KR20070065888A

KR20070065888A - 염증성 장질환을 치료하기 위한(ｚ)-2-시아노-3-하이드록시-부트-2-엔산-(4'-트리플루오로메틸페닐)-아미드의 용도

Info

Publication number: KR20070065888A
Application number: KR1020077008909A
Authority: KR
Inventors: 리차드 디 쉐이어; 스콧 디 스타이렌
Original assignee: 아벤티스 파마슈티칼스 인크.
Priority date: 2004-10-19
Filing date: 2005-10-18
Publication date: 2007-06-25
Also published as: EP1804782A1; US20070197643A1; SG142305A1; CA2584655A1; JP2008517059A; BRPI0518205A; RU2007118691A; IL182591A0; CN101043883A; AU2005295511A1; MX2007004265A; WO2006044741A1

Abstract

본 발명은 크론병 및 궤양성 대장염을 포함한 염증성 장질환의 증상에 대해서 환자를 치료하는데 있어서의 화학식 I의 화합물의 용도에 관한 것이다.

화학식 I

크론병, 궤양성 대장염, 염증성 장질환, 테리플루노마이드, 레플루노마이드

Description

염증성 장질환을 치료하기 위한 (Ｚ)-2-시아노-3-하이드록시-부트-2-엔산-(4'-트리플루오로메틸페닐)-아미드의 용도{Use of (Z)-2-cyano-3-hydroxy-but-2-enoic acid-(4'-trifluoromethylphenyl)-amide for treating inflammatory bowel disease}

본 발명은 염증성 장질환을 치료하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 통상적으로 테리플루노마이드로 알려져 있는 (Z)-2-시아노-3-하이드록시-부트-2-엔산-(4'-트리플루오로메틸페닐)-아미드를 사용한 염증성 장질환의 치료에 관한 것이다.

(Z)-2-시아노-3-하이드록시-부트-2-엔산-(4'-트리플루오로메틸페닐)-아미드(테리플루노마이드)는 하기 화학식 I로 표시되는 구조를 갖는다:

이것은 화학식 Ⅱ로 표시되는 구조를 갖는 것으로서 통상적으로 레플루노마이드로 알려져 있는 질환-변형성 항류마티스 약물 5-메틸이속사졸-4-카복실릭-(4-트리플루오로메틸)-아닐리드의 활성 대사산물이다. 레플루노마이드는 최초로 1978년 5월 2일에 허여된 미국 특허 제4,087,535호에 일반적으로 기술되어 있으며, 1981년 8월 18일에 허여된 미국 특허 제4,284,786호에 구체적으로 기술되어 있는데, 여기에서 화합물이 다발성 경화증의 치료를 위해서 사용될 수 있다고 기술되어 있다. 또한, 아자티오프린에 내성을 갖지 않는 소수의 환자에게서 크론병(Crohn's disease)을 치료하기 위한 레플루노마이드의 성공적인 사용이 문헌[참조: Prajapati, D.N., 등, 2001, American Journal of Gastroenterology, 96(9): S305]에 기술되었다. 전술한 특허들은 둘 다 그대로 본 발명에 참고로 포함된다.

만성적인 이식편 대 숙주(graft-versus-host) 질환을 치료하는데 있어서의 (Z)-2-시아노-3-하이드록시-부트-2-엔산-(4'-트리플루오로메틸페닐)-아미드(테리플루노마이드, 화학식 I)의 사용은 1990년 10월 23일에 허여된 미국 특허 제4,965,276호에 기술되어 있다. 1997년 10월 21일에 허여된 미국 특허 제5,459,163호 및 1997년 10월 21일에 허여된 미국 특허 제5,679,709호는 자가면역질환, 특히 홍반성 루푸스를 치료하는데 유용한 조성물을 기술하고 있다. 전술한 특허들은 둘 다 그대로 본 발명에 참고로 포함된다. 테리플루노마이드는 광범위한 종류의 면역세포 및 세포주들에 대한 항증식성 효과[참조: Cherwinski H. M., 등, J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;272:460-8; Prakash A., 등, Drugs 1999;58(6):1137-66; Bartlett R. R. 등, Agent Action 1991;32(1-2):10-21] 및 염증의 동물 모델에서 항염증 활성[참조: Huang, W-H. 등. Chem. Pharm. Bull., 2003, 51(3): 313-314 및 2004년 4월 6일 허여된 미국 특허 제6,716,411호]을 발생시키는 것으로 나타났다. 추가로, 이것은 피리미딘의 합성에 필수적인 효소인 효소 디하이드로오에이트 데하이드로게나제를 억제한다(Bruneau J-M, 등, Biochem. J. 1998; 36:299-303).

