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KR19990087337A - 골다공증에 대한 복합 처방 - Google Patents

골다공증에 대한 복합 처방 Download PDF

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KR19990087337A
KR19990087337A KR1019980706746A KR19980706746A KR19990087337A KR 19990087337 A KR19990087337 A KR 19990087337A KR 1019980706746 A KR1019980706746 A KR 1019980706746A KR 19980706746 A KR19980706746 A KR 19980706746A KR 19990087337 A KR19990087337 A KR 19990087337A
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phenyl
cis
ethoxy
pharmaceutical composition
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KR1019980706746A
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Inventor
후아 즈우 케
데이빗 디 톰슨
Original Assignee
스피겔 알렌 제이
화이자 인코포레이티드
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Publication date
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Abstract

본 발명은 특정 에스트로겐 작용물질/길항물질 및 프로스타글란딘 또는 프로스타글란딘 작용물질/길항물질을 포함하는 약제학적 복합 조성물에 관한 것이다. 이러한 조성물은 골다공증을 비롯한 뼈 장애를 치료하는데 유용하다.

Description

골다공증에 대한 복합 처방
골다공증은 낮은 뼈 질량 및 뼈 조직의 손실을 특징으로 하는 전신성계 골격 질환으로서, 결과적으로는 뼈 취약성 및 골절에 대한 민감성을 증가시킨다. 미국에서는, 이러한 질병이 2천 5백만 이상의 사람들에게 영향을 미치고, 각 해마다 5십만명의 척추 골절 환자, 25만명의 고관절 환자 및 24만명의 수관절 골절 환자를 비롯한 1백 3십만명 이상이 골절을 일으킨다. 고관절 골절은 가장 심각하고, 환자의 5 내지 20%가 1년 안에 사망하고, 생존자의 50% 이상이 무력해진다.
노인들은 골다공증의 위험이 가장 크고, 따라서 사람의 노화에 따라 이러한 질병이 상당히 증가한다는 점에서 문제가 된다. 전세계적인 골절 발생범위는 앞으로 60년에 걸쳐 3배 증가할 것으로 예상되고, 한 연구에 따르면 2050년에는 전세계적으로 4백 50만명의 고관절 골절 환자에 이를 것으로 보고 있다.
여성은 남성보다 골다공증의 위험이 크다. 여성은 폐경기 직후 급속도의 뼈 손실을 경험한다. 골다공증을 유발하는 뼈 손실 증가의 그 밖의 인자는 흡연, 과음, 앉아서 생활하는 습관 및 낮은 칼슘 섭취를 포함한다.
에스트로겐은 골다공증 또는 여성의 폐경기 후 뼈 손실을 방지하기 위해 선택할 수 있는 제제이다. 또한, 블랙(Black) 등은 EP 0605193A1에서 에스트로겐이 특히 경구투여되면, LDL의 플라즈마 양을 낮추고 유익한 고밀도 지단백질(HDL)을 증가시킨다고 보고하고 있다. 그러나, 장기간 에스트로겐 처방은 다양한 장애와 결부되는데, 예를 들면 자궁암, 자궁내막암 및 가능하게는 유방암의 위험을 증가시키고, 따라서 많은 여성들이 이러한 치료법을 회피하거나 약품을 짧은 시간 동안만 복용하게 된다. 자궁내막암의 위험은 프로게스테론을 병용하면 감소되리라 생각되지만, 여전히 에스트로겐의 사용으로 인한 유방암의 가능성이 증가한다고 하는 염려가 있게된다. 최근 제안된 처방요법은, 프로게스테론과 에스트로겐의 복합 물질을 투여함과 같이, 암 발생 위험을 줄이고자 하는 것으로, 이는 환자가 꺼려지는 출혈을 경험해야 한다. 또한, 프로게스테론과 에스테로겐의 결합은 에스트로겐의 혈청 콜레스테롤 감소 효과를 약화시키는 것으로 보인다. 에스트로겐 처방과 관련된 상당히 안좋은 부작용 때문에, 이러한 안좋은 부작용을 야기하지 않으면서 혈청 LDL상에 바람직한 유리한 영향을 미치는, 골다공증에 대한 선택적인 처방을 개발할 필요성이 있다.
최근, 수많은 에스트로겐 작용물질/길항물질이 골다공증을 치료하기 위해 제안되었다. 다음 문헌에서는, 랄록시펜, 즉 6-하이드록시-2-(4-하이드록시페닐)-3-[4-(2-피페리디노에톡시)벤조일]벤조[b]티오펜이 에스트로겐이 뼈 및 지질에 미치는 유리한 작용을 모방하며, 단 에스트로겐과는 다르게 경미한 자궁 자극 효과를 갖는다는 것을 보고하였다[참조: Osteoporosis Conference Scrip No. 1812/13 4월 16/20, 1993, 29쪽; Black, LJ. 등, Raloxifene(LY139481 Hcl) Prevents Bone Loss and Reduces Serum Cholesterol Without Causing Uterine Hypertrophy in Ovariectomized Rats, J. Clin. Invest., 1994, 93:63-69].
또한 타목시펜, 즉 1-(4-β-디메틸아미노에톡시페닐)-1,2-디페닐-부트-1-엔은 유방암을 완화하는 효과를 갖는 골다공증 제제로서 제안된 항에스트로겐으로서, 단 자궁 안에서 일정한 에스트로겐 활성을 갖는 것으로 보고되어 있다. 다음 문헌에서는 타목시펜 200 및 400 mg/kg/일이 숫컷 래트의 정소 및 2차 생식기의 중량을 감소시킨다는 사실이 개시되어 있다[참조: Gill-Sharma 등, J.Reproduction and Fertility(1993)99, 395].
또한 미국 특허 제 5,254,594 호(본원에서 참조로서 인용함)에서는 골다공증을 비롯한 뼈 질환을 치료하기 위한 드롤록시펜의 용도에 대해 개시하고 있다.
드롤록시펜과 같은 제제는 뼈 손실을 방지하고 이로써 에스트로겐의 부작용없이 골절의 위험을 감소시킨다. 그러나, 에스트로겐 및 에스트로겐 작용물질 단독은 골절 위험을 단지 약 50% 감소시키고, 약 50%의 나머지 골감소증을 앓고 있는 여성들은 여전히 골다공증 골절의 위험이 있는 것으로 기대된다.
비-에스트로겐 작용물질/길항물질(예: 비스포스포네이트)이 또한 골다공증 치료제로서 제안되어 있다. 예를 들면, 포사막스(Fosamax, 등록상표)는 현재 골다공증의 치료를 위해 시판중인 비스포스포네이트이다. 그 밖의 현재 정기적인 검사를 받고 있는 비스포스포네이트는 리세드로네이트, 틸루드로네이트, 및 이반드로네이트를 포함한다.
프로스트(Frost) 등의 다음 문헌에서는, 우선 뼈 세포 활성화제를 투여한 후, 뼈 재흡수 억제제를 투여함으로써 뼈 세포의 활성 및 물질대사를 동시에 발생시켜, 정상적인 뼈를 형성할 수 있다는 것을 제안하는 이론적인 모델을 개시하고 있다[참조: "Treatment of Osteoporosis by Manipulation of Coherent Bone Cell Populations", Clinical Orthopedics and Related Research, 143, 227(1979)].
탕(Tang) 등의 다음 문헌에서는 손실, 회복 및 유지(lose, restore, maintain; LRM) 개념의 데이터, 기존의 골다공증을 반전시키기 위한 실제적인 접근에 대해 개시하고 있다[참조: Restoring and Maintaining Bone in Osteogenic Female Rat Skeleton: I. Changes in Bone Mass and Structure, J.Bone Mineral Research 7(9), 1093 내지 1104쪽, 1992]. LRM 개념에서는 동화작용제(anabolic agent)를 사용하여 뼈 질량 및 골격(+ 페이스(phase))을 회복한 후 뼈 질량을 유지하기 위한 확립된 능력을 갖는 제제를 간헐적으로 투여하고, 새로운 뼈를 유지한다(+/- 페이스). 래트 연구는 PGE2및 리세드로네이트, 비스포스포네이트를 사용하여, PGE2에 의해 유도된 대부분의 새로운 망상조직 및 피질 뼈가 리세드로네이트를 투여함으로써 PGE2를 중단한 후 60일 이상 동안 유지될 수 있다는 것을 나타낸다.
골다공증의 치료를 위한 비스포스포네이트 및 프로스타글란딘의 복합 물질이 개시되어 있다. 유럽 특허원 제 0 381 296 호에서는 뼈 활성화 기간 또는 치료 요법 후 뼈 재흡수를 억제하는 요법이 이어지는 키트의 용도를 개시하고 있다. 이러한 참고문헌에 인용된 뼈 활성화 화합물의 예는 파라티로이드 호르몬(parathyroid hormone; PTH), 무기 포스포네이트, 성장 호르몬, 불소화물, 티로이드 호르몬(예: 티록신), 특정 비타민 D 대사물질 및 프로스타글란딘(10 mg/kg/일의 투여 요법으로 PGE2)을 포함한다. 폴리포스포네이트는 뼈 재흡수 억제제로서 개시되어 있다.
PCT/US93/08529에서는 목표 영역에 뼈 활성화제를 선택적으로 운반하는 뼈 재흡수 억제 화합물에 화학적으로 커플링된 프로스타글란딘과 같은 뼈 활성화제의 동시 전달을 개시하고 있다. 신규한 화합물의 점진적인 가수분해시, 가수분해된 생성물은 뼈 재흡수 억제 활성(비스포스포네이트를 통해) 및 뼈 성장 또는 자극 활성(PGE2를 통해)을 제공할 수 있다.
프로스타글란딘 E2 및 리세드로네이트(비스포스포네이트)의 복합 물질의 영향은 린(Lin) 등의 다음 문헌에서 연구되었다[참조: Effects of Prostaglandin E2 and Risedronate Administration on Cancellous Bone in Older Female Rats, Bone 15(5), 489 내지 496쪽, 1994].
퀴우(Qiu) 등의 다음 문헌에서는 비타민 E 및 에스트라디올과 결합된 PGE2의 일회 투여가 대동맥 및 피질 죽상경화 병소상에, 뿐만 아니라 혈소판 응집, 연질 근육 세포 증식 및 지질 과산화상에 PGE2의 일회 투여보다 훨씬 조화로운 억제효과를 갖는다는 것을 개시하고 있다[참조: Experimental Study on Antiatherosclerotic Treatment by PGE2Combined with Vitamin E and Estradiol, Chinese Medical Journal, 108(1), 33 내지 36쪽, 1995].
다음 문헌의 요약 부분에서는 "골다공증의 예방 및 치료를 위한 여러가지 비에스트로겐 접근을 사용할 수 있다"고 설명하고 있다[참조: "Nonhormonal Alternatives for the Management of Early Menopause in Younger Women with Breast Cancer", Monogr. Natl. Cancer Inst.(16), 161-167, 1994]. 체중 조절 운동, 칼슘이 풍부하고 카페인, 알콜 및 단백질이 제한되는 식이요법, 흡연 자제, 및 손상을 최소화하기 위한 검진과 같은 골격 일체성을 유지하기 위한 종래의 방법들이 약품(단독 또는 배합된) 사용 또는 연구에까지 이르렀다. 이러한 약품은 프로제스틴, 비타민 D 대사물질, 주사가능하고 비강내 합성 주황색 칼시토닌, 비스포스포네이트, 불소화나트륨, 파라티로이드 호르몬, 성장 인자, 타목시펜 등을 포함한다.
따라서, 다양한 골다공증 치료법이 존재하지만, 골다공증 골절을 감소시키는 종래의 치료법의 성공이 제한적이기 때문에, 대안적인 요법을 위해 당해 기술 분야에서 지속적인 필요성을 가지고 끊임없는 연구가 이루어지고 있다.
발명의 요약
본 발명은 에스트로겐 작용물질/길항물질 및 동화작용제를 포함하는 약제학적 조성물 및 포유류(예: 사람, 특히 여성)에 있어서 골다공증을 비롯한 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 치료하기 위한 이러한 조성물의 용도에 관한 것이다.
상기와 같은 복합 물질은 에스트로겐 작용물질/길항물질인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및 프로스타글란딘 또는 프로스타글란딘 작용물질/길항물질인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포함한다.
바람직한 에스트로겐 작용물질/길항물질은 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜, 4-하이드록시타목시펜,
시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
(-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 및
1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린을 포함한다.
바람직한 동화작용제는 PGD1, PGD2, PGE2, PGE1, PGF2, PGF2α 및 3S-(3-하이드록시-4-페닐-부틸)-2R-[6-(1H-테트라졸-5-일)-헥실]-사이클로펜타논을 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 에스트로겐 작용물질/길항물질인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
b) 프로스타글란딘 또는 프로스타글란딘 작용물질/길항물질인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포유류에게 투여함을 포함하는 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 치료방법이다.
이러한 방법에서 바람직한 에스트로겐 작용물질/길항물질은 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜, 4-하이드록시타목시펜,
시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
(-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 및
1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린을 포함한다.
이러한 방법에서 바람직한 동화작용제는 PGD1, PGD2, PGE2, PGE1, PGF2, PGF2α 및 3S-(3-하이드록시-4-페닐-부틸)-2R-[6-(1H-테트라졸-5-일)-헥실]-사이클로펜타논을 포함한다.
이러한 방법중 바람직한 양태는 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병이 골다공증인 방법이다.
이러한 방법의 또 다른 바람직한 양태는 제 1 화합물 및 제 2 화합물이 실질적으로 동시에 투여되는 방법이다.
이러한 방법의 또 다른 바람직한 양태는 제 2 화합물이 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여되는 방법이다.
선택적으로 제 2 화합물을 투여한 후, 제 2 화합물을 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여하지 않으면서 제 1 화합물을 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여한다.
선택적으로, 제 2 화합물을 투여한 후, 제 2 화합물을 약 3년 이상 동안 투여하지 않으면서 제 1 화합물을 약 3년 이상 동안 투여한다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 에스트로겐 작용물질/길항물질인 소정량의 제 1 화합물; 및
b) 프로스타글란딘 또는 프로스타글란딘 작용물질/길항물질인 소정량의 제 2 화합물, 및
약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 상승작용적 약제학적 조성물로서,
제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 약제학적 조성물이다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 에스트로겐 작용물질/길항물질인 소정량의 제 1 화합물; 및
b) 프로스타글란딘 또는 프로스타글란딘 작용물질/길항물질인 소정량의 제 2 화합물, 및
약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 조성물을 포유류에게 투여함을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 상승작용적 치료방법으로서,
제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 방법이다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 제 1 단위 투여 형태로, 처방학적 유효량의 에스트로겐 작용물질/길항물질 및 약제학적으로 허용가능한 담체;
b) 제 2 단위 투여 형태로, 처방학적 유효량의 프로스타글란딘 또는 프로스타글란딘 작용물질/길항물질 및 약제학적으로 허용가능한 담체; 및
c) 제 1 투여 형태 및 제 2 투여 형태를 함유하기 위한 용기 수단을 포함하는 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 치료하기 위한 키트이다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
b) 불소화나트륨 또는 N-[1(R)-[1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드(MK-677)인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
이러한 조성물의 바람직한 양태는 제 1 화합물이 드롤록시펜인 것이다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
b) 불소화나트륨 또는 N-[1(R)-[1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드(MK-677)인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포유류에게 투여함을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 치료방법에 관한 것이다.
이러한 방법의 바람직한 양태는 제 1 화합물이 드롤록시펜인 양태이다.
이러한 방법의 또 다른 바람직한 양태는 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병이 골다공증인 양태이다.
이러한 방법의 또 다른 바람직한 양태는 제 1 화합물 및 제 2 화합물이 실질적으로 동시에 투여되는 방법이다.
이러한 방법의 또 다른 바람직한 양태는 제 2 화합물이 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여되는 방법이다.
선택적으로 제 2 화합물을 투여한 후, 제 2 화합물을 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여하지 않으면서 제 1 화합물을 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여한다.
선택적으로, 제 2 화합물을 투여한 후, 제 2 화합물을 약 3년 이상 동안 투여하지 않으면서 제 1 화합물을 약 3년 이상 동안 투여한다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜인 소정량의 제 1 화합물; 및
b) 불소화나트륨 또는 N-[1(R)-[1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드(MK-677)인 소정량의 제 2 화합물, 및
약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 상승작용적 약제학적 조성물로서,
제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 약제학적 조성물이다.
이러한 상승작용적 조성물의 바람직한 양태는 제 1 화합물이 드롤록시펜인 조성물이다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜인 소정량의 제 1 화합물; 및
b) 불소화나트륨 또는 N-[1(R)-[1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드(MK-677)인 소정량의 제 2 화합물, 및
약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 포유류에게 투여함을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 치료방법으로서,
제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 방법이다.
이러한 상승작용적 방법의 바람직한 양태는 제 1 화합물이 드롤록시펜인 방법이다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 제 1 단위 투여 형태로, 처방학적 유효량의 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜, 및 약제학적으로 허용가능한 담체;
b) 제 2 단위 투여 형태로, 처방학적 유효량의 불소화나트륨 또는 N-[1(R)-[1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드(MK-677) 및 약제학적으로 허용가능한 담체; 및
c) 제 1 투여 형태 및 제 2 투여 형태를 함유하기 위한 용기 수단을 포함하는 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 치료하기 위한 키트이다.
