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KR20130105652A - 안정하고 장기간의 인그래프트먼트를 위한 면역억제 약물의 조합 - Google Patents

안정하고 장기간의 인그래프트먼트를 위한 면역억제 약물의 조합 Download PDF

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KR20130105652A
KR20130105652A KR1020137008891A KR20137008891A KR20130105652A KR 20130105652 A KR20130105652 A KR 20130105652A KR 1020137008891 A KR1020137008891 A KR 1020137008891A KR 20137008891 A KR20137008891 A KR 20137008891A KR 20130105652 A KR20130105652 A KR 20130105652A
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KR
South Korea
Prior art keywords
cell
subject
transplantation
inhibitor
cells
Prior art date
Application number
KR1020137008891A
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English (en)
Inventor
Yair Reisner
Esther Bachar-Lustig
달리트 조르쉬-유시스
Original Assignee
예다 리서치 앤드 디벨럽먼트 캄파니 리미티드
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Publication date
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Abstract

본 발명은 세포 또는 조직 이식편이 필요한 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 (a) 비-공통유전자(syngeneic) 세포 또는 조직 이식편을 대상체로 이식하는 단계, - 여기서 상기 이식편은 골수 또는 림프 세포를 포함.-; 및 (b) 상기 대상체에 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제, B7 분자 억제제 및 CD2/CD58 경로 억제제를 포함하는 치료적으로 유효량의 면역억제 섭생(regimen)을 투여하여 이것에 의해 대상체를 치료하는 단계를 포함한다.

Description

안정하고 장기간의 인그래프트먼트를 위한 면역억제 약물의 조합{AN IMMUNOSUPPRESSIVE DRUG COMBINATION FOR A STABLE AND LONG TERM ENGRAFTMENT}
본 발명, 이들의 일부의 구현예는 면역 억제 약물의 조합에 관한 것이고, 보다 상세하게는, 그러나 배타적이지 않게 안정하고 지속가능한 세포 또는 조직 이식을 유도하기 위한 면역 억제 약물의 용도에 관한 것이다.
수년 동안, 특이적이고 지속적인 면역 내성을 얻는 것은 이식 의학의 궁극적 목적이었다. 이런 목적을 성취하기 위한 하나의 주된 접근은 흉선에 잠재적으로 편재할 수 있고, 연속적으로 도너 항원을 제공하고, 이것에 의해 항-도너 T-세포 클론의 결실을 계속 진행하도록 유도하는 조혈모 세포의 이식에 의한 것이다. 이 아이디어는 60년 이상 동안 계속되어 왔으며, 이란성 쌍생 가축에서 자궁 순환 교류(intrauterine circulation exchange)가 형성된 혈액 요소에 대한 교차-내성(corss-tolerance)을 성취하였음을 보여주었지만, 출생이 발견된 이후 주된 유전 장벽에 맞서 조혈 키메리즘을 성취하는 것은 수년 동안 어려운 도전으로 남아있다.
완전한 도너 타입의 키메리즘은 동일단배체(haploidentical) 이식편을 받은 환자에서 주된 HLA 불균형(disparity)을 넘어서 조차 성취될 수 있다. 이식편대숙주 질환(graft versus host disease)의 문제는 광범위하게 T 세포 고갈 이식편을 사용하여 방지될 수 있으며, 이식 거부의 문제는 줄기세포의 메가도즈(megadoses)와 조합된 전 치사(supralethal) 컨디셔닝을 사용하여 성공적으로 극복될 수도 있다. 그러나, 적어도 20 %의 높은 이식 관련 사망률(HLA 동일한 환자를 사용하여)은 공격적으로 혈액 종양을 앓고 있는 환자에게는 합리적일 수 있지만, 이 비율은 임박한 죽음의 위협 아래가 아닌 장기 이식을 진행하는 환자에게는 용납할 수 없는 것이다.
최근 카와이 등[Kawai T. et al., N Engl J Med. (2008) 358:353-361]은 HLA 단일-단상형(hepaltype)이 일치하지 않는 도너로부터 조합된 골수(BM) 및 신장 이식 후 몇 달에서, 모든 면역 억제 요법이 크게 이식 기능에 영향을 주지 않고 중단 될 수 있음을 인간에게서 보여 주었다. 그러나, 이런 접근의 일상적인 임상 적용은 MHC-일치하지 않는 BM의 일시적인 인그래프트먼트(engraftment)을 허용하기 위해 필요한 세포감퇴(cytoreductive) 컨디셔닝의 심각한 독성에 의해 제한된다. 또한, 이 방법은 광범위한 면역 고갈이 필요하지만, 오로지 짧고 일시적인 조혈 키메리즘이 달성된다. 그것은 그 시스템에서 내성의 메커니즘이 일시적인 주변 내성만을 유도하는 규제 T 세포를 포함한다고 여겨진다.
CD4+CD25+ T 규제 세포(Tregs)에 의해 가능한 키메리즘을 더 향상시키기 위해, 필래트(Pilat) 등은 알로반응성(alloreactive) T 세포를 포함하는 전체 마우스 BM을 공동 자극 봉쇄(co-stimulatory blockade)하에서 항-CD40L 및 CTLA4-Ig로 이식하였다. 일시적인 라파마이신(Rapamycie) 치료와 함께 숙주 Tregs의 투여는 어떠한 골수제거성(myeloablative) 프리-컨디셔닝을 요구함 없이 낮은 레벨의 키메리즘을 얻었다[Pilat N. et al., Am J Transplant. (2010) 10:1-12]. 그러나, 항-CD40L의 사용은 그의 프로-트롬보 효과(pro-thrombotic effect)에 기인하여 사람에게서 문제가 되며, 필요한 많은 수의 사용된 Trges는 환자로부터 수집하는 것이 어려울 수 있다. 게다가, BM 이식에 알로반응성 T 세포의 포함은 비-악성 조건을 포함하는 적용에서 받아들일 수 없는 이식편대숙주 질환에 대한 위험을 제공한다.
1989년, 본 발명자들은 동종이계(allogenic) 조혈모세포 이식(HSCT)의 거부가 다량의 조혈모 세포를 사용함으로써 극복될 수 있음을 세계 최초로 보여주었다[Lapidot T. et al., Blood (1989) 73:2025-2032]. 그러나, 줄기 세포 접종물의 큰 증가는 인간에게서 성취하는 것을 어렵게 하고 있다. 조혈 CD34 줄기 세포를 BM으로부터 가동화(mobilization)하고, 말초 혈액으로부터의 이들 세포를 수집하는 것을 촉진하기 위하여 G-CSF를 사용하는 것은 단일 도너로부터 얻을 수 있는 간 세포(progenitor cells)의 수를 크게 증가시킨다. 통상적인 T 세포 고갈된 골수(TDBM)을 말초적으로 수집된 가동화된 간세포로 풍부하게 하는 것은 이것이 사람에게서 줄기 세포 투여량의 단계적 확대의 개념을 테스트하게 할 수 있게 한다. 레이스너 와이.(Reisner Y.) 및 마트텔리 엠.에프.(Martelli M.F.)에 의해 수행된 파일럿 연구는 마우스들과 같이 사람에게서 세포 투여랑의 단계적 확대는 T 세포 고갈된 일치하지 않는 조혈모세포 이식의 인그래프트먼트를 촉진함을 처음으로 보여주었다[Aversa F et al. Blood (1994) 84:3948-3955; Reisner Y and Martelli Immunol Today (1995) 16:437-440]. 여러번의 변형 후, 밀테니 자성 비드(Milteny magnetic beads)에 의해 단리된 CD34+ 세포를 사용하여 최적의 프로토콜이 개발되었고, 고위험군의 백혈병 환자에게서 임상적으로 시험되었다. GVHD의 낮은 비율을 갖는 동일단배체 메가도즈 이식편의 일차 인크래프트먼트는 환자의 93% 이상에서 보여주었으며, GVHD 예방은 사용하지 않았다[Aversa F et al., supra]. 성공된 인크래프트먼트에 이어서 2번째 이식을 인그래프트하는데 실패한 환자는 거의 없다. 따라서, 메가도즈의 정제된 줄기 세포 이식을 사용함으로써, BM 이식을 위한 소스로서 매우 유용한 동일단배체 가족원을 사용하고, 관해기(remission)의 급성 백혈병 환자를 위한 줄기 세포 도너의 풀을 증가시켜 유전적 장애를 극복하는 것이 가능하게 되었다. 후속적으로, 본 발명자들은 도너 pMHC에 대해서 관여된 숙주 T 세포만 억제하는 CD34+ 세포가 호스트 T 세포에 의해 나타나는 장벽을 극복하는 메커니즘이 CD34+ 세포 분획내에서 세포에 의해 소유된 특이적 규제 활성을 포함함을 보여주었다[Rachamim et al. Transplantation (1998) 65:1386-1393]. 또한, 이 관용화(tolerizing) 활성은 후에 알로반응성 세포독성 T 세포 전구체 CTLp의 제한 희석 분석을 사용하여 TNF-α유도된 아포토시스에 의한 결실 기초된 메카니즘을 통해 영향을 받는 것으로 보여진다[Gur H et al. Blood. (2005) 105: 2585-2593]. 따라서, 도너 Ags에 대해서 관여된 숙주 T 세포를 제거하는 고유의 특이성은, 감염 병원성에 대해 추가적으로 저항하고 싸울 수 있는 다른 T 세포를 조금 쓰는 동안, 이식 내성의 유도를 위해 특이적 및 효과적 양상(modality)을 제공할 수 있다.
