KR20040064490A

KR20040064490A - 메주로부터 이소플라본의 추출 방법

Info

Publication number: KR20040064490A
Application number: KR1020030002119A
Authority: KR
Inventors: 노경호; 도완녀; 이광진; 최두영
Original assignee: 학교법인 인하학원
Priority date: 2003-01-13
Filing date: 2003-01-13
Publication date: 2004-07-19
Anticipated expiration: 2023-01-13
Also published as: KR100475129B1

Abstract

본 발명은 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법에 관한 것으로서, 구체적으로는 본 발명은 증숙한 콩으로 메주를 제조하는 과정에서 증숙한 콩으로부터 부산물로 발생하는 액체 성분을 분리하고, 상기 분리한 액체 성분을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 이소플라본을 추출하는 것이다. 또한, 본 발명은 메주를 발효하여 된장을 제조하는 과정에서 상층부에 부유하는 고체 성분을 분리하고, 상기 분리한 고체 성분에 알콜 또는 알콜 수용액을 넣고 교반 및 여과한 후, 여과액을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 이소플라본을 추출하는 것이다. 본 발명은 간단한 공정으로 이소플라본을 추출할 수 있고, 메주 및 된장을 제조하는 과정에서 발생하는 부산물로부터 이소플라본을 추출함으로써 생산성을 향상시키는 것을 가능하게 한다.

Description

콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법{METHOD FOR EXTRACTING ISOFLAVONE FROM SOY BEAN}

본 발명은 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법에 관한 것이다.

이소플라본(isoflavone)은 콩에 들어 있는 식물성 화합물의 한 종류이다. 이러한 이소플라본은 여성 호르몬의 일종인 에스트로겐과 구조적으로 유사할 뿐만 아니라, 생물학적인 작용도 유사하여 식물성 에스트로겐으로 불리기도 한다. 구체적으로, 이소플라본은 에스트로겐 호르몬과 구조적으로 유사하며, 생물학적인 작용도 유사하여, 체내로 투여되면 에스트로겐 호르몬과 길항 작용을 하면서, 에스트로겐 호르몬의 작용을 조절한다. 그래서, 이소플라본은 에스트로겐 호르몬과 관련되어있는 각종 암, 폐경기 증후군, 심혈관계 질환과 골다공증을 포함하는 호르몬성 질병을 치료하는데 효과적인 작용을 하는 물질로 알려져 있다.

이러한 이소플라본은 플라보노이드계의 화합물에 당 잔기가 결합한 배당체 형태와 플로보노이드계 화합물로만 된 비배당체 형태로 존재한다. 배당체 이소플라본은 다이드진(daidzin), 제니스틴(genistin), 글리시틴(glycitin), 말로닐-다이드진(malonyl-daidzin), 말로닐-글리시틴(malonyl-glycitin), 말로닐-제니스틴(malonyl-genistin), 아세틸-다이드진(acetyl-daidzin), 아세틸-글리시틴(acetyl-glycitin) 또는 아세틸-제니스틴(acethyl-genistin)이 있다. 비배당체 이소플라본은 다이드제인, 제니스테인 또는 글리시테인이 있으며, 이들은 주로 발효 식품에 많이 존재한다. 발효 식품에서는 발효에 관계되는 박테리아에 의해 배당체 형태의 이소플라본으로부터 당 잔기가 분해되면서 비배당체 형태의 이소플라본이 형성되는 것이다. 이러한 이소플라본은 다른 식물 중에서도 콩에 많이 들어 있는 것으로 알려져 있으며, 특히, 배아에 많이 들어있는 것으로 알려져 있다. 따라서, 발효 식품 또는 콩으로부터 이소플라본을 추출하여 사용하고 있다.

종래의 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법은 유기산 및 유기 용매를 이용하는 방법, 흡착 수지를 이용하는 방법, β-글루코시다제 효소를 이용하는 방법이 있는데, 이와 같은 방법을 간략히 기술하면 다음과 같다.

