합 친화성을 유지하는 기능성 단편 및 유사체를 제조하는 데에도 사용된다.
본 발명의 항체의 결합 친화도는 SPR을 사용하여 측정된다 (실시예 6). 본 실험에서, 5T4 항원을 비아코어® 칩 상에 저밀도로 고정화시키고, 항체를 유동시킨다. 칩 표면에서 질량 증가를 측정한다. 이러한 분석 방법을 통해 실시간으로 온 및 오프 속도 둘 모두를 측정할 수 있고, 이로써 결합 친화도 (KD)를 얻을 수 있다. 본 발명의 인간화된 항체의 KD는 약 0.30 내지 약 30 nM; 약 0.30 내지 약 20 nM; 약 0.30 내지 약 10 nM; 약 0.5 내지 약 7 nM; 약 1.0 내지 약 5 nM; 내지 약 1.0 내지 약 3 nM이다.
약물의 항체에의 접합
약물은 항체 상에 접합 지점과 반응성인 기를 가지거나, 또는 포함하도록 변형된다. 예를 들어, 약물은 (예컨대, 항체의 엡실론-아미노기 리신 또는 N-말단에서의) 알킬화, 산화된 탄수화물의 환원적 아민화, 히드록실기와 카르복실기 사이의 에스테르교환, 아미노기 또는 카르복실기에서의 아미드화, 및 티올에의 접합에 의해 부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 분자 1개당 접합되는 약물 모이어티의 개수, p 범위는 평균 1 내지 8; 1 내지 7개, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 또는 1 내지 2이다. 일부 실시양태에서, p 범위는 평균 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4 또는 2 내지 3이다. 다른 실시양태에서, p는 평균 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이다. 일부 실시양태에서, p 범위는 평균 약 1 내지 약 8; 약 1 내지 약 7, 약 1 내지 약 6, 약 1 내지 약 5, 약 1 내지 약 4, 약 1 내지 약 3, 또는 약 1 내지 약 2이다. 일부 실시양태에서, p 범위는 약 2 내지 약 8, 약 2 내지 약 7, 약 2 내지 약 6, 약 2 내지 약 5, 약 2 내지 약 4 or 약 2 내지 약 3이다. 접합을 위해 사용될 수 있는 화학법에 대한 예에 대해서는, 예컨대 문헌 [Current Protocols in Protein Science (John Wiley & Sons, Inc.), Chapter 15 (Chemical Modifications of Proteins)] (상기 문헌의 개시내용은 그 전문이 본원에서 참고로 포함된다)을 참조할 수 있다.
예를 들어, 단백질의 화학적 활성화를 통해 유리 티올기가 형성될 때, 단백질은 술프히드릴 반응제와 접합될 수 있다. 한 측면에서, 상기 반응제는 유리 티올기에 실질적으로 특이적인 것이다. 그러한 반응제로는 예를 들어, 말레이미드, 할로아세트아미드 (예컨대, 아이오도, 브로모, 또는 클로로), 할로에스테르 (예컨대, 아이오도, 브로모, 또는 클로로), 할로메틸 케톤 (예컨대, 아이오도, 브로모, 또는 클로로), 벤질 할라이드 (예컨대, 아이오다이드, 브로마이드 또는 클로라이드), 비닐 술폰 및 피리딜티오를 포함한다.
링커
약물은 링커에 의해 항체에 연결될 수 있다. 적합한 링커로는 예를 들어, 절단가능한 링커 및 절단불가능한 링커를 포함한다. 절단가능한 링커는 전형적으로 세포내 조건하에서 쉽게 절단된다. 적합한 절단가능한 링커로는 예를 들어, 세포내 프로테아제, 예컨대 리소좀 프로테아제 또는 엔도솜 프로테아제에 의해 절단가능한 펩티드 링커를 포함한다. 예시적인 실시양태에서, 링커는 디펩티드 링커, 예컨대 발린-시트룰린 (val-cit), 페닐알라닌-리신 (phe-lys) 링커, 또는 말레이미도카프로닉-발린-시투룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐 (mc-Val-Cit-PABA) 링커일 수 있다. 또 다른 링커는 술포숙신이미딜-4-[N-말레이미도메틸]시클로헥산-1-카르복실레이트 (smcc)이다. 술포-smcc 접합은 술프히드릴 (티올, -SH)과 반응성이지만, 그의 술포-NHS 에스테르는 (리신 및 단백질 또는 펩티드 N-말단에서 발견되는) 1급 아민에 대해 반응성인 말레이미드기를 통해 이루어진다. 추가의 또 다른 링커는 말레이미도카프로일 (mc)이다. 다른 적합한 링커로는 특정 pH 또는 pH 범위에서 가수분해 가능한 링커, 예컨대 히드라존 링커를 포함한다. 추가의 적합한 절단가능한 링커로는 이황화물 링커를 포함한다. 링커는 예컨대, mc 링커 등과 같이, 약물이 유리될 수 있도록 하기 위해 항체가 세포내에서 분해되어야 하는 정도로 항체에 공유 결합될 수 있다.
링커는 항체에 연결시키기 위한 기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 링커는 아미노, 히드록실, 카르복실 또는 술프히드릴 반응성 기 (예컨대, 말레이미드, 할로아세트아미드 (예컨대, 아이오도, 브로모, 또는 클로로), 할로에스테르 (예컨대, 아이오도, 브로모, 또는 클로로), 할로메틸 케톤 (예컨대, 아이오도, 브로모, 또는 클로로), 벤질 할라이드 (예컨대, 아이오다이드, 브로마이드 또는 클로라이드), 비닐 술폰 및 피리딜티오)를 포함할 수 있다. 일반적으로, 문헌 [Wong, Chemistry of Protein Conjugation and Cross-linking; CRC Press, Inc., Boca Raton, 1991]을 참조할 수 있다.
면역요법
면역요법을 위해, 항체는 적합한 약물, 예컨대 세포독성제, 또는 세포 증식 억제제, 면역억제제, 방사성 동위 원소, 독소 등에 접합될 수 있다. 접합체는 종양 세포 또는 암 세포를 억제시킴으로써 종양 또는 암 세포의 아폽토시스를 유발하는 데, 또는 환자에서 암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 접합체는 동물의 암을 치료하기 위해 다양한 설정하에서 사용될 수 있다. 접합체는 종양 세포 또는 암 세포에게 약물을 전달하는 데 사용될 수 있다. 이론으로 제한하지 않으면서, 일부 실시양태에서, 접합체는 암-세포 또는 종양-관련 항원에 결합하거나, 그와 회합되고, 접합체 및/또는 약물은 수용체-매개 세포내이입을 통해 종양 세포 또는 암 세포 내부로 흡수될 수 있다. 항원은 종양 세포 또는 암 세포에 부착되어 있을 수 있거나, 종양 세포 또는 암 세포와 회합되는 세포외 기질 단백질일 수 있다. 일단 세포 내부로 이입되고 나면, 접합체 내의 (예컨대, 링커 중에 있는) 하나 이상의 특이 펩티드 서열은 하나 이상 종양-세포 또는 암-세포-회합된 프로테아제에 의해 가수분해적으로 절단되고, 이로써 약물이 유리된다. 이어서, 유리된 약물은 세포 내에서 자유롭게 이동하여 세포독성 또는 세포 증식 억제 또는 다른 활성을 유도한다. 일부 실시양태에서, 약물은 종양 세포 또는 암 세포 외부에서 항체로부터 절단된 후, 이어서, 약물은 세포로 침투하거나, 또는 표면에서 작용한다.
암 치료를 위한 요법
상기 논의된 바와 같이, 종양, 전이, 또는 비조절성 세포 성장을 특징으로 하는 다른 질환 또는 장애를 포함하나, 이에 한정되지 않는 암은 단백질-약물 접합체 투여에 의해 치료 또는 예방될 수 있다.
다른 실시양태에서, 암 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에게 유효량의 접합체 및 화학요법제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 그를 이용한 암 치료가 불응성이 아닌 것으로 밝혀진 것이다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 그를 이용한 암 치료가 불응성인 것으로 밝혀진 것이다. 접합체는 예컨대, 암 치료 수술과 같은 치료 또한 받은 적이 있는 환자에게 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 추가의 치료 방법으로는 방사선 요법이 있다.
암 치료를 위한 다중 약물 요법
암을 치료하는 방법은 암 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 항체-약물 접합체, 및 항암제인 또 다른 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 적합한 항암제로는 메토트렉세이트, 탁솔, L-아스파라기나제, 머캅토퓨린, 티오구아니딘, 히드록시우레아, 시타라빈, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 니트로소우레아, 시스플라틴, 카르보플라틴, 미토마이신, 다카르바진, 프로카르바진, 토포테칸, 질소 머스타드, 시톡산, 에토포시드, 5-플루오로우라실, BCNU, 이리노테칸, 캄프토테신, 블레오마이신, 독소루비신, 이다루비신, 다우노루비신, 닥티노마이신, 플리카마이신, 미톡산트론, 아스파라기나제, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈, 파클리탁셀, 사이클, 및 도세탁셀을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 ADC는 선택된 투여 모드, 및 제약상 허용되는 희석제 또는 부형제, 예컨대 완충제, 계면활성제, 보존제, 가용화제, 등장화제, 안정화제, 담체 등에 적절하게 제제화된 투여용 제약 조성물 형태일 수 있다. 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton Pa., 18th ed., 1995] (이는 본원에 참고로 포함된다)는 일반적으로 전문가에게 알려져 있는 바와 같은 제제화 기법의 개요를 제공한다.
본 제약 조성물은 암을 치료하고자 하는 일반적인 목적을 달성하기 위한, 당업계에 공지되어 있는 임의의 수단에 의해 투여될 수 있다. 정맥내, 근육내, 복강내, 피하, 및 동맥내 주사 및 주입을 포함하나, 이에 한정되지 않는 투여 모드를 언급하는 것으로 본원에서 정의되는 바와 같이, 바람직한 투여 경로는 비경구 투여이다. 투여되는 투여량은 수용자의 연령, 건강 상태, 및 체중, 동시 치료 종류, 존재할 경우, 치료 빈도, 및 원하는 효과의 성질에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 범주 내에 있는 조성물은, ADC가 암 치료를 위해 원하는 의학적 효과를 발휘하는 데 효과적인 양으로 존재하는 모든 조성물을 포함한다. 개인별로 개별 필요량은 달라질 수 있지만, 모든 성분의 유효량에 대해 최적인 범위를 결정하는 것은 임상의의 숙련된 기술 능력 안에 있다.
실시예 1
항-5 T4 ADC 제조
mAb를 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP)으로 부분적으로 환원시킨 후, 환원된 Cys 잔기를 원하는 말레이미드 말단형 링커-페이로드와 반응시켜 5T4-A1 항체 약물 접합체 (ADC)를 제조하였다. 특히, 37℃에서 2 h 동안 100 mM HEPES (4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산 완충제) (pH 7.0) 중의 2.8 몰 과량의 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP) 및 1 mM 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA)을 첨가함으로써 5T4-A1 mAb를 부분적으로 환원시켰다. 이어서, 원하는 링커-페이로드를 5.5 (말레이미도카프로닉-모노메틸아우리스타틴 F [mc-MMAF]) 또는 8 (말레이미도카프로닉-발린-시투룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐-모노메틸아우리스타틴 E [mc-Val-Cit-PABA-MMAE])의 링커-페이로드/mAb-티올 몰비로 반응 혼합물에 첨가하고, 15% v/v의 디메틸아세트아미드 (DMA)의 존재하에 25℃에서 추가로 1 h 동안 반응시켰다. 1 h 동안의 인큐베이션 기간이 경과한 후, N-에틸말레이미드 (mc-MMAF의 경우, 4.5배 과량, 및 mc-Val-Cit-PABA-MMAE의 경우, 2배 과량)를 첨가하여 비반응 티올을 캡핑하고, 15분 동안 반응시킨 후, 6배 과량의 L-Cys를 첨가하여 임의의 비반응 링커-페이로드를 켄칭시켰다. 반응 혼합물을 4℃에서 밤새도록 포스페이트 완충 처리된 염수 (PBS) (pH 7.4) 중에서 투석시키고, SEC (AKTA 익스플로러(AKTA explorer), 수퍼덱스(Superdex) 200 10/30 GL 칼럼)를 통해 정제하였다. 순도에 대해서 크기 배제 크로마토그래피 (SEC), 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC), 및 로딩을 계산하기 위한 액체 크로마토그래피 전자 분무 이온화 직렬 질량 분석법 (LC-ESI MS)을 통해 ADC의 특징을 추가로 규명하고, UV 분광광도계를 통해 농도를 측정하였다.