이러한 키트의 바람직한 양태는 제 1 화합물이 드롤록시펜인 키트이다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
(-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
b) 불소화나트륨, 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포함하는 약제학적 조성물이다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
(-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
b) 불소화나트륨, 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포유류에게 투여함을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 치료방법이다.
이러한 방법의 바람직한 양태는 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병이 골다공증인 방법이다.
이러한 방법의 또 다른 바람직한 양태는 제 1 화합물 및 제 2 화합물이 실질적으로 동시에 투여되는 방법이다.
이러한 방법의 또 다른 바람직한 양태는 제 2 화합물이 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여되는 방법이다.
선택적으로 제 2 화합물을 투여한 후, 제 2 화합물을 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여하지 않으면서 제 1 화합물을 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여한다.
선택적으로, 제 2 화합물을 투여한 후, 제 2 화합물을 약 3년 이상 동안 투여하지 않으면서 제 1 화합물을 약 3년 이상 동안 투여한다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
(-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린인 소정량의 제 1 화합물; 및
b) 불소화나트륨, 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 소정량의 제 2 화합물, 및
약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 상승작용적 약제학적 조성물로서,
제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 약제학적 조성물이다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
(-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린인 소정량의 제 1 화합물; 및
b) 불소화나트륨, 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 소정량의 제 2 화합물, 및
약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 포유류에게 투여함을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 치료하는 상승작용적 방법으로서,
제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 방법이다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 제 1 단위 투여 형태로서, 처방학적 유효량의 시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
(-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린 및 약제학적으로 허용가능한 담체;
b) 제 2 단위 투여 형태로, 처방학적 유효량의 불소화나트륨, 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질 및 약제학적으로 허용가능한 담체; 및
c) 제 1 투여 형태 및 제 2 투여 형태를 함유하기 위한 용기 수단을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 치료하기 위한 키트이다.
본 발명의 또 다른 양태는
a) 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
b) 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포함하는 약제학적 조성물이다.
본 발명의 또 다른 양태는 상승작용적 조성물 및 이러한 조성물의 키트를 사용하는 치료방법이다.
당해 기술분야의 숙련인들은 그 밖의 항-재흡수제(비스포스포네이트, 에스트로겐, 에스트라디올, 프레마린, 에스트론, 에스트리올 또는 17α- 또는 17β-에티닐 에스트라디올) 및 그 밖의 뼈 동화작용제(안드로겐, 안드로겐 작용물질/길항물질)를 함께 사용하거나 또는 본 발명에 기술된 임의의 제제와 함께 유사한 방식으로 사용될 수 있다는 것을 이해할 것이다.
예를 들면, 항-재흡수제 드롤록시펜은 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질과 배합될 수 있다.
"낮은 뼈 질량을 나타내는 질병"이란 문구는 뼈 질량의 수준이 세계 건강 기관(World Health Organization)에 의해 표준으로 정의되는 바와 같은 연령 특이성 정상치 미만인 질병이다[참조: "Assessment of Fracture Risk and its Application to Screening for Postmenopausal Osteoporosis(1994), Report of a World Health Organization Study Group, World Health Organization Technical Series 843"]. 어린이 특발성 초기 골다공증 또한 포함된다. 골다공증의 치료에는 척추 굽음, 신장 이상(loss of height), 보조외과술, 및 전립선 기능부전의 예방과 같은 장기간 합병증의 예방 또는 완화가 포함된다. 또한 뼈 골절 치유율을 증가시키고 성공적인 뼈 이식률을 증진시키는 방법이 포함된다. 또한 치근막 질병 및 치조골 손실이 포함된다.
"낮은 뼈 질량을 나타내는 질병"이란 문구는 또한 골다공증을 비롯한 상기 기술한 바와 같은 질병이 발달될 평균 기회보다 훨씬 높은 기회를 갖는 포유류(예: 폐경기후 여성, 60세 이상의 남성, 및 부작용으로서 골다공증을 유발하는 것으로 알려진 약품(당질 코르티코이드)으로 치료하는 환자)에 대해 말하는 것이다.
당해 기술분야의 숙련인들은 뼈 질량이란 용어가 실제로 단위 면적당 뼈 질량이고, 종종 엄밀히 말해서 정확한 것은 아니지만 뼈 무기질 밀도로서 언급된다라는 것을 이해할 것이다.
본원에서 사용한 바와 같은 "치료한다" 또는 "치료"라는 용어는 방지적(예: 예방적) 및 완화적 치료를 포함한다.
할로라는 용어는 클로로, 브로모, 요오도 또는 플루오로를 의미한다.
알킬이란 용어는 직쇄 또는 분지쇄 포화된 탄화수소를 의미한다. 이러한 알킬 기의 예(지정된 길이는 구체적인 예들을 포함하는 것으로 가정함)는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 2급-부틸, 3급 부틸, 펜틸, 이소펜틸, 헥실 및 이소헥실이다.
알콕시는 옥시를 통해 직쇄 또는 분지쇄 포화된 알킬을 의미한다. 이러한 알콕시기의 예(지정된 길이는 구체적인 예들을 포함하는 것으로 가정함)는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, 이소부톡시, 3급 부톡시, 펜톡시, 이소펜톡시, 헥속시, 및 이소헥속시이다.
"약제학적으로 허용가능한 음이온성 염"이란 표현은 한정되는 것은 아니지만, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 설페이트, 비설페이트, 포스페이트, 아세테이트, 말레에이트, 푸마레이트, 옥살레이트, 락테이트, 타르트레이트, 시트레이트, 글루코네이트, 메탄설포네이트 및 4-톨루엔-설포네이트와 같은 음이온 함유 비독성 음이온성 염을 말한다.
"약제학적으로 허용가능한 양이온성 염"이란 표현은 한정되는 것은 아니지만, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄 또는 양성자화 벤자틴(N,N'-디벤질에틸렌디아민), 콜린, 에탄올아민, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글라민(N-메틸-글루카민), 베네타민(N-벤질페네틸아민), 피페라진 또는 트로메타민(2-아미노-2-하이드록시메틸-1,3-프로판디올)과 같은 비독성 양이온성 염을 말한다.
본원에서 명명법에서 사용된 괄호 안의 플러스 또는 마이너스 표시는 평면편광이 특정 입체이성질체에 의해 회전한다는 것을 의미한다.
본원에서 사용하는 바와 같은, "반응 불활성 용매" 및 "불활성 용매"라는 표현은 출발 물질, 시약, 중간생성물 또는 생성물과 목적하는 생성물의 수율에 역효과를 미치는 방식으로 상호작용하지 않는 용매를 말한다.
당해 기술분야에 숙련된 화학자들은 본 발명의 특정 화합물이 특정 입체화학적 또는 기하학적 구조일 수 있는 하나 이상의 원자를 함유하여 입체 이성질체 및 구조 이성질체를 생성할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 이러한 이성질체 및 이의 혼합물이 본 발명에 포함된다. 본 발명의 화합물의 수화물 또한 포함된다.
당해 기술분야에 숙련된 화학자들은 본 발명에 열거된 헤테로원자-함유 치환체의 특정 조합이 생리학적 조건하에서 덜 안정한 화합물(아세탈 또는 아미날 결합을 함유하는 화합물)을 정의한다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 이러한 화합물은 덜 바람직하다.
본 발명의 약제학적 조성물을 사용하면, 상기 기술된 에스트로겐 작용물질/길항물질의 동일한 사용량을 단독으로 또는 상기 기술한 바와 같은 뼈 무기질 밀도 증가를 촉진하는 제제를 단독으로 사용하여 수득될 수 있는 뼈 질량보다 더욱 신속하고 더욱 많은 양을 증가시킨다. 따라서, 이러한 복합 물질은 각 제제를 단독으로 사용하여 달성할 수 있는 정도보다 큰 정도까지 뼈 질량을 증가시키고 골절 속도를 감소시키는 상승작용을 하게 된다. 본 발명은 뼈 질량을 증가시키고 유지하여 골다공증 및 관련된 뼈 장애를 예방, 지연, 및/또는 퇴행시키는 조성물 및 방법을 제공함으로써 당해 기술분야에 상당히 기여한다.
그 밖의 골절 및 장점이 본 발명을 기술하는 하기 상세한 설명 및 청구의 범위로부터 명백해질 것이다.
본 발명은 에스트로겐 작용물질/길항물질과 뼈 형성을 자극하고 뼈 질량을 증가시키는 제제의 약제학적 복합 물질, 이러한 복합 물질을 함유하는 키트(kit) 및 사람을 비롯한 포유류에 있어서 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 치료하기 위한 이러한 복합 물질의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 제 1 화합물은 포유류의 에스트로겐 작용물질/길항물질이다. 임의의 에스트로겐 작용물질/길항물질을 본 발명의 제 1 화합물로서 사용할 수 있다. 에스트로겐 작용물질/길항물질이란 용어는 에스트로겐 수용체와 결합하고 뼈 교체를 억제하고 뼈 손실을 방지하는 화합물을 말한다. 이러한 활성은 에스트로겐 수용체 결합 시험(이후 생체외 에스트로겐 수용체 결합 시험 참조), 표준 뼈 히스토몰포메터법(histomorphometric method) 및 밀도계량 방법(이후 에스트로겐 작용물질/길항물질 프로토콜; Eriksen E.F. 등, 뼈 히스토몰포메터법, Raven Press, New York, 1994, 1 내지 74쪽; Grier S.J. 등, The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptionmetry In Animals, Inv. Radiol., 1996, 31(1): 50-62; Wahner H.W. and Fogelman I., The Evaluation of Osteoporosis: Dual Energy X-Ray Absorptiometry in Clinical Practice., Martin Dunitz Ltd., London 1994, 1 내지 296쪽 참조)을 비롯한 표준 시험에 따라 당해 기술분야의 숙련인들에 의해 검사될 수 있다. 그러나, 다양한 이들 화합물을 아래에 개시하고 참조하며, 그 밖의 에스트로겐 작용물질/길항물질이 당해 기술분야의 숙련인들에게 잘 공지되어 있다.
바람직한 에스트로겐 길항물질/작용물질은 드롤록시펜(페놀, 3-[1-[4[2-(디메틸아미노)에톡시]페닐]-2-페닐-1-부테닐]-, (E)-) 및 본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 5,047,431 호에 개시된 관련된 화합물이다.
또 다른 바람직한 에스트로겐 작용물질/길항물질은 타목시펜(에탄아미드, 2-[4-(1,2-디페닐-1-부테닐)페녹시]-N,N-디메틸, (Z)-2-, 2-하이드록시-1,2,3-프로판트리카복실레이트(1:1)) 및 본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 4,536,516 호에 개시된 관련된 화합물이다. 또 다른 관련된 화합물은 본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 4,623,660 호에 개시된 4-하이드록시 타목시펜이다.
또 다른 바람직한 에스트로겐 작용물질/길항물질은 랄록실펜(메타논, [6-하이드록시-2-(4-하이드록시페닐)벤조[b]티엔-3-일][4-[2-(1-피페리디닐)에톡시]페닐]-, 하이드로클로라이드) 및 본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 4,418,068 호에 개시된 관련된 화합물이다.
또 다른 바람직한 에스트로겐 작용물질/길항물질은 토레미펜(에탄아민, 2-[4-(4-클로로-1,2-디페닐-1-부테닐)페녹시]-N,N-디메틸-, (Z)-, 2-하이드록시-1,2,3-프로판트리카복실레이트(1:1)) 및 본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 4,996,225 호에 개시된 관련된 화합물이다.
또 다른 바람직한 에스트로겐 작용물질/길항물질은 센트크로만(1-[2-[[4-(-메톡시-2,2, 디메틸-3-페닐-크로만-4-일)-페녹시]-에틸]-피롤리딘) 및 본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 3,822,287 호에 개시된 관련된 화합물이다.
또 다른 바람직한 에스트로겐 작용물질/길항물질은 요오독시펜(피롤리딘, 1-[4-[[1-(4-요오도페닐)-2-페닐-1-부테닐]페녹시]에틸] 및 본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 4,839,155 호에 개시된 관련된 화합물이다.
또 다른 바람직한 에스트로겐 작용물질/길항물질은 하기 화학식 I의 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 기하 이성질체; 및 비독성 약리학적으로 허용가능한 산 부가 염, N-산화물, 에스테르 또는 이의 4급 암모늄 염을 포함한다:
상기 식에서,
A는 CH2및 NR로부터 선택되고;
B, D 및 E는 CH 및 N으로부터 독립적으로 선택되고;
Y는
(a) R4로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환된 페닐;
(b) R4로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환된 나프틸;
(c) R4로부터 독립적으로 선택된 1 내지 2개의 치환체로 선택적으로 치환된 C3-C8사이클로알킬;
(d) R4로부터 독립적으로 선택된 1 내지 2개의 치환체로 선택적으로 치환된 C3-C8사이클로알케닐;
(e) R4로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환된 -O-, -NR2- 및 -S(O)n-으로 이루어진 군으로부터 선택된 2개 이하의 헤테로원자를 함유하는 5원 헤테로사이클;
(f) R4로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환된 -O-, -NR2- 및 -S(O)n-으로 이루어진 군으로부터 선택된 2개 이하의 헤테로원자를 함유하는 6원 헤테로사이클; 또는
(g) R4로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환된 -O-, -NR2- 및 -S(O)n-으로 이루어진 군으로부터 선택된 2개 이하의 헤테로원자를 함유하는 5원 또는 6원 헤테로사이클 환이 페닐 환에 접합된 비사이클릭 환계이고;
Z1은
(a) -(CH2)pW(CH2)q-;
(b) -O(CH2)pCR5R6-;
(c) -O(CH2)pW(CH2)q;
(d) -OCHR2CHR3-; 또는
(e) -SCHR2CHR3-이고;
G는
(a) -NR7R8;
(b) 인접한 탄소원자상에 1 또는 2개의 페닐 환과 선택적으로 접합되고, 1 내지 3개의 치환체와 탄소상에서 선택적으로 독립적으로 치환되고, R4로부터 선택된 화학적으로 적절한 치환체와 함께 질소상에서 선택적으로 독립적으로 치환된
(여기서, n은 0, 1 또는 2이고; m은 1, 2 또는 3이고; Z2는 -NH-, -O-, -S-, 또는 -CH2-이다); 또는
(c) 가교되거나 접합되고 R4로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환체로 선택적으로 치환된 5 내지 12개의 탄소원자를 함유하는 비사이클릭 아민이고;
Z1및 G는 함께이고;
W는
(a) -CH2-;
(b) -CH=CH-;
(c) -O-;
(d) -NR2-;
(e) -S(O)n-;
(f);
(g) -CR2(OH)-;
(h) -CONR2-;
(i) -NR2CO-;
(j); 또는
(k) -C≡C-이고;
R은 수소 또는 C1-C6알킬이고;
R2및 R3은 독립적으로
(a) 수소; 또는
(b) C1-C4알킬이고;
R4는
(a) 수소;
(b) 할로겐;
(c) C1-C6알킬;
(d) C1-C4알콕시;
(e) C1-C4아실옥시;
(f) C1-C4알킬티오;
(g) C1-C4알킬설피닐;
(h) C1-C4알킬설포닐;
(i) 하이드록시(C1-C4) 알킬;
(j) 아릴(C1-C4)알킬;
(k) -CO2H;
(l) -CN;
(m) -CONHOR;
(n) -SO2NHR;
(o) -NH2;
(p) C1-C4알킬아미노;
(q) C1-C4디알킬아미노;
(r) -NHSO2R;
(s) -NO2;
(t) -아릴; 또는
(u) -OH이고;
R5및 R6은 독립적으로 C1-C8알킬이거나 함께 C3-C10카보사이클릭 환을 형성하고;
R7및 R8은 독립적으로
(a) 페닐;
(b) 포화되거나 불포화된 C3-C10카보사이클릭 환;
(c) -O-, -N- 및 -S-로부터 선택된 2개 이하의 헤테로원자를 함유하는 C3-C10헤테로사이클릭 환;
(d) H;
(e) C1-C6알킬; 또는
(f) R5또는 R6을 함유하는 3 내지 8원 질소 함유 환이고;
선형이거나 환 형태인 R7및 R8은 C1-C6알킬, 할로겐, 알콕시, 하이드록시 및 카복시로부터 독립적으로 선택된 3개 이하의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있고;
R7및 R8에 의해 형성된 환은 페닐 환에 선택적으로 접합될 수 있고;
e는 0, 1 또는 2이고;
m은 1, 2 또는 3이고;
n은 0, 1 또는 2이고;
p는 0, 1, 2 또는 3이고;
q는 0, 1, 2 또는 3이다.
본 발명의 바람직한 화합물은 하기 화학식 1의 화합물이다:
상기 식에서,
G는또는이고;
R4는 H, OH, F, 또는 Cl이고;
B 및 E는 CH 및 N으로부터 독립적으로 선택된다.
특히 바람직한 화합물은
시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
(-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린이다.
본 발명의 상기 화합물을 하기 반응식에 나타낸 반응에 의해 용이하게 제조된다.
화학식 I의 특정 화합물을 반응 불활성 용매중 희귀 금속 촉매를 사용하여 수소화반응에 의해 하기 화학식 II의 불포화된 중간생성물로부터 통상적으로 제조한다:
압력 및 온도는 중요하지 않으며 수소화반응은 통상적으로 20 내지 80 psi 수소압력에서 실온에서 수시간 안에 달성된다.