유기산 및 유기 용매를 이용하는 방법은 빙초산 또는 젖산에서 선택된 유기산과 아세톤, 에틸 아세테이트에서 선택된 유기 용매를 이용하여 콩으로부터 추출물을 층 분리시키고, 분리된 유기 용매에 함유된 이소플라본 비배당체를 여과 정제시키는 방법이다.

흡착 수지를 이용하는 방법은 대두 배아를 실온에서 알칼리 수용액으로 추출하여 섬유질을 제거하고 섬유질이 제거된 추출액에서 단백질을 제거한 후, 흡착 수지에 통과시켜 이소플라본과 사포닌을 흡착시키고, 메탄올 또는 에탄올과 같은 극성 용매를 흘려보내 이소플라본과 사포닌을 탈착 원적외선로에 감압 건조하여 이소플라본과 사포닌 혼합물을 얻는다. 이를 아세톤을 이용한 추출법에 의하여 사포닌 및 이소플라본을 각각 분리한 후, 원적외선로에 감압 건조하여 이소플라본을 얻는다.

β-글루코시다제를 이용하는 방법은 발효 균주인 바실러스 리케니포미스( Bacillus Licheniformis ) CK-14를 사용하여 대두 배아를 발효시키고, 이로부터 생성되는 β-글루코시다제를 이용하여 대두 배아 내에 주로 배당체 형태로 존재하는 이소플라본 성분을 생체내 흡수능이 우수한 비배당체 형태로 전환하는 방법이다. 또 다른 β-글루코시다제를 이용하는 방법은 배당체 형태의 이소플라본을 포함하는 식물성 단백질을 단백질의 등전점 이상의 pH를 가진 수성 추출제로 추출하여 단백질 및 이소플라본 배당체를 포함하는 수성 추출물을 생성한 후, 추출물내의 이소플라본 배당체의 대부분을 이소플라본 비배당체로 전환시키기에 충분한 시간, 온도, pH 조건하에 이소플라본 배당체를 β-글루코시다제와 반응시킴으로써 이소플라본 비배당체 추출물을 생성시키는 방법이다.

그러나, 이와 같이 종래의 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법은 전반적으로 추출 공정이 복잡하며, 콩으로부터 직접 이소플라본을 추출함으로써 생산성이 떨어진다는 문제점이 있었다.

본 발명은 상기 문제점을 해결하기 위하여 고안된 것으로서, 본 발명의 목적은 간단한 추출 공정으로 이소플라본을 추출할 수 있으며, 콩을 이용하여 메주 및 된장을 제조하는 과정에서 발생하는 부산물로부터 이소플라본을 추출함으로써 생산성을 향상시키기 위한 것이다.

도 1은 본 발명의 첫번째 태양에 따라 액체 성분으로부터 이소플라본을 추출하는 과정에서 액체 성분을 컬럼 크로마토그래피한 것을 나타낸 것이며,

도 2는 본 발명의 두번째 태양에 따라 고체 성분을 80%의 메탄올 수용액에 넣고 25℃에서 교반하여 이소플라본을 추출하는 과정에서 여과액을 컬럼 크로마토그래피한 것을 나타낸 것이며,

도 3은 본 발명의 두번째 태양에 따라 고체 성분을 40%의 에탄올 수용액에 넣고 25℃에서 교반하여 이소플라본을 추출하는 과정에서 여과액을 컬럼 크로마토그래한 것을 나타낸 것이며,

도 4는 본 발명의 두번째 태양에 따라 고체 성분을 60%의 에탄올 수용액에 넣고 25℃에서 교반하여 이소플라본을 추출하는 과정에서 여과액을 컬럼 크로마토그래피한 것을 나타낸 것이며,

도 5는 본 발명의 두번째 태양에 따라 고체 성분을 60%의 에탄올 수용액에 넣고 50℃에서 교반하여 이소플라본을 추출하는 과정에서 여과액을 컬럼 크로마토그래피한 것을 나타낸 것이며,

