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KR20130080443A - 개선된 보체 수용체 ２(ｃｒ２) 표적 그룹들 - Google Patents

개선된 보체 수용체 ２(ｃｒ２) 표적 그룹들 Download PDF

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KR20130080443A
KR20130080443A KR1020127032196A KR20127032196A KR20130080443A KR 20130080443 A KR20130080443 A KR 20130080443A KR 1020127032196 A KR1020127032196 A KR 1020127032196A KR 20127032196 A KR20127032196 A KR 20127032196A KR 20130080443 A KR20130080443 A KR 20130080443A
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KR
South Korea
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amino acid
seq
complement
group
moiety
Prior art date
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Withdrawn
Application number
KR1020127032196A
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English (en)
Inventor
제임스 코백스
조나단 피. 해넌
브이. 마이클 홀러스
Original Assignee
더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 콜로라도, 어 바디 코포레이트
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 콜로라도, 어 바디 코포레이트 filed Critical 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 콜로라도, 어 바디 코포레이트
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Abstract

보체 활성의 조절제들을 선택적으로 전달할 수 있는 용해성 단백질들에 관한 조성물들과 방법들이 여기서 제공된다. 이러한 조절제들의 표적화 전달은 CR2의 적어도 첫 번째 두 N-말단 SCR 도메인들에 대응하는 상기 조성물의 표적 단백질 부분의 특정 아미노산들을 선택적으로 변형함으로써 구현된다. 상기 표적 부분으로 도입되는 변형들의 특정한 조합에 따라, 보체 활성 조절제는 보체계 활성 또는 원하는 서스펜션이 발생하는 장소들에서 CR2의 특정 리간드로 선택적으로 전달될 수 있다.

Description

개선된 보체 수용체 ２(ＣＲ２) 표적 그룹들{IMPROVED COMPLEMENT RECEPTOR 2(CR2) TARGETING GROUPS}
본 발명은 염증 반응이 일어나는 장소들로 치료제의 표적화 전달을 위한 보체 억제제들(complement inhibitors)을 포함하는 개선된 조성물들에 관한 것이다.
본 출원은 2010년 4월 14일 자로 출원된 미국 임시 특허 출원 제61/345,035호를 우선권으로 수반하며, 그 내용은 본 명세서에 참조로 포함되어 있다.
인간 보체 수용체 2(CR2/CD21)는 15 또는 16 짧은 컨센서스 반복(shortconsensus repeat: SCR) 세포외 도메인들, 28 아미노산 단일 패스 막횡단 도메인 및 짧은 34 아미노산 세포내 도메인(1-5)을 포함하는 킬로달톤(kiloDalton: "kDa") 막 횡단 단백질(transmembrane protein)이다. 각 세포외 SCR은 약 60-70 아미노산 잔기들을 포함하고, 3에서 8 아미노산 잔기 영역의 링커에 의해 연결된다. 모든 SRC들은 다수의 보존된 아미노산 잔기들을 포함한다. 상기 아미노산 잔기들은 4개의 시스테인(cysteine) 잔기들을 포함한다. 상기 시스테인 잔기들은 Cys1-Cys3 및 Cys2-Cys4와 연결되는 이황화물다리(disulfide bridge) 패턴을 형성한다. CR2는 정상의 체액 및 세포 면역 반응(6-9)을 촉진하는 다른 막 단백질을 가진 복합체에서 발견되는 B세포에 주로 위치한다. 가장 멀리 위치한(즉, 아미노-말단) SCR 도메인들을 이용하여, SCR1-2, CR2는 4종류의 리간드들-보체 성분(ligands-complement component) 3(C3) 단백질 가수 분해 단편들 iC3b, C3dg 및 C3d(10,11); 엡스타인-바 바이러스(EBV Epstein-Barr virus), 당단백질 gp350/220(gp350)(12-14); 저친화도 IgE 수용체 CD23(15, 16); 및 사이토카인 인터페론 알파(cytokine interferon alpha: IFNα)(17-19)를 결합한다.
CR2의 주역할은 향상된 신호 도입(20, 21)을 통하여 항원 매개의 B세포 활성화를 위한 조-수용체(co-receptor)로서 기능한다. 이러한 기능은 C3가 공유 결합으로 항원(22-28)에 부착되었을 때, C3d 및 IgM 표면을 경유하여 수행된다. CR2는 또한 엔벨로프(envelope) 표면 당단백질 gp350(12, 20, 29-31)을 통하여 EBV을 위한 절대 세포 수용체(obligate cellular receptor)가 된다. 실제 세포 EBV 감염은 CR2가 gp350에 결찰하여 바이러스를 상기 세포 표면(14, 32, 33)에 충분히 가까워지게 한 후에 이루어진다. 이 때, 실제 세포 EBV 감염은 바이랄 gp42를 인간 백혈구 항원(human leukocyte antigen) 클래스 II 분자들(34, 35) 및 그 후에 세 개의 추가적인 당단백질인 gB, gH, gL(36-38)을 경유하는 트리거링 숙주 세포 융합(triggering host cell fusion)에 결합시킨다. IFNα는 이런 작용의 생리학적 중요성이 불명확하므로(17-19) CR2의 리간드를 나타낸다. 그러나 IFNα 및 CR2는 자가 면역 질환 전신 홍반성 루프스(autoimmune disease systemic lupus erythematosus)(39-41)의 발병과 관련이 있을 수 있다.
CR2-gp350 작용의 구조 연구에 따른 돌연변이 생성 연구는 상호 작용(20, 42 43)에 요구되는 CR2의 잔기들을 제시한다. ELISA 및 유동 세포 분석법(flow cytometry)은 gp350 및 CR2(20, 42, 43)를 결합하는 후보 CR2 돌연변이(candidate CR2 mutant)를 시험하는 데 사용된다. 최근 연구들에서 CR2의 특정 잔기들은 R13, S15, R28, R36, K41, K57, K67, R83 및 R89(42, 43)가 포함되어 돌연변이들이 될 때 gp350-결합(gp350-binding)에 해로운 영향을 끼치는 것으로 나타났다. 분리된 작업 내에서 SCR1의 첫 번째로 유지되는 인터-시스테인(inter-cysteine) 및 SCR1과 SCR2 사이의 링커 영역 내부의 잔기들인 P8-S15는 또한 gp350 결합에 반드시 발생하는 것으로 강조된다(20). 이러한 데이터는, 상기 pg350 분자를 표적하는 분리된 돌연변이 유발 검사와 함께, 상기 소프트 도킹 프로그램(soft docking program)을 이용하는 CR2-gp350 작용의 인실리코 모델(in silico model)을 작동하는 데 사용된다. CR1에서의 주요 작용이 SCR1과 SCR1을 SCR2에 합류하는 링커 영역 사이에서, gp350은 도메인 1과 도메인 2 사이의 상기 링커 영역에 있다는 분석이 제시된다.
CR2는 IFNα가 gp350 및 C3d 결합을 모두 모방하였다는 결과에 의해 IFNα 수용체 및 세 리간드들이 CR2(18, 19)의 유사 영역과 결합한다는 발견을 제시한다. 상기 모방(mimicry)은 또한 기능적인 부분을 나타낸다(18). 상기 C3d와 IFNα 구조가 모두 해결된 후, 상기 추정상 CR2 결합 서열(putative CR2 binding sequence)은 유사한 구조적 모티프를 가진다. IFNα는 정도들(17)을 다양하게 함에도 불구하고, 총길이가 SCR1-2까지 CR2의 다수 형태에 결합될 수 있는 것으로 나타난다. CR2가 IFNα 수용체로 나타나지만, CR2 SCR1-2 내부 상기 IFNα 결합 장소는 알려져 있지 않다.
이러한 리간드들에 결합하는 것과 관련된 특정 아미노산 잔기들을 확인하는 알려진 리간드를 가진 CR2 작용들의 분석은 알려진 CR2 리간드에 특별한 결합을 하는 수정된 CR2 분자들을 디자인 할 수 있다(예를 들면, C3 단백질 가수 분해 팩터 iC3b, C3dg 및 C3d; EBV 당단백질 gp350; CD23; 및 IFNα).
본 발명은 보체 활성화의 조절제(modulator)를 선택적으로 전달할 수 있는 용해성 단백질의 조성물들과 방법들을 제공한다. 이러한 조절제들의 표적 전달은 CR2에서 처음에 위치하는 최소한 두 N-말단 SCR 도메인들에 대응하는 조성들의 표적 단백질 부분에서 선택적으로 특정 아미노산을 변형함으로써 이루어진다. 표적 부분에 도입된 변형(mutation)의 특정 조합에 따라, 보체 활성화 조절제는 보체계 활성화(complement system activation) 또는 억제하려는 장소에서 특정 CR2 리간드들에 선택적으로 공급(deliver)될 수 있다.
이에 따라, 본 발명의 일 측면에 있어서, 구성물(construct)을 포함하는 용해성 단백질이 제시되며, 상기 구성물은 (a) CR2 일부가 CR2 단백질의 적어도 첫 번째 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는, SEQ ID NO:1의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 일부 또는 그 생물학적 활성 단편 그리고 (b) CR2 일부가 N11, R36, K41 및 K67을 구성하는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 보체 조절 부분을 포함한다. 특정한 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절 부분은 보체 억제제(complement inhibitor) 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함한다.
특정 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제 또는 그 생물학적 활성 단편은 인체 세포막 보체 단백질(membrane complement protein: MCP)(SEQ ID NO:12), 인체 노화 팩터(decay accelerating factor: DAF)(SEQ ID NO:11), 쥐 DAF(SEQ ID NO:12), 쥐 보체 수용체 1-관련 유전자/단백질 y(Crry)(SEQ ID NO:4), 인체 CD59(SEQ ID NO:3), 쥐 CD59 이소폼(isoform) A(SEQ ID NO:6), 쥐 CD 59 이소폼 B(SEQ ID NO:7), 인체 보체 수용체 1(CR1)(SEQ ID NO:9), 인간 팩터 H(SEQ ID NO:5) 및 쥐 팩터 H(SEQ ID NO:8)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 인체 세포막 보체 단백질(MCP)(SEQ ID NO:10) 또는 그 생물학적 활성 단편들을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 인체 MCP(SEQ ID NO:10)의 생물학적 활성 단편은 SCR1-4(SEQ ID NO:10의 아미노산들 35-285), SCR1-4 플러스 세린/트레오닌-리치 도메인(serine/threonine-rich domain)(SEQ ID NO:10의 아미노산들 35-326) 및 MCP의 세포외 도메인(SEQ ID NO:10의 아미노산들 35-343)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 인체 DAF(SEQ ID NO:11) 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 인간 DAF(SEQ ID NO:11)의 생물학적 활성 단편은 SCR1-4(SEQ ID NO:11의 아미노산들 25-285) 및 SCR1-4 플러스 O-글리코실에이티드(O-glycosylated) 세린/트레오닌-리치 도메인(SEQ ID NO:11의 아미노산 25-353)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 쥐 DAF(SEQ ID NO:12) 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 쥐의 DAF(SEQ ID NO:12)의 생물학적 활성 단편은 SCR1-4(SEQ ID NO:12의 아미노산들 35-286) 및 SCR1-4 플러스 상기 O-글리코실레이티드 세린/트레오닌-리치 도메인(O-glycosilated serine/threonine-rich domain)(SEQ ID NO:12의 아미노산들 35-362)의 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 Crry(SEQ ID NO:4) 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 Crry의 생물학적 활성 단편은 SCR1-5(SEQ ID NO:4의 아미노산들 41-400) 및 세포외 도메인 쥐 Crry 단백질(SEQ ID NO:4의 아미노산들 41-405)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보제 억제제는 인간 CD59(SEQ ID NO:3)또는 그 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 인간 CD59(SEQ ID NO:3)의 생물학적 활성 단편은 GPI 앵커(GPI anchor)가 결핍된 인간 CD59 세포외 도메인을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 쥐 CD59 이소폼 A(SEQ ID NO:6) 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 쥐 CD59 이소폼 A(SEQ ID NO:6) 생물학적 활성 단편은 쥐 CD59의 세포외 도메인, GPI 앵커가 결핍된 이소폼 A(SEQ ID NO:6의 아미노산들 24-95)를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 쥐 CD59 이소폼 B(SEQ ID NO:7) 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 쥐 CD 59 이소폼 B의 상기 생물학적 활성 단편은 쥐 CD59의 세포외 도메인, 그 GPI 앵커가 결핍된 이소폼 B(SEQ ID NO:7의 아미노산들 24-103)를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 인간 CR1(SEQ ID NO:9) 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 인간 CRI(SEQ ID NO:9)의 생물학적 활성 단편은 SCR1-3(SEQ ID NO:9의 아미노산들 42-682), SCR8-10(SEQ ID NO:9의 아미노산들 491-684), SCR8-11(SEQ ID NO:9의 아미노산들 491-745), SCR15-17(SEQ ID NO:9의 아미노산들 941-1134), SCR15-18(SEQ ID NO:9의 아미노산들 941-1195) 및 SCR22-28(SEQ ID NO:9의 아미노산들 1394-1842)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 항체 억제제는 휴먼 팩터 H(SEQ ID NO:5) 또는 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 휴먼 팩터 H(SEQ ID:5)는 SCR1-4(SEQ ID:5의 아미노산들 21-262), SCR1-5(SEQ ID:5의 아미노산들 21-320), SCR1-8(SEQ ID:5의 아미노산들 21-507) 및 SCR1-18(SEQ ID:5의 아미노산들 21-1104)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 쥐 팩터 H(SEQ ID:8) 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 쥐 팩터 H(SEQ ID:8)의 생물학적 활성 단편은 SCR1-4(SEQ ID:8의 아미노산들 19-264), SCR1-5(SEQ ID:8의 아미노산들 19-322), SCR1-8(SEQ ID:8의 아미노산들 19-507) 및 SCR1-18(SEQ ID:8의 아미노산들 19-1109)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절인자 부분은 보체 촉진제(complement activator) 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 촉진제 또는 그 생물학적 활성 단편은 인간 IgG₁, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃, 쥐 IgG₃Fc 도메인, 쥐 IgM, 쥐 IgMFc 도메인 및 코브라 독 팩터(cobra venom factor: CVF)이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 CRS2 또는 그 생물학적 활성 단편에 어떠한 아미노산 치환도 포함하지 않는 구성물에 비하여 EBV-gp350 또는 IFNα에 대한 감소된 결합 친화도(binding affinity)를 나타낸다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 또는 생물학적 활성 단편은 N11, R36, K41 및 K67로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나의 아미노산 치환기를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 CR2 또는 생물학적 활성 단편에 어떠한 아미노산 치환기도 포함하지 않는 구성물에 비해 IFNα에 대해 감소된 결합 친화도를 나타낸다. 일부 실시예들 있어서, 상기 CR2 또는 그 단편은 S42 및 K50으로 구성되는 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다.
또 다른 측면에 있어서, 구성물의 결합 친화도(binding affinity)를 감소시키는 방법들이 제공되며, 상기 구성물은 (a) SEQ ID NO:1의 CR2 단백질 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분을 포함하고, 상기 CR2 단백질이 상기 CR2 부분의 적어도 하나의 첫 번째 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하며, (b) EBV-gp350에 대해 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 잔기를 변형시키는 보체 조절제 부분을 포함한다.
또 다른 측면에 있어서, 구성물의 결합 친화도를 감소시키는 방법들이 제공된다. 상기 구성물은 (a) CR2 부분은 CR2 단백질의 적어도 첫 번째 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하고, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분; 그리고 (b) IFNα에 대해 S42 및 K50으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 잔기들을 변형시키는 보체 조절제 부분을 포함한다.
도 1 CR2의 SCR1 및 SCR2 모두 gp350을 연결(ligating)하는 NMR 적정 분석을 나타낸다. CR2SCR1-2(1/3X PBS 내 0.6mM)로 라벨 붙여진 두 개의 첨부된 1H-15N 횡단 완화 최적화 분광학-헤테로핵산 단일 양자 일관성(transverse relaxaion optimized spectroscopy-heteronuclear single quantum coherence: TROSY-HSQC) 스펙트럼들은 gp350의 양을 증가시키는 적정 중에 수집되었다. 검은색은, gp350 및 회색이 아니고, gp350의 포화량을 나타낸다. 삽입된 것은, 화학적 전달 변화(chemical shift change)의 상세한 도면이다. CR2에 사용되는 번호지정 체계는 머츄어 단백질(mature protein)의 아미노산 서열에 기초한다.
도 2는 SCR1 및 CR2의 SCR2 모두 IFNα를 연결하는 NMR 적정 분석을 나타낸다. IFNα의 양을 증가시키는 적정 중에 수집된 CR2SCR1-2(1/3X PBS 내 0.6mM)로 라벨 붙여진 다섯 개의 첨부된 1H-15N 횡단 완화 최적화 분광학-헤테로핵산 단일 양자 일관(TROSY-HSQC) 스펙트럼들을 나타낸다.
도 3은 CR2-리간드 결합 잔기를 비교한 NMR 분석을 나타낸다. 막대 그래프는 C3d, IFNα 또는 gp350 결합에 따라 CR2 SCR1-2의 백본 아미드(backbone amide)들에서 유발되는 화학 전달 변화를 나타낸다.
도 4A, 도 4B 및 도 4C는 NMR-결정 리간드 결합 잔기와 리간드 결합상태(C3d는 나타나지 않음)에서의 CR2 SCR1-2 엑스레이 크리스탈 구조의 표면 표시를 나타낸다. 도 4A: NMR 결정 gp350 결합 잔기들. 회색 잔기들은 헤350적정에 의해 영향을 받지 않는 잔기들을 나타낸다. SCR1에서의 검은색 잔기들, 링커 영역 및 SCR2는 CR2SCR1-2에 결합하는 gp350과 관련된 잔기들을 나타낸다. 도 4B: NMR 결정 IFNα 결합 잔기들을 나타낸다. 회색 잔기들은 IFNα 적정에 의해 영햐을 받지 않는 잔기들을 나타낸다. SCR1의 검은색 잔기들, 상기 링커 영역 및 SCR2는 SCR2SCR1-2에 결합하는 IFNα와 관계있다. 도 4C: NMR 결정 리간드 특유 공유 결합 잔기. 상기 검은색 잔기들은 IFNα 및 gp350에 결합하는 CR2와 특이하게 관계되는 잔기들을 나타낸다. 상기 밝은 회색 잔기들은 세 CR2 리간드 결합 이벤트들에 관계되는 잔기들을 나타낸다.
도 5는 NMR 유래의 CR2-gp350 리간드 결합 잔기들을 가지는 HADDOCK　CR2-gp350 도킹 모델(docking model)을 강조된 부분으로 나타낸다. 영 등(Young, et al)으로부터의 모델. 검은 리본들은 gp350을 나타내고, 밝은 회색은 gp350의 표면을 꾸미는 글리코실-그룹을 나타낸다. 어두운 회색 리본은 CR2SCR1-2를 나타낸다. 영 등의 도킹 모델에서 나타난 NMR 유래의 결합 잔기들과 gp350 사이에서 이론상 곁사슬 상호작용의 삽입되어 확대된 도면을 나타낸다.
표 1은 NMR 적정 및 ITC부터의 CR2 결합 상수들을 나타낸다. 화학적 전달 변화를 관찰하는 NMR 적정을 이용하여 결정되는 CR2 리간드 상호작용을 위한 강한 결합 상후들에 약한 상한치(weak and upper limit)를 나타낸다. ITC를 이용하여 결정된 CR2 리간드 결합 상수들을 또한 나타낸다. UL: 상한치. ITC: 등온선의 적정 열량 측정(ishothermal titration calorimetry)을 나타낸다.
표 2는 CR2 리간드 결합 잔기를 비교한 것이다. 각 CR2 리간드 결합 상호작용과 관계된 잔기들을 나타낸다. 별표(asterisk)를 가진 잔기들은 대응되는 결합 상호작용에 특이성을 가진다.
염기 서열의 간단한 설명
SEQ ID NO:1은 인간 보체 수용체 2(CR2)의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:2는 인간 CR2의 짧은 콘센서스 반복(short consensus repeat: SCR) 도메인 1 및 2의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:3은 인간 CD59 단백질의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:4는 유전자/단백질 y(Crry)와 관련된 쥐 보체 수용체 1의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:5는 인간 팩터 H의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:6은 CD59A 단백질의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:7은 CD59B 단백질의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:8은 쥐 팩터 H의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:9는 인간 보체 수용체 1(CR1)의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:10은 인간 세포막 조팩터 단백질(membrane cofactor protein: MCP)의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:11은 인간 노화 촉진 팩터(dacay accelerating factor: DAF/CD55)의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:13은 모노클드 코브라(monocled cobra)(Naja kauthia)의 코브라 독 팩터(cobra venom factor: CVF)의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:14는 인간 IgG₁H사슬(hevy chain), C 도메인의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:15는 인간 IgG₁L사슬(light chain), C 도메인의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:16는 인간 IgG의 Fc도메인의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:17는 인간 IgM H사슬(heavey chain), C 도메인의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:18는 인간 IgM L사슬(light chain), C 도메인의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:19는 인간 IgM의 Fc 도메인의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:20은 인간 IgG₃h사슬(heavy chain), C 도메인의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:21은 인간 IgG₃L사슬(light chain), C 도메인의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:22는 쥐 IgG₃Fc도메인의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:23은 인간 IgM H사슬(heavy chain), C 도메인의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:24는 인간 IgM L사슬(light chain), C 도메인의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:25는 인간 IgM Fc도메인의 완전한 아미노산 서열이다.
SEQ ID NO:26은 인간 CR2의 첫 번째 두 N-말단 SCR들 사이에서의 연결 서열이다.
SEQ ID NO:27은 인간 CR2의 첫 번째 두 N-말단 SCR들 사이에서의 연결 서열이다.
SEQ ID NO:28은 인간 CR2의 제4 및 제5 N-말단의 짧은 콘센서스 반복 도메인들(short consensus repeat) 사이에서 연결 서열이다.
보체는 면역의 중요한 요소이다. 그러나 보체계의 부적절하고 과도한 활성은 많은 병리학적으로 염증 반응과 관계된다. 보체 활성은 상기 보체 경로에서의 다양한 지점에서 매개 조직의 손상(mediate tissue injury)을 야기한다. 세포 표면의 보체 활성은 혈청 보체 성분(serum complement component) 3(C3)의 분열 및 면역 반응기 세포(immune effector cell)가 상기 세포 표면들에 옵소닌의 역할을 하는 C3 요소의 공유 결합을 야기한다. 상기 야기되는 C3 요소는 강한 아나필라톡신인 용해성 단백질인 C3a, 대체되는 보체 경로 C3 전환 효소(C3 convertase)의 요소인 Cb를 포함한다. 상기 경로에서 혈청 보체 성분 5(C5;serum complement component)는 또 다른 강력한 아나필라톡신인 용해성 C5a 및 생리 활성물의 넓은 범위를 가진 화학 주성 인자(chemoattractant)를 방출한다. C5의 분열은 또한 세포막 공격 복합체(membrane attack complex: MAC), 세포막에서 조립되는 세포용해 단백질 복합체(cytolytic protein complex), 결국 옵소닌화 세포(opsonized cell)를 야기하는 형성물로 시작한다.
보체 성분(complement component) 3(C3)은 지모겐(zymogen)이다. 온전한 C3는 높은 농도(1-2mg/ml)에서 순환한다(M. Manzi et al., Mol. Cell. Proteomics(2005) 4(12)1942-1947). 보체 활성 중에, 전체 C3는 C3b 형태로 분열하여, 대체되는 보체 경로 C3 전환 효소(convertase)의 요소이고 표적 표면에 공유 결합하게 된다. 내생의 보체 조절 단백질(endogenous complement reglatory protein)은 iC3b를 형성하는 조직 결합 C3b를 비활성화하여 결국 상기 35 킬로달톤("kD") C3d 요소가 된다. 상기 C3d 요소는 조직들을 수정하고 보체 매개의 염증의 오래가는 마커로서의 역할을 한다(I. Leivo et al., J.cell. Biol.(1986) 103:1091-1100).
보체 활성 및 질병 장소로의 보체 억제제의 표적화 전달은 그 효과를 증진시킬 수 있다. 보체가 면역 복합체 이화 작용 및 세포 사멸 작용(apoptotic cell clearance)과 같은 면역 항상성 메커니즘뿐만 아니라 숙주 방어 및 면역 형성에 있어서 중요한 역할을 하기 때문에, 보체 억제제의 표적화 전달은 시스템적인 보체 억제, 특히 오랜 기간의 보체 억제로부터 야기되는 잠재적으로 심각한 부작용을 감소시킨다.
일반적인 기술들(General Techniques)
본 발명의 수행은, 별도의 표시가 없으면 이 분야에서 통상의 지식을 가진 자들에게 잘 알려진 분자 생물학, 미생물학, 세포 생물학, 생화학, 핵산 화학의 종래의 기술을 이용할 것이다. 이러한 기술들은 분자 클로닝: 실험실 매뉴얼, 2판(Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition)(SAmbrook et al., 1989) 및 분자 클로닝: 실험실 매뉴얼, 3판(Molecular Cloning: A Laboratory Manual, third edition)(SAmbrook and Russell, 2001)(이하, 함께 "Sambrook"로 언급한다); 분자 생물학에서의 최신 프로토콜들(Current Protoclols in Molecualr Biology)(F. M. Ausubel et al., eds., 1987, 2001 동안 보완된); PCR; 폴리머라아제 사슬 반응(The Plymerase Chain Reaction)(Mullis et al., eds., 1994); 핵산화학에서의 최신 프로토콜즈(Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry John Wiley&Sons, INc., New York, 2000), 실험 면역의 핸드북, 4판(Handbook of Experiemntal Immunology, 4th edition)(D. M. Weir&C.C. Blackwell, eds., Blackwell Science Inc., 1987); 및 포유동물 세포들의 유전자 전달 벡터(Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells)(J. M. Miller&M. P. Calos, eds, 1987)와 같은 문헌들에 충분히 설명되어 있다.
보체 수용체 2(Complement Receptor 2)
CD21(CR2/CD21)(SEQ ID NO:1 및 SEQ ID NO:2)로 참조되는 인간 보체 수용체 2는, 15 또는 16 짧은 콘센서스 반복(SCR) 도메인들, 이러한 단백질들 특징을 가진 구조적 단위를 구성되는 상기 C3 결합 단백질과의 a~145 kD 막 관통 단백질이다. CR2는 B 성숙 세포들 및 여포 수지상 세포(follicular dendritic cells)에서 표현되어서 인간 면역에 있어서 중요한 역할을 수행한다(J. Hannan et al., Biochem. Soc. Trans. (2002)30:983-989; K.A. Young et al., J. biol.Chem.(2007) 282(50):36614-36625). CR2 단백질은 온전한 C3 단백질에 결합하지 않고, 상기 C3b, iC3b, 및 C3d 분열 단편들을 포함하는 고장난 산물에 상기 CR2 단백질의 첫 번째 두 아미노-말단의 짧은 콘센서스 반복("SCR 1-2") 내부에 위치한 결합 장소를 경유하여 결합하게 된다. 따라서 CR2의 상기 SCR1-2 도메인은 C3의 분열된(즉, 활성화된) 형태와 온전한 순환 C3를 구분한다. 표적 그룹으로서, CR2의 SCR들 1-2는 따라서 순환하는 C3과 보체 활성 중 생성된 상기 C3 단편을 구별할 수 있게 된다. CR2의 C3d에 대한 친화도가 오직 620-658nM인 반면(J. Hannan et al., Niochem. Soc. Trans.(2002) 30:983-989; J.M. Guthridge et al., Biochem.(2001) 40:5931-5941), CR2의 C3d 무리에 대한 결합격은 보체 활성 장소에 분자들을 표적하는 효과적인 방법이 된다.
C3의 분열은 활성 세표 표면에서 처음에 C3b의 생성과 증착(deposition)을 야기한다. 상기 C3 단편은 보체 케스케이드(cascade)를 촉진하는 효소 복합체의 생성과 관계된다. 세포 표면에서, 특히 보체 활성의 조절인자들을 포함하는 호스트 표면(host surface)에 있을 때(즉, 대부분의 호스트 조직), C3b는 빠르게 비활성 iC3b로 전환된다. 세포막 결합 보체 조절 인자(membrane-bound complement regulator)가 없을 때에도, 혈청 팩터 H 및 혈청 팩터 I의 활동 때문에 iC3b의 상당한 레벨이 형성된다. iC3b는 충분히 세포막-결합 단편 C3dg로 소화되어 팩터 I 및 다른 프로테아제(protease) 및 코팩터들에 의해 C3d가 되는데, 이런 과정은 상대적으로 천천히 일어난다. 따라서 일단 CR2에 대한 C3리간드들이 생성되어서 보체 활성 장소에서 높은 농도로 존재하게 되면, CR2에 대한 상기 C3리간드들은 상대적으로 오래 존재하게 된다.
정의들(Definitions)
"조성물" 또는 "조성물들"에 대한 일반적인 언급은 본 발명의 조성물들을 포함하고 적용될 수 있다.
여기서 사용되는 바와 같이, 물질들의 단수 형태 "하나", "일" 및 "상기"는 다른 뜻을 나타내지 않으면 복수를 포함하는 것으로 언급된다. 예를 들면, "생물학적 활성 CR2 단편"이라는 어구는 하나 또는 그 이상의 생물학적 활성 CR2 단편들을 포함한다.
여기서 "약"의 값 또는 변수들은 그 자체로서 값 또는 변수들에 관련되는 실시예들을 포함한다(또는 설명한다). 예를 들면, "약 X"로 언급되는 표현은 "X"의 설명을 포함한다.
여기서 설명하는 본 발명의 측면들 및 실시예들은 측면들 및 실시예들을 포함하는 및/또는 본질적으로 포함하는 점을 이해할 수 있을 것이다.
여기서 사용되는 바와 같이, "개체의"라는 용어는 척추동물, 바람직하게는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간을 언급하는 것이다. 포유동물은, 이에 제한되지는 않지만, 연구 동물들, 국내 동물들, 농장 동물들, 스포츠 동물들, 애완동물들, 영장류, 쥐들 및 래빗들을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 개체는 인간과는 다른 개체이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 개체는 대체적인 보체 경로를 보여주는 질병 연구를 위한 동물 모델이다.
특정을 통해 제시된 모든 최대 수치 제한은 보다 낮은 수치의 한계점이 이하로 표현되는 것과 같이 모든 보다 낮은 수치 한계점을 포함한다. 특정을 통하여 제시된 모든 수치 한계점은 보다 높은 수치의 한계점이 이하 표시되는 것과 같이, 모든 보다 높은 수치의 한계점을 포함할 것이다. 특정을 통하여 제시되는 모든 수치 범위는 그러한 보다 좁은 범위가 이하로 나타나는 것과 같이, 이러한 보다 넓은 수치의 범위 내에 해당되는 모든 보다 좁은 수치 범위를 포함할 것이다.
아미노산 치환기(Amino Acid Substitutions)
20개의 아미노산들은 일반적으로 단백질에서 발견된다. 이러한 아미노산들은 그들의 곁사슬(side chain)들의 화학적 속성에 기초한 9개의 클래스들 또는 그룹들로 분류될 수 있다. 같은 클래스 또는 그룹 내부에서 또 다른 아미노산 잔기의 치환은 여기서는 "보존적(conservative)" 치환이라고 언급된다. 상기 보존적 아미노산 치환은 빈번하게 중대한 상기 단백질의 형태 또는 기능의 변경 없이 단백질로 될 수 있다. 다른 클래스 또는 그룹으로부터 또 다른 하나의 아미노산 잔기의 치환은 "비보존적(non-conervative)" 치환으로 언급된다. 대조적으로, 상기 비보존적 아미노산 치환은 단백질의 형태와 기능에 지장을 주는 경향이 있다.
표 3: 아미노산 분류의 예( Example of amino acid classfication )
작은/ 지방족 잔기(Aliphatic residues); Gly, Ala, Val, Leu, Ile
싸이클릭 이미노산(Cyclic Imino Acid); Pro
수산기를 포함하는 잔기들(Hydoroxy-containing Residues); Ser, Thr
산성 잔기들(Acidic REsidues); Asp, Glu
아마이드 잔기들(Amide Residues); Asn, Gln
기본 잔기들(Basic Residues); Lys, Arg
이미다졸 잔기(Imidazole residues); His
방향족 잔기들(Aromatic Residues); Phe, Tyr, Trp
황 포함 잔기들(Sulfur-containing Residues); Met, Cys
일부 실시예들에서, 상기 보존적 아미노산 치환은 글리신(glycin: G), 알라닌(alanine: A), 이소류신(isoleucine: I), 발린(valine: V) 및 류신(leucine: L)의 지방족 아미노산들 치환; 트레오닌(threonine: T)을 위한 세린(serine: S) 및 그 반대(vice versa); 글루타민산(glutaminc acid: E)을 위한 아스파르트 산(aspartic acid: D) 및 그 반대; 아스파라긴(asparagine: N)을 위한 글루타민(glutamine: Q) 및 반대; 아르기닌(arginie: R)을 위한 리신(lysine: K) 및 그 역; 페닐알라닌(phenylalanine: F), 티로신(tyrosine: Y) 및 트립토판(tryptophan: W)의 다른 방향족 아미노산으로의 치환; 시스테인(cysteine: C)을 위한 메티오닌(methionine: M) 및 그 역으로의 치환을 포함한다. 다른 치환들도 특정 아미노산의 환경 및 상기 단백질의 입체적인 구조 내 역할에 따라서 보존적으로 고려될 수도 있다. 예를 들면, 글리신(G) 및 알라닌(A)은 알라닌(A) 및 발린(V)과 같이 빈번하게 교환될 수 있다. 상대적으로 소수성인 메티오닌(M)은 류신(lucine)과 이소류신(isolucine)으로 교환될 수 있고, 가끔은 발린(valine)으로 교환될 수도 있다. 리신(K) 및 아르기닌(R)은 빈번하게 상기 아미노산 잔기의 중요 모양이 전하(charge)를 띠고 상기 두 아미노산 잔기의 다른 pK 값의 차이가 크지 않는 위치에서 빈번하게 교환된다. 다른 변화들은 특정 환경들에서 "보존적"으로 고려될 수 있다(생화학 13-15쪽, 2판. 루버트 스트라이어(Lubert Stryer ed)(스탠포드대학교), 해인코프 등(Heinikoff et al.)., Proc.Nat'l Acad.Sci.USA(1992)(89:10915-10919; 레이 등.,J.Biol.Chem.(1995)270(20): 11882-11886).
일부 실시예들에 있어서, 상기 비보존적 아미노산 치환은 글리세린(G), 알라닌(A), 트레오닌(T), 아스파르트 산(D), 글루타민 산(E), 글루타민(Q), 아스파라긴(N), 리신(K), 아르기닌(R), 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W), 메티오닌(M), 시스테인(C), 히스티딘(H) 및 프롤린(P)의 치환을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 비보존적 아미노산 치환은 세린(S) 및 트레오닌(T)으로 글리신(G), 알라닌(A), 이소류신(I), 발린(V), 류신(L), 아스파르트 산(D), 글루타민 산(E), 글루타민(Q), 아스파라긴(N), 라이신(K), 마르기닌(R), 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W), 메티오닌(M)), 시스테인(C), 히스티딘(H) 및 프롤린(P)을 치환하는 것을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 비보존적 아미노산 치환은 아스파르트 산(D) 및 글루타민 산(E)으로 글리세린(G), 알라닌(A), 이소류신(I), 발린(V), 류신(L), 세린(S), 트레오닌(T), 글루타민(Q), 아스파라긴(N), 라이신(K), 아르기닌(R), 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W), 메티오닌(M), 시스테인(C), 히스티딘(H) 및 프롤린(P)을 치환하는 것을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 비보존적 아미노산 치환은 글루타민(Q) 및 아스파라긴(N)으로 글리신(G), 알라닌(A), 이소류신(I), 발린(V), 류신(L), 세린(S), 트레오닌(T), 아스파르트 산(D), 글루타민 산(E), 리신(K), 아르기닌(R), 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W), 메티오닌(M), 시스테인(C), 히스티딘(H) 및 프롤린(P)을 치환하는 것을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 비보존적 아미노산 치환은 리신(K) 및 아르기닌(R)으로 글리신(G), 알라닌(A), 이소류신(I), 발린(V), 류신(L), 세린(S), 트레오닌(T), 아스파르트 산(D), 글루타민 산(E), 글루타민(Q), 아스파라긴(N), 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W), 메티오닌(M), 시스테인(C), 히스티딘(H), 및 프롤린(P)을 치환하는 하는 것을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 비보존적 아미노산 치환은 페닐알라닌(F), 티로신(Y) 및 트립토판(W)으로 글리신(G), 알라닌(A), 이소류신(I), 발린(V), 류신(L), 세린(S), 트레오닌(T), 아스파르트 산(D), 글루타민 산(E), 글루타민(Q), 아스파라긴(N), 라이신(K), 아르기닌(R), 메티오닌(M), 시스테인(C), 히스티딘(H) 및 프롤린(P)을 치환하는 것을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 비보존적 아미노산 치환은 메티오닌(M) 및 시스테인(C)으로 글리신(C), 알라닌(A), 이소류신(I), 발린(V), 류신(L), 세린(S), 트레오닌(T), 아스파르트 산(D), 글루타민 산(E), 글루타민(Q), 아스파라긴(N), 리신(K), 아르기닌(R), 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W), 히스티딘(H) 및 프롤린(P)을 치환하는 것을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 비보존적 아미노산 치환은 히스티딘(H)으로 글리신(G), 알라닌(A), 이소류신(I), 발린(V), 류신(L), 세린(S), 트레오닌(T), 아스파르트 산(D), 글루타민 산(E), 글루타민(Q), 아스파라긴(N), 리신(K), 아르기닌(R), 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W), 메티오닌(M), 시스테인(C) 및 프롤린(P)을 치환하는 것을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 비보존적 아미노산 치환은 프롤린(P)으로 글리신(G), 알라닌(A), 이소류신(I), 발린(V), 류신(L), 세린(S), 트레오닌(T), 아스파르트 산(D), 글루타민 산(E), 글루타민(Q), 아스파라긴(N), 라이신(K), 아르기닌(R), 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W), 메티오닌(M), 시스테인(C) 및 히스티딘(H)을 치환하는 것을 포함한다.
