[go: up one dir, main page]

KR102506219B1 - 화장품에 사용하기 위한 펩타이드 및 조성물 - Google Patents

화장품에 사용하기 위한 펩타이드 및 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR102506219B1
KR102506219B1 KR1020197022461A KR20197022461A KR102506219B1 KR 102506219 B1 KR102506219 B1 KR 102506219B1 KR 1020197022461 A KR1020197022461 A KR 1020197022461A KR 20197022461 A KR20197022461 A KR 20197022461A KR 102506219 B1 KR102506219 B1 KR 102506219B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
peptide
skin
acid
peptides
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
KR1020197022461A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20190120749A (ko
Inventor
아리아드나 그라우-캄피스타니
실비아 파스토르
파트리시아 카룰라
후안 카를로스 에스쿠데로
Original Assignee
리포트루, 엘스.엘.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 리포트루, 엘스.엘. filed Critical 리포트루, 엘스.엘.
Publication of KR20190120749A publication Critical patent/KR20190120749A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102506219B1 publication Critical patent/KR102506219B1/ko
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/04—Dispersions; Emulsions
    • A61K8/06—Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/1013—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1021—Tetrapeptides with the first amino acid being acidic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1024—Tetrapeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • A61K2800/522—Antioxidants; Radical scavengers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

본 발명은 항산화 및 브라이트닝 활성을 갖는 펩타이드의 계열; 상기 펩타이드를 함유하는 화장품 조성물 및 상기 펩타이드 또는 화장품 조성물의 화장품 용도 및 이를 이용한 방법에 관한 것이다.