도 6은 본 발명의 두번째 태양에 따라 고체 성분을 80%의 에탄올 수용액에 넣고 25℃에서 교반하여 이소플라본을 추출하는 과정에서 여과액을 컬럼 크로마토그래피한 것을 나타낸 것이며,

도 7은 본 발명의 첫번째 태양에 따라 액체 성분으로부터 추출한 이소플라본을 분석용 컬럼을 이용하여 컬럼 크로마토그래피한 것을 나타낸 것이며,

도 8은 본 발명의 두번째 태양에 따라 고체 성분을 60%의 에탄올 수용액에 넣고 50℃에서 교반하여 된장 찌꺼기로부터 추출한 이소플라본을 분석용 컬럼을 이용하여 컬럼 크로마토그래피한 것을 나타낸 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 증숙한 콩으로 메주를 제조하는 과정에서 증숙한 콩으로부터 발생하는 액체 성분을 분리하고, 상기 분리한 액체 성분을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 이소플라본을 추출하는 것이다.

또한, 본 발명은 메주를 발효하여 된장을 제조하는 과정에서 상층부에 부유하는 고체 성분을 분리하고, 상기 분리한 고체 성분에 알콜 또는 알콜 수용액을 넣고 교반 및 여과한 후, 여과액을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 이소플라본을 추출하는 것이다.

이하 본 발명을 상세히 설명하기로 한다.

본 발명의 첫번째 태양은

1) 콩에 물을 넣고 증숙한 후, 여과하여 고체 성분 및 액체 성분을 분리하는 단계(단계 1);

2) 상기 액체 성분을 컬럼 크로마토그래피로 정제하는 단계(단계 2)로 이루어져 있다.

상기 단계 1에서 고체 성분 및 액체 성분을 분리하는 것은 통상적으로 메주를 제조하는 과정에서 수행되는 것이다.

구체적으로는 메주를 제조하는 과정의 첫 번째 단계는 콩에 물을 넣고 100℃ 의 온도에서 증숙하는 것이다. 이 때 콩을 물에 끓이기 전에 일정기간 동안 콩에 물을 넣고 불릴 수 있다. 두 번째 단계는 증숙한 콩을 이용하여 메주를 제형하는 것이다. 일반적으로 콩을 증숙하는 과정에서 발생하는 액체 성분은 증숙 과정에서 생성되는 부산물로서, 메주의 제형을 만드는데 과량으로 존재하므로 일정량의 액체 성분을 제거하는 것이 필요하다. 상기 액체 성분을 제거하는 방법은 증숙한 상태를 여과하여 제거할 수 있고, 또는 원심분리하여 제거할 수 있다. 본 발명에서는 상기 생성되는 액체 성분으로부터 이소플라본을 추출하는 것으로서, 메주를 제조하는 과정에서 부산물로 생성되는 액체 성분을 이용함으로써 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 생산성을 향상시켰다.

상기 단계 2에서 상기 액체 성분을 컬럼 크로마토그래피로 정제하는 것은 다양한 종류의 컬럼과 이동상 조건으로 할 수 있다. 바람직하게는, 이동상은 이동상 A와 이동상 B를 이동상 A/이동상 B = 100/0 ~ 70/30의 농도 구배를 이루도록 한다.상기 이동상 A는 물: 아세토니트릴: 아세트산 = 94.9: 5.0: 0.1(부피%)이고, 상기 이동상 B는 물: 아세토니트릴: 아세트산 = 5.0: 94.9: 0.1(부피%)이다. 상기 이동상은 1 ㎖/min으로 유지하였다.

상기에서 컬럼 크로마토그래피로 정제된 이소플라본은 플라보노이드계 화합물을 검출할 수 있는 파장의 빛을 이용하여 검출할 수 있다. 바람직하게는 260 nm에서 검출한다.