수소화 생성물을 단리하고, 경우에 따라 정제하고 산성 촉매를 사용하여 사용된 산성 촉매에 따라 불활성 반응 용매중에 0 내지 100℃의 온도에서 에테르 기를 분해한다. 브롬화수소는 승온에서, 삼브롬화붕소 및 염화알루미늄은 0℃ 내지 주변 온도에서 이러한 반응에 효율적이라는 것을 발견하였다.
생성물, 화학식 I을 단리하고 표준 절차에 의해 정제하였다.
A가 CH2이고, B, D 및 E가 CH인 화학식 II의 중간생성물이 본원에서 참조로서 인용하는 다음 문헌들에 개시되어 있다[참조: 미국 특허 제 3,274,213 호; J.Med.Chem 10, 78(1967); J.Med.Chem 10, 138(1967); 및 J.Med.Chem. 12, 881(1969)]. 이들은 하기 설명된 절차에 의해 제조될 수도 있다.
e가 1이고, A가 CH2이고, Z1이 OCH2CH2이고, G가 사이클로알킬아민이고, B가 CH인 화학식 I의 화합물의 제조방법을 반응식 1에 나타낸다. D 및 E가 CH인 화합물(1-2)은 4-브로모페놀을 상응하는 N-클로로에틸아민과 함께 탄산칼륨을 염기로서 사용하여 극성 비양성자성 용매(예: 디메틸포름아미드)중 승온에서 알킬화반응시켜 제조한다. 바람직한 온도는 100℃이다. D 또는 E 또는 모두가 N인 화합물(1-2)은 상 전이 조건하에서 하이드록시 에틸 사이클로알킬아민을 사용하여 디브로마이드(1-1)상에서 수행되는 친핵 치환반응을 사용하여 합성되어 브로모 아민(1-2)을 수득한다( Synthesis, 77, 573(1980)). n-부틸리튬 또는 마그네슘 금속, 브로모 아민(1-2)을 사용하여 할로겐 금속 교환으로 염화세슘의 존재중 저온에서 바람직하게는 6-메톡시-1-테트랄론과 함께 반응하여 산성 후처리작업 후 카비놀(1-3) 또는 스티렌(1-4)을 수득할 수 있는 상응하는 리튬 또는 마그네슘 시약을 수득한다(염화세슘없이고 반응이 존재한다). 카비놀(1-3) 또는 스티렌(1-4)을 브롬화제(예: 피리디늄 브로마이드 퍼브로마이드)로 처리하면 브로모 스티렌(1-5)을 수득한다. 아릴 또는 헤테로아릴 아연 클로라이드 또는 아릴 또는 헤테로아릴 붕산을 팔라듐 금속 촉매(예: 테트라키스 트리페닐 포스핀 팔라듐(0))의 존재하에 브로마이드(1-5)와 함께 반응시켜 디아릴 스티렌(1-6)을 수득한다[참조: Pure & Applied Chem. 63, 419(1991) 및 Bull. Chem. Soc. Jpn. 61, 3008-3010, (1988)]. 바람직한 화합물을 제조하기 위해 치환된 페닐 아연 클로라이드 또는 치환된 페닐붕산을 이러한 반응중에 사용한다. 아릴 아연 클로라이드를 상응하는 리튬 시약을 무수 아연 클로라이드와 함께 급랭시켜 제조한다. 시판중이지 않는 아릴 붕산은 상응하는 아릴 리튬 시약을 트리알킬 보레이트, 바람직하게는 트리메틸 또는 트리이소프로필 보레이트로 급랭시킨 후 수성 산 후처리 작업하여 제조한다[참조: Acta Chemica Scan, 47, 221-230(1993)]. 시판중이지 않은 리튬 시약은 상응하는 브로마이드 또는 할라이드를 n-부틸 또는 t-부틸리튬과 함께 할로겐 금속 교환에 의해 제조한다. 선택적으로, 리튬 시약은 다음 문헌에 기술된 바와 같은 헤테로원자 촉진 리튬화반응에 의해 제조한다[참조: Organic Reactions, Volume 27, Chapter 1]. 수산화 팔라듐/숯의 존재하에 화합물(1-6)의 촉매적 수소화반응을 수행하여 메틸렌 클로라이드중 0℃에서 삼브롬화붕소를 사용하여 연속적으로 탈메틸화된 상응하는 디하이드로 메톡시 중간생성물을 수득하거나, 80 내지 100℃에서 아세트산중 48% 브롬화 수소를 사용하여 목적 구조 화합물(1-7)을 수득한다. 이들 화합물은 라세믹이고 키랄셀 OD 칼럼(Chiralcel OD column)과 같은 키랄 정지상의 칼럼을 사용하여 고압 액체 크로마토그래피를 통해 엔안티오머로 분리할 수 있다. 선택적으로 광학 분리를 광학적으로 순수한 산(예: 1,1'-비나프틸-2,2'-디일 하이드로젠 포스페이트)으로 형성된 부분입체 이성질체 염의 재결정화에 의해 수행할 수 있다.
시스 화합물(1-7)을 염기로 처리시 트란스 화합물로 이성질체화할 수 있다.
D 및/또는 E가 질소일 때, 중간생성물(화학식 II) 및 화학식 I의 화합물을 반응식 1에서 설명된 바와 같은 상응하는 디할로피리딘 또는 피리미딘으로부터 제조할 수 있다.
e가 1이고, A가 CH2이고, Z1이 OCH2CH2이고, G가 피롤리딘이고, D, E, B는 CH이고, Y는 Ph인 화학식 I의 화합물의 메틸 에테르도 또한 희귀 금속 촉매의 존재하에 반응 불활성 용매중에 나폭시딘(미국 미시간주 49001 칼라마주 포타지 로드 700 소재의 업존 앤드 캄파니(Upjohn & Co.))의 수소화반응의 제 1 단계에 의해 용이하게 제조될 수 있다. 압력 및 온도는 중요하지 않고; 반응은 50 psi에서 약 20시간 동안 실온에서 에탄올중 용이하게 수행된다.
제 2 단계는 메톡시기의 분리이고, 이는 실온에서 산성 촉매(예: 삼브롬화 붕소)로 반응 불활성 용매중 80 내지 100℃에서 아세트산중 브롬화수소로 편리하게 성취된다. 이어서 생성물을 통상적인 방법으로 단리하고 경우에 따라 산 염으로 전환시킨다.
B가 질소인 화학식 I의 화합물을 반응식 2 및 반응식 3에 설명된 절차에 따라 제조한다.
B가 N인 화학식 I의 화합물의 합성반응을 하기 반응식 2에 나타낸다. 1급 아민으로 처리시 아릴 산 클로라이드(2-1)는 아릴 2급 아미드(2-2)를 생성하고, 이를 리튬 알루미늄 하이드라이드와 함께 에테르성 용매중에 환원시켜 2급 아민(2-3)을 수득한다. 아로일 산 클로라이드와 화합물(2-3)을 연속적으로 아실화반응시켜 3급 아미드(2-4)를 생성하고, 이를 고온 포스포러스 옥시클로라이드중 환화반응시켜 디하이드로 이소퀴놀리늄 염(2-5)을 수득한다. 나트륨 보로하이드라이드로 환원시켜 알콕시테트라하이드로 이소퀴놀린을 수득하고; 이어서 메틸렌 클로라이드중 붕소 트리브로마이드 탈메틸화반응을 수행하여 목적 구조 화합물을 수득한다.
B가 N인 화학식 I의 화합물의 합성반응은 또한 하기 반응식 3에 나타낸다. 벤질옥시아로일 클로라이드(3-2)와 함께 아실화반응시 2급 아민(3-1)은 3급 아미드(3-3)를 생성하고 이는 고온 포스포러스 옥시클로라이드와 환화반응시 디하이드로 이소퀴놀린 염(3-4)을 생성한다. 화합물(3-4)을 나트륨 보로하이드라이드 환원하여 수성 염화수소산과 함께 탈벤질반응시켜 이소퀴놀린(3-5)을 수득하고, 이를 적절하게 작용화된 클로라이드와 알킬화반응시키고 삼브롬화붕소로 탈메틸화반응시켜 목적하는 구조의 화합물을 수득한다.
그 밖의 다른 에스트로겐 작용물질/길항물질은 본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 4,133,814 호에 개시되어 있다. 미국 특허 제 4,133,814 호에는 2-페닐-3-아로일-벤조티오펜 및 2-페닐-3-아로일벤조티오펜-1-옥사이드의 유도체가 개시되어 있다.
레드니커(Lednicer) 등의 다음 문헌에는 일반식
의 에스트로겐 길항물질(여기서, R2는 페닐 또는 사이클로펜틸이고 R3은 H,
또는 -CH2CHOHCH2OH이다)이 개시되어 있다(참고: J.Med.Chem., 12, 881(1969)):
본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 3,234,090 호에는 일반식
의 에스트로겐 작용물질/길항물질(여기서, Ph는 1,2-페닐렌 라디칼이고, Ar은 3급 아미노-저급 알킬-옥시에 의해 치환된 모노사이클릭 카보사이클릭 아릴 기이고, 이때 3급 아미노는 2개 이상의 탄소원자에 의해 옥시로부터 떨어져 있고, R은 수소, 지방족 라디칼, 카보사이클릭 아릴 라디칼, 카보사이클릭 아릴-지방족 라디칼, 헤테로사이클릭 아릴 라디칼 또는 헤테로사이클릭 아릴 지방족 라디칼이고, 일반식 -(CnH2n+2)-의 기는 3 내지 5개의 탄소원자를 갖는 비분지형 알킬렌 라디칼이고 기 Ar 및 R을 수반한다), 이의 염, N-산화물, N-산화물의 염 또는 이의 4급 암모늄 화합물 뿐만 아니라 이러한 화합물의 제조절차가 개시되어 있다.
본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 3,277,106 호에는 일반식
의 에스트로겐 작용물질/길항물질 효과를 갖는 염기성 에테르(여기서, Ph는 1,2-페닐렌 라디칼이고, Ar은 하나 이상의 아미노-저급 알킬-옥시 기에 의해 모노사이클릭 아릴 라디칼 치환되고, 이때 질소 원자는 2개 이상의 탄소원자에 의해 산소 원자로부터 떨어져 있고, R은 아릴 라디칼이고, -(CnH2n+2)- 부분은 Ph와 6 또는 7원 환을 형성하는 저급 알킬렌을 나타내고, 이들의 환 탄소원자중 2개는 기 Ar 및 R을 수반한다), 이의 염, N-산화물, N-산화물의 염 또는 이의 4급 암모늄 화합물이 개시되어 있다.
본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 3,274,213 호에는 일반식
의 에스트로겐 작용물질/길항물질 화합물(여기서, R1및 R2는 저급 알킬 및 5 내지 7원환 포화된 헤테로사이클릭 라디칼을 형성하기 위해 함께 결합된 저급 알킬로 구성되는 군으로부터 선택된다)이 개시되어 있다.
본 발명의 제 2 화합물은 뼈 골절 임계치 이상인 양까지 뼈 질량을 증가시키는, 하기 기술된 임의의 화합물일 수 있다[참조: World Health Organization Study, World Health Organization, "Assessment of Fracture Risk and its Application to Screening for Postmenopausal Osteoporosis(1994). Report of a WHO Study Group, World Health Organization Technical Series 843"].
임의의 프로스타글란딘 또는 프로스타글란딘 작용물질/길항물질을 본 발명의 제 2 화합물로서 사용할 수 있다. 당해 기술분야의 숙련인들은 불소화나트륨, 파라티로이드 호르몬(PTH), 파라티로이드 호르몬의 활성 분획, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질이 역시 사용될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 다음 문단은 본 발명의 제 2 화합물의 예에 대해 더욱 상세히 설명하는 것이다.
임의의 프로스타글란딘을 본 발명의 제 2 화합물로서 사용할 수 있다. 프로스타글란딘이란 용어는 골다공증의 치료에 유용한 천연 프로스타글란딘 PGD1, PGD2, PGE2, PGE1및 PGF2α의 유사체인 화합물을 말한다. 이들 화합물은 프로스타글란딘 수용체에 결합한다. 이러한 결합은 표준 시험에 따라 당해 기술분야의 숙련인들에 의해 용이하게 측정될 수 있다[예를 들면, An S. 등, Cloning and Expression of the EP2Subtype of Human Receptors for Prostaglandin E2, Biochemical and Biophysical Research Communications, 1993, 197(1):263-270].
프로스타글란딘은 염기성 화합물 프로스탄산과 관련된 지환족 화합물이다. 염기성 프로스타글란딘의 탄소원자는 카복실 탄소원자로부터 사이클로펜틸 환을 통해 인접한 측쇄상의 최종 탄소원자까지 서열적으로 번호를 매긴다. 통상적으로 인접한 측쇄는 트란스 방향이다. 사이클로펜틸 잔기의 C-9에서 옥소 기의 존재는 E 부류 안에 있는 프로스타글란딘을 나타내는 것이고, PGE2는 C13-C14에서 트란스 불포화 이중 결합 및 C5-C6위치에서 시스 이중 결합을 함유한다.
그러나, 다양한 프로스타글란딘이 이후 참조로서 기술되며, 다른 프로스타글란딘이 당해 기술분야의 숙련인들에게 공지될 것이다. 예시적인 프로스타글란딘이 본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 4,171,331 호 및 제 3,927,197 호에 개시되어 있다.
노르딘(Norrdin) 등의 문헌(The Role of Prostaglandins in Bone In Vivo, Prostaglandins Leukotriene Essential Fatty Acids 41, 139-150, 1990)은 뼈 활성 프로스타글란딘의 검토이다.
임의의 프로스타글란딘 작용물질/길항물질을 본 발명의 제 2 화합물로서 사용할 수 있다. 프로스타글란딘 작용물질/길항물질은 프로스타글란딘 수용체에 결합하는 화합물[예를 들면, An S 등, Cloning and Expression of the EP2Subtype of Human Receptors for Prostaglandin E2, Biochemical and Biophysical Research Communications, 1993, 197(1):263-270] 및 생체내에서 프로스타글란딘의 작용[예를 들면, 뼈 형성을 자극하고 뼈 질량을 증가시킴]을 모방하는 화합물을 말한다. 이러한 작용은 표준 시험에 따라 당해 기술분야의 숙련인들에 의해 용이하게 측정될 수 있다[예를 들면, 이후 기술되는 동화작용제 프로토콜; 및 Eriksen E.F. 등, Bone Histomorphometry, Raven Press, New York, 1994, 1 내지 74쪽; Grier S.J. 등, The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptionmetry in Animals, Inv. Radiol., 1996, 31(1): 50-62; Wahner H.W. 및 Fogelman I., The Evaluation of Osteoporosis: Dual Energy X-Ray Absorptionmetry in Clinical Practice., Martin Dunitz Ltd., London 1994, 1 내지 296쪽 참조]. 그러나 다양한 이들 화합물이 이후 참조로서 기술되고 다른 프로스타글란딘 작용물질/길항물질이 당해 기술분야의 숙련인들에게 공지되어 있다. 예를 들면 프로스타글란딘 작용물질/길항물질이 이후 기술된다.
본원에서 참조로서 인용하는 통상적으로 양도된 미국 특허 제 3,932,389 호에는 2-데스카복시-2-(테트라졸-5-일)-11-데스옥시-15-치환된-오메가-펜타노프로스타글란딘이 뼈 형성 활성에 유용하다고 기술되어 있다.
본원에서 참조로서 인용하는 통상적으로 양도된 미국 특허 제 4,018,892 호에는 16-아릴-13,14-디하이드로-PGE2p-비페닐 에스테르가 뼈 형성 활성에 유용하다고 기술되어 있다.
본원에서 참조로서 인용하는 통상적으로 양도된 미국 특허 제 4,219,483 호에는 2,3,6-치환된-4-피론이 뼈 형성 활성에 유용하다고 기술되어 있다.
본원에서 참조로서 인용하는 통상적으로 양도된 미국 특허 제 4,132,847 호에는 2,3,6-치환된-4-피론이 뼈 형성 활성에 유용하다고 기술되어 있다.
본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 4,000,309 호에는 16-아릴-13,14-디하이드로-PGE2p-비페닐 에스테르가 뼈 형성 활성에 유용하다고 기술되어 있다.
본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 3,982,016 호에는 16-아릴-13,14-디하이드로-PGE2p-비페닐 에스테르가 뼈 형성 활성에 유용하다고 기술되어 있다.
본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 4,621,100 호에는 치환된 사이클로펜탄이 뼈 형성 활성에 유용하다고 기술되어 있다.
본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 5,216,183 호에는 사이클로펜타논이 뼈 형성 활성에 유용하다고 기술되어 있다.
불소화나트륨이 본 발명의 제 2 화합물로서 사용될 수 있다. 불소화나트륨이란 용어는 모든 형태의 불소화나트륨을 말한다(예: 느리게 방출되는 불소화나트륨, 서방성 불소화나트륨). 서방성 불소화나트륨이 본원에서 참조로서 인용하는 미국 특허 제 4,904,478 호에 개시되어 있다. 불소화나트륨의 활성은 생물학적 프로토콜에 따라 당해 기술분야의 숙련인들에 의해 용이하게 측정될 수 있다[예를 들면, 이후 설명되는 동화작용제 프로토콜; 및 Eriken E.F. 등, Bone Histomorphometry, Raven Press, New York, 1994, 1 내지 74쪽; Grier S.J. 등, The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptionmetry in Animals, Inv. Radiol., 1996, 31(1): 50-62; Wahner H.W. 및 Fogelman I., The Evaluation of Osteoporosis: Dual Energy X-Ray Absorptionmetry in Clinical Practice., Martin Dunitz Ltd., London 1994, 1 내지 296쪽 참조].
