KR102281606B1

KR102281606B1 - 펩타이드 복합체를 함유하는 주름 및 피부탄력 개선, 타이로시네이즈 억제 등 다기능성 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102281606B1
Application number: KR1020210049622A
Authority: KR
Inventors: 김혜용; 최재춘
Original assignee: (주)바이오신펩; 주식회사 이우바이오
Priority date: 2021-04-16
Filing date: 2021-04-16
Publication date: 2021-07-26
Anticipated expiration: 2041-04-16

Abstract

본 발명은 다기능성 화장료 조성물에 관한 것으로, 테트라펩타이드-21(Tetrapeptide-21) 및 팔미토일 펜타펩타이드-4(Palmitoyl Pentapeptide-4)를 유효성분으로 포함한다.

Description

펩타이드 복합체를 함유하는 주름 및 피부탄력 개선, 타이로시네이즈 억제 등 다기능성 화장료 조성물{A MULTIFUNCTIONAL COSMETIC COMPOSITION FOR ELASTICITY, ANTI-WRINKLE, INHIBITING TYROSINASE COMPRISING PEPTIDE COMPLEX}

본 발명은 저분자 펩타이드 복합체를 유효성분으로 포함하는 다기능성 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 신체의 외부를 덮고 있는 하나의 막으로 여러 가지 외부의 자극, 장해, 건조 등의 환경요소로부터 신체를 보호해 주는 다양한 생리적 기능을 수행하여 내부 장기와 그 밖의 체내 기관을 보호 조절하는 역할을 한다.

그러나, 생체 노화로 인해 내적으로는 신진 대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하된다.

또한, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선에 자외선 함량이 증가하게 되고, 환경 오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써 야기되는 과도한 물리적, 화학적 자극 및 스트레스는 피부의 정상기능 저하, 멜라닌 침착에 의한 기미, 주근깨 등의 생성 및 피부 노화현상을 촉진하여 피부를 손상시킬 수 있다.

우리 신체는 손상된 피부에 대하여 피부 재생 과정을 수행한다. 피부 재생은 손상에 대한 조직의 반응이며 조직회복의 과정으로, 주화성(chemotaxis), 세포의 분화 및 복제(differentiation and replication), 기질 단백질(matrix protein)의 합성, 혈관의 신생 및 창상의 재구성 등을 포함하는 복잡한 생물학적 과정이다.

따라서 내적, 외적 요인에 의한 피부노화 및 손상을 방지하여 보다 건강하고 아름다운 피부를 유지하기 위하여 각종 동물, 식물, 미생물 등에서 수득한 생리 활성 물질들을 화장품에 부가하여 사용하고 있다.

이와 같이 다양한 생리 활성 물질을 통해 피부의 고유 기능을 유지시키고 피부 세포를 활성화시켜 피부 신진대사를 촉진함으로써 피부 건강을 유지하고자 하는 노력이 계속되고 있으며, 이에 따른 화장품, 피부 외용제 등이 개발되고 있다.

그러나, 이들 물질은 피부 적용시 자극, 홍반, 발적 등의 안전성 문제로 사용량의 제한이 있거나, 효과가 미미하여 실질적으로 피부 기능 개선 효과를 기대하기 어려웠다.

따라서, 기존의 피부 외용제 조성물 보다 생체에 안전하고 효과가 높은 새로운 피부 외용제 조성물의 개발이 요구되고 있다.

최근 화장품 업계에서 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 제품이 다수 개발되고 있다.

천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다.

따라서, 부작용이 적고, 소비자의 호응도가 높은 천연 재료를 이용한 화장품의 수요가 점차 증가하고 있으며, 생체 안전성 및 피부 개선 효과가 우수한 다기능성(multi-functional) 화장품 개발에 대한 다양한 연구가 활발하게 이루어지고 있다.

본 발명의 목적은 전술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 본 발명의 목적은 피부에 대한 자극성이 적고, 외부 자극에 의한 피부 손상을 최소화하는 기능성 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 테트라펩타이드-21(Tetrapeptide-21) 및 팔미토일 펜타펩타이드-4(Palmitoyl Pentapeptide-4)를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 헥사펩타이드-11(Hexapeptide-11) 및 카노신(Carnosine) 중 하나 이상을 더 포함할 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 아데노신(Adenosine), 지모뿌리 추출물, 및 글루타치온으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 더 포함할 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 주름 개선 및 피부 탄력 개선용일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 미백용일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 항염 또는 항산화용일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부재생용일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화될 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따른 화장료 조성물은 피부 자극이 적고 각 유효성분의 시너지 효과에 의한 피부 개선 효과가 현저히 우수하다.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.

