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KR101910779B1 - Ｆｇｆｒ１ 세포밖 도메인 조합치료 - Google Patents

Ｆｇｆｒ１ 세포밖 도메인 조합치료 Download PDF

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KR101910779B1
KR101910779B1 KR1020187012882A KR20187012882A KR101910779B1 KR 101910779 B1 KR101910779 B1 KR 101910779B1 KR 1020187012882 A KR1020187012882 A KR 1020187012882A KR 20187012882 A KR20187012882 A KR 20187012882A KR 101910779 B1 KR101910779 B1 KR 101910779B1
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리 롱
토마스 브렌난
Original Assignee
파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크.
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Abstract

도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드 및 베바시주맙으로부터 선택되는 적어도 하나의 추가적인 치료제와 조합하여 섬유아세포 성장인자 수용체 1(FGFR1) 세포밖 도메인(ECD) 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자를 투여하는 단계를 포함하는 암치료 방법이 제공된다. FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및/또는 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드 및 베바시주맙으로부터 선택된 적어도 하나의 추가적인 치료제를 포함하는 투약량 팩이 또한 제공된다. 일부 실시형태에서, 투약량 팩은 적어도 하나의 추가적인 치료제와 함께 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자를 투여하기 위한 설명서를 포함한다.

Description

ＦＧＦＲ１ 세포밖 도메인 조합치료 {FGFR1 EXTRACELLULAR DOMAIN COMBINATION THERAPIES}
관련출원
본 출원은 2010년 11월 15일 출원된 미국 가특허출원 제61/413,940호 및 2010년 12월 9일 출원된 제61/421,462호에 대한 우선권을 주장하며, 이들 기초출원은 본 명세서에 참조로서 포함된다.
섬유아세포 성장인자 수용체 1(Fibroblast Growth Factor Receptor 1, FGFR1)의 수용성 형태는 시험관내 및 생체내 종양 세포 성장을 억제하는 것으로 나타났다. 예를 들어, 미국특허 제7,678,890호를 참조한다. FGFR1의 가용성 형태와 같은 항암 치료 분자를 다른 항암 치료 분자와 조합하는 것은 항암 치료제 각각의 효능에서 길항적이거나, 부가적이거나 또는 상승적 효과를 초래할 수 있다.
본 발명자들은 비소세포 폐암의 마우스 이종이식 모델에서 FGFR1 ECD 및 도세탁셀의 투여가 치료제의 항-종양 활성을 나타낸다는 것을 발견하였다. 추가로, 본 발명자들은 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-fluorouracil: 5-FU), 류코보린, 페메트렉세드 및 베바시주맙으로부터 선택된 적어도 하나의 추가적인 치료 분자와 FGFR1 ECD의 투여가 특정 마우스 이종이식 모델에서 단독으로 투여된 각 분자에 대해 적어도 부가적인 활성을 가진다는 것을 발견하였다.
일부 실시형태에서, 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 소라페닙, 에토포사이드, 토포테칸, 혈관내피 성장인자(vascular endothelial growth factor: VEGF) 길항물질, VEGF 트랩, 항-VEGF 항체, 및 베바시주맙으로부터 선택된 적어도 하나의 추가적인 치료제와 섬유아세포 성장인자 수용체 1(FGFR1) 세포밖 도메인(extracellular domain: ECD)을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암치료방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 도세탁셀이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 페메트렉세드이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 시스플라틴이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 파클리탁셀이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 5-FU이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 토포테칸이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 빈크리스틴이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 VEGF 길항물질, 예컨대 항-VEGF 항체 또는 VEGF 트랩이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 베바시주맙이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 소라페닙이다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD는 서열번호 1 내지 4로부터 선택된 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 소라페닙, 에토포사이드, 토포테칸, 혈관내피 성장인자(VEGF) 길항물질, VEGF 트랩, 항-VEGF 항체 및 베바시주맙으로부터 선택된 적어도 하나의 추가적인 치료제 및 섬유아세포 성장인자 수용체 1(FGFR1) 세포밖 도메인(ECD) 융합 분자를 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암치료 방법이 제공되되, FGFR1 ECD 융합 분자는 FGFR1 ECD 및 융합 상대(fusion partner)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 도세탁셀이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 페메트렉세드이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 시스플라틴이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 파클리탁셀이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 5-FU이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 빈크리스틴이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 토포테칸이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 VEGF 길항물질, 예컨대 항-VEGF 항체 또는 VEGF 트랩이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 베바시주맙이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 소라페닙이다.
일부 실시형태에서, 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 에토포사이드, 소라페닙, 에토포사이드, 토포테칸, 혈관내피 성장인자(VEGF) 길항물질, VEGF 트랩, 항-VEGF 항체 및 베바시주맙으로부터 선택되는 적어도 2가지의 추가적인 치료제 및 FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자를 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암치료 방법이 제공되되, FGFR1 ECD 융합 분자는 FGFR1 ECD 및 융합 상대를 포함한다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 파클리탁셀이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 시스플라틴이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 카보플라틴이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 옥살리플라틴이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 5-FU이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 독소루비신이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 에토포사이드이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 토포테칸이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 VEGF 길항물질, 예컨대 항-VEGF 항체 또는 VEGF 트랩이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 베바시주맙이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제는 파클리탁셀과 카보플라틴이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제는 독소루비신과 파클리탁셀이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제는 시스플라틴과 에토포사이드이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제는 옥살리플라틴과 5-FU이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제는 5-FU와 류코보린이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제는 5-FU와 베바시주맙이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제는 파클리탁셀과 베바시주맙이다. 일부 실시형태에서, 2가지의 추가적인 치료제는 시스플라틴과 에토포사이드이다.
일부 실시형태에서, 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 에토포사이드, 소라페닙, VEGF 길항물질, 항-VEGF 항체, VEGF 트랩 및 베바시주맙으로부터 선택된 적어도 3가지의 추가적인 치료제 및 FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자를 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암치료 방법이 제공되되, FGFR1 ECD 융합 분자는 FGFR1 ECD 및 융합 상대를 포함한다. 일부 실시형태에서, 3가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 옥살리플라틴이다. 일부 실시형태에서, 3가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 5-FU이다. 일부 실시형태에서, 3가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 류코보린이다. 일부 실시형태에서, 3가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 카보플라틴이다. 일부 실시형태에서, 3가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 파클리탁셀이다. 일부 실시형태에서, 3가지의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 베바시주맙이다. 일부 실시형태에서, 3가지의 추가적인 치료제는 옥살리플라틴, 5-FU와 류코보린이다. 일부 실시형태에서, 3가지의 추가적인 치료제는 베바시주맙, 5-FU와 류코보린이다. 일부 실시형태에서, 3가지의 추가적인 치료제는 중 적어도 2가지는 시스플라틴 및 에토포사이드이다.
본 발명은 또한 일부 실시형태에서 암 치료를 위한 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 소라페닙, 에토포사이드, 토포테칸, 혈관내피 성장인자(VEGF) 길항물질, VEGF 트랩, 항-VEGF 항체 및 베바시주맙으로부터 선택된 적어도 하나의 추가적인 치료제 및 FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자의 조합에 관한 것이다. 본 발명은 추가로, 일부 실시형태에서 암 치료를 위한 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 에토포사이드, 소라페닙, 에토포사이드, 토포테칸, 혈관내피 성장인자(VEGF) 길항물질, VEGF 트랩, 항-VEGF 항체 및 베바시주맙으로부터 선택된 적어도 2가지의 추가적인 치료제 및 FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자의 조합에 관할 것이다. 본 발명은 또한 암 치료를 위한 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 에토포사이드, 소라페닙, VEGF 길항물질, 항-VEGF 항체, VEGF 트랩 및 베바시주맙으로부터 선택된 적어도 3가지의 추가적인 치료제 및 FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자의 조합에 관한 것이다.
일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자는 적어도 1, 적어도 2, 또는 적어도 3가지의 추가적인 치료제로부터 개별적으로 패키징된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자는 투여 전 적어도 1, 적어도 2, 또는 적어도 3가지의 추가적인 치료제와 혼합되지 않는다.
일부 실시형태에서, FGFR1-ECD.339-Fc 및 도세탁셀을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암치료 방법이 제공되되, FGFR1-ECD.339-Fc는 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, FGFR1-ECD.339-Fc 및 도세탁셀을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암치료 방법이 제공되되, FGFR1-ECD.339-Fc는 서열번호 6의 아미노산 서열로 이루어진다.
일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자는 글라이코실화되고/되거나 시알산화된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자의 폴리펩타이드 부분은 중국 햄스터 난소(Chinese hamster ovary, CHO) 세포 중에서 발현된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD는 서열번호 1 및 서열번호 3으로부터 선택된 아미노산을 포함한다.
일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자의 적어도 1 용량 및 적어도 하나의 추가적인 치료제의 적어도 1 용량은 동시에 투여된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 중 적어도 하나 및 적어도 하나의 추가적인 치료제 중 적어도 하나는 동시에 투여된다.
일부 실시형태에서, FGFR1 ECD는 서열번호 1 내지 4로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 융합 상대는 Fc, 알부민 및 폴리에틸렌 글라이콜로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 융합 상대는 Fc이다. 일부 실시형태에서, Fc는 서열번호 8 내지 10으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자는 서열번호 5 및 서열번호 6으로부터 선택된 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 융합 상대는 Fc 및 폴리에틸렌 글라이콜이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 융합 상대는 폴리에틸렌 글라이콜이다. 일부 실시형태에서, 융합 분자는 FGFR1 ECD와 하나 이상의 융합 상대 사이의 링커를 포함한다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD는 신호 펩타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 신호 펩타이드는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자는 약 0.5 ㎎/㎏ 체중 내지 약 20 ㎎/㎏ 체중 범위의 양, 예컨대 약 8 내지 약 16 ㎎/㎏ 체중 범위의 양이다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자의 치료적 유효량은 약 8 ㎎/㎏ 체중의 용량인 한편, 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자의 치료적 유효량은 약 16 ㎎/㎏ 체중(또는 1.11㎖/㎎*㎝의 흡광계수를 사용하여 계산할 때, 각각 약 10㎎/㎏ 체중 또는 약 20㎎/㎏ 체중)의 용량이다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자의 치료적 유효량은 약 20 ㎎/㎏ 체중의 용량이다. 일부 실시형태에서, 투약량은 1주 2회, 1주마다, 2주마다, 1주 내지 2주의 빈도로, 3주마다, 4주마다 또는 1개월마다 투여될 수 있다.