임의의 파라티로이드 호르몬(PTH)을 본 발명의 제 2 화합물로서 사용할 수 있다. 파리티로이드란 호르몬은 뼈 형성을 자극하고 뼈 질량을 증가시키는 파라티로이드 호르몬, 이의 분획 또는 이의 대사물질 및 이의 구조적 유사체를 말한다. 이러한 작용적 활성은 표준 시험에 따라 당해 기술분야의 숙련인들에 의해 용이하게 측정될 수 있다[예를 들면, 이후 설명되는 동화작용제 프로토콜; 및 Eriksen E.F. 등, Bone Histomorphometry, Raven Press, New York, 1994, 1 내지 74쪽; Grier S.J. 등, The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptionmetry in Animals, Inv. Radiol., 1996, 31(1): 50-62; Wahner H.W. 및 Fogelman I., The Evaluation of Osteoporosis: Dual Energy X-Ray Absorptionmetry in Clinical Practice., Martin Dunitz Ltd., London 1994, 1 내지 296쪽 참조]. 그러나, 다양한 이들 화합물이 이후 참조로서 기술되고 다른 파라티로이드 호르몬이 당해 기술분야의 숙련인들에게 공지되어 있다. 예를 들면 파라티로이드 호르몬이 다음 참고문헌에 기술되어 있다[참조: "Human Parathyroid Peptide Treatment of Vertebral Osteoporosis", Osteoporosis Int., 3.(Supp 1): 199-203; "PTH 1-34 Treatment of Osteoporosis with Added Hormone Replacement Therapy: Biochemical, Kinetic and Histological Responses" Osteoporosis Int. 1:162-170].
임의의 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질을 본 발명의 제 2 화합물로서 사용할 수 있다. 성장 호르몬 분비 촉진 물질이란 용어는 성장 호르몬의 방출을 자극하는 화합물 또는 성장 호르몬의 작용을 모방하는 화합물을 말한다(예를 들면, 뼈 형성을 증가시켜 뼈 질량을 증가시키는 화합물). 이러한 작용은 표준 시험(예를 들면, 이후 기술되는 시험)에 따라 당해 기술분야의 숙련인들에 의해 용이하게 측정할 수 있다. 다양한 화합물이 다음 공개된 PCT 특허원 WO 95/14666; WO 95/13069; WO 94/19367; WO 94/13696; 및 WO 95/34311에 포함된다. 그러나, 그 밖의 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질이 당해 기술분야의 숙련인들에게 공지되어 있다.
특히 바람직한 성장 호르몬 분비 촉진 물질은 N-[1(R)-[1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드(MK-677)이다.
그 밖의 바람직한 성장 호르몬 분비 촉진 물질은
2-아미노-N-[2-(3a-(R)-벤질-2-메틸-3-옥소-2,3,3a,4,6,7-헥사하이드로-피라졸로-[4,3-c]피리딘-5-일)-1-(R)-벤질옥시메틸-2-옥소-에틸]-이소부티르아미드 또는 이의 L-타르타르산 염;
2-아미노-N-{1-(R)-벤질옥시메틸-2-[3a-(R)-(4-플루오로-벤질)-2-메틸-3-옥소-2,3,3a,4,6,7-헥사하이드로-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-일]-2-옥소-에틸}이소부티르아미드; 및
2-아미노-N-[2-(3a-(R)-벤질-3-옥소-2,3,3a,4,6,7-헥사하이드로-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-일)-1-(R)벤질옥시메틸-2-옥소-에틸]이소부티르아미드이다.
일반적으로, 본 발명의 화합물은 특히 본원에 함유된 내용의 견지에서, 화학적 분야에 공지된 방법을 포함하는 공정에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물을 제조하기 위해 유용한 제조방법중 일부는 원위 작용기의 보호를 필요로 한다(예: 1급 아민, 2급 아민, 카복실). 이러한 보호의 필요성은 원위 작용기의 성질 및 제조방법의 조건에 따라 다양하다. 이러한 보호의 필요성은 당해 기술분야의 숙련인들에 의해 용이하게 검사될 수 있다. 이러한 보호/탈보호 방법의 사용 또한 당해 기술분야의 숙련인들이 알고 있는 범위 이내이다. 보호기 및 이들의 용도에 대한 일반적인 기술에 있어서, 다음 문헌을 참조한다[참조: T.W.Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991]. 본 발명의 화합물을 위한 출발물질 및 시약은 용이하게 입수할 수 있거나 통상적인 유기 합성방법을 사용하여 당해 기술분야의 숙련인들에 의해 용이하게 합성될 수 있다. 예를 들면, 본원에 사용된 많은 화합물들이 자연에서 발견된 화합물과 관련되고 이들로부터 유도되며, 이들은 대단한 과학적 관심의 대상이 되고 상업적으로 필요한 것이며 따라서 많은 이러한 화합물들이 시판중이고 문헌에 기록되어 있으며 문헌에 기록된 방법에 의해 시판중인 그 밖의 물질로부터 용이하게 제조될 수 있다. 이러한 화합물은 예를 들면 프로스타글란딘을 포함한다.
본 발명의 화합물중 일부는 비대칭 탄소원자를 갖고 따라서 엔안티오머 또는 부분입체 이성질체이다. 부분입체 이성질체 혼합물은 이들의 물리 화학적 차이를 기본으로 원래 공지된 방법(예: 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화방법)에 의해 각각의 부분입체 이성질체로 분리될 수 있다. 엔안티오머는 엔안티오머 혼합물을 적절한 광학적 활성 화합물(예: 알콜)과 반응시키고, 부분입체 이성질체를 분리하고 각각의 부분입체 이성질체를 상응하는 순수한 엔안티오머로 전환시킴으로써(예를 들면 가수분해함으로써) 부분입체 이성질체 혼합물로 전환시켜 분리될 수 있다. 부분입체 이성질체를 포함하는 이러한 모든 이성질체, 엔안티오머 및 이의 혼합물은 본 발명의 일부로서 간주될 수 있다.
비록 많은 본 발명의 화합물은 생리학적 상태에서 이온화할 수 없지만, 본 발명의 화합물중 일부는 생리학적 상태에서 이온화가능하다. 따라서, 예를 들면 본 발명의 화합물중 일부는 산성이고 이들은 약제학적으로 허용가능한 양이온과 함께 염을 형성한다. 이러한 모든 염은 본 발명의 범위 안에 있고 이들은 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면, 이들은 산성 및 염기성 형태를 통상적으로 화학량적 비율로 수성, 비수성 또는 부분적으로 수성 매질중에 적절하게 접촉시킴으로써 단순히 제조될 수 있다. 염은 여과에 의해, 침전에 의해 비용매와 함께 회수되고, 수성 용액의 경우 용매를 여과, 증발시키거나 적절하게 동결건조시켜 회수한다.
또한, 본 발명의 화합물중 몇몇은 염기성이고, 이들은 약제학적으로 허용가능한 음이온과 함께 염을 형성한다. 모든 이러한 염은 본 발명의 범주 안에 있으며 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면, 이들은 산성 및 염기성 형태를 화학량론적 비율로 수성, 비수성, 또는 부분적으로 수성 매질중에 적절하게 접촉시킴으로써 단순히 제조될 수 있다. 염은 여과에 의해, 침전에 의해 비용매와 함께 회수하고, 수성 용액의 경우 용매를 여과, 증발시키거나 적절하게 동결건조시켜 회수한다.
또한, 본 발명의 화합물이 수화물 또는 용매화합물을 형성할 경우, 이들 역시 본 발명의 범주 안에 포함된다.
본 발명의 약제학적 복합 물질 및 방법은 포유류, 특히 사람에 있어서 뼈 교체를 활성화하거나 뼈 재흡수를 방지하거나, 뼈 형성을 증가시키는 제제로서 처방학적 용도에 적합하다. 이들 작용이 골다공증의 전개, 및 뼈 관련장애와 밀접한 관계가 있기 때문에, 이러한 복합 물질은 이들의 뼈에 미치는 작용 덕분에 골다공증을 예방하고, 저지하거나, 퇴행시키거나, 반전시킨다.
포유류(예:, 사람, 특히 여성)에게 있어서 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병(예: 골다공증)을 치료하는 약품으로서 본 발명의 화합물의 유용성은 통상적인 시험 및 이후 기술되는 생체외 및 생체내 시험(복합 및 연속 치료 프로토콜; 에스트로겐 작용물질/길항물질 프로토콜; 동화작용제 프로토콜; 생체외 에스트로겐 수용체 결합 시험; 및 성장 호르몬/성장 호르몬 분비 촉진 물질 프로토콜)에서 본 발명의 화합물의 활성에 의해 증명된다. 이러한 시험은 또한 본 발명의 화합물의 활성을 스스로 비교하고 공지된 다른 화합물의 활성과 비교하는 수단을 제공한다. 이들 비교의 결과는 사람을 비롯한 포유류에 있어서 이러한 질병을 치료하기 위한 투여량을 측정하는데 유용하다.
복합 및 연속 치료 프로토콜
하기 프로토콜은 물론 당해 기술분야의 숙련인들에 의해 변화될 수 있다. 예를 들면, 건강한 숫컷 또는 암컷 래트, 성 호르몬 결핍 숫컷(정소절제술) 또는 암컷(난소절제술) 래트를 사용할 수 있다. 또한, 상이한 월령(예: 12월령)의 숫컷 또는 암컷 래트를 연구에 사용할 수 있다. 래트는 건강하거나 거세될 수 있고(정소절제술 또는 난소절제술될 수 있고), 특정 기간(예: 2주 내지 2개월) 동안 상이한 투여량(예: 1, 3 또는 6 mg/kg/일)으로 프로스타글란딘 E2(PGE2)과 같은 동화작용제로 투여한 후, 특정 기간 동안(예: 2주 내지 2개월) 상이한 투여량(예: 1, 5, 10 mg/kg/일)으로 드롤록시펜과 같은 항-재흡수제를 투여하거나, 특정 기간(예: 2주 내지 2개월)동안 상이한 투여량으로 동화작용제 및 항-재흡수제로 복합 치료할 수 있다. 거세된 래트를, 외과수술 후 다음날(뼈 손실을 방지하기 위해) 또는 뼈 손실이 이미 시작했을 때(뼈 질량을 회복하기 위해) 치료를 시작할 수 있다.
그러나 다음 프로토콜은 뼈 동화작용제로서 PGE2를 그리고 항-재흡수제로서 드롤록시펜을 사용하여 기술되며, 그 밖의 동화작용제 및 항-재흡수제를 이러한 프로토콜에서 시험할 수 있다.
104마리의 월령 12개월의 암컷 스프라그-돌리 래트(Sprague-Dawley rat)(미국 매사추세츠주 윌밍톤 찰스 리버)를 0개월째 모의 수술하거나 또는 난소절제술(OVX)을 수행한다. 수술한지 3개월 후에, OVX 래트에 프로스타글란딘 E2(PGE2), 공지된 동화작용성 뼈 제제를 3 mg/kg/일을 투여하거나(피하 주입), PGE2는 3 mg/kg/일로(피하 주입) 드롤록시펜(DRO)은 10 mg/kg/일로(경구) 2개월동안 함께 투여한다. 이후, PGE2치료를 그만두고 래트를 비히클(10% 알콜/염수) 또는 DRO(10 mg/kg/일, 경구)로 추가의 1.5 개월 동안 하기 설명하는 바와 같이 처리한다.
그룹 I: 8마리의 래트를 기본 대조군으로서 0개월째 부검한다.
그룹 II: 8마리의 모의 수술된 래트를 예비처리 대조군으로서 3개월째 부검한다.
그룹 III: 8마리의 모의 수술된 래트를 3 내지 5개월째 비히클(10% 에탄올/염수)로 경구적으로 처리하고, 5개월째 부검한다.
그룹 IV: 8마리의 모의 수술된 래트를 3 내지 6.5개월째 비히클(10% 에탄올/염수)로 경구적으로 처리하고, 6.5개월째 부검한다.
그룹 V: 8마리의 OVX 래트를 예비처리 대조군으로서 3개월째 부검한다.
그룹 VI: 8마리의 OVX 래트를 비히클(10% 에탄올/염수)로 3 내지 5개월째 경구적으로 처리하고 5개월째 부검한다.
그룹 VII: 8마리의 OVX 래트를 비히클(10% 에탄올/염수)로 3 내지 6.5개월째 경구적으로 처리하고 6.5개월째 부검한다.
그룹 VIII: 8마리의 OVX 래트를 3 내지 6.5개월째 PGE2 3 mg/kg/일로 피하 주입하고, 5개월째 부검한다.
그룹 IX: 8마리의 OVX 래트를 3 내지 5개월째 PGE2 3 mg/kg/일로 피하 주입하고, 5 내지 6.5개월째 비히클로 피하 주입한 후 6.5개월째 부검하였다.
그룹 X: 8마리의 OVX 래트를 3 내지 5개월째 PGE2 3mg/kg/일로 피하 주입하고, 5 내지 6.5개월째 DRO 10 mg/kg/일로 경구투여한 후 6.5개월째 부검한다.
그룹 XI: 8마리의 OVX 래트를 3 내지 5개월째 PGE2 3mg/kg/일로 피하 주입하고, 3 내지 5개월째 DRO 10 mg/kg/일로 경구투여한 후 5개월째 부검한다.
그룹 XII: 8마리의 OVX 래트를 3 내지 5개월째 PGE2 3mg/kg/일로 피하 주입하고, 3 내지 5개월째 DRO 10 mg/kg/일로 경구투여한 후 5 내지 6.5개월째 비히클을 투여한 후 6.5개월째 부검한다.
그룹 XIII: 8마리의 OVX 래트를 3 내지 5개월째 PGE2로 3 mg/kg/일로 피하 주입하고, DRO 10 mg/kg/일로 경구투여하고, 5 내지 6.5개월째 DRO 단독으로 투여한 후, 6.5개월째 부검한다.
PGE2(미국 미시간주 안 아버 소재의 캐이만 케미칼 캄파니(Cayman Chemical Co.)) 또는 드롤록시펜(미국 코텍티컷주 소재의 파이저 인코포레이티드(Pfizer Inc.)) 분말을 모두 일단 100% 에탄올에 용해하고 목적하는 농도까지 염수로 추가로 희석한다(최종 에탄올 농도는 10%였다). PGE 용액을 1 mL/kg로 등에 매일 피하 주입한다. 드롤록시펜 용액을 1 mL/래트로 매일 경구적으로 투여한다. 뼈 조직에서 기능적인 변화를 검사하기 위해 사망 전 12일 및 2일 전에 모든 래트에 10 mg/kg 칼세인(미국 미주리주 세인트 루이스 소재의 시그마 케미칼 캄파니(Sigma Chemical Co.)로부터 제조된 플루오로크롬 뼈 메이커(fluorochrome bone maker))을 피하 주입한다.
래트를 케타민 마취하에 죽인다. 다음 종말점을 검사한다:
대퇴골 무기질 측정: 각각의 래트로부터 우측 대퇴골을 부검시 제거하고, "국소 고해상도 스캔(Regional High Resolution Scan)" 소프트웨어(미국 매사추세츠주 왈탐 소재의 홀로직 인코포레이티드(Hologic Inc.))가 장착된 이중 에너지 X선 흡수법(DXA, QDR 1000/W, 미국 매사추세츠주 왈탐 소재의 홀로직 인코포레이티드)을 사용하여 스캐닝한다. 스캔 필드 크기는 5.08 × 1.902 ㎝이고, 해상도는 0.0254 × 0.0127 ㎝이고 스캔 속도는 7.25 mm/초이다. 대퇴골 스캔 이미지를 분석하고 전체 대퇴골(whole femora; WF), 원위 대퇴골 골간단(distal femoral metaphyses; DFM), 대퇴 골간(femoral shaft; FS) 및 근위 대퇴골(proximal femora; PF)의 뼈 면적, 뼈 무기질 함량(bone mineral content; BMC) 및 뼈 무기질 밀도(bone mineral density; BMD)를 측정한다.
요부 척추골 무기질 측정: "국소 고해상도 스캔" 소프트웨어(미국 매사추세츠주 왈탐 소재의 홀로직 인코포레이티드)가 장착된 이중 에너지 X선 흡수법(QDR 1000/W, 미국 매사추세츠주 왈탐 소재의 홀로직 인코포레이티드)을 사용하여 마취된 래트의 전체 요부 척추 및 6개의 요부 척추(LV1-6) 각각의 뼈 면적, 뼈 무기질 함량(BMC) 및 뼈 무기질 밀도(BMD)를 측정한다. 래트를 케타민/롬푼(4:3의 비율)의 혼합물을 1 mL/kg로 주입함으로써(복강내 주입) 마취시킨 후 래트 플랫포옴상에 놓는다. 스캔 필드 크기는 6 × 1.9 ㎝이고, 해상도는 0.0254 × 0.0127 ㎝이고 스캔 속도는 7.25 mm/초이다. 전체 요부 척추 스캔 이미지를 수득하고 분석한다. 뼈 면적(BA) 및 뼈 무기질 함량(BMC)을 측정하고, 뼈 무기질 밀도를 전체 요부 척추 및 6개의 요부 척추(LV1-6) 각각에 대해 계산한다(MBC를 BA로 나눔).