보체 활성의 조절제(Modulator of Complement Activity)
여기서 사용되는 바와 같이, "보체 조절제(complement modulator)"라는 용어는 화합물(compound), 조성물(composition) 또는 보체 활성 또는 그 생물학적 활성 단편을 조절하는(억제하거나 촉진시키는) 단백질을 언급한다. 보체 조절인자는 보체억제제 또는 보체촉진제가 될 수 있다.
여기서 사용되는 바와 같이, "보체 억제제(complement inhibitor)"라는 용어는 화합물(compound), 조성물(composition), 또는 보체 활동을 감소시키거나 제거하는 단백질 또는 그 생물학적 활성 단편을 언급한다. 보체 활동의 감소는 증가하거나(예를 들면, 활동에 있어서 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 감소)또는 완성된다. 상기 보체 억제제는 용해성이거나, 예를 들면 세포막 보조인자 단백질(;membrane cofactor protein: MCP), 노화 촉진 팩터(decay accelerating factor: DAF/CD55), CD59, 쥐 보체 수용체 1-관련 유전자/단백질 y(Crry), 인간 보체 수용체 1(CR1) 및 팩터 H, 또는, 예를 들면 에큘리주맵(eculizumab)(상품명: 솔리리스®(Soliris®)로 거래되는 항C5 항체), 페세리주맵(pexelizumab)(에큘리주맵(eculizumab)의 항원 결합 단편을 포함하는 단일 사슬 항체(scFv)), 항-팩터 B 항체(ATCC 수탁(deposit) 번호 제PTA-6230호에 의해 생성되는 단일 클론 항체 1379와 같은), 항-프로퍼딘 항체(anti-properdin antibody), 항-팩터 D 항체(anti-factor D antibody) 등과 같은 보체 경로의 조성물에 특이한 항체와 같은 세포막 결합 단백질이 될 수 있다. 반면, 보체 억제제는 작은 분자 또는 선형 또는. 예를 들면 컴프스타틴(compstatin), N-아세틸아스파르틸글루타민산(N-acetylasparylglutamic acid: NAAGA) 등과 같은 사이클릭 펩티드(cyclic peptide)가 될 수도 있다.
여기서 사용되는 바와 같이, "보체 활성제(complement activator)"라는 용어는 화합물, 조성물, 또는 보체 활성 또는 그의 생물학적 활동을 증가시키거나 활성화시키는 단백질을 언급하는 것이다. 보체 활동의 증가는 증대될 수도 있다(활동에서 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 증가). 보체 활성제는 용해성이거나 세포막 결합 단백질일 수도 있다. 상기 세포막 결합 단백질은, 예를 들면 코브라독 팩터(cobra venom factor: CVF) 및 그 생물학적 활성 단편뿐만 아니라 인간 Ig 이소타입 G1(IgG1), 인간 Ig 이소타입 M(Ig isotype M: IgM), 쥐 Ig 이소타입 G3(IgG3) 및 쥐 IgM Fc와 같은 막 결합 단백질, Ig 단백질들의 상기 Fc 도메인, 인간 IgG₁Fc도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG3 Fc 도메인 및 쥐 IgM Fc 도메인과 같은 막 결합 단백질이다. 보체 활성제들은 예를 들면, CVF 부분 및 보체 요소 3(C3)부분을 포함하는 하이브리드(hybrid) CVF를 포함할 수도 있다. 이 부분은 프리친거 등(Fritzinger et al.)의 "보체 체액 감소 상태를 치료하는 인간 C2/코브라 독 팩터 하이브리드 단백질의 기능적 특징(Functional characterization of human C3/cobra venom factor hybrid proteins for therapeutic complement depletion)", Develop, comp. Immunol.33(#):105~116(2009) 참조. 이러한 하이브리드들은 C3의 상기 113 또는 315 C-말단 잔기가 대응하는 CVF 서열들과 교체되는 단백질을 포함한다.
보체 억제제 단백질(Complement Inhibitor proteins)
구성물을 포함하는 용해성 조성물들이 제공되며, 상기 구성물은 (a) CR2 부분이 적어도 상기 CR2 단백질의 첫 번째 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분, 그리고 (b) 상기 CR2 부분이 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 보체 억제제 부분을 포함한다. 내생의 용해성(endogenous soluble)이고 보체를 억제하는 많은 세포막 결합 단백질들이 확인 된다. 이러한 보체 억제제 단백질은, 세포막 코팩터 단백질(MCP), 노화 촉진 인자(DAF/CD55), CD59, 쥐 보체 수용체 1-관련 유전자/단백질 y(Crry), 인간 보체 수용체 1(CR1) 및 팩터 H를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시예들에 있어서, 조성물의 상기 보체 조절제 부분은 보체 억제제 또는 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 인간 MCP, 인간 DAF, 쥐 DAF, 인간 CD59, 쥐 CD59 이소폼A, 쥐 CD59 이소폼 B, 쥐 Crry 단백질, 인간 CR1, 인간 팩터 H, 또는 쥐 팩터 H, 혹은 그 생물학적 활성 단편으로부터 선택된다.
세포막 코팩터 단백질(membrane cofactor protein: MCP)
여기서 사용되는 바와 같이, "세포막 코팩터 단백질"이라는 용어는 "MCP", 또는 "CD46"은 숙주 세포들에서 보체 활성을 억제하는 C3b/C4b-결합 세포 표면 당단백질에서 널리 이용되고, C3b 및 C4b의 상기 팩터 I-매개의 분열을 위한 코팩터 및 그와 유시한 역할을 한다(T. J. Oglesby et al., J.Exp.Med.(1992)175:1547-1551). MCP는 보체 활성의 조절제들("regulators of complement activation: RCA")로 알려진 과(family)에 속한다. 과의 구성은 보통 60개 70개 길이의 아미노산 사이에서 다양한 수의 짧은 콘센서스 반복(SCR) 도메인들을 포함하는 특정 구조를 가진 형태를 공유한다. 그 아미노-말단에서 시작하여, MCP는 4개의 SCR, 세린/트레오닌/프롤린이 가득한 영역, 정의되지 않은 기능의 부분, 막 관통 소수성 도메인, 세포질 앵커(cytoplasmic anchor) 및 세포질 테일(cytoplasmic tail)을 포함한다. 종들(species) 및 스트레인 변화(strain variation)들은 폐쇄된 펩티드들, 폴리펩티드들 및 단백질이 있고, 인간 MCP 또는 생물학적 활성 단편들은 모든 종들 및 스트레인 변화들을 포함한다.
SEQ ID NO:10은 상기 총 길이의(full-length) 인간 MCP 아미노산 서열을 나타낸다(UniProtKB/Swiss-Prot. Accesion No. P15529 참조). 아미노산들 1-34는 상기 신호 펩티드에 대응하고, 아미노산들 35-343은 세포외 도메인에 대응하고, 아미노산들 344-366은 막 관통 도메인에 대응하고, 아미노산들 367-392는 상기 세포질 도메인에 대응한다. 상기 세포외 도메인에서는, 아미노산들 35-96이 SCR1에 대응하고, 아미노산들 97-159는 SCR2에 대응하고, 아미노산들 160-225는 SCR3에 대응하고, 아미노산들 226-285는 SCR4에 대응하고, 아미노산들 302-326은 상기 세린/트레오닌-리치 도메인(serine/threonine-rich domain)에 대응한다. 종들 및 스트레인 변화(species and strain variation)는 상기 폐쇄된 펩티드들, 폴리펩티드들, 및 단백질들, MCP 또는 그 생물학적 활성 단편들이 모든 종들 및 스트레인 변화들을 포함하는 것들이 있다. 여기서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 MCP의 "생물학적 활성" 단편은 세포질 도메인 및 상기 막 관통 도메인을 모두 결여한 용해성 단편을 말하는 것으로, 총길이의 인간 MCP 단백질의 보체 억제제 활동을 약간 또는 모두 가지는, 상기 세린/트레오닌-리치 도메인을 가지고 있거나 가지고 있지 않은, 1, 2, 3 또는 4 SCR 도메인들로 구성되거나 필수적으로 포함하는 단편들을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제 부분은 총길이의 인간 MCP(SEQ ID NO:10의 아미노산들 35-392), 인간 MCP의 상기 세포외 도메인(SEQ ID NO:10의 아미노산들 35-343), 또는 인간 MCP의 SCR들 1-4(SEQ ID NO:10의 아미노산들 35-285)을 포함한다.
일 측면에 있어서, 조성물을 포함하는 용해성 구성물이 제공된다. 상기 구성물은, (a) CR2 부분이 CR2 단백질의 적어도 첫 번째 두 N-말단의 SCR 도메인들을 포함하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함하는 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분 그리고 (b) 상기 CR2 부분이 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 MCP를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 C3d, iC3dg, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수 분해 단편들을 선택적으로 연결한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 C3d, iC3dg, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들을 선택적으로 연결하고, 또한 EBV gp350에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 C3d, iC3dg, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들을 선택적으로 연결하고, 또한 IFNα에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합하고, 선택적으로 EBV gp350에 결합한다. 여기서 사용되는 바와 같이, "선택적으로 결합(selectively binds)"이라는 표현은 조성물이 하나의 리간드에 향상된 결합을 하는 것 및/또는 다른 리간드에 감소된 결합을 하는 것을 나타낸다. 예를 들면, "선택적으로 결합하다(seletively binds)"라는 표현은 1) 바뀐 조성물 제1 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합 친화력과 유사한 정도의 제1 리간드에 대한 결합 친화력을 가진다. 반면 바뀐 구성물은 제2 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물보다 더 낮은 친화도를 가지므로, 상기 바뀐 조성물은 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제1 리간드에 "선택적으로 결합한다", 2) 제2 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 유사한 제2 리간드에 결합을 유지하는 동안, 제1 리간드에 대한 상기 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제1 리간드에 대한 증가된 결합을 가지는 바뀐 조성물을 가시므로, 상기 조성물은 상기 두 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제1 리간드에 "선택적으로 결합한다", 또는 3) 바뀐 조성물은 제1 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 상기 결합과 비교하여 제1 리간드에 대해 증가된 결합을 가지고, 또한 제2 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 상기 결합과 비교하여 제2 리간드에 대한 더 낮은 결합 친화력을 가진다. 따라서 상기 바뀐 조성물은 제1 리간드와 "선택적으로 결합"하고, 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 두 번째 리간드와는 선택적으로 결합하지 않는다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물은 퓨전 단백질(fusion protein)이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 상기 보체 억제제 부분은 총 길이의 인간 MCP(SEQ ID NO:10)을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 조성물의 상기 보체 억제제 부분은 인간 MCP(SEQ ID NO:10)의 상기 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 인간 MCP의 상기 생물학적 활성 단편은 SCR1-4(SEQ ID NO:10의 아미노산 35-285), SCR1-4 플러스 상기 세린/트레오닌-리치 도메인(SEQ ID NO:10의 아미노산 35-326) 및 MCP의 상기 세포외 도메인(SEQ ID NO:10의 아미노산 35-343)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
노화 촉진 팩터(Decay Accelerating Factor: DAF)
CD55(DAF/CD55)(SEQ ID NO:11 및 SEQ ID NO:12)로 불리는, 노화 촉진팩터는 숙주 세포들에서 보체 활성을 억제하는 1~70 킬로달톤(kDa) 세포막-결합 당단백질이다. 몇몇의 다른 보체 조절 프로틴과 같이, DAF는 각기 약 60 개의 짧은 콘센서스 반복들(SCR)이라고 하는 아미노산 반복 모티프를 포함한다.
여기서 사용되는 바와 같이, "노화 촉진 팩터(decay accelerating factor)", "DAF" 또는 "CD55"라는 용어는 글리코실포스파티딜이노사톨("glycosylphosphatidylinositol: GPI")에 이어, 상기 분자를 증가시키는 C-말단에서의 막 표면으로부터 짙게 O-글리코실레이트화된 세린/트레오닌-리치도메인(heavily O-glycosylated serine/threonine-rich domain)에 이어, 네 개의 짧은 콘센서스 반복(SCR) 도메인들을 포함하는 70 킬로달톤("kD")막 당백질로 표시된다. DAF는 보체 단백질 C3을 분열하게 하는 막-결합 C3 컨버타아제(membrane-bound C3 convertase)를 용해함으로써 보체 활성으로부터 세포 표면을 보호하여 보체 케스케이드(complement cascade)를 증폭시킨다. DAF는 조립을 방해하거나 대체되고 고유한 보체 경로의 상기 C3- 및 C5- 콘버타아제의 노화를 촉진시킨다.
SEQ ID NO:11은 상기 총 길이의 인간 DAF 아미노산 서열을 나타낸다(UniProtKB/Swiss-Prot. Accession No. P08173 참조). SEQ ID NO;12는 총길이의 쥐 DAF 아미노산 서열을 나타낸다(UniProtKB/Swiss-Prot. Accession No. Q61475 참조). 인간 DAF 서열에서, 아미노산들 1-34는 신호 펩티드에 대응하고, 아미노산들 35-353은 성숙한 단백질에서 나타나고 아미노산들 354-381은 상기 폴리펩티드로부터 번역 후에 제거된다. 성숙 단백질 내부에, 아미노산들 35-96은 SCR1에 대응하고, 아미노산들 96-285는 SCR4에 대응하고, 아미노산들 287-353은 상기 O-글리코실레이티드 세린/트레오닌-리치 도메인에 대응한다. 상기 GPI 앵커는 위치 353에서 세린(serine)에서 인간 DAF에 부착된다. 상기 쥐 DAF 서열에서, 아미노산들 1-34는 신호 펩티드에 대응하고, 아미노산들 35-362는 성숙 단백질에서 나타나고, 아미노산들 363-390은 변역 후 상기 폴리펩티드로부터 제거된다. 상기 성숙 단백질 내부에서, 아미노산들 35-96은 SCR1에 대응하고, 아미노산들 97-160은 SCR2에 대응하고, 아미노산들 161-222는 SCR3에 대응하고, 아미노산들 223-286은 SCR4에 대응하고, 아미노산들 288-362는 O-글리코실레이티드 세린/트레오닌 -리치 도메인에 대응한다. 상기 GPI 앵커는 세린에서 위치 362에서 쥐 DAF에 부착된다. 종 및 스트레인 변형(species and strain variations)은 폐쇄 펩티드들, 폴리펩티드들, 및 단백질들에서 존재하고 DAF 또는 그 생물학적 활성 단편들은 모든 종들 및 스트레인 변형들을 망라한다. 여기서 사용되는 바와 같이, 상기 DAF의 "생물학적 활성" 단편은 부착된 곳(예를 들어 Ser-353)에서 GPI 앵커 및/또는 아미노산이 결여되는 DAF의 단편을 말한다.
생물학적 활성 단편은 총 길이의 DAF 단백질의 일부 또는 모든 모체 억제 활동을 가지는, O-글리코실레이티드 세린/트레오닌-리치 도메인이 있거나 없는, 1, 2, 3 또는 4 SCR 도메인들을 구성하거나 필수적으로 포함하는, 총길이의 DAF 단백의 단편들을 포함한다.
일 측면에 있어서, 구성물들을 포함하는 용해성 조성물이 제시된다. 상기 구성물은, (a) CR2 부분이 CR2 단백질의 첫 번째 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분, 및 (b) 상기 CR2 부분이 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 DAF를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3 단백질 가수분해의 단편에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 DAF를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3 단백질 가수분해의 단편에 결합하고 또한 EBV gp350에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3 단백질 가수분해의 단편에 결합하고 또한 IFNα에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합하고 선택적으로 EBV gp350에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 EBV gp350에 결합한다. 여기서 사용되는 바와 같이, "선택적으로 결합한다"라는 표현은 구성물(construct)이 하나의 리간드에 향상된 결합하는 것 및/또는 다른 리간드에 감소된 결합을 하는 것을 나타내는 것을 의미한다. 예를 들면, "선택적으로 결합한다"라는 표현은, 1) 상기 바뀐 구성물이 제2 리간드에 대해 바뀌지 않는 구성물보다 더 낮은 친화도를 가지는 반면, 바뀐 구성물은 바뀌지 않은 구성물의 제1 리간드에 대한 결합 친화도와 유사한 정도의 제1 리간드에 대한 결합 친화도를 가진다. 따라서 바뀐 구성물은 상기 두 리간드들에 대해 바뀌지 않은 구성물의 결합과 비교하여 제1 리간드에 "선택적으로 결합한다", 2) 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 구성물의 결합과 유사한 제2 리간드에 대한 결합을 유지하는 반면, 바뀐 구성물은 제1 리간드에 대한 바뀌지 않은 구성물의 결합과 비교하여 제1 리간드에 대해 증가된 결합력을 가진다. 따라서 상기 구성물은 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 구성물의 결합과 비교하면 제1 리간드에 "선택적으로 결합한다", 또는 3) 바뀐 구성물은 바뀌지 않은 구성물이 제2 리간드에 대한 결합과 비교하면 제1 리간드에 증가된 결합을 가진다. 그리고 바뀐 조성물은 제2 리간드에 대해, 상기 바뀌지 않은 조성물의 제2 리간드에 대한 결합력과 비교할 때 더 낮은 결합 친화도록 가진다. 따라서 상기 바뀐 구성물은 상기 두 리간드에 대한 바뀌지 않은 구성물의 결합력과 비교하면 제2 리간드에는 "선택적으로 결합"하고, 제2 리간드에 대해서는 선택적으로 결합하지 않는다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 보체 억제 부분은 총 길이의 인간 DAF를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 보체 억제 부분은 인간 DAF(SEQ ID NO:11)의 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 인간 DAF의 상기 생물학적 활성 단편은 SCR1-4(SEQ ID NO:11의 아미노산들 25-285) 및 SCR1-4플러스 O-글리코실레이티드 세린/트레오닌-리치 도메인(SEQ ID NO:11의 아미노산들 25-353)으로 구성된 그룹로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 보체 억제 부분은 총 길이의 쥐 DAF(SEQ ID NO:12)를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 보체 억제 부분은 쥐의 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 쥐 DAF의 상기 생물학적 활성 단편은 scr1-4(SEQ ID NO:12의 아미노산들 25-286) 및 SCR1-4 플러스 상기 O-글리코실레이티드 세린/트레오닌-리치 도메인(SEQ ID NO:12의 아미노산들 35-362)로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다.
CD59
여기서 사용되는 바와 같이, 용어"CD59"는 잠재적으로 보체의 상기 막 공격 복합체(MAC)를 억제하는 막-결합 128 아미노산 당단백질을 명명한다. CD59는 조립하는 도안에 상기 MAC의 상기 C8 및/또는 C9 조성물들에 결합함으로써 활동한다. 결국 상기 MAC의 핵심(heart)에서 오스모리틱 구멍(osmolytic pore)의 완전한 형태로 요구되는 C9의 다수의 카피들의 결합을 방지한다. CD59는 N- 및 O-글리코실레이티드이다. 상기 N-글리코실화는 락토스아민(lactosamine) 및 바깥쪽으로 퓨코오스 잔기(fucose residues)를 가지거나 가지지 않고, 일부 장소들에서 시아릴화(silaylation)가 있는, bi- 또는 tri- 구조들을 주로 포함한다. DAF, CD59 등이 글리코실포스파티일이노시톨("GPI;glycosylphospgatidylinositol")앵커에 의한 세포막에서의 앵커되는 것과 같이, 아미노산(102)에서 아스파라긴에 부착된다. 변경되지 않은 sCD59가 치료효과를 거의 가지지 못하게 하면서, CD59의 용해성 형태(sCD59)가 생산되지만, 체내에서, 특히 혈장내에서는, 보통 낮은 기능적 활동성을 가지게 된다. 에스 메리 등(S.Meri et al.)"용해성 CD59의 구조적 조성물 및 기능적 특징; 레이저-탈착 매스 스펙트롬적 분석에 의한 올리고당 및 글리코포스포이노시톨(GPI;glycophosphoinositol) 앵커의 이질성", Biochem, J. 316:923-935(1996).
SEQ ID NO:3은 상기 총길이의 인간 CD59 아미노산 서열을 나타낸다(UniProtKB/Swiss-Prot. Accession No.P13987을 참조하라);SEQ ID NO:6는 상기 총 길이의 쥐 CD59 서열, 이소폼 A를 나타낸다.(UniProtKB/Swiss-Prot. Accession No.055186);SEQ ID NO:7은 상기 총길이의 쥐 CD59 서열, 이소폼 B를 나타낸다(UniProtKB/Swiss-Prot. Accession No.58019). 인간 CD59 서열에서, SEQ ID NO:3의 아미노산 1-25는 상기 리더 펩티드에 대응하고, SEQ ID NO:3의 26-102는 상기 성숙 단백질에 대응하고, SEQ ID NO:3의 아미노산 103-128들은 번역 후 제거된다. 상기 GPI 앵커는 102위치의 아스파라긴에서 CD59에 있는 SEQ ID NO:3에 부착된다. 상기 쥐 CD59서열의 이소폼A에서, SEQ ID NO:6의 아미노산1-23은 상기 리더 펩티드에 대응하고, SEQ ID NO:6의 아미노산 24-96은 상기 성숙 단백질에 대응하고, SEQ ID NO:6의 아미노산들97-123은 번역후 제거된다. 상기 GPI 앵커는 SEQ ID NO:6의 위치(96)에서 세린에서 CD59에 부착된다. 상기 쥐CD59서열의 이소폼 B에서, SEQ ID NO:7의 아미노산 24-104는 성숙 단백질에 대응하고, SEQ ID NO:7의 아미노산 105-129는 번역후에 제거된다. 상기 GPI 앵커는 SEQ ID NO:7의 위치(104)에서 아스파라긴에서 CD59에 부착된다. 종들 및 종의 변형(specises and strain variations)은 폐쇄된 펩티드, 폴리펩티드, 및 단백질에서 존재하고 CD59 또는 그 생물학적 활성 단편들은 모든 종들 및 종의 변형을 망라한다.
여기서 사용되는 바와 같이, 인간 CD59의"생물학적으로 활성"단편이라는 용어는 GPI 앵커 및/또는 부착된 상기 아미노산(예를 들어 Asn-102)이 결여된 인간 CD59의 단편을 명명한다. 인간 CD59의"생물학적으로 활성"단편은 총 길이의 CD59단백질의 일부 또는 모든 보체 억제 활동을 가지는 상기 총길이의 인간 CD59의 단편; 및 부 쥐 CD59의 "생물학적으로 활성"단편은 쥐 CD59이소폼 A 또는 이소폼 B는 부착된 GPI 앵커 및/또는 상기 아미노산이 결여된 쥐 CD59 이소폼 A 또는 이소폼B로 언급하고(예를 들면, 이소폼 A의 Ser-96, 또는 이소폼 B의 Asp-104), 상기 총길이의 CD59 단백질의 일부 또는 모든 보체 억제 활동을 가지는 총 길이 쥐 CD59 단백질을 포함한다.
일 측면에서, 구성물(construct)들을 포함하는 용해성 조성물(soluble composition)이 제시된다. 상기 조성물은; (a) 상기 CR2 부분이 상기 CR2 단백질의 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는 것을 특징으로 하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분; 및 (b) 상기 CR2 부분이 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는; CD59를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 조성물는 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 로 하는; DAF를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합하고 또한 EBV gp350에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3 단백질가수분해의 단편에 결합하고 또한 IFNα에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합하고 선택적으로 EBV gp350에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 EBV gp350에 결합한다. 여기서 사용되는 바와 같이, "선택적으로 결합한다"라는 말은 조성물(construct)이 하나의 리간드에 향상된 결합하는 것 및/또는 다른 리간드에 감소된 결합을 하는 것을 나타내는 것을 의미한다. 예를 들면, "선택적으로 결합한다"라는 말은 1) 상기 바뀐 조성물이 제 2 리간드에 대해 바뀌지 않는 조성물보다 더 낮은 친화도를 가지는 반면, 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물의 제 1 리간드에 대한 결합 친화도와 유사한 정도의 제 1 리간드에 대한 결합 친화도를 가진다. 따라서 바뀐 조성물은 상기 두 리간드들에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제 1리간드에 "선택적으로 결합한다", 2) 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 유사한 제2 리간드에 대한 결합을 유지하는 반면, 바뀐 조성물은 제 1 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제 1리간드에 대해 증가된 결합력을 가진다. 따라서 상기 조성물은 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하면 제1 리간드에 "선택적으로 결합한다"; 또는 3) 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물이 제 2 리간드에 대한 결합과 비교하면 제 1 리간드에 증가된 결합을 가진다. 그리고 바뀐 조성물은 제 2 리간드에 대해, 상기 바뀌지 않은 조성물의 제 2 리간드에 대한 결합력과 비교할 때 더 낮은 결합 친화도록 가진다. 따라서 상기 바뀐 조성물은 상기 두 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합력과 비교하면 제 2 리간드에는 "선택적으로 결합"하고, 제 2 리간드에 대해서는 선택적으로 결합하지 않는다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물의 보체 억제제 부분은 총길이의 인간 CD59(SEQ ID NO:3)을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물의 보체 억제제 부분은 인간 CD59(SEQ ID NO:3)의 생물학적활성 부분을 포함한다. 일부 실시예들에서, 인간 CD59의 상기 생물학적 활성 단편은 그 GPI 앵커(SEQ ID NO:3의 아미노산 26-101)가 결여된 인간 CD59의 세포외 도메인을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물의 보체 억제제 부분은 총 길이 쥐 CD59, 이소폼A를 포함한다(SEQ ID NO:6). 일부 실시예들에서, 쥐 CD59, 이소폼A의 상기 생물학적 활성 단편은 그 GPI 앵커(SEQ ID NO:6의 아미노산 24-95)가 결여된 쥐 CD59, 이소폼 A의 상기 세포외 도메인을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물의 보체 억제제 부분은 총길이의 쥐 CD59, 이소폼 B을 포함한다(SEQ ID NO:7). 일부 실시예들에서, 상기 구성물의 보체 억제제 부분은 쥐 CD59의 생물학적 활성 단편, 이소폼 B을 포함한다(SEQ ID NO:7). 일부 실시예들에서, 쥐 CD59의 상기 생물학적 활성단편, 이소폼 B는 CD59의 상기 세포외 도메인, 그 GPI 앵커가 결여된 이소폼 B를 포함한다(SEQ ID NO:7의 아미노산 24-103).
쥐 보체 수용체 1-관련 유전자/단백질 y(Crry;Mouse Complement Receptor 1-related Gene/protein y)
여기서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 "쥐 보체 수용체 1-관련 유전자/단백질 y" 또는 "Crry"는 그 호모로그(homologs)들을 포함gkd, 보체 활성을 조절하는 세포막-결합 쥐 당단백질을 명명한다. Crry는 보체 팩터I, 숙주세포에서 C3b와 C4b를 분할하는 세린 프로테아제(serine protease)를 위해 코팩터로서의 역할을 함으로써 보체 활성을 조절한다. Crry는, C4b2a 및 C3bBb의 형성, 상기 보체 케스케이드의 촉진 전환효소로(convertases of the complement cascade)의 형성을 방지하면서, 노화 촉진인 팩터로서 활동한다.
SEQ ID NO:4는 총 길이의 쥐 Crry 단백질 아미노산 서열을 나타낸다. 아미노산1-40은 상기 리더 펩티드에 대응하고, SEQ ID NO:4의 아미노산 41-483은 상기 성숙 단백질에 대응하고, SEQ ID NO:4의 아미노산 41-405를 포함하는 것은, 세포외 도메인에 대응하고, SEQ ID NO:4의 아미노산 406-426은 막관통 도메인(transe membrane domain)에 대응하고, SEQ ID NO:4의 아미노산 427-483은 세포질 도메인에 대응한다. 상기 세포외 도메인에서, SEQ ID NO:4의 아미노산 83-143은 SCR1에 대응하고, SEQ ID NO:4의 아미노산 144-205는 SCR2에 대응하고, SEQ ID NO:4의 아미노산 206-276은 SCR3에 대응하고, SEQ ID NO:4의 아미노산 277-338은 SCR4에 대응하고, SEQ ID NO:4의 아미노산 339-400은 SCR5에 대응한다. 종들 및 스트레인 변형들(species and strain varitations)은 폐쇄 펩티드, 폴리펩티드들, 당단백질에서 존재하고, 쥐 Crry 단빌질 또는 그 생물학적 활성 단편들은 모든 종들 및 스트레인 변형들을 망라한다. 여기서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 쥐 Crry의"생물학적 활성"단편은 상기 막관통 도메인 및 사이토플라즈믹 도메인이 결여된 쥐 Crry의 용해성 단편을 명명한다. 상기 용어 쥐 Crry의"생물학적 활성"단편은, 1, 2, 3, 4 또는 5SCR 도메인들을 포함하고, 필수적으로 구성하거나, 함유하는 단편들을 포함하고, 상기 총길이의 Crry 단백질의 일부 또는 모든 상기 보체 억제 활동을 보유하는 상기 총길이의 쥐 Crry 단백질의 단편을 포함한다.
일 측면에서, 구성물(construct)들을 포함하는 용해성 조성물(soluble composition)이 제시된다. 상기 조성물은; (a)상기 CR2 부분이 상기 CR2 단백질의 첫 번 째 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는 것을 특징으로 하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체2(CR2)부분; 및 (b)상기 CR2 부분이 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는; Crry를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 조성물는 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 로 하는; DAF를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합하고 또한 EBV gp350에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합하고 또한 IFNα에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합하고 선택적으로 EBV gp350에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 EBV gp350에 결합한다. 여기서 사용되는 바와 같이, "선택적으로 결합한다"라는 말은 조성물(construct)이 하나의 리간드에 향상된 결합하는 것 및/또는 다른 리간드에 감소된 결합을 하는 것을 나타내는 것을 의미한다. 예를 들면, "선택적으로 결합한다"라는 말은;1) 상기 바뀐 조성물이 제 2 리간드에 대해 바뀌지 않는 조성물보다 더 낮은 친화도를 가지는 반면, 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물의 제 1 리간드에 대한 결합친화도와 유사한 정도의 제 1 리간드에 대한 결합친화도를 가진다. 따라서 바뀐 조성물은 상기 두 리간드들에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제 1리간드에 "선택적으로 결합한다";2) 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 유사한 제 2 리간드에 대한 결합을 유지하는 반면, 바뀐 조성물은 제 1 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제 1리간드에 대해 증가된 결합력을 가진다. 따라서 상기 조성물은 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하면 제 1 리간드에 "선택적으로 결합한다"; 또는 3) 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물이 제 2 리간드에 대한 결합과 비교하면 제 1 리간드에 증가된 결합을 가진다. 그리고 바뀐 조성물은 제 2 리간드에 대해, 상기 바뀌지 않은 조성물의 제 2 리간드에 대한 결합력과 비교할 때 더 낮은 결합 친화도록 가진다. 따라서 상기 바뀐 조성물은 상기 두 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합력과 비교하면 제 2 리간드에는 "선택적으로 결합"하고, 제 2 리간드에 대해서는 선택적으로 결합하지 않는다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물의 상기 보체 억제제 부분은 총길이의 쥐 Crry 단백질(SEQ ID NO:4)를 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물의 보체 억제제 부분은 쥐 Crry 단백질(SEQ ID NO:4)의 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에서 쥐 Crry 단백질의 상기 생물학적 활성 단편은 SCR1-5(SEQ ID NO:4의 아미노산 41-400) 및 쥐 Crry 단백질의 세포외 도메인(SEQ ID NO:4의 아미노산 41-405)로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
보체 수용체 1(Complement Receptor 1: CR1)
여기서 사용되는 바와 같이, 상기 용어"보체 수용체1(complement receptor)", "CR1", 또는 "CD35" 는 호모로그(homologs)를 포함하여,220킬로달톤("kD")의 예상된 분자 무게를 가진, 2039의 인간 유전자 인코딩 단백질을 명명한다. 상기 유전자는 주로 적혈구(erythrocyte)들, 단핵 백혈구(monocyte)들, 호중성 백혈구(neutrophils), 및 B 세포들에서 주로 나타나고, 일부 T림프구, 비만세포들, 및 신사구체 족세포(glomerular podocyte)들에서도 존재한다. CR1단백질은 보통 세포당 100에서 1000 개가 나타나나다. CR1은 프로세싱하고, 보체 옵소닌화 면역 복합체를 제거하는 주시스템이다. CR1은 상기 보체 케스케이드를 부정적으로 조절하고, 면역점착반응(immune adherence) 및 식균작용(phagocytosis)를 매개하고, 상기 고유의 또는 대체되는 보체 경로들을 모두 억제한다. 상기 총길이의 CR1 단백질은 42아미노산 신호 펩티드, 1930아미노산들의 세포외 도메인, 25아미노산 막통과 도메인, 및 43 아미노산 C-말단 세포질 도메인을 포함한다. CR1의 상기 세포외 도메인은 25잠재적 N-글리코실화 신호 서열을 가지고, 30개의 짧은 콘센서스("SCR;short consensus")를 포함하고, 또한 보체 조절 단백질(CCP)반복 또는 스시 도메인(sushi domain)들로서 각 60~70 아미노산의 길이를 가지고 있는 것으로 알려져있다. SCR들 사이의 상기 서열 호모로지(homology)는 60-99퍼센트 사이의 범위에 있다. 상기 30 SCR 도메인들은 긴 상동하는 반복("LHRs;long homologous repeats")로 불리는 네 개의 더 긴 영역들로 더 그룹되어져, 각기 상기 CR1 단백질의 약 45kD 부분들을 암호화하여, LHR-A,-B, -C 및 -D로 지정된다. LHR-D가 9SCR 도메인들을 포함하는 반면, LHR-A,-B, -C 는 7개의 SCR 도메인들을 각 포함한다. CR1 단백질의 상기 세포외 도메인에서 상기 활성화 장소는 아미노산 42-295를 포함하는 SCR들1-4에서 C3b에 대해 더 낮은 친화도를 가지는 C4b-결합 장소, 아미노산 490-745를 포함하는 SCR들 8-11에서 C4b에 대해 더 낮은 친화도를 갖는 C3b-결합 장소, 아미노산 940-1196을 포함하는 SCR들 15-18에서 C4b에 대해 더 낮은 친화도를 갖는 C3b-결합 장소, 및 아미노산 1394-1842를 포함하는 SCR들 22-28에서 Clq-결합 장소들을 포함한다.
SEQ ID NO;9는 총 길이의 인간 CR1 아미노산 서열을 나타낸다(UniProtKB/Swisss-Prot. Accession No.P17927 참조). 아미노산 1-41은 상기 신호 펩티드에 대응하고, 아미노산 42-2039는 상기 성숙 단백질에 대응하고, 아미노산 42-1971을 포함하는 것은 상기 세포외 도메인에 대응하고, 아미노산 1972-1996은 상기 막관통 도메인에 대응하고, 아미노산 1997-2039는 세포질 도메인에 대응한다. 상기 세포외 도메인에서, 아미노산 42-101은 SCR1에 대응하고, 102-163은 SCR2에 대응하고, 아미노산 164-234는 SCR3에 대응하고, 아미노산 236-295는 SCR4에 대응하고, 아미노산 295-355는 SCR5에 대응하고, 아미노산 356-418는 SCR6에 대응하고, 아미노산 419-489는 SCR7에 대응하고, 아미노산 491-551는 SCR8에 대응하고, 아미노산 552-613는 SCR9에 대응하고, 아미노산 614-684는 SCR10에 대응하고, 아미노산 686-745는 SCR11에 대응하고, 아미노산 745-805는 SCR12에 대응하고, 아미노산 806-868는 SCR13에 대응하고, 아미노산 869-939는 SCR14에 대응하고,아미노산 941-1001는 SCR15에 대응하고, 아미노산 1002-1063는 SCR16에 대응하고, 아미노산 1064-1134는 SCR17에 대응하고, 아미노산 1136-1195는 SCR18에 대응하고, 아미노산 1195-1255는 SCR19에 대응하고, 아미노산 1256-1318는 SCR20에 대응하고, 아미노산 1319-1389는 SCR21에 대응하고, 아미노산 1394-1454는 SCR22에 대응하고, 아미노산 1455-1516는 SCR23에 대응하고, 아미노산 1517-1587는 SCR24에 대응하고, 아미노산 1589-1648는 SCR25에 대응하고, 아미노산 1648-1708은 SCR26에 대응하고, 아미노산 1709-1771는 SCR27에 대응하고, 아미노산 1772-1842는 SCR28에 대응하고, 아미노산 1846-1906는 SCR29에 대응하고, 아미노산 1907-1967는 SCR30에 대응한다. 종들 및 스트레인 변형은 페쇄 펩티드들, 폴리펩티드들, 및 단백질에서 존재하고 CR1 단백질 또는 그 생물학적 단편은 모든 종들 및 스트레인 변형들을 망라한다. 여기서 사용되는 바와 같이, 상기 용어, CR1의"생물학적 활성"단편은 상기 막관통 도메인 및 상기 세포질 도메인이 결여된 CR1의 용해성 단편을 명명한다. CR1의"생물학적 활성"단편은, 상기 총 길이의 CR1 단백질의 일부 또는 전부의 상기 보체 억제제 활동을 보유하는 상기 총길이의 CR1단백질의 단편들을 포함하는, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30 SCR 도메인들을 포함하거나, 필수적으로 구성되거나, 구성되는 단편들을 포함한다.