본 발명은 또한, 일부 실시형태에서, 투약량 팩(dosage pack)에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, (i) 섬유아세포 성장인자 수용체 1(FGFR1) 세포밖 도메인(ECD), (ii) 섬유아세포 성장인자 수용체 1(FGFR1) 세포밖 도메인(ECD) 융합 분자, 및 (iii) 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 에토포사이드, 토포테칸, VEGF 길항물질, 항-VEGF 항체, VEGF 트랩, 베바시주맙 및 소라페닙으로부터 선택된 적어도 하나의 추가적인 치료제; 및 FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 적어도 하나의 추가적인 치료제를 환자에게 투여하기 위한 설명서로부터 선택된 적어도 하나의 구성성분을 포함하는 투약량 팩이 제공된다. 일부 실시형태에서, 투약량 팩과 함께 포함된 설명서는 FGFR1 ECD 융합 분자의 치료적 유효량을 투여하기 위한 설명서를 포함한다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자의 치료적 유효량은 약 0.5 ㎎/㎏ 체중 내지 약 20 ㎎/㎏ 체중 범위의 양, 예컨대 약 8 내지 약 16 ㎎/㎏ 체중 범위의 양이다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자의 치료적 유효량은 약 8 ㎎/㎏ 체중의 용량이다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자의 치료적 유효량은 약 16 ㎎/㎏ 체중의 용량이다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자의 치료적 유효량은 약 20 ㎎/㎏ 체중의 용량이다. 일부 실시형태에서, 투약량은 1주 2회, 1주마다, 2주마다, 1주 내지 2주의 빈도로, 3주마다, 4주마다 또는 1개월마다 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 투약량 팩은 FGFR1 ECD를 포함하며, 적어도 하나의 추가적인 치료제, 예를 들어, 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 에토포사이드, 토포테칸, VEGF 길항물질, 항-VEGF 항체, VEGF 트랩, 베바시주맙 또는 소라페닙을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 투약량 팩은 FGFR1 ECD 융합 분자를 포함하며, 적어도 하나의 추가적인 치료제는, 예를 들어, 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 에토포사이드, 토포테칸, VEGF 길항물질, 항-VEGF 항체, VEGF 트랩, 베바시주맙, 또는 소라페닙을 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 투약량 팩은 적어도 하나의 추가적인 치료제를 포함하지만, FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자를 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 투약량 팩은 (i) FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자, 및 (ii) 적어도 하나의 추가적인 치료제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 에토포사이드, 토포테칸, VEGF 길항물질, 항-VEGF 항체, VEGF 트랩, 베바시주맙 또는 소라페닙이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 도세탁셀이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 페메트렉세드이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 시스플라틴이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 파클리탁셀이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 5-FU이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 빈크리스틴이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 베바시주맙이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 소라페닙이다. 일부 실시형태에서, 투약량 팩은 적어도 2가지의 추가적인 치료제를 포함하지만, FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자를 포함하지 않는다. 일부 실시형태에서, 적어도 2가지의 추가적인 치료제는 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 에토포사이드, 토포테칸, VEGF 길항물질, 항-VEGF 항체, VEGF 트랩, 베바시주맙 및 소라페닙으로부터 선택된다.
상기 기재된 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자의 FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 부분은 서열번호 1 내지 4로부터 선택된 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 융합 상대는 Fc, 알부민 및 폴리에틸렌 글라이콜로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 융합 상대는 Fc이다. 일부 실시형태에서, Fc는 서열번호 8 내지 10으로부터 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자는 서열번호 5 및 서열번호 6으로부터 선택된 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자는 서열번호 5 및 서열번호 6으로부터 선택된 서열로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 융합 상대는 Fc 및 폴리에틸렌 글라이콜이다. 일부 실시형태에서, 적어도 하나의 융합 상대는 폴리에틸렌 글라이콜이다.
특정 실시형태에서, 암은 전립선암, 유방암, 결장직장암, 폐암, 자궁내막암, 두경부암, 후두암, 간암, 신세포암, 교모세포종 또는 췌장암이다. 특정 실시형태에서, 암은 폐암이다. 특정 실시형태에서, 암은 신세포암이다. 특정 실시형태에서, 암은 결장암이다. 특정 실시형태에서, 암은 유방암이다. 특정 실시형태에서, 암은 자궁내막암이다. 특정 실시형태에서, 암은 전립선암이다.
본 명세서에 기재된 임의의 실시형태 또는 이것의 추가적인 치료제의 임의의 조합은 본 명세서에 기재된 본 발명의 임의의 및 모든 방법에 적용된다.
도 1은 실시예 1에 기재된 바와 같이 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 도세탁셀 단독, FGFR1-ECD.339-Fc와 도세탁셀을 순차적으로, 및 FGFR1-ECD.339-Fc와 도세탁셀을 동시에 투여한 마우스 내 평균 종양 용적을 도시한 도면.
도 2는 실시예 2에 기재된 바와 같이 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 페메트렉세드 단독(62.5 ㎎/㎏ 용량), 또는 FGFR1-ECD.339-Fc와 페메트렉세드(62.5 ㎎/㎏ 용량)를 투여한 마우스의 평균 종양 용적(a) 및 체중(b)을 도시한 도면.
도 3은 실시예 2에 기재된 바와 같이 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 페메트렉세드 단독(125 ㎎/㎏ 용량) 또는 FGFR1-ECD.339-Fc 및 페메트렉세드(125 ㎎/㎏ 용량)를 투여한 마우스의 평균 종양 용적(a) 및 체중(b)을 도시한 도면.
도 4는 실시예 2에 기재된 바와 같이 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 페메트렉세드 단독(250 ㎎/㎏ 용량) 또는 FGFR1-ECD.339-Fc 및 페메트렉세드(250 ㎎/㎏ 용량)를 투여한 마우스의 평균 종양 용적(a) 및 체중(b)을 도시한 도면.
도 5는 실시예 3A에 기재된 바와 같이 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 시스플라틴 단독, 또는 FGFR1-ECD.339-Fc와 시스플라틴의 조합을 투여한 마우스의 평균 종양 용적을 도시한 도면.
도 6은 실시예 3B에 기재된 바와 같이 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 파클리탁셀 단독, 또는 FGFR1-ECD.339-Fc와 파클리탁셀의 조합을 투여한 마우스의 평균 종양 용적을 도시한 도면.
도 7은 실시예 3C에 기재된 바와 같이 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 5-FU 단독 또는 FGFR1-ECD.339-Fc와 5-FU의 조합을 투여한 마우스의 평균 종양 용적을 도시한 도면.
도 8은 실시예 3D에 기재된 바와 같이, 도세탁셀의 2가지 상이한 투약량인 3 ㎎/㎏ (a) 및 10 ㎎/㎏ (b)에서, FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 도세탁셀 단독, 또는 FGFR1-ECD.339-Fc와 도세탁셀의 조합을 투여한 마우스의 평균 종양 용적을 도시한 도면.
도 9는 실시예 3E에 기재된 바와 같이 빈크리스틴의 두 가지 상이한 투약량인 제1일에 시작하는 1 ㎎/㎏ (a) 및 제19일에 시작하는 1.5 ㎎/㎏ (b)에서 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 빈크리스틴 단독, 또는 FGFR1-ECD.339-Fc과 빈크리스틴의 조합을 투여한 마우스에서 평균 종양 용적을 도시한 도면. 제19일에 시작하여 1.5 ㎎/㎏을 투여한 마우스의 평균 체중을 또한 나타낸다(c).
도 10은 실시예 3F에 기재된 바와 같이 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 카보플라틴 단독, 파클리탁셀 단독, 카보플라틴과 파클리탁셀의 조합, 및 FGFR1-ECD.339-Fc, 카보플라틴과 파클리탁셀의 조합을 투여한 마우스에서 평균 종양 용적을 도시한 도면.
도 11은 실시예 4A에 기재된 바와 같이 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 5-FU(10 ㎎/㎏)와 류코보린(10 ㎎/㎏)의 조합, 및 FGFR1-ECD.339-Fc, 5-FU(10 ㎎/㎏)와 류코보린(10 ㎎/㎏)의 조합(a); FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 5-FU(20 ㎎/㎏)와 류코보린(20 ㎎/㎏)의 조합, 및 FGFR1-ECD.339-Fc, 5-FU(20 ㎎/㎏)와 류코보린 (20 ㎎/㎏)의 조합(b); FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 5-FU(30 ㎎/㎏)와 류코보린(30 ㎎/㎏)의 조합, 및 FGFR1-ECD.339-Fc, 5-FU(30 ㎎/㎏)와 류코보린(30 ㎎/㎏)의 조합(c); FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 베바시주맙 단독 및 FGFR1-ECD.339-Fc와 베바시주맙의 조합(d); 및 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 베바시주맙, 5-FU와 류코보린의 조합, 및FGFR1-ECD.339-Fc, 베바시주맙, 5-FU와 류코보린의 조합(e)을 투여한 마우스에서 평균 종양 용적을 도시한 도면.
도 12는 실시예 4B에 기재된 바와 같이 옥살리플라틴의 상이한 투약량, 5 ㎎/㎏ (a), 10 ㎎/㎏ (b) 및 15 ㎎/㎏ (c)에서 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 옥살리플라틴 + 5-FU 및 류코보린(LV) 단독, 및 FGFR1-ECD.339-Fc와 옥살리플라틴의 조합 + 5-FU/LV를 투여한 마우스에서 평균 종양 용적을 도시한 도면.
도 13은 실시예 5에 기재된 바와 같이 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 독소루비신과 파클리탁셀의 조합, FGFR1-ECD.339-Fc, 독소루비신과 파클리탁셀의 조합을 투여한 마우스에서 평균 종양 용적을 도시한 도면.
도 14는 실시예 6에 기재된 바와 같이 FGFR1-ECD.339-Fc 단독, 키나제 삽입 도메인 수용체(Kinase Insert Domain 수용체, KDR)-ECD 융합 분자 단독, 및 FGFR1-ECD.339-Fc와 KDR-ECD 융합 분자의 조합을 투여한 마우스에서 평균 종양 용적을 도시한 도면.
본 명세서에 사용된 주제 부문은 단지 조직적 목적을 위한 것이며, 기재된 대상을 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
정의
달리 정의되지 않는다면, 본 발명과 관련되어 사용된 과학적 및 기술적 용어는 당업자에 의해 보통 이해되는 의미를 가질 것이다. 추가로, 내용에서 달리 필요로 되지 않는다면, 단수 용어는 복수를 포함하며 복수 용어는 단수를 포함한다.
재조합 DNA, 올리고뉴클레오타이드 합성, 조직 배양물 및 형질전환(예를 들어, 전기천공법, 리포펙션), 효소적 반응 및 정제 기법과 관련되어 사용되는 특정 기법은 당업계에 공지되어 있다. 다른 이러한 기법 및 과정은, 예를 들어 특히 문헌[Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989))]에 기재된다. 추가로, 화학적 합성, 화학적 분석, 약제학적 제조, 조제물 및 전달 및 환자의 치료를 위한 특정 기법은 또한 당업계에 공지되어 있다.
본 출원에서, "또는"의 사용은 달리 언급되지 않는다면, "및/또는"을 의미한다. 다중 종속항의 내용에서, "또는"의 사용은 단지 대안적으로 하나 이상의 앞에 있는 독립항 또는 종속항으로 되돌아가는 것을 지칭한다. 또한, "구성요소" 또는 "성분"과 같은 용어는 달리 구체적으로 언급되지 않는다면 하나 이상의 서브유닛을 포함하는 하나의 단위 및 구성요소 및 성분을 포함하는 구성요소와 성분을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 모든 숫자는 근삿값이며, 측정 오류 및 대략의 유효 숫자를 설명하기 위하여 변화될 수 있다. 특정의 측정된 양 앞에서 "약"의 사용은 단순한 불순물, 측정 오류, 인간 오류 및 통계적 변형뿐만 아니라 유효 숫자의 반올림에 기인하는 변형을 포함한다.