또한, 본 발명자들은 Sca1+Lin- 세포 분획내에 조기 조혈 간 세포가 특이적으로 생체외 및 생체내에서 항-도너 T 세포 클론의 빈도를 줄일 수 있고, 반치사적으로(sublethally) 방사선 조사된 수령 마우스들에서 혼합된 키메리즘을 유도할 수 있음을 보여주었다. 이 면역 내성은 또한 도너-유형 피부 이식편에 대한 특이적 내성과 관련되어 있다. 그러나, 일차 연구는 장기 이식을 위해 허용가능한 레벨로 컨디셔닝을 감소시키는 것은 사람 도너로부터 실제적으로 수집될 수 없는 줄기 세포 수를 요구함을 제안하였다(Gan et al., 미공개된 결과).
배아 췌장 이종-이식(xeno-transplantation)을 시도하는 이전 연구에서[Tchorsh-Yutsis D et al., Diabetes (2009) 58:1585-1594], 본 발명자들은 FTY720으로의 연속적인 면역 억제와 함께 항-LFA-1 및 항-CD48로의 일시적 처리에 의해 배아 이식을 최적으로 유지할 수 있게 하였다. 그러나, 지속적인 내성을 얻을 수 없었으며, 거부가 면역 억제의 중지에 의해 발생하였다. 마찬가지로, 인그래프트먼트는 연속적인 FTY720 처리와 함께 항-CD48 및 CTLA4-Ig로의 일시적으로 처리된 마우스들의 75%에서 얻어졌다. 그러나, 다시, FTY20의 치료의 종결은 이식 거부로 나타났다.
추가적인 배경기술은 미국공개출원번호 20090041790, 미국공개출원번호 20100183612, 미국공개출원번호 20100166756, 미국공개출원번호 20100041602, 미국공개출원번호 20100022627, 미국공개출원번호 20100041602, 미국공개출원번호 20090068203, 미국공개출원번호 20090041790, 미국공개출원번호 20090041769, 미국공개출원번호 20090022730, 미국공개출원번호 20080160022, 미국공개출원번호 20070009511, 미국공개출원번호 20050214313, 미국공개출원번호 20050123539, 미국공개출원번호 20040022787, 미국공개출원번호 20030083246, 미국공개출원번호 20030022836, 미국공개출원번호 20020182211, WO 2006/041763, WO 2005/092380, Hecht G. et al., Proc Nat Aced Sci, Nat Acad Sci US (2009) 106(21): 8659-8664 및 Tchorsh-Yutsis D. et al., Diabetes, Amer Diab Assoc US (2009) 58(7): 1585-1594를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예의 양태에 따르면, 세포 또는 조직 이식이 필요한 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 비-공통유전자(non-syngeneic) 세포 또는 조직 이식편을 대상체로 이식하는 단계, - 여기서 상기 이식편은 골수 또는 림프 세포를 포함.-; 및 (b) 상기 대상체에 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제, B7 분자 억제제 및 CD2/CD58 경로 억제제를 포함하는 치료적으로 유효량의 면역억제 섭생(regimen)을 투여하여 이것에 의해 대상체를 치료하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예의 양태에 따르면, 대상체에 비-공통유전자 세포 또는 조직 이식편의 이식 거부를 줄이기 위한 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제, B7 분자 억제제 및 CD2/CD58 경로 억제제의 용도를 제공하며, 여기서 이식편은 골수 또는 림프 세포를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 면역 억제 섭생은 단기 면역 억제 섭생을 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 방법은 단계 (a) 전에 대상체를 반 치사(sublethal), 치사(lethal), 전치사(supralethal) 조건하에서 컨디셔닝하는 단계를 더 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 컨디셔닝 단계는 비-골수제거성(non-myeloablative) 컨디셔닝을 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 컨디셔닝 단계는 T 세포 용량 축소(T cell debulking)를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 T 세포 용량 축소는 단기 T 세포 용량 축소를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 컨디셔닝은 알킬화제의 투여를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 알킬화제는 부설판(Busulphan)을 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제, B7 분자 억제제 및 CD2/CD58 경로 억제제는 단기 면역 억제 섭생의 일부로서 투여된다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 골수 세포는 T 세포 고갈 골수 세포를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 골수 세포는 조혈 전구 세포를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제는 FTY720이고, B7 분자 억제제는 CTLA4-Ig이고, CD2/CD58 경로 억제제는 가용성 CD58-Ig이다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 CD2/CD58 경로 억제제는 가용성 CD2 단백질, 가용성 CD58 단백질, 항-CD2 항체 및 항-CD58 항체로 이루어진 군에서 선택된다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 가용성 CD58 단백질은 가용성 CD58-Ig를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제, B7 분자 억제제 및 CD2/CD58 경로 억제제는 부수적으로 투여된다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 단기 면역억제 섭생은 이식 후 최대 6개월 동안 시행된다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제의 투여는 이식 후 4개월에 종결된다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, B7 분자 억제제 및 CD2/CD58 경로 억제제의 투여는 이식 후 3개월에 종결된다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, B7 분자 억제제 및 CD2/CD58 경로 억제제의 투여는 이식 후 6일까지 매 2일에 시행된다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, B7 분자 억제제 및 CD2/CD58 경로 억제제의 투여는 이식 6일부터 매주 한번씩 90일까지 시행된다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 대상체는 사람 대상체이다.
본 발명의 일부 구현예에 따르면, 비-공통유전자 세포 또는 조직 이식편은 HLA 동일 동종이계 도너, HLA-비-동일 동종이계 도너 및 이종 도너로 이루어진 군에서 선택된 도너로부터 유도된다.
다르게 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및/또는 과학적 용어는 본 발명이 속한 이 분야의 당업자에 의해 공통적으로 이해할 수 있는 바와 같은 동일한 의미를 갖는다. 비록 본 명세서에 설명된 것과 유사 또는 균등한 방법 및 물질이 본 발명의 구현예를 실시하거나 테스트하는데 사용될 수 있지만, 예시적인 방법 및/또는 물질은 이하에 설명된다. 갈등의 경우, 정의를 포함하는 특허 명세서가 통제할 것이다. 또한, 물질, 방법 및 실예는 예시적일 뿐이며, 이것으로 한정할 의도는 아니다.
본 발명에 따른 면역억제 약물의 새로운 조합, 즉 B7 분자 억제제(예를 들면, CTLA4-Ig), CD2/CD58 경로 억제제(예를 들면, 가용성 CD58-Ig) 및 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제(예를 들면, FTY720)은 동종이계 T 세포 고갈 골수 세포의 인그래프트먼트를 효과적이고 지속가능하게 하며, 또한, 이 새로운 면역억제 섭생으로 면역억제의 중지 후에서 안정한 키메리즘을 보여준다.
본 발명은 첨부도면을 참고하여 실시예만을 통해서 기술된다. 특히 상세 도면과 관련하여 본 발명의 구현예를 예시적으로 논의할 목적으로 실시예를 통해 구체적인 사항을 나타내었다. 이러한 관점에서, 상세한 설명은 본 발명의 여러 형태가 어떻게 구체적으로 실시될 수 있는지 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확한 도면을 기초로 기술하였다.
도면에서:
도 1은 비-골수제거성 컨디셔닝 및 공동 자극 봉쇄를 이용한 본 발명의 키메리즘 유도 프로토콜을 보여준다. C3H/Hen 수령 마우스들을 부설판(2x30㎎/㎏) 및 300㎎ 항-CD4 및 항-CD8를 이용한 T 세포 용량 축소로 컨디셔닝하였다.