염증성 장질환(IBD)은 위장관의 다양한 부분에서 만성적 염증을 특징적으로 나타내는 미지의 병인론의 일련의 관련된 장질환을 나타내기 위해서 사용되는 일반적 용어이다. IBD의 대표적인 것은 크론병, 궤양성 대장염, 미확정성 대장염(indeterminate colitis), 및 감염성 대장염이다.

크론병은 미지의 병인론의 특발성 만성 장염이다. 이 질환은 20대에서 양 성별의 사람에게서 가장 빈번하게 나타나며, 만성적으로 된다. 이것은 섬유증 또는 궤양이 있는 육아종성 병변이며, 입에서 항문까지의 전체 소화관 내에 존재할 수 있다. 크론병의 임상적 증상은 복통, 전신적 권태감, 설사, 하혈 및 잠재출혈 양성(occult bleeding positive), 체온상승, 체중 감소, 빈혈, 장폐쇄증, 복부종양 및 복막염이다.

궤양성 대장염은 점막을 공격하여 종종 미란(erosion) 또는 궤양을 형성하는 대장의 미만성 비특이적(diffuse nonspecific) 염증의 설명할 수 없는 질환이다. 병변은 주로 점막 밑에 존재한다. 이 질환의 임상적 증상은 점성 혈변, 복통, 혈변, 물 같은 변, 체온상승, 식욕상실, 오심(nausea) 및 구토이다. 또한, 궤양성 대장염은 관절염, 대장의 협착 및 다량의 출혈과 같은 문제를 수반할 수 있지만, 이들의 발생빈도는 크지 않다.

IBD에 대한 현재의 치료법에는 항염증성 약물, 면역억제성 약물 및 수술이 포함된다. 생물활성 5-아미노-살리실산(5-ASA) 잔기를 갖는 설파살라진 및 관련된 약물은 중등도의 IBD 중상을 제어하고, 경쾌(remission)를 유지시키기 위해서 광범하게 사용된다. 중증의 염증은 종종 코르티코스테로이드 및 때때로 ACTH에 의해서, 또는 6-머캅토퓨린, 아자티오프린, 사이클로스포린 및 메토트렉세이트와 같은 면역억제제에 의해서 치료된다. 중증의 만성 IBD에 대한 가장 통상적인 수술 치료방법은 장절제술, 및 궁극적으로는 궤양성 대장염에 대해서만 완전한 완치법인 결장조루술(colostomy)이다.

오심, 현기증, 혈액화학에서의 변화(빈혈 및 백혈구감소증을 포함), 피부 발진 및 약물 의존성을 포함하는 심각한 부작용이 IBD에 대해 통상적으로 처방되는 약물과 연관되며, 수술 치료법은 종종 환자의 일상생활을 완전히 변화시키는 근치적(radical) 방법이다. 명백히, 현재의 치료법과 연관된 일부의 부작용 부담이 없이 IBD를 치료하기 위한 신규의 약제에 대한 필요성이 있다.

테리플루노마이드 자체는 다발성 경화증의 임상전 모델에서 효능을 나타내었으며, 다발성 경화증(MS)의 치료를 위한 임상실험 중에 있다. MS[참조: R.A. Adams, M.V. Victor 및 A.H. Ropper 편집가, Principles of Neurology, McGraw-Hill, New York, 1997, 페이지 903-921.] 및 IBD[참조: D.K. Poldosky, N. Eng. J. Med., 347, 6: 417-429] 질병의 병태생리학은 실질적으로, 테리플루노마이드에 의해서 이의 활성화가 변조되는 T-림프구를 통해서 매개된다. 또한, MS와 염증성 장질환이 부분적으로 중복됨을 시사하는 몇 가지 증거가 있다[참조: Purrman J 등. J. Clin. Gastroenterol. 1992, 14, 1: 43-46 및 Kimura K. Mayo Clin. Proc. 2000, 75, 8: 802-806].