Description

화장품에 사용하기 위한 펩타이드 및 조성물
본 발명은 화장품 분야, 보다 상세하게는 화장품 분야에서 항산화 및/또는 브라이트닝 활성을 갖는 펩타이드 및 조성물, 및 이를 이용한 방법 및 용도에 관한 것이다.
최근 몇 년간, 건강하고 젊은 외관의 피부를 유지하고자, 내재적 및 환경적 스트레스 요인에 의해 유발된 피부 결점 및 손상을 예방, 감소 또는 제거하기 위한 인구의 관심이 증가하고 있다. 이는 피부 결점의 양상을 유발하는 이유와 피부 결점을 예방 또는 완화시킬 수 있는 화합물 및 조성물의 탐색에 관심이 증가하고 있다.
산화 및 산화 스트레스는 아마도 피부 노화와 피부 손상에 가장 해로운 원인이며, 특히 피부 세포외 기질 (ECM)의 분해 및 염증 과정 등을 유발한다 (Bickers, D.R. Athar, M., Oxidative Stress in the Pathogenesis of Skin Disease, J. Inv. Dermatology, 2006; 126: 2565-2575). 산화 및 산화 스트레스의 기원은 다양하며, 예를 들어, 생리적 노화의 결과로서 내재성 요인 및 더 중요하게는 환경적 요인 예컨대 오염, 흡연, (UV 복사의 영향으로 인한) 광노화 또는 노화에 분명히 기여하는 다른 환경적 요인에 의해 유도될 수 있다 (Farage, M.A., Miller, K.W., Elsner, P., Maibach, H.I., Intrinsic and extrinsic factors in skin ageing: a review. Int J Cosmet Sci, 2008; 30: 87-95). 외부 요인 (예를 들어, 오염-오존 손실, 그 어느 때보다 높아진 온실 가스 농도 및 해로운 건강 영향과 보다 빈번하게 연관 지어지는 인위적 공급원으로부터의 입자성 물질)의 결과로서 산화는, 오늘날, 피부 노화 및 피부 결점 양상의 주요 촉진제 중 하나이다.
산화 및 산화 스트레스는, 다른 결과들 중에, 산소로 유도된 라디칼 및 염증을 발생시키며, 이는 결과적으로 하기를 생성한다, 예를 들어:
- 유동성 감소, 기능 상실 및 심지어 세포 사멸을 초래할 수 있는 지질 이중층의 세포 및 세포 이하의 다가불포화지방산 (이하 PUFAs)의 과산화. 말론디알데히드 (이하, MDA)는 주요 지질 과산화물로 유도된 지질 과산화로부터의 이작용기성 친전자체 중 하나이며, 이는 세포 대사 및 완전성을 심각하게 손상시키는 부가물을 생성하는 데옥시리보핵산 (이하, DNA)과 공유 결합한다.
- 전술한 요인으로 인해 가속화되는, 환원당 및 단백질, 지질 또는 핵산 간의 비-효소적 반응인 당화. 당 및 자유 아미노기 간의 반응으로부터 유래된 시프 염기(Schiff base) 및 아마도리 산물(Amadori product)은 단백질 부가물 또는 가교결합을 형성하는 펩타이드 또는 단백질의 다른 잔기와 비가역적으로 반응할 수 있거나 최종 당화 산물(Advanced Glycation End product)을 생성하는 추가 산화 반응을 거칠 수 있다.
- 다른 DNA 손상. 이미 상기에서 언급한 바와 같이, DNA는 산화에 매우 민감하다. 당 인산 골격 및 핵 염기는 모두 산화제의 직접 표적이다. 구아닌 (G)은 히드록시 라디칼 (
Figure 112019078239261-pct00001
OH), 일중항 산소 (1O2) 및 과산화 질산염 (ONOO-)의 유도체를 포함한 다양한 산화제에 의한 산화에 특히 민감하다. G의 일반적인 산화된 형태는 8-옥소G (8-oxoG)이며 유전독성 및 변이원성 병변에 관여한다.
- 과색소침착: 색소침착은 산화 스트레스, 예컨대 UV 복사, 염증, 호르몬 변화, 생활습관 및 환경적 오염 물질의 증가와 관련된 다양한 요인에 기인할 수 있다. 후자의 경우에, 아릴 탄화수소 수용체 (이하, AhR)는 멜라닌 생성 경로의 효소를 암호화하는 유전자의 발현을 조절함에 의해 색소 형성에 역할을 한다고 기술되어 있으므로 특별한 관심 대상이며 (Jux, B., Kadow, S., Luecke, S., Rannug, A., Krutmann, J. 및 Esser, C., The Aryl Hydrocarbon Receptor Mediates UVB Radiation-Induced Skin Tanning, J. of Inv. Dermatology, 131 (2011) 203-210), 결과적으로, 오염 물질, 예컨대 담배 연기에 함유된 것에 의한 활성화는 과색소침착을 야기한다 (Nakamura, M., Ueda, Y., Hayashi, M., Kato, H., Furuhashi, T. 및 Morita, A., Tobacco smoke-induced skin pigmentation is mediated by the Aryl hydrocarbon receptor, Experimental Dermatology, 22 (2013) 554-563).
이러한 바람직하지 않은 노화 과정에 대처하기 위해, 여러 가지 전략과 화합물, 예컨대 식물 추출물에 함유된 비타민, 레티노이드, 플라보노이드와 같은 국소 항산화제, 또는 항염증 활성제가 개발되었다 (Pillai, S., Oresajo, C., Hayward, J. Ultraviolet radiation and skin ageing: roles of reactive oxygen spices, inflammation and protease activation, and strategies for prevention of inflammation induced matrix degradation - a review, Int J Cosmet Sci, 2005; 27:17-34). 그러나, 이러한 화합물 중 일부는 이러한 외인성 요인 중 하나에 단지 작용할 수 있거나, 일광 노출과 양립할 수 없으며, 피부에 완전한 효과를 얻기 위해 다양한 제품을 사용해야 할 필요가 있다.
피부-미백 활성을 위해 항산화제를 사용한 이면의 발상은 UV-조사의 산화 효과가 멜라닌 생성의 활성화에 기여한다는 가설에 있다. UV 조사는 티로시나아제를 활성화시켜 멜라닌 생성을 유도할 수 있는 활성산소종 (ROS)을 피부에서 생성할 수 있다. 산화 환원제는 티로시나아제 활성 부위에서의 구리 또는 멜라닌 중간체의 산화 중합을 방해하는 o-퀴논과의 상호작용에 의해 피부 색소침착에도 영향을 줄 수 있다. 항산화제는 또한 기존 멜라닌의 직접 광산화를 감소시킬 수 있다.
이 항산화 메커니즘 외에도, 피부의 색소침착 정도를 감소시키기 위한 몇 가지 다른 전략이 있다. 많은 기존 브라이트닝 활성 성분은 멜라닌세포에 대한 티로시나아제-저해 효과를 가지고 있어 총 멜라닌 생성의 감소를 야기한다 (예를 들어, 코직산 또는 알부틴). 다른 것들은 멜라닌세포에서 각질형성세포로의 멜라닌 전달에 영향을 미치거나 (예를 들어, 니코틴아미드 및 대두), 과도한 멜라닌 함량을 제거하기 위해 피부의 박리를 증가시킨다 (Gillbro JM, Olsson MJ. The melanogenesis and mechanisms of skin-lightening agents-- existing and new approaches. Int J Cosmet Sci. 2011 Jun;33(3):210-21). 인간 섬유아세포 또는 각질형성세포 및 멜라닌세포 간의 측분비 소통도 피부의 색소침착에 기여한다 (Imokawa G, Yada Y, Morisaki N, Kimura Biological characterization of human fibroblast-derived mitogenic factors for human melanocytes. M.Biochem J. 1998 Mar 15;330 (Pt 3):1235-9; Hirobe T, Keratinocytes regulate the function of melanocytes, Dermatologica Sinica, 2014; 32(4)). 따라서, 용해성 인자 (예를 들어, 간세포 성장 인자 (HGF)), 줄기 세포 인자 (SCF, KIT-리간드로도 알려짐), 프로오피오멜라노코르틴(POMC), 엔도텔린 (EDN1), 신경 성장 인자 (NGF) 및 디코프-관련 단백질 1 (DKK1 또는 TP53)의 조절은 또한 피부 미백제 연구의 대상이다.
따라서, 환경적 산화 스트레스 (예를 들어, 오염 물질 및 UV 복사)의 결과로서 나타나는 피부 결점을 예방 또는 치료하고, 원하지 않은 피부의 색소침착을 교정 하고/하거나 노화 또는 광노화 피부 결점을 예방 또는 치료하기 위해 화장품 분야에 적용될 수 있는 광범위한 항산화 및/또는 브라이트닝 활성을 갖는 물질 또는 활성 성분을 발견하는 것이 바람직하다.
본 발명의 발명자들은, 광범위하고 철저한 연구 후에, 놀랍게도 광범위한 항산화 및/또는 브라이트닝 활성을 가진 펩타이드의 계열을 발견하였으며, 따라서, 당업계의 기술적 수준에서 전술한 문제 및 요구사항을 해결한 펩타이드를 제공한다.
본 발명에 따른 펩타이드는 그들의 입증된 높은 항산화 활성을 통해, 피부 안색, 색소침착 변화 (예컨대, 검버섯 또는 일광흑자)와 같은 산화 스트레스와 관련된 피부 결점과, 예를 들어 콜라겐 또는 탄성 섬유 양의 감소, 세포외 기질 또는 구조적 지질의 구조 손실 또는 DNA 손상, 피부 취약성의 증가 또는 염증 반응의 증가에 기인한, 주름 및 피부 밀도, 톤 및 탄력의 손실을 예방, 감소 및/또는 교정하는데 탁월한 활성을 갖는다. 또한, 후자의 활성을 고려해 볼 때, 본 발명의 펩타이드는 피부의 미백 및/또는 브라이트닝에 사용될 수 있다 (산화 스트레스로부터 유도된 염증 반응에 기인한 피부의 색 및/또는 톤에 있어서, 피부에 균일한 색을 제공하고 원하지 않은 반점, 색소침착 및/또는 불규칙성을 감소시키거나 방지함).
따라서, 첫 번째 구현예에서, 본 발명은 항산화, 미백 및/또는 브라이트닝 활성을 나타내는 펩타이드 군에 관한 것이다.
추가의 구현예에서, 본 발명은 상기 펩타이드 중 하나 또는 이들의 조합물을 포함하는 조성물에 관한 것이다.
추가의 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드 또는 화장품 조성물의 화장품으로서의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 추가의 구현예는 피부의 산화 스트레스를 예방, 감소 및/또는 제거 및/또는 피부를 밝게하기 위한, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 화장품 용도에 관한 것이다.
다른 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 사용을 포함하는 것을 특징으로 하는, 개체의 피부에서 산화 스트레스를 감소시키는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 추가의 구현예는 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 사용을 포함하는 것을 특징으로 하는, 개체의 피부를 밝게하는 방법에 관한 것이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "비환형 지방족기" 및 그 복수형은 당업계의 기술적 수준에서 상기 용어에 주어진 일반적인 의미를 갖는다. 따라서, 이들 용어는, 이에 제한되지는 않지만, 예를 들어 선형 또는 분지형 알킬, 알케닐 및 알키닐기를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "알킬기" 및 그 복수형은 1 내지 24, 바람직하게는 1 내지 16, 더 바람직하게는 1 내지 14, 보다 더 바람직하게는 1 내지 12, 및 보다 더욱 더 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 원자를 갖는, 포화된 선형 또는 분지형 기를 의미하며, 이는 단순한 결합에 의해 분자의 나머지에 결합되고, 이에 제한되지는 않지만, 예를 들어 메틸, 에틸, 이소프로필, n-프로필, i-프로필, 이소부틸, 터트-부틸, n-부틸, sec-부틸, n-펜틸, n-헥실, 헵틸, 옥틸, 데실, 도데실, 라우릴, 헥사데실, 옥타데실, 아밀, 2-에틸헥실, 2-메틸부틸, 5-메틸헥실 및 동종을 포함한다. 알킬기는 하나 이상의 치환체, 예컨대 할로, 히드록시, 알콕시, 카복시, 카보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오에 의해 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "알케닐기" 및 그 복수형은 2 내지 24, 바람직하게는 2 내지 16, 더 바람직하게는 2 내지 14, 보다 더 바람직하게는 2 내지 12, 보다 더욱 더 바람직하게는 2, 3, 4, 5 또는 6 개의 탄소 원자를 가지며, 공액 또는 비공액된, 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖고, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는, 선형 또는 분지형 기를 의미하며, 이는 단일 결합을 통해 분자의 나머지에 결합되고, 이에 제한되지는 않지만, 예를 들어 비닐, 올레일, 리놀레일 및 유사기를 포함한다. 알케닐기는 하나 이상의 치환체, 예컨대 할로, 히드록시, 알콕시, 카복시, 카보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오에 의해 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "알키닐기" 및 그 복수형은 2 내지 24, 바람직하게는 2 내지 16, 더 바람직하게는 2 내지 14, 보다 더 바람직하게는 2 내지 12, 보다 더욱 더 바람직하게는 2, 3, 4, 5 또는 6 개의 탄소 원자를 가지며, 공액 또는 비공액된, 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖고, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는, 선형 또는 분지형 기를 의미하며, 이는 단일 결합을 통해 분자의 나머지에 결합되고, 이에 제한되지는 않지만, 예를 들어 에티닐기, 1-프로피닐, 2-프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 3-부티닐, 펜티닐, 예컨대 1-펜티닐 및 유사기를 포함한다. 알키닐기는 하나 이상의 치환체, 예컨대 할로, 히드록시, 알콕시, 카복시, 카보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오에 의해 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "지환족기" 및 그 복수형은 당업계의 기술적 수준에서 상기 용어에 주어진 일반적인 의미를 갖는다. 따라서, 이들 용어는, 이에 제한되지는 않지만, 예를 들어 시클로알킬 또는 시클로알케닐 또는 시클로알키닐기를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "시클로알킬" 및 그 복수형은 3 내지 24, 바람직하게는 3 내지 16, 더 바람직하게는 3 내지 14, 보다 더 바람직하게는 3 내지 12, 보다 더욱 더 바람직하게는 3, 4, 5 또는 6 개의 탄소 원자를 갖는, 포화된 단환 또는 다환의 지방족기를 의미하며, 단일 결합을 통해 분자의 나머지에 결합되고, 이는 이에 제한되지는 않지만, 예를 들어 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 메틸 시클로헥실, 디메틸 시클로헥실, 옥타히드로인덴, 데카히드로나프탈렌, 도데카히드로-페날렌, 아다만틸 및 동종을 포함하며, 하나 이상의 기, 예컨대 알킬, 할로, 히드록시, 알콕시, 카복시, 카보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오에 의해 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "시클로알케닐" 및 그 복수형은 5 내지 24, 바람직하게는 5 내지 16, 더 바람직하게는 5 내지 14, 보다 더 바람직하게는 5 내지 12, 보다 더욱 더 바람직하게는 5 또는 6 개의 탄소 원자를 가지며, 공액 또는 비공액된, 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖고, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는, 비방향족 단환 또는 다환의 지방족기를 의미하며, 이는 단일 결합을 통해 분자의 나머지에 결합되고, 이에 제한되지는 않지만, 예를 들어 시클로펜트-1-엔-1-일기 및 유사기를 포함하며, 하나 이상의 기, 예컨대 알킬, 할로, 히드록시, 알콕시, 카복시, 카보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오에 의해 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "시클로알키닐" 및 그 복수형은 8 내지 24, 바람직하게는 8 내지 16, 더 바람직하게는 8 내지 14, 보다 더 바람직하게는 8 내지 12, 보다 더욱 더 바람직하게는 8 또는 9 개의 탄소 원자를 가지며, 공액 또는 비공액된, 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖고, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는, 비방향족 단환 또는 다환의 지방족기를 의미하며, 이는 단일 결합을 통해 분자의 나머지에 결합되고, 이에 제한되지는 않지만, 예를 들어 시클로옥트-2-인(yn)-1-일기 및 유사기를 포함하며, 하나 이상의 기, 예컨대 알킬, 할로, 히드록시, 알콕시, 카복시, 카보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오에 의해 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "아릴기" 및 그 복수형은 6 내지 30, 바람직하게는 6 내지 18, 더 바람직하게는 6 내지 10, 보다 더 바람직하게는 6 내지 10개의 탄소 원자를 가지며, 탄소-탄소 결합에 의해 결합되거나 융합된, 1, 2, 3 또는 4 방향족 고리를 포함하는 방향족기를 의미하며, 이는 단일 결합을 통해 분자의 나머지에 결합되고, 이에 제한되지는 않지만, 예를 들어 페닐, 나프틸, 디페닐, 인데닐, 페난트릴 또는 안트라닐 등을 포함한다. 아릴기는 하나 이상의 치환체, 예컨대 할로, 히드록시, 알콕시, 카복시, 카보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오에 의해 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "아랄킬기" 및 그 복수형은 7 내지 24개의 탄소 원자를 갖는, 방향족기에 의해 치환된 알킬기를 의미하며, 이에 제한되지는 않지만, 예를 들어 -(CH2)1-6-페닐, -(CH2)1-6-(1-나프틸), -(CH2)1-6-(2-나프틸), -(CH2)1-6-CH(페닐)2 및 동종을 포함한다. 아랄킬기는 하나 이상의 치환체, 예컨대 할로, 히드록시, 알콕시, 카복시, 카보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오에 의해 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "헤테로고리기" 및 그 복수형은 하나 이상의 고리 원자, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 고리 원자가 탄소와 상이한 원소, 예컨대 질소, 산소 또는 황이고, 포화되거나 불포화 될 수 있는, 3 내지 10 원의 헤테로시클릴 또는 탄화수소 고리를 의미한다. 본 발명의 목적을 위해, 헤테로시클릴은 융합된 고리계를 포함할 수 있는 환형, 단환, 이환 또는 삼환계일 수 있고; 질소, 탄소 또는 황 원자는 헤테로시클릴 라디칼에서 선택적으로 산화될 수 있고; 질소 원자는 선택적으로 4기화 될 수 있고; 헤테로시클릴 라디칼은 부분적으로 또는 완전히 포화되거나 방향족일 수 있다. 선호도가 증가함에 따라, 용어 헤테로시클릴은 5 또는 6원 고리와 관련된다. 헤테로고리기는 하나 이상의 치환체, 예컨대 할로, 히드록시, 알콕시, 카복시, 카보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오에 의해 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "헤테로아릴알킬기" 및 그 복수형은 치환된 또는 비치환된 방향족 헤테로시클릴기를 갖는 치환된 알킬기를 의미하며, 알킬기는 1 내지 6개의 탄소 원자 그리고 방향족 헤테로시클릴기는 2 내지 24개의 탄소 원자 및 탄소 이외의 1 내지 3개의 원자를 가지며, 이에 제한되지는 않지만, 예를 들어 -(CH2)1-6-이미다졸릴, -(CH2)1-6-트리아졸릴, -(CH2)1-6-티에닐, -(CH2)1-6-푸릴, -(CH2)1-6-피롤리디닐 및 동종을 포함한다. 헤테로아릴알킬기는 하나 이상의 치환체, 예컨대 할로, 히드록시, 알콕시, 카복시, 카보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오에 의해 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "할로" 또는 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 의미하며, 그의 음이온을 할라이드로 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "유도체" 및 그 복수형은 화장품의 제조에 사용될 수 있는 관심대상의 화합물로부터 유래된 화장품학적으로 허용가능한 화합물, 및 화장품학적으로 허용가능한 유도체의 제조에 유용할 수 있으므로 화장품학적으로 허용불가능한 유도체 모두를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "염" 및 그 복수형은 당업계의 기술적 수준에서 공지된 것 중에서 임의의 유형의 염, 예를 들어, 할라이드염, 히드록시산염 (예컨대 옥시산염, 산염, 염기성염 및 복염), 히드록소염, 혼합염, 옥시염 또는 다른 수화염을 의미한다. 이 용어는 화장품학적으로 허용가능한 염 및 화장품학적으로 허용불가능한 염 모두를 포함하며, 후자는 화장품학적으로 허용가능한 염의 제조에 유용할 수 있기 때문이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "이성질체" 및 그 복수형은 광학이성질체, 거울상 이성질체, 입체 이성질체 또는 부분입체 이성질체를 의미한다. 각각의 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체 뿐만 아니라 이들의 혼합물은, 당업계의 기술적 수준에서 공지된 통상의 기술에 의해 분리될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "용매화물" 및 그 복수형은 당업계의 기술적 수준에서 공지된 임의의 용매화물, 예컨대 극성, 무극성 또는 양친매성 용매화물을 의미하며, 임의의 화장품학적으로 허용가능한 용매화물을 포함하는데, 이는 관심대상 개체에게 (직접 또는 간접적으로) 투여되거나 적용될 때 관심대상의 화합물 (펩타이드 또는 본 발명의 펩타이드)을 제공한다. 바람직하게는, 용매화물은 수화물, 알코올, 예컨대 메탄올, 에탄올, 프로판올 또는 이소프로판올을 포함한 용매화물, 에스테르, 예컨대 에틸 아세테이트를 포함한 용매화물, 에테르, 예컨대 메틸 에테르, 에틸 에테르 또는 THF (테트라하이드로푸란)을 포함한 용매화물, 또는 DMF (디메틸포름아미드)를 포함한 용매화물이고, 보다 바람직하게는 수화물 또는 알코올, 예컨대 에탄올을 포함한 용매화물이다.