도 2A 내지 2E는 장기간 다계열(mulitilineage) 키메리즘을 보여주는 그래프이다. 도 2A는 면역 억제 중단 후 163일 키메리즘 레벨을 보여주고, 도 2B 내지 2E는 도 2A에 보여진 키메릭 마우스의 비장에서 전형적인 다계열 키메리즘을 보여준다.
본 발명, 이들의 일부의 구현예는 면역 억제 약물의 조합에 관한 것이고, 보다 상세하게는, 그러나 배타적이지 않게, 안정하고 지속가능한 세포 또는 조직 이식을 유도하기 위한 면역 억제 약물의 용도에 관한 것이다..
본 발명의 원리 및 작동은 도면 및 첨부하는 상세한 설명을 참조하여 보다 더 이해될 수 있다.
본 발명의 적어도 하나의 구현예를 상세히 설명하기 전에, 본 발명이 다음의 상세한 설명에서 설명된 또는 실시예에 의해 예시된 상세한 것으로 이들의 적용을 반드시 한정하는 것이 아니라는 것이 이해되어야 한다. 본 발명은 다른 구현예가 가능하며, 또한 다양한 방식으로 실시 또는 수행될 수 있다. 또한, 본 명세서에 사용된 어법 및 용어는 설명하기 위한 목적이며 이것으로 한정되는 것으로 여겨져서는 안된다.
본 발명을 실제적으로 축소하면서, 본 발명자들은 면역억제 약물의 새로운 조합, 즉 B7 분자 억제제(예를 들면, CTLA4-Ig), CD2/CD58 경로 억제제(예를 들면, 가용성 CD58-Ig) 및 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제(예를 들면, FTY720)을 사용하여 동종이계 T 세포 고갈 골수 세포의 효과적이고 지속가능한 인그래프트먼트에 이를 수 있음을 밝혔다. 또한, 본 발명자들은 이 새로운 면역억제 섭생으로 면역억제의 중지 후에서 안정한 키메리즘을 보여주었다.
이하에 및 실시예 섹션에서 보여지는 바와 같이, 본 발명자들은 마우스들을 최소의 골수제거(myeloablation)로 우선 컨디셔닝하여 마우스 모델에서 안정한 키메리즘을 구축하였다(즉, 부설팔 및 항-CD4 및 항-CD-8를 이용한 T 세포 용량 축소로, 도 1 참조). 이어서, 수령 마우스들을 동종이계 T 세포 고갈 골수 세포로 이식하였다(0 일). 이식에 이어서, 마우스들을 CTLA4-Ig 및 항-CD48 항체(마우스 CD48은 사람 CD58과 동등하다)를 포함하는 단기 면역억제 섭생으로 0일, 2일, 4일, 6일, 21일 및 35일에 치료하고, 0 내지 5일에는 매일 그리고 6 내지 90일에는 일주일에 2번 FTY720로 치료하였다. 도너 타입 키메리즘을 수령 마우스에서 면역 억제의 중지 후 몇달(2-5개월) 내에 보여졌다(도 2A). 또한, 중요한 키메리즘은 골수 및 림프 리니지(lineages) 모두에서 얻어졌다(도 2B-2E). 함께 취합된 모든 발견 모든 발견은 안정하고 장기간 인그래프트를 위한 B7 분자 억제제(예를 들면, CTLA4-Ig), CD2/CD58 경로 억제제(예를 들면, 가용성 CD58-Ig) 및 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제(예를 들면, FTY720)의 조합된 사용을 입증한다.
따라서, 하나의 구현예에 따르면, 세포 또는 조직 이식편이 필요한 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 비-공통유전자(syngeneic) 세포 또는 조직 이식편을 대상체로 이식하는 단계, - 여기서 상기 이식편은 골수 또는 림프 세포를 포함.-; 및 (b) 상기 대상물에 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제, B7 분자 억제제 및 CD2/CD58 경로 억제제를 포함하는 치료적으로 유효량의 면역억제 섭생(regimen)을 투여하여 이것에 의해 대상체를 치료하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 사용된 용어 "치료(treating)"은 증상(condition)의 진전을 제거, 실질적으로 억제, 둔화 또는 전환을 포함하고, 증상의 임상적 또는 심미적(aesthetical) 증후(symptoms)을 실질적으로 개선 또는 증상의 임상적 또는 심미적 증후의 출현을 실질적으로 방지하는 것을 포함한다.
본 명세서에 사용된 용어 "대상체" 또는 "필요로 하는 대상체"는 세포 또는 조직 이식이 요구되는 모든 나이의 암수 모두의 포유류, 바람직하게는 사람을 말한다. 전형적으로 대상체(또한 본 명세서에서는 수령인으로 언급)는 세포 또는 조직 이식을 통해 치료될 수 있는 장애 또는 병리학적 또는 바라지 않는 증상, 상태 또는 증후 또는 물리적, 형태학적 또는 생리학적 이상(abnormality)에 기인하여 세포 또는 조직 이식이 필요한 것이다. 이런 장애의 실예는 이하에서 제공된다.
본 명세서에서 사용되는 "세포 또는 조직 이식편"은 신체의 세포(예를 들면, 단일 세포 또는 세포 그룹) 또는 조직(예를 들면, 고형 조직 또는 연화 조직, 이것은 완전히 또는 부분적으로 이식될 수 있다)을 말한다. 본 기술에 따른 이식될 수 있는 예시적인 조직은 이것으로 제한되는 것은 아니지만, 간, 췌장, 비장, 신장, 심장, 폐, 피부, 장, 림프/조혈 조직(예를 들면, 림프 노드, 페이스의 패치 흉선 또는 골수(Peyer's paches thymus or bone marrow))을 포함한다. 본 기술에 따라 이식될 수 있는 예시적인 세포는 이것으로 제한되는 것은 아니지만 조혈모 세포(예를 들면, 미성숙 조혈 세포)를 포함한다. 또한, 본 발명은 전체 장기, 예를 들면 신장, 심장, 폐, 간 또는 피부의 이식을 고려한다.
적용에 따라, 상기 방법은 대상체와 비-공통유전자(예를 들면, 동종이계 또는 이종)인 세포 및 조직의 사용에 영향을 받을 수 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "동종이계(allogeneic)"은 대상체와 동일한 종이지만, 실질적으로 대상체와 비-클론인 도너로부터 유도된 세포 또는 조직을 말한다. 전형적으로, 동일한 종의 이계 교배된 비-접합성 쌍생 포유류가 서로 이질유전자이다. 동종이계 도너는 대상체에 대해서 HLA 동일 또는 HLA 비-동일일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "이종(xenogeneic)"은 대상체의 림프구의 실질적 비율의 종과 관련된 다른 종의 항원을 실질적으로 발현하는 세포 또는 조직을 말한다. 전형적으로 다른 종의 이계 교배된 포유류는 서로 이종이다.
본 발명은 이종 세포 또는 조직은 이것으로 제한되는 것은 아니지만, 소과 동물(예를 들어, 암소), 말과 동물 (예를 들어, 말), 돼지과 동물 (예를 들어 : 돼지), 오비디스(ovids)(예를 들어, 염소, 양), 고양이과 동물 (예를 들어 : 펠리스 도메스티카(Felis domestica)), 개과 동물 (예를 들면, 캐니스 도메스티카(Canis domestica)), 설치과 동물 (예, 마우스, 래트, 토끼, 기니피그, 게르빌루스쥐, 햄스터) 또는 영장류 (예 : 침팬지, 붉은 털 원숭이 원숭이, 짧은 꼬리 원숭이, 비단 원숭이)와 같은 다양한 종으로부터 유도된 것을 포함한다.
이종 기원(예를 들면, 돼지 기원)의 세포 또는 조직은 동물원성 감염증이 없는 것으로 알려진 소스, 예를 들면, 돼지 내생 레트로바이러스로부터 얻는 것이 바람직하다. 유사하게, 사람 유도된 세포 또는 조직은 실질적으로 병원성 없는 소스로부터 얻는 것이 바람직하다.
본 발명의 구현예에 따르면, 대상체 및 도너 모두 사람이다.
적용 및 유용한 소스에 따라서, 본 발명의 세포 또는 조직은 태아 생물, 출생 후의 생물, 성인이나 시신 기증자로부터 얻을 수 있다. 또한, 요구된 적용에 따라서, 세포 또는 조직은 천연 또는 유전자 변형된 것일 수 있다. 이런 것은 본 발명이 속한 기술 분야의 당업자의 지식 능력 내에서 잘 결정될 수 있다.
