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KR20070083486A - 펩티드 - Google Patents

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KR20070083486A
KR20070083486A KR1020077003571A KR20077003571A KR20070083486A KR 20070083486 A KR20070083486 A KR 20070083486A KR 1020077003571 A KR1020077003571 A KR 1020077003571A KR 20077003571 A KR20077003571 A KR 20077003571A KR 20070083486 A KR20070083486 A KR 20070083486A
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Abstract

본 발명은 약제로 사용될 수 있는 화학식 (I) ((X)l(Y)m)n 에 따른 아미노산을 포함하는 펩티드에 관련된 것으로서, 상기 화학식 (I)에서 l, m, m은 0 ~ 10 인 정수이고, X 및 Y는 소수성 아미노산 그리고/또는 양이온성 아미노산을 포함하는 군에서 선택된 아미노산으로서, 서로 동일하거나 다를 수 있다.

Description

펩티드{PEPTIDE}
본 발명은 항균성 펩티드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 항균성 펩티드를 포함하는 제약학적 조성물 및 치료에서의 펩티드의 사용, 특히 미생물 감염의 치료에서의 펩티드의 사용에 관한 것이다.
중요한 내인성(endogenous) 항균성 펩티드의 군(family) 중에 하나인, 베타 디펜신(beta-defensins)은 고등 포유동물의 소화기, 호흡기 그리고 비뇨생식기계의 벽을 형성하는 상피 세포에 의해 분비된다. 베타 디펜신은 또한 피부 내의 각질형성세포(keratinocytes)에 의해 생성된다. 베타 디펜신의 가장 우선적인 역할은 이런 경로들을 통해 병원균(pathogenic organisms) 감염에 대항하는 중요한 1차 방어 라인을 제공하는 것이다.
디펜신은 항균성 펩티드들 부류(class) 중에서 가장 많이 연구되는 것 중에 하나이다. 이 부류는 3개의 이황화 가교(disulphide bridges)를 가지는 시스테인(cysteine)이 풍부한 분자를 포함한다. 디펜신은 식물, 곤충 및 여러 포유동물에서 발견된다. 사람에서는, 6개의 시스테인 잔기들 사이의 간격 및 결합에서 서로 다른 두 부류의 디펜신이 발견된다. 이 부류(classes)의 첫 번째 부류는 호중구들(neutrophils)(HNP1-4, 인간 호중구 펩티드)에서 분리되고, 위장계(알파-디펜신 5 및 6)의 호산성 과립세포(paneth cells)에 있는 알파-디펜신(alpha-defensin)(6개 유형)있다. 두 번째 부류인 베타 디펜신은 길이가 더 길고, 좀 더 기본적이며 소화기, 호흡기 그리고 비뇨생식기계 및 피부 벽을 형성, 또는/그리고 구성, 또는/그리고 이들 내에 존재하는 상피 세포들 및 각질형성세포들 내의 점막(mucosae)을 통해서 발현된다. 인간 베타 디펜신 1(hBD1)은 조직적으로(constitutively) 분비되고 인간 베타 디펜신 2, 3 및 4(hBD2, hBD3 및 hBD4)는 감염 또는 염증에 대응하여 생성된다. hBD2 발현 및 분비는 박테리아 자극, 특히 편모 박테리아(flagellated bacteria) (Harder et al, Nature 1997; 387:861), 그리고 IL1[알파], 그리고 IL1[beta](Interleukin 1)(Liu et al, J invest Dermatol 2002; 118; 275-281)에 의해 자극 받는다. 어떤 조직 부분에서, TNF-alpha (종양 괴사 인자 알파) 및 ㅈ지지질다당질(LPS:Lipopolysaccharide)는 또한 hBD2의 발현을 유도하는 역할을 할 수 있다. 시험관 내 실험에서(in vitro) hBD2는 E- coli(Escherichia coli)와 같은 Gram 음성 박테리아에 대해 활성화되고 또한 더 약한 정도로 폐렴연쇄구균(Streptococcus pneumoniae)와 같은 그램(Gram) 양성 박테리아에도 활성화된다는 것이 밝혀졌다. hBD2는 또한 시험관 내 실험에서 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 효모에 대해 살균 작용을 한다. hBD3 발현 및 분비는 박테리아 자극, TNF-알파 그리고 IFNγ(Interferon gamma)에 의해 유도되는 데, 이들은 염증 과정에 관련된 분자들이라는 점에서 공통적인 특성을 가진다
베타 디펜신이 제공하는 잠재적이고, 조직적이고 조절된 다양한 스펙트럼이 내재하는 항균성 보호 역할에 더하여, 이러한 분자들, 특히 hBD2는 또한 미성숙 나 무가지 세포(dendritic cells) 및 기억 T-림프구에 대한 화학주성 효과(chemotactic effects)를 사용하여 면역 반응의 적응성 팔(adaptive arm)을 동원하도록 하는 능력을 가지고 있다 (Yang et al, Seience 1999; 286: 525-528).
특히, 베타 디펜신은 병원성 세균(pathogenic microbes) 감염에 대한 방어력이 있을 뿐 아니라, 피부, 소화기 및 생식기 계통 등에서와 같은 육체에 필수적인 공생 세균 생태계(commensal microbial ecosystems)에 최적의 밀도 및 다양성을 조절하고 유지하는 중요한 역할을 한다는 증거들이 나오고 있다 (Ganz,T, Nat Rev Immunol. 2004 3(9): 710-20).
베타 디펜신의 활성화 모드(mode of action)는 활성 농도에서 대부분 숙주세포(host cell)에 대해 독성이 없다. 따라서 베타 디펜신은 여러 분야의 감염 치료를 위해서 잠재적인 목표(potential target)로 관련되어 왔다. 그러나, 자연 형태의 디페신을, 낮은 수득률을 보이는 재조합형 시스템에서 생산하는 것은 기술적으로 어려움이 있다. 또한, 베타 디펜신은 잠재적인 염증성 합성물이라는 것이 그 화학주성 작용을 통해서 입증되고 있다 (Yang et al, Science 1999; 286: 525-528; Van Wetering et al. Inflamm Res. 2002; 51(1): 8-15; Niyonsaba et al, Curr Drug Targets Inflamm Allergy 2003; 2(3): 224-231).
베타 디펜신은 또한 염류에 매우 민감하게 반응한다 (Porter et al.,Infect.Immun. 1997; 65(6):2396-401; Bals et al. J Clin Invest. 1998; 102(5): 874-80; Valore et al., J Clin Invest 1998; 101(8): 1633-42; Goldmann et al., Cell 1997; 88(4): 553-609; Singh et al., Proc Natl Acad Sci USA 95(25): 14961-6). 이 때문에, 낭포성 섬유증(cystic fibrosis)과 같은 질환에서는 항균성 베타 디펜신이 항균 방어가 될 수 없다. 왜냐하면, 호흡기계 상피(repiratory epithelia)가 이 질환과 관련된 지속적인 박테리아 감염에 대하여 풍부한 베타 디펜신을 생성해도, 양이온 재흡수(특히, Na+) 증가와 염산 분비를 증가하는 결과를 가져오는 호흡기계 상피막을 통한 이온 전달 불균형 때문에 베타 디펜신은 활성화되지 않는다.(Donaldson SH and Boucher RC. Curr. Opin. Pulm. Med. 2003 Nov;9(6):486-91; Davies JC. Pediatr Pulmonol Suppl. 2004;26:147-8).
따라서, 미생물성 감염을 치료하는 데 사용될 수 있는 새로운 약제가 필요하다.
본 발명의 발명자들은 놀라울 만큼 자연 상태의 디펜신에 비해 향균활성을 놀라울 만큼 향상시킨 펩티드를 발명하였다.
본 발명의 첫 번째 측면에 따르면, 서로 동일하거나 다른 3에서 약 200 D 그리고/또는 L 아미노산들을 포함하는 펩티드가 제공된다. 상기 아미노산은 소수성(hydrophobic) 아미노산 그리고/또는 양이온 아미노산으로 구성된 군에서 선택된다. 상기 펩티드는 3 에서 약 100 D 그리고/또는 L 아미노산들을 포함할 수 있으며, 예를 들어 4 에서 약 50 D 그리고/또는 L 아미노산들을 포함하는 3에서 약 50 D 그리고/또는 L-아미노산들을 포함할 수 있다.
본 발명의 펩티드는 특히 세균성 감염의 치료 및 예방에서 유용하다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 아래 화학식 (I) 에 따른 아미노산을 포함하는 펩티드가 제공된다.
((X)l(Y)m)n (I)
상기 화학식 (I)에서, l 및 m은 0에서 10까지의 정수(예를 들어, 0에서 5까지 숫자)이고; n은 1에서 10까지의 정수이며; 같거나 다를 수 있는 X와 Y는 소수성(hydrophobic) 아미노산 그리고/또는 양이온 아미노산 중에서 선택되는 아미노산을 가리킨다.
본 발명의 바람직한 측면에서, 상기 펩티드는 3 ~ 200 의 아미노산들을 포함하며, 예를 들어 3,4,5,6,또는 7에서 20,25,30,25,40 또는 42 아미노산들을 포함하는 3,4,5,6 또는 7에서 100 아미노산들을 포함한다.
본 발명에 따른 펩티드는 100에서 200 아미노산들, 27에서 100 아미노산들, 28에서 86 아미노산들, 7에서 27 아미노산들 또는 3에서 14 아미노산들을 포함한다.
펩티드는 3에서 15 아미노산들(예, 3에서 7 아미노산들)을 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명의 다른 바람직한 측면에서, 시스테인 잔기들과 같은 하나 이상의 시스테인 잔기들, 예를 들어 1,2,3,4,5 또는 6 등까지의 시스테인 잔기들을 더 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 측면에서는, 아래 화학식 (II)에 따른 아미노산을 포함하는 펩티드를 제공한다:
C((X)l(Y)m)nC(X)l(Y)m)n (II)
상기 화학식 (II)에서, C는 시스테인이고, l,n 및 m은 0에서 10까지의 정수; 같거나 다를 수 있는 X와 Y는 소수성(hydrophobic) 아미노산 그리고/또는 양이온 아미노산 중에서 선택되는 아미노산을 가리킨다.
본 발명의 다른 측면에서는, 펩티드는 아래 화학식 (III)에 따른 아미노산을 포함한다:
C((X)l(Y)m)nC(X)l(Y)m)n C((X)l(Y)m)nC(X)l(Y)m)n C (III)
상기 화학식 (III)에서 C,X,Y,l,m 및 n은 위에서 정의된 바와 같다.
또 다른 본 발명의 측면에서, 펩티드는 아래 화학식 (IV)에 따른 아미노산을 포함한다:
C((X)l(Y)m)nC(X)l(Y)m)n C((X)l(Y)m)nC(X)l(Y)m)nCC (IV)
상기 화학식 (IV)에서, C,X,Y,l,m 및 n은 위에 정의된 바와 같다.
본 발명의 펩티드는 자연 상태의 베타 디펜신의 구조보다 간단하기 때문에 생산하기에 간단하고 효율적이다. 상기 본 발명에 따른 펩티드는 또한 염류에 반응하지 않고 간독소(hepatotoxin)가 아니다. 또한, 펩티드의 작용 모드는 대사보다는 물리적인 작용이다(즉, 활력대사 통로의 타겟 요소보다는 직접적인 점막의 분열). 이 작용 모드는 타겟 세균이 이러한 항균제에 대해 저항이 생길 가능성을 최소화한다.
이 분야의 통상적인 지식을 가진 자가 알 수 있듯이, 아미노산들은 주로 아미노산의 측쇄(side chain)의 화학적, 물리적 성질에 따라 다른 부류들로 분류할 수 있다. 예를 들면, 어떤 아미노산은 일반적으로 친수성 또는 극성(polar) 아미노산으로 알려져 있고, 다른 아미노산은 소수성 또는 비극성(nonpolar) 아미노산으로 알려져 있다. 여기에 사용되었듯이, "소수성(hydrophobic)" 및 "양이온성cationic)"이라는 용어는 Fauchere and Pliska Eur. J. Med. Chem. 10:39(1983)에 기술되어 있듯이, - 1.10 이상의 소수성 정도를 가지는 아미노산 그리고/또는 0 이상의 순하전(net charge)을 가지는 아미노산을 가리킬 수 있다.
본 발명의 바람직한 측면에서는, X 그리고/또는 Y는 글리신(glycine), 루신 페닐 알라닌(leucine phenylalanine), 프롤린(proline), 알라닌(alanine), 트립토판(tryptophan), 발린(valine) 이소루신(isoleucine), 메티오닌(methionine), 티로신(tyrosine) 및 트레오닌(threonine)을 포함하는 소수성 아미노산들 중에서 선택되고, 그리고/또는 오르니틴(ornithine), 히스티딘(histidine), 아르기닌(arginine) 및 리신(lycine)을 포함하는 양이온성 아미노산들 중에서 선택된다. X 그리고/또는 Y는 D 또는 L 아미노산일 수 있다. 또한, X 그리고/또는 Y는 교대성 아미노산들일 수 있다.
본 발명은 또한 알려진 이성질체들(구조적, 입체-, 입체형태(conformational) 그리고 형상 이성질체)과 위 아미노산들의 구조적으로 유사한 이성질체들, 그리고 예를 들면, 전사후 후 변형(post-translational modification) 같은 자연적 변형체들 또는 여기에 열거된 것에 한정되는 것은 아니며 인산화(phosphrylation), 글리코실화(glycosylation), 술포닐화(sulfonylation) 그리고/또는 히드록시화(hydroxylation)를 포함하는 화학적인 변형체들을 포함한다.
일반적으로, 본 발명의 펩티드들은 아스파르트산(aspartic acid), 글루탐산(glutamic acid), 아스파라긴(asparagine), 글루타민(glutamine) 또는 세린(serine)을 포함하지 않으나 이들 아미노산이 존재하더라도 본 발명의 어떤 펩티드들는 활성을 나타낼 수 있다.
본 발명의 펩티드는 화학식 (II), (III) 또는 (IV)의 말단 시스테인 잔기들 중에 하나 또는 둘 다에 인접한 하나 이상의 추가적인 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 펩티드들은 10까지의 추가적인 아미노산 잔여물을 포함할 수 있다(예, 1,2,3,4,5,6,7,8,9 또는 10). 바람직하게는 상기 추가적인 아미노산은 시스테인이 아닌(non-cysteine) 잔기이다. 더 바람직하게는 상기 추가적인 아미노산은 X 그리고/또는 Y이다.
또한, 펩티드의 아미노산 서열(sequence)은 다른 하나의 아미노산 잔기를 적어도 하나의 아미노산 잔기로 치환하는 것(L형보다는 D형을 사용하는 치환 포함)을 포함하는 펩티드 변형체 (peptide variant)를 얻기 위해 변형될 수 있다.
펩티드의 생물학적 활성을 바꾸거나 강화하거나 보존하기 위해 펩티드의 하나 이상의 잔기를 다른 것으로 바꿀 수 있다. 이러한 변형체는 예를 들어, 대응하는 비변형체(non-variant) 펩티드의 생물학적 활성의 적어도 약 10%를 가질 수 있다. 보존성 아미노산(conservative amino acid)이 종종 사용된다. 즉, 위에 설명한 것과 유사한 화학적 및 물리적 성질을 가지는 아미노산의 치환이 사용된다.
따라서, 예를 들어, 보존성 아미노산 치환은 리신(lysine)을 아르기닌, 오르니틴 또는 히스티딘으로 바꾸거나; 한 가지의 소수성 아미노산을 다른 아미노산으로 바꾸는 것을 포함할 수 있다. 상기 치환을 수행한 후에 상기 변형체들의 생물학적 활동을 검사한다.
상기 펩티드는 적어도 4개의 아미노산, 예를 들어 4 ~ 50 아미노산, 또는 예를 들어, 20과 45 사이의 아미노산(20,25,30,35,40,42 또는 45 아미노산 등)과 같은 4와 50 사이의 아미노산을 포함한다.
본 발명의 바람직한 측면에서는, X 및 Y는 같은 물질이고 루신 또는 글리신이다.
본 발명의 다른 바람직한 측면에서, X는 루신이고 Y는 글리신이다.
또 다른 바람직한 측면에서, X 및 Y는 같은 물질이고 리신(lysine) 또는 아르기닌(arginine)이다. 그러므로, 본 발명은 폴리-L-리신(poly-L-lysine),폴리-D-리신(poly-D-lysine), 폴리-L-아르기닌(poly-L-arginine) 그리고 폴리-D-아르기닌(poly-D-arginine) 중에서 선택된 펩디드들을 제공한다.
다른 바람직한 측면에서는, X는 리신이고 Y는 아르기닌이다.
본 발명의 펩티드에서 m은 0,1,2,3,4,5,6,7,8,9 또는 10일 수 있고, n은 1,2,3,4,5,6,7,8,9, 또는 10일 수 있다.
본 발명의 펩티드에서, l은 l일 수 있고, n은 l일 수 있으며, m은 4와 9 사이일 수 있다. 예를 들어, m은 3,4,5,6,7,8 또는 9일 수 있다.