일 측면에서, 구성물(construct)들을 포함하는 용해성 조성물(soluble composition)이 제시된다. 상기 조성물은, (a) 상기 CR2 부분이 상기 CR2 단백질의 첫 번 째 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는 것을 특징으로 하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분; 및 (b) 상기 CR2 부분이 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는; CR1를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 로 하는; DAF를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합하고 또한 EBV gp350에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합하고 또한 IFNα에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합하고 선택적으로 EBV gp350에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 EBV gp350에 결합한다. 여기서 사용되는 바와 같이, "선택적으로 결합한다"라는 말은 조성물(construct)이 하나의 리간드에 향상된 결합하는 것 및/또는 다른 리간드에 감소된 결합을 하는 것을 나타내는 것을 의미한다. 예를 들면, "선택적으로 결합한다"라는 말은;1) 상기 바뀐 조성물이 제 2 리간드에 대해 바뀌지 않는 조성물보다 더 낮은 친화도를 가지는 반면, 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물의 제 1 리간드에 대한 결합친화도와 유사한 정도의 제 1 리간드에 대한 결합친화도를 가진다. 따라서 바뀐 조성물은 상기 두 리간드들에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제 1리간드에 "선택적으로 결합한다";2) 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 유사한 제 2 리간드에 대한 결합을 유지하는 반면, 바뀐 조성물은 제 1 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제 1리간드에 대해 증가된 결합력을 가진다. 따라서 상기 조성물은 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하면 제 1 리간드에 "선택적으로 결합한다"; 또는 3) 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물이 제 2 리간드에 대한 결합과 비교하면 제 1 리간드에 증가된 결합을 가진다. 그리고 바뀐 조성물은 제 2 리간드에 대해, 상기 바뀌지 않은 조성물의 제 2 리간드에 대한 결합력과 비교할 때 더 낮은 결합 친화도록 가진다. 따라서 상기 바뀐 조성물은 상기 두 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합력과 비교하면 제 2 리간드에는 "선택적으로 결합"하고, 제 2 리간드에 대해서는 선택적으로 결합하지 않는다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물의 보체 억제제 부분은 총길이의 인간 CR1 단백질(SEQ ID NO:9)을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물의 상기 보체 억제제 부분은 인간 CR1단백질의 생물학적 활성 단편을 포함한다(SEQ ID NO:9). 일부 실시예들에서, 인간 CR1단백질의 상기 생물학적 활성 단편은 SCR1-3(SEQ ID NO:9의 아미노산 42-684), SCR1-4(SEQ ID NO:9의 아미노산 42-295), SCR1-10(SEQ ID NO:9의 아미노산 42-684), SCR8-10(SEQ ID NO:9의 아미노산 941-1134), SCR8-11(SEQ ID NO:9의 아미노산 491-745), SCR15-17(SEQ ID NO:9의 아미노산 941-1195), SCR22-28(SEQ ID NO:9의 아미노산 1394-1842)로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
팩터 H(FH)
여기서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 "보체 팩터 H", "팩터 H", 또는 "FH"는 그 호모로그(homolog)를 포함하는 단일 폴리펩티드 사슬 플라즈마 당단백질인, 보체 팩터 H를 명명한다. 상기 단백질은 20개의 유지되는 약 60 아미노산의 짧은 콘센서스 반복(SCR) 도메인들이 포함되고, 비드들의 스트링(stiring of beads)과 같이 계속되는 형태로 배치되어, 각 2-6아미노산들의 짧은 링커 서열들로서 분리된다. 팩터 H는 C3b에 결합하고, 상기 대체 경로 C3-컨버타아제(C3Bb)의 상기 노화를 촉진시키고, C3b의 상기 가수분해 비활성역 코팩터로서 역할을 한다. 팩터 H의 존재가 존재하므로, 팩터 I에 의한 단백질 가수분해가 C3b의 분열 및 비활성 하게 한다. 팩터 H는 적어도 세 개의 C3b에 대한 명백한 결합 도메인을 가진다. C3b에 대한 결합 도메인은 SCR들 1-4, SCR들5-8, 및 SCRefm 19-20 내부에 위치한다. 팩터 H의 각 장소는 상기 C3b 단백질 내부의 명백한 영역에 결합한다; 상기 N-말단은 본래의 C3b에 결합한다; 제 2 위치는, 팩터 H의 상기 중간 영역에 위치하고, 상기 C3c 단편 및 SCR 19 내부에 위치한 장소에 부착하고, 20은 상기 C2d 영역에 결합한다. 부가적으로, 팩터 H는 또한 헤파린에 대한 결합 장소들을 포함한다. 상기 결합장소는 팩터 H의 SCR7, SCR 들 5-12, SCR20에 위치하여 상기 C3b 결합 장소에 오버랩된다. 구조적, 기능적 분석은 팩터 H의 상기 보체 억제 운동의 상기 도메인이 첫 번째 4개의 N-말단 SCR 도메인 내부에 위치한다.
SEQ ID NO:5는 상기 총 길이의 인간 팩터 H 아미노산 서열(UniPROTKB/Swiss-Prot.Accession 제 P08603호 참조);SEQ ID NO:8은 상기 총 길이의 인간 팩터 H 아미노산 서열(UniPROTKB/Swiss-Prot.Accession 제 P06909호 참조). 상기 인간 팩터 H 서열 내에, SEQ ID NO:5의 아미노산 1-18은 상기 신호 펩티드에 대응하고, SEQ ID NO:5의 아미노산 19-1231은 상기 성숙 단백질에 대응한다. 단백질 내부에, SEQ ID NO:5의 아미노산 21-80은 SCR1에 대응하고, SEQ ID NO:5의 아미노산 85-141은 SCR2에 대응하고, SEQ ID NO:5의 아미노산 146-205은 SCR3에 대응하고, SEQ ID NO:5의 아미노산 210-262는 SCR4에 대응하고, SEQ ID NO:5의 아미노산 267-320은 SCR5에 대응한다. 상기 쥐 팩터 H 서열 내에서, SEQ ID NO:8의 아미노산 1-18은 상기 신호 펩티드에 대응하고, SEQ ID NO:8의 아미노산 19-1234은 상기 성숙 단백질에 대응한다. 상기 단백질 내부에, SEQ ID NO:8의 아미노산 19-82은 SCR1에 대응하고, SEQ ID NO:8의 아미노산 83-143은 SCR2에 대응하고, SEQ ID NO:8의 아미노산 144-207은 SCR3에 대응하고,SEQ ID NO:8의 아미노산 208-264은 SCR4에 대응하고, SEQ ID NO:8의 아미노산 265-322은 SCR5에 대응한다. 종들 및 스트레인 변형들은 상기 폐쇄 펩티드들, 폴리펩티드들, 및 단백질들에 존재하고, 그 팩터 H 또는 생물학적 활성 단편들은 모든 종들 및 스트레인 변형들을 망라한다.
여기서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 팩터 H의"생물학적 활성"단편은 상기 촐 길이의 팩터 H 단백질의 일부 또는 전부의 상기 보체 억제 활동을 보유하는 팩터 H의 부분을 명명한다. 그리고 팩터 H의"생물학적 활성"단편은 SCR들 1-4, SCR들 1-5, SCR들 1-8, SCR들 1-18, SCR들 19-20 또는 자연 발생의 팩터 H 또는 그 단편들의 호모로그(homolog)들을 포함하는 팩터 H 단편들을 포함하지만 그에 국한되지는 않는다. 일부 실시예들에서, 팩터 H의 상기 생물학적 활성 단편은 하나 또는 그 이상의 상기 아래 부분들을 포함한다. (1) C-반응 단백질(CRP)에 결합하는 것, (2) C3b에 결합하는 것, (3) 헤파린에 결합하는 것, (4) 시알린 산(sialic acid)에 결합하는 것, (5) 내피 세포 표면들에 결합하는 것, (6) 세포의 인테그린 수용체에 결합하는 것, (7) 병원체(pathogen)에 결합하는 것, (8)C3b 코 팩터 활동, (9)C3b 노화-촉진 활동, 및 (10)상기 대체 보체 경로를 억제하는 것을 포함한다.
일 측면에서, 구성물(construct)들을 포함하는 용해성 조성물(soluble composition)이 제시된다. 상기 조성물은; (a) 상기 CR2 부분이 상기 CR2 단백질의 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는 것을 특징으로 하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체2(CR2)부분; 및 (b)상기 CR2 부분이 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는; FH를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 로 하는; DAF를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합하고 또한 EBV gp350에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합하고 또한 IFNα에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합하고 선택적으로 EBV gp350에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 EBV gp350에 결합한다. 여기서 사용되는 바와 같이,"선택적으로 결합한다"라는 말은 조성물(construct)이 하나의 리간드에 향상된 결합하는 것 및/또는 다른 리간드에 감소된 결합을 하는 것을 나타내는 것을 의미한다. 예를 들면, "선택적으로 결합한다"라는 말은;1) 상기 바뀐 조성물이 제 2 리간드에 대해 바뀌지 않는 조성물보다 더 낮은 친화도를 가지는 반면, 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물의 제 1 리간드에 대한 결합친화도와 유사한 정도의 제 1 리간드에 대한 결합친화도를 가진다. 따라서 바뀐 조성물은 상기 두 리간드들에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제 1리간드에 "선택적으로 결합한다";2) 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 유사한 제 2 리간드에 대한 결합을 유지하는 반면, 바뀐 조성물은 제 1 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제 1리간드에 대해 증가된 결합력을 가진다. 따라서 상기 조성물은 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하면 제 1 리간드에 "선택적으로 결합한다"; 또는 3) 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물이 제 2 리간드에 대한 결합과 비교하면 제 1 리간드에 증가된 결합을 가진다. 그리고 바뀐 조성물은 제 2 리간드에 대해, 상기 바뀌지 않은 조성물의 제 2 리간드에 대한 결합력과 비교할 때 더 낮은 결합 친화도록 가진다. 따라서 상기 바뀐 조성물은 상기 두 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합력과 비교하면 제 2 리간드에는 "선택적으로 결합"하고, 제 2 리간드에 대해서는 선택적으로 결합하지 않는다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물의 상기 보체 억제 부분은 총 길이의 인간(SEQ ID NO:5) 또는 쥐(일측면에서, 구성물(construct)들을 포함하는 용해성 조성물(soluble composition)이 제시된다. 상기 조성물은; (a)상기 CR2 부분이 상기 CR2 단백질의 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는 것을 특징으로 하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체2(CR2)부분; 및 (b)상기 CR2 부분이 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는; CR1를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 로 하는; DAF를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합하고 또한 EBV gp350에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3 단백질가수분해의 단편에 결합하고 또한 IFNα에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합하고 선택적으로 EBV gp350에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 EBV gp350에 결합한다. 여기서 사용되는 바와 같이, "선택적으로 결합한다"라는 말은 조성물(construct)이 하나의 리간드에 향상된 결합하는 것 및/또는 다른 리간드에 감소된 결합을 하는 것을 나타내는 것을 의미한다. 예를 들면, "선택적으로 결합한다"라는 말은;1) 상기 바뀐 조성물이 제 2 리간드에 대해 바뀌지 않는 조성물보다 더 낮은 친화도를 가지는 반면, 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물의 제 1 리간드에 대한 결합친화도와 유사한 정도의 제 1 리간드에 대한 결합친화도를 가진다. 따라서 바뀐 조성물은 상기 두 리간드들에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제 1리간드에 "선택적으로 결합한다";2) 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 유사한 제 2 리간드에 대한 결합을 유지하는 반면, 바뀐 조성물은 제 1 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제 1리간드에 대해 증가된 결합력을 가진다. 따라서 상기 조성물은 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하면 제 1 리간드에 "선택적으로 결합한다"; 또는 3) 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물이 제 2 리간드에 대한 결합과 비교하면 제 1 리간드에 증가된 결합을 가진다. 그리고 바뀐 조성물은 제 2 리간드에 대해, 상기 바뀌지 않은 조성물의 제 2 리간드에 대한 결합력과 비교할 때 더 낮은 결합 친화도록 가진다. 따라서 상기 바뀐 조성물은 상기 두 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합력과 비교하면 제 2 리간드에는 "선택적으로 결합"하고, 제 2 리간드에 대해서는 선택적으로 결합하지 않는다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물의 상기 보체 억제 부분은 총 길이의 인간(SEQ ID NO:5) 또는 쥐 (SEQ ID NO:8) 팩터 H를 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물의 상기 보체 억제 부분은 인간(SEQ ID NO:5)의 생물학적 활성 단편 또는 쥐(SEQ ID NO:6)의 팩터를 포함한다. 일부 실시예들에서, 인간 팩터 H(SEQ ID NO:5)의 상기 생물학적 활성 단편은 SCR들 1-4(SEQ ID NO:5의 아미노산 21-262), 팩터 H의 SCR들 1-5(SEQ ID NO:5의 아미노산 21-320), 팩터 H의 SCR들 1-8(SEQ ID NO:5의 아미노산 21-1104)를 포함한다. 일부 실시예들에서, 쥐 팩터 H(SEQ ID NO:8)의 상기 생물학적 활성 단편은 SCR들 1-4(SEQ ID NO:8의 아미노산 19-264), 인간 팩터 H의 SCR들 1-5(SEQ ID NO:8의 아미노산 19-322), 인간 팩터 H의 SCR들 1-8(SEQ ID NO:8의 아미노산 19-507), 및 인간 팩터 H의 SCR들 1-18(SEQ ID NO:8의 아미노산 19-1109)를 포함한다. 일부 실시예들에서, 인간(SEQ ID NO:5) 또는 쥐(SEQ ID NO:8)팩터 H의 상기 생물학적 활성 단편은 팩터 H의 적어도 상기 첫 번 째 네 N-말단 SCR 도메인들(로 구성되거나 필수적으로 구성되는 일부 실시예들에서), 예를 들면, 적어도 하나의 첫 번째 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 또는 그 이상의 팩터 H의 N-말단 SCR 도메인들을 포함한다.
보체 촉진 단백질들(Complement Activator Proteins)
이하 구성물을 포함하는 용해성 조성물에서, 상기 구성물은;(a) 상기 CR2단백질이 상기 CR2 단백질의 적어도 첫 번째 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는 것을 특징으로 하는, 상기 SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함하는 보체 수용체2(CR2)부분; 및(b)상기 CR2 부분이 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 보체 촉진 부분을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물은 퓨전 단백질이다. 보체를 활성화시키는 많은 내생의(endogenous) 용해성 단백질이 또한 확인된다. 이러한 보체 촉진제들은 코브라 독 팩터(CVF) 및 그 생물학적 활성 단편들 뿐만 아니라 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입 M(IgM), 쥐 Ig 이소타입 G₃(IgG₃), 및 쥐 IgMFc를 포함하는 다양한 면역글루블린(Ig)단백질들을 포함하지만 이게 국한되지 않는다. Ig 단백질의 상기 보체 활성 활동은 상기 Fc 도메인에 국한된다. 따라서 보체-활성의 인간 및 쥐 Ig 단백질의의 생물학적-활성 단편들은 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgMFc 도메인, 인간 IgG₃Fc 도메인, 및 쥐 IgMFc 도메인과 같은 상기 Fc 도메인을 포함한다.
면역 글루블린 단백질들(Immunoglobulin Proteins)
여기서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 "항체" 또는 "면역 글루블린"은 단백질들의 상기 면역 글루블린(Ig)의 상과(immunoglobulin superfamily)를 명명한다. 항체 또는 면역글루블린(Ig)분자는 두 개의 동일한 경사슬 폴리펩티드들(two identical light chain polypeptides) 및 두개의 동일한 중사슬 폴리펩티드(two identical heavy chain polypeptides)를 포함하는 4분자체이다.
상기 면역 시스템은 중 사슬 폴리펩티드의 상기 특정 클래스에 의해 각기 구별되는 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM을 포함하는 Ig 분자들(이소타입들)의 몇몇의 다른 클래스들을 생성한다: IgA에서 발견되는 알파(α), IgD에서 발견되는 델타(δ), IgE에서 발견되는 엡실론(ε), IgG에서 발견되는 감마(γ), IgM에서 발견되는 무(μ).반대로, 카파(κ) 및 람다(λ)사슬로 명명되는 단일 경사슬 폴리펩티드 이소타입들이 있다. 상기 항체 이소타입들의 독특한 특징들은 상기 중사슬 연쇄 도메인의 서열에 의해 정의된다.
IgG 분자는 이황화 결합에 의해 두개의 경사슬들(카파(κ) 및 람다(λ)의 형태) 및 두 개의 중사슬들(감마(γ)형태)로 함께 결합된다. IgG 경사슬의 카파(κ) 및 람다(λ)의 형태는 가변영역이라 불리는("VL-", "Vκ"또는 "Vλ-영역" 이라고 다양하게 명명됨)상대적으로 가변적인 아미노산 서열의 도메인 및 상기 불변부(CL-영역)라고 불리는 비교적 보존 아미노산 서열들을 모두 포함한다. 유사하게도, 각 IgG 중사슬은 다양한 영역(
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영역) 및 하나 또는 그 이상의 보존 영역(conserved region)들을 포함한다. 완벽한 IgG 중사슬은 세 불변 도메인들("CH1-", "CH2-" 및 "CH3-영역들") 그리고 그 힌지영역(hinge region)을 포함한다. 각 "VL-" 또는 "VH-" 영역 내부에, 보체-결정 영역들("CDR")이라고 알려진 초가변 영역들(hypervariable region)이 비교적 보존 프레임워크 영역("FR;framework region")들 사이에 끼여 있다. 보통, 상기 경사슬 또는 중사슬 폴리펩티드의 상기 가변부는 상기 폴리펩티드에 따른 상기 아래의 순서에 따라 배치된 네 개의 FR 및 세 개의 CDR을 포함한다. NH2-FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-COOH. 상기 CDR 및 FR은 함께 IgG 연결 장소의 상기 3차원구조를 정하고, 따라서 상기 특정 표적 단백질 또는 항원이 IgG 분자에 결합하게 된다. 각 IgG 분자는 2량체(dimeric)이고, 2개의 항원 분자에 결합할 수 있다. 상기 프로테아제 파파인(protease papain)을 가지는 이량체 IgG의 분열은 두 개의 동일한 항원 결합 단편들("Fab; antigen binding fragments") 및"Fc"단편들 또는 Fc 도메인들을 생성한다.
일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물은 다음과 같은 구성물을 포함한다. 상기 구성물은 (a) 상기 CR2 일부는 CR2단백질의 적어도 첫번째 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는 것을 특징으로 하는, SEQ ID NO:1의 CR2 단백질을 포함하는 보체수용체2(CR2)일부 또는 생물학적으로 활성 단편 및 (b) 다음과 같은 보체 활성 부분을 포함한다. 보체 활성 부분은; 인간 이소타입G₁( IgG₁), 인간 Ig 이소타입M(IgM), 쥐 이소타입 G₃(IgG₃), 쥐 IgM Fc , 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃Fc 도메인, 쥐 IgMFc 도메인 및 상기 CR2 부분이 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 것을 구성되는 것으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 C3d, iC3dg, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단의 SCR도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들을 선택적으로 연결한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 C3d, iC3dg, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단의 SCR도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들을 선택적으로 연결한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 C3d, iC3dg, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단의 SCR도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들을 선택적으로 연결하고, 또한 EBV gp350에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 C3d, iC3dg, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단의 SCR도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들을 선택적으로 연결하고, 또한 IFNα에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2는 선택적으로 IFNα에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합하고 또한 EBV gp350에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 EBV gp350에 선택적으로 결합한다. 여기서 사용되는 바와 같이, "선택적으로 결합한다"라는 말은 조성물(construct)이 하나의 리간드에 향상된 결합하는 것 및/또는 다른 리간드에 감소된 결합을 하는 것을 나타내는 것을 의미한다. 예를 들면, "선택적으로 결합한다"라는 말은;1) 상기 바뀐 조성물이 제 2 리간드에 대해 바뀌지 않는 조성물보다 더 낮은 친화도를 가지는 반면, 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물의 제 1 리간드에 대한 결합친화도와 유사한 정도의 제 1 리간드에 대한 결합친화도를 가진다. 따라서 바뀐 조성물은 상기 두 리간드들에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제 1리간드에 "선택적으로 결합한다";2) 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 유사한 제 2 리간드에 대한 결합을 유지하는 반면, 바뀐 조성물은 제 1 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제 1리간드에 대해 증가된 결합력을 가진다. 따라서 상기 조성물은 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하면 제 1 리간드에 "선택적으로 결합한다"; 또는 3) 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물이 제 2 리간드에 대한 결합과 비교하면 제 1 리간드에 증가된 결합을 가진다. 그리고 바뀐 조성물은 제 2 리간드에 대해, 상기 바뀌지 않은 조성물의 제 2 리간드에 대한 결합력보다 더 낮은 결합 친화도록 가진다. 따라서 상기 바뀐 조성물은 상기 두 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합력과 비교하면 제 2 리간드에는 "선택적으로 결합"하고, 제 2 리간드에 대해서는 선택적으로 결합하지 않는다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물의 상기 보체 활성 부부은 Ig 단백질 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 Ig 단백질 또는 그 생물학적 활성 단편은 인간 IgG₁, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM, 인간 IgM Fc도메인, 쥐 IgG₃, 쥐 IgG₃Fc 도메인, 쥐 IgM 및 쥐 IgM Fc 도메인을 포함한다.
코브라 독 팩터(CVF)
여기서 사용되는 바와 같이, 상기 용어"코브라 독 팩터", "CVF" 및 "C3b(코브라)"는 코브라 독에서의 무독성, 보체 활성 요소을 명명한다. 자연 발생적인 인간 C3b, CVF(SEQ ID NO:13)은 보체 요소들 팩터 B 및 팩터 D를 보유한, 보체 복합체 또는 전환효소(convertase)를 형성한다. CVFBbD 전환 효소는 상기 대체 보체 경로를 경유하여 다양한 종들에서 C3을 활성화 시킬 수 있다. CVFBbD 전환효소는 팩터 H-저항성이고 팩터 I 또는 CR1의 상기 활동을 통해 차단되지 않고, 상기 C3에서 C3 및 C5 단편들로 거의 100퍼센트 전환될 수 있다. iC3b, C3a, SC5b-9, C5a 및 팩터 B 분열 산물 Bb들은 모두 CVF 처리된 세럼들에서 극도로 높아진다. 상기 외눈코브라(Naja kaouthia)로부터 CVF의 상기 클로닝과 시퀀싱은 프리징거 등(Fritzinger,et al.)에 의해 "코브라 독 팩터의 분자 클로닝 및 유래된 주 구조물(Molecular cloning and derived primary structure of cobra venom factor)"라는 제목으로 발표되었다(Proc.Nat'lAcad.Sci.USA 91(26);12775-779(1994)). 상기 서열은 상기 GenBank 데이터베이스 참조문헌 제 U09969호 에 저장되었다. 상기 프리징거 등(Fritziger et al.) 참조 및 GenBank 데이터베이스 참조문헌 제 U09969호로 저장된 상기 서열 모두 참조로써 이하 포함된다. 상기 용어 "코브라 독 팩터", "CVF" 및 "C3b(코브라)"는 또한 CVF 부분 및 보체 요소3(C3)부분을 포함하는 가수분해 CVF 분자들을 명명한다. CVF 부분 및 보체 요소3(C3)부분을 포함하는 가수분해 CVF 분자들은 프리징거 등(Fritzinger et al)의 "체액감소 치료를 위한 보체 인간 C3/코브라 독 팩터 가수분해 단백질의 기능적 정의(Functional characterization of human C3/cobra venom factor hybrid proteins for therapeutic complement depletion")이라는 제목으로, Develop. comp. immunol.33(1):105-116(2009), 참조에 의해 이하 포함될 것이다. 이러한 혼합물들은 단백질 내에서, CVF 서열들에 대응하여 교체되는 C3의 상기 113 또는 315 C-말단 잔기들을을 포함한다. 혼합물들은 다양한 차이에도 불구하고, 둘 다 C3-분열 활동에서 나타난 안정된 전환효소들을 생성한다. 전환효소는 C5분열되지 않는다. 전환효소들은 인간 혈청에서 요소들을 격감시키면서 인간 팩터 H 및 I에 의한 비활성화에 부분적으로 저항하는 것을 보여준다.
일 측면에서, 구성물(construct)들을 포함하는 상기 조성물은; (a)상기 CR2 부분이 상기 CR2 단백질의 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는 것을 특징으로 하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분; 및 (b) CVF를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 로 하는; DAF를 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합하고 또한 EBV gp350에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3d, iC3dg, C3dg, 및 CR2의 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포 결합 단편으로 구성된 그룹으로부터 선택된 C3단백질가수분해의 단편에 결합하고 또한 IFNα에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합하고 선택적으로 IFNα에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 선택적으로 IFNα에 결합하고 선택적으로 EBV gp 350에 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2부부은 선택적으로 EBV gp 350에 결합한다. 여기서 사용되는 바와 같이, "선택적으로 결합한다"라는 말은 조성물(construct)이 하나의 리간드에 향상된 결합하는 것 및/또는 다른 리간드에 감소된 결합을 하는 것을 나타내는 것을 의미한다. 예를 들면, "선택적으로 결합한다"라는 말은) 상기 바뀐 조성물이 제 2 리간드에 대해 바뀌지 않는 조성물보다 더 낮은 친화도를 가지는 반면, 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물의 제 1 리간드에 대한 결합친화도와 유사한 정도의 제 1 리간드에 대한 결합 친화도를 가진다. 따라서 바뀐 조성물은 상기 두 리간드들에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제1 리간드에 "선택적으로 결합한다";2) 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 유사한 제 2 리간드에 대한 결합을 유지하는 반면, 바뀐 조성물은 제1 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하여 제1 리간드에 대해 증가된 결합력을 가진다. 따라서 상기 조성물은 상기 두 리간드에 대해 바뀌지 않은 조성물의 결합과 비교하면 제1 리간드에 "선택적으로 결합한다"; 또는 3) 바뀐 조성물은 바뀌지 않은 조성물이 제2 리간드에 대한 결합과 비교하면 제 1 리간드에 증가된 결합을 가진다. 그리고 바뀐 조성물은 제 2 리간드에 대해, 상기 바뀌지 않은 조성물의 제 2 리간드에 대한 결합력과 비교할 때 더 낮은 결합 친화도록 가진다. 따라서 상기 바뀐 조성물은 상기 두 리간드에 대한 바뀌지 않은 조성물의 결합력과 비교하면 제 2 리간드에는 "선택적으로 결합"하고, 제 2 리간드에 대해서는 선택적으로 결합하지 않는다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물은 퓨전 단백질이다.
본 발명의 조성물(Compositions of the Invention)
특정 리간드에 선택적인 결합과 연관된 CR2 내의 아미노산 잔기들
EBV gp350, IFNα, 및 C3b에 결합하는 CR2 구조 분석들은 이하(예1 참조) 각 리간드들에 결합하는 데 중요한, CR2 아미노산 잔기들의 숫자가 서술될 것이다. 아미노산 잔기들들의 일부는 모든 세 리간드들에 결합에 중요한 반면, 다른 잔기들은 특정 리간들에 결합에 중요하다(EBV gp 350, IFNα, 또는 C3b).
예를 들면, 상기 CR2-EBV gp350 결합 상호작용에 중요한 결정된 잔기들은 N11,R13, A22, R28, S32, R36, K41, K57, Y64, K67, Y68, R83, G84 및 R89(표 2 참조)이다. 상기 CR2-C3D 또는 상기 CR2-IFNα 결합 상호작용이 아닌, 상기 CR2-EBV gp350 결합 상호작용에 중요한 결정된 잔기들은 N11, R36, K41, Y64, 및 K67(표 2 참조)이다. 상기 CR2-IFNα 결합 상호작용에 중요한 결정된 잔기들은 R13, Y16, R28, S42, K50, Y68, R83, G84 및 R89이다(표 2 참조). 상기 CR2-C3b 결합하는 상호작용에 중요하게 결정된 잔기들은 I9, R13, Y16, A22, R28, Y29, C31, S32, G33, T34, K48, D56, K57, Y68, S70, R83, G84, R89, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S129이다(표 2 참조). 상기 CR2-C3d 결합하는 상소작용에 중요한 결정된 잔기들은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109 및 S128이고, 상기 CR2-GP350 또는 상기 CR2-IFNα 결합하는 상호작용은 아니다(표 2 참조). 상기 CR2-C3d 결합하는 상호작용에 중요한 결정된 상기 아미노산 잔기들은 C3dg, 및 iC3b와 같은, 다른 세포 표면-결합 C3 단편들을 구비한 상기 CR2 결합하는 상호작용에 중요하다. 상기 CR2-gp350, 상기 CR2-IFNα, 및 상기 CR2-C3d 결합하는 상호작용들에 중요한 결정되는 잔기들은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, 및 R89들이다. 이러한 아미노산 잔기들이 CR2와 하나 이상의 그 리간드들 사이에 결합하는 상호작용에 중요하기 때문에, 하나 또는 그 이상의 이러한 장소들에 있는 변형 아미노산 잔기들은 C3D 및/또는 다른 CR2 리간드들에 대한 상기 CR2 부분의 상기 표적 능력을 개선할 수 있을 것이다.
Figure pct00002
여기서 사용되는 바와 같이, CR2와 EBV-gp350, CR2와 IFNα, 및/또는 CR2와 C3d 사이의 상기 결합하는 상호작용에 중요한 상기 다양한 아미노산 잔기들의 적어도 하나 또는 그 이상의 변형들을 포함하는 상기 개선된 표적 그룹은, 상기 CR2 표적 그룹에 적합한 생리적 장소(예)염증반응이 일어나는 곳)에 보체 조절자(보체 억제제 또는 보체 촉진제)를 보내는 데 사용된다. 이러한 연구는 미국 특허 출원 제2008/0267980 A1호, 미국 특허 출원 제 제2008/0221011 A1호에, 미국 특허 출원 제2005/0260198 A1호에 참조로서 발표되었다.
CR2 및 특정 리간드 사이의 결합하는 상호작용에 중요한 결정된 CR2 아미노산 잔기들의 변형은 특정 리간드에 대해 CR2의 상기 결합 친화도를 감소시킬 것이다. 반면, 남는 다른 리간드에 대한 CR2의 상기 결합 친화도는 비교적 영향을 받지 않는다. 예를 들면, CR2(SEQ ID NO:1)내의 적어도 하나의 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64, 및 K67의 변형은 EBV gp350에 대한 상기 CR2에 대한 결합 친화도를 감소시킨다. 반면, C3b 및 IFNα에 대한 남은 결합 친화도는 바뀌지 않는다. 유사하게도 C3b 및 gp350에 대한 남은 결합 친화도는 바뀌지 않는 반면, 적어도 하나의 아미노산 잔기 S42 및 K50의 변형은 IFNα에 대한 CR2의 상기 결합 친화도의 감소시킬 것이다. IFNα 및 헤 350에 대한 남은 결합 친화도는 바뀌지 않는 반면, 적어도 하나의 아미노산 잔기 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128의 변형은 C3D에 대한 CR2의 상기 결합 친화도를 감소시킬 것이다.
이하 구성물(construct)들을 포함하는 용해성 조성물(soluble composition)이 제시된다. 상기 구성물은; (a) 상기 CR2 부분이 상기 CR2 단백질의 첫 번 째 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는 것을 특징으로 하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체2(CR2)부분 및 (b) 상기 CR2 부분이 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 보체 조절제 부분(complement modulator portion)를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 구성물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서 상기 구성물은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지만 IFNα 또는 EBV gp350에 결합하지 않거나 결합 친화도가 감소된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 결합하지만 EBV gp350에는 결합하지 않거나 그 결합 친화도가 감소된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 결합하지만 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 결합 친화도가 감소된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 선택적으로 IFNα에 대해 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 결합 친화도가 감소된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 선택적으로 IFNα 및 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 결합 친화도가 감소된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 선택적으로 EBV gp350에 결합하지만 IFNα 및 하나 또는 그 이상의 C3 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 결합 친화도가 감소된다.
일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 두 개의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 세 개의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 네 개의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 다섯 개 의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 여섯 개의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 7개의 아미노산 치환을 포함한다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯, 여섯, 일곱 개의 아미노산 치환은 보존적 치환들일 수 있다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 하나, 둘, 셋, 넷, 다섯, 여섯, 일곱 개의 아미노산 치환은 비보존적 치환들일 수 있다.
일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹에서 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 CR2 부분은 EBV gp350에 대한 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹에서 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 CR2 부분은 EBV gp350에 대한 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹에서 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 CR2 부분은 EBV gp350에 대한 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹에서 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 CR2 부분은 EBV gp350에 대한 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹에서 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 CR2 부분은 EBV gp350에 대한 감소된 결합 친화도를 가진다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 5 아미노산 치환은 비보존적 치환일 수 있다.
일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹에서 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 CR2 부분은 IFNα에 대한 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹에서 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 CR2 부분은 IFNα에 대한 감소된 결합 친화도를 가진다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 하나 또는 두 개의 아미노산 치환은 보존적 치환들일 수 있다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 하나 또는 두 개의 아미노산 치환은 비-보존적 치환들일 수 있다.
일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 폴리펩티드를 포함한다. 폴리펩티드는 상기 CR2 단백질의 상기 리간드 연결 장소들의 전부 또는 일부를 포함하고, 총 길이의 CR2 단백질들(SEQ ID NO:1로 알려진 인간 CR2와 같은 것), 용해성 CR2 단백질들(CR2의 상기 세포외 도메인을 포함하는 CR2 단편들과 같은 것) 및 SCR1-2(SEQ ID NO:2)를 포함하는 CR2 단편들과 같은, CR2의 다른 생물학적 활성 단편들, 자연 발생의 CR2의 호모로그 또는 그 단편들을 포함하지만, 이에 국한되지 않는다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 하나 또는 그 이상의 다음 특징들을 가진다. 상기 CR2의 특징들은 (1)상기 C3 가수분해 단편 C3d에 선택적으로 결합하는 능력, (2)상기 C3 가수분해 단편 iC3d에 선택적으로 결합하는 능력, (3) 상기 C3 가수분해 단편 C3dg에 선택적으로 결합하는 능력, (4) CR2의 상기 두 N-말단의 SCR 도메인들에 결합하는 상기 C3 가수분해 단편 C3b의 사나 또는 그 이상의 세포 결합 단편들에 선택적으로 결합하는 능력, (5) 상기 EBV gp350에 선택적으로 결합하는 능력, 및 (6) IFNα에 선택적으로 결합하는 능력이다.
일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 CR2(SEQ ID NO:2의 146을 통한 아미노산 23)의 제 1 두 N-말단의 SCR 도메인들을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 CR2(SEQ ID NO:1의 212를 통하는 아미노산 23)의 제 1 세 N-말단의 SCR 도메인들을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 CR2(SEQ ID NO:1의 271를 통하는 아미노산 23)의 제 1 4개의 N-말단의 SCR 도메인들을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 적어도 CR2의 제 1 두 N-말단의 SCR 도메인들을 포함한다(그리고 일부 실시예들에 있어서는 적어도 CR2의 제 1 두 N-말단의 SCR 도메인들로 구성되거나 필수적으로 구성된다). 적어도 CR2의 제 1 두 N-말단의 SCR 도메인들은 예를 들면, CR2의 적어도 제 1 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15도메인들 중 어느 것이라도 포함한다.
일부 실시예들에서, 후술하는 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 그 이상의 아미노산 치환들을 포함한다(일부 실시예들에 있어서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 그 이상의 아미노산 치환들로 구성되거나 필수적으로 구성된다). 일부 실시예들에서, 상기 아미노산 치환들은 보존적 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 아미노산 치환들을 비 보존적 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 아미노산 치환들은 보존적 및 비 보존적 치환들의 복합체일 수 있다.
보체 시스템 활성화 부분에 대한 보체 조절자의 표적화 전달을 위한 조성물(Coposition for Targeted Delivery of Complement Modulators to Areas of Complement System Activation)
일 측면에서, 구성물을 포함하는 보체 시스템 활성화 장소로의 보체 조절자의 표적화 전달할 수 있는 용해성 조성물이 제시된다. 상기 조성물은; (a) 상기 CR2 부분이 상기 CR2 단백질의 첫 번째 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분 및 (b) 상기 CR2 부분이 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는; 보체 조절제 부분(complement modulator portion)를 포함하는 것을 특징으로 한다. 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 EBV gp350p 대해 상기 CR2의 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하지만 EBV gp350에 결합하지 않거나 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하지만 EBV gp350에는 결합하지 않거나 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하지만 EBV gp350에는 결합하지 않거나 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하지만 EBV gp350에는 결합하지 않거나 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하지만 EBV gp350에는 결합하지 않거나 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 5 개의 아미노산 치환을 포함하지만 EBV gp350에는 결합하지 않거나 결합 친화도를 감소시킨다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5 개의 아미노산 치환은 보존적 치환들일 수 있다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5 개의 아미노산 치환은 비보존적 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11A, R36A, K41A, Y64A 및 K67A로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 내에서 하나 또는 그 이상의 치환들을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 단백질은 C3d, iC3b, C3dg, CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 하나 또는 그 이상의 세포 결합 단편들, CD23, 및 IFNα로 구성된 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 단백질에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350에는 결합하지 않는다. 다른 실시예들에서, 상기 구성물은 EBV gp350에 O한 감소된 결합 친화도를 갖는다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 이러한 퍼센트들 사이에서 수치 뿐만 아니라, 폭넓게 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%에 의한 EBV gp350에 대한 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절자 부부은 보체 억제제이다. 이러한 일시예들에서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, 및 FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 촉진제이다. 이러한 실시예들 중에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입 M(IgM), 쥐 Ig 이소타입 G₃(IgG₃), 쥐 IgMFc, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다.