또한, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "아미노산" 및 그 복수형은 이들이 천연인지 아닌지의 여부 및 이들이 D- 및 L-아미노산인지에 관계없이, 유전암호에 의해 암호화된 아미노산 뿐만 아니라 비암호화된 아미노산을 포함한다. 비암호화된 아미노산의 예는, 제한 없이, 시트룰린, 오르니틴, 사르코신, 데스모신, 노르발린, 4-아미노부티르산, 2-아미노부티르산, 2-아미노이소부티르산, 6-아미노헥산산, 1-나프틸알라닌, 2-나프틸알라닌, 2-아미노벤조산, 4-아미노벤조산, 4-클로로페닐알라닌, 2,3-디아미노프로피온산, 2,4 디아미노부티르산, 시클로세린, 카르니틴, 시스테인, 페니실아민, 피로글루탐산, 티에닐알라닌, 히드록시프롤린, 알로-이소루신, 알로-트레오닌, 이소니페코트산, 이소세린, 페닐글리신, 스타틴, β-알라닌, 노르루신, N-메틸 아미노산, α-아미노산 및 β-아미노산 등 뿐만 아니라 이들의 유도체이다. 비천연의 아미노산 목록은 당업계의 기술적 수준에서 공지되어 있다 (예를 들어, D. C. Roberts 및 F. Vellaccio의 "Unusual amino acids in Peptides synthesis", The Peptides, Vol. 5 (1983), Chapter VI, Gross E. 및 Meienhofer J., Eds., Academic Press, New York, USA 참조).
전술한 바와 같이, 제1 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (I)의 펩타이드를 언급한다:
R1-Xm-AA1-AA2-AA3-AA4-Yn-R2
(I)
이들의 화장품학적으로 허용가능한 이성질체, 염, 용매화물 및/또는 유도체 및 이의 혼합물, 여기서:
X는 지방족 비극성 곁사슬(side-chian)(또는 측쇄)을 갖는 아미노산 군으로부터 선택되고;
AA1은 Asp, Glu, His 또는 Thr로부터 선택되고;
AA2는 방향족 아미노산 군으로부터 선택되고;
AA3은 Lys, Arg, Phe, Trp 또는 Tyr로부터 선택되고;
AA4는 Val, Ile, Leu, Lys 또는 Arg로부터 선택되고;
Y는 지방족 비극성 곁사슬을 갖는 아미노산 군으로부터 선택되고;
n 및 m은 0 및 1로부터 서로 독립적으로 선택되고;
R1은 H, 치환된 또는 비치환된 비환형 지방족, 치환된 또는 비치환된 알리시클릴, 치환된 또는 비치환된 헤테로시클릴, 치환된 또는 비치환된 헤테로아릴알킬, 치환된 또는 비치환된 아릴, 치환된 또는 비치환된 아랄킬 및 R5-CO-로부터 선택되고, 여기서 R5는 H, 치환된 또는 비치환된 비환형 지방족, 치환된 또는 비치환된 알리시클릴, 치환된 또는 비치환된 헤테로시클릴, 치환된 또는 비치환된 헤테로아릴알킬, 치환된 또는 비치환된 아릴, 치환된 또는 비치환된 아랄킬로부터 선택되며;
R2는 H, -NR3R4, -OR3 및 -SR3로부터 선택되고, 여기서 R3 및 R4는 H, 치환된 또는 비치환된 비환형 지방족기, 치환된 또는 비치환된 알리시클릴, 치환된 또는 비치환된 헤테로시클릴, 치환된 또는 비치환된 헤테로아릴알킬, 치환된 또는 비치환된 아릴, 및 치환된 또는 비치환된 아랄킬로부터 독립적으로 선택된다.
본 발명의 펩타이드에 사용되거나 존재하는 아미노산은 L-아미노산, D-아미노산 또는 이들의 조합인 것이 고려된다. 바람직한 구현예에서, 본 발명의 펩타이드에 사용되거나 존재하는 아미노산은 L-아미노산이다.
바람직하게는, 상기 언급된 이성질체는 입체이성질체이다. 상기 입체이성질체는 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체인 것이 고려된다. 따라서, 본 발명의 바람직한 구체예에서, 펩타이드는 라세미 혼합물, 부분입체 이성질체 혼합물, 순수한 거울상 이성질체 또는 순수한 부분입체 이성질체이다.
바람직한 구현예에서, m은 1이고 X는 Leu이다.
다른 바람직한 구현예에서, n은 1이고 Y는 Ala이다.
따라서, 더 바람직한 구현예에서, m은 1이고 X는 Leu이고; n은 1이고 Y는 Ala이다.
다른 바람직한 구현예에서, m 및 n은 0이다.
일 구현예에서, AA2는 Tyr, Trp 또는 Phe로부터 선택된다.
바람직하게는, R1은 H, 아세틸 (이하, Ac), 팔미토일, 미리스토일, 아젤라오일, 카페로일, 아젤라산, 갈산, 히드록시벤조산, 리포산, 타르타르산, p-쿠마르산, 카페인산 또는 페룰산이고, 더 바람직하게는, R1은 Ac, 팔미토일, 아젤라산, 갈산, 히드록시벤조산, 리포산, 타르타르산, p-쿠마르산, 카페인산 또는 페룰산이고, 더 바람직하게는, R1은 팔미토일, 페룰산 또는 Ac이고, 더 바람직하게는, R1은 팔미토일 또는 Ac이고, 보다 더 바람직하게는 R1은 Ac이다.
또한, 바람직하게는, R2는 H 또는 NH2이고, 더 바람직하게는 NH2이다.
따라서, 가장 바람직한 구현예에서, R1은 Ac이고 R2는 H 또는 NH2이고, 더 바람직하게는 NH2이다.
다른 가장 바람직한 구현예에서, R1은 페룰산이고, R2는 H 또는 NH2이고, 더 바람직하게는 NH2이다.
다른 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 펩타이드는:
R1-Asp-Tyr-Lys-Val-R2 (R1-서열번호 1-R2);
R1-His-Trp-Phe-Lys-R2 (R1-서열번호 2-R2);
R1-Leu-His-Trp-Phe-Arg-Ala-R2 (R1-서열번호 3-R2), 또는
R1-Thr-Phe-Phe-Lys-R2 (R1-서열번호 4-R2) 이다.
더 바람직하게는, 화학식 (I)의 펩타이드는:
Ac-Asp-Tyr-Lys-Val-R2 (Ac-서열번호 1-R2);
Ac-His-Trp-Phe-Lys-R2 (Ac-서열번호 2-R2);
Ac-Leu-His-Trp-Phe-Arg-Ala-R2 (Ac-서열번호 3-R2); 또는
팔미토일-Thr-Phe-Phe-Lys-R2 (팔미토일-서열번호 4-R2) 이다.
보다 더 바람직하게는, 화학식 (I)의 펩타이드는:
Ac-Asp-Tyr-Lys-Val-NH2 (Ac-서열번호 1-NH2);
Ac-His-Trp-Phe-Lys-NH2 (Ac-서열번호 2-NH2);
Ac-Leu-His-Trp-Phe-Arg-Ala-NH2 (Ac-서열번호 3-NH2); 또는
팔미토일-Thr-Phe-Phe-Lys-NH2 (팔미토일-서열번호 4-NH2) 이다.
다른 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 펩타이드는:
R1-Asp-Tyr-Lys-Val-R2 (R1-서열번호 1-R2); 또는
R1-His-Trp-Phe-Lys-R2 (R1-서열번호 2-R2) 이다.
가장 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 펩타이드는:
Ac-Asp-Tyr-Lys-Val-NH2 (Ac-서열번호 1-NH2); 또는
Ac-His-Trp-Phe-Lys-NH2 (Ac-서열번호 2-NH2) 이다.
더 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 펩타이드는:
Asp-Tyr-Lys-Val (서열번호 1); 또는
His-Trp-Phe-Lys (서열번호 2) 이다.
다른 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 펩타이드는:
Leu-His-Trp-Phe-Arg-Ala (서열번호 3) 이다.
더 바람직하게는, 화학식 (I)의 펩타이드는:
R1-Leu-His-Trp-Phe-Arg-Ala-R2 (R1-서열번호 3-R2) 이다.
보다 더 바람직하게는, 화학식 (I)의 펩타이드는:
Ac-Leu-His-Trp-Phe-Arg-Ala-NH2 (Ac-서열번호 3-NH2) 이다.
또한 바람직한 구현예에서, 화학식 (I)의 펩타이드는:
페룰산-His-Trp-Phe-Lys-R2 (페룰산-서열번호 2-R2) 이다.
이 구현예에서, 더 바람직하게는, 화학식 (I)의 펩타이드는:
페룰산-His-Trp-Phe-Lys-NH2 (페룰산-서열번호 2-NH2) 이다.
본 발명의 펩타이드의 활성은 항산화 및 브라이트닝으로 (하기 포함된 실시예에서 입증된 바와 같음), 상기 펩타이드 및 이들을 포함하는 조성물이 산화 및/또는 산화 스트레스에 기인한 피부 결점, 예를 들어, 환경적 산화 스트레스 (예를 들어, 오염 물질 또는 UV 복사)의 결과로서 나타나는 피부 결점, 원하지 않은 피부의 색소침착 또는 노화 또는 광노화에 기인한 피부 결점 (예를 들어, 피부 안색 및/또는 피부 톤 및 탄력의 손실)의 미용적 예방, 감소 또는 제거에 적합함을 입증한다.
두 번째 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 바와 같이, 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물을 언급한다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 조성물은 특히 전술한 화장품 활성: 항산화 및 브라이트닝을 제공하는 화장품 조성물이다.
본 발명의 화장품 조성물은 본 발명의 하나의 펩타이드 또는 본 발명의 펩타이드의 조합물 또는 혼합물을 포함한다는 것이 고려된다.
일 구현예에서, 상기 개시된 화장품 조성물은 0.1%-0.0001% (질량/용량; 이는, ㎎/㎖임)의 본 발명의 펩타이드 또는 본 발명의 펩타이드 조합물을 포함한다. 보다 바람직하게는, 상기 조성물은 0.1%-0.001% (m/v)의 본 발명의 펩타이드 또는 본 발명의 펩타이드 조합물을 포함한다.
본 발명의 화장품 조성물은 또한 당업계의 기술적 수준에서 일반적으로 사용된 추가의 화장품 성분으로서, 예를 들어, 보조제 예컨대 안정화제, 가용화제, 비타민, 착색제 및 향료; 담체; 및/또는 다른 화장품 활성 성분을 포함한다는 것이 고려된다.
상기 추가의 화장품 성분은, 조성물의 나머지 성분 그리고 특히 본 발명의 조성물에 포함된 본 발명의 펩타이드와 물리적 및 화학적으로 양립할 수 있어야 한다. 마찬가지로, 상기 추가의 화장품 성분의 성질은 본 발명의 화합물의 이점을 허용되지 않을 정도로 변경하지 않아야 한다. 상기 추가의 화장품 성분은 합성 또는 천연 기원, 예컨대 식물 추출물일 수 있거나, 또는 이들은 생물발효 공정으로부터 유래될 수 있다 (예를 들어, CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Eleventh Edition (2006) 참조).
전술된 추가의 화장품 성분은 피부 및/또는 모발의 관리 및/또는 세정용 조성물에 통상적으로 사용된 성분, 예컨대, 멜라닌 합성을 억제하는 기타 제제, 기타 미백 또는 탈색제, 항-노화제, NO-합성효소 억제제, 항산화제, 대기 오염 방지제 및/또는 자유 라디칼 포획제, 항-당화제, 유화제, 연화제, 유기 용제, 액체 추진제, 피부 컨디셔너, 예컨대 습윤제, 수분 유지 물질, 알파 히드록시산, 보습제, 비타민, 안료 또는 착색제, 염료, 겔화 중합체, 증점제, 계면 활성제, 유연제, 주름방지제, 눈 밑 처진 살을 감소 또는 제거할 수 있는 제제, 각질제거제, 항균제, 항진균제, 살균제, 진피 또는 표피의 거대분자 합성을 자극 및/또는 이들의 분해를 예방 또는 억제하는 제제, 예컨대 콜라겐 합성 자극제, 엘라스틴 합성 자극제, 라미닌 합성 자극제, 콜라겐 분해 억제제, 엘라스틴 분해 억제제, 섬유아세포 증식 자극제, 각질형성세포 증식 자극제, 각질형성세포 분화 자극제, 지질 합성 및 각질층의 성분 (세라마이드, 지방산 등) 합성 자극제, 피부완화제, 글리코스아미노글리칸 합성 자극제, DNA 복구제, DNA 보호제, 프로테아좀 활성 자극제, 항소양제, 민감성 피부 치료제, 리어펌제(reaffirming agent), 수렴제, 피지 생성 조절제, 지방분해 자극제, 셀룰라이트 제거제, 진정제, 항염증제, 모세혈관 순환 및/또는 미세순환에 작용하는 제제, 세포 대사에 작용하는 제제, 진피-표피 연접부 개선용 제제, 보존제, 착향제, 킬레이트제, 식물 추출물, 에센셜 오일, 해양 추출물, 생물발효 공정으로부터 유래된 제제, 미네랄 염, 세포 추출물 및/또는 태양 필터(자외선 A 및 B 광선에 대해 활성인 유기 또는 무기 광보호제) 등을 포함한다는 것이 고려된다.
따라서, 일 구현예에서, 본 발명의 화장품 조성물은 본 발명의 펩타이드에 대해 상기 개시된 바와 같이 동일, 유사 또는 상이한 화장품 활성을 발휘할 수 있는 다른 화장품 활성 성분 또는 물질도 포함한다.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 화장품 조성물은 색소침착을 방지하기 위해, 태양에의 노출로부터 또는 태양에의 노출에 의해 유발된 태닝으로부터 피부를 보호하기 위해, 또는 피부에서 멜라닌의 양을 감소시키는 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 능력 및 이의 탈색 작용을 증가시키기 위해, 태양 필터 및 이의 조합물 (UVA 또는 UVB 복사 차단제)을 포함한다. 태양 필터의 예로는, 특히, p-아미노벤조산 유도체, 벤질리덴 캠퍼 유도체, 신남산 유도체, 벤조티아졸 유도체, 벤즈이미다졸 유도체, 벤조페논 유도체, 트리아진 유도체, 살리실산 유도체, 디벤조일메탄 유도체, β,β-디페닐아크릴레이트 유도체 뿐만 아니라, 나노색소, 예컨대 산화티타늄 나노색소, 산화철 나노색소, 산화아연 나노색소, 산화지르코늄 나노색소 또는 산화세륨 나노색소를 포함한다.
본 발명의 화장품 조성물은 탈색 치료에서 더 우수한 효능을 얻을 목적으로 피부의 박리를 촉진시킬 수 있는 박리제 또는 이의 조합물을 포함한다는 것이 또한 고려된다. 박리제의 예로는, 특히, 알파 히드록시산, 예컨대, 글리콜산, 락트산, 시트르산, 타르타르산, 말산 및/또는 만델산 등; 베타 히드록시산, 예컨대 살리실산 및 이의 유도체; 우레아 및 이의 유도체; 레스베라트롤 및 이의 유도체; N-아세틸글루코사민 및 이의 유도체; 자스몬산 및 이의 유도체; 신남산; 겐티스산; 올리고푸코스; 사포라 자포니카(Saphora japonica) 추출물; 및 세정제 및/또는 효소, 예컨대 서틸레인, 파파야 추출물, 브로멜라인, 파인애플 추출물, 호박 추출물 및/또는 고구마 추출물 등을 포함한다.
또한, 본 발명의 화장품 조성물은 당업계의 기술적 수준에서 일반적으로 사용되는 임의의 형태로서, 예를 들어, "잔류" 및 "세정" 제형을 포함하는 용제, 현탁제, 에멀젼, 페이스트, 젤, 크림, 파우더, 스프레이, 로션, 오일, 도포제, 세럼, 무스, 연고, 바 또는 펜슬로 제형화될 수 있다. 본 발명의 화장품 조성물은 또한 당업계의 기술적 수준에서 공지된 기술에 의해 여러 형태의 고형 보조품(solid accessory), 예컨대 타월렛(towelette), 하이드로겔, 접착식(또는 비접착식) 패치 또는 페이스 마스크에 혼입될 수 있거나, 또는 여러 메이크업 라인 제품, 예컨대 컨실러, 메이크업 파운데이션, 로션 또는 메이크업 제거 로션 등에 혼입될 수 있다.
본 명세서에 개시된 바와 같이, 본 발명의 화장품 조성물 또는 본 발명의 펩타이드 모두는 활성 성분의 더 우수한 침투를 얻기 위한 목적으로, 화장품학적 서방형 시스템 및/또는 담체, 예컨대 리포좀, 밀리입자, 마이크로입자 및 나노입자에, 뿐만 아니라 스펀지, 소포체, 미셀, 밀리스피어, 마이크로스피어, 나노스피어, 리포스피어, 밀리캡슐, 마이크로캡슐 및 나노캡슐에, 뿐만 아니라 마이크로에멀젼 및 나노에멀젼에 혼입될 수 있다는 것도 고려된다.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 화장품 조성물은 개체, 보다 바람직하게는 인간의 얼굴 및/또는 신체에 국소적으로 적용되기에 적합하거나 조정된다.
세 번째 양태에서, 본 발명은 피부의 산화 스트레스를 예방, 감소 또는 제거 및/또는 개체의 피부를 밝게하기 위한, 본 발명의 펩타이드 또는 화장품 조성물의 화장품으로서의 용도에 관한 것이다.
일 구현예에서, 상기 화장품으로서의 용도는 산화 및/또는 산화 스트레스에 기인한 피부 결점을 예방, 감소 또는 제거하기 위해, 더 바람직하게는, 환경적 산화 스트레스 (예를 들어, 오염 물질 또는 UV 복사)의 결과로서 나타나는 피부 결점, 원하지 않은 피부의 색소침착 또는 노화 또는 광노화에 기인한 피부 결점을 예방, 감소 또는 제거하기 위한 것이다.
바람직한 구현예에서, 이러한 피부 결점은 피부 안색, 색소침착 변화 (예컨대, 검버섯 또는 일광흑자), 예를 들어, 세포외 기질의 구조의 손실, 피부 취약성의 증가 및/또는 염증 반응의 증가에 기인한, 주름 및/또는 피부 톤 및 탄력의 손실이다 (Baumann, L., Skin ageing and its treatment, J. Pathol., 2007; 211:241-251).
따라서, 바람직한 구현예에서, 본 발명의 펩타이드 또는 화장품 조성물의 화장품으로서의 상기 언급한 용도는 피부 노화 및/또는 광노화의 징후를 예방, 감소 또는 제거하기 위한 것이다.
다른 바람직한 구현예에서, 본 발명의 펩타이드 또는 화장품 조성물의 화장품으로서의 용도는 색소침착 변화를 예방, 감소 또는 제거하기 위해 사용된다.
또한 바람직한 구현예에서, 개체는 인간이다.
상기 개시된 바와 같이 본 발명의 화장품으로서의 용도에서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 하나 이상의 추가 활성 성분 및/또는 조성물과 조합하여 사용된다는 것이 고려된다. 상기 하나 이상의 활성 성분 및/또는 조성물은 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 이전에, 동시에, 또는 이후에 사용될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 상기 개시된 바와 같이 본 발명의 용도에서, 본 발명의 펩타이드 및/또는 화장품 조성물은 개체, 보다 바람직하게는 인간의 얼굴 및/또는 신체에 국소적으로 적용된다.
네 번째 양태에서, 본 발명은 전술한 바와 같이 피부의 산화 스트레스를 예방, 감소 또는 제거 및/또는 개체의 피부를 밝게하기 위한, 본 발명의 펩타이드 또는 화장품 조성물의 화장품 용도에 관한 것이다.
산화 스트레스의 예방, 감소 또는 제거 및/또는 피부의 브라이트닝은 환경적 산화 스트레스 (예를 들어, 오염 물질 또는 UV 복사)의 결과로서 나타나는 피부 결점의 예방, 감소 또는 제거를 허용한다. 이러한 피부 결점의 예로는, 피부 안색, 색소침착 변화 (예컨대, 검버섯 또는 일광흑자), 예를 들어, 세포외 기질의 구조의 손실, 피부 취약성의 증가 및/또는 염증 반응의 증가에 기인한, 주름 및/또는 피부 톤 및 탄력의 손실이다 (Baumann, L., Skin ageing and its treatment, J. Pathol., 2007; 211:241-251).
따라서, 바람직한 구현예에서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 화장품 용도는 피부 노화 및/또는 광노화의 징후를 예방, 감소 또는 제거하기 위한 것이다.
다른 바람직한 구현예에서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 화장품 용도는 색소침착 변화를 예방, 감소 또는 제거하기 위해 사용된다.
또한 바람직한 구현예에서, 개체는 인간이다.
상기 개시된 바와 같이 본 발명의 화장품 용도에서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 하나 이상의 추가 활성 성분 및/또는 조성물과 조합하여 사용된다는 것이 고려된다. 상기 하나 이상의 활성 성분 및/또는 조성물은 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 이전에, 동시에, 또는 이후에 사용될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 상기 개시된 바와 같이 본 발명의 화장품 용도에서, 본 발명의 펩타이드 및/또는 화장품 조성물은 개체, 보다 바람직하게는 인간의 얼굴 및/또는 신체에 국소적으로 적용된다.
다섯 번째 양태에서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드 또는 화장품 조성물의 사용을 포함하는 것을 특징으로 하는, 개체의 피부에서 산화 스트레스를 예방, 감소 또는 제거하는 방법에 관한 것이다.
바람직한 구현예에서, 개체는 인간이다.
본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 인체의 피부 영역에 직접 적용하여 본 발명의 방법에 사용된다는 것이 고려된다. 바람직한 구현예에서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 "잔류" 및 "세정" 제형을 포함하는 용제, 현탁제, 에멀젼, 페이스트, 젤, 크림, 파우더, 스프레이, 로션, 오일, 도포제, 세럼, 무스, 연고, 바 또는 펜슬의 형태로 적용된다. 전술한 바와 같이, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 또한 당업계의 기술적 수준에서 공지된 기술에 의해 여러 형태의 고형 보조품, 예컨대 타월렛, 하이드로겔, 접착식(또는 비접착식) 패치 또는 페이스 마스크에 혼입될 수 있거나, 또는 여러 메이크업 라인 제품, 예컨대 컨실러, 메이크업 파운데이션, 로션 또는 메이크업 제거 로션 등에 혼입될 수 있다는 것이 또한 고려되며; 따라서, 본 발명의 방법에서 임의의 상기 형태로 사용된다.
전술한 바와 같이, 상기 개시된 방법은 미용적 효과를 갖는 화장품학적 방법이다.
본 발명의 방법에서, 피부의 산화 스트레스의 예방, 감소 또는 제거는 전술한 효과 및/또는 용도를 갖는다.