수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.

이하, 본 발명의 실시예를 상세히 기술하나, 하기 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 아니함은 자명하다.

본 발명의 일 측면은, 테트라펩타이드-21(Tetrapeptide-21) 및 팔미토일 펜타펩타이드-4(Palmitoyl Pentapeptide-4)를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

상기 화장료 조성물은 저분자 복합 펩타이드 성분을 유효성분으로 포함하여 생체 안전성 및 피부 개선 활성이 우수할 뿐만 아니라 피부 자극이 적다.

상기 펩타이드(peptide)는 아미드 결합(또는 펩타이드 결합)으로 연결된 하나 이상의 아미노산으로 구성된 폴리머를 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 펩타이드는 주름 개선, 피부 탄력 개선 효과를 나타내는 펩타이드 또는 이의 단편을 의미할 수 있다.

상기 펩타이드를 명명하는 일반적인 규칙은 구체적으로 지시된 예외사항이 없는 경우 3문자 또는1문자 아미노산 코드를 기초로 할 수 있다. 예컨대, 아미노산 구조의 중심부를 3문자 코드(예컨대, Ala, Lys)로 표시하며, 3문자 코드의 앞에 "D-"를 적음으로써 D-입체형태(예컨대, D-Ala, D-Lys)를 구체적으로 지시하지 않은 경우라면L-입체형태로 가정할 수 있다. 상기 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기는 천연 또는 비-천연아미노산 잔기일 수 있다.

본 발명자들은 상기 펩타이드가 다른 성분과 상호 작용하여 다양한 요인에 의해 유발될 수 있는 피부 손상 및 피부 노화를 효과적으로 억제할 수 있음을 규명하였으며 이를 통한 다양한 용도를 도출하였다.

상기 펩타이드는 당업계에 공지된 화학적 합성 방법, 특히 고상 합성 기술(solid-phase synthesis techniques)에 따라 제조될 수 있다(Merrifield, J. Amer. Chem. 1963, Soc. 85:2149-54; Stewart, et al. Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd. ed., Pierce Chem. 1984, Co.: Rockford, 111).

상기 “유효성분으로 포함하는”은 피부 개선 효과를 나타낼 수 있는, 예컨대, 주름 개선, 피부 탄력 개선, 피부 미백, 항산화 효과 등을 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미할 수 있다.

상기 “테트라펩타이드-21(Tetrapeptide-21)”는 글라이신, 글루타민산, 라이신, 글라이신이 순차로 연결된 펩타이드로, 하기 화학식 1의 화합물일 수 있다.

[화학식 1]

상기 “팔미토일 펜타펩타이드-4(Palmitoyl Pentapeptide-4)”는 라이신, 쓰레오닌, 쓰레오닌, 라이신, 세린, 세린이 순차로 연결된 펩타이드의 아미노 말단 부위에 친유기인 지방산 팔미테이트(palmitate)를 접합시킨 것으로, 하기 화학식 2의 화합물일 수 있다.

[화학식 2]

상기 화장료 조성물은 헥사펩타이드-11(Hexapeptide-11) 및 카노신(Carnosine) 중 하나 이상을 더 포함할 수 있다.

상기 “헥사펩타이드-11(Hexapeptide-11)”은 알라닌, 페닐알라닌, 프롤린, 발린이 순차로 연결된 합성 펩타이드로, 하기 화학식 3의 화합물일 수 있다.

[화학식 3]

상기 카노신(carnosine)은 베타알라닌(β-alanin)과 히스티딘(histidine)으로 이루어진 β-알라닐-L-히스티딘의 다이펩타이드(dipeptide)로 수명이 긴 조직에서 상당히 많은 양이 발견되고, 특히 척추동물 근육 세포의 비단백질 부분에 많이 존재하는데 그 양은 약 1 내지 20 mM에 달한다.

상기 카노신은 세포를 산화적 스트레스로부터 보호하는 항산화제로서, 활성 산소종(reactive oxygen species)을 제거하는데 뛰어난 효과를 갖는 자유 라디칼 소거제(free radical scavenger)로 알려져 있다.

상기 카노신의 보호 작용은 프로톤 완충효과(proton buffering), 중금속 킬레이트화(chelating) 및 자유 라디칼과 활성 당분자의 제거를 통해 산화적 스트레스 환경에서 생체 고분자의 변형을 억제하고 이들의 고유 기능을 유지시킴으로써 이루어지며, 상기 카노신이 저분자 복합 펩타이드와 함께 작용함으로써 우수한 시너지 효과를 나타낼 수 있다.

상기 화장료 조성물은 아데노신(Adenosine), 지모뿌리 추출물, 및 글루타치온으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 더 포함할 수 있다.