근위 경골 골간단의 망상조직의 뼈 히스토몰포메터 분석: 우측 경골을 부검시 제거하고, 근육없이 해부하고 세부분으로 절단한다. 근위 경골을 70% 에탄올 중에 담그고, 구배 농도의 에탄올중 탈수하고 아세톤중에 지방제거하고 메틸 메타크릴레이트중에 포매한다(미국 뉴욕주 로체스터 소재의 이스트만 오가닉 케미칼즈(Eastman Organic Chemiclas)). 4 및 10 ㎛ 두께에서 근위 경골 골간단의 전방 분획을 레이케르트-정 폴리컷 D 마이크로톰(Reichert-Jung Polycut S microtome)을 사용하여 절단한다. 각각의 래트로부터 취한 4 ㎛ 분획 하나와 10 ㎛ 분획 하나를 망상구조의 뼈 히스토몰포메터에 사용한다. 4 ㎛ 분획은 변형된 마손 트리크롬 염색재(Masson's Trichrome stain)로 염색하고 10 ㎛ 분획은 염색되지 않은 상태로 남겨둔다.
바이오퀀트 OS/2 히스토모로포메터 시스템(Bioquant OS/2 histomorphometry system)(미국 테네시주 나슈빌 소재의 R&M 바이오메트릭스 인코포레이티드(R&M Biometrics, Inc.))을 사용하여 성장 플레이트-골단 연결부에 1.2 내지 3.6 mm 떨어져 있는 근위 경골 골간단의 이차적인 해면질을 정적 및 동적 히스토모로포메터 측정한다. 경골 골간단 부분의 처음 1.2 mm는 이차적인 해면질에 대해 측정을 한정하기 위해 생략할 필요가 있다. 4㎛ 분획을 사용하여 뼈 체적, 뼈 구조 및 뼈 재흡수와 관련된 지수를 측정하고 10 ㎛ 분획을 사용하여 뼈 형성 및 뼈 교체와 관련된 지수를 측정한다.
I. 소주(小柱)의 뼈 체적 및 구조에 관련된 측정 및 계산:
1. 총 골간단 면적(Total metaphyseal area; TV, mm2): 성장 플레이트-골단 연결부에서 1.2 내지 3.6 mm 떨어진 골간단 면적
2. 소주 뼈 면적(BV, mm2): TV 안에 있는 소주의 총 면적.
3. 소주 뼈 둘레(BS, mm): 소주의 총 둘레의 길이
4. 소주 뼈 체적(BV/TV, %): BV/TV × 100
5. 소주 뼈 개수(TBN, #/mm): 1.199/2 × BS/TV.
6. 소주 뼈 두께(TBT, ㎛): (2000/1.199) × (BV/BS).
7. 소주 뼈 분리부(TBS, ㎛): (2000 × 1.199) × (TV - BV).
II. 뼈 재흡수에 관련된 측정 및 계산
1. 파골세포 개수(Osteoclast number; OCN, #): 총 골간단 면적 안에 총 파골세포의 개수
2. 파골세포 둘레(OCP, mm): 파골세포에 의해 포함되는 소주 둘레 길이
3. 파골세포 개수/mm(OCN/mm, #/mm): OCN/BS.
4. 파골세포 둘레(%OCP, %): OCP/BS × 100.
III. 뼈 형성 및 교체와 관련된 측정 및 계산
1. 단일-칼세인 표지된 둘레(single-calcein labeled perimeter, SLS, mm): 하나의 칼세인 표지로 경골 둘레 표지된 총 길이
2. 이중-칼세인 표지된 둘레(DLS, mm): 2개의 칼세인 표지로 표지된 소주의 총 길이
3. 내부 표지된 나비(Inter-labeled width, ILW, ㎛): 두 개의 칼세인 표지 사이의 평균 길이
4. % 무기질화 둘레(percent mineralizing perimeter; PMS, %): (SLS/2 + DLS)/BS × 100.
5. 무기질 접촉률(Mineral apposition rate)(MAR, ㎛/일): ILW/표지 간격.
6. 뼈 형성률/표면 비교(BFR/BS, ㎛2/d/㎛): (SLS/2 + DLS) × MAR/BS.
7. 뼈 교체율(BTR, %/y): (SLS/2 + DLS) × MAR/BV × 100.
통계자료
통계자료는 스타트뷰(StatView) 4.0 팩키지(미국 캘리포니아주 버클리 소재의 아바쿠스 콘셉츠 인코포레이티드(Abacus Concepts, Inc.))를 사용하여 계산할 수 있다. 변형 분석(analysis of variance; ANOVA) 시험에 이어 피셔스 PLSD(Fisher's PLSD)를 사용하여 그룹들 사이의 차이점을 비교한다.
에스트로겐 작용물질/길항물질 프로토콜
에스트로겐 작용물질/길항물질은 뼈 교체를 억제하고 에스트로겐 결핍 유도 뼈 손실을 예방하는 부류의 화합물이다. 난소절제된 래트 뼈 손실 모델을 폐경기 후 뼈 손실 모델로서 광범위하게 사용하였다. 이러한 모델을 사용하여, 에스트로겐 작용물질/길항물질 화합물의 효능을 뼈 손실을 예방하고 뼈 재흡수를 억제하는데 시험할 수 있다.
상이한 월령(예: 5월령)의 스프라그-돌리 암컷 래트(미국 매사추세츠주 윌밍톤 소재의 찰스 리버)를 이러한 연구에 사용한다. 래트를 실험 기간 동안 20 ㎝ × 32 ㎝ × 20 ㎝ 케이지에 혼자서 살게 한다. 모든 래트를 물에 출입가능하게 하고 0.97% 칼슘, 0.85% 포스포러스, 및 1.05 IU/g의 비타민 D3을 함유하는 펠렛화된 시판중인 식이요법(미국 뉴욕주 시라커스 소재의 아그웨이 카운티 푸드 인코포레이티드(Agway County Food, Inc.)로부터 시판중인 아그웨이 프로랩 3000(Agway ProLab 3000))을 수행한다.
래트 그룹(8 내지 10)을 모의 수술하고 비히클(10% 에탄올 및 90% 염수, 1 mL/일)로 경구처리하고 나머지 래트들은 양측 난소절제술(OVX)을 수행하고 비히클(경구), 17β-에스트라디올(시그마(Sigma), E-8876, E2, 30 ㎍/kg, 매일 피하 주사), 또는 에스트로겐 작용물질/길항물질(예: 매일 경구투여로 드롤록시펜 5, 10, 또는 20 mg/kg)을 특정 기간 동안(예: 4주) 처리한다. 모든 래트들은 뼈 조직에서 기능적인 변화를 검사하기 위해 죽이기 전 12일 및 2일째 10 mg/kg 칼세인(플루오로크롬 뼈 메이커)을 피하 주입한다. 처리한 지 4주 후, 래트를 부검한다. 하기 종말점을 측정한다:
체중 이득: 부검시 체중 - 수술시 체중
자궁 중량 및 조직학: 자궁을 각각의 래트로부터 부검중에 제거하고 즉시 칭량한다. 이후, 자궁을 조직학 측정단계(예: 자궁 단면 조직 면적, 기질의 두께 및 내강의 상피 두께)에 도입한다.
총 혈청 콜레스테롤: 혈액을 심장 천자에 의해 수득하고 4℃에서 응고시킨 다음, 10분 동안 2,000 g으로 원심분리한다. 혈청시료를 고성능 콜레스테롤 열량계 시험(미국 인디아나주 인디아나폴리스 소재의 베링커 만하임 바이오케미칼즈(Boehringer Mannheim Biochemicals))을 사용하여 총 혈청 콜레스테롤에 대해 분석한다.
대퇴골 무기질 측정: 각각의 래트로부터 우측 대퇴골을 부검시 제거하고, "국소 고해상도 스캔" 소프트웨어(미국 매사추세츠주 왈탐 소재의 홀로직 인코포레이티드)가 장착된 이중 에너지 X선 흡수법(DEXA, QDR 1000/W, 미국 매사추세츠주 왈탐 소재의 홀로직 인코포레이티드)을 사용하여 스캐닝한다. 스캔 필드 크기는 5.08 × 1.902 ㎝이고, 해상도는 0.0254 × 0.0127 ㎝이고 스캔 속도는 7.25 mm/초이다. 대퇴골 스캔 이미지를 분석하고 전체 대퇴골(WF), 원위 대퇴골 골간단(DFM), 대퇴 골간(FS) 및 근위 대퇴골(PF)의 뼈 면적, 뼈 무기질 함량(BMC) 및 뼈 무기질 밀도(bone mineral density; BMD)를 측정한다.
요부 척추골 무기질 측정: "국소 고해상도 스캔" 소프트웨어(미국 매사추세츠주 왈탐 소재의 홀로직 인코포레이티드)가 장착된 이중 에너지 X선 흡수법(QDR 1000/W, 미국 매사추세츠주 왈탐 소재의 홀로직 인코포레이티드)을 사용하여 마취된 래트의 전체 요부 척추 및 6개의 요부 척추(LV1-6) 각각의 뼈 면적, 뼈 무기질 함량(BMC) 및 뼈 무기질 밀도(BMD)를 측정한다. 래트를 케타민/롬푼(4:3의 비율)의 혼합물을 1 mL/kg로 주입함으로써(복강내 주입) 마취시킨 후 래트 플랫포옴상에 놓는다. 스캔 필드 크기는 6 × 1.9 ㎝이고, 해상도는 0.0254 × 0.0127 ㎝이고 스캔 속도는 7.25 mm/초이다. 전체 요부 척추 스캔 이미지를 수득하고 분석한다. 뼈 면적(BA) 및 뼈 무기질 함량(BMC)을 측정하고, 뼈 무기질 밀도를 전체 요부 척추 및 6개의 요부 척추(LV1-6) 각각에 대해 계산한다(MBC를 BA로 나눔).
근위 경골 골간단의 망상조직의 뼈 히스토몰포메터 분석: 우측 경골을 부검시 제거하고, 근육없이 해부하고 세부분으로 절단한다. 근위 경골을 70% 에탄올 중에 담그고, 구배 농도의 에탄올중 탈수하고 아세톤중에 지방제거하고 메틸 메타크릴레이트중에 포매한다(미국 뉴욕주 로체스터 소재의 이스트만 오가닉 케미칼즈). 4 및 10 ㎛ 두께에서 근위 경골 골간단의 전방 분획을 레이케르트-정 폴리컷 D 마이크로톰을 사용하여 절단한다. 각각의 래트로부터 취한 4 ㎛ 분획 하나와 10 ㎛ 분획 하나를 망상구조의 뼈 히스토몰포메터에 사용한다. 4 ㎛ 분획은 변형된 마손 트리크롬 염색재로 염색하고 10 ㎛ 분획은 염색되지 않은 상태로 남겨둔다.
바이오퀀트 OS/2 히스토모로포메터 시스템(미국 테네시주 나슈빌 소재의 R&M 바이오메트릭스 인코포레이티드)을 사용하여 성장 플레이트-골단 연결부에 1.2 내지 3.6 mm 떨어져 있는 근위 경골 골간단의 이차적인 해면질을 정적 및 동적 히스토모로포메터 측정한다. 경골 골간단 부분의 처음 1.2 mm는 이차적인 해면질에 대해 측정을 한정하기 위해 생략할 필요가 있다. 4㎛ 분획을 사용하여 뼈 체적, 뼈 구조 및 뼈 재흡수와 관련된 지수를 측정하고 10 ㎛ 분획을 사용하여 뼈 형성 및 뼈 교체와 관련된 지수를 측정한다.
I. 소주의 뼈 체적 및 구조에 관련된 측정 및 계산:
1. 총 골간단 면적(TV, mm2): 성장 플레이트-골단 연결부에 1.2 내지 3.6 mm 떨어진 골간단 면적
2. 소주 뼈 면적(BV, mm2): TV 안에 있는 소주의 총 면적.
3. 소주 뼈 둘레(BS, mm): 소주의 총 둘레의 길이
4. 소주 뼈 체적(BV/TV, %): BV/TV × 100
5. 소주 뼈 개수(TBN, #/mm): 1.199/2 × BS/TV.
6. 소주 뼈 두께(TBT, ㎛): (2000/1.199) × (BV/BS).
7. 소주 뼈 분리(TBT, ㎛): (2000 × 1.199) × (TV - BV).
II. 뼈 재흡수에 관련된 측정 및 계산
1. 파골세포 개수(OCN, #): 총 골간단 면적 안에 총 파골세포의 개수
2. 파골세포 둘레(OCP, mm): 파골세포에 의해 포함되는 소주 둘레 길이
3. 파골세포 개수/mm(OCN/mm, #/mm): OCN/BS.
4. 파골세포 둘레(%OCP, %): OCP/BS × 100.
III. 뼈 형성 및 교체와 관련된 측정 및 계산
1. 단일-칼세인 표지된 둘레(SLS, mm): 하나의 칼세인 표지로 경골 둘레 표지된 총 길이
2. 이중-칼세인 표지된 둘레(DLS, mm): 2개의 칼세인 표지로 표지된 소주의 총 길이
3. 내부 표지된 나비(ILW, ㎛): 두 개의 칼세인 표지 사이의 평균 길이
4. % 무기질화 둘레(PMS, %): (SLS/2 + DLS)/BS × 100.
5. 무기질 접촉률(MAR, ㎛/일): ILW/표지 간격.
6. 뼈 형성률/표면 비교(BFR/BS, ㎛2/d/㎛): (SLS/2 + DLS) × MAR/BS.
7. 뼈 교체율(BTR, %/y): (SLS/2 + DLS) × MAR/BV × 100.
통계자료
통계자료는 스타트뷰 4.0 팩키지(미국 캘리포니아주 버클리 소재의 아바쿠스 콘셉츠 인코포레이티드)를 사용하여 계산할 수 있다. 변형 분석(ANOVA) 시험에 이어 피셔스 PLSD를 사용하여 그룹들 사이의 차이점을 비교한다.
동화작용제 프로토콜
뼈 형성을 자극하고 뼈 질량을 증가시키는데 있어서 동화작용 뼈 제제의 활성을 건강한 숫컷 또는 암컷 래트, 성 호르몬 결핍 숫컷(정소절제술) 또는 암컷(난소절제술) 래트에 대해 시험할 수 있다.
상이한 월령(예: 3월령)의 숫컷 또는 암컷 래트를 연구중에사용한다. 래트는 건강하거나 거세될 수 있고(정소절제술 또는 난소절제술될 수 있고) 특정 기간(예: 2주 내지 2개월) 동안 상이한 투여량(예: 1, 3 또는 6 mg/kg/일)으로 프로스타글란딘 E2(PGE2)과 같은 동화작용제로 투여한다. 거세된 래트의 경우, 치료를 외과수술 후 다음날(뼈 손실을 방지하기 위해) 또는 뼈 손실이 이미 시작했을 때(뼈 질량을 회복하기 위해) 치료를 시작할 수 있다. 연구중, 모든 래트를 물에 출입가능하게 하고 1.46% 칼슘, 0.99% 포스포러스, 및 4.96 IU/g의 비타민 D3을 함유하는 펠렛화된 시판중인 식이요법(미국 위스콘신주 매디슨 소재의 하란 테크레드(Harlan Teklad), 테크레드 로덴트 다이어트 # 8064(Teklad Rodent Diet # 8064))을 수행한다. 모든 래트를 죽이기 12일 및 2일전에 10 mg/kg 칼세인을 피하 투여한다.
래트를 죽인다. 다음 종말점을 측정한다:
대퇴골 무기질 측정: 각각의 래트로부터 우측 대퇴골을 부검시 제거하고, "국소 고해상도 스캔" 소프트웨어(미국 매사추세츠주 왈탐 소재의 홀로직 인코포레이티드)가 장착된 이중 에너지 X선 흡수법(DEXA, QDR 1000/W, 미국 매사추세츠주 왈탐 소재의 홀로직 인코포레이티드)을 사용하여 스캐닝한다. 스캔 필드 크기는 5.08 × 1.902 ㎝이고, 해상도는 0.0254 × 0.0127 ㎝이고 스캔 속도는 7.25 mm/초이다. 대퇴골 스캔 이미지를 분석하고 전체 대퇴골(WF), 원위 대퇴골 골간단(DFM), 대퇴 골간(FS) 및 근위 대퇴골(PF)의 뼈 면적, 뼈 무기질 함량(BMC) 및 뼈 무기질 밀도(BMD)를 측정한다.
근위 경골 골간단의 망상조직의 뼈 히스토몰포메터 분석: 우측 경골을 부검시 제거하고, 근육없이 해부하고 세부분으로 절단한다. 근위 경골을 70% 에탄올 중에 담그고, 구배 농도의 에탄올중 탈수하고 아세톤중에 지방제거하고 메틸 메타크릴레이트중에 포매한다(미국 뉴욕주 로체스터 소재의 이스트만 오가닉 케미칼즈). 4 및 10 ㎛ 두께에서 근위 경골 골간단의 전방 분획을 레이케르트-정 폴리컷 D 마이크로톰을 사용하여 절단한다. 각각의 래트로부터 취한 4 ㎛ 분획 하나와 10 ㎛ 분획 하나를 망상구조의 뼈 히스토몰포메터에 사용한다. 4 ㎛ 분획은 변형된 마손 트리크롬 염색재로 염색하고 10 ㎛ 분획은 염색되지 않은 상태로 남겨둔다.