일 측면에서, 구성물을 포함하는 보체 시스템 활성화 장소로의 보체 조절자의 표적화 전달을 하게 하는 용해성 조성물이 제시된다. 상기 조성물은; (a) 상기 CR2 부분이 상기 CR2 단백질의 첫 번째 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분, 및 (b) 상기 CR2 부분이 IFNα에 대한 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 보체 조절제 부분(complement modulator portion)를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹에서 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 S42 및 K50에서 적어도 두 아미노산 치환들을 포함하고, IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 하나 또는 두 아미노산 치환들은 보존적 치환들일 수 있다. 상술한 실시예들에서, 상기 하나 또는 두 아미노산 치환들은 비 보존적 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42A 및 K50A로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 내에서 하나 또는 그 이상의 치환들을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 단백질은 C3d, iC3b, C3dg, CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 하나 또는 그 이상의 세포 결합 단편들, CD23, 및 IFNα로 구성된 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 단백질에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα에는 결합하지 않는다. 다른 실시예들에서, 상기 구성물은 IFNα에 대한 감소된 결합 친화도를 갖는다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 이러한 퍼센트들 사이에서 수치뿐만 아니라, 폭넓게 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%에 의한 IFNα에 대한 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 억제제이다. 이러한 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, 및 FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 조절제 부분은 보체 촉진제이다. 이러한 실시예들 중에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입 M(IgM), 쥐 Ig 이소타입 G₃(IgG₃), 쥐 IgMFc, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다.
일 측면에서, 구성물을 포함하는 보체 시스템 활성화 장소로의 보체 조절자의 표적화 전달을 하게 하는 용해성 조성물이 제시된다. 상기 구성물은; (a)상기 CR2 부분이 상기 CR2 단백질의 첫 번째 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분; 및 (b) 상기 CR2 부분이 EBV gp350 및 IFNα에 대한 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하는 보체 조절제 부분(complement modulator portion)를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다. 나아가 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 잔기를 포함하고, EBV gp350 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다. 나아가 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 잔기를 포함하고, EBV gp350 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다.상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다. 나아가 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 잔기를 포함하고, EBV gp350 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다. 나아가 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 잔기를 포함하고, EBV gp350 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다.상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다. 나아가 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 5 개의 아미노산 잔기를 포함하고, EBV gp350 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 두 아미노산 치환들은 보존적 치환들일 수 있다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 두 아미노산 치환들은 비 보존적 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11A, R36A, K41A, Y64A, 및 K67A 및 S42A 및 K50A 변형으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 내에서 하나 또는 그 이상의 치환들을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 단백질은 C3d, iC3b, C3dg, CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 하나 또는 그 이상의 세포 결합 단편들, CD23으로 구성된 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 단백질에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα 및 EBV gp350에는 결합하지 않는다. 다른 실시예들에서, 상기 구성물은 IFNα에 대한 감소된 결합 친화도를 갖는다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 이러한 퍼센트들 사이에서 수치 뿐만 아니라, 폭넓게 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%에 의한 IFNα 및 EBV gp350에 대한 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 억제제이다. 이러한 실시예들에서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1 및 FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 촉진제이다. 이러한 실시예들 중에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입 M(IgM), 쥐 Ig 이소타입 G₃(IgG₃), 쥐 IgMFc, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다.
일 측면에서, 구성물을 포함하는 보체 시스템 활성화 장소로의 보체 조절자의 표적화 전달할 수 있는 하는 용해성 조성물이 제시된다. 상기 조성물은; (a) CR2 부분이 CR2 단백질의 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분 및 (b) 상기 CR2 부분이 EBV gp350 및 IFNα에 대한 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하는 보체 조절제 부분을 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다. 나아가 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 잔기를 포함하고, EBV gp350 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다. 나아가 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 잔기를 포함하고, EBV gp350 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다.상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다. 나아가 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 잔기를 포함하고, EBV gp350 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다. 나아가 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 잔기를 포함하고, EBV gp350 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다.상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다. 나아가 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 5 개의 아미노산 잔기를 포함하고, EBV gp350 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 두 아미노산 치환들은 보존적 치환들일 수 있다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 두 아미노산 치환들은 비 보존적 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11A, R36A, K41A, Y64A, 및 K67A 및 S42A 및 K50A 변형으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 내에서 하나 또는 그 이상의 치환들을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 단백질은 C3d, iC3b, C3dg, CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 하나 또는 그 이상의 세포 결합 단편들, CD23으로 구성된 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 단백질에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα 및 EBV gp350에는 결합하지 않는다. 다른 실시예들에서, 상기 구성물은 IFNα에 대한 감소된 결합 친화도를 갖는다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 이러한 퍼센트들 사이에서 수치 뿐만 아니라, 폭넓게 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%에 의한 IFNα 및 EBV gp350에 대한 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 억제제이다. 이러한 실시예들에서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1 및 FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 촉진제이다. 이러한 실시예들 중에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입 M(IgM), 쥐 Ig 이소타입 G₃(IgG₃), 쥐 IgMFc, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다.
엡스타인 바 바이러스 감염 장소들로 보체 조절제의 표적화 전달을 위한 조성물(Composition for Targeted Delivery of Complement Modulators to Sites of Epstein Barr Virus infection)
일 측면에서, 구성물을 포함하는 보체 시스템 활성화 장소로의 보체 조절자의 표적화 전달을 하게 하는 용해성 조성물이 제시된다. 상기 조성물은; (a)상기 CR2 부분이 상기 CR2 단백질의 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는 것을 특징으로 하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체2(CR2)부분; 및 (b)상기 CR2 부분이 하나 또는 그 이상의 C3 단백질가수분해 단편에 대한 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는; 보체 조절제 부분(complement modulator portion)를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 6 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 7 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 8 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 9 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 10 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 11 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 12 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 13 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 14 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 15 개의 아미노산 치환을 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3단백질 가수분해 단편들은 C3d, iC3B, C3dg, 및 하나 또는 그 이상의 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 C3b의 세포-결합 단편들을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된다. 상기 실시예들 중에서, 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15 아미노산 치환들은 보존적 치환들일 수 있다. 상기 실시예들 중에서, 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15 아미노산 치환들은 비존적 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 구성물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 CD23, EBV gp350, 및 IFNα로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 단백질에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않는다. 다른 실시예들에서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대한 감소된 결합 친화도를 갖는다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 이러한 퍼센트들 사이에서 수치 뿐만 아니라, 폭넓게 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%에 의한 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대한 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 억제제이다. 이러한 실시예들에서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1 및 FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 촉진제이다. 이러한 실시예들 중에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입 M(IgM), 쥐 Ig 이소타입 G₃(IgG₃), 쥐 IgMFc, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다.
일 측면에서, 구성물을 포함하는 엡스타인 바 바이러스 감염 장소들로 보체 조절제의 표적화 전달을 가능하게 하는 용해성 조성물이 제시된다. 상기 조성물은; (a) CR2 부분이 CR2 단백질의 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분 및 (b) 상기 CR2 부분이 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 대한 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하는 보체 조절제 부분(complement modulator portion)을 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 5 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 6 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 7 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 8 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 9 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 11 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 12 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 13 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 14 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 15 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 IFNα에 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, i3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 세포 결합 단편들로부터 선택된다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 두 아미노산 치환들은 보존적 치환들일 수 있다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 두 아미노산 치환들은 비보존적 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50A로 구성된 상기 그룹으로부터 아미노산의 치환을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 CD23 및 EBV gp350으로 구성된 상기 그룹의 하나 또는 그 이상의 단백질들에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않는다. 다른 실시예들에서, 상기 구성물은 IFNα 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 감소된 상기 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 적어도 2 개의 아미노산 치환은 이러한 퍼센트들 사이에서 수치 뿐만 아니라, 폭넓게 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%에 의한 IFNα 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대한 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 억제제이다. 이러한 실시예들에서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1 및 FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 촉진제이다. 이러한 실시예들 중에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입 M(IgM), 쥐 Ig 이소타입 G₃(IgG₃), 쥐 IgMFc, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 쥐 IgM Fc 도메인 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다.
일 측면에서, 구성물을 포함하는 보체 시스템 활성화 장소들로 보체 조절제의 표적화 전달을 가능하게 하는 용해성 조성물이 제시된다. 상기 조성물은; (a) CR2 부분이 CR2 단백질의 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분 및 (b) CR2 부분이 하나 또는 그 이상의 C3 단백질가수분해 단편 및 IFNα에 대한 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하는 보체 조절제 부분(complement modulator portion)를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 5 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 6 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 7 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 8 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 8 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 8 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 9 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 11 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 12 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 13 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 14 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들S42 및 K50에서 아미노산 치환들을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128 로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 15 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, i3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 세포 결합 단편들로부터 선택된다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 세 아미노산 치환들은 보존적 치환들일 수 있다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 세 아미노산 치환들은 비보존적 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 S42 및 K50A로 구성된 상기 그룹으로부터 아미노산의 치환을 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 CD23 및 EBV gp350으로 구성된 상기 그룹의 하나 또는 그 이상의 단백질들에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않는다. 다른 실시예들에서, 상기 구성물은 IFNα 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 감소된 상기 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 적어도 3 개의 아미노산 치환은 이러한 퍼센트들 사이에서 수치 뿐만 아니라, 폭넓게 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%에 의한 IFNα 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대한 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 억제제이다. 이러한 실시예들에서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1 및 FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 촉진제이다. 이러한 실시예들 중에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입 M(IgM), 쥐 Ig 이소타입 G₃(IgG₃), 쥐 IgMFc, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다.
일 측면에서, 구성물을 포함하는 IFNα 생성 장소들로 보체 조절제의 표적화 전달을 가능하게 하는 용해성 조성물이 제시된다. 상기 조성물은; (a)상기 CR2 부분이 상기 CR2 단백질의 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는 것을 특징으로 하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체2(CR2)부분; 및 (b)상기 CR2 부분이 하나 또는 그 이상의 C3 단백질가수분해 단편 및 EBV gp350에 대한 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는; 보체 조절제 부분(complement modulator portion)를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 5 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 6 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 7 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 8 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 9 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 11 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 12 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 13 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 14 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 15 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, i3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 세포 결합 단편들로부터 선택된다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 두 아미노산 치환들은 보존적 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11A, R36A, K41A, Y64A, K67A로 구성된 상기 그룹으로부터 아미노산의 치환을 포함한다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 두 아미노산 치환들은 비보존적 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 구조물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 CD23 및 IFNα으로 구성된 상기 그룹의 하나 또는 그 이상의 단백질들에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않는다. 다른 실시예들에서, 상기 구성물은 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 감소된 상기 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 적어도 2 개의 아미노산 치환은 이러한 퍼센트들 사이에서 수치 뿐만 아니라, 폭넓게 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%에 의한 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대한 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 억제제이다. 이러한 실시예들에서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1 및 FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 촉진제이다. 이러한 실시예들 중에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입 M(IgM), 쥐 Ig 이소타입 G₃(IgG₃), 쥐 IgMFc, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다.
일 측면에서, 구성물을 포함하는 IFNα 생성 장소들로 보체 조절제의 표적화 전달을 가능하게 하는 용해성 조성물이 제시된다. 상기 조성물은; (a) CR2 부분이 CR2 단백질의 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는 것을 특징으로 하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분 및 (b) 상기 CR2 부분이 하나 또는 그 이상의 C3 단백질가수분해 단편 및 EBV gp350에 대한 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하는 보체 조절제 부분(complement modulator portion)를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 5 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 6 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 7 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 8 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 9 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 11 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 12 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 13 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 14 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 15 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, i3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 세포 결합 단편들로부터 선택된다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 3개의 아미노산 치환들은 비보존적 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11A, R36A, K41A, Y64A, K67A로 구성된 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 아미노산의 치환을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구조물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 CD23 및 IFNα으로 구성된 상기 그룹의 하나 또는 그 이상의 단백질들에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않는다. 다른 실시예들에서, 상기 구성물은 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해 감소된 상기 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 적어도 3 개의 아미노산 치환은 이러한 퍼센트들 사이에서 수치 뿐만 아니라, 폭넓게 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%에 의한 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대한 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 억제제이다. 이러한 실시예들에서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1 및 FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 촉진제이다. 이러한 실시예들 중에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입 M(IgM), 쥐 Ig 이소타입 G₃(IgG₃), 쥐 IgMFc, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다.
일 측면에서, 구성물을 포함하는 IFNα 생성 장소들로 보체 조절제의 표적화 전달을 가능하게 하는 용해성 조성물이 제시된다. 상기 조성물은; (a) CR2 부분이 상기 CR2 단백질의 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분 및 (b) 상기 CR2 부분이 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 EBV gp350에 대한 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하는 보체 조절제 부분(complement modulator portion)를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 5 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 6 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 7 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 8 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 9 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 11 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 12 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 13 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 14 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 15 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, i3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 세포 결합 단편들로부터 선택된다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 4개의 아미노산 치환들은 보존적 치환들일 수 있다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 4개의 아미노산 치환들은 비보존적 치환들일 수 있다.일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11A, R36A, K41A, Y64A, K67A로 구성된 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 아미노산의 치환을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구조물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 CD23 및 IFNα으로 구성된 상기 그룹의 하나 또는 그 이상의 단백질들에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않는다. 다른 실시예들에서, 상기 구성물은 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해 감소된 상기 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 적어도 4 개의 아미노산 치환은 이러한 퍼센트들 사이에서 수치 뿐만 아니라, 폭넓게 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%에 의한 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대한 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 억제제이다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1 및 FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 촉진제이다. 이러한 실시예들 중에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입 M(IgM), 쥐 Ig 이소타입 G₃(IgG₃), 쥐 IgMFc, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다.
일 측면에서, 구성물을 포함하는 IFNα 생성 장소들로 보체 조절제의 표적화 전달을 가능하게 하는 용해성 조성물이 제시된다. 상기 구성물은 (a) 상기 CR2 부분이 CR2 단백질의 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체2 (CR2) 부분 및 (b) CR2 부분이 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편 및 EBV gp350에 대한 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 적어도 5 개의 아미노산 치환을 포함하는 보체 조절제 부분(complement modulator portion)을 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 5 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 6 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 7 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 8 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 9 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 11 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 12 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 13 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 14 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 15 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, i3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 세포 결합 단편들로부터 선택된다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 5 개의 아미노산 치환들은 보존적 치환들일 수 있다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 5 개의 아미노산 치환들은 비보존적 치환들일 수 있다.일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11A, R36A, K41A, Y64A, K67A로 구성된 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 아미노산의 치환을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구조물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 CD23 및 IFNα으로 구성된 상기 그룹의 하나 또는 그 이상의 단백질들에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않는다. 다른 실시예들에서, 상기 구성물은 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해 감소된 상기 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 적어도 5 개의 아미노산 치환은 이러한 퍼센트들 사이에서 수치 뿐만 아니라, 폭넓게 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%에 의한 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대한 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 억제제이다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1 및 FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 촉진제이다. 이러한 실시예들 중에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입 M(IgM), 쥐 Ig 이소타입 G₃(IgG₃), 쥐 IgMFc, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다.
일 측면에서, 구성물을 포함하는 IFNα 생성 장소들로 보체 조절제의 표적화 전달을 가능하게 하는 용해성 조성물이 제시된다. 상기 구성물은 (a) CR2 부분이 CR2 단백질의 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들을 포함하는 것을 특징으로 하는, SEQ ID NO:1 또는 그 생물학적 활성 단편의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분 및 (b)상기 CR2 부분이 하나 또는 그 이상의 C3 단백질가수분해 단편 및 EBV gp350에 대한 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 적어도 6 개의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는; 보체 조절제 부분(complement modulator portion)를 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 2 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 3 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 4 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 5 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 6 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 7 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 8 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 9 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 11 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 12 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 13 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 14 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 아미노산 잔기들 N11, R36, K41, Y64 및 K67에서 5 개의 아미노산 치환을 포함하고, I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, 및 S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기에서 적어도 15 개의 아미노산 치환을 더 포함하고, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, i3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 세포 결합 단편들로부터 선택된다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 6 개의 아미노산 치환들은 보존적 치환들일 수 있다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 6 개의 아미노산 치환들은 비보존적 치환들일 수 있다.일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 N11A, R36A, K41A, Y64A, K67A로 구성된 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 아미노산의 치환을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 구조물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 CR2 부분은 CD23 및 IFNα으로 구성된 상기 그룹의 하나 또는 그 이상의 단백질들에 선택적으로 결합한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않는다. 다른 실시예들에서, 상기 구성물은 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해 감소된 상기 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 적어도 4 개의 아미노산 치환은 이러한 퍼센트들 사이에서 수치 뿐만 아니라, 폭넓게 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%에 의한 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대한 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시킨다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 억제제이다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1 및 FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 다른 실시예들에서, 상기 보체 조절자 부분은 보체 촉진제이다. 이러한 실시예들 중에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입 M(IgM), 쥐 Ig 이소타입 G₃(IgG₃), 쥐 IgMFc, 인간 IgG₁Fc 도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다.
보체 조절제의 표적화 전달을 위한 다른 CR2 치환들(Other CR2 Substitutions for Targeted Delivery of Complement Modulators)
이하 상기 조성물의 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 적어도, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11 부가적 아미노산 치환을 상기 CR2 부분의 다른 위치에서 더 포함할 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84 및 R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84 및 R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 2 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84 및 R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 3 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84 및 R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 4 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84 및 R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 5 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84 및 R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 6 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84 및 R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 7 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84 및 R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 8 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84 및 R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 9 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84 및 R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84 및 R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 11 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 상술한 실시예들 중에서, 상기 적어도, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11 아미노산 치환들은 보존적 치환들일 수 있다. 상술한 실시예들 중에서, 상기 적어도, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11 아미노산 치환들은 비보존적 치환들일 수 있다.
링커 단백질들(Linker Proteins)
여기서 사용되는 바와 같이, 상기 실시예들에서, CR2 부분 또는 그 생물학적 활성 다편을 포함하는 상기 구성물 및 인간 CD59, 쥐 CD59 이소폼 A, 쥐 CD59 이소폼 B, 쥐 Crry 단백질, 인간 팩터 H, 쥐 팩터 H, 인간 CR1, 인간 MCP, 인간 DAF 또는 쥐 DAF, 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함하는 보체 억제제 부분은, 또한 상기 CR2 부분 및 상기 보체 억제제 부분과 연결된 아미노산 링커 서열을 포함한다(예를 들면, 인간 CD59, 쥐 CD59 이소폼 A, 쥐 CD59 이소폼 B, 쥐 Crry 단백질, 인간 팩터 H, 쥐 팩터 H, 인간 CR1, 인간 MCP, 인간 DAF 또는 쥐 DAF 또는 그 생물학적 활성 단편).
상기 실시예들에서, CR2 부분 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함하는 상기 구성물 및 인간 IgG₁, 인간 IgM, 인간 IgG₃, 쥐 IgM, 또는 CVF 또는 그 생물학적 활성 단편은 상기 CR2 부분 및 그 보체 촉진제 부분에 연결되는 아미노산 링커 서열을 또한 포함한다(예를 들면, 인간 IgG₁, 인간 IgM, 인간 IgG₃, 쥐 IgM, 또는 CVF 또는 그 생물학적 활성 단편).
링커 서열들의 예들은 이 분야에서 알려져 있고, 예를 들면, (Gly₄Ser), (Gly₄Ser)₂, (Gly₄Ser)₃, (Gly₄Ser)₄, (SerGly₄), (SerGly₄)₂, (SerGly₄)₃, (SerGly₄)₄를 포함한다. 링킹 서열(lingking sequence)들은 보체 팩터들의 다른 도메인들 사이에서 "내츄럴(natural)"링킹 서열들을 포함한다. 예를 들면, VSVFPLE(SEQ ID NO:26) 또는 EYFNKYSS(SEQ ID NO:27), 인간 CR2의 상기 첫 번째 두 N-말단 짧은 컨센서스 반복 도메인(short consensus repeat domain)들 사이의 상기 링킹 서열이 사용될 수 있다. 일부 실시예들에 있어서, 인간 CR2(EEIF)(SEQ ID NO:28)의 제 4, 제 5 N-말단 짧은 콘센서스 반복 도메인들 사이에서 상기 링킹 서열이 사용된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 링커 서열은 이러한 숫자들 사이에 어떤 수치라도 포함할 뿐만 아니라 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 아미노산들을 포함한다.
제약 조성물(Pharmaceutical Composition)
다른 측면에서, 이하 구성물들 및/또는 퓨전 단백질들을 포함하는 제약 조성물들이 있다. 이하 구성물들 및/또는 퓨전 단백질들을 포함하는 제약 조성물들은 일반적으로 무균으로(as sterile) 제조된다. 미국 식품 의약국(the U.S. Food and Drug Administration)의 모든 제품 품질 관리 기준(GMP; Good Manufacturing Practice) 규제들을 준수하는 실제로 등장성의 제약 용액들이다. 일부 실시예들에서 상기 조성물은 병원균(pathogen)이 없게 된다. 주사를 놓기 위해서, 예를 들면, 행크's 밸런스 솔트 용액(Hank's Balanced Salt Solution), 포스페이트 완충제 살림 또는 링거즈 용액(Phosphate buffered Saline 또는 Ringer's solution)과 같은 생리학적으로 호환가능한 완충제(physiologically compatible buffers)에서 상기 제약 조성물들은 액체 용액 형태로 될 수 있다. 부가적으로, 이하 제공되는 상기 조성물들은 고체 형태로 될 수 있고, 사용전에 즉시 다시 녹이거나 다시 현탁(suspend)될 수 있다. 동결 건조된 조성물 또한 고려될 수 있다.
경구 투여를 위해서는, 상기 제약 조성물은, 제약학적으로 수용가능한 첨가제와 함께 기존의 수단들로 준비된 정제들 또는 캡슐들의 형태로 복용된다. 제약학적으로 수용가능한 첨가제들은 예를 들면, 결합제들(예를 들면, 옥수수 호화 전분(pregelatinized maize starch), 폴리비닐피롤리돈(polyvinylpyrrolidone) 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스(hydroxy methylcellulose)); 충전제들(락토오스(lactose), 마이크로크리스탈린 셀룰로오스(microcrystalline cellulose), 또는 칼슘 하이드로겐 포스페이트(hydrogen phosphate); 윤활유(마그네슘 스테아레이트(magnesium searate), 타르크(talc) 또는 실리카(silica)), 정제들(예를 들면 감자 전분 또는 소듐 전분 클리콜산염(sodium starch glycolate)), 또는 습윤제(로릴황산나트륨(sodium lauryl sulfate))와 같은 것들이다. 경구 투여를 위한 액상 제제는 에를 들면, 용액들(solutions), 시럽들, 또는 현탁액(suspension) 또는 사용 전에 물 또는 다른 적합한 매개체로 구성된 건조 제품의 형태로 복용될 수 있다. 이러한 액상제제는 제약학적으로 수용가능한 첨가제들로 된 기존의 수단에 의해 준비될 수 있다. 제약학적으로 수용가능한 첨가제들은 서스펜션화제( 예를 들면, 소르비톨 시럽(sorbitol syrup), 셀룰로오스 파생물(cellulose derivatives) 또는 수소화합된 식용지방들(hydrogenated edible fats)); 에멀션 화제(예를 들면, 레시틴(lecithin) 또는 아카시아(acacia)); 비수상 운반체(분별증류된 오일(fractionated oil), 오일화 에스테르(oily esters), 에틸 알콜(ethyl alcohol), 또는 분별증류된 식물성 오일들(fractionated vegetable oils)); 및 보존제들(메틸(methyl) 또는 프로필-피-하이드록시벤조네이트들(propyl-p-hydroxybenzoates) 또는 소르빅산(sorbic acid))과 같은 것이다. 조제용 물질(preparation)들은 또한 완충염, 맛을 내고, 색을 띠고, 단 맛의 화제를 포함할 수 있다.
일부 실시예들에서, 상기 조성물들은 주사를 놓는데 사용되는 제약 조성물로서 일반적 과정에 따라 제조된다. 일부 실시예들에서, 상기 제약 조성물들은 정맥주사의(intravenous), 복강내의(intraperitoneal) 또는 안내주사(intraocular injection)용으로 조제된다. 보통, 주사용 조성물은 무균의 등장성 수분함유 완충액 내 용액들이다. 필요한 곳에, 상기 조성물은 가용화제 및 주사 부위에 고통을 완화시키는 리그노카인(lignocaine)과 같은 국부 마취약을 포함할 수 있다. 일반적으로, 상기 조성물들은 조제형 단위당 독립적으로나 함께 섞여서 공급된다. 예를 들면, 활성제의 양을 나타내는 앰플 또는 샤체트(shachette)와 같은 완전 밀폐용기 내의 동결 건조된 파우더 또는 무수분 농축액이다. 상기 조성물 투입되는 곳에, 주사 또는 살린성 무균성 수분 앰플이 제공되어 상기 조성물들이 투입 전에 혼합될 것이다.
상기 제약 조성물은 부가적 조성물들을 더 포함할 수도 있다. 부가적 조성물들은 예를 들면 보존제들, 완충제들, 토닉제(tonicity angent), 산화방지제(antioxidants), 안정제들, 비이온성 습윤 제제 또는 정화제, 점도증가제 등과 같은 것이다.
용액 중에 사용을 위한 적합한 보존제는 폴리쿼터늄-1(polyquaternium-1), 염화 벤즈알코늄(benzalkonium chloride),티메로살(thimerosal), 클로로부탄올(chlorobutanol), 메틸 파라벤(methyl paraben), 프로필 파라벤(propyl praben), 페닐에틸 알콜(phenylethyl alchol), 디소듐-EDTA(disodium-EDTA), 소르빈산(sorbic acid), 염화 벤제토늄(benzethonium chloride) 등을 포함한다. 보통(필수적이지는 않고) 그러한 보존제들은 중량으로 0.001%에서 1.0%까지의 레벨로 쓰인다.
적합한 완충제는 보릭산(boric acid), 소듐 및 포타슘 바이카보네이트(sodium and potassium bicabonate), 소듐 및 포타슘 보레이트(sodium and potassium carbonate), 소듐 아세테이트(sodium acetate), 소듐 바이포스페이트(sodium biphospgate) 등을 포함하고, 약 pH6과 pH8사이, 바람직하게는 pH7과 pH7.5 사이에서 의 에서 상기 pH를 유지하기 위해 충분한 양을 포함한다.
적합한 토닉제제(tonicity agent)들은 덱스트란40, 덱스트란 70, 덱스트로스, 글리세린, 염화 포타슘, 프로필렌 글리콜, 염화 소듐 등을 포함한다. 주사가능한 용액과 동등한 상기 염화 소듐은 상기 범위 0.9에서 플러스 마이너스 0.2%가 된다.
적합한 항산화제들 및 안정제들은 아황산수소나트륨(sodium bisulfite), 메타중아황상나트륨(sodium metabisulfite), 티오황산나트륨(sodium thiosulfite), 티오우레아(thiourea) 등을 포함한다. 적합한 습윤제 및 정화제는 폴리소르베이트80, 폴리소르베이트20, 폴록사머282(poloxamer282), 티록사폴(tyloxapol)을 포함한다. 적합한 점도증가제는 덱스트란 40, 덱스트란 70, 젤라틴, 글리세린, 하이드록시에틸셀룰로오스(hydrolyethycellulose), 하이드록시메틸프로필셀룰로오스(hydroxmethylpropylcellulose), 라놀린(lanolin), 메틸셀룰룰로오스(methylcellulose), 바셀린(petrolatum), 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol), 폴리비닐 알콜(polyvinyl alchol), 폴리비닐피롤리돈(polyvinylpyrrolidone), 카르복시메틸셀룰로오스(carboxymethylcellulose) 등을 포함한다.
상기 제약 조성물은 예를 들면 시스템적이거나 국부투여를 포함하여 이하 투여 되는 다양한 모드들에 적합할 수 있다. 상기 제약 조성물은 주사가능한 용액의 형태이거나 경구투여 가능한 형태일 수 있다. 상기 제약 조성물은 1회 투여 단위 또는 여러 회 복용 단위로 포장될 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 제약 조성물은 개인, 척추동물(vetebrate), 포유동물(mammal) 또는 인간에게 경구 투여 또는 정맥 주사를 포함한 이하 투여 루트로 적합하게 투여된다.
본 발명의 방법들(Methods of the Invention)
보체 시스템 조절을 위한 표적화 조성물을 만드는 방법(Methods of Making a Targeted Construct for Complement System Modulation)
이하, CR2의 하나 또는 그 이상의 리간드들에 선택적으로 결합하는 조성물을 만드는 방법이 제시될 것이다. 이 때, 상기 방법은 상기 조성물의 보체 수용체 2(CR2) 부분 내의 하나 또는 그 이상의 아미노산들을 변형하는 것을 포함하고, 상기 조성물은 (a)SEQ ID NO:1의 CR2 단백질 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분; 및 (b)보체 조절제 부분을 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에서, 상기 조성물은 퓨전 단백질이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 단백질 가수분해 단편들에 결합하지만 IFNα 또는 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 결합하지만 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물은 선택적으로 하나 또는 그 이상의 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 결합하지만 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물은 선택적으로 IFNα에 결합하지만 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물은 선택적으로 IFNα 및 EBV gp350에 결합하지만 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물은 선택적으로 EBV gp350에 결합하지만 IFNα 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다.
일 측면에서, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편에 선택적으로 결합하지만 EBV gp350 또는 IFNα에 선택적으로 결합하지 않는 조성물을 만드는 방법이 제시된다. 상기 방법은 (a) N11, R36, K41, Y64 및 K67으로 구성되는 상기 그룹으로부터의 상기 조성물의 보체 수용체 2(CR2) 부분에서의 하나 또는 그 이상의 아미노산을 변형하는 과정 및 (b) S42, K50으로 구성되는 상기 그룹으로부터 상기 조성물의 보체 수용체 2(CR2) 부분에 하나 또는 그 이상의 아미노산을 변형하는 단계를 포함하고, 상기 조성물은 (i) SEQ ID NO:1의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체 2(CR2) 부분 및 그 생물학적 활성 단편을 포함하고, 상기 CR2 부분은 상기 CR2 단백질의 적어도 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들 및(ii)보체 조절제 부분을 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2)부분 내 상기 하나 또는 그 이상의 변형들은상기 아미노산 알라닌에 대한 변형들이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 방법은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2)부분 내 하나 또는 그 이상의 아미노산을 변형하는 과정을 더 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2)내에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18 아미노산들 중 어느 하나라도 변형하는 과정을 포함한다.
일 측면에서, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350 에 선택적으로 결합하지만 IFNα에 선택적으로 결합하지 않는 조성물을 만드는 방법이 제시된다. 상기 방법은 S42, K50으로 구성되는 상기 그룹으로부터의 상기 조성물의 보체 수용체2(CR2)부분에서의 하나 또는 그 이상의 아미노산을 변형하는 과정을 포함하고, 상기 조성물은 (a)SEQ ID NO:1의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체2(CR2)부분 및 그 생물학적 활성 단편을 포함하고, 상기 CR2 부분은 상기 CR2 단백질의 적어도 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들; 및 (b) 보체 조절제 부분을 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2)부분 내 상기 하나 또는 그 이상의 변형들은 상기 아미노산 알라닌에 대한 변형들이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 방법은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2)부분 내 하나 또는 그 이상의 아미노산을 변형하는 과정을 더 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2)내에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 또는 13 아미노산들 중 어느 하나를 변형하는 과정을 포함한다.
일 측면에서, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350 및 IFNα에 선택적으로 결합하지만 EBV gp350에 선택적으로 결합하지 않는 조성물을 만드는 방법이 제시된다. 상기 방법은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 구성되는 상기 그룹으로부터의 상기 조성물의 보체 수용체2(CR2)부분에서의 하나 또는 그 이상의 아미노산을 변형하는 과정을 포함하고, 상기 조성물은 (a)SEQ ID NO:1의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체2(CR2)부분 및 그 생물학적 활성 단편을 포함하고, 상기 CR2 부분은 상기 CR2 단백질의 적어도 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들; 및 (b) 보체 조절제 부분을 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2)부분 내 상기 하나 또는 그 이상의 변형들은 상기 아미노산 알라닌에 대한 변형들이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 방법은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2)부분 내 하나 또는 그 이상의 아미노산을 변형하는 과정을 더 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2) 내에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,13, 14, 15 또는 16 아미노산들 중 어느 하나를 변형하는 과정을 포함한다.
일 측면에서, IFNα에 선택적으로 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 선택적으로 결합하지 않는 조성물을 만드는 방법이 제시된다. 상기 방법은 (a)N11, R36, K41, Y64 및 K67으로 구성되는 상기 그룹으로부터의 상기 조성물의 보체 수용체2(CR2)부분에서의 하나 또는 그 이상의 아미노산들을 변형하는 과정; 및 (b)I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109 및 S128로 구성된 상기 그룹들로부터 상기 조성물의 보체 수용체 2(CR2)부분 내에서 하나 또는 그 이상의 아미노산들을 변형하는 과정을 포함하고, 상기 조성물은 (i)SEQ ID NO:1의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체2(CR2)부분 및 그 생물학적 활성 단편을 포함하고, 상기 CR2 부분은 상기 CR2 단백질의 적어도 첫 번째 두 N-말단 SCR 도메인들; 및 (b) 보체 조절제 부분을 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2)부분 내 상기 하나 또는 그 이상의 변형들은 상기 아미노산 알라닌에 대한 변형들이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 방법은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2)부분 내 하나 또는 그 이상의 아미노산을 변형하는 과정을 더 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 상기 보체 수용체 2(CR2) 내에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 아미노산들 중 어느 하나를 변형하는 과정을 포함한다.
일 측면에서, EBV gp350 및 IFNα에 선택적으로 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 선택적으로 결합하지 않는 조성물을 만드는 방법이 제시된다. 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109 및 S128로 구성된 상기 그룹들로부터 상기 조성물의 보체 수용체 2(CR2)부분 내에서 하나 또는 그 이상의 아미노산들을 변형하는 과정을 포함하고, 상기 조성물은 (a)SEQ ID NO:1의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체2(CR2)부분 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함하고, 상기 CR2 부분은 상기 CR2 단백질의 적어도 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들; 및 (b) 보체 조절제 부분을 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2)부분 내 상기 하나 또는 그 이상의 변형들은 상기 아미노산 알라닌에 대한 변형들이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 방법은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2)부분 내 하나 또는 그 이상의 아미노산을 변형하는 과정을 더 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2) 내에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 또는 26 아미노산들 중 어느 하나를 변형하는 과정을 포함한다.
일 측면에서, EBV gp350에 선택적으로 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 선택적으로 결합하지 않는 조성물을 만드는 방법이 제시된다. 상기 방법은 S42 및 K50으로 구성된 상기 그룹으로부터 상기 조성물의 보체 수용체 2(CR2)부분 내 하나 또는 그 이상의 아미노산들을 변형하는 과정; 및 (b)I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109 및 S128로 구성된 상기 그룹들로부터 상기 조성물의 보체 수용체 2(CR2)부분 내에서 하나 또는 그 이상의 아미노산들을 변형하는 과정을 포함하고, 상기 조성물은 (i)SEQ ID NO:1의 CR2 단백질을 포함하는 보체 수용체2(CR2)부분 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함하고, 상기 CR2 부분은 상기 CR2 단백질의 적어도 제 1의 두 N-말단 SCR 도메인들; 및 (ii) 보체 조절제 부분을 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 상기 보체 수용체 2(CR2) 부분 내 상기 하나 또는 그 이상의 변형들은 상기 아미노산 알라닌에 대한 변형들이다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 방법은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2)부분 내 하나 또는 그 이상의 아미노산을 변형하는 과정을 더 포함한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 조성물의 상기 보체 수용체2(CR2) 내에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28 아미노산들 중 어느 하나를 변형하는 과정을 포함한다.
하나 또는 그 이상의 리간드들에 대한 상기 결합 친화도를 감소시키거나 상기 조성물의 상기 CR2 부분의 결합 동역학을 변형하는 방법(Methods for Reducing the Binding Affinity for or Altering the Binding Kinetics of the CR2 Portion of the Construct for One of More Ligands)
다른 측면에서, 하나 또는 그 이상의 CR2 리간드들에 대한 이하 나타난 상기 조성물의 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시키는 방법들이 제시되어 있다. 또한 상기 하나 또는 그 이상의 변형이 하나 또는 그 이상의 CR2 리간드들에 대한 상기 조성물의 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 것을 특징으로 하는 상기 조성물의 상기 CR2 부분의 상기 아미노산 서열에서 하나 또는 그 이상의 변형들을 소개하는 과정을 포합하는 방법들이 제시된다.
일부 실시예들에서, EBV gp350 및 IFNα에 대해 나타난 상기 조성물들의 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 방법, N11, R36, K41, K50, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 CR2 부분 내 적어도 하나의 아미노산 잔기를 변형시키는 단계를 포함하는 방법이 제시된다. 일부 실시예들에서, 상기 방법은 N11, R36, K41, K50, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 CR2 부분 내 적어도 2 개의 아미노산 잔기들을 변형시키는 단계를 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 방법은 N11, R36, K41, K50, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 CR2 부분 내 적어도 3 개의 아미노산 잔기들을 변형시키는 단계를 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 방법은 N11, R36, K41, K50, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 CR2 부분 내 적어도 4 개의 아미노산 잔기들을 변형시키는 단계를 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 방법은 N11, R36, K41, K50, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 CR2 부분 내 적어도 5 개의 아미노산 잔기들을 변형시키는 단계를 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 방법은 N11, R36, K41, K50, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 CR2 부분 내 적어도 6 개의 아미노산 잔기들을 변형시키는 단계를 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 방법은 N11, R36, K41, K50, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 CR2 부분 내 적어도 7 개의 아미노산 잔기들을 변형시키는 단계를 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7 변형들은 비 보존적 아미노산 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에 있어서, EBV gp350 및/또는 IFNα에 대한 상기 조성물의 상기 결합 친화도는 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 905, 95%, 100% 중 이러한 퍼센트들 사이에서의 어느 수치를 포함할 뿐만 아니라, 상기 퍼센트까지 감소된다.