상기 “아데노신(Adenosine)” 아데닌을 염기로 하는 뉴클레오티드로서 기능성 원료로 고시되어 있다. 상기 아데노신은 아데닌이 리보스(리보푸라노스)의 일부에 β글리코시드 결합으로 이어져 있는 뉴클레오시드이다. 상기 아데노신은 삼인산과 이인산의 형태로 생화학적인 작용에 기여할 수 있다.

상기 “지모(知母, Anemarrhenaasphodeloides Bunge)”는 외떡잎식물 백합목 지모과의 여러해살이풀로서 지모과의 뿌리줄기를 사용하며, 원산지는 중국이며 우리나라에서는 황해도 지방에 고루 분포한다.

상기 지모의 뿌리에서 잎들이 소복히 모여 자라나고 잎의 바깥 부분부터 외생엽, 정상엽, 내생엽으로 구분되며 가운데 부분의 정상엽이 가장 크기가 크며, 잎의 모양은 장협 피침형으로써 끝부분이 상당히 뾰족하다.

상기 지모의 뿌리와 줄기에는 티모사포닌(Timosaponin), 치모닌(Chimonin), 프로코카테시산 (Prococathechi acid), 판토텐산(Pantothenic acid) 등이 함유되어 있으며, 해열 작용, 강심 작용, 이뇨 작용, 양허증, 항균 작용, 거담 작용, 진정 작용, 혈당강하 작용, 항암 작용이 있는 것으로 보고 되고 있다.

상기 “글루타치온(glutathione)”은 하기 화학식 4의 구조를 가지는 화합물로서 Cas 번호가 70-18-8이고, 분자량이 307.32일 수 있다.

[화학식 4]

상기 글루타치온은 생체 내에 존재하는 항산화제로서 아스코르빈산(비타민 C), 토코페롤(비타민 E) 등과 같은 생체 내 항산화제와 가역적으로 반응하여 생체 내 라디칼을 효과적으로 제거할 수 있다.

상기 글루타치온은 상기 라디칼 제거와 관련된 생체 시스템에서 최종 라디칼 수용체로서 매우 중요한 역할을 수행할 수 있다.

상기 화장료 조성물은 주름 개선 및 피부 탄력 개선용일 수 있다.

상기 "피부 탄력 개선"은 엘라스틴으로 구성된 탄력섬유가 콜라겐과 함께 존재하며, 상기 엘라스틴과 콜라겐이 충분히 존재하는 상태에서 피부 탄력이 유지 또는 향상되는 현상을 의미한다.

또한, 상기 피부 탄력 개선 효과와 동시에 피부 주름 개선 효과가 동반될 수 있다.

상기 "주름 개선"은 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름이 완화되는 현상을 의미한다.

또한, 상기 화장료 조성물은 피부 미백용일 수 있다.

상기 "피부 미백"은 피부색에 영향을 미치는 멜라닌, 산화-환원 헤모글로빈, 카로틴, 멜라노이드 등 다양한 생체 분자의 생성을 억제함으로써 잡티, 주근깨, 기미 등의 피부 색소 침착 현상을 완화시키고, 피부 누런기, 붉은기를 완화시켜 피부 밝기 및 균일도를 향상시키는 효과를 의미한다.

상기 화장료 조성물은 항염 또는 항산화용일 수 있다.

상기 “항산화”는 산화를 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 인체는 산화촉 진물질과 산화억제물질이 균형을 이루고 있으나, 여러 가지 요인들로 인하여 이러한 균형 상태를 잃고 산화를 촉진하는 방향으로 기울게 되면, 생체 내에 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 세포손상 및 병리적 질환을 유발할 수 있다.

상기 산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 화학적으로 불안정하고 반응성이 높아 DNA, 단백질, 지질 및 탄수화물과 같은 여러 생체물질과 쉽게 반응할 수 있으며, 생체 내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키거나 돌연변이, 세포독성 및 암 등을 초래하게 되고, 노화의 직접적인 원인이 되기도 한다.

상기 화장료 조성물은 상기 활성 산소종을 제거하거나 감소시킴으로써 항산화 효과를 얻어 노화를 방지하고 건강을 유지할 수 있다.

상기 “항염”은 염증을 억제하는 작용을 의미하며, 염증반응의 조절은 매우 복잡한 것으로 알려져 있는데, 이는 생체 내 복구체계의 증강 및 손상을 감소시킨다.

반복되는 조직의 손상이나 재생에 의해 염증반응이 지속되면, 염증관련 세포에서 ROS와 RNS가 과다 생성되고 영구적인 유전자의 변형이 야기될 수 있다. 즉, ROS와 RNS는 생체 내 여러 가지 세포의 작용을 조절하는 염증 반응과 깊이 관련되어 있다.