본 발명의 펩티드에서 l,n 그리고/또는 m은 1에서 5 사이(예,1,2,3,4 또는 5) 일 수 있다.
상기 펩티드는 비환식(acyclic)이 바람직하다. 상기 펩티드는 곧은 사슬(straight chained) 즉, 직선 또는 가지형 일 수 있다.
본 발명에 쓰인 "펩티드"는 일반적으로, 펩티드 결합으로 연결된 복수의 아미노산 잔기들을 지칭한다. 펩티드는 폴리펩티드 및 단백질(protein)과 바꾸어 사용되거나 같은 뜻이다.
본 발명의 일 실시예에서, 상기 펩티드는 다음에서 선택된 아미노산 서열을 포함한다:
CGGGGGGCGGGGCGGGGGGGGGCGGGGGGCC (i)
CLLLLLLCLLLLCLLLLLLLLLCLLLLLLCC (ii)
CLGLGLGCGLGLCLGLGLGLGLCGLGLGLCC (iii)
CRKRKRRCRKRKCKRKRKRKRKCRKRKRKCC (iv)
KKK (v)
KKKKKKK (vi)
RRR (vii)
RRRRRRR (viii)
본 발명의 다른 측면에서, 상기 펩티드는 상기 아미노 서열 (i)에서 (viii) 중에 적어도 하나와 말단 시스테인 잔기들 중 하나 또는 둘 다에 인접한 추가적인 아미노산 잔기를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 실시예에서 도 1의 아미노산 서열에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 상기 펩티드는 일반적으로 합성 펩티드이다. 상기 펩티드는 시험관 내에서 합성이 가능하며, 분리되거나 정화된 펩티드나 그 변형 펩티드일 수 있다. 상기 시험관 내 합성은 예를 들어, 고체 상태의 펩티드 합성 방법(solid phase peptide synthetic method), 효소로 촉매된 펩티드 합성(enzyme catalysed peptide synthesis) 또는 재조합 DNA 기술(recombinant DNA technology)을 사용하여 수행한다.
포유동물 세포에, 원치 않는 독성이 거의 없는 또는 독성이 없는 활성 펩티드를 확인하기 위해서는, 개별 펩티드 또는 펩티드 라이브러리를 만들 수 있고 각각의 개별 펩티드 또는 펩티드 라이브러리에 대한 항균성 활동 및 독성을 검사할 수 있다. 이들 항균성 활동 및 독성 검사들은 항진균성(antifungal), 항박테리아성(antibacterial),항바이러스성(antiviral), 항원생성(antiprotozoal), 항기생충성(anti-parasitic) 활동 및 독성에 대한 것을 포함하고 이것들에 한정되지 않는다.
본 발명의 상기 펩티드들은 예를 들어, 유리산(free acids), 유리 염기들(free bases), 에스테르 및 다른 전구약물(prodrugs), 염류 및 토오토머(tautomers) 등의 다른 형태들로 존재할 수 있으며, 본 발명은 상기 혼합물들의 모든 변형 형태를 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명은 펩티드의 염류 또는 전구약물 또는 본 발명의 펩티드 변형 형태를 포함한다.
본 발명의 상기 펩티드들은 약제학적으로 허용되는 염류 형태로 투여될 수 있다. 약제학적으로 허용된 염류는 종래의 화학적 요법에 의해서 염기성 또는 산성 부분(moiety)을 포함하는 부모 펩티드로부터 합성할 수 있다. 일반적으로, 이러한 염류는 상기 펩티드들의 유리산 또는 염기 형태에, 적절한 염기 또는 산 수용액 또는 유기용제, 또는 상기 염기 또는 산 수용액 및 유기용제의 혼합물에 화학량 적량(stoichiometric amount)을 반응시키는 것에 의제 제조될 수 있다. 일반적으로, 에테르, 에틸아세테이트, 에탄올, 이소프로파놀 또는 아세토니트릴(acetonitrile) 등의 비수성(nonaqueous) 용액이 바람직하다. 적절한 염류의 목록은 Remington's Pharmaceutrical Sciences, 17th ed., Mack Publishing company, Eaton, Pa., US, 1985, p. 1418에 나와있고 그 목록은 본 명세서에 포함된다. 또한 염류의 목록은 Stahl et al, Eds, "Handbook of Pharmaceutical Salts Properties Selection and Use", Verlag Helvetica Chimica Acta and Wiley-VCH, 2002에도 있다.
따라서 본 발명은 상기 기술된 펩티드의 약제학적으로 허용된 염류를 포함하며, 여기서 상기 부모 혼합물은 이것의 산 염류 또는 염기 염류를 만드는 것에 의해서, 예를 들어 무기성 혹은 유기성 산 또는 염기로부터 형성되는 통상적인 무독성 염류 또는 4차 암모늄 염류를 만드는 것에 의해 변형된다. 이런 산을 추가한 염류의 예는 아세테이트(acetate), 아디페이트(adipate), 알지네이트(alginate), 아스파르테이트(aspartate), 벤조에이트(benzoate), 벤젠술폰산(benzenesulfonate), 바이설페이트(bisulfate), 부티레이트(butyrate), 시트레이트(citrate), 캄포레이트(camphorate), 캄포술포네이트(camphorsulfonate), 시클로펜탄프로피오네이트(cyclopentanepropionate), 디글루코산(digluconate), 도데실설페이트(dodecylsulfate), 에탄술포네이트(ethanesulfonate), 푸마레이트(fumarate), 글루코헵타노에이트(glucoheptanoate), 글리세로포스페이트(glycerophosphate), 헤미설페이트(hemisulfate), 헵타노에이트(heptanoate), 헥사모에이트(hexamoate), 하이드로클로라이드(hydrochloride), 하이드로브로마이드(hydrobromide), 하이드로요오드화물( hydroiodide), 2-하이드록시에탄술포네이드(2-hydroxyethanesulfonate), 락테이드(lactate), 말레산염(maleate), 말로네이트(malonate), 메탄술포네이트(methanesulfonate), 2-나프탈렌술포네이트(2-naphthalenesulfonate), 니코티네이트( nicotinate), 옥살레이트(oxalate), 팔모ㅇ에이트(palmoate), 펙티네이트(pectinate), 퍼설페이트(persulfate), 3-페닐프로피오네이트(3-phenylpropionate), 피크레이트(picrate), 피발레이트(pivalate), 프로피오네이트(propionate), 숙시네이트(succinate), 타르타레이트(tartrate), 티오시아네이트(thiocyanate), 토실레이트(tosylate), 그리고 운데카노에이트(undecanoate) 등이다. 염기 염류는 암모늄염, 나트륨 및 칼륨염 등과 같은 알칼리 금속염, 칼슘 및 마그네슘염 등과 같은 알카리성 토류 금속염(alkaline earth metal salts), 디시클로헥실아민염(dicycolohexylamine salts)와 같은 유기염기를 가진 염류, N-메틸-D-글루타민, 그리고 아르기닌, 리신 등과 같은 아미노산을 가진 염류를 포함한다. 또한, 질소 함유 염기류들은 염화, 브롬화 및 요오드화 메틸,에틸,프로필 그리고 부틸 등의 낮은 할로겐화알킬(lower alkyl halides); 디메틸(dimethyl), 디에틸(diethyl), 디부틸(dibutyl) 등의 디알킬 설페이트(dialkyl sulfates); 그리고 디아밀 설페이트(diamyl sulfate), 데실(decyl), 로릴(lauryl), 미리스틸(myristyl), 스테아릴(stearyl)의 염화물(chlorides), 브롬화물(bromides) 및 요오드화물(iodides) 등의 긴 사슬의(long chain) 할로겐화물, 벤질(benzyl) 그리고 펜에틸 브롬화물 같은 아랄킬 할로겐화물(aralkyl halides) 등에 의해 쿼터나이즈(quaternize)될 수 있다.
본 발명의 펩티드 또는 변형 펩티드의 카르복실(carboxyl) 그룹의 염류들은 보통 통용되는 방법인, 펩티드를 하나 이상의 원하는 염기의 펩티드의 등가량 (예, 수산화나트륨(sodium hydroxide)과 같은 수산화금속(metallic hydroxide) 염기; 탄산염나트륨(sodium carbonate) 또는 중탄산염 나트륨(sodium bicarbonate) 등의 탄산염금속(metal carbonate) 또는 중탄산염금속(metal bicarbonate); 또는 트리에틸아민(triethylamine), 디에탄올아민(thiethanolamine) 등과 유사한 아민(amine) 염기 등)과 접촉함으로써 제조할 수 있다.
본 발명의 펩티드 또는 변형 펩티드의 아미노(amino) 그룹의 N-아실(N-acyl) 유도체는 최종 축합(condensation)에서 N-아실 보호 아미노산(N-acyl protected amino acid)을 사용하거나, 보호 또는 비보호 아미노산을 아실레이트화(acylate)함으로써 제조할 수 있다. O-acyl 유도체는 예를 들면, 유리 히드록시 펩티드 또는 펩티드 레진(resin) 등을 아실화 함으로써 제조할 수 있다. 상기 두 가지 아실화(acylation)는 아실할라이드(acyl halides), 안히드라이드(anhydrides), 아실 이미다졸(acyl imidazoles) 등과 같은 표준 아실화 시제를 사용하여 수행할 수 있다.
본 발명은 상기 설명한 펩티드의 활성 약제 종류에 대한 전구약물을 포함하는 데, 여기서, 예를 들어 하나 이상의 기능적 그룹이 보호 또는 유도체화(protected or derivatised) 되지만 생체내에서는 상기 기능적 그룹으로 전환된다. 예컨대, 카르복시산의 에스테르의 경우 생체내에서 유리산으로 전환될 수 있고, 보호 아민류의 경우 유리 아미노 그룹으로 전환될 수 있다. 여기에 쓰인 "전구약물(prodrug)"라는 용어는 특히, 예를 들어, 혈액에서의 가수분해와 같이 생체 조건 내에서, 부모(parent) 구조로 급격히 변환되는 구조를 나타낸다. 이것에 대한 상세한 설명은 T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symphsium Series, Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, Americal Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987; H Bundgaard, ed, Design of Prodrugs, Elsevier, 1985; and Judkins, et al. Synthetic Comminucations, 26(23), 4351-4367(1996) 등에 개시되어 있으며 각각의 내용은 참조로서 본 명세서에 포함된다.
따라서 전구약물은 가역적인 유도체(reversible derivative)로 변환된 기능 그룹을 가진 약물을 포함한다. 일반적으로, 이런 전구약물들은 가수분해를 통해 활성 약물로 변환된다. 그 예로는 다음을 들 수 있다:
기능 그룹(Functional Group) 가역적인 유도체(Reversible derivative)
카르복실산(Carboxylic acid) e.g. 아실옥시알킬 에스테르(acyloxyalkyl esters), 아미드(amides) 등을 포함하는 에스테르류
알콜 e.g. 황산염, 인산염, 카르복실산 에스 테르 등을 포함하는 에스테르류
아민(Amine) 아미드, 카바메이트(carbamates), 이민( imines), 엔아민(enamines)
보론산(Boronic acid) 디올 에스테르(Diol ester)
카르보닐(Carbonyl: 알데히드, 케톤) 이민(Imines), 옥심(oximes), 아세탈/케탈(acetals/ketals), 에놀 에스테르(enol esters), 옥사졸리딘(oxazolidines) 그리고 티아족솔리딘(thiazoxolidines)
전구약물은 또한 산화 반응 또는 환원 반응에 의해 활성 약물로 전환이 가능한 복합물을 포함한다. 그 예로는 다음과 같다:
산화 활성화(Oxidative activation
* N- 그리고 O-디알킬화(N- and O- dealkylation)
* 산화 디아민화(oxidative deamination)
* N-산화 (N-oxidation)
* 에폭시화(epoxidation)
환원 활성화(Reductive activation)
* Azo 환원화
* Sulfoxide 환원화
* Disulfide 환원화
* Bioreductive 알킬화
* Nitro 환원화
전구약물들의 대사성 활성화로는 뉴클레오티드(nucleotide) 활성화, 인산화(phosphorylation) 활성화 및 탈카르복실작용(decarboxyl) 활성화 등이 있다.
보호 그룹의 사용은 'Protective Groups in Organic Chemistry', edited by J W F McOmie, Plenum Press(1973), 및 'Protective Groups in Organic Synthesis', 2nd edition, T W Greene & P G M Wutz, Wiley-Interscience(1991)에 상세히 설명되어 있다.
따라서, 상술한 펩티드들의 보호된 유도체들이 비록 약제학적 활성을 가지지 않을 수도 있으나, 비경구적으로 혹은 경구적으로 투여되어 체내에서 대사되어 약제학적으로 활성이 있는 화합물을 형성할 수 있다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명하다. 따라서 이들 유도체들은 전구약물의 예가 된다. 상술한 화합물들의 모든 전구약물들은 본 발명의 범위에 포함된다.
본 발명의 또 따른 측면에 따르면, 적어도 하나의 펩티드 혹은 둘 이상의 서로 다른 펩티드를 약제학적으로 유효량으로 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
상기 펩티드는 또한 약제학적으로 허용된(pharmaceutically acceptable) 운반체, 부형제 또는 희석제(carrier, excipient or diluent)를 포함한다. 여기에 "약제학적으로 허용된(pharmaceutically acceptable)"이라는 표현은 적당한 유효율(benefit/risk ratio)의 범위에서, 과다하지 않은 독성, 자극, 알러지 반응 또는 다른 문제나 합병증이 없이 사람의 세포 조직 또는 경우에 따라, 동물에 접촉하여 사용하는데 적절한 의학적인 판단 아래의 범위 내에 속하는 복합물, 물질, 합성물, 그리고/또는 도즈(dosage) 형태를 지칭한다.
본 발명의 상기 펩티드는 특히, 예를 들면, 박테리아, 균류(fungi), 이스트, 기생충, 원생류(protozoa) 및 바이러스에 대해 저항하는 항균성 펩티드로써 유용하다. 여기에 쓰인 "항균성 펩티드(antimicrobial peptide)"라는 용어는 항-박테리아성, 항진균성(anti-fungal), 항진균성(anti-mycotic), 항기생충성(anti-parasitic, 항원생성(anti-protozoal), 항바이러스성(anti-viral), 항감염성(anti-infectious), 항감염성(anti-infective) 그리고 또는 살균성(germicidal), 살-조성(algicidal), 살아메바성(amoebicidal), 살미생물성(microbicidal), 살박테리아성(bacterici(o)dal), 살진균성(fungicidal), 살기생충성(parasiticidal), 살원생성(protozoacidal) 성질을 가진 것으로 설명된 펩티드를 포함하나 이에 한정되지 않고, 살미생물성(microbicidal) 그리고/또는 미생물발육저지성(microbistatic) 활동성을 가지는 모든 펩티드를 정의하기 위해 여기에 쓰일 수 있다.
따라서, 본 발명은 약제로 사용하기 위한 본 발명에 따른 펩티드를 더 제공한다. 본 발명의 상기 펩티드들은 생체 내에서 그리고 생체 조건 밖에서 모두 항균성 약제로써 적용될 수 있다.
바람직한 측면에서는, 본 발명은 세균성 감염을 치료하기 위한 약제를 생산할 때, 본 발명에 따른 펩티드를 사용하는 방법을 제공한다.
"세균성 감염(microbial infection)"이라는 용어는 박테리아, 기생충,원생( protozoan), 바이러스성 또는 진균성(fungal) 병원체로 유발되는 감염을 말한다. "병원체(pathogen)"는 일반적으로 병을 유발하는 모든 유기체를 정의한다.
박테리아 병원체는:
Staphylococcus aureus , Staphylococcus epidermidis 등의 Staphylococcus spp. (Staphylococcus 종); Enterococcus faecalis 등의 Enterococcus 종; Streptococcus pyogenes; Listeria 종; Pseudomonas 종; Mycobacterium tuberculosis 등의 Mycobacterium 종; Enterobacter 종; Campylobacter 종; Salmonella 종; Streptococcus 그룹 A 또는 B, Streptococcus pneumoniae 등의 Streptucoccus 종; Helicobacter pylori 등의 Helicobacter 종; Neisseria gonorrhea, Neisseria meningitidis 등의 Neisseria 종; Borrelia burgdorferi ; Shigella flexneri 등의 Shigella 종; Escherichia coli ; Haemophilus influenzae 등의 Haemophilus 종; Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae , Chlamydia psittaci 등의 Chlamydia 종; Francisella tularensis ; Bacillus anthracis 등의 Bacillus 종; Clostridium botulinum 등의 Clostridia 종; Yersinia pestis 등의 Yersinia 종; Treponema 종; Burkholderiamallei 및 B pseudomallei 등의 Burkholderia 종으로 이루어진 그룹에서 선택된 박테리아 종에서 유도될 수 있다.