이 분야에서 공지된 모든 방법이 세포 또는 조직을 얻기 위해 사용될 수 있다(예를 들면, 이식을 위해).
세포 또는 조직 이식편을 대상체로 이식하는 것은 많은 방식으로, 다양한 변수에 의존하여, 예를 들면, 세포 또는 조직 타입; 수령인의 질환의 타입, 단계 또는 심함(예를 들면, 장기 장해); 대상체에 특이적인 의학적 또는 생리학적 변수; 및/또는 요구된 치료적 결과에 영향을 받는다.
본 발명의 세포 또는 조직 이식편을 이식하는 것은 적용에 따라서 다양한 해부 위치(anatomical locations)의 임의의 하나로 세포 또는 조직 이식편을 이식하는 것에 의해 영향을 받는다. 세포 또는 조직 이식편은 호모토픽(homotopic) 해부 위치(이식을 위한 정상 해부 위치), 또는 엑토픽(ectopic) 해부 위치(이식을 위한 비정상 해부 위치)로 이식될 수도 있다. 적용에 따라서, 세포 또는 조직 이식편은 신피막(renal capsule) 하에서 주입되거나, 신장, 고환 지방, 피하조직, 장막(omentum), 간문맥, 간, 비장, 심장 캐비티, 심장, 가슴 캐비티, 폐, 피부, 췌장 및/또는 복강내 공간으로 주입되는 것이 이롭다.
예를 들면, 본 기술에 따른 간 조직은 간, 간문맥, 신피막, 피하조직, 장막, 비장 및 복강내 공간으로 이식될 수 있다. 상기와 같은 다양한 해부 위치로의 간의 이식은 간 이식을 통해 치료될 수 있는 질병(예를 들면, 간부전)을 치료하기 위해 이 분야에서 일반적으로 실시된다. 유사하게, 본 발명에 따른 췌장 조직을 이식하는 것은 상기 조직을 간문맥, 간, 췌장, 고환 지방, 피하조직, 장막, 장 루프(소장의 U 루프의 장막밑조직) 및/또는 복강내 공간으로 이식하는 것에 의해 이롭게 영향을 받는다. 췌장 조직의 이식은 췌장 이식을 통해 치료가 가능한 질환(예를 들면, 당뇨병)을 치료하는 데 사용될 수 있다. 마찬가지로, 비장, 심장, 폐 또는 피부 조직과 같은 조직의 이식은 상기 설명된 해부 위치로 예를 들어 신부전, 심부전, 폐부전 또는 피부 손상(예를 들면, 화상)으로 고통받는 수령인을 치료하기 위한 목적으로 수행될 수 있다.
본 발명의 방법은 또한 조혈모 세포 이식을 요구하는 질병(예를 들면, 미성숙 조혈 세포)으로부터 고통받는 수령인을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 이런 질병으로는 이것으로 제한되는 것은 아니지만, 급성 림프구성(lymphoblastic) 백혈병(ALL), 만성 림프 백혈병(CLL)/작은 림프 림프종, 급성 비 림프구성 백혈병(ANLL), 급성 골수성(myelocytic) 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 모발성 세포 백혈병, T-세포 전림프구성 백혈병, B 세포 전림프구성 백혈병 및 청소년 골수단구성(myelomonocytic) 백혈병과 같은 백혈병; 호치킨 림프종, 버킷(Burkitt)의 림프종, 미만성(diffuse) 대형 B 세포 림프종 (DLBCL), 전구체 T-세포 백혈병/림프종, 여포성 림프종, 맨틀 세포 림프종, MALT 림프종, B-세포 만성 림프 백혈병/림프종 및 균상식육종(Mycosis fungoides)과 같은 림프종; 아데노신 데아미나제(ADA), 골화석증(osteopetrosis), 재생불량성 빈혈(aplastic anemia), 고셰병(Gaucher's disease), 지중해빈혈(thalassemia) 및 기타 선천적 또는 유전적-결정된 조혈 이상을 포함하는 심각한 조합된 면역결핍 증상(SCID)를 포함한다.
예를 들면 골수, 고정된 말초 혈액(예를 들면 백혈구분반술), 태아 간, 난황주머니 및/또는 도너의 코드 혈액으로부터 유도될 수 있고, 전형적으로 T-세포 고갈된 CD34+ 미성숙 조혈 세포인 미성숙 이질유전자 또는 이종 조혈세포(줄기세포 포함)은 질병으로 고통받는 수령인에게 이식될 수 있다.
본 발명의 특정 구현예에 따르면, 이식편은 골수 또는 림프 세포를 포함한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 세포 이식편은 T 세포 고갈된 골수 세포를 포함한다. 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 세포 이식편은 조혈 전구 세포를 포함한다.
따라서, 대상체는 kg당 약 10 x 106 내지 약 10 x 109 세포의 세포 투여량으로 투여될 수 있다.
본 발명의 미성숙 동종이계 또는 이종 조혈 세포는 세포 이식편에 대해 이 분야에 알려진 방법, 예를 들면 이것으로 제한되는 것은 아니지만, 세포 주입(예를 들면, I.V.), 복강 경로 또는 뼈 경로를 사용하여 수령인에게 이식될 수 있다.
선택적으로, 본 발명의 세포 또는 조직 이식을 결함있는 장기를 갖는 대상체에 이식하는 경우, 이식편의 최적의 전개가 가능하게 하기 위해 대상체로부터 실패한 장기, 및 이것의 구조적/기능적 인티그레이션(integration)을 대상체의 해부/생리학으로 우선 적어도 부분적으로 제거하는 것이 이로울 수 있다.
본 발명의 방법은 또한 여러 개의 장기의 공동-이식(예를 들면, 심장 및 골수, 예를 들면, 조혈모세포, 신장 및 골수, 예를 들면 조혈모세포 등)을 대상체가 이런 절차에 의해 이롭게 영향을 받는 경우 또한 고려한다.
본 기술에 따른 대상체로 세포 또는 조직 이식의 이식에 이어서, 표준 의학 실무에 따라서, 다양한 표준 기술의 임의의 하나에 따라 장기의 성장 기능성(growth functionality) 및 면역-적합성(immuno-compatability)을 모니터하는 것이 바람직하다. 예를 들면, 췌장 조직 이식의 기능성은 표준 췌장 기능 테스트(예를 들면, 인슐린의 혈청 레벨 분석)에 의해 다음의 이식에서 모니터될 수 있다. 마찬가지로 간 조직 이식은 표준 간 기능 테스트(예를 들면, 알부민의 혈장 레벨, 전체 단백질, ALT, AST 및 빌리루빈의 분석, 및 혈액 응고 시간 분석)에 의해 다음의 이식에서 모니터될 수 있다. 세포 또는 조직의 구조적 발달은 컴퓨터화된 단층촬영 또는 초음파 이미지를 통해 모니터될 수 있다.
이식편 타입에 상관없이, 이식 거부를 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 까지 감소시키기 위해 또는 바람직하게 이식 거부를 피하기 위해, 본 발명은 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제, B7 분자 억제제 및 CD2/CD58 경로 억제제를 포함하는 면역억제 섭생의 투여를 고려한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "스핑고신 1-인산염 수용체 작용제"는 스핑고신 1-인산염 수용체를 통해 시그널링을 활성화하는 분자를 말한다. 전형적으로, 이 분자는 스핑고신 1-인산염 수용체의 초작용제(예를 들면, 흉선세포(thymocytes) 및 림프구 (lymphocytes))로서 작용하고, 수용체의 일탈 내재화 및 림프 노드에서 림프구의 서열화를 유도한다. 따라서, 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제의 활성화 결정은 예를 들면 말초 림프구 총수(peripheral lymphocyte counts)(즉, 이것의 감소)에 의해 수행될 수 있다. 특정 구현예에서, 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제는 Fingolimod 또는 FTY720의 이름을 갖는 합성 화합물 2-아미노-2-[2-(4-옥틸페닐)에틸]프로판-1,3-디올 히드로클로라이드이다. 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제는 예를 들면 노바티스(Gilenia®)로부터 시판된다. FTY720 유사물의 실예는 이것으로 제한되는 것은 아니지만, FTY720의 (S)-포스포네이트 유사물이다.