또한, 본 발명의 두 번째 태양은

1) 콩으로부터 제조된 메주를 건조시키고, 건조된 메주에 물, 소금을 넣고 메주를 발효시키는 단계(단계 1);

2) 상기 발효 과정에서 상층부에 부유하는 고체 성분을 분리하는 단계(단계 2);

3) 상기 고체 성분에 알콜 또는 알콜 수용액을 첨가하고, 교반한 다음, 여과하는 단계(단계 3);및

4) 상기 여과액을 컬럼 크로마토그래피로 정제하는 단계(단계 4)로 이루어져 있다.

상기 단계 1에서 메주를 발효시키는 단계는 된장을 제조하는 단계의 일 부분이다. 구체적으로는 본 발명의 첫번째 태양에서 기술한 방법으로 메주를 제조하고, 메주를 일정 기간동안 건조시킨 후, 메주에 물, 소금을 넣고 일정기간 발효시킨다.메주가 박테리아에 의해 발효되면서 메주 상층부에는 부유하는 고체 성분이 생기게 된다. 이 고체 성분은 박테리아에 의해 메주가 발효되는 과정에서 부산물로 생성되는 것으로서, 일반적으로는 이 고체 성분을 제거하고 남아있는 발효 상태의 메주를 교반하여 된장을 제조하게 된다. 본 발명에서는 상기 생성되는 고체 성분으로부터 이소플라본을 추출하는 것으로서, 된장을 제조하는 과정에서 부산물로 생성되는 고체 성분을 이용함으로써 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 생산성을 향상시켰다.

상기 단계 2는 상기 단계 1에서 생성된 부유하는 고체 성분을 분리하는 것이다.

상기 단계 3은 상기 분리한 고체 성분에 알콜 또는 알콜 수용액을 넣고, 교반한 다음, 여과하는 단계이다.

상기 알콜은 C₁~ C₄알콜이 바람직하며, 가장 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올을 사용할 수 있다. 상기 알콜 수용액은 20 ~ 80%(부피/부피)의 알콜을 함유하는 것이다. 상기 메탄올 또는 에탄올과 같은 극성이 높은 용매를 이용함으로써, 극성이 높은 이소플라본을 효율적으로 추출할 수 있다.

상기 고체 성분에 알콜 또는 알콜 수용액을 첨가하고, 교반이 25 ~ 50 ℃에서 수행되는 것이 바람직하다.

또한, 상기 단계를 거쳐 제조된 여과액은 불순물을 많이 함유하고 있으므로, 추가적으로 여과액을 농축한 다음, 원심분리하고 재 여과하여 여과액을 제조할 수 있다.

상기 단계 4에서 상기 단계 3으로부터 얻은 여과액을 컬럼 크로마토그래피로 정제한다. 컬럼 크로마토그래피 정제는 다양한 종류의 컬럼과 이동상 조건으로 할 수 있다. 바람직하게는, 이동상은 이동상 A와 이동상 B를 이동상 A/이동상 B = 100/0 ~ 70/30의 농도 구배를 이루도록 한다. 상기 이동상 A는 물: 아세토니트릴: 아세트산 = 94.9: 5.0: 0.1(부피:부피:부피%)이고, 상기 이동상 B는 물: 아세토니트릴: 아세트산 = 5.0: 94.9: 0.1(부피:부피:부피%)이다. 상기 이동상은 1 ㎖/min으로 유지하였다.

이하, 본 발명을 실시예에 의하여 설명한다.

그러나, 본 발명이 이 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 본 발명의 첫번째 태양에 따라 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법

콩을 6시간 동안 물에 불리고, 불린 콩에 콩 무게의 1.5배의 물을 넣은 후, 100℃ 이상의 온도에서 2시간 동안 증숙한다. 상기 끓인 용액을 1시간 동안 70 ℃에서 유지하고, 60,000 rpm 에서 1 시간 동안 원심분리하여 고체 성분을 제거하고 액체 성분을 분리한다.