바이러스성 병원체는 다음으로 구성된 그룹에서 선택된 바이러스에서 유도될 수 있다:
인간 면역결핍증 바이러스(HIV 1 & 2); 인간 T-세포 혈액암(Leukaemia) 바이러스(HTLV 1 & 2); 이볼라 바이러스(Evola virus); 인간 유두종(papilloma) 바이러스(예, HPV-2, HPV-5, HPV-8, HPV-16, HPV-18, HPV-31, HPV-33, HPV-52, HPV-54 및 HPV-56); 파포바 바이러스(papovavirus); 리노 바이러스(rhinovirus); 소아마비 바이러스(poliovirus); 허피스 바이러스(herpesvirus); 아데노 바이러스(adenovirus); 엡스타인 바르 바이러스(Epstein Barr virus); 인플루엔자 바이러스(influenza virus); 헤파티티스 B 및 C 바이러스(hepatitis B and C virus), 바리올라 바이러스(Variola virus), 로타 바이러스(rotavirus) 또는 사스 코로나 바이러스(SARS coronavirus).
기생충성 병원체는, Trypanosoma cruzi , Trypansosoma brucei 등의 Trypanosoma 종, Leishmania 종., Giardia 종., Trichomonas 종, Entamoeba 종, Naegleria 종, Acanthamoeba 종., Schistosoma 종, Plasmodium 종, Crytosporidium 종, Isospora 종, Balantidium 종, Loa Loa, Ascaris lumbricoides , Dirofilaria immitis, Toxoplasma gondii 등의 Toxoplasma 종을 포함하는 그룹에서 선택될 수 있다.
진균성 병원체는 Candida spp., (e.g. C. albicans ), Epidermophyton spp., Exophiala spp., Microsporum spp., Trichophyton spp., (e.g T. rubrum and T. interdigitale ), Tinea spp., Aspergillus spp., Blastomyces spp., Blastoschizomyces spp., Coccidioides spp., Cryptococcus spp., Histoplasma spp., Paracoccidiomyces spp., Sporotrix spp., Absidia spp., C ladophialophora spp., Fonsecaea spp., Phialophora spp., Lacazia spp., Arthrographis spp., Acremonium spp., Actinomadura spp., Apophysomyces spp., Emmonsia spp., Basidiobolus spp., Beauveria spp., Chrysosporium spp., Conidiobolus spp., Cunninghamella spp., Fusarium spp., Geotrichum spp., Graphium spp., Leptosphaeria spp., Malassezia spp., Mucor spp., Neotestudina spp., Nocardia spp., Nocardiopsis spp., Paecilomyces spp., Phoma spp., Piedraia spp., Pneumocystis spp., Pseudallescheria spp., Pyrenochaeta spp., Rhizomucor spp., Rhizopus spp., Rhodotorula spp., Saccharomyces spp., Scedosporium spp., Scopulariopsis spp., Sporobolomyces spp., Syncephalastrum spp., Trichoderma spp., Trichosporon spp., Ulocladium spp., Ustilago spp., Verticillium spp., Wangiella spp. 등의 속(genus)인 진균성 병원체일 수 있다.
본 발명에 따른 펩티드에 의해서 치료가능한 미생물성 감염은 표 1에 나타난 것 같은 사람에서 발견되는 미생물성, 진균성, 기생충성, 외피보유 바이러스성 병원체로부터 발생한 것일 수 있다.
따라서 본 발명은 미생물 감염이 전신성, 국소성, 피하성, 피부성 또는 점막성 진균성 감염일 때 미생물 감염을 치료하기 위해서 의약의 제조에 본 발명에 따른 펩티드를 사용하는 것을 제공한다.
진균성 감염(Fungal infection)은 감염이 깊고 내부 기관에 영향을 미치거나 또는 감염이 혈액을 매개로 한다는 의미에서 전신성 또는 감염은 얕고 피부에서 일어난다는 의미에서 국소성(피부성:dermatophytic)으로 분류될 수 있다. 추가적으로, 이스트(효모) 감염은 신체의 점막에 영향을 미칠 수 있다. 이스트 감염은 또한 전신성(예, 칸디다혈증(candidaemia) 및 기타 치명적인 질환)일 수 있다. 피부에서의 진균 감염(Fungal infection)은 보통 크림이나 연고(국소적 항진균성 약물)로 치료한다. 그러나, 크림이나 연고로 치료되지 않는 전신성 감염, 효모 감염 또는 국소적 감염은 전신성 항진균성 약물(경구 또는 정맥내(IV))로 치료가 요구될 수도 있다. 이런 약물들은 피부에 감염되는 예를 들어, 백선(tinea; ringworm), 또는 후두나 질이나 신체의 다른 부분에 발생할 수 있는 칸디다증(아구창; 효모 감염)과 같은 일반적인 진균성 감염을 치료하기 위해 사용된다. 전신성 항진균성 약물들은 또한 폐와 다른 기관들에 감염되는 히스토플라즈마증, 분아균증(blastomycosis) 및 아스페루길루증(aspergillosis) 등과 같은 다른 심한 진균성 감염의 치료에 사용된다. 골수 또는 장기이식 환자와 HIV-에이즈 환자 등과 같이 면역 시스템이 약화된 사람에게서 진균성 감염을 예방 또는 치료하기 위해 사용되기도 한다.
국소성 또는 피부진균성 감염은 일반적으로 치명적이거나 심각한 병은 아니지만 널리 퍼져있고 치료하기에 비싸므로 경제성 면에서 중요하다. 국소성 또는 얕은 진균성 감염은 피부, 섬유판(lamina), 각질층, 손톱, 발톱 및 모발에서의 감염을 포함한다. 피부 감염은 피부, 손톱 및 발톱의 감염을 말한다.
본 발명의 바람직한 측면에서는, 상기 진균성 감염은 손발톱진균증(onychomycosis)을 말한다. 손발톱진균증은 Trichophyton interdigitale 또는 Trichophyton rubrum 등과 같은 Trichophyton spp.의 속(genus)에 속하고 여기에 한정되지 않는 진균에 의해 감염될 수 있다.
상기 "손발톱진균증(onychomycosis)"라는 용어는 손톱발톱진균증의 원위부 측면부의 손발톱밑 유형, 표제성 백색(superficial white) 유형, 근위부 백색 손발톱밑 유형(proximal white subungual), 2차 이영양성(secondary dystrophic) 유형, 1차 영양성(primary dystrophic) 유형, 엔도닉스(endonyx)유형, 칸디다성(예, 손발톱박리증 및 만성 점액 점막 증상(chronic mucocutaneous disease)) 유형들을 포함하고 이들에 한정되지 않는다. 손발톱균증은 팔과 다리의 급성 박테리아성 봉와염(acute bacterial cellulitis)과 다른 2차 박테리아성 감염 등의 더 심각한 임상적 합병증의 중대한 위험 요소라는 것이 드러났었다. 따라서, 본 발명은 이러한 감염들의 치료를 포함한다.
상기 본 발명의 펩티드들은 폭넓은 병원체 유기체들의 효능 있는 항균성 펩티드들이다. 그러나, 상기 본 발명의 펩티드들은, 낭성 섬유종(cystic fibrosis) 및 소화기관, 비뇨생식기계 또는 호흡기관의 감염 등의 점막 감염과 관련된 다른 질환을 포함하고 이들에 한정되지 않는 다른 질환들의 치료에도 또한 유용할 수 있다.
상기 본 발명의 펩티드들은, 특히 베인 피부 상처 또는 화상 및 이들과 관련된 질환 등의 상처, 궤양 및 외상의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.
"치료(treatment)"라는 용어는, 환자의 질환 개선 또는 질병 진행의 지체를 포함하여, (감염성) 질병이 있는 환자에게 이익을 주는 상기 설명된 펩티드들의 영향에 관련된 것이다.
여기에서 쓰인 " 상처의 치료(treatment of a wound)"라는 용어는 상처 회복 그리고 이와 관련하여 조직의 회복을 진전시키거나, 보강하거나 또는 가속화하는 질환 및 치료요법을 포함하고, 또한 성형 수술 및 장기 이식 등과 같은 수술 후의 흉터, 화상, 건선, 조직 재형성의 가속화 등을 포함한다.
그러므로, 본 발명의 또 다른 측면은, 본 발명의 펩티드를 바르거나 접착한 기판을 제공한다. 바람직하게는, 상기 기판은 상처에 적용하거나 또는 상처 부위에 전달하기에 적당하다. 또한 바람직하게는, 상기 기판은 항균 효과를 달성하기 위해서, 상기 기판에서 상처 기저부(wound bed)로 본 발명의 펩티드들을 운반할 수 있도록 한다. 상기 기판은 상처 드레싱(wound dressing)과 같은 드레싱일 수 있다. 상기 드레싱은 천으로된 물질 또는 콜라겐과 유사한 물질을 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 펩티드는 소독제로써 또는 소독제에 적용할 수도 있다. 이런 맥락에서, 본 발명의 상기 펩티드 또는 의약 조성물들은, 치료할 표면에 단독으로 또는 다른 소독제와 함께 적용이 가능하다. 여기에 쓰인 "치료할 표면(surface to be treated)"은 여기에 정의된 기판 또는 의약 기구일 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 펩티드의 치료법 상 유효량을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 어떤 대상에 세균성 감염을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
본 발명의 바람직한 방법에서, 미생물성 감염은 진균성 감염이다. 본 발명의 상기 방법에서 상기 펩티드는 상기 대상의 피부 또는 손톱,발톱에 적용이 가능하다.
포유류, 조류 및 다른 동물들은 여기에 설명된 펩티드들, 조성물 또는 방법으로 치료할 수 있다. 이런 포유류와 조류는 사람, 개, 고양이 및 말, 소, 양, 염소, 닭, 터키 등과 같은 가축을 포함한다. 더 나아가, 식물도 또한 본 발명의 상기 펩티드들, 조성물 또는 방법으로 치료가 가능하다.
대상자가 동물일 경우, 본 발명의 방법은 발굽, 동물의 손, 발톱(claws) 그리고 동물의 수족(trotters)을 포함하고 이에 한정되지 않는 손, 발톱과 유사한 것에 적용될 수 있다.
상기 본 발명의 방법은 펩티드 치료와 더불어, 손, 발톱에 펩티드 흡수를 가속시키는 치료법을 포함할 수 있다. 이것은 화학적 또는 물리적 수단들을 통하여 수행하는 것이 가능하다. 손,발톱 에칭(nail etching) 또는 손, 발톱의 등쪽 층을 연마하는(filing of the dorsal layer) 등의 물리적 치료는 본 발명의 펩티드들의 흡수를 가속화시킬 수 있다. 본 발명의 펩티드들의 손,발톱 흡수의 화학적 증진은 손톱판 케라틴질 내의 물리적 또는 화학적 결합을 파괴함으로써 도달할 수 있다. 요소(urea) 및 살리실산(salicylic acid) 을 포함하고 이들에 한정되지 않는 손,발톱 연화제는 손,발톱의 수분을 증가시켜 손,발톱의 밀도를 감소시킴으로써 본 발명의 펩티드들의 흡수를 증진시킨다. 황화수소(sulfhydryl) 그룹을 함유하는 복합물은 손,발톱 케라틴층의 이황화물(disulphide) 결합을 분열시켜 약물을 불안정화하고 침투를 증가시키도록 유도할 수 있다. 아세틸시스테인(acetylcysteine) 및 머캅토에탄올(mercaptoethanol) 유도체를 포함하고 이들에 한정되지 않는 혼합물을 상기 펩티들과 혼합하여 사용하는 것이 가능하다. 본 발명의 상기 펩티드들과 혼합하여 사용이 가능한 다른 알려진 손/발톱 침투 전달물질 부형제/보조제는 메틸설포닐메탄(methylsulfonylmethane), 요소(urea), 폴리에틸렌 글리콜, N-(-2-머캅토프로피오닐)글리신, 디메틸설폰(dimethylsulfone) 및 2-n-노닐-1,3-디옥솔란(2-n-nonyl-1,3-dioxolane)등을 포함한다.
다른 측면에서는, 본 발명은 본 발명에 따라 펩티드 또는 기판의 치료법 상으로 유효량을 상처에 적용하는 것을 포함하여, 어떤 대상의 외상을 치료하는 방법을 제공한다.
원하는 효과를 얻기 위하여, 상기 펩티드, 펩티드의 변형 또는 펩티드의 혼합물은, 1 도즈 또는 분할한 도즈(예, 적어도 약 0.01mg/kg에서 약 500~750 mg/kg, 적어도 약 0.01 mg/kg 에서 약 300~500 mg/kg, 적어도 0.1 mg/kg에서 적어도 100~300 mg/kg 또는 적어도 몸무게의 약 1mg/kg 에서 약 50~100 mg/kg 또는 적어도 몸무게의 약 1mg/kg에서 약 20mg/kg 등)로 투여할 수 있다. 하지만 다른 도즈들도 좋은 결과를 가져올 수 있다. 선택한 펩티드의 종류 그리고 그 임상 효과, 병, 몸무게, 신체적 조건, 건강 상태, 포유동물의 나이, 예방이 목적인지 치료가 목적인지에 따라, 그리고 펩티드가 화학적으로 변형된 물질인가 등의 조건들을 포함하고 이들에 한정되지 않는 여러 가지 요소에 따라 투여량은 달라질 수 있다. 이런 요소들은 임상 실험에서 경험적인 데이터를 조사하고 예비임상적인 동물 모델 결과 및 다른 이 기술 분야에서 가능한 다른 테스트 시스템을 조사하는 임상실험자에 의해 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 치료제의 투여는 1 도즈, 복수의 도즈, 지속적인 또는 간헐적인 규칙으로, 투여자의 생리적 조건, 투여의 목적이 치료인지 또는 예방인지, 그리고 전문가에게 알려진 다른 요소들에 따라 결정된다. 본 발명의 펩티드들은 예정된 시간에 걸쳐 지속적으로 또는 일정 간격의 여러 번의 도즈로 투여가 가능하다. 부분적 그리고 전신적인 투여를 적절히 결정한다.
조성물을 조제하는 것은 펩티드들은 합성하거나 또는 다른 방법으로 얻는데, 필요에 따라 정제한 후, 냉동건조 및 안정화한다. 상기 펩티드는 적절한 농도로 조절하고 필요에 따라 다른 약제들과 혼합한다. 단위 도즈에 포함된 선택된 펩티드의 절대 무게는 매우 다양하게 변할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 적어도 하나의 펩티드의 약 0.01에서 약 2g 또는 약 0.01에서 약 500mg, 또는 특정한 세포 타입에 맞는 복수의 펩티드들을 투여할 수 있다. 또는 선택적으로, 단위 도즈는 약 0.01g에서 약 50g, 약 0.01g에서 약 35g, 약 0.1g에서 약 25g, 약 0.5g에서 12g, 약 0.5g에서 약 8g, 약 0.5g에서 약 4g 또는 약 0.5g에서 약 2g 사이에서 가변적이다.
본 발명의 1일 도즈 역시 가변적이다. 이러한 1일 도즈는, 예를 들어, 약 0.001g/일 에서 약 100 또는 50 g/일, 약 0.1g/일에서 약 25g/일, 약 0.1g/일에서 약 12g/일, 약 0.1g/일에서 약 2g/일, 약 0.5g/일에서 약 8g/일, 약 0.5g/일에서 약 4g/일, 약 0.5g/일에서 약 2g/일, 그리고 약 0.5g/일에서 약 1g/일 사이로 정할 수 있다.
그러므로, 한 가지 이상의 적절한 단위 도즈는, 경구, 비경구(피하, 혈관 내, 근육 내 및 복막 내를 포함하는), 직장 내, 피부, 경피(transdermal), 흉관 내, 폐 내(intrapulmonary) 그리고 비강 내(호흡기) 경로 등을 포함하는 다양한 경로들을 통해 투여할 수 있다. 상기 치료용 펩티드들은 또한 지질 제형(lipid formulation)으로 또는 지속방출을 위해서 제형화될 수 있다(예, 마이크로캡슐화(microcapsulation), WO 94/07529, 및 US Patent No. 4,962,091 참조). 상기 제형화(formulation)는 때에 따라, 분리된 단위 도즈 형태로 제공하거나 제약 분야에 널리 알려진 방법으로 조제할 수 있다. 이런 방법들은 액체 운반체, 고체 매트릭스, 반-고체 운반체, 세밀하게 분할된 고체 운반체 또는 이들의 혼합한 형태를 상기 치료제와 혼합하는 단계 그리고 그 후에, 필요에 따라, 원하는 운반 시스템으로 약품을 도입하거나 모양을 만드는 단계들을 포함한다.
본 발명의 상기 치료용 펩티드(therapeutic peptides)는 경구용(oral administration)으로 제조되었을 때, 일반적으로 약학 제제(pharmaceutical formulation) 또는 단위 투약 형태(unit dosage form)로 형성하기 위해, 약제학적으로 허용된 운반체(carrier), 희석제(diluent) 또는 첨가제(excipient)와 결합된다. 경구용으로, 상기 펩티드는 가루(powder), 과립형(granular formation), 용액, 현탁액(suspension), 에멀젼(emulsion) 또는 자연적 또는 합성 폴리머 또는 츄잉 검으로부터 활성 성분(active ingredients)의 섭취를 위한 수지로 존재할 수 있다. 상기 활성 펩티드는 또한 환약(bolus), 연약(electuary) 또는 페이스트(paste)로 존재할 수 있다. 본 발명의 경구 치료용 펩티드는 또한 지속적인 방출(sustained release)을 위해 제조되었다, 예컨대, 상기 펩티드는 코팅될 수 있고, 미세 캡슐화(micro-encapsulated), 또는 지속적인 전달 소자(sustained delivery device) 내에 있을 수 있다. 상기 제제에 있어서, 전체 활성 성분은 제형의 무게에 대해 0.1 내지 99.9%일 수 있다.