본 명세서에서 사용된 용어 "B7 분자 억제제"는 B7 분자(예를 들면, B7.1(CD80) 및 B7.2(CD86))와 특이적으로 결합하고 활성화를 억제하는 분자를 말한다. 특정 구현예에서, B7 분자 억제제는 혈청 안정성을 부여하는 면역글로불린 도메인을 갖는 가용성 CTLA4 단백질, 예를 들면, CTLA4 융합 단백질이다(예를 들면, CTLA4-Ig).
본 명세서에서 사용된 용어 "CTLA4-Ig"는 면역억제활성을 갖는 사람 융합 단백질을 말한다. 이것은 사람 세포독성 T-림프구-관련된 항원 4 및 사람 IgG1의 결합 도멘인으로 구성된다. CTLA4-Ig는 항원 존재 세포상의 CD80 및 CD86에 결합하는 것으로 일하며, 이것에 의해 T-세포에서 CD28의 결합, 완전한 T-세포 활성화를 위해 요구된 공동-자극 신호를 봉쇄한다. 이 공동-자극 봉쇄는 T-세포 활성화, 증식, 및 후속의 사이토카인 생성을 방지한다. 이 T-세포 규제 단백질은 류마티스성 관절염과 같은 자가면역 질환을 치료하는데 유용하며, 장기 이식 거부를 방지하는 것을 돕는다. CTLA4-Ig는 예를 들면 Bristol-Myers Squibb로부터 Abatacept(Orencia로 표기) 및 Belatacept로 시판되고 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "CD2/CD58 경로 억제제"는 공동-자극 CD58/CD2 상호작용을 특이적으로 결합하고 봉쇄하는 분자를 말한다. CD2/CD58 경로 억제제는 가용성 CD2 단백질, 가용성 CD58 단백질[즉, 가용성 백혈구 기능 항원-3(LFA-3) 단백질], 항-CD2 항체 또는 항-CD58 항체(즉, 항-LFA-3 항체)를 포함한다. 따라서, 예를 들어, 가용성 CD58 단백질은 혈청 안정성을 부여하는 사람 IgG1의 면역글로불린 도메인(힌지, CH2 및 CH3 도메인) 부위와 융합된 CD58/LFA-3의 세포외 CD2-결합 단백질을 포함하는 CD58 융합 단백질을 포함한다(예를 들면, 가용성 CD58-Ig). 이런 가용성 CD58-Ig 융합 단백질은 이것으로 제한되지 않지만, Alefacept(브랜드명 Amevive)를 포함한다. 본 발명의 또 다른 특이적 구현예에 따르면, CD2/CD58 경로 억제제는 모노클로날 항-CD58/LFA-3 항체[예를 들면 Milipore(CHEMICON/Upstate/Linco)로부터 시판, 예를 들면, clone bric 5] 또는 항-CD2 항체(Abcam으로부터 시판, 예를 들면, Clone MEM-65) 와 같은 항체를 포함한다.
항체 및 Ig 융합 단백질 생성 방법은 이 분야에 잘 알려져 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "항체(antibody)"는 온전한 분자 뿐만 아니라 이것의 기능적 프래그먼트를 포함하며, 예를 들면, 마크로파지에 결합할 수 있는 Fab, F(ab')2 및 Fv를 포함한다. 이들 기능성 항체 프래그먼트는 다음과 같이 정의된다: (1) Fab, 항체 분자의 일가 항원-결합 프래그먼트를 포함하고, 온전한 경쇄 및 및 일부 중쇄를 얻기 위해 효소 파파인으로 전체 항체의 소화에 의해 생성될 수 있는 프래그먼트; (2) Fab', 온전한 경쇄 및 일부 중쇄를 얻기 위해 전체 항체를 펩신으로 처리하고, 이어서 환원하는 것으로 얻을 수 있는 항체 분자의 프래그먼트; (3) (Fab')2, 후속적인 환원없이 전체 항체를 효소 펩신으로 처리하여 얻을 수 있는 항체의 프래그먼트; F(ab')2는 2개의 이황화 결합에 의해 함께 고정된 2개의 Fab' 프래그먼트의 이합체; (4) Fv, 2개의 사슬로 표현된 바와 같이 가변영역의 경쇄 및 가변영역의 중쇄를 함유하는 유전공학적인 프래그먼트로 정의됨; 및 (5) 단일 사슬 항체("SCA"), 유전적으로 융합된 단일 사슬 분자로서 적합한 폴리펩티드 링커에 의해 연결된 가변영역의 경쇄 및 가변영역의 중쇄를 함유하는 유전공학적 분자.
폴리클로날 및 모노클로날 항체 뿐만 아니라 이들의 프래그먼트를 생성하는 방법은 이 분야에서 잘 알려져 있다(예를 들면, Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1988 참조, 이것은 참조로서 본 명세서 포함). 사람화 항체의 방법은 설치류 CDR 또는 CDR 서열을 대응하는 사람 항체 서열로 치환하는 것으로 문헌 [Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)]으로부터 구할 수 있다. 따라서, 이런 사람화 항체는 키메릭 항체이며, 다음의 특허 문헌(U.S. Pat. No. 4,816,567, U.S. Pat. Nos. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016), 및 다음의 과학 논문[Marks et al., Bio/Technology 10,: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368 812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14, 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14: 826 (1996); and Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13, 65-93 (1995)]을 참조한다.
본 발명의 면역억제 섭생은 대상체에 세포 또는 조직 이식편의 이식 전에, 부수적으로 또는 이후에 투여될 수 있다.
따라서, 실시예 섹션에서 교시하고 있는 바와 같이, B7 분자 억제제 (예 : CTLA4-Ig) 및/또는 CD2/CD58 경로 억제제 (예 : 가용성 CD58-Ig)은 대상체에 이식일(즉, 0일)로부터 시작하여 6일까지 지속적으로 매 2일에 투여될 수 있다. 그런 다음, B7 분자 억제제 (예 : CTLA4-Ig) 및/또는 CD2/CD58 경로 억제제는 이식 6일부터 35일까지 2주마다 투여될 수 있다. 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제(예 : FTY720)은 이식 0일부터 5일까지는 매일 대상체에게 투여하고, 이식 6일부터 90일까지는 일주일에 2번 투여될 수 있다.
본 발명의 특이적 구현예에 따르면, 면역억제 섭생은 대상체에 단기간 동안 투여된다.
본 발명에서 사용된 구 "단기간"은 지속적인 치료가 아닌 일시적 치료를 말한다. 본 발명의 구현예에 따르면, 면역억제 섭생은 대상체에 이식 후 일년 미만, 10개월 미만, 8개월 미만, 6개월 미만, 5개월 미만, 4개월 미만 또는 3개월 미만 동안 투여된다.
치료는 매일 치료, 이어서 일주일에 2번, 일주일에 한번, 2주에 한번, 한달에 한번 등으로 개시된다. 대상체는 상기 설명된 바와 같이 이식 거부에 대해 모니터도니다.
본 발명의 특정 구현예에 따르면, B7 분자 억제제 (예 : CTLA4-Ig) 및/또는 CD2/CD58 경로 억제제의 투여는 이식 후 20일, 25일, 30일, 35일, 40일, 45일, 50일, 55 일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 100일, 110일, 120일, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월 10개월, 11개월, 12개월, 18개월 또는 24개월에 종결될 수 있다. 마찬가지로, 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제(예 : FTY720)의 투여는 이식 후, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90 일, 95일, 100일, 105일, 110일, 115일, 120일, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 18개월 또는 24개월에 종결될 수 있다.
B7 분자 억제제(예 : CTLA4-Ig), CD2/CD48 경로 억제제 및 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제(예를 들면, FTY720)은 치료 과정 내내 대상체에 부수적으로 또는 서로서로 연속적으로 투여될 수 있다.
이론에 결부됨 없이, 치료적 유효량은 대상체에서 이식 거부를 감소시키는데 효과적인 면역억제 섭생의 양이다. 본 발명의 면역억제 섭생은 대상체에 단기간 동안 투여될 수 있기 때문에, 보다 높은 사용량의 B7 분자 억제제(예 : CTLA4-Ig), CD2/CD58 경로 억제제 및 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제(예 : FTY720)는 섭생의 이로운 효과(이식 거부 감소)를 성취하기 위해 요구되어질 수 있다.
본 발명의 방법에 사용된 임의의 제법을 위해, 치료적 유효량 또는 투여량은 시험관내 및 세포 배양 어세이로부터 평가될 수 있다. 예를 들면, 투여량은 요구된 농도 또는 역가를 성취하기 위해 동물 모델에서 시험될 수 있다. 이런 정보는 사람에게 보다 정확하게 유용한 투여량을 결정하는데 사용될 수 있다.