상기 화장료 조성물은 NF-kB의 활성화로 인해서 발생되는 염증 매개 인자의 발현을 조절함으로써 우수한 항염 활성을 나타낼 수 있다.

또한, 상기 화장료 조성물은 피부 재생용일 수 있다.

상기 “피부 재생”은 피부 외부 및 내부 원인에 의한 손상에 대해 피부 조직의 회복 과정을 의미한다.

상기 외부 원인에 의한 손상은 자외선, 외부 오염 물질, 창상, 외상 등을 들 수 있으며, 상기 내부 원인에 의한 손상은 스트레스 등을 들 수 있다.

상기 화장료 조성물은 피부 장벽을 복구시키고, 이를 통해 피부 재생을 촉진하며, 수분을 증가시켜 자외선이나 공해로부터 피부를 보호하고 면역력을 증대시키며 피부노화를 억제할 수 있다.

상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 통상의 방법에 의해 제형화될 수 있다. 피부 외용제의 제형화에 있어서 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있고, 화장료 조성물의 제형화에 있어서 International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed(The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, 1995)에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있다.

구체적으로, 상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형으로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등의 화장수; 훼이셜 로션, 바디로션 등의 유액; 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 선 스크린; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 피부 외용제는, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다

상기 화장료 조성물은 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물은 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일이 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.

다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택할 수 있다.

이하 실시예를 통해, 본 발명을 더욱 상술하나 하기 실시예에 의해 본 발명이 제한되지 아니함은 자명하다.

실시예 및 비교예

본 발명의 펩타이드 복합체의 안정성 및 기능성을 검증하고자 하기 표 1 및 2와 같이 시료를 혼합하여 실시예 및 비교예를 설정하였다. 각 시료는 시중에서 구득하여 사용하였다.

[함량(중량부)]

구분	실시예
구분	1	2	3	4	5	6	7	8
테트라펩타이드-21	60	40	40	30	24	24	24	24
팔미토일 펜타펩타이드-4	60	40	40	30	24	24	24	24
헥사펩타이드-11	-	40	-	30	24	24	24	24
카노신	-	-	40	30	24	24	24	24
아데노신	-	-	-	-	24	-	-	8
지모뿌리 추출물	-	-	-	-	-	24	-	8
글루타치온	-	-	-	-	-	-	24	8

[함량(중량부)]

구분	비교예
구분	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
테트라펩타이드-21	120	-	-	-	-	-	-	60	60	40	30	-
팔미토일 펜타펩타이드-4	-	120	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
헥사펩타이드-11	-	-	120	-	-	-	-	60	-	40	-	-
카노신	-	-	-	120	-	-	-	-	60	40	-	--
아데노신	-	-	-	-	120	-	-	-	-	-	30	40
지모뿌리 추출물	-	-	-	-	-	120	-	-	-	-	30	40
글루타치온	-	-	-	-	-	-	120	-	-	-	30	40

실험예 1 : 피부 안전성 시험

실시예 및 비교예의 시료에 대한 피부 안전성을 검증하기 위해, 섬유아세포(HDF)에 대한 MTT assay 실험을 수행하였다.

실시예 및 비교예의 시료를 정제수에 25, 50, 100, 200, 400 μg/mL의 농도별로 각각 현탁한 후, 세포 생존율을 측정하였다.

세포 독성은 MTT{3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyltetrazolium bromide} 시약을 이용하여 세포 생존율을 측정하는 모스만(Mosmann)의 방법을 변형하여 수행하였다.

섬유아세포(HDF)를 각각 96-웰 플레이트에 1×10⁴ cells/well의 농도로 분주하여 37℃, 5% CO₂에서 48시간 동안 배양하였다.

배양 배지를 제거하고 시료를 농도별로 처리한 배지에 48시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 PBS(Phosphate buffered saline)로 반복 세척하였다.

MTT를 5mg/mL로 PBS에 녹여 50 μL 첨가하고 37℃, 5%의 CO₂에서 48시간 동안 배양하였다. DMSO(Dimethyl sulfoxide)를 한 웰(well) 당 100L 넣고, 10분 동안 교반한 후 540nm에서 흡광도를 측정하였다.

측정 결과, 각 시료의 모든 농도에서 세포 독성은 확인되지 않았다. 상기 결과는 상기 시료가 인체에 무해할 뿐만 아니라 인체 안전성이 우수함을 시사한다.