상기 액체 성분 중 1 ㎕를 15㎛ 입자로 충진된 분취용 컬럼(Licrospher100RP-C_{18 ,}Merck, U.S.A )에 주입하고, 용리시켰다. 이 때 이동상 용매는 이동상 A(물: 아세토니트릴: 아세트산 = 94.9: 5.0: 0.1(부피:부피:부피(%))와 이동상 B(물: 아세토니트릴: 아세트산 = 5.0: 94.9: 0.1(부피:부피:부피(%))를 이동상 A/이동상 B = 100/0 ~ 70/30의 농도 구배로 용리시켰으며, 상기 이동상 용매의 용리 속도는 1 ㎖/min으로 유지하였다.

또한, 이소플라본을 검출하는 파장은 260 nm 이었다. 이소플라본의 위치를 알아보기 위하여, 제니스틴, 다이드제인 및 제니스테인을 포함하는 표준 시료로 동일한 실험을 실시하였다.

상기 컬럼 크로마토그래피를 실시한 결과는도 1에 나타내었다.도 1에서 보여지는 바와 같이, 본 발명에 따른 액체 성분에는 제니스테인을 포함하는 비배당체 이소플라본과 다이드진, 글리시틴 및 말로닐-제니스틴을 포함하는 배당체 이소플라본이 함유되어 있음을 알 수 있다.

또한, 미국 콩을 가지고 동일한 실험을 한 결과, 한국 콩을 가지고 실험한 것과 동일한 결과를 얻을 수 있었다.

<실시예 2> 본 발명의 두 번째 태양에 따라 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법 1

콩을 6시간 동안 물에 불리고, 불린 콩에 콩 무게의 1.5배의 물을 넣은 후, 100℃ 이상의 온도에서 2시간 동안 증숙한다. 증숙한 콩을 여과하여 고체 성분을분리하고, 메주를 제조한다. 제조한 메주를 통상적인 방법으로 건조시킨 후, 건조된 메주에 물과 소금을 메주콩에 대하여 1:4:0.8의 비율로 넣고 발효시킨다.

상기 발효 과정에서 상층부에 부유하는 고체 성분을 분리한다.

상기 분리한 고체 성분에 50 g에 80%의 메탄올 수용액 200 ml 를 넣고, 25℃에서 3 시간 동안 3,000 rpm으로 교반시켰다. 상기 교반액을 여과지를 통과시켜 여과한 후, 농축하였다. 상기 농축물을 원심분리기(Optima LE-80K)에 넣고, 4 ℃에서 1 시간 동안60,000 rpm으로 원심분리한 후, 0.45 ㎛여과지에 여과하였다.

상기 여과액 중 1 ㎕를 15㎛ 입자로 충진된 분취용 컬럼(Licrospher 100RP-C_{18 ,}Merck, U.S.A )에 주입하고, 용리시켰다. 이 때 이동상 용매는 이동상 A(물: 아세토니트릴: 아세트산 = 94.9: 5.0: 0.1(부피:부피:부피(%))와 이동상 B(물: 아세토니트릴: 아세트산 = 5.0: 94.9: 0.1(부피:부피:부피(%))를 이동상 A/이동상 B = 100/0 ~ 70/30의 농도 구배로 용리시켰으며, 상기 이동상 용매의 용리 속도는 1 ㎖/min으로 유지하였다. 또한, 이소플라본을 검출하는 파장은 260 nm 이었다.

상기 컬럼 크로마토그래피를 실시한 결과는도 2에 나타내었다.

도 2에서 보여지는 바와 같이, 다이드제인 및 제니스테인을 포함하는 비배당체 이소플라본과 말로닐-제니스틴, 다이드진, 글리시틴, 제니스틴 및 아세틸-제니스틴을 포함하는 배당체 이소플라본이 함유되어 있음을 알 수 있다. 또한, 그 중에서도 비배당체 이소플라본인 제니스테인의 함량이 높음을 알 수 있다. 이와 같이 비배당체 이소플라본의 함량이 높은 것는 된장을 발효시키는 과정에서 관여되는 박테리아가 콩에 들어 있는 배당체 이소플라본을 분해시킴으로써 비배당체 이소플라본의 함량이 높은 것으로 생각된다.