본 발명의 치료 펩티드를 포함하는 약학 제제는 잘 알려지고 쉽게 이용가능한 성분들을 이용하여 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진자에 의해 제조될 수 있다. 예컨대, 상기 펩티드는 통상의 첨가제, 희석제 또는 운반체를 이용하여 제조될 수 있고, 테블릿(tablets), 캡슐(capsules), 용액(solutions), 현탁액(suspensions), 파우더(powders), 에어로졸(aerosols) 및 이와 같은 형태일 수 있다. 상기 제형에 타당한 첨가제, 희석제 및 운반체의 예들은 녹말(starch), 셀룰로오스(cellulose), 당(sugars), 마니톨(mannitol) 및 규산 유도체(silicic derivatives)와 같은 희석제(extenders) 및 필터 뿐만 아니라, 버퍼제를 포함한다. 결합제(Binding agents)는 또한 포함될 수 있다. 상기 결합제는 예컨대, 카르복시메틸 셀룰로오스(carboxymethyl cellulose), 하이드록시메틸 셀룰로오스(hydroxymethy lcellulose), 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스(hydroxypropyl methylcellulose) 및 다른 셀룰로오스 유도체 예컨대, 알지네이트(alginates), 젤라틴(gelatine), 및 폴리비닐-피롤리돈(polyvinyl-pyrrolidone)이다. 수분제(moisturizing agents)는 포함될 수 있다. 예컨대, 상기 수분제는 글리세롤(glycerol), 칼슘 카보네이트와 같은 분해제(disintegrating agents) 및 소디움 바이카보네이트이다. 파라핀과 같은 용해 지연제(Agents for retarding dissolution)는 또한 포함될 수 있다. 4가 암모늄 화합물(quaternary ammonium compounds)와 같은 재흡수 가속제(Resorption accelerators)가 포함될 수 있다. 세틸 알코올(cetyl alcohol) 및 글리세롤 모노스테레이트(glycerol monostearate)와 같은 표면 활성제가 포함될 수 있다. 카올린(kaolin) 및 벤토나이트(bentonite)와 같은 흡착 운반체(Adsorptive carriers)가 포함될 수 있다. 활석(talc), 칼슘(calcium) 및 마그네슘 스테레이트(magnesium stearate) 및 고체 폴리에틸 글리콜(solid polyethyl glycols)과 같은 윤활제(Lubricants)가 포함될 수 있다. 보전제(Preservatives)가 또한 부가될 수 있다. 본 발명의 상기 조성물은 또한 셀룰로오스 및/또는 셀룰로오스 유도체와 같은 농축재(thickening agents)를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 또한 크산탄(xanthan) 검, 구아(guar)검 또는 카보 검(carbo gum) 또는 검 아라빅(gum arabic) 또는 대신에 폴리에틸렌 글리콜, 벤톤(bentones) 및 몬토릴로나이트(montmorillonites) 및 이와 같은 검을 포함할 수 있다.
예컨대, 본 발명의 펩티드를 포함하는 테블릿 또는 캐플릿(caplets)은 칼슘 카보네이트, 마그네슘 옥사이드 및 마그네슘 카보네이트와 같은 버퍼링제(buffering agents)를 포함할 수 있다. 적당한 버퍼링제는 또한 아세틱산염(acetic acid in a salt), 시트릭산염(citric acid in a salt), 보론산염(boric acid in a salt) 및 인산염(phosphoric acid in a salt)을 포함할 수 있다. 캐플릿 및 테블릿은 또한 셀룰로오스, 사전 겔화한 녹말(pregelatinized starch), 실리콘 다이옥사이드(silicon dioxide), 하이드록시 프로필 메틸 셀룰로오스(hydroxyl propyl methyl cellulose), 마그네슘 스테레이트(magnesium stearate), 미세결정 셀룰로오스(microcrystalline cellulose), 녹말(starch), 활석(talc), 티타늄 다이옥사이드, 벤조산, 시트릭산, 옥수수 녹말, 미네랄 오일(mineral oil), 폴리프로필렌 글리콜, 소디움 포스페이트(sodium phosphate), 징크 스테레이트(zinc stearate) 및 이와 유사한 비활성 성분을 포함할 수 있다. 적어도 본 발명의 하나의 펩티드를 포함하는 단단하거나 부드러운 젤라틴 캡슐은 폴리에틸렌 글리콜(PEGs) 및 식물성 기름(vegetable oil)과 같은 액상 운송체(liquid vehicles) 뿐만 아니라, 젤라틴, 미세결정 셀룰로오스, 소디움 라우릴 설페이트(sodium lauryl sulphate), 녹말, 활석 및 티타늄 다이옥사이드 및 이와 유사한 비활성 성분을 포함할 수 있다. 더욱이, 본 발명의 하나 또는 그 이상의 펩티드를 포함하는 테블릿 또는 창자용-코팅 캐플릿(enteric-coated caplets)은 위에서의 분해에 저항할 수 있도록 디자인되었고, 중성 내지 십이지장의 알칼리 환경에서 용해되도록 디자인되었다.
예컨대 근육 내의(intramuscular) 경로, 피하(subcutaneous) 경로, 복강내의(intraperitoneal) 경로 또는 정맥내의(intravenous) 경로에 의한 비경구 투여에 적당한 용액으로써, 또는 경구투여에 편리한 용액 또는 엘릭시르(elixirs)로써 본 발명의 상기 치료용 펩티드는 또한 제조될 수 있다. 본 발명의 치료용 펩티드의 상기 약학 제제는 또한 수상(aqueous) 또는 무수 용액(anhydrous solution) 또는 분산형태일 수 있고 또는 선택적으로 에멀젼 또는 현탁액 또는 연고(salve) 형태일 수 있다.
따라서, 상기 치료용 펩티드는 비경구용(예컨대, 대량 투여(bolus injection) 또는 지속적인 주입(continuous infusion) 같은 주사)으로 제조될 수 있고, 앰플(ampules), 미리 채워진 주사(pre-filled syringes), 소량 주입 용기(small volume infusion containers)의 단위 투약 형태이거나, 다중-도즈 용기( multi-dose containers)일 수 있다. 앞서 서술한 바와 같이, 보전제가 용량 제형(dosage form)의 저장수명(shelve life)를 유지하도록 부가될 수 있다. 상기 활성 펩티드 및 다른 성분들은 지성(oily) 또는 수성 운반체에서 현탁액, 용액 또는 에멀젼을 형성할 수 있고, 현탁제(suspending agents), 안정제(stabilizing agents) 또는/및 분산제(dispersing agents)와 같은 제형제(formulatory agents)를 포함할 수 있다. 선택적으로, 상기 활성 펩티드 및 다른 성분들은 예컨대 사용전에 멸균되고, 발열원이 없는 물(pyrogen-free water)과 같은 적당한 운반체와의 구성을 위해서 용액으로부터 동결건조(lyophilization)에 의해서 또는 멸균 고체(sterile solid)의 무균성 분리에 의해 얻어진 파우더형 일 수 있다.
상기 제형들은 약학적으로 허용된 운반체, 운송체 및 잘 알려진 보조약을 포함할 수 있다. 예컨대, 생물학적 견지에서 타당한 아세톤(acetone), 아세트산(acetic acid), 에탄올(ethanol), 이소프로필 알코올(isopropyl alcohol), 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulphoxide), "Dowanol"이라는 이름하에 판매되는 생산품, 폴리글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 글리콜 에스테르(glycol ethers), 짧은 체인 산(short-chain acids)의 C1-C4 알킬 에스테르, 에틸 또는 이소프로필 락테이트(isopropyl lactate), "Miglyol"이라고 명명되는 생산품과 같은 지방산(fatty acid) 트리글리세라이드(triglycerides), 이소프로필 미트리세이트(isopropyl mytrisate), 동물성, 미네랄 및 식물성 기름 및 폴리실록산과 같은 용매로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 유기 용매를 물에 부가하여 용액을 제조하는 것이 가능하다.
바람직하게는, 본 발명의 치료용 펩티드의 약학 제형은 또한 상기 펩티드를 포함하는 희석제 또는 용매 형태일 수 있다. 용매 또는 희석제는 산 용액(acid solutions), 디메틸설폰(dimethylsulphone), N-(2-머캡토프로피오닐) 글리신(N-(2-mercaptopropionyl) glycine), 2-n-노닐-1,3-다이옥소란(2-n-nonyl-1,3-dioxolane) 및 에틸 알코올(ethyl alcohol)을 포함할 수 있다. 바람직하게, 상기 용매/희석제는 산성 용매, 예컨대, 아세트산, 시트릭산, 보론산, 젖산, 프로피온산, 인산, 벤조산, 낙산(butyric acid), 말산, 말론산, 옥살산, 호박산 또는 타르타르산일 수 있다.
더 바람직하게, 상기 용매는 아세트산 용액이다. 상기 용매는, 예컨대, 아세트산 용액의 경우, 예컨대 아세트산 1%, 0.5%, 0.25%, 0.1%, 0.05% 또는 0.01% 보다 적은 농도로 조성물 내에 있을 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 미생물 감염(microbial infection), 특히, 진균성 감염(fungal infection)을 치료하는 약제의 생산에서의 산의 사용이 제공된다. 상기 진균성 감염은 손발톱진균증(onychomycosis)일 수 있다. 손발톱 진균증(Onychomycosis)은 진균류(fungus)로 부터 유발될 수 있으나, Trichophyton spp.속에 제한되지는 않는다. 예컨대, 상기 진균류(fungus)는 Trichophyton interdigitale 또는 Trichophyton rubrum일 수 있다. 상기 산은 앞서 설명된바 있다. 바람직하게는 상기 산은 아세트산이다. 바람직하게는, 여전히 상기 산은 예컨대 아세트산 1%, 0.5%, 0.25%, 0.1%, 0.05% 또는 0.01% 보다 적은 농도의 용액으로 제공될 수 있다. 전형적으로 상기 약제는 예컨대 손발톱 치료를 위한 국소 투여(topical administration)로 적용될 수 있다.
이하, "활성제(active agent)"라는 용어는 본 발명에 따른 단일 펩티드 또는 여기서 묘사되는 펩티드의 결합을 포함한다. 상기 "활성제"라는 용어는 또한 여기서 묘사된 바와 같이 약학적으로 유료량의 산을 포함할 수 있다. 상기 활성제는 동시에, 순차적으로 또는 분리되어 투여될 수 있다. 일반적으로 국소 투여가 바람직하다.
상기 활성제는 상승작용에 효과적인 양으로 투여될 수 있다. 그러므로 본 발명은 미생물 감염 치료에 있어서, 상기 활성제의 동시의(simultaneous), 분리된(separate) 또는 순차적인(sequential) 투여를 위한 약제와 같은 생산품의 생산을 위해, 활성제, 예컨대 본 발명에 따른 펩티드의, 상승작용에 효과적인 양 및 여기서 묘사된 산의 약학적으로 유효량의 사용을 포함한다.
만약 필요하다면, 산화 방지제(antioxidants), 계면활성제(surfactants), 다른 보전제, 막 형성제(film-forming), 각질박리제(keratolytic) 또는 여드름집용해제(comedolytic agents), 방향물질(perfumes), 향료(flavorings) 및 착색제(colourings)로부터 선택된 보조제(adjuvant)를 부가하는 것이 가능하다. t-부틸하이드로퀴논(t-butylhydroquinone), 부틸레이티드 하이드록시아니졸(butylated hydroxyanisole), 부틸레이티드 하이드록시톨루엔(butylated hydroxytoluene) 및 α-토코페롤(α-tocopherol)(유도체 포함)와 같은 산화 방지제(Antioxidants)가 부가될 수 있다.
또한 본 발명의 하나 또는 그 이상의 펩티드 및 하나 또는 그 이상의 다른 항세균제 또는 항진균제를 포함하는 조합 산물도 제공한다. 예컨대, 상기 항세균제 또는 항진균제는 암포테리신 B(amphotericin B), 암포테리신 B 지질 복합물(amphotericin B lipid complex)(ABCD), 리포솜 암포테리신 B(liposomal amphotericin B)(L-AMB), 및 리포솜 니스타틴(liposomal nystatin)과 같은 폴리엔(polyenes), 보리코나졸(voriconazole), 플루코나졸(fluconazole), 케토코나졸(ketoconazole), 이트라코나졸(itraconazole), 포자코나졸(pozaconazole) 및 그 유사물과 같은 아졸(azoles) 및 트리아졸(triazoles); 카스포펀진(caspofungin), 미카펀진(micafungin (FK463)), 및 V-에치노칸딘(V-echinocandin (LY303366))과 같은 글루칸 합성효소 억제제(glucan synthase inhibitors); 그리세로풀빈(griseofulvin); 터비나핀(terbinafine)과 같은 아릴아민(allylamines); 플루시토신(flucytosine) 또는 여기서 설명된 다른 것을 포함하는 다른 항진균제(antifungal agents)일 수 있다.
게다가, 상기 펩티드가 시클로피록스 올라민(ciclopirox olamine), 할로프로긴(haloprogin), 톨나프테이트(tolnaftate), 운데실네이트(undecylenate), 토피컬 니사틴(topical nysatin), 아모롤핀(amorolfine), 부티나핀(butenafine), 나프티핀(naftifine), 터비나프틴(terbinafine) 및 다른 국소용제와 같은 국소 항진균제와 결합할 수 있다.
부가적으로, 상기 펩티드는 지속적인 방출 투여 형태 및 이와 같은 제형에 잘 어울린다. 상기 제형는 예컨대, 가능한 단위 시간 동안 장내(intestinal) 또는 기도(respiratory tract)의 특정 부위에서 상기 활성 펩티드를 방출하게 할 수 있다. 예컨대, 폴리락티드-클라이콜레이트(polylactide-glycolates), 리포좀(liposomes), 마이크로에멀젼(microemulsions), 마이크로입자(microparticles), 나노입자(nanoparticles), 또는 왁스(waxes)와 같은 폴리머 물질(polymeric substances)로부터, 코팅제(Coatings), 외피(envelopes), 및 방어 메트릭스(protective matrices)가 만들어질 수 있다. 상기 코팅제(coatings), 외피(envelopes), 및 방어 메트릭스(protective matrices)는 내재하는 소자, 예컨대, 스텐트(stents), 카테터(catheters), 복막 투석 튜빙(peritoneal dialysis tubing), 배수 소자(draining devices) 및 이와 같은 것을 코팅하는데 유용하다.
국소 투여를 위해, 상기 활성제는 목적 분야에 직접적인 적용을 위해 기술 분야에서 알려진 것으로써 제형화될 수 있다. 국소용 적용을 위해 주로 조절된 형태는 예컨대, 크림, 밀크, 젤, 파우더, 분산액 또는 마이크로에멀젼, 보다 덜하거나 더 농축된(thickened) 로션, 함침 패드(impregnated pads), 연고(ointments) 또는 스틱(sticks), 에어로졸 제제(aerosol formulations) (e.g. 스프레이(sprays) 또는 거품(foams)), 비누(soaps), 세제(detergents), 비누 로숀(lotions) 또는 비누 케익 형태이다. 상기 목적을 위한 다른 통상적인 형태는 상처 드레싱, 코팅 밴드(coated bandages) 또는 다른 폴리머 커버링, 연고(ointments), 크림(creams), 로숀(lotions), 페이스트(pastes), 젤리(jellies), 스프레이(sprays), 및 에어로졸(aerosols)을 포함한다. 따라서, 본 발명의 상기 치료용 펩티드는 피부 투여(dermal administration)를 위해 패치(patches) 또는 밴드(bandages)로 전달될 수 있다. 선택적으로, 상기 펩티드는 폴리아크릴레이트(polyacrylate) 또는 아크릴레이트/비닐 아세테이트 코폴리머(acrylate/vinyl acetate copolymer)와 같은 접착성의 폴리머의 일부이도록 제조될 수 있다. 장기 적용(long-term applications)을 위해, 미소공성(microporous) 및/또는 통기성이 있는 지지 라미네이트(breathable backing laminates)를 사용하는 것이 요구되고, 피부의 수화(hydration) 또는 해리(maceration)가 최소화될 수 있다. 상기 지지층(backing layer)은 원하는 방어적이고 지지하는 기능을 제공하도록 적당한 두께를 갖을 수 있다. 적당한 두께가 일반적으로 약 10 내지 200 마이크론으로 형성될 것이다.
국소 투여는 손발톱 코팅 또는 래커(lacquer)형태일 수 있다. 예컨대, 상기 항진균(antifungal) 펩티드는 국소 투여를 위해 용액 내에서 제조될 수 있다. 상기 용액은 이소프로필 알코올내의 폴리[메틸비닐 에테르/말레 산](poly[methylvinyl ether/maleic acid])의 부틸 모노에스테르, 에틸 아세테이트(NF) 및 이소프로필 알코올(USP)을 포함할 수 있다.