실험예 2 : 자유라디칼 소거 활성 평가

실시예 및 비교예의 추출물을 정제수에 현탁하여 자유라디칼 소거 활성(free radical scavenging acticity)을 평가하였다.

DPPH 측정법은 억제제(inhibitor)가 안정한 라디칼 DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl radical)를 소거하여 탈색되는 정도를 540nm에서 흡광도를 측정하는 방법이다.

대조군으로 비타민 C를 이용하였고, 실험의 정확도를 위하여 동일한 실험을 3회 반복하였으며, 결과는 하기 표 3과 같다.

[라디칼 DPPH의 50% 소거하는 농도]

구분	SC ₅₀ (μg/mL)
실시예 1	129.7
실시예 2	119.2
실시예 3	120.7
실시예 4	114.9
실시예 5	110.9
실시예 6	110.3
실시예 7	111.7
실시예 8	106.8
비교예 1	219.3
비교예 2	190.5
비교예 3	178.4
비교예 4	177.2
비교예 5	174.2
비교예 6	178.4
비교예 7	178.4
비교예 8	174.2
비교예 9	180.1
비교예 10	174.2
비교예 11	178.4
비교예 12	178.4
대조군(비타민 C)	124.5

SC₅₀의 값이 낮을수록 DPPH 자유라디칼의 소거 활성이 높은 것을 의미한다.표 3을 참조하면, 실시예의 시료는 비교예 대비 피부 탄력 개선 효과가 현저히 우수하였다.

특히, 테트라펩타이드-21 및 팔미토일 펜타펩타이드-4를 동시에 포함하는 실시예 1은 일부가 결여된 비교예 8 내지 11에 비해 자유라디칼 소거 활성이 현저히 우수하였으며, 상기 결과는 각 구성의 조합에 따른 시너지 효과를 시사한다.

실험예 3 : 항염 활성 평가

Lipopolysaccharide(LPS)로 자극을 유도한 쥐 대식세포주 RAW 264.7 cell에서 EAME의 NO 생성 억제능을 분석하여 실시예 및 비교예의 항염 활성을 평가하였다.

실험을 위해 Murine macrophage cell line 인 Raw 264.7 세포를 한국 세포주 은행으로부터 분양받았다.

100 units/mL penicillin-streptomycin과 10% fetal bovine serum(FBS)이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5%, CO₂ incubator에서 배양하였으며, 2 내지 3일에 1회씩 계대 배양을 실시하였다.

Raw 264.7 세포(3 x 10⁵ cells/mL)를 18시간 전 배양하고, 실시예 및 비교예의 시료(농도 1%)와 LPS(1 μg/mL)를 동시 처리하여 24시간동안 배양하였다.

생성된 NO는 Griess reagent을 이용하여 세포 배양액 중 존재하는 NO₂ ^-의 형태로 측정하였다.

음성 대조군은 LPS를 처리하지 않았으며, 양성 대조군은 LPS만을 처리하여 생성된 NO량을 측정하였다.

세포 배양 상층액 100μL 및 Griess 시약(1%(w/v) sulfanilamide, 0.1%(w/v) naphtylehtylenediamine in 2.5%(v/v) phosphoric acid)을 동량 혼합하여 10분간 실온 암실에서 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 흡광도(540nm)를 측정하였다.

표준농도 곡선은 sodium nitrite(NaNO₂)를 serial dilution하여 산출하였다(10-100μM). 측정 결과는 하기 표 4와 같다.

구분	NO 생성율(%)
실시예 1	47.1
실시예 2	44.8
실시예 3	43.2
실시예 4	41.4
실시예 5	37.2
실시예 6	38.5
실시예 7	39.1
실시예 8	35.9
비교예 1	73.0
비교예 2	76.3
비교예 3	72.7
비교예 4	68.4
비교예 5	83.0
비교예 6	67.6
비교예 7	73.0
비교예 8	67.8
비교예 9	68.6
비교예 10	83.0
비교예 11	74.0
비교예 12	75.9
대조군	31.0
음성 대조군(무처리)	100.0

표 4를 참조하면, 실시예 1 내지 8의 시료는 비교예 1 내지 12 대비 NO(Nitric oxide) 생성 억제 활성이 우수하였다.

특히, 테트라펩타이드-21 및 팔미토일 펜타펩타이드-4를 동시에 포함하는 실시예 1은 일부가 결여된 비교예 8 내지 11에 비해 항염 활성이 현저히 우수하였으며, 상기 결과는 각 구성의 조합에 따른 시너지 효과를 시사한다.

실험예 4 : 멜라닌 생성 억제 활성 평가

실시예 및 비교예의 멜라닌 생성 억제 효과를 평가하고자 멜라노사이트 B16F10을 배양하였다.