<실시예 3> 본 발명에 따른 두번째 태양에 따라 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법 2

상기 실시예 2 중에서 분리한 고체 성분 50 g 에 40 %의 에탄올 수용액 200 ml 를 넣고, 25 ℃에서 교반하는 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법을 사용하여 이소플라본을 추출하였다.

상기 컬럼 크로마토그래피를 실시한 결과는도 3에 나타내었다.

도 3에서 보여지는 바와 같이, 다이드제인, 글리시테인 및 제니스테인을 포함하는 비배당체 이소플라본과 말로닐-제니스틴, 다이드진, 글리시틴, 제니스틴, 말로닐-다이드진 및 아세틸-제니스틴을 포함하는 배당체 이소플라본이 함유되어 있음을 알 수 있다. 또한, 그 중에서도 비배당체 이소플라본인 제니스테인의 함량이 높음을 알 수 있다.

<실시예 4> 본 발명에 따른 두번째 태양에 따라 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법 3

상기 실시예 2 중에서 분리한 고체 성분 50 g 에 60%의 에탄올 수용액 200 ml 를 넣고, 25 ℃에서 교반하는 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법을 사용하여 이소플라본을 추출하였다.

상기 컬럼 크로마토그래피를 실시한 결과는도 4에 나타내었다.

도 4에서 보여지는 바와 같이, 다이드제인, 글리시테인 및 제니스테인을 포함하는 비배당체 이소플라본과 말로닐-제니스틴, 다이드진, 글리시틴, 제니스틴, 말로닐-다이드진 및 아세틸-제니스틴을 포함하는 배당체 이소플라본이 함유되어 있음을 알 수 있다. 또한, 그 중에서도 비배당체 이소플라본인 제니스테인의 함량이 높음을 알 수 있다.

<실시예 5> 본 발명에 따른 두번째 태양에 따라 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법 4

상기 실시예 2 중에서 분리된 고체 성분 50 g 에 60%의 에탄올 수용액 200 ml 를 넣고, 50℃에서 교반하는 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법을 사용하여 이소플라본을 추출하였다.

상기 컬럼 크로마토그래피를 실시한 결과는도 5에 나타내었다.

도 5에서 보여지는 바와 같이, 다이드제인과 제니스테인을 포함하는 비배당체 이소플라본과 다이드진, 글리시틴 및 제니스틴을 포함하는 배당체 이소플라본이 함유되어 있음을 알 수 있다.

<실시예 6> 본 발명에 따른 두번째 태양에 따라 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법 5

상기 실시예 2 중에서 분리한 고체 성분 50 g 에 80%의 에탄올 수용액 200ml 를 넣고, 25℃에서 교반하는 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법을 사용하여 이소플라본을 추출하였다.

상기 컬럼 크로마토그래피를 실시한 결과는도 6에 나타내었다.

도 6에서 보여지는 바와 같이, 다이드제인, 글리시테인 및 제니스테인을 포함하는 비배당체 이소플라본과 말로닐-제니스틴, 아세틸-제니스틴, 다이드진, 글리시틴 및 제니스틴을 포함하는 배당체 이소플라본이 함유되어 있음을 알 수 있다.

<실험예 1> 본 발명의 첫번째 태양에 따라 추출된 이소플라본의 분석

실시예 1의 액체 성분으로부터 추출한 이소플라본을 시료로 이용하여, 5㎛ 입자로 충진된 분석용 컬럼(RS-tech 사, 0.46cm x 25cm)을 가지고 분석하였다.

분석 조건은 다음과 같다.

이동상은 이동상 A와 이동상 B를 이동상 A/이동상 B = 100/0 ~ 70/30의 농도 구배를 이루도록 하였다. 상기 이동상 A는 물: 아세토니트릴: 아세트산 = 94.9: 5.0: 0.1(부피:부피:부피(%))이고, 상기 이동상 B는 물: 아세토니트릴: 아세트산 = 5.0: 94.9: 0.1(부피:부피:부피(%))이다. 상기 이동상은 1 ㎖/min으로 유지하였고, 이소플라본 검출 파장은 260 nm으로 하였다. 시료는 실시예 1에서 제조된 이소플라본 1㎕를 주입하였다.