본 명세서에 따라 이용되는 바와 같이, 다음의 용어는 달리 표시되지 않는다면, 다음의 의미를 갖는 것으로 이해될 것이다:
용어 "핵산 분자" 및 "폴리뉴클레오타이드"는 상호호환적으로 사용될 수 있으며, 뉴클레오타이드의 폴리머를 지칭한다. 뉴클레오타이드의 이러한 폴리머는 천연 및/또는 비천연 뉴클레오타이드를 함유할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니지만, DNA, RNA 및 PNA를 포함한다. "핵산 서열"은 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 뉴클레오타이드의 선형 서열을 지칭한다.
용어 "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 폴리머를 지칭하기 위하여 상호호환적으로 사용되며, 최소 길이로 제한되지 않는다. 아미노산 잔기의 이러한 폴리머는 천연 또는 비천연 아미노산 잔기를 함유할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니지만, 펩타이드, 올리고펩타이드, 다이머, 트라이머 및 아미노산 잔기의 멀티머를 포함한다. 전장 단백질 및 이것의 단편은 둘 다 정의에 포함된다. 용어는 또한 폴리펩타이드, 예를 들어 글라이코실화, 시알산화, 아세틸화, 인산화 등의 발현후 변형을 포함한다. 더 나아가, 본 발명의 목적을 위해, "폴리펩타이드"는 단백질이 원하는 활성을 유지하는 한 천연 서열에 대해 결실, 첨가 및 치환(일반적으로 천연에서 보존적)과 같은 변형을 포함하는 단백질을 지칭한다. 이들 변형은 부위-지정 돌연변이유발을 통하는 것과 같이 유리될 수 있거나, 또는 단백질을 생성하는 숙주의 돌연변이 또는 PCR 증폭에 기인하는 오류를 통하는 것과 같이 우연적일 수 있다. 폴리펩타이드가 특정 아미노산 서열"로 이루어질" 때, 이는 여전히 번역후 변형, 예컨대 글라이코실화 및 시알산화를 함유할 수 있다.
용어 "FGFR1 세포밖 도메인"("FGFR1 ECD")은 전장 GFR1 ECD, FGFR1 ECD 단편 및 FGFR1 ECD 변이체를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "FGFR1 ECD"는 신호 펩타이드를 갖거나 또는 신호 펩타이드가 없는 세포내 및 막관통 도메인을 결여하는 FGFR1 폴리펩타이드를 지칭한다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD는 서열번호 1 및 2로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 인간 전장 FGFR1 ECD이다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "전장 FGFR1 ECD"는 세포밖 도메인의 최종 아미노산으로 연장되는 FGFR1 ECD를 지칭하며, N-말단의 신호 펩타이드를 포함하거나 또는 포함하지 않을 수 있다. 본 명세서에 정의되는 바와 같이, 전장 FGFR1 ECD의 최종 아미노산은 위치 353에 있다. 따라서, 인간 전장 FGFR1 ECD는 서열변호 2(성숙 형태)에 대해 또는 서열변호 1(신호 펩타이드를 가짐)에 대해 대응하는 아미노산 서열로 이루어질 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "FGFR1 ECD 단편"은 전장 ECD의 N 및/또는 C 말단으로부터 결실된 하나 이상의 잔기를 갖는 FGFR1 ECD를 지칭하는데, 이는 FGF-2에 결합되는 능력을 보유한다. FGFR1 ECD 단편은 N-말단의 신호 펩타이드를 포함할 수도 있고, 또는 포함하지 않을 수도 있다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 단편은 서열변호 4(성숙 형태)에 대해 또는 서열변호 3(신호 펩타이드를 가짐)에 대해 대응하는 아미노산 서열을 갖는 인간 FGFR1 ECD 단편이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 용어 "FGFR1 ECD 변이체"는 아미노산 첨가, 결실 및 치환을 함유하는 FGFR1 ECD를 지칭하는데, 이는 FGF-2에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 이러한 변이체는 모 FGFR1 ECD에 대해 적어도 90%, 92%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일할 수 있다. 두 폴리펩타이드의 동일성 %는 유사성을 결정하기 위한 디폴트 세팅을 갖는 Bestfit 프로그램을 사용하여 두 폴리펩타이드의 아미노산 서열을 비교함으로써 유사성 스코어에 의해 측정될 수 있다. 문헌[Smith and Waterman, Advances in Applied Mathematics 2:482-489 (1981)]의 국소 상동성 알고리즘을 사용하여 두 서열 사이의 유사성의 최상의 절편을 발견한다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 변이체는 서열번호 4의 서열에 대해 적어도 95% 동일성이 있다.
FGFR1 ECD 폴리펩타이드의 기준 아미노산 서열에 대해 적어도, 예를 들어 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드는, 폴리펩타이드 서열이 기준 폴리펩타이드의 각 100개 아미노산 당 5개까지의 아미노산 서열 변형을 포함할 수 있는 것을 제외하고 폴리펩타이드의 아미노산 서열이 기준 서열과 동일한 것이다. 다시 말해서, 기준 서열에서 아미노산 잔기의 5%까지 기준 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 얻는 것은, 기준 서열에서 전체 아미노산 잔기의 5%까지 다른 아미노산 또는 다수의 아미노산으로 치환되거나 또는 결실될 수 있고, 기준 서열 내로 삽입될 수도 있다. 기준 서열의 이런 변경은 기준 아미노산 서열의 N- 또는 C-말단 위치에서 또는 해당 말단 위치 사이의 어디에서나 일어날 수 있고, 기준 서열 내 잔기 중에서 개별적으로 또는 기준 서열 내 하나 이상의 연속 그룹에서 사이에 배치될 수 있다.
실행적 문제로서, 임의의 특정 폴리펩타이드가, 예를 들어 서열목록에서 제시되는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 또는 폴리펩타이드 서열에 대해 적어도 70%, 80%, 90% 또는 95% 동일한지 여부는 Bestfit 프로그램과 같은 공지된 컴퓨터 프로그램을 사용하여 통상적으로 결정될 수 있다. 특정 서열이 본 발명에 따른 기준 서열에 대해, 예를 들어 95% 동일한지 여부를 결정하기 위한 Bestfit 또는 다른 서열 정렬 프로그램을 사용할 때, 변수는 물론, 동일성%가 기준 아미노산 서열의 전장에 걸쳐 계산되고, 기준 서열에서 아미노산 잔기 전체 수의 5%까지의 상동성에서 갭이 허용된다는 것을 제시한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 용어 "hFGFR1 - ECD .353" 및 "hFGFR1 .353"은 서열번호 1(신호 펩타이드를 가짐)에 대해 또는 서열번호 2(신호 펩타이드가 없음; 성숙 형태)에 대해 대응하는 전장 인간 FGFR1 ECD를 지칭하기 위하여 상호호환적으로 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 용어 "hFGFR1 - ECD .339" 및 "hFGFR1 .339"는 서열번호 3(신호 펩타이드를 가짐)에 대해 또는 서열번호 4(신호 펩타이드가 없음; 성숙 형태)에 대해 대응하는 인간 FGFR1 ECD를 지칭하기 위하여 상호호환적으로 사용될 수 있다.
추가적인 hFGFR1 ECD는, 예를 들어 미국특허 제7,678,890호에 기재되며, 이는 그것의 전문이 임의의 목적을 위하여 본 명세서에 참조로서 포함된다.
용어 "FGFR1 ECD 융합 분자"는 FGFR1 ECD, 및 하나 이상의 "융합 상대"를 포함하는 분자를 지칭한다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및 융합 상대는 공유적으로 연결된다("융합된다"). 융합 상대가 또한 폴리펩타이드("융합 상대 폴리펩타이드")라면, FGFR1 ECD 및 융합 상대 폴리펩타이드는 연속적 아미노산 서열의 일부이며, 융합 상대 폴리펩타이드는 FGFR1 ECD의 N 말단 또는 C 말단 중 하나에 연결될 수 있다. 이러한 경우에, FGFR1 ECD 및 융합 상대 폴리펩타이드는 FGFR1 ECD와 융합 상대 폴리펩타이드("FGFR1 ECD 융합 단백질") 둘 다를 암호화하는 암호 서열로부터 단일 폴리펩타이드로서 번역될 수 있다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및 융합 상대는, 예를 들어 펩타이드 결합 이외의 화학적 결합과 같은 다른 수단을 통해 공유적으로 연결된다. 다른 분자(예를 들어, 융합 상태)에 폴리펩타이드를 공유적으로 연결시키는 다수의 공지된 방법이 사용될 수 있다. 다른 실시형태에서, FGFR1 ECD 및 융합 상대는 "링커"를 통해 융합될 수 있는데, 이는 적어도 하나의 아미노산 또는 화학적 모이어티(moiety)로 구성된다.
일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 폴리펩타이드 및 융합 상대는 비공유적으로 연결된다. 일부 이러한 실시형태에서, 그것들은, 예를 들어 결합쌍을 사용하여 연결될 수 있다. 대표적인 결합쌍은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 바이오틴과 아비딘 또는 스트렙타비딘, 항체 및 그것의 항원 등을 포함한다.
대표적인 융합 상대는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 면역글로뷸린 Fc 도메인, 알부민 및 폴리에틸렌 글라이콜을 포함한다. 일부 대표적인 Fc 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 8 내지 10에 나타낸다. 일부 실시형태에서, Fc에 융합된 FGFR1 ECD는 "hFGFR1 ECD - Fc"로서 지칭된다. 일부 실시형태에서, Fc 도메인은 IgG1 Fc, IgG2 Fc, IgG3 Fc 및 IgG4 Fc로부터 선택된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 용어 "hFGFR1 - ECD .339- Fc" 및 "hFGFR1.339-Fc"는 서열번호 6(신호 펩타이드가 없음, 성숙 형태) 및 서열번호 5(신호 펩타이드를 가짐)로부터 선택된 아미노산 서열을 지칭하기 위하여 상호호환적으로 사용될 수 있다. hFGFR1-ECD.339-Fc로 치료할 수 있는 비제한적인 대표적 암은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 비소세포 폐암, 결장암, 유방암, 위암, 두경부암, 전립선암, 자궁내막암, 육종, 소세포 폐암, 난소암, 카포시 육종, 호지킨병, 백혈병, 비호지킨 림프종, 신경아세포종(뇌암), 횡문근육종, 윌름 종양, 급성 림프구성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 방광암, 고환암, 림프종, 생식세포종양, 결장 및 직장의 암, 위장관암, 갑상선 암, 다발성 골수종, 췌장암, 중피종, 악성 흉막 중피종, 혈액/림프암, 악성 복막 중피종, 식도암, 신세포 암종, 교모세포종 다형성, 및 간암을 포함한다.