상기 개시된 바와 같이 본 발명의 방법에서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 하나 이상의 추가 활성 성분 및/또는 조성물과 조합하여 사용된다는 것이 고려된다. 상기 하나 이상의 활성 성분 및/또는 조성물은 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 이전에, 동시에, 또는 이후에 사용될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 상기 개시된 바와 같이 본 발명의 방법에서, 본 발명의 펩타이드 및/또는 화장품 조성물은 개체, 보다 바람직하게는 인간의 얼굴 및/또는 신체에 국소적으로 적용된다.
마지막 양태에서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 사용을 포함하는 것을 특징으로 하는, 개체의 피부를 밝게하는 방법에 관한 것이다.
바람직한 구현예에서, 개체는 인간이다.
본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 인체의 피부 영역에 직접 적용하여 본 발명의 방법에 사용된다는 것이 고려된다. 바람직한 구현예에서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 "잔류" 및 "세정" 제형을 포함하는 용제, 현탁제, 에멀젼, 페이스트, 젤, 크림, 파우더, 스프레이, 로션, 오일, 도포제, 세럼, 무스, 연고, 바 또는 펜슬의 형태로 적용된다. 전술한 바와 같이, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 또한 당업계의 기술적 수준에서 공지된 기술에 의해 여러 형태의 고형 보조품, 예컨대 타월렛, 하이드로겔, 접착식(또는 비접착식) 패치 또는 페이스 마스크에 혼입될 수 있거나, 또는 여러 메이크업 라인 제품, 예컨대 컨실러, 메이크업 파운데이션, 로션 또는 메이크업 제거 로션 등에 혼입될 수 있다는 것이 또한 고려되며; 따라서, 본 발명의 방법에서 임의의 상기 형태로 사용된다.
전술한 바와 같이, 상기 개시된 방법은 미용적 효과를 갖는 화장품학적 방법이다.
본 발명의 방법에서, 피부의 산화 스트레스의 예방, 감소 또는 제거는 전술한 활성, 효과 및/또는 용도를 갖는다.
상기 개시된 바와 같이 본 발명의 방법에서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 하나 이상의 추가 활성 성분 및/또는 조성물과 조합하여 사용된다는 것이 고려된다. 상기 하나 이상의 활성 성분 및/또는 조성물은 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 이전에, 동시에, 또는 이후에 사용될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 상기 개시된 바와 같이 본 발명의 방법에서, 본 발명의 펩타이드 및/또는 화장품 조성물은 개체, 보다 바람직하게는 인간의 얼굴 및/또는 신체에 국소적으로 적용된다.
상기에서 이미 언급한 바와 같이, 본 발명의 펩타이드 (및, 따라서, 또한 본 발명의 화장품 조성물)는 매우 다양한 조건하에서 상기 활성을 나타내기 때문에 광범위한 항산화 및/또는 브라이트닝 활성을 나타내었다. 따라서, 상기 펩타이드 및 이들을 포함하는 조성물은 매우 다양한 조건하에서 산화 또는 산화 스트레스에 의해 생성된 피부 결점을 예방, 감소 또는 제거하기 위한 화장품에 사용하기에 적합하다.
더 나은 이해를 위해, 본 발명은 실시예의 방법에 의해 제공되는, 첨부된 도면을 참조하여, 그리고 예시적이고 비제한적인 실시예를 참조하여 이하에서 보다 상세하게 기술된다.
도 1은 트롤록스 당량의 형태로 Ac-서열번호 1-NH2, Ac-서열번호 2-NH2, Ac-서열번호 3-NH2 및 페룰산-서열번호 2-NH2의 항산화력을 나타낸다 (실시예 9 참조). 도 1(A)는 시험된 세가지 농도에서 Ac-서열번호 1-NH2로 처리한 경우 얻은 트롤록스 당량을 나타낸다, 좌에서 우로의 컬럼 (x-축): 0.01 ㎎/㎖, 0.05 ㎎/㎖ 및 0.1 ㎎/㎖. 도 1(B)는 시험된 세가지 해당하는 농도에서 Ac-서열번호 2-NH2로 처리한 경우 얻은 트롤록스 당량을 나타낸다, 좌에서 우로의 컬럼 (x-축): 0.05 ㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖ 및 0.5 ㎎/㎖. 도 1(C)는 시험된 세가지 해당하는 농도에서 Ac-서열번호 3-NH2로 처리한 경우 얻은 트롤록스 당량을 나타낸다, 좌에서 우로의 컬럼 (x-축): 0.01 ㎎/㎖, 0.05 ㎎/㎖ 및 0.1 ㎎/㎖. 도 1(D)는 시험된 세가지 해당하는 농도에서 페룰산-서열번호 2-NH2로 처리한 경우 얻은 트롤록스 당량을 나타낸다, 좌에서 우로의 컬럼 (x-축): 0.01 ㎎/㎖, 0.05 ㎎/㎖ 및 0.1 ㎎/㎖. 분석의 양성 대조군으로서, 아스코르브산 2-글루코시드 (이하, AA-2G) 및 마그네슘 아스코르빌 포스페이트 (이하, MAP)를 시험하였다. 도 1(E)는 시험된 세가지 해당하는 농도에서 AA-2G로 처리한 경우 얻은 트롤록스 당량을 나타낸다, 좌에서 우로의 컬럼 (x-축): 0.01 ㎎/㎖, 0.05 ㎎/㎖ 및 0.1 ㎎/㎖. 도 1(F)는 시험된 세가지 해당하는 농도에서 MAP로 처리한 경우 얻은 트롤록스 당량을 나타낸다, 좌에서 우로의 컬럼 (x-축): 0.01 ㎎/㎖, 0.05 ㎎/㎖ 및 0.1 ㎎/㎖. 도 1(A) 내지 도 1(F)의 경우, y-축은 μM의 트롤록스 당량을 나타낸다.
도 2는 네 가지 농도의 페룰산-서열번호 2-NH2 및 두 가지 농도의 참조 화합물 아스코르브산의 항산화 활성을 나타내며, 2,2-디페닐-1-피크릴히드라질 (이하, DPPH) 분석에 의해 평가되고 대조군 샘플에 근거하여 표준화되었다 (실시예 10에서 설명된 바와 같음). x-축의 좌에서 우로의 컬럼은 다음에 상응한다: 대조군 (펩타이드 무첨가); 각각 30 μM 및 60 μM의 아스코르브산; 및 0.01 ㎎/㎖, 0.05 ㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖ 및 0.5 ㎎/㎖ 농도의 페룰산-서열번호 2-NH2. y-축은 대조군 조건 (펩타이드 무첨가) 대비 항산화 활성 (DPPH의 감소 %)을 나타낸다.
도 3은 대조군 샘플에 근거하여 표준화된 지질 과산화의 퍼센티지를 나타내며 (실시예 11에서 설명된 바와 같음), 이는 대조군 샘플에서의 지질 과산화의 퍼센티지를 100%로 설정한 다음 나머지 샘플들과의 비교를 수행한다. 도 3(A)는 시험된 세가지 농도에서 Ac-서열번호 1-NH2로 처리한 경우 얻은 지질 과산화의 퍼센티지 결과를 나타낸다. 도 3(A)의 x-축의 좌에서 우로의 컬럼은 다음에 상응한다: 대조군 및 각각 0.01 ㎎/㎖, 0.05 ㎎/㎖ 및 0.1 ㎎/㎖의 농도로 Ac-서열번호 1-NH2 처리. 도 3(B)는 시험된 세가지 해당하는 농도에서 Ac-서열번호 2-NH2로 처리한 경우 얻은 지질 과산화의 퍼센티지 결과를 나타낸다. 도 3(B)의 x-축의 좌에서 우로의 컬럼은 다음에 상응한다: 대조군 및 각각 0.01 ㎎/㎖, 0.05 ㎎/㎖ 및 0.1 ㎎/㎖의 농도로 Ac-서열번호 2-NH2 처리. 도 3(A) 및 도 3(B) 모두의 경우, y-축은 양성 대조군 샘플에서 관찰된 지질 과산화 대비 지질 과산화의 퍼센티지를 나타낸다.
도 4는 양성 대조군 샘플 (실시예 12에서 설명된 바와 같이, 100 μM의 과산화수소로만 처리된 샘플)과 비교하여 (과산화수소에 의해 유도된) 활성산소종의 퍼센티지를 나타내며, 이는 양성 대조군 샘플에서의 활성산소종의 퍼센티지를 100%로 설정한 다음 나머지 샘플들과의 비교를 수행한다. 도 4(A)는 시험된 세가지 농도에서 Ac-서열번호 1-NH2로 처리한 경우 얻은 활성산소종의 퍼센티지 결과를 나타낸다. 도 4(A)의 x-축의 좌에서 우로의 컬럼은 다음에 상응한다: 기저 상태 (처리가 적용되지 않은 세포), 양성 대조군, 산화의 음성 대조군 (1 mM 아스코르브산으로 처리된 샘플) 및 각각 0.001 ㎎/㎖, 0.005 ㎎/㎖ 및 0.01 ㎎/㎖의 농도로 Ac-서열번호 1-NH2 처리. 도 4(B)는 시험된 네가지 해당하는 농도에서 Ac-서열번호 2-NH2로 처리한 경우 얻은 활성산소종의 퍼센티지 결과를 나타낸다. 도 3(B)의 x-축의 좌에서 우로의 컬럼은 다음에 상응한다: 기저 상태 (처리가 적용되지 않은 세포), 양성 대조군, 음성 대조군 (1 mM 아스코르브산으로 처리된 샘플) 및 각각 0.001 ㎎/㎖, 0.005 ㎎/㎖, 0.01 ㎎/㎖ 및 0.05 ㎎/㎖의 농도로 Ac-서열번호 2-NH2 처리. 도 4(A) 및 도 4(B) 모두의 경우, y-축은 양성 대조군 샘플에서 관찰된 활성산소종 대비 활성산소종의 퍼센티지를 나타낸다.
도 5는 대조군 샘플 (실시예 13에서 설명된 바와 같이, 300 μM의 중금속으로만 처리된 샘플)과 비교하여, Ac-서열번호 1-NH2로 처리한 경우 얻은 (중금속에 의해 유도된) 최종 당화 산물의 퍼센티지를 나타내며, 이는 대조군 샘플에서의 최종 당화 산물의 퍼센티지를 100%로 설정한 다음 나머지 샘플들과의 비교를 수행한다. x-축은 시험된 샘플을 나타내며, 이는 좌에서 우로의 컬럼이다: 기저 상태 (처리가 적용되지 않은 세포), 양성 대조군 및 각각 0.01 ㎎/㎖, 0.05 ㎎/㎖ 및 0.1 ㎎/㎖의 세가지 농도로 시험된 Ac-서열번호 1-NH2. y-축은 대조군 샘플에서 관찰된 최종 당화 산물 대비 최종 당화 산물의 퍼센티지를 나타낸다.
도 6은 대조군 샘플 (실시예 14에서 설명된 바와 같이, 합성 연기로만 처리된 샘플)과 비교하여, (합성 연기에 의해 유도된) DNA 산화의 보호를 나타낸다. 이를 위해, 도 6은 대조군 샘플 (대조군 샘플의 퍼센티지를 100%로 설정한 다음 나머지 샘플과 비교를 수행함)과 비교 또는 표준화하여, Ac-서열번호 1-NH2로 처리한 경우 얻은 (DNA 산화의 척도로서) 8-히드록시데옥시구아노신의 퍼센티지를 나타낸다. x-축은 좌에서 우로 다음을 나타낸다: 기저 상태 (처리가 적용되지 않은 세포), 양성 대조군 및 각각 0.01 ㎎/㎖, 0.05 ㎎/㎖ 및 0.1 ㎎/㎖의 세가지 농도로 시험된 Ac-서열번호 1-NH2. y-축은 대조군 샘플에서 관찰된 8-히드록시데옥시구아노신 대비 8-히드록시데옥시구아노신의 퍼센티지를 나타낸다.
도 7은 대조군 샘플 (실시예 14에서 설명된 바와 같이, 합성 연기로만 처리된 샘플)과 비교하여, (합성 연기에 의해 유도된) 지질산화의 보호를 나타낸다. 이를 위해, 도 7은 대조군 샘플 (대조군 샘플의 퍼센티지를 100%로 설정한 다음 나머지 샘플과 비교를 수행함)과 비교하여, Ac-서열번호 1-NH2로 처리한 경우 얻은 (지질산화의 척도로서) MDA의 퍼센티지를 나타낸다. x-축은 좌에서 우로 다음을 나타낸다: 기저 상태 (처리가 적용되지 않은 세포), 대조군 및 각각 0.01 ㎎/㎖, 0.05 ㎎/㎖ 및 0.1 ㎎/㎖의 세가지 농도로 시험된 Ac-서열번호 1-NH2. y-축은 대조군 샘플에서 관찰된 MDA 대비 MDA의 퍼센티지를 나타낸다.
도 8은 0.05 ㎎/㎖의 펩타이드 농도로 처리한 후의 HEKa 세포의 유전자 발현 프로파일에 대한 Ac-서열번호 1-NH2의 효과를 나타낸다. 유전자 발현 수준의 변화는 기저 대조군 (미처리된 세포)과 관련하여 양성 또는 음성 배수-변화로 나타낸다. y-축의 위에서 아래로의 막대는 다음을 나타낸다: CYP2R1 (비타민 D 25-히드록시라아제), NFE2L2 (핵 인자-유사 2), HMOX1 (헴 옥시게나아제-1), GSTP1 (글루타티온 S-트랜스퍼라아제 P), GSS (글루타티온 합성효소), GPX1 (글루타티온 퍼옥시다아제) 및 TRX (티오레독신). x-축은 기저 대조군 대비 또는 관련하여 배수 변화를 나타낸다. 음성 배수 변화는 해당하는 유전자가 하향조절됨을 의미하며; 양성 배수 변화는 해당하는 유전자가 상향조절됨을 의미한다.
도 9는 인간 피부 외식편(explant)에 대한 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2의 항산화 및 오염 방지 효능을 나타낸다. 도 9(A) 및 도 9(B)는 오염 물질 (중금속 또는 탄화수소)의 혼합물에 노출된 후, 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2로 사전 처리되거나 미처리된, 인간 피부 외식편 상에서 AhR (도 9(A)) 및 헴 옥시게나아제-1 (이하, HO-1) (도 9(B))에 의해 점유된 표피 표면의 퍼센티지를 나타낸 반면, 도 9(C)는 오염 물질에 노출되지 않고 Ac-서열번호 1-NH2로 처리되거나 미처리된, 외식편의 HO-1에 의해 점유된 표피 표면의 퍼센티지를 나타낸다. 도 9(A) 및 도 9(B)에서 x-축은 좌에서 우로 다음을 나타낸다: 오염 물질의 혼합물에 노출되고 미처리된 외식편 및 오염 물질의 혼합물에 노출되고 Ac-서열번호 1-NH2로 처리된 외식편. 그 측면에서, 도 9(C)의 경우 x-축은 좌에서 우로, 미처리된 외식편 및 Ac-서열번호 1-NH2로 처리된 외식편을 나타낸다. y-축은 AhR (도 9(A)) 및 HO-1 (도 9(B) 및 도 9(C))에 의해 점유된 표면의 퍼센티지를 나타내며, 도 9(A) 및 도 9(B)에 대해서는 오염 물질의 혼합물에 노출되었으나 미처리된 경우, 그리고 도 9(C)에 대해서는 미노출 및 미처리된 경우 얻은 값을 100%로 설정한다.
도 10은 Ac-서열번호 1-NH2의 브라이트닝 효능을 나타낸다. 이를 위해, 도 10은 기저 상태 (처리가 적용되지 않은 세포)에 존재하는 세포 당 멜라닌과 비교하여 Ac-서열번호 1-NH2로 처리한 경우 얻은, 세포 당 멜라닌의 퍼센티지를 나타낸다 (기저 상태의 퍼센티지를 100%로 설정한 다음 나머지 샘플과 비교를 수행함). 두 농도의 코직산을 양성 대조군으로서 사용하였다. x-축은 좌에서 우로, 다음을 나타낸다: 기저 상태, 10 μM의 코직산, 50 μM의 코직산 및 각각 0.01 ㎎/㎖ (17.7 μM), 0.05 ㎎/㎖ (88.5 μM) 및 0.1 ㎎/㎖ (177.1 μM)의 세가지 농도로 시험된 Ac-서열번호 1-NH2. y-축은 세포 당 멜라닌의 퍼센티지를 나타낸다 (기저 상태의 경우에 얻은 값을 100%로 설정함).
도 11은 Ac-서열번호 2-NH2의 브라이트닝 효능을 나타낸다. 이를 위해, 도 11은 기저 상태 (처리가 적용되지 않은 세포)에 존재하는 세포 당 멜라닌과 비교하여 Ac-서열번호 2-NH2로 처리한 경우 얻은, 세포 당 멜라닌의 퍼센티지를 나타낸다 (기저 상태의 퍼센티지를 100%로 설정한 다음 나머지 샘플과 비교를 수행함). 두 농도의 코직산을 양성 대조군으로서 사용하였다. x-축은 좌에서 우로, 다음을 나타낸다: 기저 상태, 10 μM의 코직산, 50 μM의 코직산 및 각각 0.01 ㎎/㎖ (15.2 μM), 0.05 ㎎/㎖ (76 μM) 및 0.1 ㎎/㎖ (152 μM)의 세가지 농도로 시험된 Ac-서열번호 2-NH2. y-축은 세포 당 멜라닌의 퍼센티지를 나타낸다 (기저 상태의 경우에 얻은 값을 100%로 설정함).
도 12는 Ac-서열번호 3-NH2의 브라이트닝 효능을 나타낸다. 이를 위해, 도 12는 기저 상태 (처리가 적용되지 않은 세포)에 존재하는 세포 당 멜라닌과 비교하여 Ac-서열번호 3-NH2로 처리한 경우 얻은, 세포 당 멜라닌의 퍼센티지를 나타낸다 (기저 상태의 퍼센티지를 100%로 설정한 다음 나머지 샘플과 비교를 수행함). 코직산을 양성 대조군으로서 사용하였다. x-축은 좌에서 우로, 다음을 나타낸다: 기저 상태, 70 μM의 코직산 및 이는 각각 0.01 ㎎/㎖ (11.5 μM), 0.05 ㎎/㎖ (57.5 μM) 및 0.1 ㎎/㎖ (115 μM)의 세가지 농도로 시험된 Ac-서열번호 3-NH2. y-축은 세포 당 멜라닌의 퍼센티지를 나타낸다 (기저 상태의 경우에 얻은 값을 100%로 설정함).
도 13은 페룰산-서열번호 2-NH2의 브라이트닝 효능을 나타낸다. 이를 위해, 도 13은 기저 상태 (처리가 적용되지 않은 세포)에 존재하는 세포 당 멜라닌과 비교하여 페룰산-서열번호 2-NH2로 처리한 경우 얻은, 세포 당 멜라닌의 퍼센티지를 나타낸다 (기저 상태의 퍼센티지를 100%로 설정한 다음 나머지 샘플과 비교를 수행함). 코직산을 양성 대조군으로서 사용하였다. x-축은 좌에서 우로, 다음을 나타낸다: 기저 상태, 70 μM의 코직산 및 이는 각각 0.005 ㎎/㎖ (6.3 μM), 0.01 ㎎/㎖ (12.6 μM) 및 0.05 ㎎/㎖ (63 μM)의 세가지 농도로 시험된 페룰산-서열번호 2-NH2. y-축은 세포 당 멜라닌의 퍼센티지를 나타낸다 (기저 상태의 경우에 얻은 값을 100%로 설정함).
도 14는 튜브 내에서 버섯 티로시나아제 활성에 대한 펩타이드 Ac-서열번호 3-NH2의 억제 효과를 나타낸다. 결과는 기저 (미처리된 세포)와 비교하여 버섯 티로시나아제 억제의 퍼센티지로서 나타내었다. 코직산을 양성 대조군으로서 사용하였다. x-축은 좌에서 우로, 다음을 나타낸다: 기저 상태, 400 μM 및 800 μM의 코직산 및 이는 각각 0.1 ㎎/㎖, 0.5 ㎎/㎖ 및 1 ㎎/㎖의 세가지 농도로 시험된 Ac-서열번호 3-NH2. y-축은 버섯 티로시나아제의 활성 퍼센티지를 나타낸다 (기저 상태의 경우에 얻은 값을 100%로 설정함).
도 15는 튜브 내에서 버섯 티로시나아제 활성에 대한 펩타이드 페룰산-서열번호 2-NH2의 억제 효과를 나타낸다. 결과는 기저 (미처리된 웰)와 비교하여 버섯 티로시나아제 억제의 퍼센티지로서 나타내었다. 코직산을 양성 대조군으로서 사용하였다. x-축은 좌에서 우로, 다음을 나타낸다: 기저 상태, 400 μM 및 800 μM의 코직산 및 이는 각각 0.05 ㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖ 및 0.5 ㎎/㎖의 세가지 농도로 시험된 페룰산-서열번호 2-NH2. y-축은 버섯 티로시나아제의 활성 퍼센티지를 나타낸다 (기저 상태의 경우에 얻은 값을 100%로 설정함).
도 16은 0.1 ㎎/㎖의 펩타이드 농도로 11일 (도 16(A)) 및 24시간 (도 16(B)) 처리한 후의 HEMn 세포의 유전자 발현 프로파일에 대한 Ac-서열번호 3-NH2의 효과를 나타낸다. 유전자 발현 수준의 변화는 기저 대조군 (미처리된 세포)과 관련하여 양성 또는 음성 배수-변화로 나타낸다. 도 16(A)의 경우, y-축의 위에서 아래로의 막대는 다음을 나타낸다: COX-1 (시클로옥시게나아제-1), MITF (멜라닌 생성 관련 전사 인자), MC1R (멜라노코르틴-1 수용체), MLAN-A (T-세포에 의해 인지된 흑색종 항원), C-KIT (원종양유전자 수용체 티로신 키나아제 KIT), PMEL17 (전-멜라노좀 단백질), DCT-TYRP2 (도파크롬 상호변이효소), TYRP-1 (티로시나아제 관련 단백질 1) 및 TYR (티로시나아제). 도 16(B)의 경우, y-축의 위에서 아래로의 막대는 다음을 나타낸다: BLOC-1 (리소좀-관련 세포기관 복합체-1의 생합성), MITF (멜라닌 생성 관련 전사 인자), MC1R (멜라노코르틴-1 수용체), MLAN-A (T-세포에 의해 인지된 흑색종 항원), C-KIT (원종양유전자 수용체 티로신 키나아제 KIT), PMEL17 (전-멜라노좀 단백질), DCT-TYRP2 (도파크롬 상호변이효소), TYRP-1 (티로시나아제 관련 단백질 1) 및 TYR (티로시나아제). x-축은 기저 대조군 대비 배수 변화를 나타낸다. 음성 배수 변화는 해당하는 유전자가 하향조절됨을 의미하며; 양성 배수 변화는 해당하는 유전자가 상향조절됨을 의미한다.
도 17은 0.05 ㎎/㎖의 펩타이드 농도로 11일 처리한 후의 HEMn 세포의 유전자 발현 프로파일에 대한 페룰산-서열번호 2-NH2의 효과를 나타낸다. 유전자 발현 수준의 변화는 기저 대조군 (미처리된 세포)과 관련하여 양성 또는 음성 배수-변화로 나타낸다. y-축의 위에서 아래로의 막대는 다음을 나타낸다: VDR (비타민 D 수용체), PMEL17 (전-멜라노좀 단백질) 및 DCT-TYRP2 (도파크롬 상호변이효소). x-축은 기저 대조군 대비 배수 변화를 나타낸다. 음성 배수 변화는 해당하는 유전자가 하향조절됨을 의미하며; 양성 배수 변화는 해당하는 유전자가 상향조절됨을 의미한다.
도 18은 0.1 ㎎/㎖의 펩타이드 농도로 24시간 처리한 후의 HEKa 세포의 유전자 발현 프로파일에 대한 Ac-서열번호 3-NH2의 효과를 나타낸다. 유전자 발현 수준의 변화는 기저 대조군 (미처리된 세포)과 관련하여 양성 또는 음성 배수-변화로 나타낸다. y-축의 위에서 아래로의 막대는 다음을 나타낸다: KITLG (KIT 리간드), TP53 (종양 단백질 p53), DKK1 (딕오프-관련 단백질 1) 및 NGF (신경 성장 인자). x-축은 기저 대조군 대비 배수 변화를 나타낸다. 음성 배수 변화는 해당하는 유전자가 하향조절됨을 의미하며; 양성 배수 변화는 해당하는 유전자가 상향조절됨을 의미한다.
도 19는 0.05 ㎎/㎖의 펩타이드 농도로 24시간 처리한 후의 HEKa 세포의 유전자 발현 프로파일에 대한 페룰산-서열번호 2-NH2의 효과를 나타낸다. 유전자 발현 수준의 변화는 기저 대조군 (미처리된 세포)과 관련하여 양성 또는 음성 배수-변화로 나타낸다. y-축의 위에서 아래로의 막대는 다음을 나타낸다: KITLG (KIT 리간드), POMC (프로-오피오멜라노코르틴), EDN1 (엔도텔린-1) 및 NGF (신경 성장 인자). x-축은 기저 대조군 대비 배수 변화를 나타낸다. 음성 배수 변화는 해당하는 유전자가 하향조절됨을 의미하며; 양성 배수 변화는 해당하는 유전자가 상향조절됨을 의미한다.
실시예
약어:
아미노산에 대해 사용된 약어는 Eur. J. Biochem. (1984) 138:937에 요약된 1983년 생화학적 명명법에 관한 IUPAC-IUB 공동위원회의 권장사항을 따른다.
2-CITrt, 2-클로로트리틸; Ac, 아세틸; Arg, 아르기닌; Asp, 아스파르트산; Boc, 터트-부틸옥시카보닐; cDNA, 상보적 DNA; C-말단, 카복시-말단; DCM, 디클로로메탄; DIEA, N,N'-디이소프로필에틸아민; DIPCDI, N,N'-디이소프로필카르보디이미드; DMF, N,N-디메틸포름아미드; DNA, 데옥시리보핵산; DPPH, 2,2-디페닐-1-피 크릴히드라질; equiv, 당량; ESI-MS, 전기 분무 이온화 질량 분석법; Fmoc, 9-플루오레닐메틸옥시카보닐; Glu, 글루탐산; HDFa, 인간 피부 섬유아세포, 성인; HEKa, 인간 표피 각질형성 세포, 성인; HEMn, 인간 표피 멜라닌세포, 신생아; His, 히스티딘; HOBt, 1-하이드록시벤조트리아졸; HPLC, 고성능 액체 크로마토그래피; Ile, 이소루신; INCI, 화장품 성분의 국제적인 명명법; MBHA, p-메틸벤즈히드릴아민; Leu, 류신;L Lys, 리신; Me, 메틸; MeCN, 아세토니트릴; MeOH, 메탄올; N-말단, 아미노-말단; Palm, 팔미토일; Pbf, 2,2,4,6,7-펜타메틸디히드로벤조푸란-5-설포닐; Phe, 페닐알라닌; RNA, 리보핵산; RT, 상온; Ser, 세린; tBu, 터트-부틸; TFA, 트리플루오로아세트산; Thr, 트레오닌; TIS, 트리이소프로필실란; Trp, 트립토판; Trt, 트리페닐메틸 또는 트리틸; Tyr, 티로신; Val, 발린; Z, 벤질옥시카보닐.