일부 실시예들에서, EBV gp350에 대해 나타난 상기 조성물들의 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 방법, N11, R36, K41, K50, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 CR2 부분 내 적어도 하나의 아미노산 잔기를 변형시키는 단계를 포함하는 방법이 제시된다. 일부 실시예들에서, 상기 방법은 N11, R36, K41, K50, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 CR2 부분 내 적어도 2 개의 아미노산 잔기들을 변형시키는 단계를 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 방법은 N11, R36, K41, K50, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 CR2 부분 내 적어도 3 개의 아미노산 잔기들을 변형시키는 단계를 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 방법은 N11, R36, K41, K50, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 CR2 부분 내 적어도 4 개의 아미노산 잔기들을 변형시키는 단계를 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 방법은 N11, R36, K41, K50, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 CR2 부분 내 적어도 5 개의 아미노산 잔기들을 변형시키는 단계를 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5 변형들은 보존적 아미노산 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 또는 5 변형들은 비보존적 아미노산 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에 있어서, EBV gp350에 대한 상기 조성물의 상기 결합 친화도는 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 905, 95%, 100% 중 이러한 퍼센트들 사이에서의 어느 수치를 포함할 뿐만 아니라, 상기 퍼센트까지 감소된다.
일부 실시예들에서, IFNα에 대해 나타난 상기 조성물들의 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 방법,S42 및 K50으로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 잔기를 변형시키는 단계를 포함하는 방법이 제시된다. 일부 실시예들에서, 적어도 하나 또는 두 변형은 보존적 아미노산 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 적어도 하나 또는 두 변형들은 비보존적 아미노산 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에 있어서, EBV gp350에 대한 상기 조성물의 상기 결합 친화도는 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 905, 95%, 100% 중 이러한 퍼센트들 사이에서의 어느 수치를 포함할 뿐만 아니라, 상기 퍼센트까지 감소된다.
다른 측면에서, 하나 또는 그 이상의 CR2 리간드들에 대한 이하 나타난 상기 조성물의 상기 CR2 부분의 상기 결합 친화도를 감소시키는 방법은 상기 CR2 부분 내의 다른 지점들에서 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 아미노산들 잔기들을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 조건부로 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹들로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 조건부로 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹들로부터 선택된 적어도 2 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 조건부로 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹들로부터 선택된 적어도 3 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 조건부로 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹들로부터 선택된 적어도 4 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 조건부로 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹들로부터 선택된 적어도 5 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 조건부로 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹들로부터 선택된 적어도 6 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 조건부로 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹들로부터 선택된 적어도 7 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 조건부로 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹들로부터 선택된 적어도 8 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 조건부로 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹들로부터 선택된 적어도 9 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 조건부로 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹들로부터 선택된 적어도 10 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 CR2 부분은 조건부로 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84, R89로 구성된 상기 그룹들로부터 선택된 적어도 11 개의 아미노산 치환을 더 포함한다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11 아미노산 치환들은 보존적 치환들일 수 있다. 상술한 실시예들에서, 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11 아미노산 치환들은 비보존적 치환들일 수 있다.
다른 측면에서, 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 변형하는 방법들이 제시된다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3의 세포 표면 결합 단백질 가수분해 단편들에 대한 상기 조성물의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 개선한다. 그리고 상기 방법은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67을 구상하는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 CR2 부분 내 적어도 하나의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3의 세포 표면 결합 단백질 가수분해 단편들에 대한 상기 조성물의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 개선한다. 그리고 상기 방법은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67을 구상하는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 CR2 부분 내 적어도 2 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3의 세포 표면 결합 단백질 가수분해 단편들에 대한 상기 조성물의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 개선한다. 그리고 상기 방법은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67을 구상하는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 CR2 부분 내 적어도 2 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3의 세포 표면 결합 단백질 가수분해 단편들에 대한 상기 조성물의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 개선한다. 그리고 상기 방법은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67을 구상하는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 CR2 부분 내 적어도 3 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3의 세포 표면 결합 단백질 가수분해 단편들에 대한 상기 조성물의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 개선한다. 그리고 상기 방법은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67을 구상하는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 CR2 부분 내 적어도 4 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3의 세포 표면 결합 단백질 가수분해 단편들에 대한 상기 조성물의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 개선한다. 그리고 상기 방법은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67을 구상하는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 CR2 부분 내 적어도 5 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3의 세포 표면 결합 단백질 가수분해 단편들에 대한 상기 조성물의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 개선한다. 그리고 상기 방법은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67을 구상하는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 CR2 부분 내 적어도 6 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3의 세포 표면 결합 단백질 가수분해 단편들에 대한 상기 조성물의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 개선한다. 그리고 상기 방법은 N11, R36, K41, S42, K50, Y64, K67을 구상하는 상기 그룹으로부터 선택된 상기 조성물의 상기 CR2 부분 내 적어도 7 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, C3의 상기 세포 결합 단편은 C3d, C3dg, iC3b로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에서 C3의 상기 세포 표면 결합 단편은 C3d이다. 일부 실시예들에서, C3의 상기 세포 표면 결합 단편은 C3dg이다. 일부 실시예들에서, C3의 상기 세포 표면 결합 단편은 iC3b이다. 일부 실시예들에서, 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7 변형들은 보존적 아미노산 치환들일 수 있다. 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7 변형들은 비보존적 아미노산 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 변형은 적어도 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% 까지 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3의 세포 표면 결합 단백질 가수분해 단편들에 대한 상기 조성물의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 향상한다.
일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 2 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 3 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 4 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 5 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 6 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다.일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 7 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 8 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 9 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 10 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 11 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 12 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 13 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 14 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 변형은 다른 CR2 리간드들(EBV gp350 및 IFNα)에 관한 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3, C3(H₂O) 또는 세포 표면-결합 C3 단백질 가수분해 단편들의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다. 또한 상기 방법은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128을 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된 적어도 15 개의 아미노산 잔기를 변형하는 과정을 포함한다. 일부 실시예들에서, 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9. 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15 변형들은 보존적 아미노산 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9. 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15 변형들은 비보존적 아미노산 치환들일 수 있다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 변형은 적어도 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% 까지 C3d, C3dg, 및 iC3b와 같은 C3의 세포 표면 결합 단백질 가수분해 단편들에 대한 상기 조성물의 상기 CR2 부분의 상기 결합 동역학을 더 나쁘게 한다.
보체 관련 질병 또는 보체 관련 질환을 치료하는 방법들(Methods of Treating Complement-Associated Disease or Conditions)
이하 상기 조성물이 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개체의 보체 관련 질병 또는 질환들을 치료하는 방법들이 제시된다. 여기서 사용되는 바와 같이, "개인"은 척추동물, 포유동물, 또는 인간일 수 있다. 특히, 여기서 사용되는 바와 같이, "포유동물"은 인간 영장류, 쥐, 랫(rat), 돼지, 개, 고양이, 원숭이, 소, 또는 말일 수 있다. 상기 개체에게 상기 조성물의 투여는 상기 질환의 증상을 경감시키고, 상기 극심한 질환의 경감, 또는 상기 질환의 완치에 효과적일 수 있지만 이에 국한되지 않는다.
일부 실시예들에 있어서, 이하 상기 조성물들을 상기 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개인의 보체 관련 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제시된다. 상기 구성물의 상기 보체 조절제 부분은 억제제 또는 그 생물학적 활성부분을 포함하고, 상기 구성물의 상기 투여는 보체 활동을 억제하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 선택적으로 결합하지만 IFNα 및 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 선택적으로 결합하지만 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 선택적으로 결합하지만 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 IFNα에 선택적으로 결합하지만 EBV gp350 및 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα 및 EBV gp350 에 선택적으로 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350에 선택적으로 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, iC3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 C3b의 세포 결합 단편들로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시예들에 있어서, 이하 상기 조성물들을 상기 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개인의 보체 관련 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제시된다. 상기 구성물의 상기 보체 조절제 부분은 억제제 또는 그 생물학적 활성부분을 포함하고, 상기 구성물의 상기 투여는 보체 활동을 억제하고; 상기 보체 관련 질병 또는 질환은 염증 질환인 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 관련 질병 또는 질환은 천식(asthma), 전신 홍반성 루프스(systemic lupus erythemato년), 류마티스성 관절염(rheumatoid arthritis), 반응성 관절염(reactive arthritis), 척추 관절염 (spondylarthritis), 전신 맥관염(systemic vasculitis), 인슐린 의존성 당뇨병(insulin dependent diabetes mellitus), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 실험 알레르기성 뇌척수염(experimental allergic encephalomyelitis), 쇼그렌 증후군(Sjogre's syndrome), 대숙주이식편병(graft versus host disease), 크론병(Crohn's disease)을 포함하는 염증성 장 질환, 궤양성 대장염(ulcerative colitis), 국소빈형 리퍼퓨전 부상(ischemia reperfusion injury), 심근경색(myocardial Infarction), 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 이식거부반응(알러지성 및 이종), 열성 트라우마(thermal trauma), 면역 복합체 유발 염증(immune complex-induced inflammation), 사구체신염(glomerulonephiritis), 그라비스형 근무력증(myasthenia gravis), 뇌 루프스(cerebral lupus), 귈랑-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome), 맥관염(vascultis), 전신성 경화증(systemic sclerosis), 아나필라시스(anaphylaxis), 카테테르 반응(Catheter reaction), 아테롬(atheroma), 불임(infertility), 갑상선염(thyroiditis), 성인 호흡 장애 증후군(ARDS;adult respitory distress syndrome), 포스트-바이패스 증후군(post-bypass syndrome), 혈액투성(hemodialysis), 소아류 류마티즘(juvenile rheumatoid), 베체트병(Behcets syndrome), 용혈성빈혈(hemolytic anemia), 수포창(pemphigus), 수포성 유천포창(bullos pemphigoid), 뇌졸중(stroke), 아테롬성 동맥 경화증(atherosclerosis) 및 피부 경화증(scleroderma)와 같은 염증 질환을 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1, 및 FH 를 포함하는 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 EBV gp350에 선택적으로 결합하지만, IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 선택적으로 결합하지만, EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα에 선택적으로 결합하지만, EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα 및 EBV gp350에 선택적으로 결합하지만, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350에 선택적으로 결합하지만, 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, iC3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 C3b의 세포 결합 단편들로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시예들에 있어서, 이하 상기 조성물들을 상기 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개인의 보체 관련 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제시된다. 상기 구성물의 상기 보체 조절제 부분은 억제제 또는 그 생물학적 활성부분을 포함하고, 상기 구성물의 상기 투여는 보체 활동을 억제하고; 상기 보체 관련 질병 또는 질환은 바이러스 감염인 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 바이러스 감염은 인플루엔자 바이러스 A, 인플루엔자 바이러스 B, 호흡기 세포융합 바이러스(respiratory syncytial virus), 댕기열 바이러스(Dangue virus), 황열병 바이러스(Yellow fever virus), 에볼라 바이러스(Ebola virus), 마르부르그 바이러스(Marbug virus), 랏사 열 바이러스(Lassa fever virus), 동부형마 뇌막염 바이러스(Eastern Equine Encephalitis virus), 일본뇌염 바이러스(Japanese Encephalitis virus), 세인트루이스 뇌염 바이러스(St.Louis Encephalitis virus), 머레이 밸리 열 바이러스(Murray Valley fever virus), 웨스트나일 바이러스(West Nile virus), 리프트 밸리 열 바이러스(Rift Valley fever virus), 로터바이러스 A(Rotavirus A), 로터바이러스 B(Rotavirus B), 로터바이러스 C(Rotavir C), 신도비스 바이러스(Sindobis virus), 한타바이러스(Hantavirus)를 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 관련 질병 또는 질환은 개체의 바이러스성 팩터에 대한 반응의 결과가 된다. 일부 실시예들에서, 상기 바이러스성 팩터는 아데노바이러스(adenovirus), 우두 바이러스(vaccina virus), 아데노 관련 바이러스(adeno associated virus), 수정된 우도 앙카라 바이러스(modified vaccinia ancara virus), 사이토메갈로바이러스(cytomegalovirus), 또는 상기 분양의 어떤 다른 바이러스성 팩터를 포함하되, 이에 국한되지 않는다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1, FH로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 선택적으로 결합하지만 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 선택적으로 결합하지만 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα에 선택적으로 결합하지만 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα 및 EBV gp350에 선택적으로 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350에 선택적으로 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα 에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, iC3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 C3b의 세포 결합 단편들로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 S42 및 K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고, IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, D42A 및 K50A로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFMa에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67, S42A, K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350 및 IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다.
일부 실시예들에 있어서, 이하 상기 조성물들을 상기 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개인의 보체 관련 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제시된다. 상기 구성물의 상기 보체 조절제 부분은 억제제 또는 그 생물학적 활성부분을 포함하고, 상기 구성물의 상기 투여는 보체 활동을 억제하고; 상기 보체 관련 질병 또는 질환은 곰팡이 감염인 것을 특징으로 한다. 상기 분야에서 칸디다균(Candida)이 CR2와 비슷한 결합 부분들을 가지는 CR3 등 단백질로 나타난다. 상기 칸디다 CR3 등 단백질은 발병과 관련되어 나타난다. 따라서 본 발명의 실시예는 곰팡이 감연된 개인을 치료하는 방법을 나타낸다. 상기 치료는 이하 상기 조성물들을 대상에 투여하는 것을 포함하여 ,보체를 억제할 뿐만 아니라 곰팡이-"CR3"기능을 막고, 상기 구성물의 상기 보체 조절제 부분은 보체 억제제 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1, FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 선택적으로 결합하지만 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 선택적으로 결합하지만 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα에 선택적으로 결합하지만 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα 및 EBV gp350에 선택적으로 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350에 선택적으로 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, iC3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 C3b의 세포 결합 단편들로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 S42 및 K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고, IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, D42A 및 K50A로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFMa에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67, S42A, K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고, EBV gp350 및 IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다.
일반적인 과정 중에 일어나는 세포 고사(apoptosis)는 비 염증성이고, 면역 내성의 유발과 관계있다. 세포 고사가 얼마나 활성화되는지 및 어떤 세포 종류(예를 들면, Fas와 결합하는 치료제는 염증을 줄일 수 있다)인지에 따라 염증성일 수도 있지만. 세포 괴저성 사멸(necrotic cell death)은 지속될 수 있고 방출된 세포 내용물들 및 자극된 포식세포들에 의해 방출되는 면역반응을 생성 및 증강하는 사이토카인(proinflammatory cytokines)에 의해 매개된 강한 염증반응을 일으킨다. 고사되는 세포들 및 전달수단(apoptosis cells and vehicles)은 포식세포에 의해 보통 제거되므로 세포 용해의 상기 프로 면역반응 서열들을 방지한다. 고사되는 세포 및 고사되는 몸통들은 바로 보체를 수리하고, 보체는 옵소닌화 및 고사되는 세포들의 개선된 식균 작용으로 인해 항-염증반응을 유지할 수 있다.
염증은 타고나고 적응되는 면역 반응에 영향을 끼칠 수 있는 면역 세포의 불특정 보충과 관계있다. 고사된 세포들/ 및 잔해들의 식세포의 흡수를 억제하기 위한 세포고사에 바탕한 종양 치료를 하는 동안 보체 활성을 조절하는 것은 상기 종양 환경 내부의 상기 염증성/선천적인 면역반응을 향상시킨다. 부가적으로, 고사 세포들은 면역학적 자가 항원들의 원천이 될 수 있고, 남아있는 세포고사 잔해들은 자동면역을 발생할 수 있다. 향상된 면역 자극 환경을 생성하고, 종양 세포들이 있는 장소에서 보체를 조절하는 것은 세포고사를 감소시키고 나아가 상기 숙주가 보통 내성이 있는 종양에 대항해 특정 면역을 증가시키거나 작동시키게 된다.
따라서 일 측면에서 상기 구성물을 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개체의 세포고사에 기반한 치료법(예를 들면, Fas 리간드를 나타내는 아데노 바이러스를 이용한 유전자 치료)의 상기 결과를 개선하는 방법이 제시된다. 상기 구성물의 상기 보체 조절제 부분은 보체 억제제 또는 그 생물학적 활성 단편을 포함하고, 상기 구성물의 투여는 보체 활성을 억제하는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 보체 억제제는 MCP, DAF, CD59, Crry, CR1, FH로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 결합하지만 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα에 결합하지만 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350과 IFNα에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, iC3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 C3b의 세포 결합 단편들로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 S42 및 K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고, IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, D42A 및 K50A로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFMa에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67, S42A, K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350 및 IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다.
보체 활성을 향상시키는 치료법(Methods of Treatment by Enhancing Complement Activity)
일부 실시예들에 있어서, 이하 상기 조성물들을 상기 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개인의 보체 관련 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제시된다. 상기 구성물의 상기 보체 조절제 부분은 억제제 또는 그 생물학적 활성부분을 포함하고, 상기 구성물의 상기 투여가 보체 활성을 향상시키는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예들에 있어서 보체 활성을 향상하는 것은 상기 질환의 증상을 감소하게 하고, 극심한 상기 질환을 완화시키고, 상기 질환의 완치하는데 효과가 있을 수 있지만 이에 국한되지는 않는다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 EBV gp350에 결합하지만 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 결합하지만 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα에 결합하지만 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα과 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, iC3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 C3b의 세포 결합 단편들로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된다.
일부 실시예들에 있어서, 이하 상기 조성물들을 상기 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개인의 보체 관련 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제시된다. 상기 구성물의 상기 보체 조절제 부분은 억제제 또는 그 생물학적 활성부분을 포함하고, 상기 구성물의 상기 투여가 보체 활성을 향상시키고, 상기 보체 관련 질병 및 질환은 암(cancer)인 것을 특징으로 한다. 구성물들을 향상하는 보체를 나타내는 암들의 대표적이지만 비제한적 목록은; 림프종, B세포 림프종, T 세포 림프종, 균상 식육종(mycosis fungoides), 다발성골수증(multiple myeloma), 홉킨스병(Hodgkin's Disease), 골수성백혈병(myeloid leukemia), 방광암(bladder cancer), 뇌암, 신경계 암, 두경부암, 두경부 편평상피세포 암(squamous cell carcinoma of head and neck), 신장암, 소세포폐암 및 소세포가 아닌 폐암과 같은 폐암(lung cancers such as small cell lung cancer and non-small cell lung cancer), 요도암(urothelial carcinomas), 선암(adenocarcinomas), 육종(sarcomas), 신경교종(gliomas), 고수준 gliomas(high grade giomas), 아세포종(blastomas), 신경아세포종(neuroblastomas), 형질세포종(plasmacytomas), 조직구종(histiocytomas), 선종(adenomas), 저산소 암(hypoxic tumors), 골수증(myelomas), 에이즈 관련 림프종 및 육종(AIDS-related lymphomas or sarcomas), 전이성암(metastatic cancers), 신경아세포종/교아종(neuroblastoma/glioblastoma), 난소암(ovarian cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 전립선암(prostate cancer), 피부암(skin cancer), 간암(liver cancer), 흑색종(melanoma), 구강, 목, 후두, 및 폐의 편평상피암(squarmous cell carcinomas of the mouth, throat, larynx, and lung), 대장암(colon cancer), 자궁암(cervical cancer), 상피암(cervical carcinoma), 유방암(breast cancer), 및 상피암(epithelial cancer), 신장암(renal cancer), 비뇨계 암(genitourinary cancer), 폐암(pulmonary cancer), 식도암(esphageal carcinoma), 두경부 암(head and neck carcinoma), 대장암(large bowel cancer), hematopoietic cancers), 고환암(testicular cancer), 결장 및 직장암(colon and rectal cancers), 위암(stomach cancer), 전립샘암(porostatic cancer), 반덴스트룀혈증 또는 췌장암(Waldenstroms disease or pancreatic cancer)을 포함한다. 다른 실시예들에서, 자궁 및 항문 형성장애(cervical and anal dysplasias), 다른 형성장애(other dysplasias), 극심함 형성장애(severe dysplasias), 과형성(hyperplasias), 이례적 과형성(atypical hyperplasias), 종양형성(neoplasias)와 같은 상기 보체 관련 질병 또는 질환은 전암성질환이지만 이에 국한되지 않는다. 일부 실시예들에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입M(IgM; Ig isotype M), 쥐 Ig 이소타입G₃(IgG₃), 및 쥐 IgM Fc, 인간 IgG₁Fc도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 및 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 EBV gp350에 결합하지만 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 결합하지만 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα에 결합하지만 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα 및 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, iC3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 C3b의 세포 결합 단편들로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 S42 및 K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고, IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, D42A 및 K50A로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFMa에 결합하지 않거나 감소된 결합 친화도를 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67, S42A, K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350 및 IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다.
일부 실시예들에 있어서, 이하 상기 조성물들을 상기 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개인의 보체 관련 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제시된다. 상기 구성물의 상기 보체 조절제 부분은 억제제 또는 그 생물학적 활성부분을 포함하고, 상기 구성물의 상기 투여가 보체 활성을 향상시키고, 상기 보체 관련 질병 및 질환은 바이러스 감염인 것을 특징으로 한다. 구성물들을 향상하는 보체를 나타내는 바이러스 감염의 대표적이지만 비제한적 목록은; 단순 헤르페스 바이러스 타입-1(Herpes simplex virus type-1), 단순 헤르페스 바이러스 타입-2(Herpes simplex virus type-2). 사이토메갈로바이러스(Cytomegalovirus), 엡스타인-바 바이러스(Epstein Barr virus), 바리첼라 조스터 바이러스(Varicella-zoster virus), 인간 헤르페스바이러스 6(Human herpesvirus 6), 인간 헤르페스바이러스(Human herpesvirus 7), 인간 헤르페스 바이러스 8(Human herpesvirus 8), 베리올라 바이러스(Variola virus), 수포성 구내염 바이러스(Vesicular stomatitis virus), A형 간염바이러스(Hepatitis A virus), B형 간염 바이러스(Hepatitis B virus), C형 간염 바이러스(Hepatitis C virus), D형 간염 바이러스(Hepatitis D virus), E형 간염 바이러스(Hepatitis E virus), 리노바이러스(Rhinovirus), 코로나바이러스(Coronavirus), 인플루엔자 바이러스 A(Influenza virus A), 인플루엔자 바이러스 B(Influenza virus B), 홍역바이러스(Measles virus), 폴리오마 바이러스(Polyomavirus), 인간 유두종 바이러스(Human Papilomavirus), 호흡기합포체바이러스(respiratory syncytial virus), 아데노바이러스(Adenovirus), 콕사키바이러스(Coxsackie virus), 뎅기 바이러스(Dengue virus), 유행성이하선염 바이러스(Mumps virus), 폴리오바이러스(Poliovirus), 라우스 육종바이러스(Laus sarcoma virus), 황열병 바이러스(Yellow fever virus), 에볼라바이러스(Ebola virus), 마르버그 바이러스(Marburg virus), 랏사열 바이러스(Lassa fever virus), 동부형마 뇌막염(eastern Equine Encephalitis virus), 일본 뇌염 바이러스(Japanese Encephalitis virus), 세인트 루이스 뇌염 바이러스(St. Louis Encephalitis virus), 머레이 밸리 열 바이러스(Murray Valley fever virus), 웨스트 나일 바이러스(West Nile virus), 리프트 밸리 열 바이러스(Rift Valley fever virus), 로터바이러스 A(Rotavirus A), 로터바이러스 B(Rotavirus B), 로터바이러스 C(Rotavir C), 신도비스 바이러스(Sindobis virus), 인간 T 세포 백혈병 바이러스 타입-1(Human T-cell Leukemia virus type-1), 한타바이러스(Hantavirus), 루벨라 바이러스(Rubella virus), 원숭이면역결핍바이러스(Simian Immunodeficiency virus), 인간 면역결핍 바이러스 타입-1(Human Immunodeficiency virus type-1), 인간 면역결핍 바이러스 타입-2(Human Immunodeficiency virus type-2)를 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입M(IgM; Ig isotype M), 쥐 Ig 이소타입G₃(IgG₃), 및 쥐 IgM Fc, 인간 IgG₁Fc도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 및 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 EBV gp350에 결합하지만 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 결합하지만 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα에 결합하지만 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα 및 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, iC3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 C3b의 세포 결합 단편들로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 S42 및 K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고, IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, D42A 및 K50A로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFMa에 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67, S42A, K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350 및 IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다.
일부 실시예들에 있어서, 이하 상기 조성물들을 상기 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개인의 보체 관련 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제시된다. 상기 구성물의 상기 보체 조절제 부분은 억제제 또는 그 생물학적 활성부분을 포함하고, 상기 구성물의 상기 투여가 보체 활성을 향상시키고, 상기 보체 관련 질병 및 질환은 박테리아 감염인 것을 특징으로 한다. 구성물들을 향상하는 보체를 나타내는 바이러스 감염의 대표적이지만 비제한적 목록은; 소결핵(M. tuberculosis), 소결핵균(M. bovis), 소 결핵 스트레인 BCG(M. bovis strain BCG), 조형결핵균(M.avium). MAI(M. intracellulare), 북중앙아프리카결핵(M. africanum), 마이코박테리움 칸사시(M. kansasii), 마이코박테리움 마리늄(M. marinum), 마이코박테리움 율세란즈(M. ulcerans), 조형 아종 부결핵균(M. avium subspecies paratuberculosis), 노카르디아 폐렴(Nocardia asteroides), 다른 노카르디아 종들(other Nocardia species), 레지오넬라.뉴모필라(Legionella pneumophila), 다른 레지오넬라 종들(other Legionella species), 살모넬라 균(Salmonella typhi), 다른 살모넬라 종들(other Salmonella species), 쉬겔라 종들(Shigella species), 흑사병균(Yesinia pestis), 파스퇴렐라헤몰라이티카(Pasteurella haemolytica), 파스퇴렐라물토시다(Pasteurella multocida), 다른 파스퇴렐라 종들(Pasteurella species), 악티노바실루스(actinobacillus), 흉막폐렴(pleuropneumoniae), 리스테리아 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes). 리스테리아 이바노비(Listeria Ivanovii), 소유산균(Brucella abortus), 다른 유산균류(other Brucella species), 카우드리아 루미내티움(Cowdira ruminatium), 뉴모니아 클라미디아(chlamydia pneumoniae), 트라코마 클라미디아(chlamydia trachomatis), 고양이 클라미디아(chlamydia psittaci) , 큐열균(coxiella burnetii), 다른 리케차 종(rickettsial species), 얼리키아 종(Ehrlichia species), 포도상구균(staphylococcus aureus), 표피포도구균(staphylococcus epidermidis), 화농성포도상구균(Stereptococcus pyogenes), 연쇄상구균(Streptococcus agalactiae), 탄저균(bacillus anthracis), 대장균(Escherichia coli), 콜레라균(vibrio cholerae), 캄필로박터 종(Campylobacter species), 수막염균(neisseria meningitidis), 임균(neisseria gonorrhoeae), 녹농균(pseudomonas aeruginosa), 다른 슈도모나스 종(other pseudomonas species), 인플루엔자 균(haemophilus influenzae), 연성하감균(haemophilus ducreyi), 헤모필루스 균(haemophilus species), 파상풍균(clostridium tetani), 다른 클로스트리듐 종(other clostridium species), 식중독균(yersinia enterolitica), 및 다른 에르시니아 종(other yersinia species)에 의한 감염을 치료하는 데 사용된 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입M(IgM; Ig isotype M), 쥐 Ig 이소타입G₃(IgG₃), 및 쥐 IgM Fc, 인간 IgG₁Fc도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 및 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 EBV gp350에 결합하지만 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 결합하지만 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα에 결합하지만 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα 및 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, iC3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 C3b의 세포 결합 단편들로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 S42 및 K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고, IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, D42A 및 K50A로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFMa에 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67, S42A, K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350 및 IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다.
일부 실시예들에 있어서, 이하 상기 조성물들을 상기 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개인의 보체 관련 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제시된다. 상기 구성물의 상기 보체 조절제 부분은 억제제 또는 그 생물학적 활성부분을 포함하고, 상기 구성물의 상기 투여가 보체 활성을 향상시키고, 상기 보체 관련 질병 및 질환은 기생충 감염인 것을 특징으로 한다. 구성물들을 향상하는 보체를 나타내는 바이러스 감염의 대표적이지만 비제한적 목록은; 톡소포자충(toxoplasma gondii), 열대열말라리아원충(plasmodium falciparum), 삼일열 말라리아 원충(plasmodium vivax) , 다른 말라리아원충 종들(other plasmodium species), 브루세이트리파노소마(trypanosoma brucei), 크루즈트리파노소마(trypanosoma cruzi), 레슈마니아 메이져(leishmania major), 다른 레슈마니아 종들(other leishmania species), 만손주혈흡충(schistosoma mansoni), 다른 주혈흡충 종들(other schistosoma species), 이질아메바(entamoeba histolytica)를 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입M(IgM; Ig isotype M), 쥐 Ig 이소타입G₃(IgG₃), 및 쥐 IgM Fc, 인간 IgG₁Fc도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 및 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 EBV gp350에 결합하지만 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 결합하지만 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα에 결합하지만 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα 및 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, iC3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 C3b의 세포 결합 단편들로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 S42 및 K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고, IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, D42A 및 K50A로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFMa에 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67, S42A, K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350 및 IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다.
일부 실시예들에 있어서, 이하 상기 조성물들을 상기 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개인의 보체 관련 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제시된다. 상기 구성물의 상기 보체 조절제 부분은 억제제 또는 그 생물학적 활성부분을 포함하고, 상기 구성물의 상기 투여가 보체 활성을 향상시키고, 상기 보체 관련 질병 및 질환은 곰팡이 감염인 것을 특징으로 한다. 구성물들을 향상하는 보체를 나타내는 곰팡이 감염의 대표적이지만 비제한적 목록은; 칸디다알비칸스(candida albicans), 크립토코커스 네오포르만스(cryptococcus neoformans), 히스토플라스카 캡슐라툼(histoplasma capsulatum), 아스페르길루스푸미가투스(aspergillus fumigatus), 콕시디오이데스임미티스(coccidioides immitis), 파라콕시디오데스 브라실리엔시스(paracoccidiodes brasiliensis), 블라스토미세스 더마티티디스(blastomyces dermatitidis), 뉴모시스티스카르니(pneuomocystis carnii), 페르실리움마르네피(penicillium marneffi) 및 알터나리아 곰팡이(alternaria alternate)를 포함하여 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시예들에서, 상기 보체 촉진제는 인간 Ig 이소타입 G₁(IgG₁), 인간 Ig 이소타입M(IgM; Ig isotype M), 쥐 Ig 이소타입G₃(IgG₃), 및 쥐 IgM Fc, 인간 IgG₁Fc도메인, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG₃ Fc 도메인, 및 쥐 IgM Fc 도메인, 및 CVF로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 EBV gp350에 결합하지만 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 결합하지만 EBV gp350에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα에 결합하지만 EBV gp350 및 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 IFNα 및 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물은 EBV gp350에 결합하지만 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들과 IFNα에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 결합을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들은 C3d, iC3b, C3dg 및 CR2의 상기 두 N-말단 SCR 도메인들에 결합하는 하나 또는 그 이상의 C3b의 세포 결합 단편들로 구성되는 상기 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 S42 및 K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고, IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, N11, R36, K41, Y64, K67로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 EBV gp350에 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 CR2 부분은 I9, Y29, C31, G33, T34, D56, S70, H90, D92, S93, A97, T100, N101, S109, S128, D42A 및 K50A로 구성된 상기 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들 및 IFMa에 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다. 일부 실시예들에 있어서, 상기 구성물의 상기 CR2 부분은 N11, R36, K41, Y64, K67, S42A, K50A로 구성되는 상기 그룹으로부터 하나 또는 그 이상의 변형들을 가지고,EBV gp350 및 IFNα에 대해 결합하지 않거나 감소된 결합 효율을 가진다.
다른 실시예들
본 명세서에서 언급된 모든 간행물들, 특허 출원들 및 특허들은 여기에 참조로서 통합된다.
본 발명이 특정한 실시예들에 관해서 개시되었으나, 변형될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로, 본 출원은, 본 발명이 속하는 기술분야의 상식 및 관습의 범위 내에서 본 명세서에 개시로부터의 변경을 포함하여, 일반적으로 본 발명의 원리를 따르는 본 발명의 임의의 변형, 사용 및 각색을 포괄한다.
예 1: EBV gp350 및 IFNα와 함께 CR2 결합 상호작용에 중요한 아미노산 잔기들의 확인(IDENTIFICATION OF AMINO ACID RESIDUES IMPORTANT FOR CR2 BINDING INTERACTIONS WITH EBV gp350 AND IFNα)
실험 방법들
재조합형 단백질의 발현 및 정제
NMA 및 아이티씨("ITC";isothermal titration calorimetry) 연구들에 대한 인간 CR2 SCR1-2는 전술한 바와 같이(46), 바이오110발효조(Bio™110 Fermenter)(New Brunswick Scientific, Edison, NJ)를 이용하는 피치아 파스토리스(Pichia pastoris)로 나타난다. 간단히, 단일 클론은 1% 글리세롤(리터 당 BMG; 85% 인산 26.7ml, 황산 칼슘 0.93mg, 황산 칼륨 18.2g, 황산 마그네슘-7수화물 14.9g, 수산화칼륨 4.13g, 글리세롤 10.0g, 중성 탈이온수 1 리터) 5ml 피치아 기저 염분 배지에서 30℃ 및 250rpm, 50ml BMG에서(24시간) 및 최종 300ml BGM(24시간)까지에서 자라게 된다. 상기 배양 컬쳐(inoculation culture)Sms 2500*g25℃에서 원심분리되고, 30ml BGM에서 다시 서스펜드된다. 상기 30ml 배양 컬쳐는 글리세롤 40g을 포함하는 최소의 피치아 바살 염분 배지(Pichia basal salt medium) 1L.0에서 를 배양하는 데 사용된다. 용해된 0₂농축액은 40%로 유지되고, 30℃의 온도 및 상기 2M 수산화칼륨을 사용한 pH. 5에서 유지된다. 처음 피드(initial feeds)은 배치 글리세롤 피드들(batch glycerol)이다; 메탄올로의 전환은 기하급수적인 메탄올 피드들이 생기기 전에 메탄올 주사에 의해 완화된다. 메탄올 인덕션(methanol induction)은 상기 컬쳐가 세포 잔해를 제거한 후에 이틀간 지속된다. 상기 상청액은 GSTrap™콜럼에 GST-C3d를 결합함으로써 인하우스가 생성되는, CR2 친화도 콜럼에 따른 SP-세파로스 콜럼(2*5mL SP HiTrap™콜럼들, GE 바이오사이언스, Pittsburgh, PA)를 지나기 전에 (10mM 포름산염에서 pH 4.0으로 교체된다. CR2는 1/3 살린 인산염 완충액(PBS, 1.6mM MgCL₂, 0.9 mM KCL, 0.5 mM KH₂PO₄, 45.6mMNaCL, 2.7 mM Na₂HPO₄pH7.4)에 녹는다. 최족적으로, CR2SCR1-2는 사이즈 배제 크로마토 그래피에 의해 정제된다. CR2의 정제 및 확인은 에스디에스-페이지(SDS-PAGE), 웨스턴 블롯 분석(Western blot analysis) 및 질량 분석법(mass spectorometry)를 경유하여 모니터링된다. N 및 N-C는 동위원소로 이름 붙여진 단백질들은 이러한 전략을 사용하여 준비된다. 15N 동위원소로 라벨된 CR2 15N-황산 암모늄이 사용된다. N-동위원소로 라벨된 CR@ N-황산 암모늄, C-글리세롤 및 C-메탄올이 사용된다. 동위원소리 채워진 화학물질들은 이소텍 주식회사(Isotec Inc., Miamisburg, OH)에서 구입했다.
인간 ITC 연구들에 대한 CR2 SCR1-2는 상술한 바와 같이(42, 43), pMAL-P2X™ 발현계(New England Biolabs, Ipswich.MA)를 사용하여 생성된다. 앰피실린-저항성의 콜론들은 1LRK지 연장되고 37℃에서 0.3의 A600이 유지될 때까지 오버나이트 컬쳐(overnight culture)가 사용된다. 컬쳐들은 원심불리기에 의해서 수확되기 전에 30℃에서 0.3 mM 이소프로필-β-티오갈락토사이드(IPTG;isopropyl-β-D-thiogalactoside)로 유도된다. 얻어진 펠렛(harvested pellets)들은 아밀로오스 컬럼 완충액에서 다시 서스펜드되고,(20mM Tris HCL, pH 7.4, 0.2M NaCl, 1mM EDTA) 및 초음파 분해에 의해 용해된다. 용해물은 원심분리기에 의해 정제되고, 아밀리오스 레진 컬럼(amylose resin column)(New England Niosciences, Ipswich, MA)에 적용된다. 바운드 MBP-CR2 SCR1-2는 아밀로오스 컬럼 용해 완충액(아밀로오스 컬럼 완충액 더하기 10mM 말토오스)을 사용하여 상기 컬럼으로부터 용해된다. 최종적으로 상기 MBP-CR2 SCR1-2는 사이즈 배제 크로마토그래피에 의해 정제된다. MBP-CR2의 정제 및 확인은 에스디에스-페이지(SDS-PAGE) 및 웨스턴 블롯 분석(Werstern blot analysis)에 의해 모니터링된다.