테리플루노마이드의 투여 후에, 다량의 테리플루노마이드는 장관강(intestinal lumen) 내로 들어간다. 이것은 장간 재순환에 기인하거나, 장점막을 통해서 일어날 수 있다. 따라서, 장점막은 비교적 다량의 테리플루노마이드에 노출되며, 치료학적 효과는 전신적 자가면역질환을 치료하는데 필요한 양보다 더 작은 양에서 획득될 수 있다. GI 점막의 통합성(integrity)에서의 변화는 국소 노출의 추가의 증진을 제공할 수 있다. 따라서, 전신적 질환을 치료하는 용량에서 조차도 우수한 테리플루노마이드의 양호한 안전성 프로필과 함께 상기한 설명을 기초로 하고, 위장관 부작용의 낮은 가능성과 연결하여 테리플루노마이드는 크론병, 궤양성 대장염, 미확정성 대장염, 및 감염성 대장염을 포함하는 IBD의 치료를 위한 잠재적으로 유용한 약물이 된다.

발명의 요약

본 발명은 염증성 장질환을 치료하기 위한 치료학적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 투여함으로써 환자의 염증성 장질환을 치료하는 방법이다:

화학식 I

발명의 상세한 설명

여기에서 사용된 용어는 본 명세서에서 정의된 의미를 갖는다.

a)"약제학적으로 허용되는 염"은 본 발명의 화합물에 의해서 만들어질 수 있는 산부가염 또는 염기부가염을 의미한다.

"약제학적으로 허용되는 산부가염"은 화학식 I로 표시되는 염기 화합물의 임의의 비독성 유기 또는 무기 산부가염이다. 적합한 염을 형성하는 무기산의 예로는 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산, 및 소듐 모노하이드로젠 오르토포스페이트 및 포타슘 하이드로젠 설페이트와 같은 산 금속염이 포함된다. 적합한 염을 형성하는 유기산의 예로는 모노-, 디- 및 트리-카복실산이 포함된다. 이러한 산의 예는 예를 들어, 아세트산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 말레산, 하이드록시말레산, 벤조산, 하이드록시벤조산, 페닐아세트산, 신남산, 살리실산, 2-페녹시벤조산, p-톨루엔설폰산, 및 메탄설폰산 및 2-하이드록시에탄설폰산과 같은 설폰산이다. 모노- 또는 디-산 염이 형성될 수 있으며, 이러한 염은 수화된 형태 또는 실질적으로 무수물 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 이들 화합물의 산부가염은 물 및 다양한 친수성 유기용매에 더욱 가용성이며, 이들의 유리 염기 형태에 비해서 일반적으로 더 높은 융점을 나타낸다.

"약제학적으로 허용되는 염기 부가염"은 화학식 I의 화합물의 비독성 유기 또는 무기 염기부가염을 의미한다. 이의 예는 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 또는 바륨 수산화물과 같은 알칼리 금속 또는 알칼리-토금속 수산화물; 암모니아, 및 메틸아민, 트리메틸아민 및 피콜린과 같은 지방족, 지환족 또는 방향족 유기 아민이다. 적절한 염의 선택은 에스테르가 가수분해되지 않도록 하기 위해서 중요할 수 있다. 적절한 염에 대한 선택 기준은 본 기술 분야에서 숙련된 전문가에게 공지된 것이다.

b) "환자"는 예를 들어, 쥐, 생쥐, 개, 고양이, 기니아 피그, 및 사람과 같은 영장류와 같은 온혈동물을 의미한다.

c) "치료하다" 또는 "치료하는"은 증상을 완화시키거나, 일시적이거나 영구적인 기준으로 증상의 원인을 제거하거나, 또는 증상의 발현 및 지정된 질병 또는 상태의 진행을 방지하거나 느리게 하는 것을 포함하는 모든 치료를 의미하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

d) "치료학적 유효량"은 지정된 질병 또는 상태를 치료하는데 효과적인 화합물의 양을 의미한다.