예를 들면, T 세포 고갈 골수 이식의 경우, 이식 전 일주일로부터 시작하여 이식 후 약 5주 동안 대상체에 투여된 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제(예 : FTY720)는 약 0.5mg/kg 내지 약 1.5mg/kg, 약 0.75mg/kg 내지 약 1.25mg/kg 또는 1mg/kg의 범위이어야 한다. 이식 후 5주부터 이식 후 약 120일까지 대상체에 투여된 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제(예 : FTY720)의 투여량은 약 0.1mg/kg 내지 약 1.0mg/kg, 약 0.2mg/kg 내지 약 0.6mg/kg 또는 약 0.3mg/kg의 범위이어야 한다. 특정 구현예에 따르면, 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제(예 : FTY720)의 투여량은 매일 투여된다.
예를 들면, T 세포 고갈된 골수 이식의 경우, 대상체에 투여된 B7 분자 억제제(예 : Belatacept와 같은 CTLA4-Ig)는 약 0.5mg/kg 내지 약 50mg/kg, 약 1.0mg/kg 내지 약 40mg/kg, 약 2.0mg/kg 내지 약 30mg/kg 또는 약 20mg/kg의 범위내이어야 한다. 특정 구현예에 따르면, CTLA4-Ig(예를 들면, Belatacept)는 이식의 0일, 4일 및 7일에 투여되고, 이어서 일주일에 한번 이식후 60일까지 투여된다.
예를 들어, T 세포 고갈 골수 이식의 경우, 대상체에 투여된 CD2/CD58 경로 억제제(예 : Alefacept)의 투여량은 약 0.1mg/kg 내지 약 1.0mg/kg, 약 0.2mg/kg 내지 약 0.6mg/kg 또는 약 0.6mg/kg의 범위이어야 한다. 특정 구현예에 따르면, LFA-3/CD58 억제제(예 : Alefacept)는 근육내(I.M.)으로 이식의 0일, 4일 및 7일에 투여되고, 이어서 일주일에 한 번 씩 이식 후 60일까지 투여된다.
본 명세서에 설명된 면역 억제 섭생의 투여 횟수, 투여 기간 및 치료적 유효량은 이식의 유형 및 대상체의 섭생에 대한 반응을 고려하여 필요에 따라 조절될 수 있다. 투여 횟수, 투여 기간 및 치료적 유효량의 결정은 이 분야의 기술자의 역량내이며, 특히 본 명세서에 제공된 상세한 설명을 고려한다.
세포 또는 조직 이식편의 인그래프트먼트를 촉진하기 위해, 상기 방법은 세포 또는 조직 이식편의 이식 전, 부수적으로 또는 이후에 대상체를 추가적인 면역억제 약물 및/또는 면역억제 방사서 조사로 컨디셔닝하는 단계를 더 포함하는 것이 바람직할 수 있다.
따라서, 본 발명의 구현에에 따르면, 대상체는 세포 또는 조직 이식편의 이식 전에 반 치사(sublethal), 치사(lethal) 또는 전 치사(supralethal) 조건하에서 컨디셔닝된다.
따라서, 예를 들면, 대상체는 골수제거성 또는 비-골수제거성 컨디셔닝으로 처리될 수 있다. 이런 컨디셔닝은 예를 들면, 및 실시예 섹션에서 상세히 설명된 바와 같이, 예를 들어 항-CD4 항체 및 항-CD8 항체에 의해 또는 항-흉선세포 글로불린(ATG)으로의 T 세포 용량 축소(예를 들면, 이식 6일전) 및 부설판(Busulfan), 미엘란(Myleran) 또는 부설펙스(Busullfex)과 같은 알킬화제로의 처리(예를 들면, 이식 3 및 2일 전, 예를 들면, kg 당 약 8mg의 투여량)를 포함할 수도 있다. 본 발명의 특정 구현예에 따르면, T 세포 용량 축소는 단기간 동안 효과적이다.
이식을 위한 적합한 면역억제 제제를 선택 및 투여하기 위한 앰플 가이던스는 종래 문헌에 제시되어 있다(예를 들면, Kirkpatrick CH. 및 Rowlands DT Jr., 1992. JAMA. 268, 2952; Higgins RM. et al., 1996. Lancet 348, 1208; Suthanthiran M. 및 Strom TB., 1996. New Engl. J. Med. 331, 365; Midthun DE. et al., 1997. Mayo Clin Proc. 72, 175; Morrison VA. et al., 1994. Am J Med. 97, 14; Hanto DW., 1995. Annu Rev Med. 46, 381; Senderowicz AM. et al., 1997. Ann Intern Med. 126, 882; Vincenti F. et al., 1998. New Engl. J. Med. 338, 161; Dantal J. et al. 1998. Lancet 351, 623 참조).
본 기술의 면역억제 섭생의 적합한 투여 경로는 예를 들면, 경구, 직장, 점막, 특히 경비(transnasal), 장 또는 경구 전달(척추강내, 직접 심실내, 심장내 뿐만 아니라 근육, 피하 및 연수를 포함), 관상 동맥, 정맥, 복강내, 비강, 또는 안구내 주사를 포함할 수 있다.
본 발명의 면역억제 제제는 면역억제 제제를 포장하는 적어도 하나의 포장 물질을 포함하는 제품에 포장될 수 있다. 특정 구현예에서 상기 포장에는 모두 세개의 제제, 즉 B7 분자 억제제(예 : CTLA4-Ig), CD2/CD58 경로 억제제 및 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제(예 : FTY720)을 포함한다. 또 다른 특정 구현예에서 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제(예 : FTY720)이 별개의 포장으로 포장되면서, B7 분자 억제제(예 : CTLA4-Ig) 및 CD2/CD58 경로 억제제는 함께 제형화된다. 또 다른 특정 구현예에서, 각각의 면역억제 제제, 즉 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제(예 : FTY720), B7 분자 억제제(예 : CTLA4-Ig) 및 CD2/CD58 경로 억제제가 별개의 포장으로 포장되는 것이다. 제품은 세포 또는 조직 이식편을 진행하고 있는 대상체의 치료에 사용하기 위한 지시서(상기 제공된 가이드라인과 일치함)를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "약"은 ±10%을 말한다.
상기 용어 "포함하다(comprises)", "포함하는(comprising)", "포함하다(inculdes)", "포함하는(including)", "갖는(having)" 및 이들의 활용어는 "포함하지만 제한되는 것은 아니다"의 의미이다.
용어 "~로 이루어진(consisting of)"은 "포함하고 제한되는 것이다"의 의미이다.
용어 "~필수적으로 이루어진(consisting essentially of)"는 조성물, 방법 또는 구조가 추가적인 성분, 단계 및/또는 파트를 포함할 수 있지만, 추가적인 성분, 단계, 및/또는 파트가 청구된 조성물, 방법 또는 구조체의 기본적이고 신규한 특성을 실질적으로 변경하는 것은 아님을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 단수 형태 "a", "an", 및 "the"는 문맥에서 다르게 특정적으로 지시하지 않는 이상 복수형을 포함한다. 예를 들어, "화합물(a compound)" 또는 "적어도 하나의 화합물(at least one compound)"는 혼합물을 포함하여 복수의 화합물을 포함할 수 있다.
본 명세서 전반에 걸쳐, 본 발명의 다양한 구현예는 범위 방식(range format)으로 나타낼 수 있다. 범위 방식의 설명은 단지 편의 및 간결성을 위한 것이며, 본 발명의 범위를 융통성없이 한정하는 것으로 구속되어서는 안되는 것이 이해되어야 한다. 따라서, 범위의 설명은 모든 가능한 부분범위(subrange) 뿐만 아니라 그 범위 내의 개개의 숫자를 개시한 것으로 여겨져야 한다. 예를 들면, 1 내지 6과 같은 범위의 설명은 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 2 내지 4, 2 내지 6, 3 내지 6과 같은 부분 범위 뿐만 아니라 범위 내의 개별 숫자, 예를 들면 1, 2, 3, 4, 5 및 6을 구체적으로 개시한 것으로 여겨져야 한다. 이것은 범위의 폭에 상관없이 적용한다.
숫자 범위를 본 명세서에 나타낸 어떤 경우에도, 지적된 범위내의 모든 인용된 수(분수 또는 정수)를 포함하는 것으로 이해된다. 제 1 수 및 제 2 수 "의 범위/사이의 범위(ranging/ranges between)" 및 제 1 수 "내지" 제 2 수 "범위/의 범위(ragning/ragnes from)"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되며, 지칭된 제 1 수 및 제 2 수, 및 이들 사이의 모든 분수 및 정수를 포함하는 것으로 이해된다.