B16F10을 8 x 10⁴ cells가 되도록 6-well plate의 각 well에 분주한 후, 5% CO₂, 37℃ 조건의 세포 배양기에서 18시간동안 배양하였다.

18시간 후 B16F10 세포의 배지를 제거하고 실시예 및 비교예의 시료를 동일 농도로 처리하여 5% CO₂, 37℃ 조건의 세포 배양기에서 2일 동안 배양하였다.

2일 후, scraper를 이용하여 플레이트로부터 세포를 회수하고 1분간 원심 분리하여 펠렛 형태의 세포를 수득하였다.

수득된 세포에 1N NaOH를 넣고 95℃에서 10분 동안 반응시켜 멜라닌을 용해시켰다.

10분 후, microplate reader를 이용하여 475nm 파장으로 멜라닌 생성량을 측정하였고, BCA assay를 이용하여 595nm 파장으로 단백질 양을 측정하였다.

각 실험군은 “melanin 절대량 / protein 절대량”으로 수치화하여 나타내고, 실험군과 대조군을 상대 정량하였다.

Melanogenesis inducer로는 α-MSH를 사용하였고, 양성 대조군으로 알부틴을 사용하였다.

구분	멜라닌 상대값 (%)
실시예 1	51.4
실시예 2	48.9
실시예 3	48.5
실시예 4	46.6
실시예 5	44.5
실시예 6	43.3
실시예 7	45.1
실시예 8	39.5
비교예 1	77.8
비교예 2	74.2
비교예 3	69.5
비교예 4	68.4
비교예 5	74.2
비교예 6	77.8
비교예 7	68.4
비교예 8	77.8
비교예 9	67.5
비교예 10	74.2
비교예 11	68.4
비교예 12	74.2
양성대조군	43.3
대조군	100.0

표 5를 참조하면, 실시예 1 내지 8의 시료는 비교예 1 내지 12 대비 멜라닌 생성 억제 활성이 우수하였다.

특히, 테트라펩타이드-21 및 팔미토일 펜타펩타이드-4를 동시에 포함하는 실시예 1은 일부가 결여된 비교예 8 내지 11에 비해 멜라닌 생성 저해 활성이 현저히 우수하였으며, 상기 결과는 본원 각 구성의 조합에 따른 시너지 효과를 시사한다.

실험예 5 : 타이로시네이즈(tyrosinase) 억제 활성 평가

상기 실시예, 및 비교예의 Tyrosinase 저해 활성을 평가하였다.

상기 동일 농도로 처리하여 저해 활성을 측정하였으며, L-DOPA를 기질로 하였다.

68mM sodium phosphate buffer(pH 6.8)에 mushroom tyrosinase를 녹여 125U/ml가 되도록 하고, -20℃에서 저장하여 실험에 사용하였다.

96-well plate에 희석된 시료 40μM 및 8mM L-DOPA 120μL를 투입하였다.

mushroom tyrosinase 40μL를 첨가하여 20분간 반응시킨 후, ELISA reader로 490nm에서 흡광도를 측정하였다.

대조군으로 Arbutin을 사용하였다. Tyrosinase 저해 활성은 시료 무첨가군 대비 시료 첨가군의 흡광도 비율을 측정하였다.

구분	Tyrosinase activity 상대값 (%)
실시예 1	44.5
실시예 2	39.8
실시예 3	41.1
실시예 4	36.1
실시예 5	32.8
실시예 6	33.2
실시예 7	32.4
실시예 8	29.0
비교예 1	72.0
비교예 2	70.1
비교예 3	74.7
비교예 4	75.9
비교예 5	74.0
비교예 6	82.2
비교예 7	76.3
비교예 8	74.8
비교예 9	72.2
비교예 10	74.8
비교예 11	76.3
비교예 12	74.0
양성대조군	44.5
대조군	100.0

표 6을 참조하면, 실시예 1 내지 8의 시료는 비교예 1 내지 12 대비 타이로시네이즈 저해 활성이 우수하였다.

특히, 테트라펩타이드-21 및 팔미토일 펜타펩타이드-4를 동시에 포함하는 실시예 1은 일부가 결여된 비교예 8 내지 11에 비해 타이로시네이즈 저해 활성이 현저히 우수하였으며, 상기 결과는 본원 발명의 우수한 미백 활성을 시사한다.

실험예 6 : 엘라스타제 억제 효과 평가

엘라스타제(elastease)의 저해 활성을 통해 실시예 및 비교예의 시료의 주름 개선 효과를 평가하였다. 실시예 및 비교예의 시료를 정제수에 현탁하여 엘라스타제 저해 활성을 하기와 같이 측정하였다.