실시예 2
결합 연구
5T4 항원을 발현하는 세포, 및 음성 대조군 Raji 세포를 비-조직 배양물 처리된 96 웰 플레이트 상에 500,000개의 세포/웰의 밀도로 플레이팅하고, 얼음상에서 유지시켰다. 둘베코스(Dulbecco's) 포스페이트 완충 처리된 염수 (DPBS) 중 3% 우혈청 알부민 BSA 중에서 A1 및 A1-IgG4 항체 또는 A1-mcMMAF ADC의 희석액을 제조하고, 10 ㎍/mL의 최종 농도로 플레이트에 첨가하였다. 이어서, 플레이트를 1시간 동안 얼음상에서 인큐베이션시킨 후, 2회에 걸쳐 세척하였다. 2차 항체인 PE (피코에리트린) 접합된 염소 항-인간 IgG Fc를 웰에 첨가하였다. 4℃에서 30분 동안 인큐베이션시킨 후, 이어서 유세포 분석기를 이용하여 평균 형광 강도를 측정하였다.
하기 표 4에 제시되어 있는 데이터는 A1 항체가 다양한 5T4 양성 세포주 패널에 결합한다는 것을 나타낸다. 하기 표 5에 제시되어 있는 데이터는 여러 상이한 세포주 상에서 A1 및 A1-IgG4 항체 뿐만 아니라, A1-mcMMAF ADC에 대해 유사한 결합이 관찰되었다는 것을 나타낸다.
Figure pct00004
Figure pct00005
실시예 3
세포독성 검정
5T4를 발현하는 세포주, 및 음성 대조군 Raji 세포주를 ADC의 농도를 증가시켜 가면서 ADC와 함께 배양하였다. 4일 경과 후, 각 배양물의 생존가능성을 평가하였다. 로지스틱 비-선형 회귀에 의해 IC50 값을 계산하고, (ng Ab/mL)로 나타내었다. A1-mcMMAF, A1-vcMMAE, A3-mcMMAF 및 A3-mcMMAE는 5T4를 발현하는 세포주 (MDAMB435/5T4, MDAMB468, 및 MDAMB361DYT2)의 성장을 억제시키는 반면, 5T4 음성 세포 (Raji) 상에서 불활성인 것으로 밝혀졌다 (하기 표 6).
Figure pct00006
추가로, 5T4+ 원발성 폐 종양 37622a 세포를 단리시키고, 배양물 중에서 성장시켰다. 세포를 ADC의 농도를 증가시켜 가면서 ADC와 함께 배양하였다. 10일 경과 후, MTS 방법을 사용하여 각 배양물의 생존가능성을 평가하였다. 로지스틱 비-선형 회귀에 의해 IC50 값을 계산하고, (ng Ab/mL)로 나타내었다. A1-mcMMAF, A1-vcMMAE, A3-mcMMAF, 및 A3-vcMMAE는 원발성 폐 종양 세포의 성장을 억제시켰다 (하기 표 7).
Figure pct00007
실시예 4
피하 이종이식 모델
무흉선 (누드) 암컷 마우스 (또는 또 다른 면역억제된 마우스 계통)에 MDAMB435/5T4, MDAMB361DYT2, 또는 H1975 종양 세포를 s.c.로 주사하였다. 대략 0.1 내지 0.3 g의, 병기별 종양을 앓는 마우스 (1처리군당 n=6 내지 10마리의 마우스)에 생리 식염수 (비히클), A1-mcMMAF, A1-vcMMAE, A1-mcMMAD, A1-smccDM1, A3-mcMMAF, A3-vcMMAE, 또는 mcMMAF 또는 vcMMAE에 접합된 비결합 대조군 항체를 3 mg Ab/kg의 용량으로 Q4Dx4로 하여 정맥내로 투여하였다. 모든 ADC는 Ab 함량에 기초하여 투여하였다. 주 1회 이상 종양을 측정하고, 그의 크기 (㎟ ± SEM)는 ㎟ = 0.5 x (종양의 너비2) x (종양의 길이)로 계산하였다.
하기 표 8에 제시된 데이터는 A1-mcMMAF, A1-vcMMAE, A1-vcMMAD, A3- mcMMAF, 및 A3-vcMMAE가 MDAMB435/5T4 이종이식 모델의 성장을 억제시키는 반면, A1-mcMMAD 및 A1-smccDM1은 상기 모델에서 활성을 띠지 않았다는 것을 나타낸다.
하기 표 9에 제시된 데이터는 A1-mcMMAF, A1-vcMMAE, A1-vcMMAD, A1-smccDM1, A3-mcMMAF, 및 A3-vcMMAE가 MDAMB361DYT2 이종이식 모델의 성장을 억제시키는 반면, A1-mcMMAD는 상기 모델에서 활성을 띠지 않았다는 것을 나타낸다.
하기 표 10에 제시된 데이터는 A1-mcMMAF, A1-vcMMAE, A1-vcMMAD, A3- mcMMAF, 및 A3-vcMMAE가 H1975 이종이식 모델의 성장을 억제시키는 반면, A1-mcMMAD 및 A1-smccDM1은 상기 모델에서 활성을 띠지 않았다는 것을 나타낸다.
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
별법으로, 37622a 원발성 종양 세포 이종이식편이 피하로 확립된 누드 마우스를 3 mg Ab/kg 용량의 A1-mcMMAF, A1-mcMMAD, A1-vcMMAD, 또는 A3-mcMMAF로 Q4Dx4로 하여 iv로 처리하고, 96일 동안에 걸쳐 종양 성장을 모니터링하였다. 비히클 대조군 처리된 동물과 비교해 볼 때, A1-mcMMAF, A1-vcMMAD 및 A3-mcMMAF는 37622a 원발성 종양 이식편의 성장을 억제시킨 반면, A1-mcMMAD은 상기 모델에서 활성을 띠지 않았다는 것이 하기 표 11을 통해 입증된다.
Figure pct00011
예상외로, 표 8-11에 제시된 데이터는 4개의 모든 이종이식 모델에서 항체 및 약물 페이로드는 같지만, 링커가 다른 ADC의 경우, 즉, A1-mcMMAD 대 A1-vcMMAD와 같은 경우, 그 효능 프로파일은 다르게 나타났다는 것을 보여준다. 추가로, 상기 데이터는 4개의 모든 이종이식 모델에서 항체 및 링커는 같지만, 약물 페이로드가 다른 ADC의 경우, 즉, A1-mcMMAF 대 A1-mcMMAD와 같은 경우에도 또한 그 효능 프로파일은 다르게 나타났다는 것을 보여준다. 따라서, 약물 MMAD는 vc 링커에 의해 A1 항체 연결된 경우에 4개의 모든 이종이식 모델에서 유효하였지만, mc 링커에 의해 연결된 경우에는 시험된 이종이식 모델 중 어느 것에서도 활성을 보이지 않았다. 대조적으로, 약물 MMAF는 mc 링커로 A1 항체에 연결된 경우에는 4개의 모든 이종이식 모델에서 고도로 유효한 반면, 화학적으로 관련된 약물 MMAD는 같은 링커에 의해 같은 항체에 연결된 경우에는 4개의 모든 이종이식 모델에서 활성을 보이지 않았다.
ADC A1-smccDM1의 경우에도 예상 밖의 추가의 또 다른 관찰 결과가 관찰되었다 (표 8-10). 상기 ADC는 비록 모든 이종이식편이 5T4 표적 항원을 고도로 발현하였지만, MDAMB361DYT2 이종이식편에 대해서는 매우 효과적인 반면, MDAMB435/5T4 및 H1975 이종이식편에 대해서는 본질적으로 어떤 효과도 없었다. 상기 데이터는 링커-페이로드의 유효성은 심지어 같은 고친화성 항체를 사용한 경우에도, 또는 심지어 같은 ADC를 사용한 경우에도 예측할 수 없다는 것을 설명한다.
실시예 5
항체 의존성 세포-매개 세포독성 ( ADCC )
ADCC 검정:
건강한 지원자로부터의 혈액을, 헤파린 나트륨을 포함하는 BD 배큐테이너(Vacutainer) CPT 세포 제조 튜브로 수집하였다. 인간 말초 혈액 단핵구 세포 (PBMC)를 수거하고, 2.5 x 107개의 세포/ml로 검정 완충제 (10 mM HEPES로 보충된 RPMI 1640) 중에 재현탁시켰다. 표적 세포 (MDAMB435/5T4 또는 MDAMB435/neo)를 96 웰 검정 플레이트에 1 x 104개의 세포/웰인 밀도로 시딩하였다. A1 항체 또는 A1-mcMMAF를 첨가한 후, 인간 PBMC 이펙터 세포 (5 x 105개)를 50:1의 이펙터:표적 세포 비 (E:T)가 되도록 웰에 분배하였다. ADCC 활성을 위해 검정 플레이트를 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션시켰다. 동량의 시토톡스-원(CytoTox-One) 시약 (프로메가(Promega))을 첨가하여 플레이트를 수거하였다. 정지액 (프로메가; 50 ul)을 각 웰에 첨가하고, 형광 강도를 측정함으로써 락테이트 데히드로게나제 방출량을 정량화하였다. 양성 대조군으로서, 웰당 2 ㎕씩의 용해 완충제를 첨가하여 대조군 웰에서 최대 LDH 방출량 (100% 세포독성)을 얻었다. 하기 식을 사용하여 세포독성(%)을 계산하였다:
Figure pct00012
여기서, "실험치"는 실험 조건들 중 한 조건하에서 측정된 신호에 상응하고, "이펙터 자발적"은 PBMC만이 단독으로 존재하는 조건하에서 측정된 신호에 상응하고, "표적 자발적"은 표적 세포만이 단독으로 존재하는 조건하에서 측정된 신호에 상응하고, "표적 최대치"는 계면활성제로 용해된 표적 세포만이 단독으로 존재하는 조건하에서 측정된 신호에 상응한다.
A1-IgG4 Ab와 비교한, A1-IgG1 Ab 및 A1-mcMMAF의 ADCC 활성을 하기 표 12에 제시한다. A1 항체 및 A1-mcMMAF 둘 모두는 유사한 ADCC 활성을 보였는데, 이는 A1-mcMMAF의 ADCC 활성이 그의 항종양 활성에 기여할 수 있다는 것을 나타낸다.
Figure pct00013
실시예 6
결합 친화성
비아코어®를 사용하여 표면 플라스몬 공명 (SPR) 분석을 수행함으로써 pH 6.0 및 pH 7.4에서 인간 또는 시노몰구스 5T4에 결합하는 A1-IgG1 및 A1-IgG4에 대한 친화도 상수를 측정하였다. 비아코어® 기술은 huA1 항체 변이체가 표면층 상에서 고정화되어 있는 인간 5T4 단백질에 결합할 때, 표면층에서의 굴절률 변화를 이용한다. 결합은 표면으로부터 굴절되는 레이저 광의 SPR에 의해 검출된다. 신호 동역학적 성질 온-속도 및 오프-속도에 대해 분석함으로써 비-특이 상호작용과 특이 상호작용을 구별할 수 있다. 본 분석에 사용된 5T4 단백질은 인간 IgG1-Fc 도메인에 융합된 인간 또는 시노몰구스 5T4 엑토도메인으로 구성되었고, 저밀도 (인간 및 시노몰구스의 경우에 각각 45.1 및 45.4 RU)로 CM5 칩 상에 고정화시켜 친화도 상수를 정확하게 측정하였다.
오직 같은 밀도로 CM5 칩 상에 고정화된 인간 IgG1-Fc 단백질만을 포함하는 참조 표면에의 결합량에서 5T4-Fc 표면상의 값을 감산함으로써 5T4 엑토도메인에의 특이적인 결합을 측정할 수 있었다. 이어서, HBS-EP pH 7.4 또는 MES-EP pH 6.0 완충제 중의 다양한 농도의 A1, A1-IgG4, 또는 A3 항체를 표면 상에 주입하였다. 주입 사이클 사이에 글리신 (pH 1.7) + 0.05% 계면활성제 P20 (GE 헬쓰케어(GE Healthcare), BR-1000-54)을 이용하여 2회에 걸쳐 표면을 재생시켰다.
그 결과, A1-IgG4에 비하여 A1이 pH 6.0 및 pH 7.4 둘 모두에서 저밀도 5T4 표면을 사용하였을 때, 인간 5T4에 대해 친화도가 약간 더 높은 것으로 나타났다 (각각 1.5배 및 1.2배, 하기 표 13). 추가로, A1은 A1-IgG4와 비교하였을 때, pH 6.0 및 pH 7.4 둘 모두에서 시노몰구스 5T4에 대해 약간 더 잘 결합하는 것으로 나타났고 (각각 1.7배 및 1.2배), A1 및 A1-IgG4 모두 시노몰구스 5T4보다 인간 인간 5T4에 대해 3-4배 더 잘 결합하였다 (하기 표 13).
Figure pct00014
A1 항체와 A3 항체를 비교해 볼 때, A1 항체는 pH 6.0에 비하여 pH 7.4에서 인간 및 시노몰구스 5T4에 더욱 잘 결합하는 반면, A3 항체는 pH 7.4에 비하여 pH 6.0에서 결합이 증강된 것으로 나타났다는 것은 자명한 것이다 (하기 표 14).
Figure pct00015
실시예 7
5 T4 키메라를 사용한 에피토프 지도화
각각의 A1 및 A3 항체가 결합하는 에피토프를 확인하기 위해, COS-1 세포에서 일시적으로 발현되는 (1) 5T4 엑토도메인 Fc 구축물, 및 (2) 인간/마우스 5T4 키메라 구축물을 이용하여 효소 결합 면역흡착 검정법 (ELISA)을 수행하였다. 엑토도메인은 아미노-말단 영역, 2개의 류신이 풍부한 반복부, 및 개재 소수성 영역을 포함하였고, 마우스 및 래트 5T4 엑토도메인은 그의 소수성 영역 내에 6개의 아미노산으로 된 동향 반복부(direct repeat)를 함유하였다.