e) "약제학적으로 허용되는 담체"는 약제학적 조성물, 즉 환자에게 투여할 수 있는 투약형의 형성을 가능하게 하기 위하여 본 발명의 화합물과 혼합되는 비독성 용매, 분산제, 부형제, 보조제 또는 이 밖의 물질이다. 이러한 담체의 한 가지 예는 비경구 투여에 일반적으로 사용되는 약제학적으로 허용되는 오일이다.

f) "입체이성질체"는 이들의 원자의 공간적 배향만이 상이한 개개 분자들의 모든 이성질체에 대한 일반적 용어이다. 이것에는 거울상 이성질체(enantiomer), 기하(시스/트랜스) 이성질체, 및 서로에 대해서 거울상이 아닌, 하나 이상의 키랄 중심을 갖는 화합물들의 이성질체(부분입체이성질체)가 포함된다.

g) "레플루노마이드"는 5-메틸이속사졸-4-카복실릭-(4-트리플루오로메틸)-아닐리드에 대한 일반명이다.

h) "테리플루노마이드"는 (Z)-2-시아노-3-하이드록시-부트-2-엔산-(4'-트리플루오로메틸페닐)-아미드의 일반명이다.

화학식 I의 화합물의 합성방법은 밝혀져 있으며, 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 잘 알려진 방법들에 의해서 수행된다. 예를 들어, 1996년 4월 2일에 허여된 미국 특허 제5,504,084호 및 1999년 11월 23일에 허여된 미국 특허 제5,990,141호는 합성방법을 기술하고 있다. 전술한 특허들은 본 발명에 참고로 포함된다. 미국 특허 제5,990,141호에 기술된 바와 같은 한 가지 합성방법은 반응식 1에 설명되어 있다.

반응식 1의 단계 A에서는, 시판되는 시아노아세트산 에틸 에스테르를 상승된 온도에서 시판되는 4-트리플루오로메틸아닐린 이 자체와 반응시켜 시아노아세트-(4-트리플루오로메틸)아닐리드를 수득한다. 단계 B에서는, 단계 A로부터의 생성물을 테트라하이드로푸란에 용해시키고, 아세토니트릴 중의 NaH와 반응시킨 후에 아세틸 클로라이드와 반응시켜 화학식 I의 화합물을 생성시킨다.

따라서, 본 발명의 실시에 따라 치료학적 유효량의 화학식 I의 화합물, 이의 입체이성질체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 임의로 약제학적으로 허용되는 담체와 조합하여 염증성 장질환이 있는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 염증성 장질환을 치료하는 방법이 기술된다.

화학식 I

본 발명의 방법의 또 다른 양태에서, 상기한 염증성 장질환은 크론병이다.

본 발명의 방법의 추가의 양태에서, 상기한 염증성 장질환은 궤양성 대장염이다.

본 발명의 방법의 또 다른 양태에서, 상기한 염증성 장질환은 미확정성 대장염이다.

본 발명의 방법의 또 다른 추가의 양태에서, 상기한 염증성 장질환은 감염성 대장염이다.

본 발명의 방법의 추가의 양태에서, 상기한 화합물의 치료학적 유효량은 전신적 자가면역질환을 치료하는데 필요한 양보다 적은 양이다.

본 발명의 방법의 또 다른 양태에서, 상기한 화합물의 치료학적 유효량은 약 10 mg/kg/일 미만인 양이다.

본 발명의 방법의 또 다른 양태에서, 상기한 화합물의 치료학적 유효량은 1.0 mg/kg/일 미만 내지는 약 10 mg/kg/일의 양이다.

상술한 상태를 앓고 있는 환자를 치료하는 경우에, 화학식 I의 화합물은 경구, 설하, 구강(buccally), 피하, 근육내, 정맥내, 경피, 비내, 직장, 국소 등을 포함하여, 화합물을 치료학적 유효량에서 생체 이용 가능하도록 만드는 어떤 형태나 모드로도 투여될 수 있다. 제제를 제조하는 기술분야에서 숙련된 전문가는 치료할 상태 또는 질환을 위해서 선택된 화합물의 개별적인 특징, 질환의 단계, 환자의 상태 및 이 밖의 관련된 환경에 따라서 적절한 투여의 형태 및 모드를 결정할 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 참고로 포함된 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18판, Mack Publishing Co. (1990)]을 참고로 한다.