1.6mM 엘라스타제 기질(N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide; SANA) 및 0.2mM Tris-HCl 버퍼(pH 8.0)를 준비하였다. 96 well-plate에 상기 Tris-HCl 버퍼 0.165 mL, SANA 0.005 mL 및 엘라스타제 0.01 mL씩 분주하였다.

양성 대조군과 함께 실시예 및 비교예의 시료를 넣고 25℃에서 15분간 반응시킨 후 405nm에서 흡광도를 측정하였다.

시료를 첨가하지 않은 흡광도 대비 시료를 첨가한 흡광도의 차의 비율로 엘라스타제 저해 활성의 퍼센트(%)를 계산하였다.

양성 대조군으로 oleanolic acid를 사용하였고, 실시예 및 비교예의 시료의 엘라스타제를 50% 억제하는 농도(IC₅₀)를 측정하여 표 7에 나타내었다.

[엘라스타제 50% 억제 농도]

구분	IC ₅₀ (μg/mL)
실시예 1	161.9
실시예 2	152.5
실시예 3	154.1
실시예 4	146.2
실시예 5	132.2
실시예 6	132.4
실시예 7	131.3
실시예 8	114.2
비교예 1	270.3
비교예 2	277.5
비교예 3	270.3
비교예 4	263.2
비교예 5	268.9
비교예 6	280.4
비교예 7	262.3
비교예 8	266.2
비교예 9	278.1
비교예 10	268.9
비교예 11	262.3
비교예 12	265.9
양성 대조군	98.8

IC₅₀의 값이 낮을수록 엘라스타제 활성 억제율이 높은 것을 의미한다. 엘라스타제(Elastase)는 진피 내 피부 탄력을 유지시키는 데 중요한 기질인 엘라스틴을 분해하는 효소이다. 또한 엘라스타제는 다른 중요한 기질단백질인 콜라겐(collagen)을 분해할 수 있는 비특이적 가수분해 효소이다.

따라서 높은 엘라스타제 활성 억제율은 피부 탄력을 유지하는데 중요한 엘라스틴과 콜라겐이 오래 유지됨을 의미하며, 이는 피부 주름 개선 효과가 우수하다는 것을 시사한다.

표 7을 참조하면, 실시예의 시료는 비교예에 비해 엘라스타제 활성을 더욱 효과적으로 억제하였다.

실험예 7 : 주름 개선 효과 평가

실시예 및 비교예의 시료를 제형화한 화장료 조성물의 피부 주름 개선 효과를 평가하였다.

30세 이상의 성인 여성을 대상으로 20개의 그룹으로 나누고, 피시험자는 4주 동안 매일 아침, 저녁 세안 후 크림 타입으로 제형화한 화장료를 안면에 고르게 도포하여 충분히 흡수시켰다.

주름개선 평가를 위하여 ANTERA 3D(Miravex, Ireland)를 적용하였으며, 기기측정은 시험물질 사용 전과 3주 사용 후 시점에서 이루어졌다.

동일한 시험담당자가 모든 피시험자의 왼쪽 눈꼬리부위를 측정하였고, 측정의 재현성을 위하여 시험 물질 사용 전에 측정한 이미지와 오버랩시켜 동일부위를 측정하였다.

촬영된 이미지는 ANTERA 3D 전용 소프트웨어인 ANTERA pro software를 이용하여 매칭시킨 후 일치된 측정부위를 분석에 사용하였다.

측정값은 측정변수인 Indentation index를 이용하여 피부 주름을 나타내는 Wrinkles small 값을 분석하였다.

표 8에서 실시예 및 비교예의 시료를 제형화한 화장료 사용에 따른 피시험자의 4주 후 Wrinkles small값의 변화량을 나타내었다. 주름 개선 효과가 우수할수록 Wrinkles small 값 변화량은 크다.

구분	Wrinkles small 평균값
실시예 1	1.22
실시예 2	1.27
실시예 3	1.25
실시예 4	1.32
실시예 5	1.37
실시예 6	1.39
실시예 7	1.38
실시예 8	1.51
비교예 1	0.74
비교예 2	0.73
비교예 3	0.72
비교예 4	0.81
비교예 5	0.74
비교예 6	0.74
비교예 7	0.80
비교예 8	0.75
비교예 9	0.76
비교예 10	0.81
비교예 11	0.83
비교예 12	0.82

표 8을 참조하면, 실시예의 시료를 제형화한 화장료는 비교예 대비 피부 주름 개선 효과가 현저히 우수하였다.

실험예 8 : 피부 탄력 개선 효과 평가

실시예 및 비교예의 시료를 제형화한 화장료 조성물의 피부 탄력 개선 효과를 평가하였다.