바이오퀀트 OS/2 히스토모로포메터 시스템(미국 테네시주 나슈빌 소재의 R&M 바이오메트릭스 인코포레이티드)을 사용하여 성장 플레이트-골단 연결부에 1.2 내지 3.6 mm 떨어져 있는 근위 경골 골간단의 이차적인 해면질을 정적 및 동적 히스토모로포메터 측정한다. 경골 골간단 부분의 처음 1.2 mm는 이차적인 해면질에 대해 측정을 한정하기 위해 생략된다. 4㎛ 분획을 사용하여 뼈 체적, 뼈 구조 및 뼈 재흡수와 관련된 지수를 측정하고 10 ㎛ 분획을 사용하여 뼈 형성 및 뼈 교체와 관련된 지수를 측정한다.
I. 소주의 뼈 체적 및 구조에 관련된 측정 및 계산:
1. 총 골간단 면적(TV, mm2): 성장 플레이트-골단 연결부에 1.2 내지 3.6 mm 떨어진 골간단 면적
2. 소주 뼈 면적(BV, mm2): TV 안에 있는 소주의 총 면적.
3. 소주 뼈 둘레(BS, mm): 소주의 총 둘레의 길이
4. 소주 뼈 체적(BV/TV, %): BV/TV × 100
5. 소주 뼈 개수(TBN, #/mm): 1.199/2 × BS/TV.
6. 소주 뼈 두께(TBT, ㎛): (2000/1.199) × (BV/BS).
7. 소주 뼈 분리(TBT, ㎛): (2000 × 1.199) × (TV - BV).
II. 뼈 재흡수에 관련된 측정 및 계산
1. 파골세포 개수(OCN, #): 총 골간단 면적 안에 총 파골세포의 개수
2. 파골세포 둘레(OCP, mm): 파골세포에 의해 포함되는 소주 둘레 길이
3. 파골세포 개수/mm(OCN/mm, #/mm): OCN/BS.
4. 파골세포 둘레(%OCP, %): OCP/BS × 100.
III. 뼈 형성 및 교체와 관련된 측정 및 계산
1. 단일-칼세인 표지된 둘레(SLS, mm): 하나의 칼세인 표지로 경골 둘레 표지된 총 길이
2. 이중-칼세인 표지된 둘레(DLS, mm): 2개의 칼세인 표지로 표지된 소주의 총 길이
3. 내부 표지된 나비(ILW, ㎛): 두 개의 칼세인 표지 사이의 평균 길이
4. % 무기질화 둘레(PMS, %): (SLS/2 + DLS)/BS × 100.
5. 무기질 접촉률(MAR, ㎛/일): ILW/표지 간격.
6. 뼈 형성률/표면 비교(BFR/BS, ㎛2/d/㎛): (SLS/2 + DLS) × MAR/BS.
7. 뼈 교체율(BTR, %/y): (SLS/2 + DLS) × MAR/BV × 100.
통계자료
통계자료는 스타트뷰 4.0 팩키지(미국 캘리포니아주 버클리 소재의 아바쿠스 콘셉츠 인코포레이티드)를 사용하여 계산할 수 있다. 변형 분석(ANOVA) 시험에 이어 피셔스 PLSD를 사용하여 그룹들 사이의 차이점을 비교한다.
생체외 에스트로겐 수용체 결합 시험
[3H]-에스트라디올을 효모중 재조합 방법에 의해 수득된 사람 에스트로겐 수용체로부터 대체하기 위한 본 발명의 에스트로겐 작용물질/길항물질 화합물의 능력을 측정하는 생체외 에스트로겐 수용체 결합 시험을 사용하여 본 발명의 화합물의 에스트로겐 수용체 결합 친화력을 측정하였다. 이러한 평가에 사용된 물질은
(1) 시험 완충제, TD-0.3(10 Nm Tris, pH 7.6, 0.3M 염화칼륨 및 5mM 디티오트레이톨(DTT)(시그마 캄파니)을 함유, pH 7.6);
(2) 사용된 방사성 리간드, 뉴 잉글랜드 뉴클리어(New England Nuclear)로부터 입수된 [3H]-에스트라디올;
(3) 사용된 차가운 리간드, 시그마로부터 입수된 에스트라디올;
(4) 재조합 사람 에스트로겐 수용체, hER(human estrogen receptor).
시험될 화합물의 용액을 TD-0.3과 4% DMSO 및 16% 에탄올중에 제조한다. 삼중수소화된 에스트라디올을 TD-0.3중 용해시켜 시험중 최종 농도가 5nM가 되도록 한다. hER을 또한 TD-0.3으로 희석하여 총 단백질 4 내지 10 ㎍이 각각의 시험 웰에 있도록 한다. 적정 플레이트를 사용하여, 각각의 배양물에 차가운 에스트라디올(비특이성 결합) 50 ㎕ 또는 화합물 용액, 삼중수소화된 에스트라디올 20 ㎕ 및 hER 용액 30 ㎕를 가한다. 각각의 플레이트는 화합물의 총 결합 및 변화하는 농도를 3개씩 갖는다. 플레이트를 4℃에서 밤새 항온처리한다. 이어서 결합 반응을 10 mM Tris(pH 7.6)중 3% 하이드록시아파타이트 100 mL을 첨가하고 혼합하고 15분 동안 4℃에서 항온처리한다. 혼합물을 원심분리하고 펠렛을 10 mM Tris(pH 7.6)중 1% Triton-X 100으로 4회 세척하였다. 하이드록시아파타이트 펠렛을 에코신트 A(Ecoscint A)중에 현탁시키고 방사활성을 β 섬광조영술을 사용하여 평가한다. 모든 3회 데이타 포인트(counts per minute, cpm)의 평균을 측정한다. 특이성 결합을, 총 결합된 cpm(재조합 수용체, 방사성 리간드만을 함유하는 반응 혼합물을 분리한 후 남아 있는 계수로 정의됨)에서 비특이성 cpm(재조합 수용체, 방사성 리간드 및 과량의 미표지부착 리간드를 함유하는 반응 혼합물을 분리한 후 남아 있는 계수로 정의됨)를 뺌으로써 계산한다. 화합물 효능을 IC50 측정에 의해 결정한다(총 결합된 특이성 삼중수소화된 에스트라디올의 50% 억제에 필요한 화합물의 농도). 화합물의 농도 변화의 존재하에 특이성 결합을 측정하고 총 결합된 특이성 방사성 리간드중 특이성 결합 %로서 계산된다. 데이터를 화합물에 의한 억제율(선형 눈금)대 화합물 농도(log 눈금)로서 도시한다.
성장 호르몬/성장 호르몬 분비 촉진 물질 프로토콜
배양된 래트 뇌하수체 세포로부터 GH 분비촉진을 자극하기 위한 능력을 갖는 화합물은 다음 프로토콜을 사용하여 동일시된다. 이들 시험은 또한 투여량을 결정하는데 표준물질에 대해 비교하기 위해 유용하다. 6주령 숫컷 위스타 래트(Wistar rat)의 뇌하수체로부터 세포를 단리한다. 단두한 후, 전방 뇌하수체엽을 차가운 살균 핸크스(Hank) 칭량된 염 용액 안으로 칼슘 또는 마그네슘(HBSS) 없이 제거한다. 조직은 매우 얇고, 이어서 HBSS중 10 U/mL 박테리아 프로테아제(EC 3.4.24.4, 시그마 P-6141)를 사용하여 기계적으로 보조된 효소 분산액의 2개의 사이클에 도입시킨다. 조직-효소 혼합물을 5% CO2대기중 30 rpm으로 방사 플라스크중에 약 37℃에서 약 30분 동안 교반하고, 약 15분 및 약 30분후 10 mL 피펫을 사용하여 손으로 분쇄한다. 이러한 혼합물을 약 5분 동안 200 × g으로 원심분리한다. 말 혈청을 상청액에 첨가하여 과량의 프로테아제를 중성화한다. 펠렛을 신선한 프로테아제중에 재현탁하고, 약 30 분 이상동안 상기 조건하에 교반하고, 궁극적으로 23 게이지 니들을 통과시킨다. 또한, 말 혈청을 첨가하고, 양쪽 다이제스트로부터 세포를 합하고, 펠렛화하고(약 15분 동안 200 × g), 세척하고, 배지에서 재현탁시키고 셈한다. 셀을 6.0 내지 6.5 × 104세포/㎠로 48-웰 코스타(Costar) 디쉬에 놓고 4.5 g/L 글루코즈, 10% 말 혈청, 2.5% 송아지 혈청, 소량의 1% 아미노산, 100 U/mL 니스타틴 및 50mg/mL 젠타마이신 황산염으로 보충된 둘베코스 모디파이드 이글 메듐(Dulbecco's Modified Eagle Medium, D-MEM)에서 GH 분비에 대해 시험하기전에 3 내지 4일 동안 배양한다.
시험 직전, 배양 웰을 2회 세정하고, 이어서 약 30분 동안 방출매질(25 mM 헤프스(Hepes)로 완충된 D-MEM, pH 7.4 및 37℃에서 0.5% 소 혈청 알부민 함유)중 약 30분 동안 평형화한다. 시험 화합물을 DMSO에 용해시키고, 이어서 미리-데운 방출 매질로 희석시킨다. 시험을 4회 수행한다. 시험을 방출 매질(비히클 또는 시험 화합물) 0.5 mL을 각각의 배지에 첨가함으로써 개시한다. 약 37℃에서 약 15분 동안 항온처리하고 이어서 배지를 꺼내어 종결하고, 이를 약 15분 동안 2000 × g에서 원심분리하여 세포 물질을 제거한다. 상청액중 래트 성장 호르몬 농도를 래트 성장 호르몬 참조 제조(NIDDK-rGH-RP-2) 및 파를로우 박사(Dr.A.Parlow)로부터 수득된 원숭이(NIDDK-안티-rGH-S-5) 안에서 사육된 래트 성장 호르몬 항혈청을 사용하여 표준 방사선 면역측정법 프로토콜에 의해 측정한다. 추가의 래트 성장 호르몬(미국 캘리포니아주 산디에고 소재의 스크립스 랩스(Scripps Labs), #G2414, 1.5U/mg)을 약 30μCi/㎍의 비활성이 되도록 트레이서로서 사용하기 위한 클로라민 T 방법에 의해 요오드화한다. 면역 복합체를 원숭이 lgG(미국 노쓰 캐롤라이나주 더함 소재의 오가논 테크니카(Organon Teknica) + 폴리에틸렌 글리콜에 염소 항혈청을 첨가함으로써 수득하고, 4.3%의 최종 농도까지 MW 10,000-20,000; 회수율은 원심분리에 의해 이루어진다. 이러한 시험은 바탕선 위에 튜브당 래트 성장 호르몬 0.08 내지 2.5 ㎍의 작동 범위를 갖는다. 활성 화합물은 일반적으로 1.4배보다 큰 성장 호르몬 방출을 자극한다[참조: Cheng,K., Chan, W.-S., Barreto, Jr., A., Convey, E.M., Smith, R.G. 1989].
시험 화합물을 래트의 정맥내 투여 후 외인성-자극된 성장 호르몬 방출에 대한 시험
21일령의 암컷 스프라그-돌리 래트(미국 매사츄세츠주 윌밍톤 소재의 챨스 리버 러보라토리(Charles River Laboratory))를 화합물 시험전에 국부적 비바륨 조건(24℃, 12시간 명, 12시간 암 사이클)에서 약 1주일 동안 길들인다. 모든 래트를 물 및 펠렛화 상업적인 식이요법(미국 뉴욕주 시라큐즈 소재의 아그웨이 칸트리 푸드(Agway Country Food))에 대해 임의량 평가한다.
실험일에, 시험 화합물을 1% 에탄올, 1mM 아세트산 및 염수중 0.1% 소 혈청 알부민을 함유하는 비히클중에 용해한다. 각각의 화합물을 n을 3으로하여 시험한다. 래트를 칭량하고 나트륨 펜토바르비톨(넴부톨, 50 mg/체중kg)의 복강내 주입을 통해 마취한다. 마취 투여 14분 후, 꼬리 끝을 잘라서 혈액 시료를 취하고 혈액이 마이크로원심분리 튜브 안으로 떨어지도록 한다(바탕선 혈액 시료, 대략 100㎕). 마취 투여 15분 후, 시험 화합물을 꼬리 정맥 안으로 정맥내 주사함으로써 전달하고, 1 mL/체중 kg의 총 주사 체적으로 한다. 추가의 혈액 시료를 화합물 투여 후 5, 10 및 15분에 꼬리로부터 취한다. 혈액 시료를 원심분리에 의해 혈청분리될 때까지 얼음 위에서 유지한다(10℃에서 10분 동안 1430×g). 혈청을 -80℃에서 상기 및 하기 언급하는 방사선 면역측정법에 의해 성장 호르몬이 결정될 때까지 저장한다.
개의 경구 투여 후 외인성-자극된 성장 호르몬 방출의 평가
실험일에, 시험 화합물을 적절한 투여량만큼 칭량하고 물 속에 용해시킨다. 투여량을 각각의 투여 생활규제에 대해 4마리의 개에게 가바즈에 의해 0.5 mL 체적/가바즈 kg으로 전달한다. 혈액 시료(2 mL)를 직접 정맥 천자 예비 투여에 의해 리튬 헤파린을 함유하는 2 mL 바큐테이너(vacutainer)를 사용하여 0.08, 0.17, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 2, 4, 6 및 8시간 후 경정맥으로부터 수거한다. 제조된 플라즈마를 분석될 때까지 -20℃에서 저장한다.
개의 성장 호르몬의 측정
개의 성장 호르몬 농도를 표준 방사선 면역측정법 프로토콜에 의해 개의 성장 호르몬(요오드화에 대한 항원 및 참조용 제제 AFP-1983B) 및 파를로우 박사(미국 캘리포니아주 토렌스 소재의 하버-UCLA 메디칼 센터(Harbor-UCLA Medical Center))로부터 입수한 원숭이 안에서 사육된 개의 성장 호르몬 항혈청(AFP-21452578)을 사용하여 측정한다. 개의 성장 호르몬의 클로라민 T-요오드화에 의해 생성하여 20 내지 40 μCi/㎍의 비활성이 되도록 트레이서를 제조한다. 면역 복합체를 원숭이 lgG(미국 노쓰 캐롤라이나주 더함 소재의 오가논 테크니카) + 폴리에틸렌 글리콜에 염소 항혈청을 첨가함으로써 수득하고, 4.3%의 최종 농도까지 MW 10,000-20,000; 회수율은 원심분리에 의해 이루어진다. 이러한 0.8 내지 2.5 ㎍ 개의 GH/튜브의 작동범위를 갖는다.
본 발명의 화합물의 투여방법은 본 발명의 화합물을 전신 및/또는 국소적으로 운반하는 임의의 방법을 통해서이다. 이들 방법은 경구, 비경구, 십이지장내 경로 등을 포함한다. 일반적으로, 본 발명의 화합물은 경구 투여될 수 있고, 단 경구 투여가 본 발명의 목적을 위해 부적절할 경우 또는 환자가 약품을 섭취할 수 없는 경우, 비경구 투여(예: 근육내, 복강내, 정맥내 또는 피하 주사, 또는 이식)될 수 있다. 본 발명의 두 가지 상이한 화합물은 동시에 같이 투여되거나 연속적으로 따로 투여될 수 있으며, 상기 기술한 바와 같이 제 1 화합물 및 상기 기술한 바와 같은 제 2 화합물을 약제학적으로 허용가능한 담체중에 함유하는 단일 약제학적 조성물이 투여될 수 있다.
예를 들면, 뼈 동화작용제는 단독으로 또는 항-재흡수제와 배합된 형태로 3개월 내지 3년 동안 사용된 후 항-재흡수제를 3개월 내지 3년 동안 단독으로 사용하고, 전체 치료 사이클을 선택적으로 반복할 수 있다. 선택적으로, 예를 들면 뼈 동화작용제를 단독으로 또는 항-재흡수제와 배합하여 3개월 내지 3년 동안 사용한 후, 항-재흡수제를 단독으로 환자의 나머지 수명동안 사용할 수 있다. 예를 들면, 한가지 바람직한 투여 양태에서, 상기 기술한 바와 같은 제 2 화합물(예: PGE2)을 매일 1회 투여하고 상기 기술한 바와 같은 제 1 화합물(예: 에스트로겐 작용물질/길항물질)을 매일 단일 또는 복합 투여식으로 투여할 수 있다. 선택적으로, 예를 들면, 또 다른 바람직한 투여 양태에 있어서 두 개의 화합물을 연속적으로 투여할 수 있는데, 이때 상기 기술한 바와 같은 제 2 화합물(예: PGE2)을 매일 1회, 뼈 질량을 뼈 골절 임계치 이상인 양만큼 증가시키기에 충분한 시간 동안 투여할 수 있고(세계 건강 기관 연구, "Assessment of Fracture Risk and its Application to Screening for Postmenopausal Osteoporosis(1994), Report of a World Health Organization Study Group, World Health Organization Technical Series 843"], 상기 기술한 바와 같은 제 1 화합물(예: 에스트로겐 작용물질/길항물질)을 단일 또는 복합 투여량으로 매일 투여할 수 있다. 상기 기술한 바와 같은 제 2 화합물(PGE2)를 경구 운반과 같은 신속한 운반 형태(예: 서방성 운반 형태는 피하는 것이 바람직하다)로 매일 1회 투여한다.