용어 "신호 펩타이드"는 포유류 세포로부터 폴리펩타이드의 분비를 용이하게 하는 폴리펩타이드의 N 말단에 위치된 아미노산 잔기의 서열을 지칭한다. 신호 펩타이드는 성숙 단백질을 형성하는 포유류 세포로부터 폴리펩타이드를 내보낼 때 절단될 수 있다. 신호 펩타이드는 천연 또는 합성일 수 있고, 그것들은 그것들이 부착되는 단백질에 대해 비상동성 또는 상동성일 수 있다. 대표적인 신호 펩타이드는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 예를 들어 서열번호 7의 아미노산 서열과 같은 FGFR1 신호 펩타이드를 포함한다. 대표적인 신호 펩타이드는 또한 비상동 단백질로부터의 신호 펩타이드를 포함한다. "신호 서열"은 신호 펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 지칭한다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD는 신호 펩타이드가 없다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD는 적어도 하나의 신호 펩타이드를 포함하는데, 이는 천연 FGFR1 신호 펩타이드 또는 비상동 신호 펩타이드일 수 있다.
용어 "벡터"는 숙주 세포에서 전파될 수 있는 클로닝된 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드를 함유하도록 유전자조작될 수 있는 폴리뉴클레오타이드를 기재하기 위하여 사용된다. 벡터는 다음의 구성요소 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 복제원점, 관심의 폴리펩타이드의 발현을 조절하는 하나 이상의 조절 서열(예를 들어, 프로모터 및/또는 인핸서) 및/또는 하나 이상의 선택가능한 마커 유전자(예를 들어, 항생물질 내성 유전자 및 비색분석법에 사용될 수 있는 유전자, 예를 들어, β-갈락토시다제). 용어 "발현 벡터"는 숙주 세포에서 관심의 폴리펩타이드를 발현시키기 위하여 사용되는 벡터를 지칭한다.
"숙주 세포"는 벡터 또는 단리된 폴리뉴클레오타이드의 수용인일 수 있거나 또는 수용인이었던 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 원핵 세포 또는 진핵 세포일 수 있다. 대표적인 진핵 세포는 포유류 세포, 예컨대 영장류 또는 비-영장류 동물 셀포; 진균 세포; 식물 세포; 및 곤충 세포를 포함한다. 대표적인 포유류 세포는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 293 및 CHO 세포, 및 그것의 유도체, 예컨대 293-6E 및 DG44 세포를 각각 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "단리된"은 자연상태에서 전형적으로 발견되는 성분 중 적어도 일부로부터 분리된 분자를 지칭한다. 예를 들어, 폴리펩타이드는 그것이 생성되는 세포 성분 중 적어도 일부로부터 분리될 때 "단리된"으로서 지칭된다. 폴리펩타이드가 발현 후 세포에 의해 분리되는 경우, 생성된 세포로부터 폴리펩타이드를 함유하는 상청액을 물리적으로 분리시키는 것은 폴리펩타이드를 "단리시키는 것"으로 고려된다. 유사하게, 폴리뉴클레오타이드는 더 큰 폴리뉴클레오타이드(예를 들어 DNA 폴리뉴클레오타이드 경우에 게놈 DNA 또는 미토콘드리아 DNA)의 부분이 아닐 때 "단리된"으로 지칭되며, 이는 전형적으로 자연에서 발견되거나 또는 그것이 생성되는 세포 성분의 적어도 일부로부터 분리되고, 예를 들어RNA 폴리뉴클레오타이드의 경우에 생성된다. 따라서, 숙주 세포 내부의 벡터에 함유된 DNA 폴리뉴클레오타이드는 폴리뉴클레오타이드가 자연에서 해당 벡터 내에서 발견되지 않는다면 "단리된"으로서 지칭될 수 있다.
용어 "항- 종양성 조성물"은 적어도 하나의 활성 치료제, 예를 들어, "항암제"를 포함하는 암을 치료하는데 유용한 조성물을 지칭한다. 치료제(항암제)의 예는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 예를 들어 화학치료제, 성장억제제, 세포독성제, 방사선 치료에 사용되는 작용제(agent), 항-혈관생성제, 아포토시스 작용제, 항-튜뷸린 작용제 및 암을 치료하기 위한 다른 작용제, 예컨대 항-VEGF 항체(예를 들어, 베바시주맙, AVASTIN(등록상표)), 항-HER-2 항체(예를 들어, 트라스투주맙, HERCEPTIN(등록상표)), 항-CD20 항체(예를 들어, 리툭시맙, RITUXAN(등록상표)), 표피성장인자 수용체(epidermal growth factor receptor, EGFR) 길항물질(예를 들어, 티로신 키나제 억제제), HER1/EGFR 억제제(예를 들어, 엘로티닙(TARCEVA(등록상표)), 혈소판 유래 성장 인자 억제제(예를 들어, GLEEVEC(등록상표)(이마티닙 메실레이트(Imatinib Mesylate))), COX-2 억제제(예를 들어, 셀레콕십), 인터페론, 사이토카인, 다음의 표적 ErbB2, ErbB3, ErbB4, PDGFR-베타, BlyS, APRIL, BCMA 또는 VEGF 수용체(들) 중 하나 이상에 결합되는 길항물질(예를 들어, 중화 항체), TRAIL/Apo2 및 다른 생활성 및 유기 화학 작용제 등을 포함한다. 이들의 조합은 또한 본 발명에 포함된다.
"화학치료제"는 암 치료에 유용한 화학적 화합물을 지칭한다. 화학치료제의 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 사이클로포스파마이드(CYTOXAN(등록상표)); 알킬 설포네이트, 예컨대 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카보쿠온(carboquone), 메튜레도파 및 유레도파; 에틸렌이민 및 알트레타민을 포함하는 메틸아멜아민, 트라이에틸렌아민, 트라이에틸렌포스포아마이드, 트라이에틸렌티오포스포아마이드 및 트라이메틸로멜라민; 아세토게닌(특히, 불라탁신 및 불라탁시논); 델타-9-테트라하이드로칸나비놀(드로나비놀, MARINOL(등록상표)); 베타-라파촌; 라파콜; 콜히친; 베툴린산; 캄토테신(합성 유사체 토포테칸(HYCAMTIN(등록상표)을 포함), CPT-11(이리노테칸, CAMPTOSAR(등록상표)), 아세틸캄토테신, 스코폴렉틴, 및 9-아미노캄토테신); 브리오스타틴; 칼릴스타틴; CC-1065(그것의 아도젤레신, 카젤레신 및 바이젤레신 합성 유사체를 포함); 포도필로톡신; 포도필린산; 테니포사이드; 크립토피신(특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1을 포함); 엘레유테로빈; 판크라티스타틴; 살코딕타인(sarcodictyin); 스폰지스타틴(spongistatin); 질소 머스터드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파마이드, 에스트라무스틴, 이폽스파마이드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비신, 펜에스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파마이드, 유라실 머스터드; 나이트로소유레아, 예컨대 카무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라니무스틴; 항생물질, 예컨대 엔다이인 항생물질(예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가I1(예를 들어, 문헌[Nicolaou et al., Angew . Chem Intl . Ed. Engl ., 33: 183-186 (1994))]을 참조; CDP323, 경구 알파-4 인테그린 억제제; 다이네미신 A를 포함하는 다이네미신; 에스페라미신;뿐만 아니라 네오카지노스타틴 발색단 및 관련된 색소단백질 엔다이인 항생물질 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 오트라마이신(authramycin), 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라바이신, 카미노마이신, 카지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다오노류비신, 데토류비신, 6-다이아조-5-옥소-L-놀류신, 독소루비신(ADRIAMYCIN(등록상표), 모폴리노-독소루비신, 시아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 독소루비신 HCl 리포좀 주입(DOXIL(등록상표)을 포함), 리포좀 독소루비신 TLC D-99(MYOCET(등록상표)), 페길화된(pegylated) 리포좀 독소루비신(CAELYX(등록상표)), 및 데옥시독소루비신), 에피류비신, 에소류비신, 이다류비신, 마셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도류비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 튜버시딘, 유베니멕스, 지노스타틴, 조류비신; 항-대사물질, 예컨대 메토트렉세이트, 젬시타빈(GEMZAR(등록상표)), 페메트렉세드(ALIMTA(등록상표)); 테가푸르(UFTORAL(등록상표)), 카페시타빈(XELODA(등록상표)), 에포틸론 및 5-플루오로유라실(5-FU); 폴산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트라이메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자유리딘, 카모푸르, 사이타라빈, 다이데옥시유리딘, 독시플루리딘, 에녹시타빈, 플록수리딘; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스톨락톤; 항-아드레날, 예컨대 아미노글루테티마이드, 미토탄, 트라이로스탄; 폴산 보충제, 예컨대 폴린산; 아세갈락톤; 알도포스파마이드 글라이코사이드; 아미노에뷸린산; 에닐유라실; 암사크린; 베스트라뷰실; 비산트렌; 에다트렉세이트; 데포파민; 데메콜신; 다이아지쿠온(diaziquone); 엘포니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 나이트레이트; 하이드록시유레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라류비신; 로속산트론; 2-에틸하이드라자이드; 프로카바진; PSK(등록상표) 다당류 복합체(오리건주 유진에 소재한 JHS Natural Products); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게마늄; 테누아존산; 트라이아지쿠온; 2,2',2'-트라이클로로트라이에틸아민; 트라이코테센(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 유레탄; 빈데신(ELDISINE(등록상표), FILDESIN(등록상표)); 다카바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가사이토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 티오테파; 탁소이드, 예를 들어, 파클리탁셀(TAXOL(등록상표)), 파클리탁셀(ABRAXANE(상표명))의 알부민-유전자조작된 나노입자 조제물 및 도세탁셀(TAXOTERE(등록상표)); 클로람부실; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 작용제, 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴(예를 들어, ELOXATIN(등록상표)), 및 카보플라틴; 튜불린 폴리머화가 미세소관을 형성하는 것을 방지하는 빈카스, 예를 들어 빈블라스틴(VELBAN(등록상표)), 빈크리스틴(ONCOVIN(등록상표)), 빈데신(ELDISINE(등록상표), FILDESIN(등록상표)) 및 빈오렐빈(NAVELBINE(등록상표)); 에토포사이드(VP-16); 이포스파마이드; 미톡산트론; 류코보린; 