인간 5T4 (아미노산 1-355), 마우스 5T4 (아미노산 1-361), 래트 5T4 (아미노산 1-361), 시노몰구스 원숭이 5T4 (아미노산 1-355), 침팬지 5T4 (아미노산 1-355), 및 검은 꼬리 마모셋 (아미노산 1-355)을 이용하여 5T4 엑토도메인 및 인간 IgG1로부터의 Fc 불변 영역을 함유하는 융합 단백질을 제조하였다. 인간/마우스 5T4 키메라 구축물을 이용하여 얻은 결합 결과는, A1 및 A3 항체에 의한 특이적인 결합, 부분적인 결합, 또는 결합 부족을 보여주는 표 14에 요약되어 있다.
하기 표 15는 다양한 인간/마우스 키메라에 대한 항체의 결합능을 나타내고 있으며, 명명법은 마우스 5T4 콘텐츠에 의해 지정된 것이다. 어떤 결합도 일어나지 않은 경우, 이는 항체가 마우스 5T4에 결합하지 않았기 때문에, 항체는 인간 5T4에 결합한다는 것을 나타낸다. 예를 들어, A3 항체가 (83-163 사이에) 가장 많은 N-말단 결합 에피토프를 가지고 있고, 이는 잔기 83-163이 마우스 5T4로 치환된 5T4 키메라에는 결합하지 못하는 것으로 나타났으며, 따라서, A3은 더 이상 결합이 불가능하였다. 상기 결과에 기초하여, 인간화된 A1 항체는 먼저 아미노산 잔기 173 내지 252 사이의 인간 5T4와 접촉하고, 아미노산 잔기 276 내지 355 사이의 인간 5T4와 두번째 접촉을 한다는 것을 확인할 수 있었다. A3 항체는 먼저 아미노산 잔기 83 내지 163 사이의 인간 5T4의 류신이 풍부한 반복부 영역에 결합하였다. 아미노산 잔기 번호는 서열 번호 11의 인간 5T4 항원 아미노산 서열에 상응한다.
Figure pct00016
실시예 8
A1- mcMMAF ADC 와 A1- IgG4 - CM ADC 비교
안전성 및 효능 둘 모두에 대해서 A1-mcMMAF를 A1-IgG4-AcBut 칼리키아미신 (A1-IGG4-CM)과 비교하였다. A1-4-CM은 링커, AcBut [-(4' 아세틸 페녹시) 부탄산]를 이용하여 칼리키아미신 페리로드에 접합된 A1-IgG4로 구성된 것이다. 칼리키아미신은 마이크로모노스포라 에키노스포라(Micromonospora echinospora) 박테리아로부터 유래된 엔다이인 부류의 항생제인 강력한 항종양제이다.
여러 5T4 양성 세포주를 사용하여 A1 Ab, A1-IgG4 Ab, A1-mcMMAF ADC 및 A1-IgG4-CM ADC의 세포 결합 활성을 비교하였다 (실시예 2, 표 5 참조). 데이터는 A1 및 A1-IgG4 항체 뿐만 아니라, A1-mcMMAF ADC 경우, 유사한 결합이 관찰되었으며, 이들 모두는 시험된 모든 5T4 양성 세포주에 있어서 A1-IgG4-CM보다 더 높은 평균 형광 강도를 가지는 것으로 나타났다.
MDAMB435/5T4 피하 이종이식 모델에서 A1-mcMMAF 및 A1-IgG4-CM을 나란히 시험하였다. 종양 크기가 대략 200 ㎟에 도달하였을 때 상기 두 ADC 모두를 iv로 (Q4dx2로 하여) 투여하였다. 3 mg/kg 용량의 A1-IgG4-CM의 항-종양 활성은 10 mg/kg의 용량으로 투여된 A1-mcMMAF의 항-종양 활성과 유사하였다 (하기 표 16). 상기 결과에 기초하면, A1-IgG4-CM의 항-종양 활성은 A1-mcMMAF의 활성보다 대략 3.3배 더 강력하였다.
Figure pct00017
예측컨대, A1-mcMMAF의 효능에 비하여 A1-IgG4-CM이 3.3배 증강된 효능을 가진다는 것은 동물 독성 연구에서 A1-IgG4-CM의 안전역에 비하여 A1-mcMMAF이 3.3배 증강된 안전역을 가진다는 것으로 해석될 수 있다. 그러나, 시노몰구스 마카쿠에서 A1-IgG4-CM의 안전성 프로파일을 검토해 보았을 때, 시노몰구스 마카쿠에서 A1-IgG4-CM이 A1-mcMMAF보다 100배 이상 독성이 더 크다는 것을 확인할 수 있었다. A1-IgG4-CM을 0.032, 0.095 및 0.32 mg Ab/kg/사이클 (2, 6, 20 ㎍ 사이클/kg/사이클)로 수컷 (n=3) 및 암컷 (n=3) 시노몰구스 마카쿠에 투여하였을?, 각 용량 수준에서 독성이 관찰되었다. 2회 사이클 후 (2회 투여 후), 0.095 처리군에서 6마리 중 4마리는 안락사하거나, 또는 사망한 것으로 나타났다. 한편, A1-mcMMAF (247 ㎍ mcMMAF/kg/사이클)를 최대 10 mg/kg까지의 투여량으로 동일하게 4주간의 기간에 걸쳐 2회 사이클 후 (2회 투여 후), 어느 것도 사망하지 않은 것으로 관찰되었다. 요약컨대, 하기 둘 모두를 4주간의 관찰 기간 동안 시노몰구스 마카쿠에게 2회에 걸쳐 투여하였을 때, A1-mcMMAF 10 mg/kg의 투여량 군은 안전한 반면, A1-IgG4-CM 0.096 mg/kg의 투여량 군은 독성인 것으로 간주되었다.
예상외로, 각 ADC의 상대적인 항-종양 효능에 기초하여 예상해 보았을 때 안전역이 3.3배 더 크다고 한 것보다는, 본 결과를 통해 볼 때, A1-mcMMAF의 안전역은 A1-IgG4-CM의 안전역의 105배 (10/0.095=105)가 된다는 것이 입증되었다. 본 데이터를 통해 동일한 항원 표적에 대한 항체를 이용하지만, 상이한 약물 페이로드에 접합된 항체-약물 접합체의 예측불가능한 성질이 밝혀졌다.
실시예 9
A1- mcMMAF 마우스 PK / PD 모델링 및 임상 용량 예측
전체 세포주에 대해 유효한 농도를 측정하기 위해 마우스 이종이식 연구에서 는 PK/PD 모델링을 사용하여 A1-mcMMAF의 종양 반응을 정량화하였다. 사용된 전이 구획 종양 사멸 PK/PD 모델은 앞서 시메오니(Simeoni) 등에 의해 기술된 바 있다 (문헌 [Simeoni et al , Cancer Res , 64:1094, (2004)]). 종양의 선형, 지수적 및 로지스틱 성장, 및 약물에 의한 포화 사멸을 설명하기 위해 모델을 변형시켰다. PK/PD 모델 파라미터은 하기를 포함한다:
k g ex 지수적 성장
k g 로지스틱 성장
w 0 초기 종양 부피
tau 변환 속도
k 최대 최대 사멸 속도
kC 50 최대 사멸 속도가 ½이 될 때의 속도
PK/PD 모델링 결과를 사용하여 종양 정적 속도 (TSC, 식 1)를 계산하였다. 이는 종양 성장이 종양 사멸 속도와 같고, 종양 부피는 변함없이 그대로 유지되는 약물 농도이다. TSC는 효능에 필요한 최소 농도로서 정의될 수 있다. TSC는 임상 용량 선택에 대한 가이던스를 제공하는 데 사용되며, 농도는 진료소에서의 효능을 위해 필요한 TSC보다 크다 (>TSC).
A1-mcMMAF의 경우, 별개의 연구에서 마우스 PK를 측정하였다 (3 mg/kg IV, 암컷 무흉선 nu/nu 마우스). 매 4일마다 1 내지 30 mg/kg의 용량 수준으로 A1-mcMMAF를 투여받은 3개의 상이한 5T4 세포주를 사용하여 마우스 이종이식 연구를 완료하였다: 세포주 MDAMB435/5T4 (1, 3, 10, 및 30 mg/kg으로 투여받음), 세포주 H1975 (1, 3, 및 10 mg/kg으로 투여받음) 및 세포주 37622A (1 및 10 mg/kg으로 투여받음). 기술된 바와 같이 PK/PD 모델링을 수행하고, TSC를 하기 표 17에 기록하였다.
각 이종이식 세포주에 대한 마우스 PK/PD 파라미터를 예측된 A1-mcMMAF의 인간 PK와 조합하여 진료소에서의 효능을 위해 필요한 용량을 모의하였다. 이러한 방법을 이용하였을 때, A1-mcMMAF의 최소 유효 임상 용량은 약 0.22 내지 약 2.3 mg/kg Q3 주 [매 3주마다]인 것으로 예측되었다 (하기 표 17).
본 발명의 한 실시양태에서, 용량 범위는 약 0.18 mg/kg 내지 약 2.7 mg/kg, 약 0.22 mg/kg 내지 약 2.6 mg/kg, 약 0.27 mg/kg 내지 약 2.5 mg/kg, 약 0.32 mg/kg 내지 약 2.3 mg/kg, 약 0.37 mg/kg 내지 약 2.15 mg/kg, 약 0.42 mg/kg 내지 약 2.10 mg/kg, 약 0.47 mg/kg 내지 약 2.05 mg/kg, 약 0.52 mg/kg 내지 약 2.00 mg/kg, 약 0.57 mg/kg 내지 약 1.95 mg/kg, 약 0.62 mg/kg 내지 약 1.90 mg/kg, 약 0.67 mg/kg 내지 약 1.85 mg/kg, 약 0.72 mg/kg 내지 약 1.80 mg/kg, 약 0.82 mg/kg 내지 약 1.70 mg/kg, 약 0.92 mg/kg 내지 약 1.60 mg/kg, 약 1.02 mg/kg 내지 약 1.50 mg/kg, 약 1.12 mg/kg 내지 약 1.40 mg/kg, 또는 약 1.20 mg/kg 내지 약 1.30 mg/kg 범위일 수 있고, Q3 주로 투여된다. 바람직하게, 용량 범위는 약 0.22 mg/kg 내지 약 2.3 mg/kg 범위일 수 있다.
<식 1>
Figure pct00018
Figure pct00019
서열 목록
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
SEQUENCE LISTING <110> PFIZER GERBER, HANS-PETER <120> ANTIBODY-DRUG CONJUGATES <130> PC71762 <160> 34 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> "Synthetic Sequence Humanized A1 human IgG1 heavy chain <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Ala Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Trp Asp Gly Ala Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 2 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Humanized A1 human Kappa light chain <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Phe Ala Thr Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence A1-VH <400> 3 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Ala Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Trp Asp Gly Ala Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 4 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence A1-VL <400> 4 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Phe Ala Thr Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence A1-HC CDR1 <400> 5 Asn Phe Gly Met Asn 1 5 <210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence A1-HC CDR2 <400> 6 Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Ala Glu Glu Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence A1-HC CDR3 <400> 7 Asp Trp Asp Gly Ala Tyr Phe Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence A1-LC-CDR1 <400> 8 Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Ala 1 5 10 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence A1-LC-CDR2 <400> 9 Phe Ala Thr Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence A1-LC-CDR3 <400> 10 Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Trp Thr 1 5 <210> 11 <211> 420 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Human 5T4 antigen <400> 11 Met Pro Gly Gly Cys Ser Arg Gly Pro Ala Ala Gly Asp Gly Arg Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ala Arg Leu Ala Leu Val Leu