실시예에 포함된 화학적 합성 절차와 관련하여, 모든 합성 공정은 다공성 폴리에틸렌 디스크가 장착되어 있는 폴리프로필렌 주사기 또는 다공성 플레이트가 장착되어 있는 파이렉스® 반응기에서 수행되었음을 주목한다. 모든 시약 및 용매는 합성 품질이었고 임의의 추가 처리 없이 사용되었다. 용매 및 용해성 시약은 흡입에 의해 제거되었다. Fmoc기는 피페리딘-DMF (2:8, v/v) (적어도 1×1 분, 2×10 분, 5 ㎖/g 수지)로 제거되었다 (Lloyd Williams P. 외, Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, CRC, 1997, Boca Raton (Fla., USA)). 탈보호, 결합, 및 재탈보호의 단계 간의 세척은 10 ㎖ 용매/g 수지를 사용하여 매회 DMF (3×1 분) 및 DCM (3×1 분)으로 수행되었다. 결합 반응은 3 ㎖ 용매/g 수지를 사용하여 실시하였다. 결합 제어는 닌하이드린 시험을 수행하여 실시하였다 (Kaiser E. 외, Anal. Biochem., 1970, 34: 595598). 모든 합성 반응 및 세척은 상온에서 수행되었다.
실시예 1. 본 발명의 펩타이드의 합성 및 제조
- Fmoc-X m -AA 1 -AA 2 -AA 3 -AA 4 -Y n -R 2 -Rink-MBHA-수지를 수득함, 여기서 AA 1 은 -L-Asp- 또는 -L-Glu-이고; AA 2 는 -L-Tyr-, -L-Trp- 또는 -L-Phe-이고; AA 3 은 -L-Lys- 또는 -L-Arg-이고; AA 4 는 -L-Val-, -L-Ile- 또는 -L-Leu-이고; n 및 m은 0임.
중량을 표준화하였다. 0.52 mmol/g의 작용기화를 갖는 4.8 g (2.5 mmol)의 Fmoc-Rink-MBHA 수지는 상기 기술된 일반 프로토콜에 따라 피페리딘-DMF로 처리하여 Fmoc기를 제거하였다. 2.55 g의 Fmoc-L-Val-OH, 2.65 g의 Fmoc-L-Ile-OH 또는 2.65 g의 Fmoc-L-Leu-OH (7.5 mmol, 3 당량)를 용매로서 DMF를 사용하여 DIPCDI (1.17 ㎖; 7.5 mmol; 3 당량) 및 HOBt (1.01 g; 7.5 mmol; 3 당량)의 존재하에 탈보호된 수지 상에 1시간 동안 혼입시켰다.
이후, 수지를 일반적인 방법에 기술된 바와 같이 세척하고, Fmoc기의 탈보호 처리를 반복하여 다음 아미노산을 결합시켰다. 앞서 기술된 프로토콜에 따라 3.51 g의 Fmoc-L-Lys(Boc)-OH 또는 4.87 g의 Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (7.5 mmol; 3 당량); 이어서 3.45 g의 Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH, 3.95 g의 Fmoc-L-Trp(Boc)-OH 또는 2.91 g의 Fmoc-L-Phe-OH (7.5 mmol; 3 당량); 그리고 이어서 3.09 g의 Fmoc-L-Asp(tBu)-OH 또는 3.19 g의 Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (7.5 mmol; 3 당량)를 1.01 g의 HOBt (7.5 mmol; 3 당량) 및 1.17 ㎖의 DIPCDI (7.5 mmol; 3 당량)의 존재하에 각 결합을 순차적으로 결합시켰다. 상기 이미 언급한 바와 같이, 각 아미노산 첨가 단계 사이에, Fmoc기의 탈보호 처리를 수행하였다.
합성 후, 펩타이드 수지를 DCM으로 세척하고 (각각 3분 동안 5회) 진공하에 건조시켰다.
- Fmoc-X m -AA 1 -AA 2 -AA 3 -AA 4 -Y n -R 2 -Rink-MBHA-수지를 수득함, 여기서 X는 -L-Leu-이고; AA 1 은 -L-His- 또는 -L-Thr-이고; AA 2 는 -L-Tyr-, -L-Trp- 또는 -L-Phe-이고; AA 3 은 -L-Tyr-, -L-Trp- 또는 -L-Phe-이고; AA 4 는 -L-Lys- 또는 -L-Arg-이고 Y는 -L-Ala-이고; n 및 m은 1임.
중량을 표준화하였다. 0.52 mmol/g의 작용기화를 갖는 4.8 g (2.5 mmol)의 Fmoc-Rink-MBHA 수지는 상기 기술된 일반 프로토콜에 따라 피페리딘-DMF로 처리하여 Fmoc기를 제거하였다. 2.34 g의 Fmoc-L-Ala-OH (7.5 mmol; 3 당량)를 용매로서 DMF를 사용하여 DIPCDI (1.17 ㎖; 7.5 mmol; 3 당량) 및 HOBt (1.01 g; 7.5 mmol; 3 당량)의 존재하에 탈보호된 수지 상에 1시간 동안 혼입시켰다.
이후, 수지를 일반적인 방법에 기술된 바와 같이 세척하고, Fmoc기의 탈보호 처리를 반복하여 다음 아미노산을 결합시켰다. 앞서 기술된 프로토콜에 따라 3.51 g의 Fmoc-L-Lys(Boc)-OH 또는 4.87 g의 Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (7.5 mmol; 3 당량); 이어서 3.45 g의 Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH, 3.95 g의 Fmoc-L-Trp(Boc)-OH 또는 2.91 g의 Fmoc-L-Phe-OH (7.5 mmol; 3 당량); 이어서 3.45 g의 Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH, 3.95 g의 Fmoc-L-Trp(Boc)-OH 또는 2.91 g의 Fmoc-L-Phe-OH (7.5 mmol; 3 당량); 이어서 4.65 g의 Fmoc-L-His(Trt)-OH 또는 2.98 g의 Fmoc-L-Thr(tBu)-OH (7.5 mmol; 3 당량); 그리고 이어서 2.65 g의 Fmoc-L-Leu-OH (7.5 mmol; 3 당량)를 1.01 g의 HOBt (7.5 mmol; 3 당량) 및 1.17 ㎖의 DIPCDI (7.5 mmol; 3 당량)의 존재하에 각 결합을 순차적으로 결합시켰다. 상기 이미 언급한 바와 같이, 각 아미노산 첨가 단계 사이에, Fmoc기의 탈보호 처리를 수행하였다.
합성 후, 펩타이드 수지를 DCM으로 세척하고 (각각 3분 동안 5회) 진공하에 건조시켰다.
- Fmoc-X m -AA 1 -AA 2 -AA 3 -AA 4 -Y n -R 2 -O-2-ClTrt-수지를 수득함, 여기서 AA 1 은 -L-Asp- 또는 -L-Glu-이고; AA 2 는 -L-Tyr-, -L-Trp- 또는 -L-Phe-이고; AA 3 은 -L-Lys- 또는 -L-Arg-이고; AA 4 는 -L-Val-, -L-Ile- 또는 -L-Leu-이고; n 및 m은 0임.
중량을 표준화하였다. 약 30 ㎖의 DCM에 용해된 0.85 ㎖의 DIEA (5 mmol; 1 당량)와 1.77 g의 Fmoc-L-Ile-OH, 1.77 g의 Fmoc-L-Leu-OH 또는 1.70 g의 Fmoc-L-Val-OH (5 mmol; 1 당량)의 혼합물을 건조 2-클로로트리틸 수지 (3.8 g; 5 mmol)에 결합시켰다. 이들을 5분 동안 교반한 후, 1.7 ㎖의 DIEA (10 mmol; 2 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 40분 동안 반응시켰다. 나머지 염소기는 MeOH로 처리하여 차단하였다.
이후, 수지를 일반적인 방법에 기술된 바와 같이 세척하고, Fmoc기의 탈보호 처리를 반복하여 다음 아미노산을 결합시켰다. 앞서 기술된 프로토콜에 따라 7.02 g의 Fmoc-L-Lys(Boc)-OH 또는 9.74 g의 Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (15 mmol; 3 당량); 이어서 6.90 g의 Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH, 7.90 g의 Fmoc-L-Trp(Boc)-OH 또는 5.82 g의 Fmoc-L-Phe-OH (15 mmol; 3 당량); 그리고 이어서 6.18 g의 Fmoc-L-Asp(tBu)-OH 또는 6.38 g의 Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH (15 mmol; 3 당량)를 2.03 g의 HOBt (15 mmol; 3 당량) 및 2.3 ㎖의 DIPCDI (15 mmol; 3 당량)의 존재하에 각 결합을 순차적으로 결합시켰다.
합성 후, 펩타이드 수지를 DCM으로 세척하고 (각각 3분 동안 5회) 진공하에 건조시켰다.
상기 언급된 합성 절차를 사용하여, 요구되는 아미노산의 선택과 더불어, 하기 서열을 합성하였다:
Asp-Tyr-Lys-Val (서열번호 1); 및
Leu-His-Trp-Phe-Arg-Ala (서열번호 3).
추가로, 적절한 정렬을 만들어 하기 서열도 합성하였다:
His-Trp-Phe-Lys (서열번호 2); 및
Thr-Phe-Phe-Lys (서열번호 4).
실시예 2. 실시예 1에 따라 합성된 펩타이드의 Fmoc N-말단 보호기의 제거
펩티딜 수지의 N-말단 Fmoc기는 DMF 중의 20% 피페리딘으로 탈보호되었다 (1×1 분+2×10 분) (Lloyd Williams P. 외 (1997) "Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins" CRC, Boca Raton (Fla., USA)). 펩티딜 수지를 DMF (5×1 분), DCM (4×1 분)으로 세척하고, 진공하에 건조시켰다.
실시예 3. 실시예 2에 따라 수득된 펩티딜 수지 상에 R 1 아세틸기를 도입하는 공정
실시예 2에 따라 수득된 1 mmol (1 당량)의 펩티틸 수지를 용매로서 5 ㎖의 DMF를 사용하여 25 당량의 DIEA 존재하에 25 당량의 아세트산 무수물로 처리하였다. 이들을 30분 동안 반응시킨 후, 펩티딜 수지를 DMF (5×1 분), DCM (4×1 분)으로 세척하고, 진공하에 건조시켰다.
실시예 4. 실시예 2에서 얻은 펩티딜 수지 상에 R 1 팔미토일기를 도입하는 공정
DMF (1 ㎖)에 전-용해된 10 당량의 팔미트산을 10 당량의 HOBt 및 10 당량의 DIPCDI의 존재하에, 실시예 2에서 얻은 1 mmol (1 당량)의 펩티틸 수지에 혼입시켰다. 이들을 밤새 (약 15 시간) 반응시킨 후, 수지를 DMF (5×1 분), DCM (4×1 분), MeOH (5×1 분)로 세척하고 진공하에 건조시켰다.
실시예 5. 실시예 2에서 얻은 펩티딜 수지 상에 R 1 페룰산을 도입하는 공정
DMF (1 ㎖)에 전-용해된 10 당량의 페룰산을 10 당량의 HOBt 및 10 당량의 DIPCDI의 존재하에, 실시예 2에서 얻은 1 mmol (1 당량)의 펩티틸 수지에 혼입시켰다. 이들을 약 3-4 시간 동안 반응시킨 후, 수지를 DMF (5×1 분), DCM (4×1 분), MeOH (5×1 분)로 세척하고 진공하에 건조시켰다.
실시예 6. 실시예 2, 3, 4 및 5에 따라 수득된 펩티딜 수지의 중합성 지지체로부터의 절단 공정
중량을 표준화하였다. 실시예 2, 3, 4 또는 5 중 어느 하나에서 얻은 200 ㎎의 건조된 펩티딜 수지를 5 ㎖의 TFA/TIS/H2O (90:5:5)로 2 시간 동안 상온에서 교반하에 처리하였다. 여과액을 수집하고 50 ㎖ (8 내지 10 배)의 차가운 디에틸 에테르를 사용하여 침전시켰다. 에테르성 용액을 감압 및 상온에서 증발 건조시키고, 침전물을 H2O 중 50% MeCN에 재용해시키고 동결건조시켰다.
실시예 7. 실시예 6에 따라 합성되고 제조된 펩타이드의 특성
실시예 5에 따라 수득된 펩타이드의 HPLC 분석은 H2O (+0.045% TFA) 중 MeCN (+0.036% TFA)의 구배에서 1.25 ㎖/분의 유속으로 역상 컬럼 (150×4.6 ㎜, XBridge Peptide BEH C18, 3.5 ㎛, Waters, USA)을 사용하여 Shimadzu사 장비 (Kyoto, Japan)로 수행하였고 검출은 220 ㎚에서 수행하였다. 모든 펩타이드는 80%를 초과한 순도를 나타내었다. 수득된 펩타이드의 유사성은 이동상으로서 MeOH 및 0.2 ㎖/분의 유속을 사용하여 Water ZQ 4000 검출기에서 전기 분무 이온화 질량 분석법 (ESI-MS)으로 확인되었다.
실시예 8. Ac-서열번호 1-NH 2 를 함유한 안면용 화장품 조성물의 제조
하기 표 1에 따른 안면용 화장품 조성물을 제조하였다. 이를 위해, 상(phase) A로부터의 성분을 적합한 용기에 용해시키고 혼합물을 70-75℃로 가열하였다. 다른 용기에서 상 B의 성분을 함께 혼합하고 혼합물을 70-75℃로 가열하였다. 다음으로, 상 C (TEGOLON 12-10 (INCI: 나일론-12))를 완전히 용해될 때까지, 교반하에 상 B에 천천히 첨가하였다. 혼합물을 70-75℃로 가열하였다. 그 다음, 상 A의 용액을 터빈 교반하에 상 B 및 C의 혼합물에 첨가하여 에멀젼을 형성하였다. 다음으로, 균질한 에멀젼이 수득될 때까지 교반을 유지하면서, 상 D를 혼합물에 천천히 첨가하였다. 마지막으로, 약 30℃에서 혼합물과 함께, 화합물 Ac-서열번호 1-NH2 (INCI: 물 (수분), 글리세린, 카프릴릴 글리콜, Ac-서열번호 1-NH2)를 함유한 상업용 제제를 교반을 유지하면서 천천히 첨가하였다.
표 1. 실시예 8의 안면용 화장품 조성물의 세부사항.
Figure 112019078239261-pct00002
실시예 9. 트롤록스 당량의 항산화능 (이하, TEAC)
실시예 1 내지 6에 따라 합성된 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2, Ac-서열번호 2-NH2, Ac-서열번호 3-NH2 및 페룰산-서열번호 2-NH2는, 이 실시예에서 사용되었다.
TEAC 분석법은 이 경우에 사용되었다. 상기 분석법은 비타민 E의 유사체인 표준, 트롤록스와 비교하여 주어진 물질의 항산화능을 측정한다.
항산화능은 ABTS 탈색 분석법을 사용하여 측정되었다. 이 분석법에서, 2,2'-아지노비스-(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산) (ABTS*+)의 전-형성된 라디칼 1가 양이온은 과황산칼륨으로 ABTS의 산화에 의해 생성되었으며 항산화제의 존재하에 감소되었다 (Ac-서열번호 1-NH2, Ac-서열번호 2-NH2, Ac-서열번호 3-NH2 또는 페룰산-서열번호 2-NH2). ABTS
Figure 112019078239261-pct00003
+는 650, 734 및 820 ㎚에서 최대 흡수를 갖는 청록색을 띤다. 샘플의 항산화물질은 ABTS
Figure 112019078239261-pct00004
+를 감소시켜 이 색의 생성을 그들의 농도 및 항산화능에 비례하는 정도로 억제한다. 흡광도의 정량화는 폴라스타 오메가(POLARstar Omega) 장비 (BMG Labtech)를 사용하여 734 ㎚에서 수행하였다.
이 실험에 대해 얻은 결과는 도 1에 요약하여 나타내었다. 간략하게, Ac-서열번호 1-NH2의 경우 하기 값의 트롤록스 당량이 수득되었다: 0.01 ㎎/㎖에서 15 μM, 0.05 ㎎/㎖에서 24 μM 및 0.1㎎/㎖에서 94 μM; Ac-서열번호 2-NH2의 경우 하기 값의 트롤록스 당량이 수득되었다: 0.05 ㎎/㎖에서 22 μM, 0.1㎎/㎖에서 49 μM 및 0.5 ㎎/㎖에서 130 μM; Ac-서열번호 3-NH2의 경우 하기 값의 트롤록스 당량이 수득되었다: 0.01 ㎎/㎖에서 28 μM, 0.05 ㎎/㎖에서 59 μM 및 0.1㎎/㎖에서 74 μM; 및 페룰산-서열번호 2-NH2의 경우 하기 값의 트롤록스 당량이 수득되었다: 0.01 ㎎/㎖에서 59 μM, 0.05 ㎎/㎖에서 112 μM 및 0.1㎎/㎖에서 113 μM. 결과는 또한 ≥0.05 ㎎/㎖의 농도에서 페룰산-서열번호 2-NH2의 항산화력이 AA-2G의 항산화력 보다 더 높고, 이 동일 농도에서 트롤록스 당량의 MAP 값과 동일함을 나타내었다. 또한, 시험된 더 높은 농도의 Ac-서열번호 2-NH2 가 AA-2G 및 MAP 보다 더 높은 항산화력을 나타내었다.
상기 도에 나타낸 결과로부터 도출된 바와 같이, 시험된 4종 펩타이드는 각각 Ac-서열번호 1-NH2, Ac-서열번호 2-NH2, Ac-서열번호 3-NH2 및 페룰산-서열번호 2-NH2의 경우 시험된 더 높은 농도에서 94, 130, 74 및 113 μM의 트롤록스에 도달하는 중요한 항산화력을 나타내었다. 당업계의 기술적 수준에서 레스베라트롤과 같은 다른 항산화제는, 0.02 ㎎/㎖에서 29 μM의 트롤록스 항산화능을 나타내며, 이는 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2, Ac-서열번호 2-NH2, Ac-서열번호 3-NH2 및 페룰산-서열번호 2-NH2과 비교할 때 현저하게 낮은 항산화능이다.
실시예 10. 항산화 활성의 평가
펩타이드 페룰산-서열번호 2-NH2의 항산화 활성은 튜브 내 (in tubo)에서 소거 분석법으로 평가되었다.
안정한 DPPH 자유 라디칼을 소거하는 능력은 항산화 활성의 척도로서 표현될 수 있다.
이 분석 동안, 자주색 색소원 (DPPH) 라디칼은 항산화제/환원 화합물에 의해 상응하는 담황색 히드라진으로 환원되었다. 수소-공여 항산화제에 의한 자주색 색소원 라디칼의 환원은 장파장 (515-520 ㎚)에서의 광학 밀도의 감소에 의해 모니터되었다.
간략하게, 여러 농도의 페룰산-서열번호 2-NH2 (주로, 0.01 ㎎/㎖, 0.05 ㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖ 및 0.5 ㎎/㎖)은 3번 반복으로 300 μM의 DPPH (MeOH 중)와 함께 인큐베이션하였다. 또한 아스코르브산을 30μM 및 60μM로 소거 활성 평가에 대한 양성 대조군으로서 분석에 포함하였다. 조심스럽게 흔들면서, 상온에서 30분간 인큐베이션한 후, 마이크로플레이트 리더인 Multiskan FC (Thermo Fisher Scientific, MA, USA)를 사용하여 520 ㎚에서 각 웰의 흡광도를 측정하였으며, 이는 반응 혼합물에 남아있는 (비-소거된) DPPH의 양에 직접 비례한다. 흡광도 값은 100%로 설정한 대조군 (미처리된 웰)을 기준으로, 각각의 처리에 대해 얻어진 상응하는 활성 퍼센티지를 표준화하였다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 페룰산-서열번호 2-NH2는 시험된 더 높은 농도 (0.05 ㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖ 및 0.5 ㎎/㎖)에서 용량-반응에 따라 각각 48.3%, 72.9% 및 90.6%의 DPPH의 환원으로 현저한 항산화 활성을 나타낸다. 0.05㎎/㎖ 및 0.1㎎/㎖의 화합물의 항산화 활성은 각각 30μM (31.3%) 및 60 μM (67.6%)의 아스코르브산의 항산화 활성과 필적한다.
실시예 11. 티오바비투르산 반응성 물질 (이하, TBARS) 분석법
실시예 1-3 및 6에 따라 합성된, 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2 및 Ac-서열번호 2-NH2은 또한 이 실시예에서 사용되었다.
TBARS는 자연적으로 생물학적 샘플에 존재하며 산화 스트레스의 결과로서 증가한다. 이 분석은 다가불포화 지방산 지질 과산화물의 분해에서 기인한 화합물인 MDA의 검출을 통해 지질 과산화 수준을 측정하며, 이는 세포 및 조직의 산화 스트레스의 지표이다.
난황으로부터 소형 단일 라멜라 소포체(이하, SUV)를 준비하고, 분석된 화합물 (펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2 또는 Ac-서열번호 2-NH2 및 상응하는 대조군)과 함께 인큐베이션하였다. 이후, SUV의 산화는 다른 분자를 산화시킬 수 있는 자유 라디칼인 2,2'-아조비스(2-아미디노프로판) 디하이드로클로라이드 (이하, AAPH)의 첨가에 의해 유도되었다. 그 다음, 항산화 특성을 지닌 친유성 유기 화합물인 부틸레이티드 하이드록시톨루엔 (이하, BHT)로 산화 반응을 중단시켰다. 최종적으로, 티오바비투르산 (이하, TBA)은 530 ㎚에서 형광으로 MDA의 검출 및 정량화를 위해 첨가되었다. 형광 정량화는 Cytation 3 (Biotek)에 의해 수행되었다.
이 분석법에서 얻은 결과는 도 3에 요약하여 나타내었다.
두 펩타이드의 경우, 통계적으로 유의한 지질 과산화의 억제가 시험된 모든 농도에서 관찰되었다.
실시예 12. 시험관내 ( in vitro )에서 과산화수소 (H 2 O 2 )에 의해 유도된 산화 스트레스에 대한 보호 효능의 평가
실시예 1-3 및 6에 따라 합성된, Ac-서열번호 1-NH2 및 Ac-서열번호 2-NH2은 이어서, 과산화수소에 의해 유도된 산화 스트레스에 대해 보호하기 위한 그들의 능력을 시험하였다.
일차 인간 표피 각질형성세포를 검정 96-웰 플레이트의 해당 배양 배지 속에 시딩(seeding)하고, 48시간 후에 분석된 여러 화합물 (Ac-서열번호 1-NH2 또는 Ac-서열번호 2-NH2) 또는 항산화 대조군으로 아스코르브산을 37℃에서 3시간 동안 처리하였다. 인큐베이션 후, 세포를 형광 프로브로 45분 동안 로딩(loading)한 다음, H2O2를 30분 동안 첨가하였다.
마지막으로, 여기 485 ㎚/방출 520 ㎚에서 형광을 측정하였다.
얻은 결과는 도 4에 요약하여 나타내었다.
이 도로부터 직접 파생될 수 있는 바와 같이, 두 펩타이드는 과산화수소에 의해 발휘되는 산화 활성의 억제를 나타내며, 상기 언급한 펩타이드들 중 임의의 하나로 처리될 시 샘플에서 검출된 활성산소종의 감소에 의해 실현된다. 주목할 만한 것은 Ac-서열번호 1-NH2가 Ac-서열번호 2-NH2와 비교할 때 시험된 모든 농도에서 증가된 활성을 나타내었다는 사실이다.
실시예 13. 시험관내에서 중금속에 의해 유도된 당화에 대한 보호 효능의 평가 (최종 당화 산물 조절)
실시예 1-3 및 6에 따라 합성된, 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2는 또한 중금속에 의해 유도된 당화에 대해 보호하기 위한 그것의 능력을 시험하였다.