본 발명의 화합물은 예를 들어, 정제, 트로치(troche), 캅셀제, 엘릭서, 현탁제, 용액, 시럽, 웨이퍼(wafers), 츄잉검 등의 형태로 경구적으로 투여될 수 있으며, 하나 또는 그 이상의 다음의 보조제를 함유할 수 있고: 미세결정성 셀룰로즈, 트라가칸트(tragacanth) 고무 또는 젤라틴과 같은 결합제; 전분 또는 락토오즈와 같은 부형제; 알긴산, 프리모젤(Primogel), 옥수수 전분 등과 같은 붕해제(disintegrating agents); 마그네슘 스테아레이트 또는 스테로텍스(Sterotex)와 같은 윤활제; 콜로이드성 실리콘 디옥사이드와 같은 활택제(glidants); 또한, 슈크로즈 또는 사카린과 같은 감미제, 또는 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지향과 같은 방향제가 첨가될 수 있다. 단위투약형이 캅셀제인 경우에, 이것은 상기한 유형의 물질 이외에도 폴리에틸렌 글리콜 또는 지방유와 같은 액체 담체를 함유할 수도 있다. 이 밖의 다른 단위투약형은 단위투약형의 물리적 형태를 변화시키는 이 밖의 다른 다양한 물질을, 예를 들어, 코팅제로 함유할 수 있다. 따라서, 정제 또는 환제는 당, 쉘락 또는 이 밖의 다른 장용성 코팅제(enteric coating agents)에 의해서 코팅될 수 있다. 시럽제는 본 발명의 화합물 이외에도 감미제로서 슈크 로즈 및 특정의 보존제, 염료 및 착색제 및 향료를 함유할 수 있다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 또한, 국소적으로 투여될 수도 있으며, 이렇게 투여하는 경우에 담체는 적합하게는 용액, 연고 또는 겔 기제를 포함할 수 있다. 이 기제는 예를 들어, 바셀린, 라놀린, 폴리에틸렌 글리콜, 밀랍, 광유, 물 및 알코올과 같은 희석제, 및 유화제 및 안정화제 중의 하나 또는 그 이상을 포함할 수 있다.

용액 또는 현탁제는 또한 다음의 보조제 중의 하나 또는 그 이상을 포함할 수도 있다: 주사용 물, 식염수 용액, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 이 밖의 다른 합성용매와 같은 멸균 희석제; 벤질알콜 또는 메틸 파라벤과 같은 항균제; 아스코르빈산 또는 소듐 비설파이트와 같은 항산화제; 에틸렌 디아민테트라아세트산과 같은 킬레이트화제; 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트와 같은 완충제; 및 염화나트륨 또는 덱스트로즈와 같은 긴장성(tonicity) 조정제. 비경구용 제제는 앰플, 일회용 주사기 또는 수회 투약 용량 바이알 내에 넣을 수 있다.

화학식 I의 화합물이 치료학적으로 작용하는 이의 능력을 나타내는 투약량 범위는 이의 중증도, 환자, 제제, 환자가 앓고 있는 이 밖의 다른 기저 질환(underlying disease) 상태, 및 환자에게 동시에 투여될 수 있는 이 밖의 다른 약제에 따라서 달라질 수 있다. 일반적으로, 화학식 I의 화합물은 약 0.001 mg/환자의 체중 kg/일 내지 약 100 mg/환자의 체중 kg/일의 투약량에서 이들의 치료학적 활성을 나타낼 수 있다.

본 명세서에 기술된 모든 문헌들은 본 발명에 온전히 참고로 포함된다.

도 1은 쥐의 실험적 알레르기성 뇌척수염(EAE)에서의 증상에 대해 3가지 상이한 용량으로 경구적으로(p.o.) 투여된 경우의 테리플루노마이드의 효과를 비이클(vehicle) 및 덱사메타존과 비교하여 나타낸 것이다.

하기의 실시예는 본 발명을 더 설명하기 위해서 제시된 것이다. 그러나, 이것이 본 발명을 어떤 식으로든 제한하는 것으로 해석되지는 않아야 한다.