Leu Gly Trp Val Ser Ser Ser 20 25 30 Ser Pro Thr Ser Ser Ala Ser Ser Phe Ser Ser Ser Ala Pro Phe Leu 35 40 45 Ala Ser Ala Val Ser Ala Gln Pro Pro Leu Pro Asp Gln Cys Pro Ala 50 55 60 Leu Cys Glu Cys Ser Glu Ala Ala Arg Thr Val Lys Cys Val Asn Arg 65 70 75 80 Asn Leu Thr Glu Val Pro Thr Asp Leu Pro Ala Tyr Val Arg Asn Leu 85 90 95 Phe Leu Thr Gly Asn Gln Leu Ala Val Leu Pro Ala Gly Ala Phe Ala 100 105 110 Arg Arg Pro Pro Leu Ala Glu Leu Ala Ala Leu Asn Leu Ser Gly Ser 115 120 125 Arg Leu Asp Glu Val Arg Ala Gly Ala Phe Glu His Leu Pro Ser Leu 130 135 140 Arg Gln Leu Asp Leu Ser His Asn Pro Leu Ala Asp Leu Ser Pro Phe 145 150 155 160 Ala Phe Ser Gly Ser Asn Ala Ser Val Ser Ala Pro Ser Pro Leu Val 165 170 175 Glu Leu Ile Leu Asn His Ile Val Pro Pro Glu Asp Glu Arg Gln Asn 180 185 190 Arg Ser Phe Glu Gly Met Val Val Ala Ala Leu Leu Ala Gly Arg Ala 195 200 205 Leu Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Leu Ala Ser Asn His Phe Leu Tyr 210 215 220 Leu Pro Arg Asp Val Leu Ala Gln Leu Pro Ser Leu Arg His Leu Asp 225 230 235 240 Leu Ser Asn Asn Ser Leu Val Ser Leu Thr Tyr Val Ser Phe Arg Asn 245 250 255 Leu Thr His Leu Glu Ser Leu His Leu Glu Asp Asn Ala Leu Lys Val 260 265 270 Leu His Asn Gly Thr Leu Ala Glu Leu Gln Gly Leu Pro His Ile Arg 275 280 285 Val Phe Leu Asp Asn Asn Pro Trp Val Cys Asp Cys His Met Ala Asp 290 295 300 Met Val Thr Trp Leu Lys Glu Thr Glu Val Val Gln Gly Lys Asp Arg 305 310 315 320 Leu Thr Cys Ala Tyr Pro Glu Lys Met Arg Asn Arg Val Leu Leu Glu 325 330 335 Leu Asn Ser Ala Asp Leu Asp Cys Asp Pro Ile Leu Pro Pro Ser Leu 340 345 350 Gln Thr Ser Tyr Val Phe Leu Gly Ile Val Leu Ala Leu Ile Gly Ala 355 360 365 Ile Phe Leu Leu Val Leu Tyr Leu Asn Arg Lys Gly Ile Lys Lys Trp 370 375 380 Met His Asn Ile Arg Asp Ala Cys Arg Asp His Met Glu Gly Tyr His 385 390 395 400 Tyr Arg Tyr Glu Ile Asn Ala Asp Pro Arg Leu Thr Asn Leu Ser Ser 405 410 415 Asn Ser Asp Val 420 <210> 12 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Humanized A1 human IgG4m heavy chain <400> 12 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Ala Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Trp Asp Gly Ala Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 13 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence human IgG4m VH (A1-IGG4-VH) <400> 13 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Ala Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Trp Asp Gly Ala Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 14 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence A1-IgG4-VH-CDR1 <400> 14 Asn Phe Gly Met Asn 1 5 <210> 15 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Chimeric A3 heavy chain (muA3-huIgG1) <400> 15 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Met 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr 85 90 95 Tyr Cys Val Arg Gln Trp Asp Tyr Asp Val Arg Ala Met Asn Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly Lys 450 <210> 16 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Chimeric A3 VH <400> 16 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Met 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr 85 90 95 Tyr Cys Val Arg Gln Trp Asp Tyr Asp Val Arg Ala Met Asn Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Chimeric A3 VH-CDR1 <400> 17 Thr Tyr Ala Met Asn 1 5 <210> 18 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Chimeric A3 VH-CDR2 <400> 18 Arg Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser 1 5 10 15 Val Lys Asp <210> 19 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Chimeric A3 VH-CDR3 <400> 19 Gln Trp Asp Tyr Asp Val Arg Ala Met Asn Tyr 1 5 10 <210> 20 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Chimeric A3 light chain (muA3-huKappa) <400> 20 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Ile Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Leu Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 21 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Chimeric A3 VL <400> 21 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Ile Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Leu Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 22 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Chimeric A3 VL-CDR1 <400> 22 Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 23 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Chimeric A3 VL-CDR2 <400> 23 Trp Ala Ser Thr Arg Leu Thr 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Chimeric A3 VL-CDR3 <400> 24 Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 25 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Humanized A3 human IgG1 heavy chain <400> 25 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Val Arg Gln Trp Asp Tyr Asp Val Arg Ala Met Asn Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly Lys 450 <210> 26 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Humanized A3 VH <400> 26 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Ser 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Val Arg Gln Trp Asp Tyr Asp Val Arg Ala Met Asn Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Humanized A3 VH-CDR1 <400> 27 Thr Tyr Ala Met Asn 1 5 <210> 28 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Humanized A3 VH-CDR2 <400> 28 Arg Ile Arg Ser Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser 1 5 10 15 Val Lys Asp <210> 29 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Humanized A3 VH-CDR3 <400> 29 Gln Trp Asp Tyr Asp Val Arg Ala Met Asn Tyr 1 5 10 <210> 30 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Humanized A3 human Kappa light chain <400> 30 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Leu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 31 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Humanized A3 VL <400> 31 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Leu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 32 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Humanized A3 VL-CDR1 <400> 32 Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Humanized A3 VL-CDR2 <400> 33 Trp Ala Ser Thr Arg Leu Thr 1 5 <210> 34 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence Humanized A3 VL-CDR3 <400> 34 Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr 1 5