또한, 본 발명에 따라 액체 성분으로부터 추출한 이소플라본의 구성성분을 알아보기 위하여, 제니스틴과 다이드제인을 혼합한 혼합물을 표준 시료로 하여 동일한 실험을 반복하였다.

분석용 컬럼을 이용하여 콩 추출액으로부터 추출한 이소플라본을 분석한 결과는도 7에 나타내었다.도 7에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 콩 추출액으로부터 추출한 이소플라본에는 다이드진, 글리시틴, 제니스틴 및 말로닐-제니스틴을 포함하는 배당체 이소플라본이 함유되어 있음을 알 수 있다.

<실험예 2> 본 발명에 따른 두번째 태양에 따라 추출한 이소플라본의 분석

실시예 5로부터 추출된 이소플라본을 시료로 이용하여, 5㎛ 입자로 충진된 분석용 컬럼(RS-tech 사, 0.46cm x 25cm)을 가지고 분석하였다.

분석 조건은 다음과 같다.

이동상은 이동상 A와 이동상 B를 이동상 A/이동상 B = 100/0 ~ 70/30의 농도 구배를 이루도록 하였다. 상기 이동상 A는 물: 아세토니트릴: 아세트산 = 94.9: 5.0: 0.1(부피%)이고, 상기 이동상 B는 물: 아세토니트릴: 아세트산 = 5.0: 94.9: 0.1(부피%)이다. 상기 이동상은 1 ㎖/min으로 유지하였고, 이소플라본 검출 파장은 260 nm으로 하였다. 시료는 실시예 2 ~ 6에서 제조된 추출물 1㎕를 주입하였다.

분석용 컬럼을 이용하여 고체 성분으로부터 추출한 이소플라본을 분석한 결과는도 8에 나타내었다.도 8에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 고체 성분으로부터 추출한 이소플라본에는 제니스테인, 다이드제인, 글리시테인을 포함하는 비배당체 이소플라본과, 말로닐-제니스틴, 제니스틴, 말로닐-다이드진, 글리시틴, 다이드진 및 아세틸 제니스틴을 포함하는 배당체 이소플라본이 함유되어 있다. 특히, 본 발명의 첫번째 태양에 따라 추출된 이소플라본에 비하여 비배당체 이소플라본의함량이 상대적으로 높은 것을 알 수 있다.

상기 구성에 의한 본 발명의 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법은 다음과 같은 효과가 있다.

첫째, 메주를 제조하는 과정에서 발생하는 부산물인 액체 성분을 컬럼 크로마토그래피로 정제하거나 또는 된장을 제조하는 과정에서 발생하는 부산물인 고체 성분을 용매를 첨가하여 여과액을 분리하고 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써 간단한 공정으로 이소플라본을 추출할 수 있다.

둘째, 콩으로부터 직접 이소플라본을 추출하지 않고, 콩을 이용하여 메주 및 된장을 제조하는 과정에서 발생하는 부산물로부터 이소플라본을 추출함으로써 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 생산성을 향상시킬 수 있다.

Claims

2) 상기 액체 성분을 컬럼 크로마토그래피로 정제하는 단계(단계 2)로 이루어진 것을 특징으로 하는 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법.

4) 상기 여과액을 컬럼 크로마토그래피로 정제하는 단계(단계 4)로 이루어진 것을 특징으로 하는 콩으로부터 이소플라본을 추출하는 방법.

제 2항에 있어서, 상기 알콜이 C₁~ C₄알콜인 것을 특징으로 하는 방법.

제 3항에 있어서, 상기 알콜이 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 방법.

제 2항에 있어서, 상기 수용액이 20 ~ 80%(부피/부피)의 알콜을 포함하고 있는 것을 특징으로 하는 방법.

제 2항에 있어서, 상기 교반이 25 ~ 50℃에서 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.