ITC에 대한 인간 C3d 연구들은 전술한 바와 같이(47), 상기 pGEX™발현계(GE Healthcare, Piscataway, NJ)대장균을 사용하여 생성된다. 간단히, 앰피실린-저항성 콜론들은 1L까지 연장되는 오버나이트 컬쳐들을 시작하는데 사용되고, 0.3의 A600에 도달할 때까지 37℃에서 배양된다. 컬쳐들을 원심분리기에 의해 얻어지기 전에 30℃에서 밤새 0.3 mM IPTG로 유도된다. 얻어진 필렛들은 GST 컬럼 완충액(50mM Tris-HCl, pH 8.0 250mM NaCl, 1mM EDTA)로 다시 서스팬드되고, 초음파 분해에 의해 용해된다. 용해물은 원심분리기에 의해 정제되고, GSTrap™컬럼(GE Biosciences, Pittsburgh, PA)에 적용된다. C3d는 4℃에서 밤새 트롬빈의 50U로 소화하여 상기 컬럼으로부터 정제되고, 사이즈 배제 크로마토그래피에 의해 상당히 정제된다. C3d의 정제는 에스디에스-페이지(SDS-PAGE)를 경유하여 모니터링된다.
NMR 적정들 및 ITC 연구에 대한 야생형 단백질의 잔기들1-470을 포함하는 EBV gp350의 불완전한 조성물의 정제는 전술한 바와 같이 수행된다(46). gp350은 상기 gp350-패키지의 바큘로바이러스 단편들(pFL-Bac Trasfer vector, c-말단 polyhistidine tag)로 3의 감염의 다양성(MOI;multiplicity of infection)에서 Sf9 곤충 세포에 영향을 끼쳐서 생성된다. 상기 바큘로바이러스성 상청액은 10mM 이미다졸 pH 7.4로, 10mM Tris-HCl 로 완충되고 5 mL HiTrap™컬럼(GE Biosciences, Pittsburgh, PA)에 적용되어 선형 이미다졸 기울기로 상당히 용해된다. gp350의 정제 및 확인은 에스디에스-페이지(SDS-PAGE) 및 웨스턴 블롯(Western blot)분석을 경유하여 모니터링된다.
NMR 적정들 및 ITC 연구에 대한 인간 IFNα는 대장균 내의 상기 pMAL™발현계(New England Biolabs, Ipswich, MA)를 이용하여 전술한 바와 같이 생성된다(48). 앰피실린-저항성 콜론들은 1L까지 연장되는 오버나이트 컬쳐들을 시작하는데 사용되고, 0.3의 A600에 도달할 때까지 37℃에서 배양된다. 컬쳐들이 원심분리기에 의해 얻어지기 전에 25℃에서 밤새 0.3 mM IPTG로 유도된다. 얻어진 필렛들은 아밀로오스 컬럼 완충액(20 mM Tris-HCl, pH 7.4, 0.2M NaCl, 1mM EDTA)로 다시 서스팬드되고, 초음파 분해에 의해 용해된다. 용해물은 원심분리기에 의해 정제되고, 아밀로오스 레진 컬럼(New England Biosciences, Ipswich, MA)에 적용된다. C3d는 4℃에서 밤새 트롬빈의 50U로 소화하여 상기 컬럼으로부터 정제되고, 사이즈 배제 크로마토그바운드 MBP-IFNα는 아밀로오스 컬럼 용해 완충액(아밀로오스 컬럼 완충액 더하기 10mM 말토오스)을 사용하여 상기 컬럼으로부터 용해된다. 용해 MBP tag는 밤새 4℃에서 Factor Xa (New England Biosciences, Ipswich, MA)로 분열된다. 최종적으로 IFNα는 사이즈 배제 크로마토그래피에 의해 상당히 정제된다. IFNα의 정제 및 확인은 에스디에스-페이지(SDS-PAGE)및 웨스턴 블롯 분석을 경유하여 모니터링된다.
NMR 분석들은 베리안600, 800, 및 900 MHZ 마그넷(Varian 600, 800, 900)에서 수행된다. 베리안600, 800, 및 900 MHZ 마그넷은 UCDSOM에 있는 상기 록키 마운틴 지역 NMR 시설에서 수용되고(600 및 900 MHz) 및 유씨콜로라도 볼더 캠퍼스에 있는 더블유. 엠. 케크 하이필드 NMR 시설(W.MMKeck High Field NMR Facility at the University　of Colorado　Bouder campus)에서 수용된다(800MHz). 상기 동일하게 1/3 PBS 내의 CR2의 15N-13C 라벨의 SCR1-2 도메인들은 순차적으로 HNCACB(50), CDCA(CO)NH(51) 및 15N 에디티드 NOESY-HSQC(52) 3 차원의 스펙트럼을 사용하여 15-TROSY-HSQC를 배정하도록 사용된다. 상기 NMR 데이터는 nmrPipe(53)으로 프로세스되어서 ccpNMR(54)로 분석된다. 화학적 전달 변화들은 EBV gp350 또는 IFNα 중 하나의 농축액들로 증가하는 자유로운 CR2 SCR1-2 및 CR2 SCR1-2로부터 TROSY-HSQC를 더하여 ccpNMR을 사용하여 모니터링된다.
등온 적정 열량측정계("ITC";Isothermal Titration Calorimetry) 분석
ITC 실험들은 상기 UCDSOM 캠퍼스의 생리학 핵심 시설(Biophysics Core facility) 내의 Microcal VP-ITC(GE healthecare, Piscataway, NJ)에서 수행되었다. 5 ㎕ 주사로 구성된 각 적정 실험은 C3d, gp350 또는 IFNα의 높은 10㎕의 농축액의 26주입하여 나타난다. 데이터는 모델들이 결합하는 단일 장소 또는 두 장소들 중 어느 것을 사용하여 상기 제조업자에 의해 제공된 상기 소프트로웨어(Origin, version 7.0 MicroCal)에 의해 분석된다(55).
화학적 전달 분석들
전술한 레조넌스 배열(48)을 이용하여, 총 길이의 리간드들 EBV gp350, IFNα는 동일하게 15N-라벨의 CR2 SCR1-2 샘플들로 적정되고, 상기 1H-15N 화학적 전달은 모니터링된다(도 1-3). EBV gp350으로 적정하는 것은 단단한 결합 상호작용을 나타내는, 특정 레조넌스 재현 및 재발에 의해 특징되는 결합의 단일 모드를 생성한다. EBV gp350으로 화학 전달 변화들을 나타내는 CR2 SCR1-2에서의 상기 잔기들은 N11, R13, A22, R28, S32, R36, K41, K57, Y64, K67, Y68, R83, G84, 및 R89이다. 이러한 잔기들은 CR2의 SCR1-2 사이에서 상기 SCR1, SCR2, 상기 내측 SCR 링커 영역을 관통한다(도 3, 4). 화학 전달 변화 규모는 도 3에서 나타난다. 이러한 결과는 SCR1-2와 SCR1의 릿지 사이에서 상기 내측 SCR 링커가 CR2에 gp350을 연결하는 가장 중요한 역할을 담당하게 한다(도 3). 이 상호작용은 상기 NMR 시간 스케일에서 천천히 교환하여, 상한점Kd만이 계산될 수 있다. 상기 Kd는 프리 및 바운드 레조넌스들(약 60Hz)사이에서 상기 최소한의 발견되는 화학적 전달 차이를 사용하는 과정; ~60μM로 계산되는 상기 결합 상수의 상한점인 ~108M-1s-1의 정도로 확산 제한을 수행하는 것을 나타내는 데 계산된다(표 1).
총 길이의 IFNα는 또한 동일하게 15N-라벨의 CR2 SCR1 1-2 샘플들로 적정되고, 상기 1H-15N 화학적 전달은 모니터링된다(도 2). 상기 사이토카인 IFNα를 이용한 적정은 gp350 연결과 유사한 결합의 단일 모드를 생성하고, 따라서 단단한 상소작용이 된다. 화학적 전달 변화들을 나타내는 CR2 SCR1-2에서의 상기 잔기들은 R13, Y16, R28, S42, K48, K50, Y68, R83, G84 및 R89이다. 이러한 장기들은 상기 SCR1, SCR2 및 CR2의 내측 SCR 링커 영역을 관통한다(도 3 및 4B). 화학적 전달 변화 규모는 도 3에서 나타난다. 이러한 결과는 IFNα 결합 표면이 C3d 결합 표면과 유사하다는 것을 제시한다(도 3). 상기 gp350 화학 전달 변화들과 유사하게, IFNα에 대한 상기 화학 전달 변화는 상기 NMR 시간 스케일보다 더 단단하다는 것; 상기 상한점 Kd가 ~70μM가 되기 전에 계산되는 것을 나타낸다(표 1).
Figure pct00003
비교하여, C3d, gp350 및 IFNα에 의한 연결을 요구하는 CR2에서의 독특하고 공유되는 잔기들은 도 4CDPTJ 나타난다. 각 연결 스테이트에 대한 화학 전달의 규모의 변화는 도 3에서 나타난다.
화학 전달 분석
전술한 레노넌스 배열들(48)을 이용하여 총 길이의 EBV gp350 및 IFNα는 또한 동일하게 15N-라벨의 CR2 SCR1 1-2 샘플들로 적정되고, 상기 1H-15N 화학적 전달은 모니터링된다(도 1-3). EBV gp350을 이용한 적정은 단단한 상호작용을 나타내는 특정 레조넌스의 소멸 및 재발에 의해 특징되는 결합의 단일 모드를 생성한다. 화학적 전달 변화들을 나타내는 CR2 SCR1-2에서의 상기 잔기들은 N11, R13, Y16, R28, S42, K48, K50, Y68, R83, G84 및 R89이다. 이러한 장기들은 상기 SCR1, SCR2 및 CR2의 내측 SCR 링커 영역을 관통한다(도 3 및 4A). 화학적 전달 변화 규모는 도 3에서 나타난다. 이러한 결과는 상기 내측 SCR 링커 및 SCR1의 릿지가 상기 내측 SCR 링커가 CR2에 gp350을 연결하는 가장 중요한 역할을 담당하게 한다(도 3). 이 상호작용은 상기 NMR 시간 스케일에서 천천히 교환하여, 상한점Kd만이 계산될 수 있다. 상기 Kd는 프리 및 바운드 레조넌스들(약 60Hz)사이에서 상기 최소한의 발견되는 화학적 전달 차이를 사용하는 과정(약 60Hz);~60μM로 계산되는 상기 결합 상수의 상한점인 1~10X8M-1s-1의 정도로 확산 제한을 수행하는 것을 나타내는 데 계산된다(표 1).
총길이의 IFNα는 또한 동일하게 15N-라벨의 CR2 SCR1 1-2 샘플들로 적정되고, 상기 1H-15N 화학적 전달은 모니터링된다(도 2). 사이토카인 IFNα를 이용한 적정은 gp350에 대한 것과 비슷한 결합의 단일 모드를 생성하여 단단한 상호작용을 나타낸다. 화학적 전달 변화들을 나타내는 CR2 SCR1-2에서의 상기 잔기들은 R13, Y16, R28, S42, K48, K50, Y68, R83, G84 및 R89이다. 이러한 장기들은 상기 SCR1, SCR2 및 CR2의 내측 SCR 링커 영역을 관통한다(도 3 및 4B). 화학적 전달 변화 규모는 도 3에서 나타난다. IFNα 결합 표면은 상기 C3d 결합 표면과 유사하다(도 3). gp350 화학 전달 변화들과 유사하게 , IFNα에 대한 상기 화학 전달변화는 NMR 시간 스케일을 경유하여 나타나는 것보다 더 단단한 결합 상호작용; 상기 상한점 Kd는 ~70μM가 되기 전에 계산되는 것을 나타낸다. 비교하여, C3d, gp350 및 gp350에 의한 연결을 요구하는 CR2에서의 독특하고 공유되는 잔기들은 도 4C에서 나타난다. 각 연결 스테이트에 대한 화학 전달의 규모의 변화는 도 3에서 나타난다.
CR2-리간드 상호작용들의 열역학
ITC는 CR2-리간드 상호작용의 결합 친화도들을 결정하는데 사용된다. 상기 NMR 화학 전달 분석과 일치하여, CR2와 C3d 사이의 상기 상호작용은 단수의 결합 모델보다 두 장소 결합 모델에 적합한 상태를 바탕으로 결합하는 두 장소이다. 상기 두 친화도들은 0.13 ± 0.05μM 및 160 ± 20μM이다. CR2와 gp350 사이의 상기 상호작용은 0.014 ± 0.009μM을 생성하는 단수의 장소 결합 모델을 사용하여 알맞게 된다. CR2와 IFNα 사이의 상기 상호작용은 0.035 ± 0.008μM의 친화도를 생성하는 단수 장소 결합 모델을 사용하여 알맞게 된다. 친화도들로부터 파생되는 NMR 및 ITC로부터 모든 열역학 파라미터들의 상기 결과는 표 1에 나타난다.
논의
용액 단계에서 EBV gp350 및 IFNα의 CR2-리간드 상호작용들에 대한 연구에 대해:(1)총 길이의 EBV gp350 및 IFNα는 또한 동일하게 15N-라벨의 CR2 SCR1 1-2 샘플들로 적정되고, 상기 1H-15N 화학적 전달은 모니터링되는 NMR 스펙트로스코피 실험; 및 (2)각 CR-2 리간드 상호작용에 대한 결합 상수를 더 특징하고 결정하는 ITC에 대한 두 가지 접근법이 있다.
종전의 분석들은 SCR1 및 2가 모두 gp350(1, 12, 20, 56, 57)의 상기 결합을 위해 필요하다는 것을 나타낸다. 나아가, SCR1-2의 특정 영역들은 gp350(20, 58)을 결합시키는 데 중요하다. 이러한 영역들은 상기 첫 번 째와 두 번 째 사이에 있어서, SCR1의 두 번째 및 세 번째 시스테인 잔기들, 및 SCR2의 두 번째 반; SCR2(58) 내의 R89를 R96에, T100을 S128에 대응하는 것을 포함하는 아미노산들을 나타낸다. 상기 링커를 이용한 상호작용은 또한 gp350이 제거된 상기 링커로 글리코실화 장소의 상기 소개하할 뿐만 아니라 C3d 결합(20, 31, 57)을 나타낸다. 최근에 CR2 SCR1-2의 상기 표면에서 특정 작용하는 아미노산들이 나타난다. 돌연변이 생성 연구는 잔기들 R13, S15, R28, R36, K41, K56, K67, R83 및 R89가 상기 CR2-gp350 상호작용(42, 43)에서 가장 중요한 잔기인 것을 나타낸다. 부가적으로, HADDOCK를 이용하여, 상호작용의 모델이 gp350의 하나 및 두 도메인들 사이에서 상기 링커 영역이 CR2(43)의 SCR1 및 SCR2 사이의 상기 링커와 상호작용 하는 곳에서 결정된다.
그러나 중요한 영역들이 제시되고, CR2와 gp350사이의 상기 상호작용에서 중요한 아미노산들이 있음에도 불구하고, 발생하는 상호작용의 생리학적 증거가 없다. 이하 상기 데이터는 상기 CR2-gp350에 중요한 아미노산 잔기들을 나타낸다(도 4A). CR2-gp350 상호작용에 중요한 결정된 잔기들은 N11, R13, Y16, R28, S42, K48, K50, Y68, R83, G84 및 R89이다. 상기 링커 영역 내부에 다양한 상호작용들이 있기 때문에 결합 gp350에 따른 상기 링커 영역에 대해 SCR 도메인들의 재배열을 상상하는 것이 가능하므로 모든 접촉점들이 만나게 된다. 상기 이와 같은 경우라면, 상호작용에 중요한 잔기들의 일부는 결합에 따른 구조적 재배치와 관계있고, 아미노산 접촉 장소에는 접근하지 않는다. 일부 레조넌스들은 상기 연결된 복합체의 크기가 약 110 kDa 이고 그 결과로 생긴 증가된 텀블링 시간 때문에 소멸된다; 따라서 대체되는 라벨링 기술들은 그러한 레조넌스들을 발견하는데 필수적이다.
상기 데이터는 링커 영역이 상기 CR2-gp350 상호작용 내에서의 중요성을 나타낸다. 상기 링커 상호작용은 HADDOCK(43)으로부터 상기 부드러운 독(DOCK) 내부에서 뿐만 아니라 돌연변이로부터 파생되는 데이터에도 중요하다는 것을 나타낸다. SCR1과 SCR2 사이의 상기 링커 영역은 8 개의 아미노산들이고, SCR를 포함하는 단백질 내의 가장 긴 단백질 등은 다양한 리간드 상호작용들을 매개할 정도로 충분히 유연하다. 상기 CR2-C3d 상호작용과는 다르게, 데이터는 상기 링커 영역 내의 두 잔기들, K67, K68은 상기 CR2-gp350 상호작용에 있어서 중요하다. 따라서 전하를 띤 잔기들, K67, 및 Y68들은 상기 CR2-gp350 상호작용에 중요하다. 따라서 전하를 띤 잔기, K67 및 하이드록실 기를 포함하는 잔기, Y68과 함께, 상기 링커를 이용한 상기 상호작용은 상기 CR2-C3d 상호작용보다 상기 CR2-gp350에서 더 강한 결합을 가진다. 이러한 정보는 CR2가 다양한 특정 리간드 상호작용을 매개할 수 있는지를 정의하도록 한다.
상기 CR2-C3d 상호작용(59, 60)에 따라서, 상기 CR2-gp350서 많은 수의 전하를 띤 잔기들이 나타남에 따라 상호작용은 상기 정전기 CR2-gp350상호작용에 의해서 커다란 비중을 차지한다. SCR 1에서 발견되는 전하를 띤 잔기들의 대부분은, 도메인이 상기 CR2-gp350 내에서 더 중요한 역할을 하도록 한다. R83 주위의 다양한 잔기들이 상기 CR2-C3d 상호작용 동안 화학적 전달의 변화들을 나타낸 것을 보여주지 않음에도 불구하고, R83은 또한 CR2-gp350내에서 중요하게 정해진다. CR2-C3d 상호작용에서 나타나는 상기 약한 상호작용을 따라서, 이 데이터는 상기 R83 상호작용이 아미노산 접촉들보다 gp350의 정전기 끌림을 더 잘 유발할 수 있음을 나타낸다. 이 연구에서 나타나는 상기 전하를 띠는 잔기들은 상기 HADDOCK 모델(42, 43)에 동의한다. 나타나는 상기 CR2-C3d NMR 결합 지도로, 상기 CR2-gp350 상호작용과 관계있는 전하를 띠는 잔기들보다 더 많은 잔기들을 발견할 수 있다. 특별히 세 개의 하이드록실 기를 및 포함하는 아미노산들(S32, Y64, Y68)들은 상기 CR2-gp350 상호작용에서 중요하다. 이러한 측쇄 반응은 수소결합 상호작용과 유사하다. 세로운 데이터는 상기 CR2-gp350 및 CR2-C3d 결합 장소들이, 상기 리간드들이 왜 상기 리간드들이 컴피트(COMPETE)를 넘는지를 설명하지만 얼마나 선택적인 결합이 발생하는지를 설명하는 것에는 큰 차이들이 있음을 나타낸다.
상기 HADDOCK 모델은 CR2-gp350 결하바 잔기들을 결정하는 상기 NMR 에 적합하다(도 5). 두 잔기들인 K57, A22를 제외한 모든 잔기들은 상기 HADDOCK 모델로부터 파생되는 상기 가상의 결합 표면 내부에서 나타난다. 상기 A22 화학 전달은 CR2 결합 gp350에 따라 SCR1에서 약간의 모양 변화를 가질 수 있으므로 발생할 수 있다. NMR에 의해 나타나는 상기 K57 상호작용은 다른 잠재적으로 낮은 에너지의 도킹 모델을 작동시키는 데 이용되는 반면, 상기 영(Young, et al)(43)의 자극 받은 도킹 접근에 있어서는 활성 잔기로서 이용되지 않는다.
상기 CR2-IFNα 상호작용은 여러 가지 방식으로 특징된다. 상기 첫 번째는 C3d에 위치한 CR2 결합 장소들과 gp350(19)사이에 비슷한 염기서열을 조사하는 것으로 시작된다. 상기 잠재적인 결합 상호작용, IFNα의 상기 CR2 결합 장소의 펩티드 염기서열들에 대항하여 생긴 항체들은 세포 결합 부분 내 상기 CR2-C3d상호작용을 억제하는 것을 나타낸다.CR2에 결합하는 IFNα가 셀 결합 부분에서 CR2-C3d 복합체 형태를 억제함을 나타낸다. 부가적으로 IFNα는 gp350에 의한 CR2의 상기 캡핑을 억제하여 EVB(18)로부터의 초기 감염 단계의 항 바이러스성 억제제로 작용한다. 더 최근에 생리학 연구는 CR2-리간드 상호작용들의 열동역학 부분들에 대해 나타내어 CR2 및 IFNα(17)의 상기 생리학적 결합을 나타낸다. 상기 데이터는 상기 CR2-IFNα 상호작용에 대한 결합 장소 또는 결합 표면을 더 정의한다. NMR 중화 연구를 이용하여, R13, Y16, R28, S42, K48, K50, Y68, R83, G84, R89의 상기 CR2-IFNα 상호작용과 관련하여 아미노산들이 확인될 것이다.
다른 CR2 리간드 상호작용과 마찬가지로, 상기 CR2-IFNα 상호작용은 정전기 반응이 큰 비중을 차지한다. 상기 CR2-IFNα 작용들은 상기 C3d 상호작용과 가장 가깝고, 같은 링커 영역 잔기 Y68을 가지고, C3d 및 IFNα에 따라 커다란 동요를 경합하게 된다. 뿐만 아니라 C3d 및 IFN a 모두와 관련된 잔기들의 포관적인 레이아웃과 같다(도 4).
CR2 리간드의 상호작용의 열동역학적 연구들은 조금씩 다른 결과들을 생성한다(표 2). 전술한 바와 같이, 상기 CR2-C3d의 두 장소 또는 단수 장소 결합 상호작용(17,48)을 나타낸다. 상기 ITC 데이터는 160μM 의 더 약한 Kd 및 0.13μM의 더 단단한 상호작용을 가지는 두 장소 모델들에 적합하다. 이 Kd는 바이오생리학적 연구에 기초를 둔 표면 플라스몬 레조넌스(SPR)로부터 결정된 Kb의 거의 유사하다. ITC를 사용하여, 첫 번째로 액체상태에서 상기 두 독특한 결합 사건들에 대해 두 개의 분리된 친화도들을 측정하는 데 사용될 수 있다. 상기 CR2-C3 상호작용은 모든 다른 특징있는 CR2 리간드 상호작용은 간단한 하나의 결합 이소덤(one binding isoderm)에 알맞다는 점에서 특이하다. 대조적으로, CR2-gp350 상호작용의 최근의 ITC 연구는 0.014 μM의 Kd를 가진 단수의 결합 이소덤에 완전히 잘 맞게 된다. 친화도는 넥에 의해 결정된 0.077μM의 예전 발표된 Kd보다 약간 더 단단하게 결합한다. 이하 친화도의 상기 차이는 각 연구들의 실험조건들을 분류하기 때문에 생긴다. 최종적으로, 상기 CR2-IFNα 상호작용에 대한 상기 ITC 데이터는 0.036μM의 Kd를 가진 단수의 결합 이소덤과 가장 잘 맞는다. 이는 SPR에 의해 결정된 0.042의 상기 예전에 발표된 Kd와 완전히 합치된 친화도이다. 단단하게 지원하도록 수정된, CR2를 이용한 상기 SPR 연구들과 용액 내 CR2 및 IFNα를 완전히 이용한 상기 ITC 실험들과의 상기 차이는 각 에세이(assay)에서의 차이 때문일 뿐만 아니라, 완충액에서 사용되는 차이 때문이기도 하다. 결합 강도의 순위는 기존에 발표한 바와 같이(17,18), IFNα 및 gp350 결합 모두 CR2에 결합하는 C3d를 억제한다.
참조문헌들
1. Fingeroth, J. D., Clabby, M. L., and Strominger, J. D. (1988) J. Virol. 62, 1442-1447.
2. Fujisaku, A., Harley, J. B., Frank, M. B., Gruner, B. A., Frazier, B., and Holers, V. M. (1989) J. Biol. Chem. 264, 2118-2125.
3. Moore, M. D., Cooper, N. R., Tack, B. F., and Nemerow, G. R. (1987) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 84, 9194-9198.
4. Weis, J. J.,Fearon, D. T., Klickstein, L. B., Wong, W. W., Richards, S. A., de Bruyn Kops, A., Smith, J. A., and Weis, J. H. (1986) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83, 5639-5643.
5. Weis, J. J., Toothaker, L. E., Smith, J. A., Weis, J. H., and Fearon, D. T. (1988) J. Exp. Med. 167, 1047-1066.
6. Ahearn, J. M., and Fearon, D. T. (1989) Adv. Immunol. 46, 183-219.
7. Cooper, N. R., Moore, M. D., and Nemerow, G. R. (1988) Ann. Rev. Immunol. 6, 85-113.
8. Holers, V. M. (1995) Mosby, 363-391.
9. Tolnay, M., and Tsokos, G. C. (1998) Clin. Immunol. Immunopathol. 88, 123-132.
10. Iida, K., Nadler, L., and Nussenzweig, V. (1983) J. Exp. Med. 158, 1021-1033.
11. Weis, J. J., Tedder, T. F., and Fearon, D. T. (1984) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 81, 881-885.
12. Fingeroth, J. D., Weis, J. J., Tedder, T. F., Strominger, J. L., Biro, P. A., and Fearon, D. T. (1984) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 81, 4510-4514.
13. Nemerow, G. R., Houghten, R. A., Moore, M. D., and Cooper, N. R. (1989) Cell 56, 369-377.
14. Nemerow, G. R., Wolfert, R., McNaughton, M. E., and Cooper, N. R. (1985) J. Virol. 55, 347-351.
15. Aubry, J. P., Pochon, S., Gauchat, J. F., Nueda-Marin, A., Holers, V. M., Graber, P., Siegfried, C., and Bonnefoy, J. Y. (1994) J. Immunol. 152, 5806-5813.
16. Aubry, J. P., Pochon, S., Graber, P., Jansen, K. U., and Bonnefoy, J. Y. (1992) Nature 358, 505-507.
17. Asokan, R., Hua, J., Young, K. A., Gould, H. J., Hannan, J. P., Kraus, D. M., Szakonyi, G., Grundy, G. J., Chen, X. S., Crow, M. K., and Holers, V. M. (2006) J. Immunol. 177, 383-394.
18. Delcayre, A. X., Lotz, M., and Lernhardt, W. (1993) J. Virol. 67, 2918-2921.
19. Delcayre, A. X., Salas, F., Mathur, S., Kovats, K., Lotz, M., and Lernhardt, W. (1991) EMBO J. 10, 919-926.
20. Martin, D. R., Yuryev, A., Kalli, K. R., Fearon, D. T., and Ahearn, J. M. (1991) J. Exp. Med. 174, 1299-1311.
21. Tuveson, D. A., Ahearn, J. M., Matsumoto, A. K., and Fearon, D. T. (1991) J. Exp. Med. 173, 1083-1089.
22. Bohnsack, J. F., and Cooper, N. R. (1988) J.Immunol. 141, 2569-2576.
23. Carter, R. H., and Fearon, D. T. (1989) J.Immunol. 143, 1755-17608.
24. Carter, R. H., and Fearon, D. T. (1992) Science 256, 105-107.
25. Carter, R. H., Spycher, M. O., Ng, Y. C., Hoffman, R., and Fearon, D. T. (1988) J. Immunol. 141, 457-463.
26. Dempsey, P. W., Allison, M. E., Akkaraju, S., Goodnow, C. C., and Fearon, D. T. (1996) Science 271, 348-350.
27. Luxembourg, A. T., and Cooper, N. R. (1994) J.Immunol. 153, 4448-4457.
28. Lyubchenko, T., dal Porto, J., Cambier, J. C., and Holers, V. M. (2005) J. Immunol. 174, 3264-3272.
29. Ahearn, J. M., Hayward, S. D., Hickey, J. C., and Fearon, D. T. (1988) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 85, 9307-9311.
30. Tanner, J., Weis, J., Fearon, D., Whang, Y., and Kieff, E. (1987) Cell 50, 203-213.
31. Lowell, C. A., Klickstein, L. B., Carter, R. H., Mitchell, J. A., Fearon, D. T., and Ahearn, J. M. (1989) J. Exp. Med. 170, 1931-1946.
32. Moore, M. D., DiScipio, R. G., Cooper, N. R., and Nemerow, G. R. (1989) J. Biol. Chem. 264, 20576-20582.
33. Nemerow, G. R., Mold, C., Schwend, V. K., Tollefson, V., and Cooper, N. R. (1987) J. Virol 61, 1416-1420.
34. Mullen, M. M., Haan, K. M., Longnecker, R., and Jardetzky, T. S. (2002) Mol. Cell 9, 375-385.
35. Spriggs, M. K., Armitage, R. J., Comeau, M. R., Strockbine, L., Farrah, T., Macduff, B., Ulrich, D., Alderson, M. R., Mullberg, J., and Cohen, J. I. (1996) J. Virol. 70, 5557-5563.
36. Haan, K. M., Lee, S. K., and Longnecker, R. (2001) Virology 290, 106-114.
37. Haddad, R. S., and Hutt-Fletcher, L. M. (1989) J. Virol. 63, 4998-5005.
38. Molesworth, S. J., Lake, C. M., Borza, C. M., Turk, S. M., and Hutt-Fletcher, L. M. (2000) J. Virol. 74, 6324-6332.
39. Baechler, E. C., Batliwalla, F. M., Karypis, G., Gaffney, P. M., Ortmann, W. A., Espe, K. J., Shark, K. B., Grande, W. J., Hughes, K. M., Kapur, V., Gregersen, P. K., and Behrens, T. W. (2003) Proc.Nat'l Acad. Sci. USA 100, 2610-2615.
40. Santiago-Raber, M. L., Baccala, R., Haraldsson, K. M., Choubey, D., Stewart, T. A., Kono, D. H., and Theofilopoulos, A. N. (2003) J. Exp. Med. 197, 777-788.
41. Takahashi, K., Kozono, Y., Waldschmidt, T. J., Berthiaume, D., Quigg, R. J., Baron, A., and Holers, V. M. (1997) J. Immunol. 159, 1557-1569.
42. Young, K. A., Chen, X. S., Holers, V. M., and Hannan, J. P. (2007) J. Biol. Chem. 282, 36614-36625.
43. Young, K. A., Herbert, A. P., Barlow, P. N., Holers, V. M., and Hannan, J. P. (2008) J. Virol.
44. Dominguez, C., Boelens, R., and Bonvin, A. M. (2003) J. Am. Chem. Soc. 125, 1731-1737.
45. Szakonyi, G., Klein, M. G., Hannan, J. P., Young, K. A., Ma, R. Z., Asokan, R., Holers, V. M., and Chen, X. S. (2006) Nature Struct. Mol. Biol. 13, 996-1001.
46. Guthridge, J. M., Rakstang, J. K., Young, K. A., Hinshelwood, J., Aslam, M., Robertson, A., Gipson, M. G., Sarrias, M. R., Moore, W. T., Meagher, M., Karp, D., Lambris, J. D., Perkins, S. J., and Holers, V. M. (2001) Biochemistry 40, 5931-59419.
47. Hannan, J. P., Young, K. A., Guthridge, J. M., Asokan, R., Szakonyi, G., Chen, X. S., and Holers, V. M. (2005) J. Mol. Biol. 346, 845-858.
48. Kovacs, J. M., Hannan, J. P., Eisenmesser, E. Z., and Holers, V. M. (2009) J. Biol. Chem. 284, 9513-9520.
49. Pervushin, K., Riek, R., Wider, G., and Wuthrich, K. (1997) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 94, 12366-12371.
50. Wittkekind, M. a. L. M. (1993) J. Magn. Reson. 101, 201-205.
51. Grzesiek, S. a. A. B. (1992) J. Magn. Reson. 96, 432-440.
52. Zuiderweg, E. R., and Fesik, S. W. (1989) Biochemistry 28, 2387-2391.
53. Delaglio, F., Grzesiek, S., Vuister, G. W., Zhu, G., Pfeifer, J., and Bax, A. (1995) J. Biomol. NMR 6, 277-293.
54. Vranken, W. F., Boucher, W., Stevens, T. J., Fogh, R. H., Pajon, A., Llinas, M., Ulrich, E. L., Markley, J. L., Ionides, J., and Laue, E. D. (2005) Proteins 59, 687-696.
55. Wiseman, T., Williston, S., Brandts, J. F., and Lin, L. N. (1989) Anal. Biochem. 179, 131-137.
56. Carel, J. C., Myones, B. L., Frazier, B., and Holers, V. M. (1990) J. Biol. Chem. 265, 12293-12299.
57. Prota, A. E., Sage, D. R., Stehle, T., and Fingeroth, J. D. (2002) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 99, 10641-10646.
58. Molina, H., Brenner, C., Jacobi, S., Gorka, J., Carel, J. C., Kinoshita, T., and Holers, V. M. (1991) J. Biol. Chem. 266, 12173-12179.
59. Morikis, D., and Lambris, J. D. (2004) J. Immunol. 172, 7537-7547.
60. Zhang, L., Mallik, B., and Morikis, D. (2007) J. Mol. Biol. 369, 567-583.
예 1: 결합 에세이들
실험 방법들
재조합형 단백질들의 발현 및 정제
결합 연구들에 대한 인간 및 돌연변이인 CR2 SCR 1-2은 상술한 바와 같이(46) 상기 예1에서와 같이 BioFlo 피치아 파스토리스TM110 발표조(New Brunswick Scientific, Edison, NJ)를 사용하여 나타낸다. 간단히, 단일 클론은 1% 글리세롤(리터 당 BMG:85% 인산 26.7ml, 황산칼슘 0.93, 황산 칼륨 18.2g, 황산 마그네슘-7H20 14.9g, 수산화칼륨 4.13g, 글리세롤 10.0g,중성 탈이온수 1 리터)을 포함하는 5ml 피치아 바잘 염분 배지(Pichia basal salt medium)에서 밤새 30℃, 250rpm, 50ml BMG에서(24시간), 및 최종 300ml BGM(24시간)까지 배양된다. 상기 배양 컬쳐(inoculation culture)Sms 2500*g25에서 원심분리되고, 30ml BGM에서 다시 서스펜드된다. 상기 30ml 배양 컬쳐는 글리세롤 40g을 포함하는 최소의 피치아 바살 염분 배지(Pichia basal salt medium) 1L를 배양하는 데 사용된다. 용해된 0₂농축액은 40%로 유지되고, 30℃의 온도 및 상기 2M 수산화칼륨을 사용한 pH 5.0에서 유지된다. 처음 피드(initial feeds)은 배치 글리세롤 피드들(batch glycerol)이다; 메탄올로의 전환은 기하급수적인 메탄올 피드들이 생기기 전에 메탄올 주사에 의해 완화된다. 메탄올 인덕션(methanol induction)은 상기 컬쳐가 세포 잔해를 제거한 후에 이틀간 지속된다. 상기 상청액은 GSTrap™콜럼에 GST-C3d를 결합함으로써 인하우스가 생성되는, CR2 친화도 콜럼에 따른 SP-세파로스 콜럼(2*5mL SP HiTrap™콜럼들, GE 바이오사이언스, Pittsburgh, PA)를 지나기 전에(10mM 포름산염에서 pH 4.0으로 교체된다. CR2는 1/3 살린 인산염 완충액(PBS, 1.6mM MgCL₂, 0.9 mM KCL, 0.5 mM KH₂PO₄, 45.6mMNaCL, 2.7 mM Na₂HPO₄pH7.4)에 녹는다. 최종적으로, 자연적 인간 및 변형 CR2 SCR1-2는 사이즈 배제 크로마토 그래피에 의해 정제된다. CR2의 정제 및 확인은 에스디에스-페이지(SDS-PAGE), 웨스턴 블롯 분석(Western blot analysis) 및 질량 분석법(mass spectorometry)를 경유하여 모니터링된다.
ITC에 대한 인간 C3d 연구들은 전술한 바와 같이(47), 상기 pGEX™발현계(GE Healthcare, Piscataway, NJ)대장균을 사용하여 생성된다. 간단히, 앰피실린-저항성 콜론들은 1L까지 연장되는 오버나이트 컬쳐들을 시작하는데 사용되고, 0.3의 A600에 도달할 때까지 37℃에서 배양된다. 컬쳐들을 원심분리기에 의해 얻어지기 전에 30℃에서 밤새 0.3 mM IPTG로 유도된다. 얻어진 필렛들은 GST 컬럼 완충액(50mM Tris-HCl, pH 8.0 250mM NaCl, 1mM EDTA)로 다시 서스팬드되고, 초음파 분해에 의해 용해된다. 용해물은 원심분리기에 의해 정제되고, GSTrap™컬럼(GE Biosciences, Pittsburgh, PA)에 적용된다. C3d는 4℃에서 밤새 트롬빈의 50U로 소화하여 상기 컬럼으로부터 정제되고, 사이즈 배제 크로마토그래피에 의해 상당히 정제된다. C3d의 정제는 에스디에스-페이지(SDS-PAGE)를 경유하여 모니터링된다.
EBV gp350은 상업적으로 사용가능한 항-gp350 항체들 및 표준 절차에 따라 면역 친밀 크로마토 그래피에 의해 감염된 세포들로부터 분리된다. 인간 IFNα는 상업적 공급자들로부터 구입한다.