노반트론; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 토포아이소머라제 억제제 RFS 2000; 다이플루오로메틸올니틴(difluoromethylornithine, DMFO); 레티노이드, 예컨대 벡사로텐(TARGRETIN(등록상표))을 포함하는 레티노산; 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트(예를 들어, BONEFOS(등록상표) 또는 OSTAC(등록상표)), 에티드로네이트(DIDROCAL(등록상표)), NE-58095, 졸레드론산/졸레드로네이트(ZOMETA(등록상표)), 알렌드로네이트(FOSAMAX(등록상표)), 파미드로네이트(AREDIA(등록상표)), 틸루드로네이트(SKELID(등록상표)), 또는 리세드로네이트(ACTONEL(등록상표)); 트록사시타빈(1,3-다이옥솔란 뉴클레오사이드 사이토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 특히 비정상 세포 증식에 연루된 신호처리 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 것, 예를 들어, PKC-알파, Raf, H-Ras 및 표피성장인자 수용체(EGF-R); 백신, 예컨대 THERATOPE(등록상표) 백신 및 유전자 치료 백신, 예를 들어, ALLOVECTIN(등록상표) 백신, LEUVECTIN(등록상표) 백신, 및 VAXID(등록상표) 백신; 토포아이소머라제 1 억제제(예를 들어, LURTOTECAN(등록상표)); rmRH(예를 들어, ABARELIX(등록상표)); BAY439006(소라페닙, NEXAVAR(등록상표); Bayer); SU-11248(수니티닙, SUTENT(등록상표), Pfizer); 페리포신, COX-2 억제제(예를 들어 셀레콕십 또는 에토리콕십), 프로테오좀 억제제(예를 들어 PS341); 보테조밉(VELCADE(등록상표)); CCI-779; 티피파닙(R11577); 오라페닙, ABT510; Bcl-2 억제제, 예컨대 오블리머센 나트륨(GENASENSE(등록상표)); 픽산트론; EGFR 억제제(이하의 정의를 참조); 티로신키나제 억제제(이하의 정의를 참조); 세린-트레오닌 키나제 억제제, 예컨대 라파마이신(시롤리무스, RAPAMUNE(등록상표)); 파네실트랜스퍼라제 억제제, 예컨대 로나파닙(SCH 6636, SARASAR(상표명)); 및 약제학적으로 허용가능한 염 또는 상기 중 어떤 것의 유도체;뿐만 아니라 상기 중 2 이상의 조합, 예컨대 사이클로포스파마이드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니솔론의 조합치료를 위한 약어인 CHOP; 및 5-FU 및 류코보린과 조합된 옥살리플라틴(ELOXATIN(상표명))을 지니는 치료 섭생에 대한 약어인 FOLFOX를 포함한다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 화학치료제는 암의 성장을 촉진시킬 수 있는 호르몬의 효과를 조절하거나, 감소시키거나, 차단하거나 또는 억제하도록 작용하는 "항-호르몬제" 또는 "내분비 치료제"를 포함한다. 이에 제한되는 것은 아니지만, 타목시펜(NOLVADEX(등록상표)), 4-하이드록시타목시펜, 토레미펜(FARESTON(등록상표)), 이독시펜, 드롤록시펜, 랄록시펜(EVISTA(등록상표)), 트라이옥시펜, 케옥시펜, 및 SERM3와 같은 선택적 에스트로겐 수용체 조절자(selective estrogen receptor modulator, SERM); 작용물질(agonist) 특성이 없는 순수한 항-에스트로겐, 예컨대 플베스트란트(fulvestrant)(FASLODEX(등록상표)) 및 EM800(이러한 작용제는 에스트로겐 수용체(estrogen receptor, ER) 다이머화를 차단하고, DNA 결합을 억제하며, ER 턴오버를 증가시키고/시키거나 ER 수준을 억제할 수 있음); 포메스탄 및 엑세메스탄(AROMASIN(등록상표))과 같은 스테로이드성 아로마타제 억제제를 포함하는 아로마타제 억제제, 및 비스테로이드성 아로마타제 억제제, 예컨대 아나스트라졸(ARIMIDEX(등록상표)), 레트로졸(FEMARA(등록상표)) 및 아미노글루테티마이드를 포함하는 혼합된 작용물질/길항물질 프로파일을 갖는 항-에스트로겐을 포함하는 호르몬 그 자체일 수 있고, 다른 아로마타제 억제제는 보로졸(RIVISOR(등록상표)), 메게스트롤 아세테이트(MEGASE(등록상표)), 파드로졸 및 4(5)-이미다졸; 류프롤라이드(LUPRON(등록상표) 및 ELIGARD(등록상표)), 고세렐린, 뷰세렐린 및 트라이프테렐린을 포함하는 황체형성 호르몬-방출 호르몬 작용물질; 메게스트롤 아세테이트 및 메드록시프로게스테론 아세테이트와 같은 프로게스틴, 다이에틸스틸베스트롤 및 프레마린과 같은 에스트로겐 및 플루옥시메스테론과 같은 안드로겐/레티노이드, 모든 트랜스레티논산 및 펜레티나이드를 포함하는 성 스테로이드; 오나프리스톤; 항-프로게스테론; 에스트로겐 수용체 하향 조절자(estrogen receptor down-regulator: ERD); 플루타마이드, 닐루타마이드 및 비칼루타마이드와 같은 항-안드로겐; 및 상기 중 어떤 것의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체;뿐만 아니라 상기 중 2 이상의 조합을 포함한다.
"혈관생성 인자 또는 작용제"는 혈관의 발생을 자극하는, 예를 들어 혈관생성, 내피 세포 성장, 혈관의 안정성 및/또는 맥관형성 등을 촉진하는 성장 인자를 지칭한다. 예를 들어, 혈관생성 인자는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 예를 들어, VEGF 및 VEGF 패밀리의 구성원(VEGF-B, VEGF-C 및 VEGF-D), PlGF, PDGF 패밀리, 섬유아세포 성장인자 패밀리(FGF), TIE 리간드(안지오포이에틴), 에프린, 델타-유사 리간드 4(DLL4), del-1, 섬유아세포 성장 인자: 산성(aFGF) 및 염기성(bFGF), 폴리스타틴, 과립구집락자극인자(granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF), 간세포성장인자(hepatocyte growth factor, HGF)/산란인자(scatter factor, SF), 인터류킨-8(IL-8), 렙틴, 미드킨, 뉴로필린, 태반성장인자, 혈소판-유래 내피 세포 성장인자(platelet-derived endothelial cell growth factor, PD-ECGF), 혈소판-유래 성장인자, 특히 PDGF-BB 또는 PDGFR-베타, 플레이오트로핀(pleiotrophin, PTN), 프로그라뉼린, 프롤리페린, 형질전환 성장 인자-알파(TGF-알파), 형질전환 성장 인자-베타(transforming growth factor-beta, TGF-beta), 종양 괴사 인자(tumor necrosis factor-alpha, TNF-alpha) 등을 포함한다. 또한 상처 치유를 가속화하는 인자, 예컨대 성장 호르몬, 인슐린 유사 성장 인자(insulin-like growth factor-I, IGF-I), VIGF, 상피 성장 인자(epidermal growth factor, EGF), CTGF 및 그것의 구성원, 및 TGF-알파 및 TGF-베타를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Klagsbrun and D'Amore (1991) Annu . Rev. Physiol . 53:217-39; Streit and Detmar (2003) Oncogene 22:3172-3179; Ferrara & Alitalo (1999) Nature Medicine 5(12):1359-1364; Tonini et al. (2003) Oncogene 22:6549-6556 (예를 들어, 알려진 혈관생성 인자를 열거하는 표 1); 및 Sato (2003) Int . J. Clin . Oncol . 8:200-206]을 참조한다.
"항- 혈관생성제" 또는 "혈관생성 억제제"는 소분자량 물질, 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 억제 RNA(RNAi 또는 siRNA)를 포함), 폴리펩타이드, 단리된 단백질, 재조합 단백질, 항체, 또는 이들의 컨쥬게이트 또는 융합 단백질을 지칭하는데, 이는 직접적으로 또는 간접적으로 혈관생성, 맥관형성, 또는 원치않는 혈관투과성을 억제한다. 항-혈관생성제는 혈관생성 인자 또는 그것의 수용체의 혈관생성 활성에 결합되거나 또는 차단하는 해당 작용제를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 항-혈관생성제는 상기 정의한 바와 같은 혈관생성제에 대한 항체 또는 다른 길항물질, 예를 들어 ZALTRAP(상표명)(아플리버셉트(Aflibercept))와 같은 VEGF-A에 결합하는 융합 단백질, AVASTIN(등록상표)(베바시주맙)과 같은 VEGF-A에 대한 항체 또는 VEGF-A 수용체(예를 들어, KDR 수용체 또는 Flt-1 수용체)에 대한 항체, GLEEVEC(등록상표)(이마티닙 메실레이트)와 같은 항-PDGFR 억제제, VEGF 수용체 신호처리를 차단하는 소분자(예를 들어, PTK787/ZK2284, SU6668, SUTENT(등록상표)/SU11248(수니티닙 말레이트), AMG706, 또는 예를 들어 국제특허출원 WO 2004/113304에 기재된 것)이다. 항-혈관생성제는 또한 천연 혈관생성 억제제, 예를 들어, 안지오스타틴, 엔도스타틴 등을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Klagsbrun and D'Amore (1991) Annu . Rev. Physiol . 53:217-39; Streit and Detmar (2003) Oncogene 22:3172-3179(예를 들어, 악성 흑색종에서 항-혈관생성을 열거하는 표 3); Ferrara & Alitalo (1999) Nature Medicine 5(12):1359-1364; Tonini et al. (2003) Oncogene 22:6549-6556(예를 들어, 알려진 항-혈관생성 인자를 열거하는 표 2); 및 Sato (2003) Int . J. Clin . Oncol . 8:200-206(예를 들어, 임상시험에서 사용되는 항-혈관생성제를 열거하는 표 1)]을 참조한다.
"도세탁셀"은 1,7β,10β-트라이하이드록시-9-옥소-5β,20-에폭시탁스-11-엔-2α,4,13α-트라이일 4-아세테이트 2-벤조에이트 13-{(2R,3S)-3-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-2-하이드록시-3-페닐프로파노에이트}를 지칭하는데, 일부 실시형태에서, 이는 상표명 Taxotere(등록상표) 하에 시판될 수 있다. 일부 실시형태에서, 도세탁셀은 유방암 및 비소세포 폐암으로부터 선택된 적어도 하나의 암을 치료하는데 효과적이다. 도세탁셀로 치료될 수 있는 비제한적인 대표적 암은 유방암, 결장직장암, 폐암, 난소암, 전립선암, 간암, 신세포암, 위암, 두경부암 및 흑색종을 포함한다.
"파클리탁셀"은 (2α,4α,5β,7β,10β,13α)-4,10-비스(아세틸옥시)-13-{[(2R,3S)-3-(벤조일아미노)-2-하이드록시-3-페닐프로파노일]옥시}-1,7-다이하이드록시-9-옥소-5,20-에폭시탁스-11-엔-2-일 벤조에이트를 지칭하는데, 이는 일부 실시형태에서, 상표명 TAXOL(등록상표) 하에 시판될 수 있다. 파클리탁셀로 치료될 수 있는 비제한적인 대표적 암은 유방암, 폐암 및 카포시 육종을 포함한다.
"카보플라틴"은 시스-다이아민(사이클로뷰탄-1,1-다이카복실레이트-O,O')플래티늄(II)을 지칭하는데, 이는 일부 실시형태에서, 상표명 Paraplatin(등록상표) 하에 시판될 수 있다. 파클리탁셀로 치료될 수 있는 비제한적인 대표적 암은 난소암, 비소세포 폐암, 고환암, 위암 및 방광암을 포함한다.