일차 인간 표피 각질형성세포를 96-웰 플레이트의 표준 배양 배지 속에 시딩하고, 24시간 후에 (Fe, Pb 및 Cr의 혼합물을 함유한) 중금속 및 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2을 48시간 동안 동시에 처리하였다. 최종 당화 산물(AGE)의 수준은 450 ㎚의 흡광도로 경쟁적 ELISA 분석법에 의해 측정되었다.
이 분석법에서 얻은 결과는 도 5에 요약하였다.
도 5에서 알 수 있는 바와 같이, 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2의 시험된 모든 농도는 최종 당화 산물의 양에 있어서 통계적으로 유의한 감소를 가져 왔으며, 기저 상태에서 관찰된 것과 비슷한 수준으로 감소시킨다 (중금속으로 처리되지 않은 대조군 샘플 또는 중금속으로 처리 적용 전에 처리된 샘플의 양 또는 수준).
실시예 14. 시험관내에서 합성 연기에 의해 유도된 DNA 산화 및 지질산화에 대한 보호 효능의 평가 (8-히드록시-2'-데옥시구아노신(8-OHdG) 조절)
실시예 1-3 및 6에 따라 합성된, 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2의 항산화 활성은 또한 합성 연기로 샘플을 처리하여 분석하였다.
일차 인간 표피 각질형성세포를 96-웰 플레이트의 표준 배양 배지 속에 시딩하고, 24시간 후에, 입자 상 (예를 들어, 카드뮴 및 니코틴) 및 담배 연기의 증기 상 (예를 들어, 포름알데하이드 (이하, FA) 및 에틸 카바메이트)으로부터 선택된 화합물 및 분석된 화합물 (Ac-서열번호 1-NH2)을 함유한 합성 연기로 48시간 동안 동시에 처리하였다.
처리 후, 세포를 용해시키고 세포 균질물에 대한 DNA 산화는 450 ㎚의 흡광도로 경쟁적 ELISA 분석법에 의해 8-OHdG 수준을 측정하여 분석하였다.
또한, 처리 후, 지질산화는 세포 내 MDA의 수준에 의해 분석되었으며, 이는 586 ㎚에서 흡수 피크를 갖는 안정한 청색 발색단을 제공하는 MDA 및 N-메틸-2-페닐인돌 (이하, NMPI) 간의 반응에 의해 측정되었다.
이 분석법의 결과는 도 6 및 도 7에 나타내었다.
두 개의 도 모두로부터, Ac-서열번호 1-NH2가 DNA 산화 및 지질산화에 대해 세포를 보호할 수 있음이 파생될 수 있다. 실제, 이러한 두 매개변수에 대해, 거동은 유사하였다: 시험된 낮은 농도는 상기 매개변수에 대해 (통계적으로 유의하지 않은) 약간의 감소를 나타낸 반면, 시험된 다른 두가지 농도는 통계학적으로 유의한 더 높은 효과를 나타내었으며, 0.1 ㎎/㎖로 처리된 샘플에서 관찰된 DNA 산화 수준이 기저 상태에서 (이는, 미처리된 대조군 샘플에서) 관찰된 수준에 근접하므로 DNA 산화의 보호의 경우에는 합성 연기에 대한 거의 완전한 억제 효과를 야기한다.
실시예 15. 항산화 유전자의 발현 조절
시험관내에서 Ac-서열번호 1-NH2에 의한 유전자 발현의 조절은 HEKa 세포에서 평가되었다.
간략하게, HEKa 세포를 4 × 105 세포/웰의 밀도로 6-웰 플레이트에 2번 반복으로 시딩하였으며, 표준 배양 조건 (37℃, 95% 습도, 5% CO2)에서 24시간 동안 유지하였다. 이후, 세포를 Ac-서열번호 1-NH2 (0.05 ㎎/㎖)의 비-세포독성 농도로 추가 24시간 동안 처리하였다.
미처리 세포를 기저 대조군으로서 사용하였다. 이후, 세포를 제조사 지침에 따라 RNA 정제 상업용 키트 (RNeasy mini kit; Qiagen; Netherlands)로 RNA 추출을 위해 용해시켰다. 그 다음에, RNA를 나노드롭으로 정량화하여 농도를 조정하고, 상업적으로 이용가능한 키트 (High-Capacity cDNA Reverse Transcription kit; Thermofisher Scientific, USA)를 사용하여 cDNA로 역전사를 진행하였다. 생성된 cDNA는 Taqman 기술과 멜라닌 생성 및 HEMn-HEKa 및 HEMn-HDFa 소통과 관련된 특정 유전자를 타겟으로 설계된 프로브 패널을 사용하여 RTqPCR (실시간 정량적 중합효소연쇄반응)을 수행하는 데 사용되었다.
이 실시예의 결과는 도 8에 요약하여 나타내었다.
상기 도는 0.05 ㎎/㎖의 Ac-서열번호 1-NH2를 포함한 처리는 하기에 따르는 배수 변화로 주요 항산화 유전자의 상향조절이 유도됨을 보여준다: CYP2R1 (1.44), NFE2L2 (1.23), HMOX1 (1.48), GSTP1 (1.13), GSS (1.10), GPX1 (1.22) 및 TRX (1.34). 따라서, 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2는 실시예 9에서 알 수 있는 바와 같이 높은 고유한 항산화 활성을 나타낼 뿐만 아니라, 주요 항산화 유전자, 예컨대 NFE2L2 및 HMOX-1의 발현 증가를 통해, 중금속 및 담배 연기와 같은 많은 스트레스 요인에 대한 여러 생물학적 구조, 예컨대 단백질, 지질 및 DNA를 보호할 수 있다.
실시예 16. 인간 피부 외식편에 대한 Ac-서열번호 1-NH 2 의 항산화 및 오염 방지 능력
인간 생(living) 외식편 상에서 오염 공격성에 대해 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2의 보호 효능을 일반적인 형태의 관찰, AhR 및 HO-1 (둘다는 산화 스트레스의 공지된 마커로, 이들은 항산화 반응과 관련되어 있기 때문임)의 면역염색으로 평가하였다 (Esser C., Bargen I., Weighardt H., Haarmann-Stemmann T., Krutmann J., Functions of the aryl hydrocarbon receptor in the skin, Semin Immunopathol (2013) 35:677-691; Kohen R., Nyska A., Oxidation of Biological Systems: Oxidative Stress Phenomena, Antioxidants, Redox Reactions, and Methods for Their Quantification, Toxicologic Pathology (2002) vol 30, no 6, 620-650).
간략하게, 49세의 백인 여성으로부터의 인간 피부 외식편은 통제된 조건하에 배양되었다. 평균 직경 11 ㎜ (±1 ㎜)의 21개의 피부 외식편을 준비하고 습윤한 37℃, 5% CO2 분위기에서 BEM 배양 배지로 생존을 유지시켰다. 외식편은 5개의 집단으로 배분하였다: 외식편 대조군 (시간=0), 대조군 집단, 상기 언급된 펩타이드로 처리된 외식편, 오염 물질로 처리된 외식편 및 오염 물질로 처리되고 상기 언급된 펩타이드로 처리된 외식편. 실시예 8에 따른 Ac-서열번호 1-NH2를 함유하는 조성물을 제조하고 이를 0, 1, 3 및 4일에 국소적으로 적용하였다. 미처리된 외식편을 대조군으로 사용하였으며 어떠한 처리도 하지 않았다. 각 조건에 대해, 외식편의 반은 나중에 벤젠, 자일렌, 톨루엔, 중금속 및 탄화수소를 함유한 오염 물질 혼합물에 노출시켰다. 외식편 노출은 Ac-서열번호 1-NH2로 처리 후 Pollubox® 시스템 (BIO-EC, Longjumeau, France)을 사용하여 3시간째 수행하였으며, 1.5시간 동안 지속하였다. 샘플은 0일 및 5일째에 조직학용으로 처리하였다. 일반적인 형태의 관찰은 메이슨 트리크롬(Masson's trichrome), 골드너 변종 (Goldner variant)에 따른 파라핀화된 절편의 염색 후에 수행되었다. AhR 면역염색은 단클론 항-AhR 항체 (Thermoscientific, ref. MA1-514, clone RPT1, MA, USA)로, 그리고 HO-1는 단클론 항-HO-1 항체 (Novus biologicals, ref. NBP1-97507, CO, USA)로 파라핀 절편에 대해 수행하였다. 마지막으로, Cell^D 소프트웨어 (Olympus, Tokyo, Japan)를 사용하여 이미지 분석 및 정량화를 수행하였다.
이 실험의 결과는 그림 9에 요약하여 나타내었으며, 여기서 상기 펩타이드를 제형으로 처리한, 인간 피부 외식편에 대한 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2의 항산화 효능 (AhR 및 HO-1의 양)을 관찰할 수 있다.
도 9(C)에서 알 수 있는 바와 같이, Ac-서열번호 1-NH2의 항산화 효과가 확인되었는데, 이는 산화적 손상 및 산화 스트레스의 예방을 위한 HO-1의 발현을 증가시키는 효능으로부터 직접 유도할 수 있기 때문이다. 최종 제형의 펩타이드를 이용하여 (오염 물질에 대한 노출 없이) 피부 외식편을 처리한 후, HO-1의 수준을 미처리 및 미노출된 외식편과 비교했을 때 69%까지 유의하게 증가하였다 (도 9C).
도 9 (A) 및 도 9 (B)에서 관찰된 바와 같이, Ac-서열번호 1-NH2는 외식편이 필요로 하는 항산화 반응 환원에 의해 오염 방지 및 항산화 활성을 나타내었는데, 이는 오염 물질을 포함하고 펩타이드의 처리 없이 발현된 수준과 비교하여, AhR (16%) 및 HO-1 (23%)의 관찰된 감소에 의해 각각 쉽게 확인될 수 있다. 이는 본 발명의 펩타이드 (이 경우에 Ac-서열번호 1-NH2)를 이용한 전처리가 임의의 미래 또는 차후의 산화적 손상에 대한 외식편을 준비하여 항산화 반응을 이미 유도할 것이기 때문에, 따라서, 상기 산화적 손상이 도달하거나 수행 (본 경우에, 오염 물질에 대한 세포의 노출) 될 때, 세포는 보다 적은 항산화 반응을 필요로 하며, 이미 준비된 항산화 메카니즘은 상기 산화적 손상에 대해 사용되거나 또는 소모된다 (예를 들어, 도 9(C) 참조).
따라서, 본 발명의 펩타이드는 산화 스트레스 및 그 결과의 예방에 효과적이다.
유전자 수준 및 피부 외식편에서 모두 검출되는 (스마트 데이터 유전자 패널에서도 검출되는), 특별한 관심대상인 효소 HO-1 또는 HMOX-1는 항산화 스위치로 알려진 NFE2L2를 통해 활성화된 효소인 것으로 알려져 있으며, 이는 그 자체가 항산화반응인자 (ARE)에 결합하는 전사 인자이며, 강력한 항산화 효소를 암호화하는 수많은 유전자의 전사를 개시하는 DNA 서열 인핸서이다 (Nguyen, T., Nioi, P., 및 Pickett, C.B., The Nrf2-Antioxidant Response Element Signaling Pathway and Its Activation by Oxidative Stress, J. Biol. Chem., 284 (2009) 13291-13295). 인간의 피부 외식편에서 관찰된 바와 같이, Ac-서열번호 1-NH2는 또한 오염 물질 노출 후 유도된, AhR의 증가된 발현의 조절자로서 작용하며, 따라서, AhR 활성화 및 이후의 과색소침착과 관련된 산화적 손상을 예방하고, 멜라닌 합성의 억제를 통해 시험관내에서도 관찰된다.
실시예 9 내지 16에 나타낸 결과는, Ac-서열번호 1-NH2, Ac-서열번호 2-NH2, Ac-서열번호 3-NH2 및 페룰산-서열번호 2-NH2에 의해 예시된 바와 같이, 본 발명의 펩타이드는 강력한 항산화 활성을 가질 뿐만 아니라 상기 활성이 광범위함을 입증한다. 이는, 시험된 모든 산화 조건 및 시험된 모든 매개변수에 대해 펩타이드가 유의하고 중요한 활성을 나타내었다.
따라서, 이러한 실험 결과는 산화 및 산화 스트레스와 관련된 피부 결점, 예를 들어, 피부 안색, 색소침착 변형 또는 기타 연령 관련 또는 환경 관련 피부 결점을 예방, 감소 및/또는 제거하기 위한 화장품 조성물 또는 방법에 사용되는 이러한 펩타이드의 가능성을 입증한다. 이는 분석된 활성이 산화 스트레스와 직접적으로 관련되기 때문이다 (Gkogkolou P, Bohm M, Advanced glycation end products Key players in skin aging?, Dermatoendocrinol., 2012 Jul 1; 4(3): 259-270; Sciskalska M, Zalewska M, Grzelak A, 및 Milnerowicz H, The Influence of the Occupational Exposure to Heavy Metals and Tobacco Smoke on the Selected Oxidative Stress Markers in Smelters, Biol Trace Elem Res., 2014; 159(1-3): 59-68; Tchounwou PB, Yedjou CG, Patlolla AK, 및 Sutton DJ, Heavy Metals Toxicity and the Environment, EXS., 2012; 101: 133-164; Aflanie I, Effect of Heavy Metal on Malondialdehyde and Advanced Oxidation Protein Produtcs Concentration: A Focus on Arsenic, Cadmium, and Mercury, Journal of Medical and Bioengineering Vol. 4, No. 4, August 2015; van der Vaart H, Postma DS, Timens W, ten Hacken NH, Acute effects of cigarette smoke on inflammation and oxidative stress: a review, Thorax., 2004 Aug;59(8):713-21; 및 Danielsen PH1, Møller P, Jensen KA, Sharma AK, Wallin H, Bossi R, Autrup H, Mølhave L, Ravanat JL, Briede JJ, de Kok TM, Loft S, Oxidative stress, DNA damage, and inflammation induced by ambient air and wood smoke particulate matter in human A549 and THP-1 cell lines, Chem Res Toxicol., 2011 Feb 18;24(2):168-84).
실시예 17. 브라이트닝 활성 연구
실시예 1 내지 6에 따라 합성된 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2, Ac-서열번호 2-NH2, Ac-서열번호 3-NH2 및 페룰산-서열번호 2-NH2를 이 실시예에서 사용하였다.
일차 인간 표피 멜라닌세포를 6-웰 플레이트에서 4일 동안 배양한 후 분석하기 위한 화합물 (Ac-서열번호 1-NH2, Ac-서열번호 2-NH2, Ac-서열번호 3-NH2 또는 페룰산-서열번호 2-NH2)을 7일 동안 처리하였다. 처리 후, 세포를 균질화시키고, 세포 내 멜라닌 함량은 Multiskan FC (Thermo Fisher Scientific, MA, USA)에 의해 450 ㎚의 흡광도로 정량화되었다.
이 실시예에서 얻은 결과는 도 10 내지 13에 요약하여 나타내었다.
도 10 및 도 11에 나타낸 결과로부터 쉽게 파생될 수 있는 바와 같이, 시험된 모든 농도의 펩타이드 Ac-서열번호 1-NH2 및 Ac-서열번호 2-NH2 둘다는 이 활성을 위한 참조 화합물인 코직산과 비교했을 때 현저하게 높은 브라이트닝 또는 미백 활성을 갖는다. 이 증가된 활성 범위는 코직산의 두가지 농도에 대해 보인 활성의 2배에서 4배 이상에 이른다. 또한, 저농도에서 조차도, 본 발명의 펩타이드는 코직산에 대하여 두드러지게 증가된 브라이트닝 활성을 발휘한다는 것이 주목할 만하다 (50μM의 코직산과 비교했을 때 Ac-서열번호 1-NH2 -17.7 μM- 및 Ac-서열번호 2-NH2 -15.2 μM-에 사용된 낮은 농도 참조).
도 12 및 도 13에서 관찰된 바와 같이, 펩타이드 Ac-서열번호 3-NH2 및 페룰산-서열번호 2-NH2는 또한 멜라닌 함량의 현저한 감소를 보이며, 이는 Ac-서열번호 3-NH2의 경우에는 양성 참조 대조군 (코직산으로 처리)보다 더 높지만 (0.1 ㎎/㎖에서 49.3%까지), 페룰산-서열번호 2-NH2의 경우에는 필적할 만하다 (0.05 ㎎/㎖에서 36% 감소).
실시예 18. 티로시나아제 활성의 평가
티로시나아제 활성을 억제하기 위한 펩타이드 Ac-서열번호 3-NH2 및 페룰산-서열번호 2-NH2의 잠재력을 튜브 내에서 평가하였다.
간략하게, L-DOPA (PBS 중 L-3,4 디하이드록시페닐알라닌, 2.5 ㎎/㎖)의 첨가 전에 여러 농도의 Ac-서열번호 3-NH2 및 페룰산-서열번호 2-NH2 (0.1, 0.5 및 1 ㎎/㎖)와 양성 대조군 코직산 (400 및 800 μM)을 30분 동안 재조합 버섯 티로시나아제와 함께 인큐베이션하였다. 상온에서 2시간 반응 후, 마이크로플레이트 리더인 Multiskan FC (Thermo Fisher Scientific, MA, USA)를 사용하여 450 ㎚에서 각 웰의 흡광도를 측정하였으며, 이는 반응 혼합물 중의 도파크롬의 양에 직접 비례한다.
흡광도 값은 100%로 설정한 미처리된 웰 (대조군)과 관련하여, 시험된 각각의 조건에 대해 이후 얻어진 활성 퍼센티지를 표준화하였다.
결과는 도 14 및 도 15에 요약하여 나타내었다.
도 14에서 결과는 0.5 ㎎/㎖ (30.6%) 및 1 ㎎/㎖ (58.1%)의 Ac-서열번호 3-NH2 처리 후, 800 μM의 코직산의 것과 근접한 퍼센티지에 도달하는 티로시나아제 활성의 현저한 감소를 보여준다. 유사하게, 페룰산-서열번호 2-NH2는 0.05㎎/㎖, 0.1 ㎎/㎖ 및 0.5 ㎎/㎖에서 각각 12%, 46.5% 및 71%의 감소로, 티로시나아제 활성에 있어서 용량-반응 감소를 유도하였다 (도 15 참조).
실시예 19. 멜라닌 생성 경로의 유전자 발현 조절
시험관내에서 Ac-서열번호 3-NH2 및 페룰산-서열번호 2-NH2 펩타이드에 의한 유전자 발현의 조절은 두가지 다른 세포 유형 (HEMn 및 HEKa)에서 평가되었다.
간략하게, HEKa 세포를 4 × 105 세포/웰의 밀도로 6-웰 플레이트에 2번 반복으로 시딩하였으며, 표준 배양 조건 (37℃, 95% 습도, 5% CO2)에서 24시간 동안 유지하였다. 이후, 세포를 Ac-서열번호 3-NH2 (0.1 ㎎/㎖) 또는 페룰산-서열번호 2-NH2 (0.05 ㎎/㎖)의 비-세포독성 농도로 추가 24시간 동안 처리하였다.
HEMn 세포의 경우에, 세포를 표준 배양 조건 (37℃, 95% 습도, 5% CO2)에서 12일 (0일째부터 11일째까지, 11-일간 처리) 동안 배양하였으며, 4일째부터 11일째까지 Ac-서열번호 3-NH2 (0.1 ㎎/㎖) 또는 페룰산-서열번호 2-NH2 (0.05 ㎎/㎖)의 비-세포독성 농도로 처리하였다.
또한, HEMn 세포는 표준 배양 조건 (37℃, 95% 습도, 5% CO2)에서 24시간 동안 배양하였으며, Ac-서열번호 3-NH2 (0.1 ㎎/㎖)의 비-세포독성 농도로 추가 24시간 동안 처리하였다.
미처리 세포를 기저 대조군으로서 사용하였다. 이후, 세포를 제조사 지침에 따라 RNA 정제 상업용 키트 (RNeasy mini kit; Qiagen; Netherlands)로 RNA 추출을 위해 용해시켰다. 그 다음에, RNA를 나노드롭으로 정량화하여 농도를 조정하고, 상업적으로 이용가능한 키트 (High-Capacity cDNA Reverse Transcription kit; Thermofisher Scientific, USA)를 사용하여 cDNA로 역전사를 진행하였다. 생성된 cDNA는 Taqman 기술과 멜라닌 생성 및 HEMn-HEKa 및 HEMn-HDFa 소통과 관련된 특정 유전자를 타겟으로 설계된 프로브 패널을 사용하여 RTqPCR (실시간 정량적 중합효소연쇄반응)을 수행하는 데 사용되었다.
이 실시예의 결과는 도 16 내지 19에 요약하여 나타내었다 (HEMn의 조절을 위한 도 16 및 도 17과, HEKa의 조절을 위한 도 18 및 도 19).
상기 도 16은 0.1 ㎎/㎖의 Ac-서열번호 3-NH2 (도 16)의 처리가 다음의 배수 변화와 함께, 멜라닌 생성 경로와 관련된 여러 유전자의 하향조절을 처리 11일에 유도함을 보여준다: COX-1 (-1.51), MITF (-1.48), MC1R (-1.28), MLAN-A (-1.88), C-KIT (-1.78), PMEL17 (-2.30), DCT-TYRP2 (-1.40), TYRP-1 (-1.64) 및 TYR (-1.66). 처리를 24시간에 수행하였을 때, 유전자 발현을 하향조절하는 경향 또한 관찰되었다.
페룰산-서열번호 2-NH2 (도 17)의 경우, VDR 유전자의 상향조절 (1.48의 배수 변화) 및 PMEL17 및 DCT-TYRP2 발현을 하향조절하는 약간의 경향이 관찰되었다.
도 18 및 도 19는 HEMn-HEKa 소통 및 멜라닌 생성 인자의 방출과 관련된 유전자의 조절을 보여준다. HEKa 세포에 대해 0.1 ㎎/㎖의 Ac-서열번호 3-NH2의 24시간 처리는 KITLG, TP53 및 NGF의 하향조절 및 DKK-1의 상향조절을 유도하였다 (도 18). 낮은 농도의 페룰산-서열번호 2-NH2 (0.05 ㎎/㎖)는 KITLG, POMC, EDN1 및 NGF의 하향조절을 유도하였다 (도 19).
상기 결과는 Ac-서열번호 1-NH2, Ac-서열번호 2-NH2, Ac-서열번호 3-NH2 및 페룰산-서열번호 2-NH2에 의해 예시된 바와 같이, 피부를 미백하거나 밝게하기 위한 화장품 조성물 또는 방법에 사용되는 본 발명의 펩타이드의 가능성을 입증한다.
SEQUENCE LISTING <110> Lipotrue S.L. <120> Peptides and compositions for use in cosmetics <130> 2018/105221 <150> EP 17382092.9 <151> 2017-02-24 <160> 4 <170> BiSSAP 1.3.6 <210> 1 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificially synthesized peptide <400> 1 Asp Tyr Lys Val 1 <210> 2 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Atificially synthesized peptide <400> 2 His Trp Phe Lys 1 <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificially synthesized peptide <400> 3 Leu His Trp Phe Arg Ala 1 5 <210> 4 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificially synthesized peptide <400> 4 Thr Phe Phe Lys 1