본 명세서에서 사용된 용어 "방법"은 주어진 업무를 성취하기 위한 방식(manner), 수단(means), 기술(techniques) 및 절차(procedures)를 말하며, 이것으로 제한되는 것은 아니지만, 화학, 약학, 생물학, 생화학 및 의학 분야의 전문가들에 의해 공지된 방식, 수단, 기술 및 절차 또는 이들로부터 용이하게 발전된 방식, 수단, 기술 및 절차를 포함한다.
보다 명확히 하기 위하여, 별개의 구현예로 설명된 본 발명의 특정의 특징은 단일 구현예에서 조합되어 제공될 수도 있다. 결과적으로, 간결함을 위해 단일 구현예로 설명된 본 발명의 다양한 특징은 별개로 또는 임의의 적합한 부분 조합으로 또는 본 발명의 임의의 다른 구현예에서 적합하게 제공될 수도 있다. 다양한 구현예에서 설명된 특정 특징은 구현예가 다른 요소없이 이용될 수 없지 않는 이상 이들 구현예의 필수적인 특징으로 여겨져서는 안된다.
또한 상기 설명되고 이하 청구 범위에서 청구하는 본 발명의 다양한 구현예 및 양태는 하기 실시예를 통해 실험적으로 입증될 것이다.
실시예
상기한 설명과 함께 다음의 실시예를 참고하여 본 발명을 비한정적으로 설명한다.
일반적으로, 본 발명에 사용되는 명칭 및 본 발명에 사용되는 실험실 방법은 분자, 생화학, 분자생물학 및 재조합 DNA 기술을 포함한다. 상기 기술은 전체적으로 문헌에 설명되어 있다. 문헌["Molecular Cloning: A laboratory Manual" Sambrook et al., (1989); "Current Protocols in Molecular Biology "Volumes I-III Ausubel, R.M., ed. (1994); Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley and Sons,Baltimore, Maryland (1989); Perbal, "A Practical Guide to Molecular Cloning", John Wiley & Sons, New York (1988); Watson et al., "Recombination DNA", Scientific American Books, New York; Birren et al.(eds) "Genome Analysis: A Laboratory Manual Series", Vols. 1-4, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1998); 미국 특허 제 4,666,828; 4,683,202; 4,801,531; 5,192,659 및 5,272,057 호에 설명된 방법들; "Cell Biology: A Laboratory Handbook", Volumes I-III Cellis, J. E., ed. (1994); "Current Protocols in Immunology" Volumes I-III Coligan J. E., ed. (1994); Stites et al.(eds), "Basic and Clinical Immunology" (8th Edition), Appleton & Lange, Norwalk, CT (1994); Mishell and Shiigi (eds), "Selected Methods in Cellular Immunology", W. H. Freeman and Co., New York (1980)]을 참조하기 바라며 이용가능한 면역에세이는 전체적으로 특허 및 과학 문헌에 기술되어 있다[참조예, 미국특허 제3,791,932; 3,839,153; 3,850,752; 3,850,578; 3,853,987; 3,867,517; 3,879,262; 3,901,654; 3,935,074; 3,984,533; 3,996,345; 4,034,074; 4,098,876; 4,879,219; 5,011,771 및 5,281,521호; "Oligonucleotide Synthesis" Gait, M. J., ed. (1984); "Nucleic aicd Hybridization" Hames, B. D., and Higgins S. J., eds. (1985); "Transcription and Translation" Hames, B. D., and Higgins S. J., Eds. (1984); "Animal Cell Culture" Freshney, R.I.,ed. (1986); "Immobilized Cells and Enzymes" IRL Press, (1986); "A Practical Guide to Molecular Cloning" Perbal, B., (1984) and "Methods in Enzymology" Vol. 1-317, Academic Press; "PCR Protocols: A Guide To Methods And Applications", Academic Press, San Diego, CA (1990); Marshak et al., "Strategies for Protein Purification and Characterization - A Laboratory Course Manual" CSHL Press (1996)](상기한 문헌은 모두 본 명세서에서 전체적으로 참조 문헌으로서 인용된다). 이 문서 전체를 통해 다른 일반 문헌이 제공된다. 그 안의 방법은 본 분야에 잘 공지되어 있고 독자의 용이를 위해 제공된다. 거기에 포함된 모든 정보는 본 명세서에서 참고적으로 인용된다.
일반적인 물질 및 실험 절차
동물 : 6 내지 12주령 암컷 마우스들로 다음의 균주 : C57BL/6 (B6, 수령, H-2b, Ly-5.2), B6.SJL-Ptprca Pep3b/BoyJ　(유사유전자형(congenic) 균주, 도너, H-2b, Ly-5.1) Balb/c (도너, H-2d) 및 C3H/Hen (수령, H-2k) 마우스들 (예루살렘, 에인 케렘 브리딩 농장(Ein Kerem Breeding farm), 할랜 래보래토리 엘티디(Harlan Laboratories Ltd)에서 모두 구매)가 사용되었다. 모든 마우스들은 특이적 병원성 없는 조건하에서 사육하고, 웨이쯔만 인슈티튜드 오브 사이언스(Weizmann Institute of Science)의 동물실험윤리심의위원회(Institutional Animal Care and Use Committee)에 의해 승인된 조건하에서 유지되었다.
부설판( Busulphan )으로 최소 골수제거성의 결정 : C57BL/6(Ly-5.2) 수령 마우스들의 다른 그룹을 IV 부설펙스(오츠카 아메리카 파마슈티컬, 인크)의 다음의 최종 투여량으로 컨디셔닝하였다: 10, 20, 40, 50, 60, 80 및 100 mg/kg/마우스. IV 부설펙스의 최종 투여량을 2개로 나누고 2일 및 1일에 투여하였다(IP). 0일에 B6.SJL-Ptprca Pep3b/BoyJ (Ly - 5.1) 도너로부터 단리된 25x106 T-고갈 골수 세포를 이식하고(IV), 도너 타입 키메리즘의 구축을 이식 후 1 및 12 개월에 혈액, 비장 및 BM에서 유사유전자형 도너 마커(Ly - 5.1)의 FACS 분석에 의해 확정하였다. 도너 키메라의 비장 및 BM의 LY-5.1+(도너) 세포상에 CD8, CD4, CD45/B220 및 CD11b 마커의 표현형 발현 분석을 이식 후 12개월에 수행하였다.
비 골수제거성 컨디셔닝 및 공동-자극 봉쇄 프로토콜: C3H/Hej (H-2Kk) 수령 마우스를 -6일에 항-CD4 (Bio Express, clone Gk1.5) 및 항-CD8 (Bio Express, cone 53.6.72) 항체 300㎍으로 T 세포 용량 축소한 후, 30 mg/kg IV 부설펙스로 - 3일 및 - 2일에 컨디셔닝하였다. 0일에 Balb/c-Nude (H-2Dd) 도너로부터 25 x 106 T-고갈 BM 세포를 이식하고, 다음과 같이 투여되는 방식으로 200㎍ CTLA4/FC (Chimerigen Laboratories), 250㎍ 항-CD48 (Bio Express, clone HM 48) 및 0.1 mg FTY720 (Novartis)로 이루어진 공동-자극 봉쇄를 겪게 하였다: CTLA4/FC 및 항-CD48을 0일, 2일, 4일, 6일, 21일 및 35일에 IP 주사하면서, FTY20을 0 내지 5일 동안 OS 마다 접종하고, 6일부터 90일까지는 일주일에 2번 접종하였다. 키메리즘 분석은 FACS 분석에 의해 매 30일에 모니터되었다.
키메리즘 및 다계열 분석을 위한 유세포분석 : 키메리즘 분석을 위하여, 혈액 단핵 세포를 숙주(H-2Kk- 피코에리트린 (PE)) 및 도너 (H-2Dd-플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC)) MHC 분류-I 항원에 대해 특이적인 라벨화된 항체로 염색하였다. 유사유전자형 모델에서, 항-CD45.2-PE 및 항-CD45.1-FITC 항체를 숙주와 도너를 구별하기 위해 사용하였다.
다계열 키메리즘은 이식 후 70 내지 163일에 도너 키메라에서 수행하였다. 지라세포를 숙주(H-2Kk-PE), 도너(H-2Dd-FITC) 및 다음의 계열 마커(항-CD4-알로피코시아닌(APC), 항-CD8-APC, 항-CD45/B220-PE 및 CD11b-PE)에 대한 항체로 다색 염색하였다. 형광-활성화된 세포 분류(FACS) 분석을 변형된 벡톤 디킨슨 FACScan을 사용하여 수행하였다.