결합 에세이들
EBV gp350, IFNα, 및 C3d에 대한 자연적 인간 CRE SCR1-2의 결합은 아미노산들에서의 하나 또는 그 이상의 변형을 포함하는 인간 CR2 SCR1-2 이형과 비교된다. 상기 아미노산은 CR2와 EBV gp350 또는 IFNα 사이에서 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)에 의해 결합 상호작용들에 필수적으로 결정된다. 처음 결합 에세이는 CR2 이종들을 포함하는 알라닌을 가지고 수행된다. 왜냐하면 상기 주사슬 형태에 변형 또는 극도의 정전기를 띠거나 입체 효과 없이 아미노산의 상기 β 카르본을 넘어선 측쇄를 제거하기 때문이다. 상기 다음의 CR2 SCR1-2 이형들은 분리된 실험들에서 EBV gp350 및 C3d에 결합하는 데 시험된다. 분리된 실험들은 SCR 1-2N11A, SCR 1-2N11A+R36A, SCR 1-2N11A+R36+K41A, SCR 1-2N11A+R36A+K41A+Y64A, 및 SCR 1-2N11A+R36+K41A+Y64A+K67A이다. 상기 SCR2 SCR1-2 이형들은 IFNα 및 C3d에 분리된 실험들에서 결헙하는데 테스트된다. 상기 분리된 실험들은 S42A 및 S42A+K50A이다. CR2 결합 키네틱스 및 다른 부분들(결합 특이성)에서의 상기 아미노산 치환의 효과는 상기 같은 리간드에 자연 CR2 SCR1-2의 결합하는 EBV gp350 또는 IFNα 및 C3d 중 어느 하나에 CR2 SCR1-2의 상기 결합을 구성합으로써 처리된다. 대체되는 보존적 또는 비보존적 아미노산 치환들을 서브서열의 실험들에서 시험된다.
마이크로웰 ELISA 플레이트들(Microwell ELISA plates)(Corning Life Science, New York, N.Y., USA)은 4℃에서 밤새 0.1 M 탄산수소나트륨, pH 8.6을 함유한 정제된 EBV gp350, IFNα, 또는 C3d 의 적정한 양에 코팅된다. 상기 코팅된 플레이트들은 1X PBS로 1분당 세 번 씻겨, 200마이크로리터의 블록 솔루션(PBST 내 5mg/ml bovin serum albumin (BSA))에서 37℃에서 한 시간 동안 배양된다.
상기 결합 반응이 완성된 후에, 상기 플레이트들은 PBST로 1Q 분 당 6번 씻겨진다. 다음, 상기 플레이트들은 항 CR2 주 항체로 배양되고, 블록 솔루션으로 일분당 6 번 씻겨진 후, 상기 두 번째 항체로 배양되고, 겨자무과산화수소-활용의 쥐 항-인간 IgG Fcб(Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.) 1:10,000 PBST+5mg/ml BSA로 희석되어, 한 시간 동안 실온으로 배양된다. 상기 플레이트들은 PBST+5mg/ml BSA로 방온도에서 6번 다시 씻겨지다. 그리고 50mM 구연산 포스페이트로 준비된 상기 3, 3', 5, 5'-TMB(tetramethybenzidine) 솔루션에 의해 상기 나타난다. 상기 TMB 솔루션을 첨가한 후에, 상기 플레이트들은 방온도로 30분간 배양되고 흡수는 MRX Microplate Reader(Dynex Technologies)로 상기 제조업자의 안내에 따라 450nm에서 측정된다. 결합 곡선은 상기 생생한 데이터로부터 구축되고, 결합 친화도들은 제거된다.
대체하여, 결합 친화도는 표면 플라스몬 레조넌스 분석에 의해 보다 상세히 결정된다. 레조넌스 분석은 예를 들면 BIACore TM 4000SPR시스템(Biacome Life Science, GE Healthcare, Piscataway,NJ)을 사용한다. 상기 엘리사(ELLISA)0 와 같이, 마이크로웰 플레이트들은 EBV gp350, IFNα, C3d 중 어느 하나로 코팅된다. 그 후 자연적 인간 CR2 SCR1-2 또는 그 CR2 SCR1-2 이형들의 농축액에서 배양된다. ELISA들과 달리, SPR 은 직접적으로 결합 친화도들을 측정하고 탐지 가능한 라벨의 사용이 요구되지는 않는다.
상기 SCR 1-2 N11A, SCR 1-2 N11A+R36A, SCR 1-2 N11A+R36A+K41A, SCR 1-2 N11A+R36A+K41A+Y64A 및 SCR 1-2 N11A+ R36A+K41A+Y64A+K67A 이형들이 EBV gp350에 대한 결합 친화도를 시험된다. CR2 SCR1-2와 같은 C3d에 대한 상기 같은 결합 친화도를 유지하는 반면 상기 SCR 1-2 N11A, SCR 1-2 N11A+R36A, SCR 1-2 N11A+R36A+K41A, SCR 1-2 N11A+R36A+K41A+Y64A, 및 SCR 1-2 N11A+ R36A+K41A+Y64A+K67A 이형들이 EBV gp350에 대해 더 낮은 결합 친화도를 가지게 됨을 알 수 있다. 상기 SCR1-2 S42A 및 SCR1-2 S42A+K50A 이종들은 IFNα에 대한 결합친화도가 시험된다. 그리고 자연 CR2 SCR1-2와 같은 C3d에 대한 상기 같은 결합 친화도를 필수적으로 가지는 반면, 상기 SCR1-2 S42A 및 SCR1-2 S42A+K50A 이종들은 IFNα에 대한 더 낮은 결합 친화도를 가지게 됨을 알 수 있다.
서열들
SEQ ID NO:1 [인간 보체 수용체 2(CR2)의 완전한 아미노산 서열]:
SLAPVLCGIAAGLILLTFLIVITLYVISKHRERNYYTDTSQKEAFHLEAREVYSVDPYNPAS
SEQ ID NO:2 [인간 CR2의 짧은 콘센서스 반복(SCR) 도메인 1 및 2의 아미노산 서열]:
ISCGSPPPILNGRISYYSTPIAVGTVIRYSCSGTFRLIGEKSLLCITKDKVDGTWDKPAPKCEYFNKYSSCPEPIVPGGYKIRGSTPYRHGDSVTFACKTNFSMNGNKSVWCQANNMWGPTRLPTCVS
SEQ ID NO:3 [인간 CE59 단백질의 아미노산 서열]:
MGIQGGSVLFGLLLVLAVFCHSGHSLQCYNCPNPTADCKTAVNCSSDFDACLITKAGLQVYNKCWKFEHCNFNDVTTRLRENELTYYCCKKDLCNFNEQLENGGTSLSEKTVLLLVTPFLAAAWSLHP
SEQ ID NO:4 [쥐 보체 수용체 1-관련 유전자/단백질 y(Crry)의 아미노산 서열]:
MEVSSRSSEPLDPVWLLVAFGRGGVKLEVLLLFLLPFTLGELRGGLGKHGHTVHREPAVNRLCADSKRWSGLPVSAQRPFPMGHCPAPSQLPSAKPINLTDESMFPIGTYLLYECLPGYIKRQFSITCKQDSTWTSAEDKCIRKQCKTPSDPENGLVHVHTGIQFGSRINYTCNQGYRLIGSSSAVCVITDQSVDWDTEAPICEWIPCEIPPGIPNGDFFSSTREDFHYGMVVTYRCNTDARGKALFNLVGEPSLYCTSNDGEIGVWSGPPPQCIELNKCTPPPYVENAVMLSENRSLFSLRDIVEFRCHPGFIMKGASSVHCQSLNKWEPELPSCFKGVICRLPQEMSGFQKGLGMKKEYYYGENVTLECEDGYTLEGSSQSQCQSDGSWNPLLAKCVSRSISGLIVGIFIGIIVFILVIIVFIWMILKYKKRNTTDEKYKEVGIHLNYKEDSCVRLQSLLTSQENSSTTSPARNSLTQEVS
SEQ ID NO:5 [인간 팩터 H의 아미노산 서열]:
GASNVTCINSRWTGRPTCRDTSCVNPPTVQNAYIVSRQMSKYPSGERVRYQCRSPYEMFGDEEVMCLNGNWTEPPQCKDSTGKCGPPPPIDNGDITSFPLSVYAPASSVEYQCQNLYQLEGNKRITCRNGQWSEPPKCLHPCVISREIMENYNIALRWTAKQKLYSRTGESVEFVCKRGYRLSSRSHTLRTTCWDGKLEYPTCAKR
SEQ ID NO:6 [쥐 CD59A 단백질의 아미노산 서열]:
MRAQRGLILLLLLLAVFCSTAVSLTCYHCFQPVVSSCNMNSTCSPDQDSCLYAVAGMQVYQRCWKQSDCHGEIIMDQLEETKLKFRCCQFNLCNKSDGSLGKTPLLGTSVLVAILNLCFLSHL
SEQ ID NO:7 [쥐 CD59B 단백질의 아미노산 서열]:
MRAQRGLILLLLLLAVFCSTAVSLKCYNCFQFVSSCKINTTCSPNLDSCLYAVAGRQVYQQCWKLSDCNSNYIMSRLDVAGIQSKCCQWGLCNKNLDGLEEPNNAETSSLRKTALLGTSVLVAILKFCF
SEQ ID NO:8 [쥐 팩터 H의 아미노산 서열]:
PYQMNGSDTVTCVNSRWIGQPVCKDNSCVDPPHVPNATIVTRTKNKYLHGDRVRYECNKPLELFGQVEVMCENGIWTEKPKCRDSTGKCGPPPPIDNGDITSLSLPVYEPLSSVEYQCQKYYLLKGKKTITCTNGKWSEPPTCLHACVIPENIMESHNIILKWRHTEKIYSHSGEDIEFGCKYGYYKARDSPPFRTKCINGTINYPTCV
SEQ ID NO:9 [인간 보체 수용체 1(CR1)의 아미노산 서열]:
RINYSCTTGHRLIGHSSAECILSGNTAHWSTKPPICQRIPCGLPPTIANGDFISTNRENFHYGSVVTYRCNLGSRGRKVFELVGEPSIYCTSNDDQVGIWSGPAPQCIIPNKCTPPNVENGILVSDNRSLFSLNEVVEFRCQPGFVMKGPRRVKCQALNKWEPELPSCSRVCQPPPEILHGEHTPSHQDNFSPGQEVFYSCEPGYDLRGAASLHCTPQGDWSPEAPRCAVKSCDDFLGQLPHGRVLFPLNLQLGAKVSFVCDEGFRLKGSSVSHCVLVGMRSLWNNSVPVCEHIFCPNPPAILNGRHTGTPSGDIPYGKEISYTCDPHPDRGMTFNLIGESTIRCTSDPHGNGVWSSPAPRCELSVRAGHCKTPEQFPFASPTIPINDFEFPVGTSLNYECRPGYFGKMFSISCLENLVWSSVEDNCRRKSCGPPPEPFNGMVHINTDTQFGSTVNYSCNEGFRLIGSPSTTCLVSGNNVTWDKKAPICEIISCEPPPTISNGDFYSNNRTSFHNGTVVTYQCHTGPDGEQLFELVGERSIYCTSKDDQVGVWSSPPPRCISTNKCTAPEVENAIRVPGNRSFFSLTEIIRFRCQPGFVMVGSHTVQCQTNGRWGPKLPHCSRVCQPPPEILHGEHTLSHQDNFSPGQEVFYSCEPSYDLRGAASLHCTPQGDWSPEAPRCTVKSCDDFLGQLPHGRVLLPLNLQLGAKVSFVCDEGFRLKGRSASHCVLAGMKALWNSSVPVCEQIFCPNPPAILNGRHTGTPFGDIPYGKEISYACDTHPDRGMTFNLIGESSIRCTSDPQGNGVWSSPAPRCELSVPAACPHPPKIQNGHYIGGHVSLYLPGMTISYTCDPGYLLVGKGFIFCTDQGIWSQLDHYCKEVNCSFPLFMNGISKELEMKKVYHYGDYVTLKCEDGYTLEGSPWSQCQADDRWDPPLAKCTSRAHDALIVGTLSGTIFFILLIIFLSWIILKHRKGNNAHENPKEVAIHLHSQGGSSVHPRTLQTNEENSRVLP
SEQ ID NO:10 [인간 세포막 코팩터 단백질(MCP)의 아미노산 서열]:
MEPPGRRECPFPSWRFPGLLLAAMVLLLYSFSDACEEPPTFEAMELIGKPKPYYEIGERVDYKCKKGYFYIPPLATHTICDRNHTWLPVSDDACYRETCPYIRDPLNGQAVPANGTYEFGYQMHFICNEGYYLIGEEILYCELKGSVAIWSGKPPICEKVLCTPPPKIKNGKHTFSEVEVFEYLDAVTYSCDPAPGPDPFSLIGESTIYCGDNSVWSRAAPECKVVKCRFPVVENGKQISGFGKKFYYKATVMFECDKGFYLDGSDTIVCDSNSTWDPPVPKCLKVLPPSSTKPPALSHSVSTSSTTKSPASSASGPRPTYKPPVSNYPGYPKPEEGILDSLDVWVIAVIVIAIVVGVAVICVVPYRYLQRRKKKGTYLTDETHREVKFTSL
SEQ ID NO:11 [인간 노화 촉진 팩터의 아미노산 서열(DAF/CD55)]:
MTVARPSVPAALPLLGELPRLLLLVLLCLPAVWGDCGLPPDVPNAQPALEGRTSFPEDTVITYKCEESFVKIPGEKDSVICLKGSQWSDIEEFCNRSCEVPTRLNSASLKQPYITQNYFPVGTVVEYECRPGYRREPSLSPKLTCLQNLKWSTAVEFCKKKSCPNPGEIRNGQIDVPGGILFGATISFSCNTGYKLFGSTSSFCLISGSSVQWSDPLPECREIYCPAPPQIDNGIIQGERDHYGYRQSVTYACNKGFTMIGEHSIYCTVNNDEGEWSGPPPECRGKSLTSKVPPTVQKPTTVNVPTTEVSPTSQKTTTKTTTPNAQATRSTPVSRTTKHFHETTPNKGSGTTSGTTRLLSGHTCFTLTGLLGTLVTMGLLT
SEQ ID NO:12 [쥐 노화 촉진 팩터의 아미노산 서열(DAF/CD55)]:
MIRGRAPRTRPSPPPPLLPLLSLSLLLLSPTVRGDCGPPPDIPNARPILGRHSKFAEQSKVAYSCNNGFKQVPDKSNIVVCLENGQWSSHETFCEKSCVAPERLSFASLKKEYLNMNFFPVGTIVEYECRPGFRKQPPLPGKATCLEDLVWSPVAQFCKKKSCPNPKDLDNGHINIPTGILFGSEIFNSCNPGYRLVGVSSTFCSVTGNTVDWDDEFPVCTEIHCPEPPKINNGIMRGESDSYTYSQVVTYSCDKGFILVGNASIYCTVSKSDVGQWSSPPPRCIEKSKVPTKKPTINVPSTGTPSTPQKPTTESVPNPGDQPTPQKPSTVKVSATQHVPVTKTTVRHPIRTSTDKGEPNTGGDRYIYGHTCLITLTVLHVMLSLIGYLT
SEQ ID NO:13 [나자 카우디아(Naja kaouthia)부터의 CVF의 아미노산 서열]:
TEAVNQIVTGYAQQMVYKKADHSYAAFTNRASSSWLTAYVVKVFAMAAKMVAGISHEIICGGVRWLILNRQQPDGAFKENAPVLSGTMQGGIQGAEEEVYLTAFILVALLESKTICNDYVNSLDSSIKKATNYLLKKYEKLQRPYTTALTAYALAAADQLNDDRVLMAASTGRDHWEEYNAHTHNIEGTSYALLALLKMKKFDQTGPIVRWLTDQNFYGETYGQTQATVMAFQALAEYEIQMPTHKDLNLDITIELPDREVPIRYRINYENALLARTVETKLNQDITVTASGDGKATMTILTFYNAQLQEKANVCNKFHLNVSVENIHLNAMGAKGALMLKICTRYLGEVDSTMTIIDISMLTGFLPDAEDLTRLSKGVDRYISRYEVDNNMAQKVAVIIYLNKVSHSEDECLHFKILKHFEVGFIQPGSVKVYSYYNLDEKCTKFYHPDKGTGLLNKICIGNVCRCAGETCSSLNHQERIDVPLQIEKACETNVDYVYKTKLLRIEEQDGNDIYVMDVLEVIKQGTDENPRAKTHQYISQRKCQEALNLKVNDDYLIWGSRSDLLPTKDKISYIITKNTWIERWPHEDECQEEEFQKLCDDFAQFSYTLTEFGCPT
SEQ ID NO:14 [상기 인간 IgG1 중사슬, C 도메인의 아미노산 서열]:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:15 [상기 인간 IgG1 경사슬, C 도메인의 아미노산 서열]:
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:16 [상기 인간 IgG1의 Fc 도메인의 아미노산 서열]:
EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGPFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:17 [인간 IgM 중사슬, C 도메인의 아미노산 서열]:
GSASAPTLFPLVSCENSPSDTSSVAVGCLAQDFLPDSITLSWKYKNNSDISSTRGFPSVLRGGKYAATSQVLLPSKDVMQGTDEHVVCKVQHPNGNKEKNVPLPVIAELPPKVSVFVPPRDGFFGNPRKSKLICQATGFSPRQIQVSWLREGKQVGSGVTTDQVQAEAKESGPTTYKVTSTLTIKESDWLGQSMFTCRVDHRGLTFQQNASSMCVPDQDTAIRVFAIPPSFASIFLTKSTKLTCLVTDLTTYDSVTISWTRQNGEAVKTHTNISESHPNATFSAVGEASICEDDWNSGERFTCTVTHTDLPSPLKQTISRPKGVALHRPDVYLLPPAREQLNLRESATITCLVTGFSPADVFVQWMQRGQPLSPEKYVTSAPMPEPQAPGRYFAHSILTVSEEEWNTGETYTCVAHEALPNRVTERTVDKSTGKPTLYNVSLVMSDTAGTCY
SEQ ID NO:18 [인간 IgM 경사슬, C 도메인의 아미노산 서열]:
GSASAPTLFPLVSCENSPSDTSSVAVGCLAQDFLPDSITLSWKYKNNSDISSTRGFPSVLRGGKYAATSQVLLPSKDVMQGTDEHVVCKVQHPNGNKEKNVPLPV
SEQ ID NO:19 [인간 IgM의 상기 Fc 도메인의 아미노산 서열]:
GSASAPTLFPLVSCENSPSDTSSVAVGCLAQDFLPDSITFSWKYKNNSDISSTRGFPSVLRGGKYAATSQVLLPSKDVMQGTDEHVVCKVQHPNGNKEKNVPLPVIAELPPKVSVFVPPRDGFFGNPRSKSKLICQATGFSPRQIQVSWLREGKQVGSGVTTDQVQAEAKESGPTTYKVTSTLTIKESDWLSQSMFTCRVDHRGLTFQQNASSMCVPDQDTAIRVFAIPPSFASIFLTKSTKLTCLVTDLTTYDSVTISWTRQNGEAVKTHTNISESHPNATFSAVGEASICEDDWNSGERFTCTVTHTDLPSPLKQTISRPKGVALHRPDVYLLPPAREQLNLRESATITCLVTGFSPADVFVQWMQRGQPLSPEKYVTSAPMPEPQAPGRYFAHSILTVSEEEWNTGETYTCVVAHEALPNRVTERTVDKSTGKPTLYNVSLVMSDTAGTCY
SEQ ID NO:20 [쥐 IgG3 중사슬의 아미노산 서열]:
TTTAPSVYPLVPGCSDTSGSSVTLGCLVKGYFPEPVTVKWNYGALSSGVRTVSSVLQSGFYSLSSLVTVPSSTWPSQTVICNVAHPASKTELIKRIEPRIPKPSTPPGSSCPPGNILGGPSVFIFPPKPKDALMISLTPKVTCVVVDVSEDDPDVHVSWFVDNKEVHTAWTQPREAQYNSTFRVVSALPIQHQDWMRGKEFKCKVNNKALPAPIERTISKPKGRAQTPQVYTIPPPREQMSKKKVSLTCLVTNFFSEAISVEWERNGELEQDYKNTPPILDSDGTYFLYSKLTVDTDSWLQGEIFTCSVVHEALHNHHTQKNLSRSP
SEQ ID NO:21 [쥐 IgG3 경사슬의 아미노산 서열]:
IVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCRASSSVRSSYLHWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISSVEAEDAATYYCQQYDSSPSITFGAGTKLELK
SEQ ID NO:22 [IgG3 Fc 도메인의 아미노산 서열]:
EPRIPKPSTPPGSSCPPGNILGGPSVFIFPPKPKDALMISLTPKVTCVVVDVSEDDPDVHVSWFVDNKEVHTAWTQPREAQYNSTFRVVSALPIQHQDWMRGKEFKCKVNNKALPAPIERTISKPKGRAQTPQVYTIPPPREQMSKKKVSLTCLVTNFFSEAISVEWERNGELEQDYKNTPPILDSDGTYFLYSKLTVDTDSWLQGEIFTCSVVHEALHNHHTQKNLSRSPGK
SEQ ID NO:23 [IgM 중사슬, C 도메인의 아미노산 서열]:
SQSFPNVFPLVSCESPLSDKNLVAMGCLARDFLPSTISFTWNYQNNTEVIQGIRTFPTLRTGGKYLATSQVLLSPKSILEGSDEYLVCKIHYGGKNRDLHVPIPAVAEMNPNVNVFVPPRDGFSGPAPRKSKLICEATNFTPKPITVSWLKDGKLVESGFTTDPVTIENKGSTPQTYKVISTLTISEIDWLNLNVYTCRVDHRGLTFLKNVSSTCAASPSTDILTFTIPPSFADIFLSKSANLTCLVSNLATYETLNISWASQSGEPLETKIKIMESHPNGTFSAKGVASVCVEDWNNRKEFVCTVTHRDLPSPQKKFISKPNEVHKHPPAVYLLPPAREQLNLRESATVTCLVKGFSPADISVQWLQRGQLLPQEKYVTSAPMPEPGAPGFYFTHSILTVTEEEWNSGETYTCVVGHEALPHLVTERTVDKSTGKPTLYNVSLIMSDTGGTCY
SEQ ID NO:24 [쥐 IgM 경사슬, C도메인의 아미노산 서열]:
SQSFPNVFPLVSCESPLSDKNLVAMGCLARDFLPSTISFTWNYQNNTEVIQGIRTFPTLRTGGKYLATSQVLLSPKSILEGSDEYLVCKIHYGGKNRDLHVPIP
SEQ ID NO:25 [쥐 IgM Fc 도메인의 아미노산 서열]:
ASPSTDILTFTIPPSFADIFLSKSANLTCLVSNLATYETLNISWASQSGEPLETKIKIMESHPNGTFSAKGVASVCVEDWNNRKEFVCTVTHRDLPSPQKKFISKPNEVHKHPPAVYLLPPAREQLNLRESATVTCLVKGFSPADISVQWLQRGQLLPQEKYVTSAPMPEPGAPGFYFTHSILTVTEEEWNSGETYTCVVGHEALPHLVTERTVDKSTGKPTLYNVSLIMSDTGGTCY
SEQ ID NO:26 [인간의 CR2의 첫 번째 두 N-말단의 짧은 콘센서스 반복 도메인들 사이에서의 연결 서열]:
VSVFPLE
SEQ ID NO:27 [인간의 CR2의 첫 번째 두 N-말단의 짧은 콘센서스 반복 도메인들 사이에서의 연결 서열]:
EYFNKYSS
SEQ ID NO:28 [인간 CR2의 네 번째와 다섯 번째 두 N-말단의 짧은 콘센서스 반복 도메인들 사이에서의 연결 서열]:
EEIF
SEQUENCE LISTING <110> The Regents of the University of Colorado, a Body Corporate <120> IMPROVED COMPLEMENT RECEPTOR 2 (CR2) TARGETING GROUPS <130> 50867-013WO2 <140> PCT/US2011/036552 <141> 2011-05-13 <150> 61/345,035 <151> 2010-05-14 <160> 28 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1087 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Gly Ala Ala Gly Leu Leu Gly Val Phe Leu Ala Leu Val Ala Pro 1 5 10 15 Gly Val Leu Gly Ile Ser Cys Gly Ser Pro Pro Pro Ile Leu Asn Gly 20 25 30 Arg Ile Ser Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile Ala Val Gly Thr Val Ile Arg 35 40 45 Tyr Ser Cys Ser Gly Thr Phe Arg Leu Ile Gly Glu Lys Ser Leu Leu 50 55 60 Cys Ile Thr Lys Asp Lys Val Asp Gly Thr Trp Asp Lys Pro Ala Pro 65 70 75 80 Lys Cys Glu Tyr Phe Asn Lys Tyr Ser Ser Cys Pro Glu Pro Ile Val 85 90 95 Pro Gly Gly Tyr Lys Ile Arg Gly Ser Thr Pro Tyr Arg His Gly Asp 100 105 110 Ser Val Thr Phe Ala Cys Lys Thr Asn Phe Ser Met Asn Gly Asn Lys 115 120 125 Ser Val Trp Cys Gln Ala Asn Asn Met Trp Gly Pro Thr Arg Leu Pro 130 135 140 Thr Cys Val Ser Val Phe Pro Leu Glu Cys Pro Ala Leu Pro Met Ile 145 150 155 160 His Asn Gly His His Thr Ser Glu Asn Val Gly Ser Ile Ala Pro Gly 165 170 175 Leu Ser Val Thr Tyr Ser Cys Glu Ser Gly Tyr Leu Leu Val Gly Glu 180 185 190 Lys Ile Ile Asn Cys Leu Ser Ser Gly Lys Trp Ser Ala Val Pro Pro 195 200 205 Thr Cys Glu Glu Ala Arg Cys Lys Ser Leu Gly Arg Phe Pro Asn Gly 210 215 220 Lys Val Lys Glu Pro Pro Ile Leu Arg Val Gly Val Thr Ala Asn Phe 225 230 235 240 Phe Cys Asp Glu Gly Tyr Arg Leu Gln Gly Pro Pro Ser Ser Arg Cys 245 250 255 Val Ile Ala Gly Gln Gly Val Ala Trp Thr Lys Met Pro Val Cys Glu 260 265 270 Glu Ile Phe Cys Pro Ser Pro Pro Pro Ile Leu Asn Gly Arg His Ile 275 280 285 Gly Asn Ser Leu Ala Asn Val Ser Tyr Gly Ser Ile Val Thr Tyr Thr 290 295 300 Cys Asp Pro Asp Pro Glu Glu Gly Val Asn Phe Ile Leu Ile Gly Glu 305 310 315 320 Ser Thr Leu Arg Cys Thr Val Asp Ser Gln Lys Thr Gly Thr Trp Ser 325 330 335 Gly Pro Ala Pro Arg Cys Glu Leu Ser Thr Ser Ala Val Gln Cys Pro 340 345 350 His Pro Gln Ile Leu Arg Gly Arg Met Val Ser Gly Gln Lys Asp Arg 355 360 365 Tyr Thr Tyr Asn Asp Thr Val Ile Phe Ala Cys Met Phe Gly Phe Thr 370 375 380 Leu Lys Gly Ser Lys Gln Ile Arg Cys Asn Ala Gln Gly Thr Trp Glu 385 390 395 400 Pro Ser Ala Pro Val Cys Glu Lys Glu Cys Gln Ala Pro Pro Asn Ile 405 410 415 Leu Asn Gly Gln Lys Glu Asp Arg His Met Val Arg Phe Asp Pro Gly 420 425 430 Thr Ser Ile Lys Tyr Ser Cys Asn Pro Gly Tyr Val Leu Val Gly Glu 435 440 445 Glu Ser Ile Gln Cys Thr Ser Glu Gly Val Trp Thr Pro Pro Val Pro 450 455 460 Gln Cys Lys Val Ala Ala Cys Glu Ala Thr Gly Arg Gln Leu Leu Thr 465 470 475 480 Lys Pro Gln His Gln Phe Val Arg Pro Asp Val Asn Ser Ser Cys Gly 485 490 495 Glu Gly Tyr Lys Leu Ser Gly Ser Val Tyr Gln Glu Cys Gln Gly Thr 500 505 510 Ile Pro Trp Phe Met Glu Ile Arg Leu Cys Lys Glu Ile Thr Cys Pro 515 520 525 Pro Pro Pro Val Ile Tyr Asn Gly Ala His Thr Gly Ser Ser Leu Glu 530 535 540 Asp Phe Pro Tyr Gly Thr Thr Val Thr Tyr Thr Cys Asn Pro Gly Pro 545 550 555 560 Glu Arg Gly Val Glu Phe Ser Leu Ile Gly Glu Ser Thr Ile Arg Cys 565 570 575 Thr Ser Asn Asp Gln Glu Arg Gly Thr Trp Ser Gly Pro Ala Pro Leu 580 585 590 Cys Lys Leu Ser Leu Leu Ala Val Gln Cys Ser His Val His Ile Ala 595 600 605 Asn Gly Tyr Lys Ile Ser Gly Lys Glu Ala Pro Tyr Phe Tyr Asn Asp 610 615 620 Thr Val Thr Phe Lys Cys Tyr Ser Gly Phe Thr Leu Lys Gly Ser Ser 625 630 635 640 Gln Ile Arg Cys Lys Arg Asp Asn Thr Trp Asp Pro Glu Ile Pro Val 645 650 655 Cys Glu Lys Gly Cys Gln Pro Pro Pro Gly Leu His His Gly Arg His 660 665 670 Thr Gly Gly Asn Thr Val Phe Phe Val Ser Gly Met Thr Val Asp Tyr 675 680 685 Thr Cys Asp Pro Gly Tyr Leu Leu Val Gly Asn Lys Ser Ile His Cys 690 695 700 Met Pro Ser Gly Asn Trp Ser Pro Ser Ala Pro Arg Cys Glu Glu Thr 705 710 715 720 Cys Gln His Val Arg Gln Ser Leu Gln Glu Leu Pro Ala Gly Ser Arg 725 730 735 Val Glu Leu Val Asn Thr Ser Cys Gln Asp Gly Tyr Gln Leu Thr Gly 740 745 750 His Ala Tyr Gln Met Cys Gln Asp Ala Glu Asn Gly Ile Trp Phe Lys 755 760 765 Lys Ile Pro Leu Cys Lys Val Ile His Cys His Pro Pro Pro Val Ile 770 775 780 Val Asn Gly Lys His Thr Gly Met Met Ala Glu Asn Phe Leu Tyr Gly 785 790 795 800 Asn Glu Val Ser Tyr Glu Cys Asp Gln Gly Phe Tyr Leu Leu Gly Glu 805 810 815 Lys Asn Cys Ser Ala Glu Val Ile Leu Lys Ala Trp Ile Leu Glu Arg 820 825 830 Ala Phe Pro Gln Cys Leu Arg Ser Leu Cys Pro Asn Pro Glu Val Lys 835 840 845 His Gly Tyr Lys Leu Asn Lys Thr His Ser Ala Tyr Ser His Asn Asp 850 855 860 Ile Val Tyr Val Asp Cys Asn Pro Gly Phe Ile Met Asn Gly Ser Arg 865 870 875 880 Val Ile Arg Cys His Thr Asp Asn Thr Trp Val Pro Gly Val Pro Thr 885 890 895 Cys Ile Lys Lys Ala Phe Ile Gly Cys Pro Pro Pro Pro Lys Thr Pro 900 905 910 Asn Gly Asn His Thr Gly Gly Asn Ile Ala Arg Phe Ser Pro Gly Met 915 920 925 Ser Ile Leu Tyr Ser Cys Asp Gln Gly Tyr Leu Val Val Gly Glu Pro 930 935 940 Leu Leu Leu Cys Thr His Glu Gly Thr Trp Ser Gln Pro Ala Pro His 945 950 955 960 Cys Lys Glu Val Asn Cys Ser Ser Pro Ala Asp Met Asp Gly Ile Gln 965 970 975 Lys Gly Leu Glu Pro Arg Lys Met Tyr Gln Tyr Gly Ala Val Val Thr 980 985 990 Leu Glu Cys Glu Asp Gly Tyr Met Leu Glu Gly Ser Pro Gln Ser Gln 995 1000 1005 Cys Gln Ser Asp His Gln Trp Asn Pro Pro Leu Ala Val Cys Arg 1010 1015 1020 Ser Arg Ser Leu Ala Pro Val Leu Cys Gly Ile Ala Ala Gly Leu 1025 1030 1035 Ile Leu Leu Thr Phe Leu Ile Val Ile Thr Leu Tyr Val Ile Ser 1040 1045 1050 Lys His Arg Glu Arg Asn Tyr Tyr Thr Asp Thr Ser Gln Lys Glu 1055 1060 1065 Ala Phe His Leu Glu Ala Arg Glu Val Tyr Ser Val Asp Pro Tyr 1070 1075 1080 Asn Pro Ala Ser 1085 <210> 2 <211> 128 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ile Ser Cys Gly Ser Pro Pro Pro Ile Leu Asn Gly Arg Ile Ser Tyr 1 5 10 15 Tyr Ser Thr Pro Ile Ala Val Gly Thr Val Ile Arg Tyr Ser Cys Ser 20 25 30 Gly Thr Phe Arg Leu Ile Gly Glu Lys Ser Leu Leu Cys Ile Thr Lys 35 40 45 Asp Lys Val Asp Gly Thr Trp Asp Lys Pro Ala Pro Lys Cys Glu Tyr 50 55 60 Phe Asn Lys Tyr Ser Ser Cys Pro Glu Pro Ile Val Pro Gly Gly Tyr 65 70 75 80 Lys Ile Arg Gly Ser Thr Pro Tyr Arg His Gly Asp Ser Val Thr Phe 85 90 95 Ala Cys Lys Thr Asn Phe Ser Met Asn Gly Asn Lys Ser Val Trp Cys 100 105 110 Gln Ala Asn Asn Met Trp Gly Pro Thr Arg Leu Pro Thr Cys Val Ser 115 120 125 <210> 3 <211> 128 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Gly Ile Gln Gly Gly Ser Val Leu Phe Gly Leu Leu Leu Val Leu 1 5 10 15 Ala Val Phe Cys His Ser Gly His Ser Leu Gln Cys Tyr Asn Cys Pro 20 25 30 Asn Pro Thr Ala Asp Cys Lys Thr Ala Val Asn Cys Ser Ser Asp Phe 35 40 45 Asp Ala Cys Leu Ile Thr Lys Ala Gly Leu Gln Val Tyr Asn Lys Cys 50 55 60 Trp Lys Phe Glu His Cys Asn Phe Asn Asp Val Thr Thr Arg Leu Arg 65 70 75 80 Glu Asn Glu Leu Thr Tyr Tyr Cys Cys Lys Lys Asp Leu Cys Asn Phe 85 90 95 Asn Glu Gln Leu Glu Asn Gly Gly Thr Ser Leu Ser Glu Lys Thr Val 100 105 110 Leu Leu Leu Val Thr Pro Phe Leu Ala Ala Ala Trp Ser Leu His Pro 115 120 125 <210> 4 <211> 483 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Met Glu Val Ser Ser Arg Ser Ser Glu Pro Leu Asp Pro Val Trp Leu 1 5 10 15 Leu Val Ala Phe Gly Arg 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Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 15 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 1 5 10 15 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 20 25 30 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 35 40 45 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 50 55 60 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 65 70 75 80 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 85 90 95 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 16 <211> 232 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Pro Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 17 <211> 452 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Leu Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile 130 135 140 Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr 145 150 155 160 Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr 165 170 175 Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Gly Gln 180 185 190 Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln 195 200 205 Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val 210 215 220 Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr 225 230 235 240 Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr 245 250 255 Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn 260 265 270 Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala 275 280 285 Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr 290 295 300 Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg 305 310 315 320 Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro 325 330 335 Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu 340 345 350 Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg 355 360 365 Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro 370 375 380 Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val 385 390 395 400 Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Ala His 405 410 415 Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr 420 425 430 Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala 435 440 445 Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 18 <211> 105 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Leu Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val 100 105 <210> 19 <211> 454 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn 1 5 10 15 Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp 20 25 30 Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser 35 40 45 Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln 65 70 75 80 Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn 85 90 95 Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys 100 105 110 Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg 115 120 125 Ser Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln 130 135 140 Ile Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val 145 150 155 160 Thr Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr 165 170 175 Tyr Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Ser 180 185 190 Gln Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln 195 200 205 Gln Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg 210 215 220 Val Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser 225 230 235 240 Thr Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val 245 250 255 Thr Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr 260 265 270 Asn Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu 275 280 285 Ala Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys 290 295 300 Thr Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser 305 310 315 320 Arg Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro 325 330 335 Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys 340 345 350 Leu Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln 355 360 365 Arg Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met 370 375 380 Pro Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr 385 390 395 400 Val Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val 405 410 415 Ala His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys 420 425 430 Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp 435 440 445 Thr Ala Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 20 <211> 327 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 20 Thr Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Val Pro Gly Cys Ser Asp 1 5 10 15 Thr Ser Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe 20 25 30 Pro Glu Pro Val Thr Val Lys Trp Asn Tyr Gly Ala Leu Ser Ser Gly 35 40 45 Val Arg Thr Val Ser Ser Val Leu Gln Ser Gly Phe Tyr Ser Leu Ser 50 55 60 Ser Leu Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Thr Val Ile 65 70 75 80 Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr Glu Leu Ile Lys Arg Ile 85 90 95 Glu Pro Arg Ile Pro Lys Pro Ser Thr Pro Pro Gly Ser Ser Cys Pro 100 105 110 Pro Gly Asn Ile Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys 115 120 125 Pro Lys Asp Ala Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val 130 135 140 Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val His Val Ser Trp Phe 145 150 155 160 Val Asp Asn Lys Glu Val His Thr Ala Trp Thr Gln Pro Arg Glu Ala 165 170 175 Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His 180 185 190 Gln Asp Trp Met Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys 195 200 205 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Arg 210 215 220 Ala Gln Thr Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Arg Glu Gln Met 225 230 235 240 Ser Lys Lys Lys Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Thr Asn Phe Phe Ser 245 250 255 Glu Ala Ile Ser Val Glu Trp Glu Arg Asn Gly Glu Leu Glu Gln Asp 260 265 270 Tyr Lys Asn Thr Pro Pro Ile Leu Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Leu 275 280 285 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Thr Asp Ser Trp Leu Gln Gly Glu Ile 290 295 300 Phe Thr Cys Ser Val Val His Glu Ala Leu His Asn His His Thr Gln 305 310 315 320 Lys Asn Leu Ser Arg Ser Pro 325 <210> 21 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 21 Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Arg Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Ser Pro Ser 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 22 <211> 233 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 22 Glu Pro Arg Ile Pro Lys Pro Ser Thr Pro Pro Gly Ser Ser Cys Pro 1 5 10 15 Pro Gly Asn Ile Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys 20 25 30 Pro Lys Asp Ala Leu Met Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val 35 40 45 Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val His Val Ser Trp Phe 50 55 60 Val Asp Asn Lys Glu Val His Thr Ala Trp Thr Gln Pro Arg Glu Ala 65 70 75 80 Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His 85 90 95 Gln Asp Trp Met Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys 100 105 110 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Arg 115 120 125 Ala Gln Thr Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Arg Glu Gln Met 130 135 140 Ser Lys Lys Lys Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Thr Asn Phe Phe Ser 145 150 155 160 Glu Ala Ile Ser Val Glu Trp Glu Arg Asn Gly Glu Leu Glu Gln Asp 165 170 175 Tyr Lys Asn Thr Pro Pro Ile Leu Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Leu 180 185 190 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Thr Asp Ser Trp Leu Gln Gly Glu Ile 195 200 205 Phe Thr Cys Ser Val Val His Glu Ala Leu His Asn His His Thr Gln 210 215 220 Lys Asn Leu Ser Arg Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 23 <211> 454 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 23 Ser Gln Ser Phe Pro Asn Val Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Ser Pro 1 5 10 15 Leu Ser Asp Lys Asn Leu Val Ala Met Gly Cys Leu Ala Arg Asp Phe 20 25 30 Leu Pro Ser Thr Ile Ser Phe Thr Trp Asn Tyr Gln Asn Asn Thr Glu 35 40 45 Val Ile Gln Gly Ile Arg Thr Phe Pro Thr Leu Arg Thr Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Leu Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Ser Pro Lys Ser Ile Leu Glu 65 70 75 80 Gly Ser Asp Glu Tyr Leu Val Cys Lys Ile His Tyr Gly Gly Lys Asn 85 90 95 Arg Asp Leu His Val Pro Ile Pro Ala Val Ala Glu Met Asn Pro Asn 100 105 110 Val Asn Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Ser Gly Pro Ala Pro 115 120 125 Arg Lys Ser Lys Leu Ile Cys Glu Ala Thr Asn Phe Thr Pro Lys Pro 130 135 140 Ile Thr Val Ser Trp Leu Lys Asp Gly Lys Leu Val Glu Ser Gly Phe 145 150 155 160 Thr Thr Asp Pro Val Thr Ile Glu Asn Lys Gly Ser Thr Pro Gln Thr 165 170 175 Tyr Lys Val Ile Ser Thr Leu Thr Ile Ser Glu Ile Asp Trp Leu Asn 180 185 190 Leu Asn Val Tyr Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Leu 195 200 205 Lys Asn Val Ser Ser Thr Cys Ala Ala Ser Pro Ser Thr Asp Ile Leu 210 215 220 Thr Phe Thr Ile Pro Pro Ser Phe Ala Asp Ile Phe Leu Ser Lys Ser 225 230 235 240 Ala Asn Leu Thr Cys Leu Val Ser Asn Leu Ala Thr Tyr Glu Thr Leu 245 250 255 Asn Ile Ser Trp Ala Ser Gln Ser Gly Glu Pro Leu Glu Thr Lys Ile 260 265 270 Lys Ile Met Glu Ser His Pro Asn Gly Thr Phe Ser Ala Lys Gly Val 275 280 285 Ala Ser Val Cys Val Glu Asp Trp Asn Asn Arg Lys Glu Phe Val Cys 290 295 300 Thr Val Thr His Arg Asp Leu Pro Ser Pro Gln Lys Lys Phe Ile Ser 305 310 315 320 Lys Pro Asn Glu Val His Lys His Pro Pro Ala Val Tyr Leu Leu Pro 325 330 335 Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Val Thr Cys 340 345 350 Leu Val Lys Gly Phe Ser Pro Ala Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu Gln 355 360 365 Arg Gly Gln Leu Leu Pro Gln Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met 370 375 380 Pro Glu Pro Gly Ala Pro Gly Phe Tyr Phe Thr His Ser Ile Leu Thr 385 390 395 400 Val Thr Glu Glu Glu Trp Asn Ser Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val 405 410 415 Gly His Glu Ala Leu Pro His Leu Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys 420 425 430 Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Ile Met Ser Asp 435 440 445 Thr Gly Gly Thr Cys Tyr 450 <210> 24 <211> 104 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 24 Ser Gln Ser Phe Pro Asn Val Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Ser Pro 1 5 10 15 Leu Ser Asp Lys Asn Leu Val Ala Met Gly Cys Leu Ala Arg Asp Phe 20 25 30 Leu Pro Ser Thr Ile Ser Phe Thr Trp Asn Tyr Gln Asn Asn Thr Glu 35 40 45 Val Ile Gln Gly Ile Arg Thr Phe Pro Thr Leu Arg Thr Gly Gly Lys 50 55 60 Tyr Leu Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Ser Pro Lys Ser Ile Leu Glu 65 70 75 80 Gly Ser Asp Glu Tyr Leu Val Cys Lys Ile His Tyr Gly Gly Lys Asn 85 90 95 Arg Asp Leu His Val Pro Ile Pro 100 <210> 25 <211> 238 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 25 Ala Ser Pro Ser Thr Asp Ile Leu Thr Phe Thr Ile Pro Pro Ser Phe 1 5 10 15 Ala Asp Ile Phe Leu Ser Lys Ser Ala Asn Leu Thr Cys Leu Val Ser 20 25 30 Asn Leu Ala Thr Tyr Glu Thr Leu Asn Ile Ser Trp Ala Ser Gln Ser 35 40 45 Gly Glu Pro Leu Glu Thr Lys Ile Lys Ile Met Glu Ser His Pro Asn 50 55 60 Gly Thr Phe Ser Ala Lys Gly Val Ala Ser Val Cys Val Glu Asp Trp 65 70 75 80 Asn Asn Arg Lys Glu Phe Val Cys Thr Val Thr His Arg Asp Leu Pro 85 90 95 Ser Pro Gln Lys Lys Phe Ile Ser Lys Pro Asn Glu Val His Lys His 100 105 110 Pro Pro Ala Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu 115 120 125 Arg Glu Ser Ala Thr Val Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Ser Pro Ala 130 135 140 Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu Gln Arg Gly Gln Leu Leu Pro Gln Glu 145 150 155 160 Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro Gly Ala Pro Gly Phe 165 170 175 Tyr Phe Thr His Ser Ile Leu Thr Val Thr Glu Glu Glu Trp Asn Ser 180 185 190 Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Gly His Glu Ala Leu Pro His Leu 195 200 205 Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr 210 215 220 Asn Val Ser Leu Ile Met Ser Asp Thr Gly Gly Thr Cys Tyr 225 230 235 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Val Ser Val Phe Pro Leu Glu 1 5 <210> 27 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Glu Tyr Phe Asn Lys Tyr Ser Ser 1 5 <210> 28 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Glu Glu Ile Phe 1