국소 투여용 약제학적 제형은 예컨대, 약 0.001mg/ml 내지 100mg/ml, 예컨대 약 0.1mg/ml 내지 10mg/ml,의 하나 또는 그 이상의 본 발명의 펩티드를 함유하는 생리학적으로 허용된 완충 식염 용액(buffered saline solution)을 치료할 질병 또는 처방을 위해 포함할 수 있다.
예컨대, 적당한 농축제 및/또는 겔화제(gelling agents)를 부가하며 수성 또는 지성 베이스에서 연고(Ointments) 및 크림(creams)이 제조될 수 있다. 로션은 수성 또는 지성 베이스에서 제조될 수 있고 일반적으로 하나 또는 그 이상의 유화제(emulsifying agents), 안정제(stabilizing agents), 분산제(dispersing agents), 현탁제(suspending agents), 농축제(thickening agents), 또는 착색제(coloring agents)를 포함할 수 있다. 상기 활성 펩티드는 또한 예컨대, 미국특허 4,140,122; 4,383,529; 또는 4,051,842에 개시된 전리요법(iontophoresis)에 의해 전달될 수 있다. 국소 제형 내에서 본 발명의 상기 치료제의 무게%는 다양한 요소에 의존할 수 있으나, 일반적으로 제제의 전체 무게의 0.01% 내지 95%일 것이고, 전형적으로 0.1-85%일 것이다.
점안액 또는 점비약과 같은 점약(drops)은 수성 또는 비수성 베이스에서 하나 또는 그 이상의 치료용 펩티드로 제조될 수 있고 또한 하나 또는 그 이상의 분산제, 안정제 또는 현탁제를 포함할 수 있다. 액체 스프레이는 또한 펌프되거나 편리하게 압축된 팩으로부터 전달될 수 있다. 점약(drops)은 단순한 점안 용기(eye dropper-capped bottle), 방울로 떨어뜨리는(drop-wise) 플라스틱 용기 또는 특별히 만들어진 폐쇄 용기로 전달될 수 있다.
상기 치료용 펩티드는 입 또는 목 내에서의 경구 투여를 위해 제조될 수 있다. 예컨대, 활성 성분들은 대개 자당(sucrose) 및 아카시아 또는 트래거캔스(tragacanth)인 향료 베이스(flavoured base)를 포함하는 정제(lozenge); 젤라틴 및 글리세린 또는 자당(sucrose) 및 아카시아(acacia)와 같은 비활성 베이스 내의 조성물을 포함하는 향정(pastilles); 적당한 액상 운반체 내에 본 발명의 조성물을 포함하는 양치액(mouthwashes)으로써 제조될 수 있다.
본 발명의 상기 약학 제제는 선택적 성분으로써 약제학적으로 허용된 운반제, 희석제, 용해제(solubilizing agents) 또는 유화제(emulsifying agents), 및 기술분야에서 이용가능한 형태의 염들을 포함할 수 있다. 상기 물질들의 예들은 생물학적으로 완충 식염 용액(buffered saline solutions) 및 물과 같은 일반적인 식염 용액을 포함한다. 본 발명의 약학 제제에서 유용한 운반체 및/또는 희석제의 제한받지 않는 예시들은 물 및 생물학적으로 타당한 완충 식염 용액, 예컨대 pH 7.0-8.0의 포스페이트 완충 식염 용액(phosphate buffered saline solutions)를 포함한다.
본 발명의 상기 펩티드는 또한 호흡기계로 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 방법들에 있어서 사용을 위해, 에어로졸 약학 제형 및 투약 형태를 제공할 수 있다. 일반적으로, 상기 투약 형태는 특정 감염, 징후 또는 질병의 임상 징후(clinical symptoms)를 치료하거나 또는 방지하기 위해 효과적인 본 발명의 적어도 하나의 물질의 일정량을 포함한다. 본 발명의 방법에 따라 치료되어온 감염, 징후 또는 질병의 하나 또는 그 이상의 징후의 통계적으로 중요한 감쇠는 본 발명의 범위 내에서 감염, 징후 또는 질병의 치료로 간주된다.
선택적으로, 흡입(inhalation) 또는 주입(insufflation)에 의한 투여를 위해, 상기 조성물은 예컨대, 락토오스 또는 녹말과 같은 적당한 파우더 베이스 및 치료용제의 파우더 혼합물의 건조 파우더 형태일 수 있다. 상기 파우더 조성물은 예컨대, 캡슐 또는 카트리지(cartridges)의 단위 투약 형태일 수 있고, 또는 예컨대, 젤라틴 또는 블리스터(blister) 팩일 수 있으며, 상기 파우더는 흡입기(inhalator), 주입기(insufflator), 또는 정량 흡입기(metered-dose inhaler)를 이용하여 투여될 수 있다(참조, the pressurized metered dose inhaler (MDI) and the dry powder inhaler disclosed in Newinan, S.P. in Aerosols and the Lung, Clarke, S.W. and Davia, D. eds., pp. 197-224, Butterworths, London, England, 1984).
본 발명의 치료용 펩티드는 에어로졸 또는 흡입 형태로 투여될 때 수상 용액으로 투여될 수 있다. 따라서, 예컨대, 다른 에어로졸 약학 제형은 치료될 징후 또는 질병을 위한 본 발명의 하나 또는 그 이상의 펩티드를 약 0.001 mg/ml 내지 100 mg/ml 포함하는 생물학적으로 허용된 완충 식염 용액을 포함할 수 있다. 액상으로 용해 또는 현탁되지 않은 미세한 고체 펩티드 또는 핵산 입자 형태의 건식 에어로졸은 본 발명의 실시에 유용하다. 본 발명의 펩티드는 살포제(dusting powders)로 제조될 수 있고, 평균 크자 크기가 약 1 내지 5μm, 또는 2 내지 3μm인 미세한 입자들을 포함할 수 있다. 미세한 입자들은 본 발명이 속한 기술분야에서 잘 알려진 기술을 이용한 분말 만들기(pulverization) 및 스크린 여과(screen filtration)에 의해 조제될 수 있다. 상기 입자들은 파우더형태일 수 있는 미세한 물질의 예정된 양을 흡입하는 것에 의해 투여될 수 있다.
상기 활성 성분 또는 각 투약 형태의 개개의 에어로졸 도즈에 포함된 성분들의 단위 함량은 그 자체로 특정 감염, 징후 또는 질병을 치료하기 위한 유효량을 가질 필요는 없다. 왜냐하면, 상기 필요한 유효량은 다수의 단위 투약(plurality of dosage units)을 통해 이루어질 수 있기 때문이다. 더욱이, 상기 유효량은 개개의 단위 투약 형태 또는 일련의 투약들보다 적은 투약에 의해 이루어질 수도 있다.
흡입에 의한 상부(코) 또는 하부 기도(respiratory tract)로의 투여를 위해, 본 발명의 상기 치료용 펩티드는 통상적으로 분무기(nebulizer) 또는 압축된 팩 또는 에어로졸 스프레이를 전달하는 다른 편리한 수단으로부터 편리하게 전달되었다. 압축된 팩은 디클로로다이플루오로메탄(dichlorodifluoromethane), 트리클로로플루오로메탄(trichlorofluoromethane), 디클로로테트라플루오로에탄( dichlorotetrafluoroethane), 카본 다이옥사이드(carbon dioxide) 또는 다른 적당한 기체와 같은 적당한 추진체(propellant)를 포함할 수 있다. 압축된 에어로졸의 경우, 상기 투약 단위는 정량을 전달하기 위해 밸브를 제공함으로써 결정될 수 있다. 분무기는 미국 특허 4,624,251; 3,703,173; 3,561,444; 및 4,635,627에 묘사된 것을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 여기에 개시된 형태의 에어로졸 전달 시스템은 Fisons Corporation (Bedford, Mass.), Schering Corp. (Kenilworth, NJ) 및 American Pharmoseal Co. (Valencia, CA)을 포함하는 다양한 상업적 소스로부터 이용가능하다. 비강내의(intra-nasal) 투여를 위해, 상기 치료용의 물질은 점비약(nose drops), 플라스틱 병 분무기(plastic bottle atomizer) 또는 정량 흡입기(metered-dose inhaler)와 같은 액체 스프레이에 의해 투여될 수 있다. 전형적인 분무기(atomizers)는 미스토미터(Mistometer(Wintrop)) 및 메디할러(Medihaler (Riker))이다.
더욱이, 상기 활성 성분은 여기서 설명되거나 또는 다른 조건에서, 진통제(pain relievers), 항 염증제(anti-inflammatory agents), 항히스타민제(antihistamines), 기관지 확장제(bronchodilators) 및 이와 같은 다른 치료용 물질과 결합하여 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 인체 또는 동물 세포에 낮은 독성을 가지나 원하는 항진균성과 같은 항세균성 및 특성(진균성 세포막 투과, 용해 혹은 살해 또는 진균류의 성장 억제)을 갖는 펩티드를 위한 스크린 분석(screening assay)을 제공할 수 있다.
펩티드는 여기서 설명된 본 발명의 펩티드 라이브러리로부터 얻어질 수 있다. 상기 펩티드는 특정의 구조적 모양을 갖도록 개별적으로 또는 합리적으로 설계될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 4개의 펩티드의 아미노산 서열을 나타낸다.
도 2는 도 1의 펩티드로 처리하여 (a) 4일 및 (b) 7일 후의 진균류(fungus) T. interdigitale 성장을 나타내는 히스토그램이다.
도 3은 도 1의 펩티드로 처리하여 (a) 4일 및 (b) 7일 후의 진균류(fungus) T. rubrum 성장을 나타내는 히스토그램이다.
도 4는 도 1의 펩티드로 처리하여 (a) 24시간 및 (b) 48시간 후의 진균류(fungus) Candida albicans 성장을 나타내는 히스토그램이다.
도 5는 24시간 처리 후 Candida albicans 성장에서 펩티드 1(도 1)의 도즈-반응 실험(dose-response experiment)의 결과를 나타내는 히스토그램이다.
도 6은 도 1의 펩티드 4의 도즈 범위에서 24시간일때 Candida spp. 생존을 보여주는 그래프이다.
도 7은 도 1의 펩티드 4의 도즈 범위에서 24시간일때 박테리아의 3개의 다른 스트레인의 생존을 보여주는 그래프이다.
도 8은 성장 3일째에서 펩티드 4(1mg/ml)의 항진균 활성도(antifungal activity)(T. rubrum 에 대항)에서 0.01% 아세트산의 상승 효과를 나타내는 히스토그램이다.
도 9는 펩티드 4에 의한 T. interdigitale 및 T. rubrum 의 억제를 나타내는 히스토그램이다.
도 10은 T. interdigitale 에서 펩티드 3 및 펩티드 5의 영향을 나타내는 히스토그램이다.
도 11은 T. interdigitale 성장에 있어서 아세트산의 영향을 나타내는 히스토그램이다.
도 12는 T. interdigitale 성장에 있어서 폴리리신(polylysine)의 영향을 나타내는 히스토그램이다.
도 13은 T. rubrum의 성장에 있어서 폴리리신 및 폴리아르기닌(polyarginine)의 영향을 나타내는 히스토그램이다.
도 14는 폴리-L-아르기닌(poly-L-arginine)에 의한 T. interdigitale 및 T. rubrum 억제를 나타내는 히스토그램이다.
도 15는 T. rubrum 및 T. . interdigitale 에 있어서 폴리아르기닌의 감소된 농도의 영향을 나타내는 히스토그램이다.
도 16은 T. rubrum의 성장에 있어서 트리머(trimers)의 영향을 나타내는 히스토그램이다.
도 17은 T. interdigitale의 성장에 있어서 펩티드 4 및 NaCl의 영향을 나타내는 히스토그램이다.
도 18은 증가된 염 농도에서 Candida albicans 에 있어서 펩티드 4의 영향을 나타내는 그래프이다.
도 19는 Candida albicans의 생존에 있어서 폴리리신 및 폴리아르기닌의 영 향을 나타내는 히스토그램이다.
표 1은 본 발명의 펩티드에 의해 치료될 수 있는 인체 박테리아, 진균류 및 enveloped viral pathogens의 리스트이다.
표 2는 결과 및 도면에서 보여진 아미노산 폴리머 코드에 상응하는 펩티드를 열거한다.
본 발명은 다음 실시예들을 참조하여 설명될 것이다.
실시예들
물질 및 방법 시약
모든 펩티드는 인비트로젠-에보퀘스트, 칼스바드(Invitrogen-Evoquest, Carlsbad, CA, USA)에 의한 계약하에 고상 합성(solid-phase synthesis)에 의해 생산되거나 펩티드 제공자 에오엠피에스 에스에이(NeoMPS SA (Strasbourg, France)) 또는 시그마-알드리히 케미컬 컴퍼니(Sigma-Aldrich Chemical Company Ltd. (Poole, UK))로부터 얻어졌다. 진균류의 시험을 위해, 동결건조된 펩티드가 시험 완충액(assay buffer)에서 1,000 mg/ml의 저장 용액으로써 준비되었다. 도 2 내지 8 및 도 11이 생성된 실험에서 명시적으로 언급되었듯이, 아세트산이 용매로써 0.5%의 최종 농도에 부가되었다.
병원균(Pathogens)
Trichophyton interdigitale (NCPF 117) 및 Trichophyton rubrum (NCPF 335) 균주들이 National Collection of Pathogenic Fungi, Bristol 에서 얻어졌고, 약 월 간격(monthly intervals)으로 전달되어 사보로드 한천(Sabuoraud's agar) 및 감자포도당한천(Potato Dextrose Agar)에서 약 30℃에서 사변 배양으로 유지되었다. Candida albicans 균주 3179 (National Collection of Type Cultures [NCTC], Colindale에서 얻어짐)은 옥소이드 뮐러 힌톤 액체배지(Oxoid Mueller Hinton Broth)에서 370C로 유지되었다. Streptococcus pyogenes 균주n 8198, Staphylococcus aureus 균주 10642 (methicillin-resistant), 및 E. coli 0157 ㄱ균주 12900이 NCTC, Colindale 에서 얻어졌고 옥소이드 뮐러 힌톤 액체배지(Oxoid Mueller Hinton Broth) 에서 370C로 유지되었다.
진균 성장 민감도 측정(Fungal Growth Sensitivity Assays)
각각의 시험 펩티드(test peptide)에 대한 진균성 균주(fungal strains)의 민감도를 결정하기 위해, 진균류의 성장에 있어서 이들의 영향이 다음과 같이 평가되었다. T. interdigitale 및 T. rubrum 분생포자(conidia)의 현탁액 및 균사 단편(hyphal fragments)이 영양 글루코스 액체배지(Nutrient Glucose Broth (NGB)) (2% w/v 글루코스를 포함하는 옥소이드 영양 액체배지(Oxoid Nutrient broth))를 사면 배양(slope culture)에 부가하고 스페츌라로 교반하는 것에 의해 조제되었다. 결과로 생기는 분생자포/균사 단편 현탁액은 큰 균사 매트(hyphal mats) 및 한천(agar) 조각을 제거하기 위해 2층의 멸균된 수술용 거즈(sterile surgical gauze)를 통해 여과되었다. 20μl의 상기 현탁액(540 nm 근처에서 약 0.1의 흡광도, 약 106 propagules/ ml에 대응)이 멸균 웰(well of sterile), 96 웰 마이크로타 이터 플레이트(96 well microtitre plates)에 접종되었고, 각 플레이트에는 전체 부피 80μl의 영양 배지(nutrient medium)(NGB) 및 적당한 양의 펩티드 용액이 미리 부가되어 있었다. 컨트롤 웰(Control wells)은 NGB 배지만으로 혹은 (적용가능하다면 펩티드 샘플과 동일한 농도의) 용액과 함께 만들어진 100ml의 최종 측정 부피로 만들어진 것이다. 30℃에서 24시간, 4일 및 7일 배양 후, 플레이트 내에서의 진균류의 성장이 마이크로텍 플레이트 리더(Microtek plate reader)에서 540nm 흡수도에서 모니터 되었다.
Candida albicans 생존 시험 ( Survival Assays)
상기 각 시험 펩티드의 진균성 균주(fungal strains) 의 민감도를 결정하기위해, 다음과 같이 Candida 생존에 미치는 그들의 영향이 평가되었다. C. albicans 배양이 18 내지 24시간 동안 성장되었고 사용전에 4oC에 저장되었다. 생존가능한 세포들의 수를 5 x 106 내지 1 x 107 /ml로 조절하도록, 하룻밤동안 성장된 신선한 배양액이 10분동안 2000 x g 에서 원심분리되었고 신선한 밀러 힌톤 액체배지(Mueller Hinton Broth)로 세정되었다. 검사 완충액(Assay buffer)이 100μl의 NGB 배지(medium)를 6.9 ml 의 10 mM 인산 나트륨 완충액(sodium phosphate buffer) pH 7.7에 부가함으로써 제조되었다. 펩티드 농도 범위를 갖거나 갖지 않는 35μl의 측정 완충액(assay buffer)이 멸균된 폴리프로필렌 스크류 캡 바이엘(sterile polypropylene screw-capped vial)에 부가되었고 앞서 설명된 15μl의 Candida albicans 접종물(inoculum)이 부가되었다. 상기 바이엘(vials)은 물 욕조 에서 2시간 동안 37℃에서 배양(incubate)되었고 살아남은 Candida spp.의 수는 무균의 인 완충 식염 용액(sterile phosphate buffered saline:PBS)에서 일련의 희석 및 옥소이드 사보로드 한천(Oxoid Sabouraud's Agar (20 ml))를 포함하는 9cm의 패트리 디쉬에 플레이트하여 결정되었다. 수 계산은 이들 플레이트가 37oC 에서 18-24시간 동안 배양된 후 수행되었다.