실시예 1
최소 컨디셔닝을 위한 마우스 모델의 구축
성공적인 BM 인그래프트먼트를 위한 빈 니치(niches)을 제공하는 중요성을 고려하여, 본 발명자들은 지속적인 키메리즘을 유도하는 부설판으로 최소 골수제거를 초기에 결정하고, 이어서 유사유전자형 B6-SJL(Ly-5.1) T 세포 고갈된 골수(TDBM, 25x106)을 B6(Ly-5.2) 마우스들에 주입하였다. 10mg/kg 내지 100mg/kg 부설판의 투여량 범위 테스트에서, 본 발명자들은 50% 이상의 도너 타입 키메리즘이 50mg/kg보다 높은 투여량에서 얻어졌음을 보여주었다(50, 60 및 100mg/kg에서 각각 40±26%, 66±7%, 및 75±2% 키메리즘). 결과적으로, 60mg/kg의 반 치사 투여량은 항-CD4 및 항-CD8 고갈 항체의 단일 주입에 의해 숙주 림프구의 일시적 용량축소와 함께 동종이계 키메리즘을 유도하기 위한 모든 시도에서 추가로 사용하기 위해 선택되었다.
실시예 2
새로운 임상적으로 실현가능한 제제로의 키메리즘 유도
상기 실시예 1에서 설명된 잘 견딘 조합된 반 치사 컨디셔닝은 동종이계 '메가도즈' T 세포 고갈된 골수의 인그래프트먼트을 위한 가공할 장벽을 보여주었고, 골수(BM)을 단독으로 또는 BM과 FTY720을 사용한 경우 키메리즘이 성취되지 않았다.
그러나, 이식 후 CTLA4-Ig, 항-CD48 및 FTY720(도 1)으로의 일시적인 처리의 추가(2개의 독립된 실험)는 면역 억제 중지 후 116일(70 내지 163일)의 추적관찰로 마크된 도너 타입 키메리즘에 이르렀다(도 2). 따라서, 이식 후 FTY 단독으로 처리된 마우스에서 키메리즘이 검출되지 않은 반면, 이식 후 CTLA4-Ig, 항-CD48 및 FTY720으로의 일시적인 면역 억제는 11마리의 마우스들 중에서 8마리에서 80% 이상의 도너 타입 키메리즘을 얻었다. 도 2b 내지 2e에서 보여지는 바와 같이, 중요한 키메리즘은 골수 및 림프 리니지 모두에서 얻어졌다.
Belatacept(CTLA4-Ig) 및 Alefacept(CD48의 상호작용 차단)과 같은 제재는 임상적 사용을 위해 유용하기 때문에, 본 결과는 비-골수제거성 컨디셔닝하에서 지속가능한 조혈 키메리즘의 유도를 위하여 세포 치료 및 장기 이식을 위한 플랫폼으로서 잠재적으로 실현가능한 공동-자극 봉쇄를 제안한다.
비록 본 발명은 이들의 특정 구현예와 결합되어 설명되고 있지만, 많은 대안, 변형 및 변화가 이 분야의 기술자에게 명확해질 것이다. 따라서, 첨부된 청구범위의 정신 및 광범위한 범위 내에 속하는 모든 대안, 변형 및 변화도 포괄된다고 여겨진다.
본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 및 특허출원은 각각의 간행물, 특허 또는 특허출원이 구체적으로 및 개별적으로 참고로, 본 명세서에 포함하려고 하는 동일한 정도까지 본 명세서에 참고로 인용하였다. 더욱이, 본 출원서에서 인용하거나 확인한 어떤 참고문헌은 이러한 참고문헌이 본 발명의 선행기술로서 이용가능한 것으로 허가를 필요로 하는 것으로 생각되지는 않는다. 섹션의 제목이 사용되는 정도까지, 이들은 필수적으로 한정한 것으로 구속되어서는 안 된다.

Claims (24)

  1. (a) 비-공통유전자(syngeneic) 세포 또는 조직 이식편을 대상체로 이식하는 단계, - 여기서 상기 이식편은 골수 또는 림프 세포를 포함.-; 및
    (b) 상기 대상체에 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제, B7 분자 억제제 및 CD2/CD58 경로 억제제를 포함하는 치료적으로 유효량의 면역억제 섭생(regimen)을 투여하여 이것에 의해 대상체를 치료하는 단계를 포함하는 세포 또는 조직 이식이 필요한 대상체의 치료방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 면역 억제 섭생은 단기 면역 억제 섭생을 포함하는 것인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 단계 (a) 전에 대상체를 반 치사(sublethal), 치사(lethal), 전 치사(supralethal) 조건하에서 컨디셔닝하는 단계를 더 포함하는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 컨디셔닝 단계는 비-골수제거성 컨디셔닝을 포함하는 방법.
  5. 제3항에 있어서, 상기 컨디셔닝 단계는 T 세포 용량 축소를 포함하는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 T 세포 용량 축소는 단기 T 세포 용량 축소를 포함하는 방법.
  7. 제3항에 있어서, 상기 컨디셔닝은 알킬화제의 투여를 포함하는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 알킬화제는 부설판(Busulphan)을 포함하는 방법.
  9. 대상체에 비-공통유전자 세포 또는 조직 이식편의 이식 거부를 줄이기 위하여, 여기서 이식편은 골수 또는 림프 세포를 포함하며, 스핑고신 1-인산염 수용체 작용, B7 분자 억제제 및 CD2/CD58 경로 억제제의 용도.
  10. 제9항에 있어서, 상기 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제, B7 분자 억제제 및 CD2/CD58 경로 억제제는 단기 면역 억제 섭생의 일부로서 투여되는 것인 용도.
  11. 제1항 또는 제9항에 있어서, 상기 골수 세포는 T 세포 고갈 골수 세포를 포함하는 방법 또는 용도.
  12. 제11항에 있어서, 상기 골수 세포는 조혈 전구 세포를 포함하는 방법 또는 용도.
  13. 제1항 또는 제9항에 있어서, 상기 세포 또는 조직 이식편은 고형 장기를 포함하는 방법 또는 용도.
  14. 제1항 또는 제9항에 있어서, 상기 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제는 FTY720이고, 상기 B7 분자 억제제는 CTLA4-Ig이고, 상기 CD2/CD58 경로 억제제는 가용성 CD58-Ig인 방법 또는 용도.
  15. 제1항 또는 제9항에 있어서, 상기 CD2/CD58 경로 억제제는 가용성 CD2 단백질, 가용성 CD58 단백질, 항-CD2 항체 및 항-CD58 항체로 이루어진 군에서 선택되는 방법 또는 용도.
  16. 제15항에 있어서, 상기 가용성 CD58 단백질은 가용성 CD58-Ig를 포함하는 방법 또는 용도.
  17. 제1항, 제9항, 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제, 상기 B7 분자 억제제 및 상기 CD2/CD58 경로 억제제는 부수적으로 투여되는 방법 또는 용도.
  18. 제2항 또는 제10항에 있어서, 상기 단기 면역억제 섭생은 이식 후 최대 6개월 동안 시행되는 것인 방법 또는 용도.
  19. 제18항에 있어서, 상기 스핑고신 1-인산염 수용체 작용제의 투여는 이식 후 4개월에 종결되는 방법 또는 용도.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 상기 B7 분자 억제제 및 상기 CD2/CD58 경로 억제제의 투여는 이식 후 3개월에 종결되는 방법 또는 용도.
  21. 제18항, 제19항, 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 B7 분자 억제제 및 상기 CD2/CD58 경로 억제제의 투여는 이식 후 6일까지 매 2일에 시행되는 것인 방법 또는 용도.
  22. 제21항에 있어서, 상기 B7 분자 억제제 및 상기 CD2/CD58 경로 억제제의 투여는 이식 6일부터 매주 한번씩 90일까지 시행되는 것인 방법 또는 용도.
  23. 제1항 또는 제9항에 있어서, 상기 대상체는 사람 대상체인 방법 또는 용도.
  24. 제1항 또는 제9항에 있어서, 상기 비-공통유전자 세포 또는 조직 이식편은 HLA 동일 동종이계 도너, HLA-비-동일 동종이계 도너 및 이종 도너로 이루어진 군에서 선택된 도너로부터 유도되는 것인 방법 또는 용도.
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