Claims (21)

  1. 하기 식의 항체-약물 접합체 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Ab-(LU-D)p
    상기 식에서,
    (a) Ab는
    (i) 서열 번호 5에 제시된 바와 같은 VH CDR1 영역,
    (ii) 서열 번호 6에 제시된 바와 같은 VH CDR2 영역, 및
    (iii) 서열 번호 7에 제시된 바와 같은 VH CDR3 영역
    을 가지는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항-5T4 항체 또는 그의 항원 결합 부분이고,
    (b) LU는 말레이미도카프로일 및 말레이미도카프로일-Val-Cit로 이루어진 군으로부터 선택되는 링커 단위이고,
    (c) p는 정수 약 1 내지 약 8이고,
    (d) D는 MMAE, MMAD, 및 MMAF로 이루어진 군으로부터 선택되는 약물 단위이다.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항-5T4 항체 또는 그의 항원 결합 부분이
    (a) 서열 번호 8에 제시된 바와 같은 VL CDR1 영역,
    (b) 서열 번호 9에 제시된 바와 같은 VL CDR2 영역, 및
    (c) 서열 번호 10에 제시된 바와 같은 VL CDR3 영역
    을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항-5T4 항체 또는 그의 항원 결합 부분이
    1) (a) 서열 번호 5에 제시된 바와 같은 VH CDR1 영역,
    (b) 서열 번호 6에 제시된 바와 같은 VH CDR2 영역, 및
    (c) 서열 번호 7에 제시된 바와 같은 VH CDR3 영역
    을 가지는 중쇄 가변 영역, 및
    2) (a) 서열 번호 8에 제시된 바와 같은 VL CDR1 영역,
    (b) 서열 번호 9에 제시된 바와 같은 VL CDR2 영역, 및
    (c) 서열 번호 10에 제시된 바와 같은 VL CDR3 영역
    을 가지는 경쇄 가변 영역
    을 추가로 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-5T4 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 서열 번호 3의 VH 영역 및 서열 번호 4의 VL 영역을 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-5T4 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 서열 번호 1을 가지는 중쇄 및 서열 번호 2를 가지는 경쇄로 구성된 것인 항체-약물 접합체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 인간 5T4 항원 상의 에피토프를 인식하고, 여기서 상기 에피토프는 서열 번호 11의 아미노산 서열의 아미노산 잔기 173-258 및 282-361을 포함하는 것인 항체-약물 접합체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LU가 말레이미도카프로일인 항체-약물 접합체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약물이 MMAF인 항체-약물 접합체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, p가 정수 약 1 내지 약 4인 항체-약물 접합체.
  10. 제1항에 있어서,
    (a) 상기 항-5T4 항체가 서열 번호 1을 가지는 중쇄 및 서열 번호 2를 가지는 경쇄로 구성되고,
    (b) 상기 LU가 말레이미도카프로일이고,
    (c) 상기 약물이 MMAF이고,
    (d) p가 4인
    항체-약물 접합체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  12. 5T4-양성 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 항체-약물 접합체를 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 5T4-양성 암을 치료하는 방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 암이 결장직장암종, 유방암종, 췌장암종, 및 비-소세포폐암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  14. 요법에서 사용하기 위한 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체.
  15. 의약의 제조를 위한 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 항체-약물 접합체의 용도.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 용도가 5T4-양성 암의 치료를 위한 것인 용도.
  17. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 항-5T4 항체를 코딩하는 핵산.
  18. 제17항의 핵산을 포함하는 벡터.
  19. 제18항에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  20. 제19항의 숙주 세포를 배양하는 단계 및 배양물로부터 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 항체를 제조하는 방법.
  21. (a) 말레이미도카프로일 또는 말레이미도카프로일-Val-Cit로 이루어진 군으로부터 선택되는 링커 단위를 MMAE, MMAD, 또는 MMAF로 이루어진 군으로부터 선택되는 약물 단위에 화학적으로 연결시키는 단계;
    (b) 상기 링커-약물을 제20항의 세포 배양물로부터 회수된 항체에 접합시키는 단계; 및
    (c) 항체-약물 접합체를 정제하는 단계
    를 포함하는, 항-5T4 항체-약물 접합체를 제조하는 방법.
KR1020137025712A 2011-04-01 2012-03-19 항체-약물 접합체 Expired - Fee Related KR101529810B1 (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161470576P 2011-04-01 2011-04-01
US61/470,576 2011-04-01
US201261593549P 2012-02-01 2012-02-01
US61/593,549 2012-02-01
US201261602349P 2012-02-23 2012-02-23
US61/602,349 2012-02-23
PCT/IB2012/051304 WO2012131527A1 (en) 2011-04-01 2012-03-19 Antibody-drug conjugates