Claims (16)

  1. 하기 화학식 (I)의 펩타이드로서:
    R1-Xm-AA1-AA2-AA3-AA4-Yn-R2
    (I)
    이들의 화장품학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 이의 혼합물, 여기서 상기 화학식 (I)의 펩타이드는:
    Ac-Asp-Tyr-Lys-Val-NH2 (Ac-서열번호 1-NH2);
    Ac-His-Trp-Phe-Lys-NH2 (Ac-서열번호 2-NH2);
    페룰산-His-Trp-Phe-Lys-NH2 (페룰산-서열번호 2-NH2); 또는
    Ac-Leu-His-Trp-Phe-Arg-Ala-NH2 (Ac-서열번호 3-NH2)인 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  2. 제1항에 있어서, 화학식 (I)의 펩타이드는:
    Ac-Asp-Tyr-Lys-Val-NH2 (Ac-서열번호 1-NH2); 또는
    Ac-His-Trp-Phe-Lys-NH2 (Ac-서열번호 2-NH2)인 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  3. 제1항에 따른 펩타이드를 포함하는 화장품 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 0.1%-0.0001% (m/v)의 펩타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 화장품 조성물.
  5. 피부의 산화 스트레스를 예방, 감소 또는 제거 및/또는 개체의 피부를 밝게하는 것을 특징으로 하는, 제1항 또는 제2항에 따른 펩타이드.
  6. 피부의 산화 스트레스를 예방, 감소 또는 제거 및/또는 개체의 피부를 밝게하는 것을 특징으로 하는, 제3항에 따른 화장품 조성물.
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
KR1020197022461A 2017-02-24 2018-02-23 화장품에 사용하기 위한 펩타이드 및 조성물 Active KR102506219B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP17382092 2017-02-24
EP17382092.9 2017-02-24
PCT/EP2018/054587 WO2018154080A1 (en) 2017-02-24 2018-02-23 Peptides and compositions for use in cosmetics