실시예 1

쥐의 실험적 알레르기성 뇌척수염(쥐의 EAE)

본 실시예는 MS와 연관된 뇌 및 척수의 염증인 T-세포 관련된 자가면역질환을 연구하는 방법을 설명한다(참조: Bolton, C. Multr. Scler. 1995; 1(3); 143-9).

실험적 알러지성 뇌척수염(EAE)은 전체 척수 균질물 또는 이의 성분(마이엘린 기본 단백질)에 의해서 감작(sensitization)시킨 후에 감수성 동물에서 나타나는 신경계의 T-세포-매개된 자가면역질환이다. EAE 설치류 모델은 MS 환자에게서 관찰되는 뇌 및 척수의 염증을 연구하기에 적절한 도구이다. 설치류에서, 전체 척수 또는 마이엘린 기본 단백질과 같은 척수 성분의 주사는 T-림프구의 활성화를 기 본으로 하는 자가면역반응을 유도한다. 임상적 질환은 온화한 보행장애 및 꼬리 이완증(tail atony)부터 마비 및 사망으로 끝나는 범위의 행동이상의 광범한 스펙트럼으로 관찰되는 것으로서 일반적으로 접종한 지 약 8-10일 후에 나타나게 된다. 일반적으로 체중 감소가 일어난다. 생존하는 동물들에서, 대부분의 동작 기능의 다양한 회복이 수반되는 자발적 회복이 발생한다. 종, 알레르기 항원(allergen), 및 사용된 방법에 따라서, EAE 모델에 의해서 시험한 동물은 단일회(급성 EAE) 또는 수회(만성적 재발성 EAE) 공격을 겪을 수 있다. 몇 가지 치료 패러다임이 사용될 수 있다: 면역화시키기 전에, 비증후적 기간 중에, 또는 임상적 질환 중에 선택된 약물 또는 치료를 투여할 수 있다.

동물:

암컷 루이스(Lewis) 쥐, 160-220g(Charles River)

항원:

전체 기니아 피그 척수(Harlan Biosciences).

완전 프로인트 보조액 H37 Ra [1mg/ml 마이코박테리움 튜버큘로시 스(Mycobacterium Tuberculosis) H37 Ra](Difco).

추가의 항원:

마이코박테리움 튜버큘로시스(Difco).

보르데텔라 퍼튜시스(Bordetella Pertussis) [가열 살균] (Difco).

항원 제제: (약 720마리의 동물에 대한 것임)

1. 동결된 기니아 피그 척수 5 g의 무게를 단다.

2. 5g의 척수를 환저 원심분리관 내의 5 ml 0.9% 식염수(1g/ml)에 첨가한다.

3. 조직이 완전히 붕괴될 때까지(약 5분) 티슈-테크(Tissue-tech)를 사용하여 얼음 상에 균질화시킨다.

4. 200 mg 마이코박테리움 튜버큘로시스(20 mg/ml 완전 프로인트 보조액 H37 Ra)가 보충된 10 ml 완전 프로인트 보조액을 첨가한다.

5. 균질물/보조액을 18 게이지 유화 니들(emulsifying needle)이 장착된 10 ml 주사기 내로 흡인함으로써 균질물/보조액을 튜브로부터 추출한다.

6. 이것이 니들을 통해서 계속해서 통과하기 어렵게 될 때까지(약 5분 {여기에서는 오일상과 수성상 사이에서 분리는 없어야 한다}) 두 개의 30 ml 유리 주사기 사이에서 유화시킨다.

7. 즉시 사용하거나, 또는 필요할 때까지(30분 이하) 얼음 상에서 유지시킨다(동결시키지는 않음).

프로토콜

1. 암컷 루이스 쥐(Charles River)는 사료와 물을 자유롭게 먹도록 하고, 실험에 사용하기 전에 최소 3일을 순응시켜야 한다.

2. 체중 160 및 220 g의 쥐를 우선 2-5분 동안, 5% 이소플루란(Aerrane, Fort Dodge), 30% O₂, 70% N₂O로 유도한다.

3. 그 후, 쥐를 순환수 가열 블랭킷(circulating water heating blanket; Gaymar)(배면을 위로 한다) 상에 놓고, 마취가스의 자발적인 호흡을 위해서 노즈콘(nose cone) 내에 배치시킨다. 이소플루란을 2%로 감소시킨다.