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157002692A Division KR101783529B1 (ko) 2011-04-01 2012-03-19 항체-약물 접합체

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20130125833A true KR20130125833A (ko) 2013-11-19
KR101529810B1 KR101529810B1 (ko) 2015-06-26

Family

ID=45895455

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157002692A Expired - Fee Related KR101783529B1 (ko) 2011-04-01 2012-03-19 항체-약물 접합체
KR1020137025712A Expired - Fee Related KR101529810B1 (ko) 2011-04-01 2012-03-19 항체-약물 접합체

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157002692A Expired - Fee Related KR101783529B1 (ko) 2011-04-01 2012-03-19 항체-약물 접합체

Country Status (27)

Country Link
US (4) US8309094B2 (ko)
EP (2) EP2694111B1 (ko)
JP (3) JP5925875B2 (ko)
KR (2) KR101783529B1 (ko)
CN (2) CN105288644A (ko)
AR (1) AR085747A1 (ko)
AU (3) AU2012235817B2 (ko)
BR (1) BR112013025186A2 (ko)
CA (1) CA2830338C (ko)
CO (1) CO6771458A2 (ko)
DK (1) DK2694111T3 (ko)
ES (1) ES2596194T3 (ko)
HK (1) HK1221153A1 (ko)
HU (1) HUE031017T2 (ko)
IL (1) IL228404A0 (ko)
MX (1) MX342860B (ko)
MY (1) MY170719A (ko)
PE (1) PE20140573A1 (ko)
PH (1) PH12013501942A1 (ko)
PL (1) PL2694111T3 (ko)
PT (1) PT2694111T (ko)
RU (1) RU2624141C2 (ko)
SA (1) SA112330402B1 (ko)
SG (2) SG10201605401WA (ko)
SI (1) SI2694111T1 (ko)
TW (2) TWI471334B (ko)
WO (1) WO2012131527A1 (ko)