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20190120749A KR20190120749A (ko) 2019-10-24
KR102506219B1 true KR102506219B1 (ko) 2023-03-07

Family

ID=58185473

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197022461A Active KR102506219B1 (ko) 2017-02-24 2018-02-23 화장품에 사용하기 위한 펩타이드 및 조성물

Country Status (7)

Country Link
US (1) US11246818B2 (ko)
EP (1) EP3585488A1 (ko)
JP (1) JP7191386B2 (ko)
KR (1) KR102506219B1 (ko)
CN (1) CN110234407B (ko)
AU (1) AU2018223975B2 (ko)
WO (1) WO2018154080A1 (ko)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3894425A1 (en) * 2019-03-28 2021-10-20 Lipotrue, S.L. Peptides and compositions for use in cosmetics
EP3831358B1 (en) * 2019-12-04 2025-03-12 Lipotrue, S.L. Peptides and compositions for use in cosmetics and medicine
CN113956326B (zh) * 2021-09-15 2024-05-28 河南工业大学 一种短肽单体，结构自愈型肽基水凝胶及其应用
CN114456234B (zh) * 2022-03-17 2023-06-30 中国石油大学(华东) 抗氧化脂肽及其制备方法和应用
CN114644705B (zh) * 2022-03-25 2023-11-17 云南民族大学 一种防护皮肤急性光损伤活性多肽及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110305735A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Lipotec, S.A. Skin antiaging treatment

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6942981B1 (en) * 1999-05-14 2005-09-13 Arbor Vita Corporation Method of determining interactions with PDZ-domain polypeptides
EP1553177A4 (en) * 2002-09-03 2008-08-20 Tanuma Sei Ichi METHOD FOR DEVELOPING A PHYSIOLOGICALLY ACTIVE PEPTIDE AND ITS APPLICATIONS
WO2004099784A2 (en) * 2003-05-06 2004-11-18 Anamar Medical Ab Method for determining a tissue degradation process by detection of fibromodulin neoepitopes
JP2008063285A (ja) * 2006-09-08 2008-03-21 Univ Nagoya 高親和性ペプチドの設計法及び調製法、並びに高親和性ペプチド
FR2944018B1 (fr) * 2009-04-02 2012-03-09 Isp Investments Inc Nouveaux peptides anti-age activateurs du proteasome et compositions les contenant
US20120021029A1 (en) * 2009-04-17 2012-01-26 Lipotec, S.A. Peptides used in the treatment and/or care of the skin and/or hair and their use in cosmetic or pharmaceutical compositions
CA2761901C (en) * 2009-05-12 2019-08-13 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Methods of inhibiting the ghrelin/growth hormone secretatogue receptor pathway and uses thereof
WO2012087913A2 (en) * 2010-12-20 2012-06-28 The Regents Of The University Of Michigan Peptide reagents and methods for detection of colon dysplasia
DE102011003944A1 (de) * 2011-02-10 2012-08-16 Oxprotect Gmbh Detektion und Entfernung von missgefalteten Proteinen/Peptiden
EP2773366B1 (en) * 2011-11-04 2017-03-01 Lipotec, S.A. Peptides which inhibit activated receptors and their use in cosmetic or pharmaceutical compositions
EP2649983A1 (en) * 2012-04-13 2013-10-16 Lipotec, S.A. Compounds which inhibit neuronal exocytosis (II)
EP2740484A1 (en) * 2012-12-05 2014-06-11 Lipotec, S.A. Compounds useful in the treatment and/or care of the skin, hair and/or muccous membranes and their cosmetic or pharmaceutical compositions
EP2990027A1 (en) 2014-09-01 2016-03-02 Institut Curie Skin whitening peptide agents
KR101572606B1 (ko) 2014-11-24 2015-11-27 강원대학교산학협력단 Sfrp5 유래의 펩타이드 및 이를 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물
US11235066B2 (en) * 2015-12-02 2022-02-01 The Regents Of The University Of Michigan Micelles and methods

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110305735A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Lipotec, S.A. Skin antiaging treatment

Also Published As

Publication number Publication date
WO2018154080A1 (en) 2018-08-30
US11246818B2 (en) 2022-02-15
JP7191386B2 (ja) 2022-12-19
KR20190120749A (ko) 2019-10-24
WO2018154080A8 (en) 2019-10-31
CN110234407B (zh) 2022-07-29
AU2018223975A1 (en) 2019-06-13
AU2018223975B2 (en) 2023-07-27
US20190388325A1 (en) 2019-12-26
CN110234407A (zh) 2019-09-13
EP3585488A1 (en) 2020-01-01
JP2020508974A (ja) 2020-03-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102506219B1 (ko) 화장품에 사용하기 위한 펩타이드 및 조성물
AU2013354184C1 (en) Compounds useful in the treatment and/or care of the skin, hair and/or mucous membranes and their cosmetic or pharmaceutical compositions
EP3648784A1 (en) Compounds useful for the treatment and/or care of the skin, hair, nails and/or mucous membranes
US10987295B2 (en) Method of facilitating the bindings between keratinocytes
KR20110129516A (ko) 페놀릭산 유도체 및 이를 포함하는 화장품 조성물
JP2022550991A (ja) 皮膚及びその付属器の、ペプチドに基づいた化粧品又は皮膚科学的な処置
US20130336904A1 (en) Novel anti-ageing peptides modulating survivin and compositions including same
KR102281606B1 (ko) 펩타이드 복합체를 함유하는 주름 및 피부탄력 개선, 타이로시네이즈 억제 등 다기능성 화장료 조성물
AU2020247128B2 (en) Peptides and compositions for use in cosmetics
KR102038697B1 (ko) 피부 항산화 및 미백 효능을 갖는 피부용 화장료 조성물
HK40007766A (en) Peptides and compositions for use in cosmetics
HK40007766B (en) Peptides and compositions for use in cosmetics
EP3831358B1 (en) Peptides and compositions for use in cosmetics and medicine
WO2000064926A1 (fr) Inhibiteur hormonal stimulant les melanocytes
KR102561289B1 (ko) 미백용 펩타이드 및 이를 포함하는 경피 흡수가 개선된 화장료 조성물
US8530623B2 (en) Proteasome-activating lightening peptides and compositions containing same
HK40052617A (en) Peptides and compositions for use in cosmetics
CN113121644A (zh) 抗白发的多肽、方法及组合物
WO2010112713A2 (fr) Nouveaux peptides eclaircissants activateurs du proteasome et compositions les contenant

Legal Events

Date Code Title Description
PA0105 International application

Patent event date: 20190730

Patent event code: PA01051R01D

Comment text: International Patent Application

PG1501 Laying open of application
PA0201 Request for examination

Patent event code: PA02012R01D

Patent event date: 20210215

Comment text: Request for Examination of Application

E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20220913

Patent event code: PE09021S01D

AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
PE0601 Decision on rejection of patent

Patent event date: 20221125

Comment text: Decision to Refuse Application

Patent event code: PE06012S01D

Patent event date: 20220913

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event code: PE06011S01I

AMND Amendment
PX0701 Decision of registration after re-examination

Patent event date: 20230222

Comment text: Decision to Grant Registration

Patent event code: PX07013S01D

Patent event date: 20230127

Comment text: Amendment to Specification, etc.

Patent event code: PX07012R01I

Patent event date: 20221125

Comment text: Decision to Refuse Application

Patent event code: PX07011S01I

Patent event date: 20221108

Comment text: Amendment to Specification, etc.

Patent event code: PX07012R01I

X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant
PR0701 Registration of establishment

Comment text: Registration of Establishment

Patent event date: 20230228

Patent event code: PR07011E01D

PR1002 Payment of registration fee

Payment date: 20230302

End annual number: 3

Start annual number: 1

PG1601 Publication of registration