박테리아 생존 측정(Bacterial Survival Assays)
Streptococcus pyogenes 균주 8198, Staphylococcus aureus 균주 10642 (methicillin-resistant), 및 E. coli 0157 균주 12900 (NCTC, Colindale로 부터 얻어짐)이 18-24h 동안 성장되었고 사용 전에 4℃에서 저장되었다. 하룻밤 동안 성장된 신선한 배양액이 10분 동안 2000 x g 에서 원심분리되었고 신선한 밀러 힌톤 액체배지(Mueller Hinton Broth)로 세정되었다. 4개의 펩티드 각각의 민감도는 앞서 설명된 C. albcans 로써 시험되었다. E. coli 및 S. aureus를 위해, 펩티드 민감도 측정을 위한 세포의 개시 수는 108 /ml이고 측정을 위해 사용된 배지는 영양 한천(Nutrient Agar) (Oxoid) 이었다. Str . pyogenes은 밀러 힌톤 액체배지(Mueller Hinton agar)의 다른 균주들 보다 덜 자랐고 이런 측정을 위한 세포의 개시 수는 106 /ml 에서 다른 균주들 보다 낮았다. Str . pyogenes 생존은 영양 한천(Nutrient Agar) 대신에 옥소이드 트립토스 소야 한천(Oxoid Tryptose Soya Agar)를 이용하여 결정되었다.
결과
펩티드 1-4에 의한 Trichophtyon spp . 성장 억제
성장 배지 단독의(컨트롤 배지) 또는 50mg/ml 의 펩티드 1, 2, 3 또는 4 (도 1에 도시)를 포함하는 성장 배지에서, 2개의 임상적으로 적절한 피부 진균성 병원체(dermal fungal pathogens)인, Trichopyton rubrum 및 Trichopyton interdigitale가 앞서 물질 및 방법 섹션에서 설명된 바와 같이 배양되었다. T. interdigitale 및 T. rubrum의 성장은 배양액에서 4 및 7일 후에 광도(540nm에서의 흡광도)를 측정함으로써 평가되었다. 컨트롤되고 처리되지 않은 샘플과 비교하여, 테스트된 각 펩티드는 특정적으로 4일 및 7일 째에 T. interdigitale (도 2) 및 T. rubrum (도 3)의 성장을 억제하였다. OD readings의 증가에 의해 나타나는 것처럼, 4 내지 7일 사이에, 각 테스트 균주의 컨트롤 배지(control cultures)는 성장하기를 계속하였다.
1-4 펩티드에 의한 Candida spp . 성장 및 생존의 억제
상기 물질 및 방법 섹션에서 설명된 바와 같이, 성장 배지 단독(컨트롤 ㅂ배배양)에서 또는 50mg/ml 또는 100mg/ml 및 300mg/ml 또는 500mg/ml의 펩티드 1, 2, 3 또는 4를 포함하는 성장 배지에서 이스트 Candida albicans가 배양되었다. C. albicans의 성장이 배양에서 24시간(도 4a) 및 48시간(도 4b) 후의 광도(540nm 에서의 흡광도)를 측정함으로써 평가되었다. 컨트롤되고 처리되지 않은 샘플과 비교하여, 테스트된 각 펩티드는 특정적으로 시간 및 도즈에 의존하는 방법으로 C. albicans의 성장을 억제하였다. C. albicans 성장이 컨트롤 조건에서의 배양(성장 배지만 존재)을 24시간 하거나 50mg/ml 내지 500mg/ml (도 5)의 펩티드 1의 농도 범위에서 24시간 한 후 광학적으로 평가된 실험에서, 성장 억제의 도즈 의존도는 더 확인되었다. 분리된 실험에서, 배지만 있는 곳(컨트롤)에서 성장된 것 또는 1mg/ml 내지 1000mg/ml (도 6) 범위의 펩티드 4의 농도를 포함하여 성장된 된 것을 배양액에서 18 내지 24시간 후에, C. albicans 생존이 평가되었다. 배양액에서 24시간 후 생존수계수(viability counts)에 의해 평가된 바와 같이, C. albicans organisms의 생존은 도즈에 의존하는 방법으로 감소하였다(도 6).
펩티드 4에 의한 박테리아 생존의 억제
물질 및 방법 섹션에서 이미 설명된 바와 같이, 3개의 임상적으로 적절한 박테리아 병원체(pathogens)인, E. coli0157, 메치실린 내성(methicillin-resistant) Staphylococcus aureus (MRSA) 및 Streptococcus pyogenes이 펩티드 4의 농도 범위를 포함하는 범위에 노출되었다. 3시간 후, 각 박테리아 배양의 샘플들은 적당한 고상 성장 배지 플레이트들로 옮겨졌고, 18 내지 24시간 후에 컨트롤(control)(펩티드를 포함하지 않는 단독 성장 배지) 샘플 및 처리(펩티드 4를 포함하는 성장 배지)된 샘플에서 생존 콜로니(viable colonies)의 수가 측정되었다. 3시간 노출 후, 도즈 의존적인 방법(dose dependent manner)에서, 컨트롤되고 처리되지 않은 배지와 비교하여 펩티드 4는 특정적으로 각 박테리아 균주의 생존을 억제했다(도 7).
펩티드 4의 항진균 활성도를 증가시키는 아세트산
도 2 및 3에서 보여진 실험들에서 컨트롤(펩티드 無) 및 시험(펩티드 1, 2, 3 또는 4 포함) 배지 모두 펩티드 용매로써 0.5% 의 아세트산을 포함하였으므로(물질 및 방법 섹션), 분리된 실험이 상기 아세트산 자체가 펩티드 활성도 및/또는 진 균 생존에서 역할을 하는지 그렇지 않은지 확인하기 위해 수행되었다. 이를 위해서, T. rubrum 성장 실험들이 상술한 방법 및 물질 섹션에 따라 성장 배지만을 갖는 배지, 단지 0.01%의 아세트산을 갖는 성장 배지, 1mg/ml의 펩티드 4를 포함하는 성장 배지, 1mg/ml의 펩티드 4 및 0.01%의 아세트산을 갖는 배지에 대해서 수행되었다. 상술한 것 같이, 진균의 성장이 배양액에서 3일 후에 OD에 의해 결정되었다. 기대한 것과 같이, 펩티드 4는 T. rubrum 성장을 억제했다. 0.01%의 아세트산만으로는 T. rubrum 성장에 월등한 효과가 없었지만(도 8), 펩티드 4가 배지에 포함되었을 때, 0.01%의 아세트산의 존재는 1mg/ml의 펩티드 4만 있을 때 보다 T. rubrum 성장을 월등하게 억제했다.
펩티드 4에 의한 T. interdigitale 및 T. rubrum 성장의 억제
Trychophyton spp.의 성장에 있어서 펩티드 4의 억제 효과는, 상술한 물질 및 방법 섹션에서와 같이, 진균 성장 측정에 의해 결정되었다. T. rubrum 및 T. interdigitale는 배지에서만 배양되었거나 또는 3가지의 다른 농도를 갖는 펩티드 4를 포함하는 배지에서 배양되었다. 어떤 샘플에서도 아세트산은 존재하지 않았다. 배지만 있는 컨트롤은 배지의 흡수 백그라운드(background absorbance)를 나타내기 위해 사용되었다. 진균의 성장은 30℃에서 96시간 동안 배양된 후에 이전에 기술한 것과 같이 OD에 의해 결정되었다. 도 9에 보여진 것과 같이, 이 시험들은 양쪽 진균 종(species)의 성장에 있어서 펩티드 4의 억제 효과를 확인했다. T. interdigitale와 함께하는 것이 T. rubrum와 함께하는 것보다 항상 더 펩티드 4 처리의 억제 효과가 있을 수 있다. T. interdigitale의 성장이 0.55mg/ml의 펩티드 농도에서 억제되었다.
T. interdigitale 의 성장에 있어서 펩티드 3 및 4의 영향
T. interdigitale에 있어서 펩티드 3 및 4의 항진균 잠재력(antifugal potential)이 평가되었다. 성장 억제 측정(Growth inhibition assays)이 아세트산 없이, 상술한 물질 및 방법 섹션에 따라 수행되었다. 펩티드 1 내지 3이 심한 소수성으로 불용성이어서 이들은 미리 단지 용매로써 아세트산 내에서 Trichophyton spp.에 대하여 테스트되었다. T. interdigitale 배양(cultures)이 7일 동안 펩티드 3, 펩티드 4 또는 배지만 있는 상태에서 아세트산 용매없이 성장되었고 OD에 의해 성장이 측정되었다. 펩티드 4는 월등하게 진균의 성장을 억제하는 것으로 보여졌고(도 10), 반면 펩티드 3은 억제 활성도를 보이지 않았다(도 10). 0.5%의 아세트산이 없는 조건에서 소수성 펩티드 3에 비해서 양이온성 펩티드 4가 월등히 우수한 성장 억제효과를 나타낸다는 것은 이전의 소수성 펩티드에서 보여진 활성에 아세트산이 아주 중요한 기여를 한다는 것을 암시한다.
T. interdigitale 의 성장에 있어서 아세트산의 영향
아세트산에 의한 T. interdigitale 성장의 억제가, 물질 및 방법 섹션에 따른, 진균 성장 실험(fungal growth experiments)을 수행함으로써 평가되었다. T. interdigitale 배양(cultures)이 30oC에서 96시간 동안 3가지의 다른 아세트산 농도로 처리되거나 아세트산으로 처리되지 않고 성장되었다(도 11). 이는 용매로써 이전에 펩티드 1내지 4와 사용되었던 동일한 농도의 0.5% 아세트산의 월등한 효과가 있음을 보여준다. 아세트산이 없는 펩티드 3의 활성도의 부족과 함께 이 실험은 펩티드 4가 Trichophyton spp.에 대해 가장 활성된 화합물이라는 것을 제시한다.
T. interdigitale 성장에 있어서 폴리 -L- 리신(Poly-L-Lysine)의 영향
펩티드 4가 리신 및 아르기닌 잔기를 포함하는 높은 양이온성 펩티드이므로, 아미노산의 폴리-L 형태의 진균의 활성도가, 아세트산이 없는 조건에서, 상술한 물질 및 방법 섹션에서 설명된 바와 같이, 성장 억제 시험을 이용하여 T. interdigitale 에 대해 테스트되었다. 컨트롤되고 처리되지 않은 T. interdigitale 배양액(cultures) 및 길이에 있어서 27-100 잔기(residues) 내지 100-200 잔기(residues) 범위인 폴리-L-리신 분자들을 1mg/ml 내지 50mg/ml로 포함하는 배양액이 만들어졌다. 각 배양액에 있어서 T. interdigitale 의 성장이 30℃에서 96 시간 후 평가되었다. 각 길이의 폴리-L-리신 분자가 T. interdigitale 의 성장을 억제하였지만(도 12), 반면 더 큰 분자는 테스트된 모든 농도에서 성장을 억제하였고, 억제 활성도는 더 높은 농도에서 길이가 27-100인 아미노산의 분자와 함께 보여졌다(도 12). 이는 Trichophyton spp.에 있어서 리신의 성장 억제 효과가 크기 및 도즈에 의존하는 것을 나타낸다.
T. rubrum 의 성장에 있어서 폴리 -L-리신( Poly -L-Lysine) 및 폴리 -L-아르기닌( Poly-L-Arginine)의 영향
폴리-L-리신에 대한 폴리-L-아르기닌의 항진균 활성도는 이후 T. rubrum에 대해 테스트되었다. 성장 억제가 아세트산 없는 조건에서, 상술한 물질 및 방법 섹션에 따라 결정되었다. T. rubrum 이 배지만 있는 곳에서, 폴리-L-아르기닌(poly- L-Arginine) (28-86 amino acids in length) 및 폴리-L-리신(poly-L-Lysine) (100-200 amino acids)를 포함하는 배지에서 배양되었다. 접종되지 않은 배지 단독 컨트롤(uninoculated medium only control) 이 만들어졌다. 30℃에서 96시간 동안, 배양액은 유지되었고, 성장이 모니터되었다. 폴리-L-아르기닌(Poly-L-Arginine) 및 폴리-L-리신(poly-L-Lysine) 모두 T. rubrum 의 성장을 억제했다(도 13). 동일한 도즈량으로 시험되었을 때, 폴리-L-아르기닌이 폴리-L-리신보다 T. rubrum에 대한 억제 효과에 있어서 더 활발하였고, 1mg/ml에서는 완전히 성장을 억제하였다(도 13).
poly -L- Arginine 에 의한 T. interdigitale 및 T. rubrum 의 억제
poly-L-Arginine에 의한 Trychophyton spp.의 성장 억제가, 상술한 물질 및 방법 섹션에 따른 진균 성장 실험을 셋업하여 테스트되었다. T. rubrum 및 T. interdigitale 배양액이 배지 만에서 또는 3가지의 다른 농도의 poly-L-Arginine을 포함하는 배지에서 모두 성장되었다. 어떤 샘플에도 아세트산은 없었다. 배지 컨트롤은(Medium controls) 상기 배지의 백그라운드 흡수(background absorbance)를 보여주기 위해 사용되었다. 진균의 성장은 이전에 설명된 바와 같이 30℃에서 96시간 배양된 후 OD에 의해 결정되었다(도 14). 폴리아르기닌(Polyarginine)이 0.55mg/ml까지 양 종류의 진균에 대해 활동적인 것으로 보여졌다(도 14).
T. rubrum 및 T. interdigitale 에 있어서 폴리아르기닌(polyarginine)의 감 소된 농도(100mg/ml)의 영향
폴리아르기닌에 의한 Trychophyton spp.의 성장 억제가 상기 물질 및 방법 섹션에 따른 진균 성장 실험을 셋업하여 테스트되었다. T. rubrum 및 T. interdigitale 배양액(cultures)이 어떤 샘플에서도 아세트산을 사용하지 않고, 단일 농도의 폴리아르기닌(100mg/ml)으로 처리되거나 처리되지 않고 성장되었다. 배지 컨트롤(Medium controls)이 상기 배지의 백그라운드 흡수(background absorbance)를 보여주기 위해 사용되었다. 진균의 성장은 이전에 설명된 바와 같이 30℃에서 96시간 배양된 후 OD에 의해 결정되었다(도 15). 상기 감소된 농도는 활성도의 감소로 나타나고, 이는 Trychophyton spp.에 있어서 폴리아르기닌의 투여(dose) 영향을 나타낸다.
T. rubrum 의 성장에 있어서 펩티드 트리머(trimers)(3 아미노산)의 영향
T. rubrum의 성장에 있어서 poly-L-Lysine, poly-L-Arginine, poly-L-Histidine 및 poly-L-Tryptophan의 펩티드 트리머(trimer)의 활성도가 테스트되었다. 성장 억제는 상기 물질 및 방법 섹션에 따라 셋업되었고, T. rubrum 가 처리되지 않거나 또는 각각의 트리머 2mg/ml 에 노출되었다. 배양액(Cultures)은 30℃에서 96시간 동안 유지되었다. 진균 성장은 OD에 의해 측정되었고, 결과들은 처리되지 않은 배양액에서의 성장 퍼센트로써 표시되었다(도 16). T. rubrum의 성장에서 월등한 감소를 도출하기 위해 필요한 3 아미노산 폴리펩티드와 함께 Poly-L-Arginine 은 T. rubrum 에 대해 가장 활동적인 펩티드이다.
T. interdigitale 의 성장에 있어서 Peptide 4 (1.2mg/ml) 및 NaCl의 영향
T. interdigitale에 대한 펩티드 4의 진균 활성도에 있어서 다양한 염 농도의 영향이 조사되었다. T. interdigitale 성장 억제 시험은 아세트산 없이 상술한 물질 및 방법 섹션에 따라 셋업되었다. 배양액(Cultures)은 처리되지 않은 채로 남겨지거나 또는 펩티드 4 및 100mM 내지 500mM 농도 범위의 NaCl에 노출되었다. T. interdigitale 배양액(cultures)은 30℃에서 96시간 동안 유지되었고 성장은 앞서 설명되 바와 같이 OD에 의해 평가되었다(도 17). 펩티드 4의 항진균 활성도가 생리학적 조건하에서 발견되는 농도에 근접하거나 또는 초과하는 염농도에서 영향받지 않았다(도 17). 내생적인 베타-디펜신(endogenous β-defensins)의 항미생물 활성도(antimicrobial activities)는 심지어 낮은 염 농도에 의해 억제되는 것으로써 잘 알려져있다.