4. 항원 또는 생리식염수를 뒷발의 복면 내로 2회 피하주사(각각 0.1 ml 씩)한다.

5. 동물을 노즈콘으로부터 꺼내어 무게를 재고, 번호를 매긴다.

6. 쥐를 마취로부터 깨도록 하고, 각각의 우리에 넣는다.

7. 동물들의 EAE 유도의 징후에 대해서 매일 관찰한다(이하의 판단기준 참조).

단계 0 정상

단계 1 비정상적인 보행 및 꼬리 이완증

단계 2 하나 또는 두 개의 뒷다리의 경증이지만 확실한 허약함

단계 3 하나 또는 두 개의 뒷다리의 중증의 허약함 또는 경증의 운동실조

단계 4 중증의 대부전마비(paraparesis) 및 최소의 뒷다리 운동

단계 5 뒷다리의 운동이 없고, 대마비(paraplegia)

단계 6 자발적인 운동이 없고 호흡이 손상된 빈사상태.

증가된 정도의 앞다리 침습 및 요실금 및 변실금이 또한 일 어날 수도 있다.

단계 7 사망

치료는 면역화시킨 후 10일째에 시작하였다. 이 모델에서 질환의 증상은 일반적으로 접종한 지 10-11일 후에 나타나기 때문에, 이 시점이 MS의 급성 에피소드의 초기상을 나타내는 것으로 간주될 수 있다. 치료 시작의 이러한 지연은 약물을 접종 시에, 또는 그 전에도 투여하는 전통적으로 사용되는 프로토콜보다 임상적 상황을 더 근접하게 모사하는 것으로 판단된다[참조: Teitelbaum D. 등, Proc Natl Acad Sci USA 1999; 96: 3842-3847 및 Brod S. A., 등, Ann Neurol 2000; 47: 127-131].

쥐에서의 EAE의 증상에 대한 다양한 용량의 테리플루노마이드의 효과를 도 1에 나타내었다. 덱사메타존은 비교를 위해서 도면에 포함되어 있다.

실시예 2

2,4- 디니트로벤젠설폰산 ( DNBS ) 유도된 원위 대장염( Distal Colitis)

본 실시예는 2,4-디니트로벤젠설폰산(DNBS) 유도된 원위 대장염의 모델(염증성 장질환의 모델)을 사용하여 본 발명의 한 가지 화합물의 항염증 활성을 설명하는 것이다.

24시간 동안 단식시킨 3마리의 수컷 또는 암컷 쥐의 그룹을 사용한다. DNBS(2,4-디니트로벤젠설폰산, 0.5 ml 에탄올 30% 중의 30 mg)를 대장내 점적주입한 후에 카눌라를 통해서 공기(2 ml)를 온화하게 주입하여 용액이 대장 내에 확실 히 유지되도록 함으로써 원위 대장염을 유도한다. 시험물질은 DNBS를 점적주입하기 24시간 및 2시간 전에 PO(30 mg/kg)로 투여한다. 그 후, 동물에게 매 24시간 마다 연속 5일 동안 투여한다. 화합물 투여 패턴으로서 대조군에 비이클 만을 제공한다. 시험화합물의 마지막 용량을 투여한 지 24시간 후에 동물을 희생시키고, 각각의 대장을 절제하여 무게를 잰다. 동물 대장 중량과 체중 사이의 비교를 통한 백분율로부터 대장-대-체중 중량비를 수득한다. 비이클 처리된 대조군에 대비하여 대장-대-체중 중량비에서 30% 또는 그 이상(.+-.30%)의 감소는 유의적인 것으로 간주되었다[참조: C.M. Hogaboam 등, Eur. J. Pharmacol. 309:261 (1996)].

Claims

염증성 장질환이 있는 환자에게 치료학적 유효량의 화학식 I의 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 임의로 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 투여하는 것을 포함하여 염증성 장질환을 치료하는 방법.

화학식 I
제1항에 있어서, 상기 염증성 장질환이 크론병인 방법.
제1항에 있어서, 상기 염증성 장질환이 궤양성 대장염인 방법.
제1항에 있어서, 상기 염증성 장질환이 미확정성 대장염(indeterminate colitis)인 방법.
제1항에 있어서, 상기 염증성 장질환이 감염성 대장염인 방법.