Families Citing this family (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8435529B2 (en) 2002-06-14 2013-05-07 Immunomedics, Inc. Combining radioimmunotherapy and antibody-drug conjugates for improved cancer therapy
US7585491B2 (en) 2002-12-13 2009-09-08 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
US9770517B2 (en) 2002-03-01 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
US9745380B2 (en) 2002-03-01 2017-08-29 Immunomedics, Inc. RS7 antibodies
WO2003074566A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Immunomedics, Inc. Rs7 antibodies
US10058621B2 (en) 2015-06-25 2018-08-28 Immunomedics, Inc. Combination therapy with anti-HLA-DR antibodies and kinase inhibitors in hematopoietic cancers
US9707302B2 (en) 2013-07-23 2017-07-18 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
TWI421257B (zh) 2006-03-10 2014-01-01 Wyeth Corp 抗５ｔ４抗體及其用途
DK2575870T3 (en) * 2010-06-04 2017-02-13 Wyeth Llc vaccine Formulations
BR112013025186A2 (pt) * 2011-04-01 2018-09-11 Wyeth Llc conjugados de anticorpo-fármaco
WO2013068874A1 (en) * 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. Antibody-drug conjugates
US10254286B2 (en) 2012-01-24 2019-04-09 Pfizer Inc. Methods for detecting 5T4-positive circulating tumor cells and methods of diagnosis of 5T4-positive cancer in a mammalian subject
AU2012376421A1 (en) * 2012-04-04 2014-11-13 Perseus Proteomics Inc. Drug conjugate comprising anti-cdh3 (p-cadherin) antibody
SMT201800096T1 (it) * 2012-10-23 2018-05-02 Synaffix Bv Anticorpo modificato, coniugato di anticorpo e processo per la preparazione degli stessi
BR112015010436A2 (pt) * 2012-11-07 2017-08-22 Pfizer Anticorpos anti-notch3 e conjugados anticorpo-fármaco
US10226535B2 (en) 2012-12-10 2019-03-12 Mersana Therapeutics, Inc. Auristatin compounds and conjugates thereof
MX379460B (es) 2012-12-13 2025-03-11 Immunomedics Inc Dosis de inmunoconjugados de anticuerpos y sn-38 para eficacia mejorada y toxicidad reducida.
US10206918B2 (en) 2012-12-13 2019-02-19 Immunomedics, Inc. Efficacy of anti-HLA-DR antiboddy drug conjugate IMMU-140 (hL243-CL2A-SN-38) in HLA-DR positive cancers
US12310958B2 (en) 2012-12-13 2025-05-27 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US9492566B2 (en) 2012-12-13 2016-11-15 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US10137196B2 (en) 2012-12-13 2018-11-27 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US20240148873A1 (en) 2012-12-13 2024-05-09 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and sn-38 for improved efficacy and decreased toxicity
WO2014137931A1 (en) * 2013-03-06 2014-09-12 Imaginab, Inc. Antigen binding constructs to 5t4
US9352049B2 (en) 2013-03-14 2016-05-31 Albany Molecular Research, Inc. Ligand-therapeutic agent conjugates, silicon-based linkers, and methods for making and using them
EP3613468A1 (en) 2013-05-02 2020-02-26 Glykos Finland Oy Glycoprotein-toxic payload conjugates
US9517276B2 (en) 2013-06-04 2016-12-13 Cytomx Therapeutics, Inc. Compositions and methods for conjugating activatable antibodies
US11253606B2 (en) 2013-07-23 2022-02-22 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
JP6510518B2 (ja) * 2013-08-01 2019-05-08 アジェンシス，インコーポレイテッド Ｃｄ３７タンパク質に結合する抗体薬物結合体（ａｄｃ）
US10035847B2 (en) 2013-10-02 2018-07-31 The Rockefeller University Amyloid protofibril antibodies and methods of use thereof
KR102087850B1 (ko) 2013-10-11 2020-03-12 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드 단백질-고분자-약물 접합체
US10316080B2 (en) * 2013-10-11 2019-06-11 Asana Biosciences, Llc Protein-polymer-drug conjugates
RU2016119491A (ru) 2013-11-04 2017-12-11 Пфайзер Инк. Конъюгаты антитела к efna4 с лекарственным средством
MX384646B (es) 2014-02-21 2025-03-14 Ibc Pharmaceuticals Inc Anticuerpo biespecífico que comprende al menos un sitio de unión para trop-2 y al menos sitio de unión para cd3 y su uso para inducir una respuesta inmune
WO2015155345A1 (en) * 2014-04-11 2015-10-15 Medimmune Limited Antibodies and antibody-drug conjugates
US20150320706A1 (en) 2014-05-12 2015-11-12 Chiesi Farmaceutici S.P.A. Formulations and methods of treating alzheimer's disease and other proteinopathies by combination therapy
CA2947238A1 (en) * 2014-05-22 2015-11-26 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Site-specific conjugation of linker drugs to antibodies and resulting adcs
AP2016009586A0 (en) * 2014-05-29 2016-11-30 Macrogenics Inc Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
WO2016022939A1 (en) * 2014-08-08 2016-02-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Human monoclonal antibodies specific for 5t4 and methods of their use
US10617670B2 (en) 2014-10-10 2020-04-14 Pfizer Inc. Synergistic auristatin combinations
WO2016133927A1 (en) * 2015-02-16 2016-08-25 New York Blood Center, Inc. Antibody drug conjugates for reducing the latent hiv reservoir
CA2981543A1 (en) 2015-04-22 2016-10-27 Immunomedics, Inc. Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating trop-2-positive cancer cells
CN106279352B (zh) * 2015-05-29 2020-05-22 上海新理念生物医药科技有限公司 海兔毒素10的衍生物及其应用
US10195175B2 (en) 2015-06-25 2019-02-05 Immunomedics, Inc. Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors
TWI744261B (zh) 2015-11-24 2021-11-01 荷蘭商拜恩迪斯公司 抗５ｔ４抗體和抗體-藥物共軛體
US20210198377A1 (en) * 2015-12-24 2021-07-01 Xdcexplorer (Shanghai) Co., Ltd. Tpbg antibody and preparation method therefor, conjugate and use thereof
CN108601841A (zh) 2016-02-10 2018-09-28 免疫医疗公司 Abcg2抑制剂与sacituzumab govitecan(immu-132)的组合克服表达trop-2的癌中对sn-38的抗性
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
US20200338210A1 (en) * 2016-12-22 2020-10-29 Ardeagen Corporation Anti-ror1 antibody and conjugates thereof
CN108285487B (zh) * 2017-01-08 2021-02-19 浙江昭华生物医药有限公司 抗5t4抗体-药物偶联物及其应用
CN110678197A (zh) * 2017-03-15 2020-01-10 牛津生物医学（英国）有限公司 方法
WO2018183041A1 (en) 2017-03-27 2018-10-04 Immunomedics, Inc. Treatment of trop-2 expressing triple negative breast cancer with sacituzumab govitecan and a rad51 inhibitor
US11608384B2 (en) 2017-04-05 2023-03-21 Xdcexplorer (Shanghai) Co., Ltd. Humanized anti-TPBG antibody, preparation method therefor, conjugate thereof, and applications
US11666657B2 (en) 2017-05-16 2023-06-06 Universite De Strasbourg Protein-drug conjugates and their use in the treatment of cancers
AU2018335880B2 (en) * 2017-09-22 2025-04-10 Avidity Biosciences, Inc. Nucleic acid-polypeptide compositions and methods of inducing exon skipping
EP3717021A1 (en) 2017-11-27 2020-10-07 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
EP3727463A1 (en) 2017-12-21 2020-10-28 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
CN110507824A (zh) * 2018-05-21 2019-11-29 荣昌生物制药（烟台）有限公司 一种抗间皮素抗体及其抗体药物缀合物
CN113365664A (zh) 2018-10-29 2021-09-07 梅尔莎纳医疗公司 具有含肽接头的半胱氨酸工程化的抗体-药物缀合物
US20230257479A1 (en) * 2019-09-12 2023-08-17 Genmab A/S Bispecific antibodies binding to 5t4 and cd3 for use in treatment of cancer
EP4121564A1 (en) 2020-03-20 2023-01-25 Immunomedics, Inc. Biomarkers for sacituzumab govitecan therapy
WO2023045141A1 (zh) * 2021-09-26 2023-03-30 上海迈泰君奥生物技术有限公司 一种双功能融合蛋白
WO2023107954A1 (en) * 2021-12-08 2023-06-15 Dragonfly Therapeutics, Inc. Antibodies targeting 5t4 and uses thereof
CA3250452A1 (en) * 2022-02-21 2023-08-24 Lepu Biopharma Co., Ltd. ANTI-5T4 ANTIBODIES AND THEIR USES
AR132178A1 (es) * 2023-03-22 2025-06-04 Salubris Biotherapeutics Inc Dominios de unión al antígeno anti-5t4, conjugados anticuerpo-fármaco, y métodos de uso de los mismos
AU2024292473A1 (en) 2023-07-19 2026-01-29 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with trop-2 targeting adc
CN119816522B (zh) * 2023-08-18 2025-06-24 上海美雅珂生物技术有限责任公司 5t4抗体药物偶联物及其应用
WO2025167900A1 (zh) * 2024-02-06 2025-08-14 上海齐鲁制药研究中心有限公司 澳瑞他汀类抗体药物偶联物及其制备方法和应用