높은 염 농도에서 Candida albicans 에 대한 펩티드 4의 영향
C. albicans 의 생존이 상술한 방법 및 물질 섹션에서 설명된 바와 같이 펩티드 4의 농도 범위로 37℃에서 2시간 배양 후 평가되었다. 생리학적이고 매우 높은 염 조건(내생적인 베타-디펜신 펩티드 활성도를 억제하는 것으로 알려진)의 영향을 확인하기 위해 NaCl의 2가지 농도가 성장 배지로 도입되었다. 펩티드 4의 월등한 살균 활성도(killing activity)가 심지어 매우 높은 염 농도에서도 관찰되었다(도 18). 펩티드 4의 농도가 증가할수록, 더 높은 염 농도의 영향이 감소되는 것이 보여질 수 있다(도 18). 그러므로, 펩티드 4의 진균 활성도는 염에 의해 억제되지 않는다.
Candida albicans 에 대한 Poly -L Lysine, Poly -D-Lysine 및 Poly -D-Arginine의 활성도
펩티드 변형체의 어떤 것이 Candida albicans에 대해 증가된 활성도를 나타 내는지 결정하기 위해, poly-L Lysine 대비 poly-L Arginine의 항진균 활성도와 poly-D Lysine 대비 poly-L Lysine 의 항진균 활성도가 평가되었다. 100mg/ml, 1mg/ml 및 10mg/ml poly-D-lysine, poly-L-lysine 및 poly-L-Arginine의 존재 하에, 37℃에서 2시간 동안 물질 및 방법 섹션에서 설명된 바와 같이, Candida spp.가 배양되었다. 생존이 이전에 설명된 바와 같이 평가되었고, poly-L-lysine 에 비해서 poly-L-Arginine의 증가된 항진균 활성도가 나타난다(도 19). 또한, poly-D-lysine이 poly-L-lysine에 대해 매우 유사한 항진균 활성도를 갖는 것으로 나타난다.
표 1
사람과 관련된 박테리아성 병원체(여기에 열거된 것에 제한되지 않음)
Genus Species Comments
Abiotropha defectiva
elegans
Achromobacter alcaligenes
Acidaminacoccus fermentans
Acinetobacter baumannii
calcoaceticus
lowffii
haemolyticus
Actinobacillus actinomycetemcomitans
Actinomadura madurae
pelletieri
dassonvillei
Actinomyces israelii
gerencseriae
pyogenes
naeslundii
bernardiae
neuii
radingae
turicensis
propinicus
Aerococcus urinae
viridans
Aeromonas hydrophila
veroniae
caviae
Alcaligenes xylososidans
denitrificans
faecalis
Anaerovibrio lipolytica
Arcanobacterium pyogenes
haemolyticum
Arthrobacter globiformis
creatinolyticus
cumminsii
woluwensis
Bacillus anthracis
cereus
brevis
subtilis
licheniformis
macerans
alvei
megaterium
pumilis
coagulans
laterosporus
thuringiensis
sphaericus
circulans
Bacteroides fragilis
vulgatus
forsythus
buccae
gingivalis
ureolyticus
gracilis
tectum
Bartonella quintana
henselae
bacilliformis
washoensis
clarridgeiae
elizabethae
Bordatella/ avium
Bordetella hinzii
pertussis
parapertussis
bronchiseptica
petrii
Borrelia hermsii
turicatae
burgdorferi
recurrentis
duttonii
garinii
afzelii
japonica
andersonii
Brachyspira hyodysenteriae
pilosicoli
Brucella abortus
melitensis
suis
canis
Burkholderia mallei
cepacia
pseudomallei
multivorans
stabilis
gladioli
vietnamiensis
ambifaria
fungorum
Calymmatobacterium granulomatis
Campylobacter fetus
jejuni
coli
lari
hyointestinalis
mucosalis
concisus
sputorum
upsaliensis
curvus
rectus
hominis
Capnocytophaga canimorsus
gingivalis
ochracea
cynodegmi
Cardiobacterium hominis
vulvarum
Catonella morbi
Chlamydia trachomatis
pneumoniae
psittaci
Chryseobacterium meningosepticum
Citrobacter freundii
diversus
Clostridium botulinum
difficile
tetani
perfringens
butyricum
diphtheriae
sordellii
septicum
tertium
clostridioforme
inocuum
ramosum
coccoides
Corynebacterium diphtheriae
ulcerans
minutissimum
pseudotuberculosis
pseudodiphtheriticum
xerosis
jeikeium
parvum
macginleyi
amycolatum
Coxiella burnetii
Dermabacter hominis
Desulfovibrio desulfuricans
fairfieldensis
vulgaris
salexigens
africanus
gigas
baculatus
sapovorans
baarsii
thermophilus
gabonensis
piger
profundus
aosterae
burkinensis
longus
orale
aespoeensis
Dialister pneumocintes
invisus
Dolosicoccus paucivorans
Dolosigranulum pigrum
Edwardsiella tarda
hoshinae
Eggerthella lenta
Ehrlichia sennetsu
chaffeensis
phagocytophila
ewingii
canis
Eikinella corrodens
Empedobacter brevis
Enterobacter cloacae
agglomerans
aerogenes
sakazakii
Enterococcus faecalis
faecium
gallinarum
casseliflavus
flavescens
gilvus
hirae
pallens
raffinosus
solitarius
Erysipelothrix rhusiopathiae
Escherichia coli
fergusonii
taylorae
hermanii
vulneris
Eubacterium brachy
timidum
nodatum
saphenum
aerofaciens
lentum
Facklamia languida
sourekii
ignavia
hominis
Filifactor alocis
villosus
Flavimonas oryzihabitans
Flavobacterium meningosepticum
breve
scophthalmum
johnsoniae
Fluoribacter bozemaniae
Francisella tularensis
philomiragia
Fusobacterium necrophorum
nucleatum
Gardnerella vaginalis
Gemella morbillorum
haemolysans
bergeriae
sanguinis
Globicatella sanguis
sanguinius
sulfidifaciens
Granulicatella elegans
adiacens
Haemophilus influenzae
parainfluenzae
ducreyi
aegyptus
paraphrophilus
aphrophilus
Hafnia alvei
Helicobacter pylori
cinaedi
fennelliae
rappini
heilman(n)ii
pullorum
bilis
hepaticus
westmeadii
canadensis
typhlonius
Helococcus kunzii
Ignavigranum ruoffiae
Inquilinus limosus
Kingella kingae
dentrificans
Klebsiella pneumoniae
agglomerans
oxytoca
Kytococcus schroeteri
Lactobacillus rhamnosus
Lactococcus lactis
Legionella pneumophila
anisa
sainthelensi
birminghamensis
micdadei
dumofii
longbeachae
cincinattiensis
bozemanii
gormanii
macehenii
tusconensis
feelii
hackeliae
oakridgensis
lansingensis
israelensis
jordansis
wadsworthii
Leptospira biflexa
borgpetersenii
interrogans
kirschneri
noguchii
santarosai
weilii
wolbachii
inadai
meyeri
ivanovii
Leptotrichia amnionii
buccalis
sanguinegans
Leuconostoc mesenteroides
pseudomesenteroides
Listeria monocytogenes
ivanovii
Megasphaera micronuciformis
elsdenii
Micrococcus luteus
Micropolyspora faeni
Mobiluncus mulieris
curtisii
Moraxella lacunata
nonliquefaciens
catarrhalis
influenzae
Morganella morganii
Mycobacterium tuberculosis
ulcerans
avium
intracellulare
marin(ar)um
leprae
kansasii
scrofulaceum
chelonae
bovis
africanum
microtii
fortuitum
hominis
pneumoniae
malmoense
paratuberculosis
simiae
szulagi
xenopi
Mycoplasma pneumoniae
genitalium
hominis
pulmonis
caviae
Myroides odoratus
odoratimimus
Neisseria meningitides
gonorrhoeae
lactamica
mucosa
Nocardia caviae
asteroides
brasiliensis
vaccinii
africana
veterana
arthritidis
anaemiae
farcinica
nova
otitidiscaviarum
Orientia tsutsugamuchi
Pandoraea pneumonicola
sputorum
apista
pnomenusa
Pasteurella multocida
pneumotrophica
bettyae
canis
dagmatis
gallinarum
haemolytica
stomatis
Pediococcus acidilactici
pentosaceus
Peptostreptococcus magnus
anaerobius
micros
vaginalis
asaccharolyticus
tetradius
prevotii
Photorhabdus luminescens
asymbiotica
Plesiomonas shigelloides
(Plesiomonas)
Porphyromonas gingivalis
levii
uenonsis
Prevotella melaninogenica
intermedia
bivia
heparinolytica
nigrescens
oris
disiens
Propionibacterium acnes
propionicus
Proteus mirabilis
vulgaris
penneri
Providencia alcalifaciens
rettgeri
stuartii
Pseudomonas aeruginosa
fluorescens
putida
mendonica
alcaligenes
pickettii
maltophila
cepacia
mallei
pseudomallei
oryzihabitans
stutzeri
putrefaciens
Ralstonia picketii
mannitolilytica
Rhizobium radiobacter
massiliae
Rhodococcus equi
Rickettsia tsutsugamuchi
conorii
prowazekii
rickettsii
akari
japonica
austral(ens)is
typhi
monogolotimonae
felis
parkeri
helvetica
canada
montana
sennetsu
Rochalimaea quintana
Roseomonas gilardii
fauriae
mucosa
Rothia dentocariosa
Salmonella typhi
arizonae
enteritidis
paratyphi
typhimurium
enterica
dublin
choleraesuis
Selenomonas sputagena
Serpulina hyodysenteriae
pilosicoli
murdochii
Serratia marcesans
liquefaciens
Shigella flexneri
boydii
dysenteriae
sonnei
Sneathia sanguinegens
Staphylococcus aureus
epidermidis
saphrophyticus
lugdunensis
haemolyticus
warneri
schleferi
intermedius
Stenotrophomonas maltophilia
Streptobacillus moniliformis
Steptococcus pneumoniae
gordonii
gallolyticus
pyogenes
mutans
sanguis
iniae
agalactiae
faecalis
suis
equisimilis
bovis
salivarius
mitis
milleri group
Group A, B, C, D, F, G, R
A, b, g type
Streptomyces somaliensis
Streptophomonas maltophila
Thermoactinomyces sacchari
vulgaris
dichotomicus
Thermomonospora viridis
Treponema carateum
pallidum Including subsp. Pertenue & endemicum
pertenue
denticola
Tropheryma whippelii
Ureaplasma urealyticum
parvum
Vagococcus fluvialis
Veillonella montpellierensis
parvula
alcalescens
Weisella confusa
cibaria
Vibrio cholerae
parahaemolyticus
vulnificus
alginolyticus
mimicus
hollisae
fluvialis
damsella
furnisii
metchnikovii
Yersinia pestis
enterocolitica
pseudotuberculosis
표 1 계속
사람과 관련된 진균성 병원체로서 여기에 열거된 것에 제한되지 않음
Genus Species Comments
Absidia corymbifera
Acremonium Falciforme
kiliensis
recifei
Apophysomyces elegans
Ajellomyces Dermatitidis
Capsulatus
Alternaria alternata
Arthroderma vanbreuseghemii
Arthrographis kalrae
Grisea
cuboidea
Aspergillus Fumigatus
Ochraceus
Versicolor
Flavus
terreus
glaucus
Nidulans
niger
Oryzae
flavatus
ustus
Basidiobolus Ranarum
Meristosporus
haptosporus
Beauveria bassiana
Bipolaris spicifera
Australiensis
hawaiiensis
Blastomyces Dermatitidis
brasiliensis
Blastoschizomyces capitatum
Candida Albicans
Tropicalis
Glabrata
parapsilosis
krusei
zeylanoides
guillermondii
pelliculosa
Kefyr
dubliniensis
Chrysosporium Keratinophilum
Tropicum
Merdarium
Inops
Pannicola
Queenslandicum
Zonatum
parvum
Cladophialophora Bantiana
carrionii
Cladosporium Bantianum
Caldosporiodes
Coccoides Immitis
Conidiobolus coronatus
Coniothyrium fuckelii
Cryptococcus neoformans Var neoformans & gattii & grubii
Albidus
laurentii
Cunninghamella bertholletiae
Curvularia Brachyspora
Clavata
Geniculata
Lunata
Pallescens
Senegalensis
verruculosis
Emmonsia Parva Var parva & crescens
Epidermophyton Floccosum
rubrum
stockdaleae
gallinae
Exophiala jeanselmiae
dermatitidis
Exserohilum Rostratum
Halodes
meginnisii
longirostratum
Filobasidiella neoformans Var neoformans & gattii
Fonsecaea Compacta
Pedrosoi
Fusarium oxyporum
solani
Geotrichium candidum
Histoplasma Capsulatum Var capsulatum, dubiosii & farcinimosum
Lacazia loboi
Lasiodiplodia theobromae
Leptosphaeria senegalensis
Loboa loboi
Madurella Grisea
mycetomatis
Malassezia furfur
Microsporum gypseum
Audoinii
canis
Nanum
Fulvum
ferrugineum
distortum
Mucor Ramosissimus
Indicus
circinneloides
hiernalis
Neotestudina Rosatii
Nocardiopsis dassonvillei
Ochroconis gallopava
Onchyocola canadiensis
Paecilomyces crustaceus
variotii
Paracoccidiomyces brasiliensis
Paracoccidioides Brasiliensis
Penicillium Marneffei
verrucosum
Phaeoannellomyces werneckii
Phialophora verrucosa
Repens
parasitica
Phoma Cruris-hominis
Piedaria Hortae
(Piedra) (iahortae)
Pneumocystis carinii
Jiroveci(i)
Pseudallescheria Boydii
Pyrenochaeta romeroi
Rhinosporidium seeberi
Rhizomucor pusillus
Rhizopus arrhizus
Rhodotorula Rubra
Minuta
Glutinis
mucilaginosa
Saccharomyces cerevisiae
Boulardii
Scedosporium Apiospermum
Proliferans
Inflatum
Scopulariopsis brevicaulis
Schizophyllum commune
Scytalidium Dimidiatum
hyalinum
Sporobolomyces salmonicolor
Sporothrix Schenckii
Stachybotrys Chartarum
Atra
alternans
Synchephalastrum racemosum
Trichoderma longibrachiatum
Trichophyton Rubrum Including var nigricans & granular
Interdigitale
Mentagrophytes Including var interdigitale & goetzii
Violaceum
Tonsurans
schoenleinii
Megninii
concentricum
Sourdanense
gourvilii
verrucosum
terrestre
Trichosporon beigleii
Ulocladium botyris
chartarum
Ustilago maydis
Verticillium affinae
Albo-atrum
fusisporum
luteoalbum
Wangiella dermatitidis
Xylohypha Bantiana
표 1 계속
사람에 관련된 기생충성 병원체로서 여기에 열거된 것에 제한되지 않음
Genus Species Comments
Acanthamoeba castellanii
culbertsoni
Ancylostoma duodenale
Angiostrongylus cantonensis
costaricensis
Anisakis simplex
Ascaris lumbricoides
suum
Babesia divergens
microti
Equi
Balamuthia mandrillaris
Balantidium coli
Blastocystis hominis
Brugia malayi
pahangi
timori
Capillaria philipinensis
Clonorchis sinensis
viverrini
Contracaecum osculatum
Cryptosporidium parvum
Cyclospora cayetanensis
Dicrocoelium dendriticum
Dientamoeba fragilis
Diphyllobothrium latum
Dirofilaria immitis
Dracunculus medinensis
Echinococcus granulosus
multilocaris
vogeli
Entamoeba histolytica
Enterobius vermicularis
Enterocytozoon bieneusi
Fasciola gigantica
hepatica
buski
Giardia lamblia
intestinalis
Heterophyes
Hymenolepis diminuta
nana
Isospora belli
Leishmania aethipoica
brasiliensis
donovani
mexicana
peruviana
major
tropica
amazonensis
panamensis
guyanensis
infantum
chagasi
Loa loa
Mansonella ozzardi
perstans
streptocerca
Naegleria fowleri
Necator americanus
Onchocerca volvulus
Opisthorcis felineus
sinensis
viverinni
Paragonimus westermani
Plasmodium falciparum
vivax
Malariae
ovale
Pneumocystis carinii
Pseudoterranova decipiens
Rhinosporidium seeberi
Sarcocystis suihominis
Schistosoma haematobium
intercalatum
japonicum
mansoni
mekongi
Spirostomum teres
Strongyloides stercoralis
Taenia saginata
solium
Theileria parva
Toxocara canis
cati
Toxoplasma gondii
Trichinella native
nelsoni
spiralis
psuedospiralis
Trichomonas vaginalis
Trichostrongylus orientalis
Trichuris trichiura
Trypanosoma cruzi
brucei brucei
brucei gambiense