Claims (37)

  1. 구성물을 포함하는 보체계 활성 장소들로 보체 조절제(complement modulator)의 표적화된 배송을 가능하게 하는 용해성 조성물에 있어서, 상기 구성물은,
    (a) SEQ ID NO:1의 CR2 단백질 또는 그 생리학적 활성 단편을 포함하는 보체 수용체(complement receptor) 2(CR2) 부분을 포함하고, 상기 CR2 부분은 상기 CR2 단백질의 적어도 첫 번째 두 N-말단 SCR 도메인들을 함유하며,
    (b) 보체 조절제 부분을 포함하고,
    상기 CR2 부분은 EBV gp350 및 인터페론-알파(Interferon-alpha: IFNα)를 위한 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 적어도 하나의 아미노산 치환을 함유하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 EBV gp350을 위해 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, 상기 IFNα를 위해 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 적어도 하나의 아미노산 치환은 S42 및 K50으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 구성물은 퓨전 단백질(fusion protein)인 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 보체 조절제 부분은 보체 억제제(complement inhibitor) 또는 상기 보체 억제제의 생물학적 활성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  5. 제 3 항에 있어서, 상기 보체 억제제 또는 상기 보체 억제제의 생물학적 활성 단편은 인간 세포막 보체 단백질(membrane complement protein: MCP)(SEQ ID NO:10), 인간 노화 촉진 팩터(decay accelerating factor: DAF)(SEQ ID NO:11), 쥐(mouse) DAF(SEQ ID NO:12), 쥐 보체 수용체 1-관련 유전자/단백질 y(complement receptor 1-related gene/protein y: Crry)(SEQ ID NO:4), 인간 CD59(SEQ ID NO:3), 쥐 CD59 이소폼(isoform) A(SEQ ID NO:6), 쥐 CD59 이소폼 B(SEQ ID NO:7), 인간 보체 수용체 1(CR1)(SEQ ID NO:9), 인간 팩터 H(SEQ ID NO:5) 및 쥐 팩터 H(SEQ ID NO:8)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  6. 제 4 항에 있어서, 상기 보체 억제제는 인간 세포막 보체 단백질(MCP)(SEQ ID NO:10) 또는 인간 세포막 보체 단백질(MCP)(SEQ ID NO:10)의 생물학적 활성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  7. 제 5 항에 있어서, 상기 인간 MCP(SEQ ID NO:10)의 생물학적 활성 단편은 SCR1-4(SEQ ID NO:10의 아미노산들 35-285), SCR1-4 플러스 세린/트레오닌-리치 도메인(serine/threonine-rich domain)(SEQ ID NO:10의 아미노산들 35-326) 및 MCP의 세포외 도메인(SEQ ID NO:10의 아미노산들 35-343)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  8. 제 4 항에 있어서, 상기 보체 억제제는 인간 DAF(SEQ ID NO:11) 또는 인간 DAF(SEQ ID NO:11)의 생물학적 활성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  9. 제 7 항에 있어서, 상기 인간 DAF(SEQ ID NO:11)의 생물학적 활성 단편은 SCR1-4(SEQ ID NO:11의 아미노산들 25-285) 및 SCR1-4 플러스 O-글리코실레이티드 세린/트레오닌-리치 도메인(O-glycosylated serine/threonine-rich domain)(SEQ ID NO:11의 아미노산들 25-353)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  10. 제 4 항에 있어서, 상기 보체 억제제는 쥐 DAF(SEQ ID NO:12) 또는 쥐 DAF(SEQ ID NO:12)의 생물학적 활성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  11. 제 9 항에 있어서, 상기 쥐 DAF(SEQ ID NO:12)의 생물학적 활성 단편은 SCR1-4(SEQ IN NO:12의 아미노산들 35-286) 및 SCR1-4 플러스 상기 O-글리코실레이티드 세린/트레오닌-리치 도메인(SEQ ID NO:11의 아미노산들 25-362)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  12. 제 4 항에 있어서, 상기 보체 억제제는 Crry(SEQ ID NO:4) 또는 Crry(SEQ ID NO:4)의 생물학적 활성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  13. 제 11 항에 있어서, 상기 Crry(SEQ ID NO:4)의 생물학적 활성 단편은 SCR1-5(SEQ ID NO:4의 아미노산들 41-400) 및 상기 세포외 도메인 쥐 Crry 단백질(SEQ ID NO:4의 아미노산들 41-405)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  14. 제 4 항에 있어서, 상기 보체 억제제는 인간 CD59(SEQ ID NO:3) 또는 인간 CD59(SEQ ID NO:3)의 생물학적 활성 단편들을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  15. 제 13 항에 있어서, 상기 인간 CD59(SEQ ID NO:3)의 생물학적 활성 단편은 상기 인간 CD59(SEQ ID NO:3)의 GPI 앵커(SEQ ID NO:3의 아미노산들 26-101)가 결핍된 인간 CD59의 세포외 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  16. 제 4 항에 있어서, 상기 보체 억제제는 쥐 CD59 이소폼 A(SEQ ID NO:6) 또는 쥐 CD59 이소폼 A(SEQ ID NO:6)의 생물학적 활성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  17. 제 15 항에 있어서, 상기 쥐 CD59 이소폼 A(SEQ ID NO:6)의 생물학적 활성 단편은 쥐 CD59의 세포외 도메인, 쥐 CD59의 세포외 도메인의 GPI 앵커(SEQ IN NO:6의 아미노산들 24-95)가 결핍된 이소폼 A를 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  18. 제 4 항에 있어서, 상기 보체 억제제는 쥐 CD59 이소폼 B(SEQ ID NO:7) 또는 쥐 CD59 이소폼 B(SEQ ID NO:7)의 생물학적 활성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  19. 제 17 항에 있어서, 상기 쥐 CD59 이소폼 B(SEQ ID NO:7)의 생물학적 활성 단편은 쥐 CD59의 세포외 도메인, 쥐 CD59의 상기 세포외 도메인의 GPI가 결핍된 이소폼 B(SEQ ID NO:7의 아미노산들 24-103)를 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  20. 제 3 항에 있어서, 상기 보체 억제제는 인간 CR1(SEQ ID NO:9) 또는 인간 CR1(SEQ ID NO:9)의 생물학적 활성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  21. 제 19 항에 있어서, 상기 인간 CR1(SEQ ID NO:9)의 생물학적 활성 단편은 SCR1-3(SEQ ID NO:9의 아미노산들 42-234), SCR1-4(SEQ ID NO:9의 아미노산들 42-295), SCR1-10(SEQ ID NO:9의 아미노산들 42-684), SCR8-10(SEQ ID NO:9의 아미노산들 491-684), SCR8-11(SEQ ID NO:9의 아미노산들 491-745), SCR15-17(SEQ ID NO:9의 아미노산들 941-1134), SCR15-18(SEQ ID NO:9의 아미노산 941-1195) 및 SCR22-28(SEQ ID NO:의 아미노산들 1394-1842)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  22. 제 4 항에 있어서, 상기 보체 억제제는 인간 팩터 H(SEQ ID NO:5) 또는 인간 팩터 H(SEQ ID NO:5)의 생물학적 활성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  23. 제 21 항에 있어서, 상기 인간 팩터 H(SEQ ID NO:5)의 생물학적 활성 단편은 SCR1-4(SEQ ID NO:5의 아미노산들 21-262), SCR1-5(SEQ ID NO:5의 아미노산들 21-320), SCR1-8(SEQ ID NO:5의 아미노산들 21-507) 및 SCR1-18(SEQ ID NO:5의 아미노산들 21-1104)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  24. 제 4 항에 있어서, 상기 보체 억제제는 쥐 팩터 H(SEQ ID NO:8) 또는 쥐 팩터 H(SEQ ID NO:8)의 생물학적 활성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  25. 제 23 항에 있어서, 상기 쥐 팩터 H(SEQ ID NO:8)의 생물학적 활성 단편은 SCR1-4(SEQ ID NO:8의 아미노산들 19-264), SCR1-5(SEQ ID NO:8의 아미노산들 19-322), SCR1-8(SEQ ID NO:8의 아미노산들 19-507) 및 SCR1-18(SEQ ID NO:8의 아미노산들 19-1109)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  26. 제 1 항에 있어서, 상기 보체 조절 부분은 보체 촉진제(complement activator) 또는 보체 촉진제의 생물학적 활성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  27. 제 25 항에 있어서, 상기 보체 촉진제 또는 상기 보체 촉진제의 생물학적 활성 단편은 인간 IgG1, 인간 IgG1 Fc 도메인, 인간 IgM, 인간 IgM Fc 도메인, 쥐 IgG3, 쥐 IgG3 Fc 도메인, 쥐 IgM, 쥐 IgM Fc 도메인 및 코브라 독(cobra venom) 팩터(CVF)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  28. 제 1 항에 있어서, 상기 구성물은 상기 CR2 또는 그 생물학적 활성 단편이 어떠한 아미노산 치환도 함유하지 않는 구성물에 비하여 EBV-gp350 또는 IFNα를 위해 감소되는 결합 친화도를 나타내는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  29. 제 27 항에 있어서, 상기 구성물은 상기 CR2 또는 그 생물학적 활성 단편이 어떠한 아미노산 치환도 함유하지 않는 구성물에 비하여 EBV-gp350을 위해 감소되는 결합 친화도를 나타내는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  30. 제 28 항에 있어서, 상기 CR2 또는 상기 CR2의 생물학적 활성 단편은 N11, R36, K41, Y64 및 K67로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 잔기의 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  31. 제 27 항에 있어서, 상기 구성물은 상기 CR2 또는 그 생물학적 활성 단편이 어떠한 아미노산 치환도 함유하지 않는 구성물에 비하여 IFNα를 위해 감소된 결합 친화도를 나타내는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  32. 제 30 항에 있어서, 상기 CR2 또는 상기 CR2의 단편은 S42 및 K50으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 잔기에 대한 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 용해성 조성물.
  33. 하나 또는 그 이상의 C3 단백질 가수분해 단편들에 선택적으로 결합되고, EBV gp350 또는 IFNα에 대하여 선택적으로 결합되지 않는 구성물의제조 방법에 있어서, 상기 방법은,
    (a) N11, R36, K41, Y64 및 K67로 이루어진 그룹으로부터 상기 구성물의 보체 수용체 2(CR2) 부분에 하나 또는 그 이상의 아미노산들을 변형하는(mutating) 단계; 및
    (b) S42 및 K50으로 이루어진 그룹으로부터 상기 구성물의 보체 수용체 2(CR2) 부분에 하나 또는 그 이상의 아미노산들을 변형하는 단계를 포함하며,
    상기 구성물이,
    (i) SEQ ID NO:1의 CR2 단백질 또는 그 생리학적 활성 단편을 포함하는 보체 수용체(complement receptor) 2(CR2) 부분을 포함하고, 상기 CR2 부분은 상기 CR2 단백질의 적어도 첫 번째 두 N-말단 SCR 도메인들을 함유하며,
    (ii) 보체 조절제 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 제 33 항에 있어서, 상기 구성물의 상기 보체 수용체 2(CR2) 내의 하나 또는 그 이상의 변형들은 아미노산 알라닌(amino acid alanine)으로의 변형들인 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 제 33 항에 있어서, 상기 방법은 R13, Y16, A22, R28, S32, K48, K57, Y68, R83, G84 및 R89로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 상기 구성물의 보체 수용체 2(CR2) 부분 내에 하나 또는 그 이상의 아미노산들을 변형하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  36. EBV-gp350을 위해 제 1 항에 따른 상기 구성물의 상기 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 방법에 있어서, N11, R36, K41, Y64 및 K67로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 잔기를 변형하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  37. IFNα를 위해 제 1 항에 따른 상기 구성물의 CR2 부분의 결합 친화도를 감소시키는 방법에 있어서, S42 및 K50으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 잔기를 변형하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
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Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0506629A (pt) 2004-02-10 2007-05-02 Univ Colorado inibição do fator b, a via alternativa do sistema complemento e métodos relacionados
CA2610340C (en) 2005-05-26 2016-02-16 Vernon Michael Holers Inhibition of the alternative complement pathway for treatment of traumatic brain injury, spinal cord injury and related conditions
EP2826788B1 (en) 2006-06-21 2017-12-13 MUSC Foundation for Research Development Targeting complement factor h for treatment of diseases by the use of cr2-fh molecules
JP5872757B2 (ja) 2007-03-14 2016-03-01 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド ヒト化抗ｂ因子抗体
CA2767105A1 (en) 2009-07-02 2011-01-06 Musc Foundation For Research Development Methods of stimulating liver regeneration
CA2795311A1 (en) 2009-11-05 2011-05-12 Taligen Therapeutics, Inc. Treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, hemolytic anemias and disease states involving intravascular and extravascular hemolysis
SG185483A1 (en) 2010-05-14 2012-12-28 Univ Colorado Regents Improved complement receptor 2 (cr2) targeting groups
USRE49339E1 (en) 2010-06-22 2022-12-20 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Antibodies to the C3D fragment of complement component 3
AU2011295715B9 (en) 2010-09-03 2017-02-23 Abbvie Stemcentrx Llc Novel modulators and methods of use
WO2012095519A1 (en) * 2011-01-13 2012-07-19 Leibniz-Institut Für Naturstoff-Forschung Und Infektionsbiologie Potent inhibitors of complement activation
US20180021376A1 (en) * 2011-03-04 2018-01-25 Rare Antibody Antigen Supply, Inc. Naming of KH1 through KH55 good healthy cells synthesizes the KH1 through KH55 proteins
WO2013177035A2 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Humaneered anti-factor b antibody
JP2015535212A (ja) 2012-08-17 2015-12-10 ザ・リージエンツ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・コロラド、ア・ボデイー・コーポレイト 補体活性化を検出するための組成物および方法
US10413620B2 (en) 2012-08-17 2019-09-17 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Light-emitting versions of the monoclonal antibody to C3D (MAB 3D29) for imaging
KR102448976B1 (ko) 2013-08-07 2022-09-29 알렉시온 파마슈티칼스, 인코포레이티드 비정형적 용혈성 요독증후군 (ahus) 바이오마커 단백질
RU2016151761A (ru) * 2014-05-28 2018-07-03 Рэар Энтибоди Энтиджен Сеплай, Инк. Очищенные композиции белков ivig и kh для модулирования лимфоцитов и лечения вируса гепатита b
US20190016766A1 (en) * 2015-10-07 2019-01-17 Daniel E. Benjamin Use of improved modulators of complement function as cancer therapeutics
GB201800620D0 (en) 2018-01-15 2018-02-28 Univ Manchester C3b Binding Polypeptide
EP3793586B1 (en) * 2018-05-16 2024-04-10 CSL Limited Soluble complement receptor type 1 variants and uses thereof
BR112021004141A2 (pt) 2018-09-06 2021-05-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania anticorpo dependente de ph que se liga especificamente a c5 humano, métodos para tratar uma doença ou distúrbio mediado pela via do complemento em um indivíduo e para reduzir a atividade de um sistema complemento de um indivíduo, célula, e, animal não humano geneticamente modificado.
CN109929026B (zh) * 2019-03-15 2020-10-13 北京康普美特创新医药科技有限责任公司 人源靶向补体抑制物蛋白mCR2-DAF及应用
SG11202111419QA (en) * 2019-04-24 2021-11-29 Univ Pennsylvania Bi-functional humanized anti-c5 antibodies and factor h fusion proteins and uses thereof
CN110128547B (zh) * 2019-05-07 2022-07-22 北京康普美特创新医药科技有限责任公司 人源靶向补体抑制物蛋白mCR2-fH及应用
GB201912437D0 (en) * 2019-08-30 2019-10-16 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd CR2 Binding Proteins and their use in Medical Therapy
CN111763243B (zh) * 2020-05-22 2021-01-29 浙江海洋大学 小公鱼免疫活性肽及其制备方法和用途
WO2022251446A1 (en) 2021-05-28 2022-12-01 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods for detecting cm-tma biomarkers
WO2025015317A2 (en) * 2023-07-13 2025-01-16 Kriya Therapeutics, Inc. Complement pathway inhibitor fusions and methods of using the same

Family Cites Families (98)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5981481A (en) 1974-12-06 1999-11-09 The Johns Hopkins University Human C3b/C4b receptor (CR1)
US5212071A (en) 1988-04-01 1993-05-18 The Johns Hopkins University Nucleic acids encoding a human C3b/C4b receptor (CR1)
JPH0742235B2 (ja) 1985-11-08 1995-05-10 三共株式会社 自己免疫性疾病の予防・治療剤
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US5256642A (en) 1988-04-01 1993-10-26 The Johns Hopkins University Compositions of soluble complement receptor 1 (CR1) and a thrombolytic agent, and the methods of use thereof
DE3830271A1 (de) 1988-09-06 1990-03-15 Goetze Otto Mittel mit immunsuppressiver wirkung
US5328470A (en) 1989-03-31 1994-07-12 The Regents Of The University Of Michigan Treatment of diseases by site-specific instillation of cells or site-specific transformation of cells and kits therefor
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
FR2648133B1 (fr) 1989-06-08 1992-02-21 Sanofi Sa Lauramides n-substitues, leur preparation et compositions les contenant
US5331090A (en) 1989-09-08 1994-07-19 California Institute Of Biological Research CR2 ligand compositions and methods for modulating immune cell functions
US5310729A (en) 1990-04-20 1994-05-10 California Institute Of Biological Research Interferon-related polypeptides as CR2 ligands and their use for modulating immune cell functions
US6458360B1 (en) 1990-04-25 2002-10-01 The Johns Hopkins University Soluble complement regulatory molecules
EP1413587A2 (en) 1991-05-03 2004-04-28 Washington University Modified complement system regulator
DE4222534A1 (de) 1992-07-09 1994-01-13 Behringwerke Ag Verwendung von Komplement-Inhibitoren zur Herstellung eines Arzneimittels zur Prophylaxe und Therapie von entzündlichen Darm- und Hauterkrankungen sowie Purpura
US5679546A (en) 1993-09-24 1997-10-21 Cytomed, Inc. Chimeric proteins which block complement activation
US6074642A (en) 1994-05-02 2000-06-13 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Use of antibodies specific to human complement component C5 for the treatment of glomerulonephritis
US5679345A (en) 1994-06-02 1997-10-21 The Johns Hopkins University Method for preventing complement-dependent rejection of organ or tissue transplants
BR9509434A (pt) 1994-10-25 1998-01-06 Glaxo Group Ltd Agente de aglutinação uso do mesmo composição farmacêutica e processo de tratamento de uma doença inflamatória autoimune ou alérgica
US5922320A (en) 1996-06-14 1999-07-13 Georgetown University Recombinant proCVF
US5843778A (en) 1996-06-14 1998-12-01 The Johns Hopkins University School Of Medicine Use of chimeric vaccinia virus complement control proteins to inhibit complement
WO1998007835A2 (en) 1996-08-21 1998-02-26 Sugen, Inc. Crystal structures of a protein tyrosine kinase
US6214966B1 (en) 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
GB9624731D0 (en) 1996-11-28 1997-01-15 Univ Leicester Complement inhibitor
AU8296098A (en) 1997-07-08 1999-02-08 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for homoconjugates of antibodies which induce growth arrest or apoptosis of tumor cells
US8088386B2 (en) 1998-03-20 2012-01-03 Genentech, Inc. Treatment of complement-associated disorders
US6503947B1 (en) 1998-01-27 2003-01-07 Brigham And Women's Hospital Method of treating cytotoxic damage
DK1054693T3 (da) 1998-02-20 2008-12-08 Genentech Inc Inhibitorer af komplementaktivering
US7112327B2 (en) 1998-02-20 2006-09-26 Tanox, Inc. Inhibition of complement activation
WO1999044625A1 (en) 1998-03-03 1999-09-10 John Hopkins University Smallpox inhibitor of complement enzymes (spice) protein and methods of inhibiting complement activation
US6432679B1 (en) 1998-06-12 2002-08-13 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Enhancement of B cell activation and immunoglobulin secretion by co-stimulation of receptors for antigen and EBV Gp350/220
US6572856B1 (en) 1998-09-10 2003-06-03 The University Of Virginia Patent Foundation Methods for the prevention and treatment of cancer using anti-C3b(i) antibodies
EP1001021B1 (en) 1998-09-25 2003-08-27 Wolfgang Prodinger Monoclonal antibody to human CD21, and its uses
US6224866B1 (en) 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
JP2002534959A (ja) 1998-12-08 2002-10-22 バイオベーション リミテッド 免疫原性タンパク質の改変方法
WO2000040749A2 (en) 1999-01-06 2000-07-13 Genenews Inc. Method for the detection of gene transcripts in blood and uses thereof
MXPA01011279A (es) 1999-05-07 2002-07-02 Genentech Inc Tratamiento de enfermedades autoinmunes con antagonistas que se unene a los marcadores de superficie, de celulas b.
US7576182B1 (en) 1999-08-31 2009-08-18 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
GB0008582D0 (en) 2000-04-08 2000-05-31 Adprotech Plc DNA immunization vectors
DK2026073T3 (en) 2000-04-29 2016-07-25 Univ Iowa Res Found Diagnosis and treatment of macular degeneration-related disorders
US7439330B2 (en) 2000-05-08 2008-10-21 President And Fellows Of Harvard College Anti-glycated CD59 antibodies and uses thereof
MXPA03002262A (es) 2000-09-18 2003-10-15 Idec Pharma Corp Terapia de combinacion para tratamiento de enfermedades autoinmunes usando una combinacion de anticuerpos inmunorreguladores/supresores de celulas b.
WO2002068579A2 (en) 2001-01-10 2002-09-06 Pe Corporation (Ny) Kits, such as nucleic acid arrays, comprising a majority of human exons or transcripts, for detecting expression and other uses thereof
US7635676B2 (en) 2001-02-21 2009-12-22 Alavita Pharmaccuticals, Inc. Modified annexin proteins and methods for their use in organ transplantation
ES2286247T3 (es) 2001-02-21 2007-12-01 Alavita Pharmaceuticals, Inc. Proteinas anexinicas modificacdas y tratamiento de la trombosis.
US7645739B2 (en) 2001-02-21 2010-01-12 Alavita Pharmaceuticals, Inc. Modified annexin compositions and methods of using same
US7635680B2 (en) 2001-02-21 2009-12-22 Alavita Pharmaceuticals, Inc. Attenuation of reperfusion injury
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
EP1387697A4 (en) 2001-05-17 2005-04-20 Jolla Pharma METHOD FOR TREATING ANTIBODY-MEDIATED DISEASES USING MEANS TO INHIBIT CD21
WO2003018774A2 (en) 2001-08-29 2003-03-06 University Of Virginia Patent Foundation Therapeutic uses of complement receptor 2
EP1336618A1 (en) 2002-02-15 2003-08-20 HANS-KNÖLL-INSTITUT FÜR NATURSTOFF-FORSCHUNG e.V. Porcine complement regulator factor H and its use
US20030180292A1 (en) 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
US8007804B2 (en) * 2002-11-15 2011-08-30 Musc Foundation For Research Development Complement receptor 2 targeted complement modulators
US7534427B2 (en) 2002-12-31 2009-05-19 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B cell malignancies and autoimmune diseases using unconjugated antibodies and conjugated antibodies and antibody combinations and fusion proteins
CN1791422A (zh) 2003-03-28 2006-06-21 应用研究系统Ars股份公司 凝聚素在治疗和/或预防周围神经疾病中的用途
WO2004103288A2 (en) 2003-05-13 2004-12-02 New York Society For The Ruptured And Crippled Maintaining The Hospital For Special Surgery Method of preventing recurrent miscarriages
JP4029772B2 (ja) 2003-05-16 2008-01-09 株式会社日立製作所 磁気ヘッドおよびそれを用いた磁気記録再生装置
EP1488798A1 (en) 2003-06-18 2004-12-22 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) HIP/PAP polypeptide composition for use in liver regeneration and for the prevention of liver failure
US20050079184A1 (en) 2003-08-08 2005-04-14 Immunomedics, Inc. Bispecific antibodies for inducing apoptosis of tumor and diseased cells
JP2007513072A (ja) 2003-11-05 2007-05-24 パリンゲン インコーポレーテッド Ｃｄｉｍ結合抗体における増強されたｂ細胞細胞傷害性
US8454963B2 (en) 2003-11-13 2013-06-04 Musc Foundation For Research Development Tissue targeted complement modulators
US20050214286A1 (en) 2004-01-27 2005-09-29 University Of Southern California Polymer-bound antibody cancer therapeutic agent
BRPI0506629A (pt) 2004-02-10 2007-05-02 Univ Colorado inibição do fator b, a via alternativa do sistema complemento e métodos relacionados
EP1713503B1 (en) 2004-02-10 2013-07-31 The Regents of the University of Colorado, a Body Corporate Inhibition of factor b, the alternative complement pathway and methods related thereto
US7919094B2 (en) 2004-06-10 2011-04-05 Omeros Corporation Methods for treating conditions associated with MASP-2 dependent complement activation
AU2005279308B2 (en) 2004-09-03 2012-05-03 Creabilis Therapeutics S.R.L. Protease resistant human and non-human HMGB1 Box-A mutants and their therapeutic/diagnostic use
US7563443B2 (en) 2004-09-17 2009-07-21 Domantis Limited Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof
US7423128B2 (en) 2004-11-03 2008-09-09 Amgen Fremont Inc. Anti-properdin antibodies, and methods for making and using same
ATE528410T1 (de) 2004-11-18 2011-10-15 Univ Yale Verfahren und zusammensetzungen zur diagnose von altersbedingter maculadegeneration
CA2593846A1 (en) 2005-01-14 2006-08-10 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for inhibiting drusen formation and for diagnosing or treating drusen-related disorders
EP2357257B1 (en) 2005-02-14 2019-07-31 University of Iowa Research Foundation Methods and reagents for treatment and diagnosis of age-related macular degeneration
CA2610340C (en) 2005-05-26 2016-02-16 Vernon Michael Holers Inhibition of the alternative complement pathway for treatment of traumatic brain injury, spinal cord injury and related conditions
US20090087907A1 (en) 2005-07-29 2009-04-02 Alice Pebay Compositions and Methods for Growth of Pluripotent Cells
WO2007029008A2 (en) 2005-09-08 2007-03-15 Dsm Ip Assets B.V. Method of treatment or prevention of age-related macular degeneration
US20070081989A1 (en) 2005-09-19 2007-04-12 Sanders Martin E Treatment of B cell diseases using anti-germline antibody binding agents
CA2903896A1 (en) 2005-11-04 2007-05-18 Genentech, Inc. Use of complement pathway inhibitors to treat ocular diseases
US20110014270A1 (en) 2006-03-27 2011-01-20 The Regents Of The University Of Colorado Prevention and treatment of ischemia-reperfusion injury and related conditions
BRPI0710826A2 (pt) 2006-04-21 2011-08-23 Novartis Ag composições farmacêuticas de anticorpo anti-cd40 antagonista
EP1854810A1 (en) 2006-05-09 2007-11-14 PanGenetics B.V. Deimmunized antagonistic anti-human CD40 monoclonal antibody from the ch5D12 antibody
EP2826788B1 (en) * 2006-06-21 2017-12-13 MUSC Foundation for Research Development Targeting complement factor h for treatment of diseases by the use of cr2-fh molecules
US7705475B2 (en) 2006-08-03 2010-04-27 Stats Chippac Ltd. Integrated circuit package system
KR20090078364A (ko) 2006-11-02 2009-07-17 제넨테크, 인크. 인간화 항-ｄ 인자 항체
JP5872757B2 (ja) 2007-03-14 2016-03-01 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド ヒト化抗ｂ因子抗体
SG182165A1 (en) 2007-06-07 2012-07-30 Genentech Inc C3b antibodies and methods for the prevention and treatment of complement- associated disorders
EP2195024B1 (en) 2007-08-27 2016-10-05 NovelMed Therapeutics, Inc. Method of inhibiting complement activation with factor bb specific antibodies
CL2008003241A1 (es) 2007-11-02 2009-07-31 Novartis Ag Molecula de enlace que comprende una porcion de enlace de antigeno que se enlaza con un neoepitopo de c3b; composicion farmaceutica que la comprende; y su uso para tratar trastornos oculares
EP2262831B1 (en) 2008-03-03 2015-01-21 NovelMed Therapeutics, Inc. Anti-properdin antibodies
SG10201405377XA (en) 2008-08-05 2014-12-30 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting complement protein c5
WO2010033868A2 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Taligen Therapeutics, Inc. Ligand-specific non-antibody compounds that inhibit cr2 activation and methods of use thereof
BRPI0921845A2 (pt) 2008-11-12 2019-09-17 Medimmune Llc formulação aquosa estéril estável, forma de dosagem unitária farmacêutica, seringa pré-carregada, e, métodos para tratar uma doença ou distúrbio, para tratar ou prevenir rejeição, para esgotar células t que expressam icos em um paciente humano, e para interromper arquitetura central germinal em um órgão linfóide secundário de um primata
WO2010091183A2 (en) 2009-02-04 2010-08-12 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Non-invasive detection of complement-mediated inflammation using cr2-targeted nanoparticles
US20100291106A1 (en) 2009-05-06 2010-11-18 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting complement protein c3b
US9291622B2 (en) 2009-05-21 2016-03-22 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Complement assays and uses thereof
CA2767105A1 (en) 2009-07-02 2011-01-06 Musc Foundation For Research Development Methods of stimulating liver regeneration
CA2795311A1 (en) 2009-11-05 2011-05-12 Taligen Therapeutics, Inc. Treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, hemolytic anemias and disease states involving intravascular and extravascular hemolysis
SG185483A1 (en) 2010-05-14 2012-12-28 Univ Colorado Regents Improved complement receptor 2 (cr2) targeting groups
USRE49339E1 (en) 2010-06-22 2022-12-20 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Antibodies to the C3D fragment of complement component 3
CN103248395A (zh) 2012-02-09 2013-08-14 中兴通讯股份有限公司 一种窄带干扰抑制方法及装置
WO2013177035A2 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Humaneered anti-factor b antibody

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