여하튼 투여되는 화합물의 양 및 시기는 물론 치료할 환자, 고통의 심각성, 투여 방법 및 담당의사의 판단에 달려 있다. 따라서, 환자마다 변할 수 있기 때문에, 하기 주어진 투여량은 지침선이며 담당의사는 환자에게 적절하다고 생각되는 활성(예: 뼈 질량 증가)을 달성하기 위해 약품 투여량을 조절할 수 있다. 목적하는 활성의 정도를 고려하여, 담당의사는 다양한 인자(예: 뼈 질량 출발량, 환자 연령, 기존의 질병의 유무, 뿐만 아니라 그 밖의 질병의 존재(예: 심혈관 질환))들의 균형을 맞추어야 한다. 예를 들면, 에스트로겐 작용물질/길항물질의 투여는 특히 폐경기 후 여성에게 있어서 심혈관에 유리하게 작용한다. 다음 문단은 본 발명의 각종 성분에 대한 바람직한 투여 범위를 나타낸다.
사용될 항-재흡수제의 양은 뼈 손실 억제제로서 활성에 의해 결정된다. 이러한 활성은 개별적인 화합물의 약동학 및 상기 기술된 바와 같은 프로토콜(에스트로겐 작용물질/길항물질 프로토콜)을 사용한 뼈 손실의 억제에 있어서 최소한 최대 효과 투여량에 의해 결정된다.
일반적으로 본 발명의 제 1 화합물에 있어서, 본 발명의 활성, 예를 들면 본 발명의 뼈 재흡수 활성에 효과적인 투여량은 0.01 내지 200 mg/kg/일, 바람직하게는 0.5 내지 100 mg/kg/일이다.
특히, 드롤록시펜의 효과적인 투여량은 0.1 내지 40 mg/kg/일, 바람직하게는 0.1 내지 5 mg/kg/일이다.
특히, 랄록시펜의 효과적인 투여량은 0.1 내지 100 mg/kg/일, 바람직하게는 0.1 내지 10 mg/kg/일이다.
특히, 타목시펜의 효과적인 투여량은 0.1 내지 100 mg/kg/일, 바람직하게는 0.1 내지 5 mg/kg/일이다.
특히,
시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
(-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린에 대한 효과적인 투여량은 0.0001 내지 100 mg/kg/일, 바람직하게는 0.001 내지 10 mg/kg/일이다.
특히, 4-하이드록시 타목시펜의 효과적인 투여량은 0.0001 내지 100 mg/kg/일, 바람직하게는 0.001 내지 10 mg/kg/일이다.
일반적으로, 뼈 동화작용제(예: PGE2)의 양은 뼈 골절 임계치 이상인 양까지 뼈 질량을 증가시키기에 충분한 양이다(본원에서 상기 인용한 세계 건강 기관 연구에서 상세히 설명됨).
일반적으로 상기 기술한 뼈 동화작용제를 위한 효과적인 투여량은 0.001 내지 100 mg/kg/일, 바람직하게는 0.1 내지 10 mg/kg/일이다.
특히, PGE2에 대한 효과적인 투여량은 0.001 내지 10 mg/kg/일, 바람직하게는 0.01 내지 1 mg/kg/일의 범위이다.
특히, 3S-(3-하이드록시-4-페닐-부틸)-2R-[6-(2H-테트라졸-5-일)-헥실]-사이클로펜타논에 대한 효과적인 투여량은 0.001 내지 20 mg/kg/일, 바람직하게는 0.01 내지 10 mg/kg/일이다.
특히, 불소화나트륨의 효과적인 양은 0.01 내지 50 mg/kg/일, 바람직하게는 0.2 내지 10 mg/kg/일의 범위이다.
특히, 파라티로이드 호르몬 및 대사 물질 및 이의 분획에 대한 효과적인 투여량은 0.00001 내지 1 mg/kg/일, 바람직하게는 0.001 내지 0.5 mg/kg/일의 범위이다.
특히, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질을 위한 효과적인 투여량은 0.0001 내지 100 mg/kg/일, 바람직하게는 0.01 내지 5 mg/kg/일의 범위이다.
본 발명의 화합물은 일반적으로 하나 이상의 본 발명의 화합물을 약제학적으로 허용가능한 비히클 또는 담체와 함께 포함하는 약제학적으로 조성물의 형태이다. 따라서, 본 발명의 화합물은 개별적으로 투여되거나 또는 임의의 통상적인 경구, 비경구 또는 경피적인 투여 형태로 함께 투여될 수 있다.
경구 투여에 있어서, 약제학적으로 조성물은 용액, 현탁액, 정제, 필제, 캡슐제, 분제 등의 형태를 취할 수 있다. 나트륨 시트레이트, 탄산칼슘 및 인산칼슘과 같은 각종 부형제를 함유하는 정제를 각종 붕해제(예: 전분 및 바람직하게는 감자 또는 타피오카 전분) 및 특정 착화합물 실리케이트와 함께, 결합 제제(예: 폴리비닐피롤리돈, 수크로즈, 젤라틴 및 아카시아)와 함께 사용한다. 부가적으로, 윤활제(예: 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 라우릴 설페이트 및 활석)은 종종 정제용으로 유용하다. 유사한 유형의 고체 조성물을 또한 연질 및 경질 충진된 캡슐로서 사용할 수 있다; 이와 관련지어 바람직한 물질은 또한 락토오즈 또는 우유 당 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 수성 현탁액 및/또는 엑릭시르제가 경구 투여에 바람직한 경우, 본 발명의 화합물을 다양한 감미제, 향미제, 착색제, 유화제 및/또는 현탁제, 뿐만 아니라 희석제(예: 물, 에탄올, 프로필렌, 글리콜, 글리세린 및 각종 이들의 조합)과 함께 결합될 수 있다.
비경구 투여용으로, 참깨 또는 땅콩 오일 용액 또는 수성 프로필렌 글리콜 용액을 사용할 뿐만 아니라 상응하는 수용성 염의 살균 수용액을 사용할 수 있다. 이러한 수용액은 경우에 따라, 적절하게 완충될 수 있고, 액체 희석제는 일단 충분한 염수 또는 글루코즈와 함께 등장액이 된다. 이들 수성 용액은 정맥내, 근육내, 피하 및 복막내 주사용에 특히 적절하다. 이와 관련해서, 사용된 살균 수성 매질은 당해 기술분야의 숙련인들에게 잘 공지된 표준 기술에 의해 용이하게 수득될 수 있다.
경피성(예: 국부적) 투여용으로, 상기 비경구 용액과 유사한 묽은 살균 수성 또는 부분적으로 수성 용액(통상적으로 약 0.1 내지 5% 농도)을 제조한다.
특정 양의 활성 성분을 갖는 각종 약제학적 조성물을 제조하는 방법이 공지되어 있고, 이는 내용 관점에서 당해 기술분야의 숙련인들에게 명백할 것이다. 예를 들면, 다음 문헌을 참조한다[참조: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15th Edition(1975)].
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 본 발명의 화합물 0.1 내지 95%, 바람직하게는 1 내지 70%을 함유할 수 있다. 여하튼, 투여될 제형의 조성물은 본 발명에 따르는 화합물을 치료될 환자의 질병/질환을 치료하는 효과적인 양으로 함유할 것이다.
본 발명이 개별적으로 투여될 수 있는 활성 성분의 복합 물질로 처리함으로써 뼈 질량의 강화 및 유지에 관련된 것이므로, 본 발명은 또한 별도의 약제학적 조성물을 키트 형태로 결합하는 것에 관한 것이다. 키트는 두 개의 별도의 약제학적 조성물, 즉 에스트로겐 작용물질/길항물질 및 동화작용제를 포함한다. 키트는 별도의 조성물을 함유하기 위한 용기 수단(예: 분할된 병 또는 분할된 호일 패킷)을 포함한다. 키트 형태는 별개의 성분이 바람직하게는 상이한 투여 형태(예: 경구 및 비경구)로 투여될 때, 상이한 투여 간격으로 투여될 때, 또는 복합 물질중 개별적인 성분의 적정이 담당의사에 의해 의도될 때 특히 유리하다.
키트와 같은 예는 소위 투명 포장 팩이다. 투명 포장 팩은 포장 산업에서 잘 공지되어 있고 약제학적 단위 투여 형태(예: 정제, 캡슐 등)의 포장용으로 광범위하게 사용되고 있다. 투명 포장 팩은 일반적으로 바람직하게는 투명 플라스틱 재료로 이루어진 호일로 덮인 비교적 강성인 재료의 시이트로 이루어진다. 포장 공정중에 플라스틱 호일중에 움푹한 모양을 형성한다. 이러한 움푹한 모양은 포장될 정제 또는 캡슐의 크기 및 모양을 갖는다. 이어서, 정제 또는 캡슐을 움푹한 곳에 놓고 비교적 강성인 재료를 움푹한 곳을 형성한 방향으로부터 반대쪽인 호일의 면에 플라스틱 호일에 대해 밀봉한다. 결과적으로, 정제 또는 캡슐을 플라스틱 호일과 시이트 사이의 움푹한 곳 안에 밀봉한다. 바람직하게는 시이트의 강도는 정제 또는 캡슐이 손으로 압력을 움푹한 곳에 가함으로써 움푹한 장소에 시이트중에 개구부를 형성함으로써 투명 포장 팩으로부터 꺼낼 수 있도록 한다. 정제 또는 캡슐을 상기 개구부를 통해 꺼낼 수 있다.
카드상에 정제 또는 캡슐 옆에 숫자(이때, 숫자는 이러한 구체화된 정제 또는 캡슐이 섭취되어야 하는 요법의 날짜에 상응한다) 형식으로 기억 보조기구를 제공하는 것이 바람직하다. 이러한 기억 보조기구의 예는 카드상에 "첫주, 월요일, 화요일, -- 등 ---; 두 번째 주, 월요일, 화요일, ---" 등과 같이 인쇄된 달력이다. 기억 보조기구의 그 밖의 변형 또한 물론 있을 수 있다. "하루 투여량"은 주어진 날짜에 섭취하여야 할 단일 정제 또는 캡슐 또는 몇몇 필제 또는 캡슐일 수 있다. 또한, 뼈 동화작용제의 매일 투여량은 하나의 정제 또는 캡슐로 구성되는 반면 항-재흡수제의 매일 투여량은 몇몇 정제 또는 캡슐로 구성될 수 있다. 기억 보조기구는 이를 반영하여야 한다.
본 발명의 또 다른 구체적인 실시양태에서, 매일의 투여량을 이들의 소정의 목적을 위해 알맞은 시간에 분배하도록 설계된 디스펜서(dispenser)를 제공한다. 바람직하게는, 이러한 디스펜서는 기억 보조기구를 장착하고 있고, 따라서 요법에 잘 따르기가 쉽다. 이러한 기억 보조기구의 예는 분배된 하루 투여수를 지시하는 기계적 계수기이다. 이러한 기억 보조기구의 또 다른 예는 액정 정보판독장치가 장착된 배터리-구동식 마이크로 칩 메모리, 또는 예를 들면 마지막으로 약을 먹은 날짜를 판독하고 다음 약을 먹을 날짜를 상기시켜주는 들을 수 있는 경음 신호이다.
104마리의 월령 12개월의 암컷 스프라그-돌리 래트(미국 매사추세츠주 윌밍톤 찰스 리버)를 0개월째 모의 수술하거나 또는 난소절제술(OVX)을 수행한다. 수술 후 3개월 후에, OVX 래트는 프로스타글란딘 E2(PGE2), 공지된 동화작용성 뼈 제제를 3 mg/kg/일로 투여하거나(피하 주입), PGE2는 3 mg/kg/일로(피하 주입) 드롤록시펜(DRO)은 10 mg/kg/일(경구)로 2개월동안 함께 투여한다. 이후, PGE2치료를 그만두고 래트를 비히클(10% 알콜/염수) 또는 DRO(10 mg/kg/일, 경구)로 추가의 1.5 개월 동안 하기 설명하는 바와 같이 처리한다.
그룹 I: 8마리의 래트를 기본 대조군으로서 0개월째 부검한다.
그룹 II: 8마리의 모의 수술된 래트를 예비처리 대조군으로서 3개월째 부검한다.
그룹 III: 8마리의 모의 수술된 래트를 3 내지 5개월째 비히클(10% 에탄올/염수)로 경구적으로 처리하고, 5개월째 부검한다.
그룹 IV: 8마리의 모의 수술된 래트를 3 내지 6.5개월째 비히클(10% 에탄올/염수)로 경구적으로 처리하고, 6.5개월째 부검한다.
그룹 V: 8마리의 OVX 래트를 예비처리 대조군으로서 3개월째 부검한다.
그룹 VI: 8마리의 OVX 래트를 비히클(10% 에탄올/염수)로 3 내지 5개월째 경구적으로 처리하고 5개월째 부검한다.
그룹 VII: 8마리의 OVX 래트를 비히클(10% 에탄올/염수)로 3 내지 6.5개월째 경구적으로 처리하고 6.5개월째 부검한다.
그룹 VIII: 8마리의 OVX 래트를 3 내지 6.5개월째 PGE2 3 mg/kg/일로 피하 주입하고, 5개월째 부검한다.
그룹 IX: 8마리의 OVX 래트를 3 내지 5개월째 PGE2 3 mg/kg/일로 피하 주입하고 5 내지 6.5개월째 비히클로 피하 주입한 후 6.5개월째 부검하였다.
그룹 X: 8마리의 OVX 래트를 3 내지 5개월째 PGE2 3mg/kg/일로 피하 주입, 5 내지 6.5개월째 DRO 10 mg/kg/일로 경구투여한 후 6.5개월째 부검한다.
그룹 XI: 8마리의 OVX 래트를 3 내지 5개월째 PGE2 3mg/kg/일로 피하 주입, 3 내지 5개월째 DRO 10 mg/kg/일로 경구투여한 후 5개월째 부검한다.
그룹 XII: 8마리의 OVX 래트를 3 내지 5개월째 PGE2 3mg/kg/일로 피하 주입, 3 내지 5개월째 DRO 10 mg/kg/일로 경구투여한 후 5 내지 6.5개월째 비히클을 투여한 후 6.5개월째 부검한다.
그룹 XIII: 8마리의 OVX 래트를 3 내지 5개월째 PGE2로 3 mg/kg/일로 피하 주입하고 DRO 10 mg/kg/일로 경구투여하고, 5 내지 6.5개월째 DRO 단독으로 투여한 후, 6.5개월째 부검한다.
PGE2(미국 미시간주 안 아버 소재의 캐이만 케미칼 캄파니(Cayman Chemical Co.)) 또는 드롤록시펜(미국 코텍티컷 소재의 파이저 인코포레이티드) 분말을 모두 일단 100% 에탄올에 용해하고 목적하는 농도로 염수로 추가로 희석한다(최종 에탄올 농도는 10%였다). PGE 용액을 1 mL/kg로 등에 매일 피하 주입한다. 드롤록시펜 용액을 1 mL/래트로 매일 경구적으로 투여한다.
요부 척추골 무기질 측정
"국소 고해상도 스캔" 소프트웨어(미국 매사추세츠주 왈탐 소재의 홀로직 인코포레이티드)가 장착된 이중 에너지 X선 흡수법(QDR 1000/W, 미국 매사추세츠주 왈탐 소재의 홀로직 인코포레이티드)을 사용하여 마취된 래트의 전체 요부 척추 및 6개의 요부 척추(LV1-6) 각각의 뼈 면적, 뼈 무기질 함량(BMC) 및 뼈 무기질 밀도(BMD)를 측정한다. 래트를 케타민/롬푼(4:3의 비율)의 혼합물을 1 mL/kg로 주입함으로써(복강내 주입) 마취시킨 후 래트 플랫포옴상에 놓는다. 스캔 필드 크기는 6 × 1.9 ㎝이고, 해상도는 0.0254 × 0.0127 ㎝이고 스캔 속도는 7.25 mm/초이다. 전체 요부 척추 스캔 이미지를 수득하고 분석한다. 뼈 면적(bone area; BA) 및 뼈 무기질 함량(BMC)을 측정하고, 뼈 무기질 밀도를 전체 요부 척추 및 6개의 요부 척추(LV1-6) 각각에 대해 계산한다(MBC를 BA로 나눔).