brucei rhodesiense
Wuchereria bancrofti
표 1 계속
이하에 열거된 것에 한정되지 않는 사람과 관련된 외피를 갖는 바이러스 병원체
외피를 갖는 바이러스: 숙주 세포막을 통해 버딩하는 것에 의해 얻어진 외부 지질단백을 갖는 바이러스
Virus Disease Comments
TOGAVIRIDAE
Alphaviruses:
Eastern equine encephalomyelitis Fever, malaise, headaches, encephalitis
Western equine encephalomyelitis Fever, malaise, headaches, encephalitis
Venezuelan equine encephalomyelitis Fever, malaise, headaches, encephalitis Includes Mucambo, Everglades, Tonate, Pixuna, Cabassou virus/fever
Ross river Fever, rash, arthralgia
Chikungunya Fever, rash, arthralgia, arthritis
Mayaro Fever, rash, arthralgia
O'nyong'nyong Fever, rash, arthralgia
Sindbis Fever, rash, arthralgia Ockelbo, Karelian & Pogosta fevers
Ndumu
Middleburg
Bebaru
Sagiyama
Sem(i)liki forest
Getah
Rubiviridae :
Rubella German Measles
Flaviviruses :
Yellow fever hepatitis with a hemorrhagic diathesis high fever, chills, headache, muscle aches, vomiting, and backache, shock, bleeding, and kidney & liver failure
Dengue (types 1, 2, 3 & 4) immunopathologic disease (shock & haemorrhage) Dengue fever or Dengue hemorrhagic fever
St Louis Encephalitis encephalitis
Japanese Encaphalitis Encephalitis
Murray Valley Encaphalitis Encephalitis
Russian Spring Summer Encaphalitis Encephalitis Tick-borne
Tick-borne encephalitis Encephalitis
Kyanasur forest disease encephalitis Tick-borne
Powassan Hemorrhagic fever Tick-borne
Hepatitis C
Hepatitis G
Israel Turkey Meningitis Meningitis
Rocio
Sal Vieja
San Perlita
Spondweni
Wesselsbron
West Nile Fever
Absettarov Tick-borne
Hanzalova Tick-borne
Hypr Tick-borne
Kumlinge Tick-borne
Louping ill Tick-borne
Negishi Tick-borne
Omsk Tick-borne
BUNYAVIRIDAE
Bangui Fever, rash
Bhanja Fever, encephalitis
Issk-kul Fever
Kasokero Fever
Nyando Fever
Tamdy Fever
Tataguine Fever
Wanowrie Fever, hemorrhage
Bunyaviruses :
Akabene
Bunyamwera Fever Bunyamwera, Germiston, Ilesha, Shokwe, Tensaw, Wyeomyia
Bwamba Fever Bwamba, Pongola
C Fever Apeu, Caraparu, Itaqui, Madrid, Marituba, Murutucu, Nepuyo, Oriboca, Ossa, Restan
California Fever &/or Encephalitis California encephalitis, Guaroa, Inkoo, La Crosse, Snowshoe hare, Jamestown Canyon, Tahyna
Guama Fever Catu, Guama
Simbu Fever Shuni, Oropouche
Phleboviridae :
Phlebotomous fever fever Alenquer, Candinu, Chagres, Naples, Punto Toro, Rift Valley Fever, Sicilian, Toscana
Sandfly fever
Nairoviridae :
Crimean-Congo Hemmorhagic fever
Nairobi Sheep Disease Fever
Hazara
Hantaviridae :
Hantaan Hemorrhagic fever with renal syndrome or Hantavirus Pulmonary Syndrome Hantaan (Korean haemorrhagic fever), Puumala, Seoul, Sin Nombre (Muerto Canyon), New York, Black Creek Canal
Belgrade (Dobrava)
Prospect Hill
ARENAVIRIDAE
LCM-Lassa-virus-complex (Old World Arenaviruses) Ippy, Lassa Fever, Lymphotic choriomeningitis, Mobala, Mobeia
Tacaribe-virus-complex Ampari, Flexal, Guanarito, Junin, Latino, Machupo, Parana, Pichinde, Sabia, Tamiami
ORTHOMYXOVIRIDAE
Influenza Types A, B & C
Dhori Tick-borne
Thogoto Tick-borne
PARAMYXOVIRIDAE
Rubulavirus Newcastle Disease
Nipah
Hendra Equine morbillivirus
Human metapneumonovirus
Paramyxovirus :
Mumps
Parainfluenza mild, febrile common cold to severe, potentially life-threatening croup, bronchiolitis, and pneumonia Types 1-4 (4 is sub-divided into A & B)
Pneumovirus :
Respiratory Synctial Virus Types A & B
Morbillivirus :
Measles
CORONAVIRIDAE
Coronavirus Cold
SARS Severe acute respiratory syndrome
RHABDOVIRIDAE
Piry
Lyssaviridae :
Rabies Rabies
Lagos Bat
Mogola
Duvenhage
European Bat Lyssavirus
Vesiculovirus :
Vesiculovirus Vesicular Stomatitis Types 1-4
RETROVIRIDAE
Oncoviridae :
Human T-cell Leukaemia lymphoproliferative and neurologic disorders Types 1, 2 & 5
Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus
Lentiviridae :
Human Immunodeficiency Virus AIDS Types 1 & 2
Simian Immunodeficiency Virus
Spumaviridae :
Human Foamy Virus
HERPESVIRIDAE
Herpes simplex Genital & oral herpes Types 1 & 2
Varicella-zoster virus Chicken Pox
Cytomegalovirus hepatosplenomegaly, retinitis, rash, and central nervous system involvement & possibly mononucleosis
Epstein-Barr virus Mononucleosis
Human herpesvirus exanthem subitem (roseola) Types 6 & 7
Kaposi's Sarcoma virus Kaposi's sarcoma Human herpesvirus type 8
B virus encephalitis
FILOVIRIDAE
Ebola Reston multiple hemorrhagic manifestations, marked hepatic involvement, disseminated intravascular coagulation, and shock
Ebola Siena
Ebola Sudan
Ebola Zaire
Marburg
표 2
아미노산 폴리머 코드
KKK - L-Lysine trimer
RRR - L-Arginine trimer
HHH - L-Histidine trimer
WWW - L-Tryptophan trimer
pK3-14 - Poly-L-lysine-HBr 500-2,000Da (3-14aa)
pK7-27 - Poly-L-lysine-HBr 1,000-4,000Da (7-27aa)
pK100-200 - Poly-L-lysine-HCl 15,000-30,000Da (100-200aa)
pKd27-100 - Poly-D-lysine-HBr 4,000-15,000Da (27-100aa)
pR28-86 - Poly-L-arginine-HCl 5,000-15,000 (28-86aa)
본 발명은 항균성 펩티드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 항균성 펩티드를 포함하는 제약학적 조성물 및 치료에서의 펩티드의 사용, 특히 미생물 감염의 치료에서의 펩티드의 사용에 관한 것이다.

Claims (38)

  1. 약제학적 사용을 위해 화학식 I에 따른 아미노산을 포함하는 펩티드, 상기 펩티드의 변이체(variant) 또는 상기 펩티드의 약제학적으로 허용된 염,
    ((X)l(Y)m)n (I)
    여기서, l 및 m 은 0 내지 10의 정수; n은 1 내지 10의 정수; X 및 Y는 같거나 서로 다르며, 아르기닌 및 리신으로부터 선택됨.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 X 및/또는 Y는 D 또는 L 아미노산인 펩티드 또는 펩티드 변이체.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 X 및 Y는 교대성 아미노산(alternating amino acids)인 펩티드 또는 펩티드 변이체.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 X 및 Y는 동일한 펩티드 또는 펩티드 변이체.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 X는 리신이고 상기 Y는 아르기닌인 펩티드 또는 펩티드 변이체.
  6. 제 1 항에 있어서,
    상기 펩티드는 3 내지 200개의 아미노산을 포함하는 펩티드 또는 펩티드 변이체.
  7. 제 6 항에 있어서,
    상기 펩티드는 3 내지 100개의 아미노산을 포함하는 펩티드 또는 펩티드 변이체.
  8. 제 1 항에 있어서,
    상기 펩티드는 3 내지 50 개의 아미노산을 포함하는 펩티드 또는 펩티드 변이체.
  9. 제 8 항에 있어서,
    상기 펩티드는 3 내지 15개의 아미노산을 포함하는 펩티드 또는 펩티드 변이체.
  10. 제 9 항에 있어서,
    상기 펩티드는 3 내지 7개의 아미노산을 포함하는 펩티드 또는 펩티드 변이 체.
  11. 제 1 항 내지 10 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 펩티드는 비환식(acyclic)인 펩티드 또는 펩티드 변이체.
  12. 약제학적으로 유효량을 갖는 제 1 항 내지 11 항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 펩티드 및 약제학적으로 허용된 운반체, 첨가제 또는 희석제를 포함하는 조성물.
  13. 제 12 항에 있어서,
    제 1 항 내지 12 항 중 어느 한 한의 펩티드를 적어도 두 개 이상 포함하며, 이 적어도 두 개 이상의 펩티드들은 서로 다른 조성물.
  14. 제 12 항 또는 13 항에 있어서,
    상기 첨가제 또는 희석제는 산, 디메틸설폰(dimethylsulphone), n-(2-머캡토프로피오닐)글리신(n-(2-mercaptopropionyl)glycine), 2-n-노닐-1, 3-다이옥소란(2-n-nonyl-1,3 dioxolane) 및 에틸 알코올로 이루어진 그룹에서 선택되는 조성물.
  15. 제 14 항에 있어서,
    상기 첨가제 또는 희석제는 아세트산(acetic acid), 시트릭산(citric acid), 보론산(boric acid), 젖산(lactic acid), 프로피온산(propionic acid), 인산(phosphoric acid), 벤조산(benzoic acid), 부틸산(butyric acid), 말론산(malonic acid), 말산(malic acid), 옥살산(oxalic acid), 숙신산(succinic acid) 또는 타르타르산(tartaric acid)으로 이루어진 그룹에서 선택된 산인 조성물.
  16. 제 15 항에 있어서,
    상기 산은 아세트산인 조성물.
  17. 제 16 항에 있어서,
    상기 아세트산은 상기 조성물 내에서 1%, 0.5%, 0.25%, 0.1%, 0.05% 또는 0.01% 보다 적은 농도로 존재하는 조성물.
  18. 미생물 감염을 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서 제 1 항 내지 11 항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  19. 제 18 항에 있어서,
    상기 미생물 감염은 박테리아성(bacterial) 병원체, 기생(parasitic) 병원체, 원생동물(protozoal) 병원체, 바이러스성(viral) 병원체 또는 진균성 변원 체(fungal pathogen)에 의한 것인 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  20. 제 19 항에 있어서,
    상기 박테리아성 병원체는 Staphylococcus spp., e.g. Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis ; Enterococcus spp., e.g. Enterococcus faecalis; Streptococcus pyogenes ; Listeria spp.; Pseudomonas spp.; Mycobacterium spp., e.g. Mycobacterium tuberculosis; Enterobacter spp.; Campylobacter spp.; Salmonella spp.; Streptococcus spp., e.g. Streptococcus Group A or B, Streptoccocus pneumoniae ; Helicobacter spp., e.g. Helicobacter pylori; Neisseria spp., e.g. Neisseria gonorrhea, Neisseria meningitidis ; Borrelia burgdorferi; Shigella spp., e.g. Shigella flexneri ; Escherichia coli; Haemophilus spp., e.g. Haemophilus influenzae ; Chlamydia spp., e.g. Chlamydia trachomatis , Chlamydia pneumoniae , Chlamydia psittaci ; Francisella tularensis; Bacillus spp., e.g. Bacillus anthracis ; Clostridia spp., e.g. Clostridium botulinum ; Yersinia spp., e.g. Yersinia pestis ; Treponema spp.; Burkholderia spp.; e.g. Burkholderia mallei 및 B pseudomallei 으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 박테리아 종인 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  21. 제 19 항에 있어서,
    상기 바이러스성 병원체는 휴먼 면역 결핍 바이러스(Human Immunodeficiency Virus)(HIV1 & 2); 휴먼 T 셀 백혈병 바이러스(Human T Cell Leukaemia Virus)(HTLV 1 & 2); 에볼라 바이러스(Ebola virus); 휴먼 유두종 바이러스(human papilloma virus)(e.g. HPV-2, HPV-5, HPV-8 HPV-16, HPV-18, HPV-31, HPV-33, HPV-52, HPV-54 and HPV-56); 파포바바이러스(papovavirus); 리노바이러스(rhinovirus); 폴리오바이러스(poliovirus); 헤르페스바이러스(herpesvirus); 아데노바이러스(adenovirus); 엡스타인-바 바이러스(Epstein Barr virus); 인플루엔자 바이러스(influenza virus), B형 간염 및 C형 간염 바이러스(hepatitis B and C viruses), 두창 바이러스(Variola virus), 로타바이러스(rotavirus) 또는 사스 코로나바이러스(SARS coronavirus)로 이루어진 그룹에서 선택된 바이러스인 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  22. 제 19 항에 있어서,
    상기 기생 병원체는 Trypanosoma spp., ( Trypanosoma cruzi , Trypansosoma brucei), Leishmania spp., Giardia spp., Trichomonas spp., Entamoeba spp., Naegleria spp., Acanthamoeba spp., Schistosoma spp., Plasmodium spp., Crytosporidium spp., Isospora spp., Balantidium spp., Loa Loa, Ascaris lumbricoides, Dirofilaria immitis , Toxoplasma ssp., e.g Toxoplasma gondii로 이루어진 그룹에서 선택된 것인 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  23. 제 19 항에 있어서,
    상기 진균성의 병원체는 속 Candida spp., (e.g. C. albicans ), Epidermophyton spp., Exophiala spp., Microsporum spp., Trichophyton spp., (e.g T. rubrum and T. interdigitale ), Tinea spp., Aspergillus spp., Blastomyces spp., Blastoschizomyces spp., Coccidioides spp., Cryptococcus spp . , Histoplasma spp . , Paracoccidiomyces spp., Sporotrix spp., Absidia spp., C ladophialophora spp., Fonsecaea spp., Phialophora spp., Lacazia spp., Arthrographis spp., Acremonium spp., Actinomadura spp., Apophysomyces spp., Emmonsia spp., Basidiobolus spp., Beauveria spp., Chrysosporium spp., Conidiobolus spp., Cunninghamella spp., Fusarium spp., Geotrichum spp., Graphium spp., Leptosphaeria spp., Malassezia spp., Mucor spp., Neotestudina spp., Nocardia spp., Nocardiopsis spp., Paecilomyces spp., Phoma spp., Piedraia spp., Pneumocystis spp., Pseudallescheria spp., Pyrenochaeta spp., Rhizomucor spp., Rhizopus spp., Rhodotorula spp., Saccharomyces spp., Scedosporium spp., Scopulariopsis spp., Sporobolomyces spp., Syncephalastrum spp., Trichoderma spp., Trichosporon spp., Ulocladium spp., Ustilago spp., Verticillium spp., Wangiella spp.로 부터 얻어진 것인 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  24. 제 23 항에 있어서,
    상기 병원체는 Trichophyton spp. 속인 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  25. 제 24 항에 있어서,
    상기 병원체는 Trichophyton interdigitale. 인 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  26. 제 24 항에 있어서,
    상기 병원체는 Trichophyton rubrum 인 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  27. 제 19 항에 있어서,
    상기 진균성 감염은 손톱 진균증(onychomycosis)인 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  28. 점막 감염을 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서 제 1 항 내지 11 항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  29. 제 28 항에 있어서,
    상기 감염은 낭포성 섬유증(cystic fibrosis)인 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  30. 제 1 항 내지 11 항 중 어느 한 한의 펩티드 또는 펩티드 변이체 또는 제 12 항 또는 13 항의 조성물에 부착되거나 제공되는 기질(substrate).
  31. 제 30 항에 있어서,
    상기 기질은 직물 또는 콜라겐 물질을 포함하는 기질.
  32. 상처를 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서 제 1 항 내지 11 항 중 어느 한항의 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  33. 제 32 항에 있어서,
    상기 상처는 베인 것이거나 화상인 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  34. 궤양을 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서 제 1 항 내지 11 항의 펩티드 또는 펩티드 변이체의 사용.
  35. 제 1 항 내지 11 항의 펩티드 또는 펩티드 변이체, 또는 제 12 항 또는 13 항의 조성물을 치료상으로 유효량으로 환자에 투여하는 것을 포함하는 환자에 있어서 미생물 감염을 예방 또는 치료하는 방법.
  36. 제 31 항에 있어서,
    상기 미생물 감염은 진균성 감염인 미생물 감염을 예방 또는 치료하는 방법.
  37. 제 35 항 또는 36 항에 있어서,
    펩티드, 펩티드 변이체 또는 조성물이 상기 환자의 피부 또는 손발톱에 국소적으로 투여되는 미생물 감염을 예방 또는 치료하는 방법.
  38. 제 1 항 내지 11 항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 펩티드 변이체, 제 12 항 또는 13 항의 조성물 또는 제 30 항 또는 31 항의 기질을 치료상으로 유효량으로 상처에 제공하는 것을 포함하는 환자의 상처 치료 방법.
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