"옥살리플라틴"은 [(1R,2R)-사이클로헥산-1,2-다이아민](에탄다이오에이트-O,O')플래티늄(II)을 지칭하는데, 이는 일부 실시형태에서, 상표명 Eloxatin(등록상표) 하에 시판될 수 있다. 옥살리플라틴으로 치료될 수 있는 비제한적인 대표적 암은 결장직장암, 위암 및 난소암을 포함한다.
"시스플라틴"은 (SP-4-2)-다이아민다이클로리도플래티늄을 지칭한다. 시스플라틴으로 치료될 수 있는 비제한적인 대표적 암은 육종, 소세포 폐암, 난소암, 방광암, 고환암, 림프종 및 생식세포종양을 포함한다.
"빈크리스틴"은 메틸 (1R,9R,10S,11R,12R,19R)-11-(아세틸옥시)-12-에틸-4-[(13S,15S,17S)-17-에틸-17-하이드록시-13-(메톡시카보닐)-1,11-다이아자테트라사이클로[13.3.1.04,12.05,10]노나데카-4(12),5,7,9-테트라엔-13-일]-8-포밀-10-하이드록시-5-메톡시-8,16-다이아자펜타사이클로[10.6.1.01,9.02,7.016,19]노나데카-2,4,6,13-테트라엔-10-카복실레이트를 지칭하는데, 이는 일부 실시형태에서, 상표명 Vincasar(등록상표) 하에 시판될 수 있다. 빈크리스틴으로 치료될 수 있는 비제한적인 대표적 암은 호지킨병, 백혈병, 비호지킨 림프종, 신경아세포종, 횡문근육종, 급성 림프구성 백혈병 및 윌름 종양을 포함한다.
"페메트렉세드"는 (S)-2-[4-[2-(4-아미노-2-옥소-3,5,7-트라이아자바이사이클로[4.3.0] 노나-3,8,10-트라이엔-9-일)에틸] 벤조일] 아미노펜탄다이온산을 지칭하는데, 이는 일부 실시형태에서, 상표명 Alimta(등록상표) 하에 시판될 수 있다. 페메트렉세드로 치료될 수 있는 비제한적인 대표적 암은 비소세포 폐암, 중피종 및 식도암을 포함한다.
"독소루비신"은 (8S,10S)-10-(4-아미노-5-하이드록시-6-메틸-테트라하이드로-2H-피란-2-일옥시)-6,8,11-트라이하이드록시-8-(2-하이드록시아세틸)-1-메톡시-7,8,9,10-테트라하이드로테트라센-5,12-다이온을 지칭하는데, 이는 일부 실시형태에서, 상표명 Adriamycin(등록상표) 하에 시판될 수 있다. 독소루비신으로 치료될 수 있는 비제한적인 대표적 암은 방광암, 유방암, 폐암, 난소암, 위암, 갑상선 암, 연조직 육종, 다발성 골수종, 호지킨병, 백혈병, 비호지킨 림프종, 신경아세포종, 육종 및 윌름 종양을 포함한다.
"5-FU" 및 "5- 플루오로유라실"은 5-플루오로-1H-피리미딘-2,4-다이온을 지칭하는데, 이는 일부 실시형태에서, 상표명 Adrucil(등록상표) 하에 시판될 수 있다. 5-FU로 치료될 수 있는 비제한적인 대표적 암은 결장직장암, 췌장암, 유방암, 식도암, 위암, 두경부암, 간세포암 및 난소암을 포함한다.
"류코보린"은 또한 폴린산으로서 공지되며, (S)-2-[4-[(2-아미노-5-포밀-4-옥소-5,6,7,8-테트라하이드로-1H-프테리딘-6-일)메틸아미노]벤조일] 아미노펜탄다이온산을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 류코보린은 5-플루오로유라실과 함께 투여된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "VEGF" 또는 "VEGF -A"는 165-아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자를 지칭하며, 자연적으로 생기는 대립유전자 및 이것의 가공 형태와 함께 문헌[Leung et al. (1989) Science 246:1306, 및 Houck et al. (1991) Mol . Endocrin, 5:1806]에 의해 기재된 121-, 189- 및 206- 아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자에 관한 것이다. 용어 "VEGF"는 또한 마우스, 래트 또는 영장류와 같은 비-인간 종으로부터의 VEGF를 지칭한다. 때때로 특이적 종으로부터의 VEGF는 인간 VEGF에 대한 hVEGF, 뮤린 VEGF에 대한 mVEGF 등과 같은 용어에 의해 표시된다. 용어 "VEGF"는 또한 165-아미노산 인간 혈관 내피 세포 성장 인자의 아미노산 8 내지 109 또는 1 내지 109를 포함하는 폴리펩타이드의 절단된(truncated) 형태를 지칭하기 위하여 사용된다. VEGF의 임의의 이러한 형태에 대한 기준은, 예를 들어 "VEGF(8-109)", "VEGF(1-109)", "VEGF-A109" 또는 "VEGF165"으로서 본 출원에서 확인될 수 있다. "절단된" 천연 VEGF에 대한 아미노산 위치는 천연 VEGF 서열에서 표시되는 것과 같이 넘버링된다. 예를 들어, 절단된 천연 VEGF에서 아미노산 위치 17(메티오닌)은 또한 천연 VEGF에서 위치 17(메티오닌)이다. 절단된 천연 VEGF는 천연 VEGF와 비슷한 KDR 및 Flt-1 수용체에 대한 결합 친화도를 가진다.
"VEGF 길항물질"은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 하나 이상의 VEGF 수용체에 그것의 결합을 포함하는 VEGF 활성을 중화시키거나, 차단하거나, 억제하거나, 없애거나, 감소시키거나 또는 방해할 수 있는 분자를 지칭한다. VEGF 길항물질은, 제한 없이, VEGF에 특이적으로 결합하는 항-VEGF 항체 및 이것의 항원-결합 단편, 수용체 분자 및 유도체를 포함함으로써, 하나 이상의 수용체, 항-VEGF 수용체 항체, VEGF 수용체 길항물질, 예컨대 VEGFR 티로신키나제의 소분자 억제제 및 VEGF에 결합하는 면역접합체(immunoadhesin), 예컨대 VEGF 트랩(예를 들어, 아플리버셉트)에 대한 그것의 결합을 봉쇄한다(sequestering). 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "VEGF 길항물질"은 구체적으로는 항체, 항체 단편, 다른 결합 폴리펩타이드, 펩타이드 및 VEGF에 결합하는 비-펩타이드 소분자를 포함하며, VEGF 활성을 중화시키거나, 차단하거나, 억제하거나, 없애거나, 감소시키거나 또는 방해할 수 있다. 따라서, 용어 "VEGF 활성"은 구체적으로는 VEGF의 VEGF 매개 생물학적 활성을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "VEGF 트랩"은 VEGF에 결합하는 융합 분자와 같은 단백질을 의미하며, VEGF 활성을 중화시키거나, 차단하거나, 억제하거나, 없애거나, 감소시키거나 또는 방해할 수 있다. VEGF 트랩의 예는 아플리버셉트이다.
용어 "항- VEGF 항체" 또는 "VEGF에 결합하는 항체"는 항체가 VEGF를 표적화하는 것에서 진단제 및/또는 치료제로서 유용한 충분한 친화도 및 특이성으로 VEGF에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 항-VEGF 항체는 누드 마우스에서 다양한 인간 종양 세포주의 성장을 억제하고(Kim et al., Nature 362:841-844 (1993); Warren et al., J. Clin . Invest. 95:1789-1797 (1995); Borgstrom et al., Cancer Res. 56:4032-4039 (1996); Melnyk et al., Cancer Res. 56:921-924 (1996)) 또한 허혈성 망막 장애의 모델에서 안구내 혈관생성을 억제한다. 문헌[Adamis et al., Arch. Ophthalmol. 114:66-71 (1996)]. 예를 들어, 항-VEGF 항체는 질병 또는 질환을 표적화하고 방해하는 치료제로서 사용될 수 있되, VEGF 활성이 관련된다. 예를 들어, 미국특허 제6,582,959호, 제6,703,020호; WO98/45332; WO 96/30046; WO94/10202, WO2005/044853; EP 0666868B1; 미국특허 출원 제20030206899호, 제20030190317호, 제20030203409호, 제20050112126호, 제20050186208호 및 제20050112126호; 문헌[Popkov et al., Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004)]; 및 WO2005012359호를 참조한다. 선택된 항체는 보통 VEGF에 대해 충분히 강한 결합 친화도를 가질 것이다. 예를 들어, 항체는 100 nM 내지 1 pM의 Kd 값으로 hVEGF에 결합할 수 있다. 항체 친화도는, 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 기반 분석(예컨대 국제특허출원 공개 제WO2005/012359호에 기재된 것과 같은 바이아코어(BIAcore) 분석); 효소-결합 면역흡착 분석법(enzyme-linked immunoabsorbent assay: ELISA); 및 경쟁 분석((예를 들어 RIA's)에 의해 결정될 수 있다. 항체는, 예를 들어 치료제로서 그것의 유효성을 평가하기 위하여 다른 생물학적 활성 분석이 실시될 수 있다. 이러한 분석은 당업계에 공지되어 있으며, 표적 항원 및 항체에 대해 의도된 용도에 의존한다. 예는 HUVEC 억제 분석; 종양 세포 성장 억제 분석(예를 들어, WO 89/06692에 기재된 것과 같음); 항체-의존적 세포의 세포독성(antibody-dependent cellular cytotoxicity: ADCC) 및 보체-매개 세포독성(complement-mediated cytotoxicity: CDC) 분석(미국특허 제5,500,362호); 및 작용물질 활성 또는 조혈작용 분석(WO 95/27062를 참조)을 포함한다. 항-VEGF 항체는 보통 VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D 또는 VEGF-E와 같은 다른 VEGF 상동체와 결합하지 않을 것이고, PlGF, PDGF 또는 bFGF와 같은 다른 성장인자와도 결합하지 않을 것이다.
한 실시형태에서, 항-VEGF 항체는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 하이브리도마 ATCC HB 10709에 의해 생성된 단클론성 항-VEGF 항체 A4.6.1; "rhuMAb VEGF" 또는 "AVASTIN(등록상표)"으로도 알려진 "베바시주맙"으로 알려진 항체를 포함하는 재조합 인간화된 항-VEGF 단클론성 항체(문헌[Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599]을 참조)와 동일한 에피토프에 결합하는 단클론성 항체를 포함한다. AVASTIN(등록상표)은 현재 상업적으로 입수가능하다. 베바시주맙으로 치료될 수 있는 비제한적인 대표적 암은 비소세포 폐암, 결장직장암, 유방암, 신세포암, 난소암, 교모세포종 다형성, 소아 골육종, 위암 및 췌장암을 포함한다. 베바시주맙은 인간 VEGF의 그것의 수용체에 대한 결합을 차단하는 뮤린 항체 A.4.6.1로부터의 돌연변이된 인간 IgG1 프레임워크 영역 및 항원-결합 상보성-결정 영역을 포함한다. 베바시주맙 및 다른 인간화된 항-VEGF 항체는 미국특허 제6,884,879호 및 제7,169,901호에서 추가로 기재된다. 추가적인 항-VEGF 항체는 국제특허출원 제WO2005/012359호 및 제WO2009/073160호; 미국특허 제7,060,269호, 제6,582,959호, 제6,703,020호; 제6,054,297호; WO98/45332호; WO 96/30046호; WO94/10202호; EP 0666868B1; 미국특허출원 공개 제2006009360호, 제20050186208호, 제20030206899호, 제20030190317호, 제20030203409호, 및 제20050112126호; 및 문헌[Popkov et al., Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004)]에서 기재된다.