수술 후, 3, 5 또는 6.5 개월째, 전체 요부 척추 및 요부 척추의 각각의 BMC 및 BMD을 모의 대조군과 비교하면 OVX 래트중에 15 내지 27% 만큼 상당히 감소하였다. PGE2단독 또는 DRO와의 복합 물질로 2개월동안 OVX 치료된 지 3개월 후 래트는 BMC 및 BMD를 모의 대조군 수준으로 완전히 회복한다. PGE2단독 또는 DRO와 결합된 PGE2로 치료된 OVX 래트의 BMC 및 BMD에서의 차이는 전혀 없고, 이는 DRO가 PGE2의 동화작용 효과를 약화시키지 않았음을 나타낸다. 치료중 PGE2의 투여중단시, LV1, LV2 및 LV3의 BMD, 및 LV2의 BMC에서 상당한 감소를 관찰하였다. 한편, PGE2의 투여중단 후 DRO로 OVX 래트를 치료하였고, PGE2-회복된 뼈를 완전히 유지하였다. 유사하게, PGE2및 DRO 모두를 1.5 개월 동안 투여중단하면 LV3의 BMD에서 상당한 감소가 발생하였다. 그러나, PGE2를 그만 두고 DRO 치료를 추가로 1.5 개월 동안 계속하였고, OVX 래트의 요부 척수에서 어떠한 뼈 손실도 발견하지 못했다. 이제 DRO, 항-재흡수제가 골형성 래트에 있어서 PGE2의 동화작용 효과를 약화시키지 않는다고 결론을 내릴 수 있다. 추가로, DRO는 PGE2의 투여중단 후 PGE2-회복된 뼈를 유지하는데 효과적이었다. 이들 데이타로서 골다공증 골격에서 항-재흡수제에 의해 뼈 질량을 회복하고 회복된 뼈 질량을 유지하기 위해 동화작용제를 사용한다는 전략이 지지된다.
본 발명이 본원에서 기술한 구체적인 실시양태에 제한되는 것이 아니라, 다양한 변화 및 변형이 하기 청구의 범위에 의해 정의되는 바와 같은 본 발명의 새로운 개념의 취지 및 범주를 벗어나지 않는 한 가능하다는 것을 이해해야 한다.

Claims (92)

  1. a) 에스트로겐 작용물질/길항물질인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
    b) 프로스타글란딘 또는 프로스타글란딘 작용물질/길항물질인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포함하는 약제학적 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    약제학적 담체를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
  3. 제 2 항에 있어서,
    에스트로겐 작용물질/길항물질이 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜, 4-하이드록시타목시펜,
    시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    (-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
    1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
    시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
    1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린인 약제학적 조성물.
  4. 제 3 항에 있어서,
    제 2 화합물이 PGD1, PGD2, PGE2, PGE1, PGF2, PGF2α 또는 3S-(3-하이드록시-4-페닐-부틸)-2R-[6-(1H-테트라졸-5-일)-헥실]-사이클로펜타논인 약제학적 조성물.
  5. 제 4 항에 있어서,
    에스트로겐 작용물질/길항물질이 드롤록시펜인 약제학적 조성물.
  6. 제 5 항에 있어서,
    제 2 화합물이 PGE2인 약제학적 조성물.
  7. 제 5 항에 있어서,
    제 2 화합물이 3S-(3-하이드록시-4-페닐부틸)-2R-[6-(2H-테트라졸-5-일)-헥실]-사이클로펜타논인 약제학적 조성물.
  8. 제 4 항에 있어서,
    에스트로겐 작용물질/길항물질이
    시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    (-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
    1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
    시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
    1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린
    인 약제학적 조성물.
  9. 제 8 항에 있어서,
    제 2 화합물이 PGE2인 약제학적 조성물.
  10. 제 8 항에 있어서,
    제 2 화합물이 3S-(3-하이드록시-4-페닐부틸)-2R-[6-(2H-테트라졸-5-일)-헥실]-사이클로펜타논인 약제학적 조성물.
  11. a) 에스트로겐 작용물질/길항물질인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
    b) 프로스타글란딘 또는 프로스타글란딘 작용물질/길항물질인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포유류에게 투여함을 포함하는 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 치료방법.
  12. 제 11 항에 있어서,
    에스트로겐 작용물질/길항물질이 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜, 4-하이드록시타목시펜, 요오독시펜, 센트라크로만,
    시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    (-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
    1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
    시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
    1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린인 방법.
  13. 제 12 항에 있어서,
    제 2 화합물이 PGD1, PGD2, PGE2, PGE1, PGF2, PGF2α 또는 3S-(3-하이드록시-4-페닐-부틸)-2R-[6-(1H-테트라졸-5-일)-헥실]-사이클로펜타논인 방법.
  14. 제 13 항에 있어서,
    에스트로겐 작용물질/길항물질이 드롤록시펜인 방법.
  15. 제 14 항에 있어서,
    제 2 화합물이 PGE2인 방법.
  16. 제 14 항에 있어서,
    제 2 화합물이 3S-(3-하이드록시-4-페닐부틸)-2R-[6-(1H-테트라졸-5-일)-헥실]사이클로펜타논인 방법.
  17. 제 14 항에 있어서,
    낮은 뼈 질량을 나타내는 질병이 골다공증인 방법.
  18. 제 13 항에 있어서,
    에스트로겐 작용물질/길항물질이
    시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    (-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
    1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
    시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
    1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린인 방법.
  19. 제 18 항에 있어서,
    제 2 화합물이 PGE2인 방법.
  20. 제 18 항에 있어서,
    제 2 화합물이 3S-(3-하이드록시-4-페닐부틸)-2R-[6-(1H-테트라졸-5-일)-헥실]-사이클로펜타논인 방법.
  21. 제 18 항에 있어서,
    낮은 뼈 질량을 나타내는 질병이 골다공증인 방법.
  22. 제 14 항에 있어서,
    제 1 화합물 및 제 2 화합물이 실질적으로 동시에 투여되는 방법.
  23. 제 14 항에 있어서,
    제 2 화합물이 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여되는 방법.
  24. 제 23 항에 있어서,
    약 3개월 내지 약 3년 동안 제 2 화합물을 투여하지 않으면서 약 3개월 내지 약 3년 동안 제 1 화합물을 투여하는 방법.
  25. 제 23 항에 있어서,
    약 3년 이상 동안 제 2 화합물을 투여하지 않으면서 약 3년 이상 동안 제 1 화합물을 투여하는 방법.
  26. 제 18 항에 있어서,
    제 1 화합물 및 제 2 화합물이 실질적으로 동시에 투여되는 방법.
  27. 제 18 항에 있어서,
    제 2 화합물이 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여되는 방법.
  28. 제 27 항에 있어서,
    약 3개월 내지 약 3년 동안 제 2 화합물을 투여하지 않으면서 약 3개월 내지 약 3년 동안 제 1 화합물을 투여하는 방법.
  29. 제 27 항에 있어서,
    약 3년 이상 동안 제 2 화합물을 투여하지 않으면서 약 3년 이상 동안 제 1 화합물을 투여하는 방법.
  30. 제 1 항의 약제학적 조성물을 포유류에게 투여함을 포함하는 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 치료방법.
  31. a) 에스트로겐 작용물질/길항물질인 소정량의 제 1 화합물; 및
    b) 프로스타글란딘 또는 프로스타글란딘 작용물질/길항물질인 소정량의 제 2 화합물, 및
    약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서,
    제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 약제학적 조성물.
  32. a) 에스트로겐 작용물질/길항물질인 소정량의 제 1 화합물; 및
    b) 프로스타글란딘 또는 프로스타글란딘 작용물질/길항물질인 소정량의 제 2 화합물, 및
    약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 조성물을 포유류에게 투여함을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 치료방법으로서,
    제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 방법.
  33. a) 제 1 단위 투여 형태로, 처방학적 유효량의 에스트로겐 작용물질/길항물질 및 약제학적으로 허용가능한 담체;
    b) 제 2 단위 투여 형태로, 처방학적 유효량의 프로스타글란딘 또는 프로스타글란딘 작용물질/길항물질 및 약제학적으로 허용가능한 담체; 및
    c) 제 1 투여 형태 및 제 2 투여 형태를 함유하기 위한 용기 수단을 포함하는 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 치료하기 위한 키트(kit).
  34. a) 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
    b) 불소화나트륨 또는 N-[1(R)-[1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드(MK-677)인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포함하는 약제학적 조성물.
  35. 제 34 항에 있어서,
    약제학적 담체를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
  36. a) 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
    b) 불소화나트륨 또는 N-[1(R)-[1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드(MK-677)인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포유류에게 투여함을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 치료방법.
  37. 제 36 항에 있어서,
    낮은 뼈 질량을 나타내는 질병이 골다공증인 방법.
  38. 제 36 항에 있어서,
    제 1 화합물 및 제 2 화합물이 실질적으로 동시에 투여되는 방법.
  39. 제 36 항에 있어서,
    제 2 화합물이 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여되는 방법.
  40. 제 39 항에 있어서,
    약 3개월 내지 약 3년 동안 제 2 화합물을 투여하지 않으면서 약 3개월 내지 약 3년 동안 제 1 화합물을 투여하는 방법.
  41. 제 39 항에 있어서,
    약 3년 이상 동안 제 2 화합물을 투여하지 않으면서 약 3년 이상 동안 제 1 화합물을 투여하는 방법.
  42. 제 34 항의 약제학적 조성물을 포유류에게 투여함을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 치료방법.
  43. a) 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜인 소정량의 제 1 화합물; 및
    b) 불소화나트륨 또는 N-[1(R)-[1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드(MK-677)인 소정량의 제 2 화합물, 및
    약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서,
    제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 약제학적 조성물.
  44. a) 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜인 소정량의 제 1 화합물; 및
    b) 불소화나트륨 또는 N-[1(R)-[1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드(MK-677)인 소정량의 제 2 화합물, 및
    약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 포유류에게 투여함을 포함하는 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 치료방법으로서,
    제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 방법.
  45. a) 제 1 단위 투여 형태로, 처방학적 유효량의 드롤록시펜, 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜, 및 약제학적으로 허용가능한 담체;
    b) 제 2 단위 투여 형태로, 처방학적 유효량의 불소화나트륨 또는 N-[1(R)-[1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드(MK-677) 및 약제학적으로 허용가능한 담체; 및
    c) 제 1 투여 형태 및 제 2 투여 형태를 함유하기 위한 용기 수단을 포함하는 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 치료하기 위한 키트.
  46. a) 시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    (-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
    1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
    시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
    1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
    b) 불소화나트륨, 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포함하는 약제학적 조성물.
  47. 제 46 항에 있어서,
    약제학적 담체를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
  48. 제 47 항에 있어서,
    제 2 화합물이 불소화나트륨인 약제학적 조성물.
  49. 제 47 항에 있어서,
    제 2 화합물이 파라티로이드 호르몬인 약제학적 조성물.
  50. 제 47 항에 있어서,
    제 2 화합물이 성장 호르몬인 약제학적 조성물.
  51. 제 47 항에 있어서,
    제 2 화합물인 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 약제학적 조성물.
  52. a) 시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    (-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
    1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
    시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
    1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
    b) 불소화나트륨, 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포유류에게 투여함을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 치료방법.
  53. 제 52 항에 있어서,
    제 2 화합물이 불소화나트륨인 방법.
  54. 제 52 항에 있어서,
    제 2 화합물이 파라티로이드 호르몬인 방법.
  55. 제 52 항에 있어서,
    제 2 화합물이 성장 호르몬인 방법.
  56. 제 52 항에 있어서,
    제 2 화합물이 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 방법.
  57. 제 52 항에 있어서,
    낮은 뼈 질량을 나타내는 질병이 골다공증인 방법.
  58. 제 52 항에 있어서,
    제 1 화합물 및 제 2 화합물이 실질적으로 동시에 투여되는 방법.
  59. 제 52 항에 있어서,
    제 2 화합물이 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여되는 방법.
  60. 제 59 항에 있어서,
    약 3개월 내지 약 3년 동안 제 2 화합물을 투여하지 않으면서 약 3개월 내지 약 3년 동안 제 1 화합물을 투여하는 방법.
  61. 제 59 항에 있어서,
    약 3년 이상 동안 제 2 화합물을 투여하지 않으면서 약 3년 이상 동안 제 1 화합물을 투여하는 방법.
  62. 제 46 항의 약제학적 조성물을 포유류에게 투여함을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병의 치료방법.
  63. a) 시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    (-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
    1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
    시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
    1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린인 소정량의 제 1 화합물; 및
    b) 불소화나트륨, 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 소정량의 제 2 화합물, 및
    약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서,
    제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 약제학적 조성물.
  64. a) 시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    (-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
    1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
    시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
    1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린인 소정량의 제 1 화합물; 및
    b) 불소화나트륨, 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 소정량의 제 2 화합물, 및
    약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 포유류에게 투여함을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 치료하는 방법으로서,
    제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 방법.
  65. a) 제 1 단위 투여 형태로서, 처방학적 유효량의 시스-6-(4-플루오로페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    (-)-시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-6-페닐-5-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올;
    시스-1-[6'-피롤로디노에톡시-3'-피리딜]-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌;
    1-(4'-피롤리디노에톡시페닐)-2-(4"-플루오로페닐)-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린;
    시스-6-(4-하이드록시페닐)-5-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-페닐]-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올; 또는
    1-(4'-피롤리디놀에톡시페닐)-2-페닐-6-하이드록시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린 및 약제학적으로 허용가능한 담체;
    b) 제 2 단위 투여 형태로, 처방학적 유효량의 불소화나트륨, 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질 및 약제학적으로 허용가능한 담체; 및
    c) 제 1 투여 형태 및 제 2 투여 형태를 함유하기 위한 용기 수단을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 치료하기 위한 키트.
  66. 제 34 항에 있어서,
    제 1 화합물이 드롤록시펜인 약제학적 조성물.
  67. 제 36 항에 있어서,
    제 1 화합물이 드롤록시펜인 방법.
  68. 제 40 항에 있어서,
    제 1 화합물이 드롤록시펜인 방법.
  69. 제 41 항에 있어서,
    제 1 화합물이 드롤록시펜인 방법.
  70. 제 43 항에 있어서,
    제 1 화합물이 드롤록시펜인 약제학적 조성물.
  71. 제 44 항에 있어서,
    제 1 화합물이 드롤록시펜인 방법.
  72. 제 45 항에 있어서,
    제 1 화합물이 드롤록시펜인 키트.
  73. a) 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
    b) 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포함하는 약제학적 조성물.
  74. 제 73 항에 있어서,
    약제학적 담체를 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
  75. 제 74 항에 있어서,
    제 1 화합물이 랄록시펜인 약제학적 조성물.
  76. 제 74 항에 있어서,
    제 2 화합물이 파라티로이드 호르몬인 약제학적 조성물.
  77. 제 74 항에 있어서,
    제 2 화합물이 성장 호르몬인 약제학적 조성물.
  78. 제 74 항에 있어서,
    제 2 화합물이 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 약제학적 조성물.
  79. a) 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜인 처방학적 유효량의 제 1 화합물; 및
    b) 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 처방학적 유효량의 제 2 화합물을 포유류에게 투여함을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 갖는 질병을 갖는 포유류의 치료방법.
  80. 제 79 항에 있어서,
    제 1 화합물이 랄록시펜인 방법.
  81. 제 79 항에 있어서,
    제 2 화합물이 파라티로이드 호르몬인 방법.
  82. 제 79 항에 있어서,
    제 2 화합물이 성장 호르몬인 방법.
  83. 제 79 항에 있어서,
    제 2 화합물이 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 방법.
  84. 제 79 항에 있어서,
    낮은 뼈 질량을 나타내는 질병이 골다공증인 방법.
  85. 제 79 항에 있어서,
    제 1 화합물 및 제 2 화합물이 실질적으로 동시에 투여되는 방법.
  86. 제 79 항에 있어서,
    제 2 화합물이 약 3개월 내지 약 3년 동안 투여되는 방법.
  87. 제 86 항에 있어서,
    약 3개월 내지 약 3년 동안 제 2 화합물을 투여하지 않으면서 약 3개월 내지 약 3년 동안 제 1 화합물을 투여하는 방법.
  88. 제 86 항에 있어서,
    약 3년 이상 동안 제 2 화합물을 투여하지 않으면서 약 3년 이상 동안 제 1 화합물을 투여하는 방법.
  89. 제 73 항의 약제학적 조성물을 포유류에게 투여함을 포함하는 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 치료방법.
  90. a) 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜인 소정량의 제 1 화합물; 또는
    b) 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 소정량의 제 2 화합물, 및
    약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물로서,
    제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 조성물.
  91. a) 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜인 소정량의 제 1 화합물; 및
    b) 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비 촉진 물질인 소정량의 제 2 화합물, 및
    약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포유류에게 투여함을 포함하는, 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 갖는 포유류의 치료방법으로서,
    제 1 화합물 단독량 및 제 2 화합물 단독량이 동시에 투여된다면 뼈 형성에서의 증가 및 뼈 재흡수에서의 감소의 처방학적 효과를 달성하기에 불충분하고, 제 1 화합물 및 제 2 화합물 양의 합쳐진 효과는 제 1 화합물 및 제 2 화합물의 각각의 양으로 달성할 수 있는 처방학적 효과의 합계보다 큰 방법.
  92. a) 제 1 단위 투여 형태로, 처방학적 유효량의 랄록시펜, 타목시펜 또는 요오독시펜, 및 약제학적으로 허용가능한 담체;
    b) 제 2 단위 투여 형태로, 처방학적 유효량의 파라티로이드 호르몬, 성장 호르몬 또는 성장 호르몬 분비촉진 물질 및 약제학적으로 허용가능한 담체; 및
    c) 제 1 투여 형태 및 제 2 투여 형태를 함유하기 위한 용기 수단을 포함하는 낮은 뼈 질량을 나타내는 질병을 치료하기 위한 키트.
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