상기 각 시료를 동일한 조성의 크림으로 제형화하였으며 실시예 및 비교예 시료만을 달리하였다.

온도 24 내지 26℃, 습도 75%의 조건에서 20세 이상의 건강한 여성(평균연령 39세)을 그룹별로 나누고 제형화한 실시예 및 비교예의 크림을 각각 도포하였다.

눈가를 중심으로 하루 2회씩(아침 및 저녁) 12주간 제형화한 크림을 도포하였고, 피부 탄력 측정기(Cutometer MPA580, Conrage + Khazaka사, 독일연방국)를 이용하여 피부 탄력을 측정하였다.

시험결과는 cutometer MPA580의 R8(R8(12주)-R8(0주)) 값으로 기재하였고, R8 값은 피부 점탄성(Vicoelasticity)의 성질을 나타내며, 결과는 하기 표 9와 같다

구분	피부 탄력 개선 효과
실시예 1	0.69
실시예 2	0.77
실시예 3	0.79
실시예 4	0.78
실시예 5	0.83
실시예 6	0.84
실시예 7	0.83
실시예 8	0.91
비교예 1	0.44
비교예 2	0.37
비교예 3	0.36
비교예 4	0.41
비교예 5	0.38
비교예 6	0.42
비교예 7	0.39
비교예 8	0.45
비교예 9	0.45
비교예 10	0.47
비교예 11	0.48
비교예 12	0.44
양성 대조군(비타민 C)	0.91
음성 대조군(무처리)	0.31

표 9를 참조하면, 실시예의 시료는 비교예 대비 피부 탄력 개선 효과가 현저히 우수하였다.

특히, 테트라펩타이드-21 및 팔미토일 펜타펩타이드-4를 동시에 포함하는 실시예 1은 일부가 결여된 비교예 8 내지 11에 비해 현저히 우수하였으며, 상기 결과는 각 구성의 조합에 따른 시너지 효과를 시사한다.

실험예 9 : 세포 이동 촉진 활성 평가

상처 치유 어세이(Wound healing assay)를 통해 실시예 및 비교예의 시료의 피부 재생, 상처 치유 효과를 확인하였다.

구체적으로, HaCat 세포를 96웰 플레이트에 1×10³ cells/well의 수로 분주하였다.

24시간 후 5% FBS가 첨가된 DMEM 배지로 교체한 후 실시예 및 비교예의 시료를 각 웰에 동일 농도(1%)로 처리하였다.

48시간 후 옐로우 팁(yellow tip)을 이용하여 상처를 주었고, 24시간 후 상처가 닫힌 정도를 사진을 찍어 이미지 J(image J) 프로그램을 통해 면적을 측정하였다.

구분	세포이동성(%)
실시예 1	55.0
실시예 2	60.6
실시예 3	60.2
실시예 4	64.0
실시예 5	67.7
실시예 6	68.4
실시예 7	66.9
실시예 8	74.5
비교예 1	28.0
비교예 2	27.1
비교예 3	26.5
비교예 4	25.8
비교예 5	27.7
비교예 6	26.4
비교예 7	27.5
비교예 8	32.1
비교예 9	30.1
비교예 10	31.2
비교예 11	31.7
비교예 12	31.0

표 10을 참조하면, 실시예의 시료는 비교예 대비 세포 이동능이 현저히 우수하였다.

특히, 테트라펩타이드-21 및 팔미토일 펜타펩타이드-4를 동시에 포함하는 실시예 1은 일부가 결여된 비교예 8 내지 11에 비해 세포 이동 촉진 활성이 현저히 월등하며, 상기 결과는 각 구성의 조합에 따른 시너지에 의해 피부 재생, 상처 치유 효과가 개선되었음을 시사한다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims

테트라펩타이드-21(Tetrapeptide-21), 팔미토일 펜타펩타이드-4(Palmitoyl Pentapeptide-4), 헥사펩타이드-11(Hexapeptide-11), 카노신(Carnosine) 및 지모뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선 및 피부 미백용 화장료 조성물.
삭제
제1항에 있어서,
아데노신(Adenosine) 및 글루타치온으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 더 포함하는, 화장료 조성물.
제1항 또는 제3항에 있어서,
피부 탄력 개선 용도를 더 포함하는 화장료 조성물.
삭제
제1항 또는 제3항에 있어서,
항염 또는 항산화 용도를 더 포함하는 화장료 조성물.
제1항 또는 제3항에 있어서,
피부 재생 용도를 더 포함하는 화장료 조성물.
제1항 또는 제3항에 있어서,
유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화된 화장료 조성물.