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5869053A (en) 1988-03-04 1999-02-09 Cancer Research Campaign Technology, Ltd. 5T4 antigen from human trophoblasts
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US7256257B2 (en) 2001-04-30 2007-08-14 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US20090068178A1 (en) * 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
PT2489364E (pt) * 2003-11-06 2015-04-16 Seattle Genetics Inc Compostos de monometilvalina conjugados com anticorpos
RU2007108716A (ru) * 2004-09-10 2008-10-20 Вайет (Us) Гуманизированные антитела к антигену 5т4 и конъюгаты гуманизированного антитела к антигену 5т4 с калихеамицином
EP2511299A1 (en) 2005-04-19 2012-10-17 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-CD70 binding agents and uses thereof
US20090226465A1 (en) 2005-10-31 2009-09-10 Jackson David Y Macrocyclic depsipeptide antibody-drug conjugates and methods
WO2007067602A1 (en) * 2005-12-06 2007-06-14 Wyeth Interleukin-11 compositions and methods of use
US7750116B1 (en) * 2006-02-18 2010-07-06 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugate metabolites
TWI421257B (zh) * 2006-03-10 2014-01-01 Wyeth Corp 抗５ｔ４抗體及其用途
AR059900A1 (es) * 2006-03-17 2008-05-07 Genentech Inc Anticuerpos anti-tat226 e inmunoconjugados
US8044778B2 (en) * 2007-07-12 2011-10-25 Henry Schein, Inc. Injection device and case with reporting ability
JP5394246B2 (ja) * 2007-03-30 2014-01-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体及びイムノコンジュゲートとこれらの使用方法
PT2211904T (pt) * 2007-10-19 2016-11-02 Seattle Genetics Inc Agentes de ligação a cd19 e seus usos
US8521761B2 (en) * 2008-07-18 2013-08-27 Google Inc. Transliteration for query expansion
JP5788863B2 (ja) 2009-03-27 2015-10-07 ワイス・エルエルシー 腫瘍開始細胞およびその使用方法
BR112013025186A2 (pt) * 2011-04-01 2018-09-11 Wyeth Llc conjugados de anticorpo-fármaco

Also Published As

Publication number Publication date
TWI471334B (zh) 2015-02-01
KR101783529B1 (ko) 2017-09-29
AU2017272321A1 (en) 2018-01-04
RU2013142004A (ru) 2015-05-10
SG10201605401WA (en) 2016-08-30
AU2012235817B2 (en) 2016-03-10
PL2694111T3 (pl) 2017-01-31
US20120251558A1 (en) 2012-10-04
EP2694111B1 (en) 2016-08-10
US8586049B2 (en) 2013-11-19
CA2830338A1 (en) 2012-10-04
HK1221153A1 (zh) 2017-05-26
MY170719A (en) 2019-08-27
MX342860B (es) 2016-10-14
CN103517719B (zh) 2016-10-12
ES2596194T3 (es) 2017-01-05
SA112330402B1 (ar) 2015-03-18
RU2624141C2 (ru) 2017-06-30
TWI549968B (zh) 2016-09-21
SI2694111T1 (sl) 2016-10-28
KR20150018903A (ko) 2015-02-24
CA2830338C (en) 2016-11-15
PE20140573A1 (es) 2014-05-14
US20170319711A1 (en) 2017-11-09
JP2016172747A (ja) 2016-09-29
IL228404A0 (en) 2013-12-31
PH12013501942A1 (en) 2019-11-29
HK1193052A1 (zh) 2014-09-12
EP3130356A1 (en) 2017-02-15
AU2012235817A1 (en) 2013-10-10
KR101529810B1 (ko) 2015-06-26
HUE031017T2 (en) 2017-06-28
AU2016203839A1 (en) 2016-06-23
EP2694111A1 (en) 2014-02-12
TW201302795A (zh) 2013-01-16
AR085747A1 (es) 2013-10-23
BR112013025186A2 (pt) 2018-09-11
DK2694111T3 (en) 2016-10-10
TW201534624A (zh) 2015-09-16
JP2014516508A (ja) 2014-07-17
PT2694111T (pt) 2016-10-20
MX2013011353A (es) 2013-12-16
CN103517719A (zh) 2014-01-15
WO2012131527A1 (en) 2012-10-04
SG193324A1 (en) 2013-10-30
US8309094B2 (en) 2012-11-13
CO6771458A2 (es) 2013-10-15
JP5925875B2 (ja) 2016-05-25
US20130011418A1 (en) 2013-01-10
JP2018140997A (ja) 2018-09-13
JP6333882B2 (ja) 2018-05-30
CN105288644A (zh) 2016-02-03
NZ615308A (en) 2015-10-30
US20140081005A1 (en) 2014-03-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101783529B1 (ko) 항체-약물 접합체
JP7254861B2 (ja) エリブリンをベースとする抗体－薬物コンジュゲート及び使用方法
TWI583394B (zh) 抗-ｇｃｃ抗體分子及其相關之組合物及方法
CN103402538B (zh) 结合于191p4d12蛋白的抗体药物偶联物(adc)
KR20210125511A (ko) 항-cd228 항체 및 항체-약물 컨쥬게이트
HK1193052B (en) Antibody-drug conjugates
NZ615308B2 (en) Antibody-drug conjugates

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E13-X000 Pre-grant limitation requested

St.27 status event code: A-2-3-E10-E13-lim-X000

P11-X000 Amendment of application requested

St.27 status event code: A-2-2-P10-P11-nap-X000

P13-X000 Application amended

St.27 status event code: A-2-2-P10-P13-nap-X000

PA0105 International application

St.27 status event code: A-0-1-A10-A15-nap-PA0105

PA0201 Request for examination

St.27 status event code: A-1-2-D10-D11-exm-PA0201

PG1501 Laying open of application

St.27 status event code: A-1-1-Q10-Q12-nap-PG1501

E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

St.27 status event code: A-1-2-D10-D21-exm-PE0902

A107 Divisional application of patent
E13-X000 Pre-grant limitation requested

St.27 status event code: A-2-3-E10-E13-lim-X000

P11-X000 Amendment of application requested

St.27 status event code: A-2-2-P10-P11-nap-X000

P13-X000 Application amended

St.27 status event code: A-2-2-P10-P13-nap-X000

PA0104 Divisional application for international application

St.27 status event code: A-0-1-A10-A18-div-PA0104

St.27 status event code: A-0-1-A10-A16-div-PA0104

E701 Decision to grant or registration of patent right
PE0701 Decision of registration

St.27 status event code: A-1-2-D10-D22-exm-PE0701

GRNT Written decision to grant
PR0701 Registration of establishment

St.27 status event code: A-2-4-F10-F11-exm-PR0701

PR1002 Payment of registration fee

St.27 status event code: A-2-2-U10-U12-oth-PR1002

Fee payment year number: 1

PG1601 Publication of registration

St.27 status event code: A-4-4-Q10-Q13-nap-PG1601

R18-X000 Changes to party contact information recorded

St.27 status event code: A-5-5-R10-R18-oth-X000

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180329

Year of fee payment: 4

PR1001 Payment of annual fee

St.27 status event code: A-4-4-U10-U11-oth-PR1001

Fee payment year number: 4

PC1903 Unpaid annual fee

St.27 status event code: A-4-4-U10-U13-oth-PC1903

Not in force date: 20190612

Payment event data comment text: Termination Category : DEFAULT_OF_REGISTRATION_FEE

PC1903 Unpaid annual fee

St.27 status event code: N-4-6-H10-H13-oth-PC1903

Ip right cessation event data comment text: Termination Category : DEFAULT_OF_REGISTRATION_FEE

Not in force date: 20190612

R18-X000 Changes to party contact information recorded

St.27 status event code: A-5-5-R10-R18-oth-X000