용어 "피험체" 및 "환자"는 포유류를 지칭하기 위하여 본 명세서에서 상호호환적으로 사용된다. 일부 실시형태에서, 피험체 또는 환자는 인간이다. 다른 실시형태에서, 이에 제한되는 것은 아니지만, 설치류, 유인원, 고양이, 개, 말, 소, 돼지, 양, 염소, 포유류 실험실 동물, 포유류 농장 동물, 포유류 스포츠 동물 및 포유류 애완동물을 포함하는 다른 동물의 치료 방법이 또한 사용된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "암" 및 "종양"은 동물에서 임의의 비정상적 세포 또는 조직 성장 또는 증식을 지칭하는 상호호환가능한 용어이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "암" 및 "종양"은 고형암 및 혈액암/림프암을 포함하며, 또한 악성, 악성 전 및 양성(benign) 성장, 예컨대 이형성을 포함한다. 암의 예는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 암종, 림프종, 아세포종, 육종 및 백혈병을 포함한다. 더 구체적으로는 이러한 암의 비-제한적 예는 편평세포암, 소세포 폐암, 뇌하수체암, 식도암, 성상세포종, 연조직 육종, 비소세포 폐암, 폐의 선암종, 폐의 편평암종, 복막암, 간세포암, 위장관암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 결장직장암, 자궁내막암 또는 자궁 암종, 침샘 암종, 신장암, 신세포암, 간암, 전립선암, 음문암, 갑상선 암, 간암종, 뇌암, 자궁내막암, 고환암, 담관암, 쓸개 암종, 위암, 흑색종 및 다양한 유형의 두경부암을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "치료"는 인간을 포함하는 포유류에서 질환에 대한 치료제의 임의의 투여 또는 적용을 포함하며, 질환 또는 질환의 진행을 억제하는 것, 질환 또는 그것의 진행을 억제하거나 늦추는 것, 그것의 발생을 막는 것, 질환을 부분적으로 또는 완전히 없애는 것 또는 예를 들어 퇴행을 야기함으로써 질환을 치유하는 것, 상실되거나, 잃어버렸거나 또는 결함있는 기능을 회복하거나 또는 보수하는 것; 또는 비효율적인 과정을 자극하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, "치료"는 개개의 또는 치료되는 세포의 천연 과정을 변경하기 위한 시도에서 임상적 개입을 지칭하며, 예방을 위해 또는 임상적 병리 과정 동안 수행될 수 있다. 바람직한 치료효과는 질병의 발생 또는 재발을 방지하는 것, 증상의 완화, 질병의 임의의 직접적 또는 간접적 병적 측면의 결과를 줄이고, 전이를 예방하는 것, 질병 진행 속도를 감소시키는 것, 질병 상태의 완화 또는 경감, 및 차도 또는 개선된 예후를 포함한다.
분자 또는 분자 조합의 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 단독으로 또는 다른 치료와 조합될 때, 적어도 피험체의 서브세트에서 질환을 치료하고/하거나 종양 세포의 성장을 억제하기에 충분한 양을 의미한다. 특정 실시형태에서, 치료적 유효량은 투약량에서 및 필요한 시간 기간 동안 원하는 치료적 또는 예방적 결과를 달성하기 위해 유효한 양을 지칭한다. 본 발명의 FGFR1 융합 단백질의 치료적 유효량은 개체의 질병 상태, 연령, 성별 및 체중과 같은 인자 및 개체에서 원하는 반응을 유발하는 FGFR1 융합 단백질의 능력에 따라 다를 수 있다. 치료적 유효량은 또한 FGFR1 융합 단백질의 임의의 독성 또는 해로운 효과가 치료적으로 유리한 효과에 의해 더 커지는 것이다. 암의 경우에, 약물의 유효량은 암 세포 수를 감소시키고; 종양 크기를 감소시키며; 주변 기관에 암 세포 침윤을 억제하고(즉, 일정한 정도로 늦추고, 전형적으로는 중단시킴); 종양 전이를 억제하며(즉, 일정한 정도로 늦추고, 전형적으로는 중단시킴); 일정한 정도로 종양 성장을 억제하고; 종양을 치료하며/하거나 장애와 관련된 증상 중 하나 이상을 일정한 정도로 완화할 수 있다. 약물이 성장을 방지하고/하거나 존재하는 암 세포를 사멸시키는 정도로, 세포 증식 억제성 및/또는 세포독성일 수 있다.
"예방적 유효량"은 투약량에서 및 필요한 시간 기간 동안 원하는 예방 결과를 달성하기 위한 요효량을 지칭한다. 전형적으로, 필수적이지는 않지만, 예방 용량은 피험체에서 질병 전 또는 질병의 초기 단계에 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량 미만일 수 있다.
용어 "억제" 또는 "억제하다"은 임의의 표현형 특징의 감소 또는 중단 또는 해당 특징의 발생, 정도 또는 가능성의 감소 또는 중단을 지칭한다. 비제한적인 대표적 억제는 종양 성장의 억제를 포함한다.
본 명세서에서 "동시" 투약은 8시간 기간 이내에 2가지 치료 분자의 투여를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 2가지 치료 분자는 동시에 투여된다. 각 치료분자 용량의 적어도 일부가 1시간 이내에 투여된다면, 2가지 치료 분자는 동반하여(즉, 동시에) 투여되는 것으로 고려된다. 적어도 1 용량이 동시에 투여된다면, 하나 이상의 다른 용량이 동시에 투여되지 않는다고 해도, 2가지 치료 분자는 동시에 투여된다. 일부 실시형태에서, 동시 투여는 하나 이상의 다른 치료분자(들)의 투여를 중단시킨 후 하나 이상의 치료 분자(들)의 투여가 계속될 때, 투약 섭생을 포함한다.
하나 이상의 추가적인 치료제와 "조합된" 투여는 동시에(일제히를 포함) 및 임의의 순서로 연속된(즉, 순차적) 투여를 포함한다.
"약제학적으로 허용가능한 담체"는 비독성 고체, 반고체 또는 액체 충전제, 희석제, 캡슐화 재료, 조제 보조제 또는 피험체에게 투여를 위해 "약제학적 조성물"을 함께 포함하는 치료제와 함께 사용을 위한 당업계에서 통상적인 담체를 지칭한다. 약제학적으로 허용가능한 담체는 사용된 투약량 및 농도에서 수용자에게 비독성이며, 조제물의 다른 성분과 양립가능하다. 약제학적으로 허용가능한 담체는 사용된 조제물에 대해 적절하다. 예를 들어, 치료제가 경구로 투여된다면, 담체는 겔 캡슐일 수 있다. 치료제가 피하로 투여된다면, 담체는 이상적으로는 피부를 자극하지 않으며, 주사 부위 반응을 야기하지 않는다.
치료 조성물 및 방법
다른 치료제와 조합하여 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자를 사용하는 암 치료 방법
본 발명은 섬유아세포 성장인자 수용체 1(FGFR1) 세포밖 도메인(ECD) 또는 FGFR1 ECD 융합 분자와 하나 이상의 추가적인 항암 치료제의 조합 및 암 치료에서 이러한 조합의 용도를 특징으로 한다. 추가적인 항-암 치료의 예는, 제한 없이, 수술, 방사선 치료(방사선요법), 생물요법, 면역요법 및 화학요법 또는 이들 요법의 조합을 포함한다. 추가로, 세포독성제, 항-혈관생성 및 항-증식제는 FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자와 조합하여 사용될 수 있다. 해당 방법 및 용도 중 어떤 것의 특정 양태에서, 본 발명은 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 하나 이상의 화학치료제의 치료적 유효량을 이전에 치료되지 않은 암에 걸렸거나 또는 진단된 피험체에게 투여함으로써 암을 치료하는 단계를 제공한다. 다양한 화학치료제가 조합된 치료 방법 및 본 발명의 용도에서 사용될 수 있다. 고려되는 화학치료제의 대표적이고, 비제한적인 열거는 본 명세서에서 "정의" 및 "발명의 내용" 하에 제공된다. 다른 양태에서, 본 발명은 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 하나 이상의 항-혈관생성제(들)의 치료적 유효량을 이전에 치료되지 않은 암으로 진단된 피험체에게 투여함으로써 암을 치료하는 단계를 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 하나 이상의 VEGF 길항물질의 치료적 유효량을 이전에 치료되지 않은 암으로 진단된 피험체에게 투여함으로써 암을 치료하는 단계를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 화학치료제와 조합한 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 하나 이상의 VEGF 길항물질의 치료적 유효량을 이전에 치료되지 않은 암으로 진단된 피험체에게 투여함으로써 암을 치료하는 단계를 제공한다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 VEGF 길항물질은 항-VEGF 항체 및/또는 VEGF 트랩이다.
한 실시형태에서, 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 소라페닙, 에토포사이드, 토포테칸, VEGF 길항물질, 항-VEGF 항체, VEGF 트랩 및 베바시주맙으로부터 선택된 적어도 하나의 추가적인 치료제와 조합한 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자를 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 도세탁셀을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암치료방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 페메트렉세드를 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 파클리탁셀을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암치료방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 시스플라틴을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 빈크리스틴을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 5-FU를 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 에토포사이드를 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 토포테칸을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 VEGF 길항물질을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 항-VEGF 항체를 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 VEGF 트랩을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 베바시주맙을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 중 적어도 1 용량 및 적어도 하나의 추가적인 치료제의 적어도 1 용량은 동시에 투여된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자의 적어도 1용량 및 적어도 하나의 추가적인 치료제의 적어도 1 용량은 동시에(즉, 일제히) 투여된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자의 적어도 1 용량 및 적어도 2가지의 추가적인 치료제의 적어도 1용량은 동시에 또는 일제히 투여된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자의 적어도 1 용량 및 적어도 3가지의 추가적인 치료제의 적어도 1용량은 동시에 또는 일제히 투여된다. 다른 예에서, 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드 및 에토포사이드, 토포테칸, VEGF 길항물질, 항-VEGF 항체, VEGF 트랩, 소라페닙, 및 베바시주맙으로부터 선택된 적어도 하나의 추가적인 치료제와 조합한 FGFR1-ECD.339-Fc를 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암치료 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1-ECD.339-Fc 및 도세탁셀을 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 암치료 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, FGFR1-ECD.339-Fc의 적어도 1 용량 및 적어도 하나의 추가적인 치료제의 적어도 1용량은 동시에 투여된다. 일부 실시형태에서, FGFR1-ECD.339-Fc의 적어도 1 용량 및 적어도 하나의 추가적인 치료제의 적어도 1 용량은 동시에 투여된다.
FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자(예를 들어, FGFR1-ECD.339-Fc)를 포함하는 약제학적 조성물은 특이적 징후에 대해 치료적 유효량으로 투여된다. 치료적 유효량은 전형적으로 치료되는 피험체의 체중, 그 또는 그녀의 신체 또는 건강 상태, 치료되는 질환의 규모, 및/또는 치료되는 피험체의 연령에 의존한다. 일반적으로, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자(예를 들어, FGFR1-ECD.339-Fc)는 용량 당 약 50 ㎍/㎏ 체중 내지 약 100 ㎎/㎏ 체중 범위의 양으로 투여된다. 선택적으로, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자(예를 들어, FGFR1-ECD.339-Fc)는 용량 당 약 100 ㎍/㎏ 체중 내지 약 30 ㎎/㎏ 체중 범위의 양으로 투여될 수 있다. 더 선택적으로, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자(예를 들어, FGFR1-ECD.339-Fc)는 용량 당 약 0.5 ㎎/㎏ 체중 내지 약 20 ㎎/㎏ 체중 범위의 양으로 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자(예를 들어, FGFR1-ECD.339-Fc)는 약 8 ㎎/㎏ 체중 내지 약 20 ㎎/㎏ 체중의 용량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자(예를 들어, FGFR1-ECD.339-Fc)는 약 8 ㎎/㎏ 체중, 약 10 ㎎/㎏ 체중, 약 11 ㎎/㎏ 체중, 약 12 ㎎/㎏ 체중, 약 13 ㎎/㎏ 체중, 약 14 ㎎/㎏ 체중, 약 15 ㎎/㎏ 체중, 약 16 ㎎/㎏ 체중, 약 17 ㎎/㎏ 체중, 약 18 ㎎/㎏ 체중, 약 19 ㎎/㎏ 체중, 또는 약 20 ㎎/㎏ 체중의 용량으로 투여된다. FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자는 또한 상기 용량 중 하나로부터 다른 것까지의 범위에서 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 투약량은 1주 2회, 1주마다, 2주마다, 1주 내지 2주의 빈도로, 3주마다, 4주마다 또는 1개월마다 투여될 수 있다.
특정 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자의 투약량은 사용된 흡광계수(extinction coefficient, EC)에 의존하여 2가지 방법으로 계산될 수 있다. 흡광계수는 단백질의 글라이코실화가 고려되는지 여부에 따라서 다르다. 한 실시형태에서, FGFR1-ECD.339-Fc의 아미노산 조성물에 기반한 흡광계수는, 예를 들어 1.42 ㎖/㎎*㎝이다. 다른 실시형태에서, FGFR1-ECD.339-Fc의 탄수화물 부분뿐만 아니라 아미노산 부분이 고려될 때, 흡광계수는 1.11 ㎖/㎎*㎝이다. 1.11 ㎖/㎎*㎝의 EC를 사용하는 FGFR1-ECD.339-Fc 용량의 계산은 표 1에서 나타내는 바와 같이 28% 만큼 계산 용량을 증가시킨다. 2개의 흡광계수를 사용하여 계산한 용량이 다르지만, 투여된 약물의 몰농도 또는 실제 양은 동일하다. 달리 주목되지 않는다면, 본 명세서에 개시된 용량은 글라이코실화를 고려하지 않은 흡광계수를 사용하여 각각 계산된다. FGFR1-ECD.339-Fc에 대해 글라이코실화를 고려하는 흡광계수를 사용하여 계산한 것과 이들 투약량을 비교하는 방법은 표 1에 나타낸다. 표 1로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 명세서에서 1.42 ㎖/㎎*㎝의 EC를 사용하는 약 8 ㎎/㎏(예를 들어, 7.8 및 8.0)의 투약량은 1.11 ㎖/㎎*㎝의 EC를 사용하여 계산할 때 약 10 ㎎/㎏(예를 들어 10.0 및 10.2)의 투약량에 대응한다. 본 명세서에서 1.42 ㎖/㎎*㎝의 EC를 사용하는 약 16 ㎎/㎏(예를 들어 15.6 및 16.0 ㎎/㎏)의 투약량은 1.11 ㎖/㎎*㎝의 EC를 사용하여 계산할 때 약 20 ㎎/㎏(예를 들어 20.0 및 20.5)의 투약량에 대응한다. 상기 "정의" 부문에서 주목한 바와 같이, 본 명세서에 제공된 측정된 수는 근삿값이며, 반올림한 추가적인 유효숫자를 갖는 수치를 포함한다. 예를 들어, 8 ㎎/㎏은 7.6, 7.8, 8.0, 8.2, 8.4 및 8.45와 같은 2개의 유효숫자를 갖는 수치를 포함하는데, 이것 각각은 8로 반올림한다. 마찬가지로, 16 ㎎/㎏과 같은 수치는 예를 들어 15.6 및 16.0과 같이 16으로 반올림되는 3개의 유효숫자를 갖는 수치를 포함한다.
Figure 112018044380103-pat00001
피험체에게 필요하다면 FGFR1 ECD, FGFR1 ECD 융합 분자 및/또는 적어도 하나의 추가적인 치료제를 포함하는 약제학적 조성물이 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, 치료적 분자의 유효량은 1회 이상 피험체에게 투여된다. 다양한 실시형태에서, 치료 분자의 유효 용량은 2개월에 적어도 1회, 1개월에 적어도 1회, 1개월에 적어도 2회, 1주 1회, 1주 2회 또는 1주 3회로 피험체에게 투여된다. 다양한 실시형태에서, 치료 분자의 유효량은 적어도 1주, 적어도 1개월, 적어도 3주, 적어도 6개월 또는 적어도 1년 동안 피험체에게 투여된다.
특정 실시형태에서, FGFR1 ECD, FGFR1 ECD 융합 분자 및 적어도 하나의 추가적인 치료제의 조합 투여는 별개의 조제물 또는 단일 약제학적 조제물을 사용하여 일제히 투여를 포함하는 동시 투여뿐만 아니라 임의의 순서로 연속적 투여를 포함한다. 선택적으로는, 활성제 둘 다(또는 모두) 그것의 생물학적 활성을 일제히 발휘하는 동안의 시간 기간이다. FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자(예를 들어, FGFR1-ECD.339-Fc)와 조합하여 투여된 치료제의 치료적 유효량은 의사 또는 수의사의 재량에 있을 것이다. 투약량 투여 및 조정은 치료되는 질환의 최대 관리를 달성하도록 행해진다. 용량은 추가적으로 사용되는 치료제의 유형, 치료되는 구체적 환자, 질병 단계 및 치료 섭생의 원하는 침해성(aggressiveness)으로서 이러한 인자에 의존할 것이다.
특정 실시형태에서, 환자는 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자(예를 들어, FGFR1-ECD.339-Fc) 및 VEGF 길항물질의 조합으로 치료된다. 일부 실시형태에서, VEGF 길항물질은 VEGF 트랩(예를 들어, 아플리버셉트)이다. 일부 실시형태에서, VEGF 길항물질은 항-VEGF 항체이다. 일부 실시형태에서, VEGF 항체는 베바시주맙이다. 베바시주맙의 한 대표적인 투약량은 약 0.05 ㎎/㎏ 내지 약 20 ㎎/㎏의 범위에 있다. 따라서, 약 0.5 ㎎/㎏, 2.0 ㎎/㎏, 4.0 ㎎/㎏, 7.5 ㎎/㎏, 10 ㎎/㎏ 또는 15 ㎎/㎏(또는 이들의 임의의 조합) 중 하나 이상의 용량이 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 용량은 간헐적으로, 예를 들어 매주, 2주마다 또는 3주마다 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자(예를 들어, FGFR1-ECD.339-Fc)는 치료제의 추천되거나 또는 처방된 투약량 및/또는 빈도에서 다른 치료제, 예컨대 화학치료제 또는 항-혈관생성제와 조합되어 투여된다.
투여경로 및 담체
일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자는 정맥내로 및/또는 피하로 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자는 다른 경로, 예컨대 동맥 내, 비경구, 비강내, 근육내, 심장내, 심실내, 기관내, 구강, 직장, 복강내, 피내, 국소, 경피 또는 척추강내, 또는 이식 또는 흡입에 의한 다른 것에 의해 투여될 수 있다. 다양한 실시형태에서, 적어도 하나의 추가적인 치료제는 정맥내, 동맥 내, 피하, 비경구, 비강내, 근육내, 심장내, 심실내, 기관내, 구강, 직장, 복강내, 피내, 국소, 경피 및 척추강내, 또는 이식 또는 흡입에 의한 다른 것을 포함하는 다양한 경로에 의해 생체내에 투여될 수 있다. 각각의 대상 조성물은 고체, 반고체, 액체 또는 기체 형태, 예컨대 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌약, 관장, 주사, 흡입 및 에어로졸로 제제 내에 단독으로 또는 조합되어 조제될 수 있다.
다양한 실시형태에서, FGFR1 ECD, FGFR1 ECD 융합 분자, 및/또는 적어도 하나의 추가적인 치료제를 포함하는 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 조제물로 제공되며, 이중 다수는 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Gennaro, Remington : The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd ed., Pharmaceutical Press (2000)]을 참조한다). 비히클, 애주번트(adjuvant), 담체 및 희석제를 포함하는 다양한 약제학적으로 허용가능한 담체는 공중에게 이용가능하다. 게다가, 다양한 약제학적으로 허용가능한 보조제 물질, 예컨대 pH 조절제 및 완충제, 등장성 조절제, 습윤제 등이 또한 공중에게 이용가능하다. 특정의 비-제한적인 대표적인 담체는, 식염수, 완충 식염수, 덱스트로스, 물, 글라이세롤, 에탄올 및 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시형태에서, 치료제는 정의 부문에서 상기 표시한 상표명의 약물 또는 일반적 동등물로서 조제된다. 일부 실시형태에서, 도세탁셀은 Taxotere(등록상표)(Sanofi Aventis) 또는 일반적 동등물로서 조제된다.
다양한 실시형태에서, FGFR1 ECD, FGFR1 ECD 융합 분자 및/또는 적어도 하나의 추가적인 치료제를 포함하는 조성물은 그것들을 수성 또는 비수성 용매, 예컨대 식물성 또는 다른 오일, 합성 지방산 글라이세라이드, 고급 지방산의 에스터 또는 프로필렌 글라이콜을, 원한다면, 가용화제, 등장제, 현탁제, 에멀젼화제, 안정제 및 보존제와 같은 통상적인 첨가제와 함께 용해시키거나, 현탁시키거나 또는 에멀젼화시킴으로써 주사용으로 조제될 수 있다. 다양한 실시형태에서, 조성물은 흡입용으로, 예를 들어 다이클로로다이플루오로메탄, 프로판, 질소 등과 같은 가압된 허용가능한 추진제를 사용하여 조제될 수 있다. 다양한 실시형태에서, 조성물은 또한, 예컨대 생분해성 또는 비-생분해성 폴리머와 함께 서방출 마이크로캡슐 내로 조제될 수 있다. 비제한적인 대표적 생분해성 조제물은 폴리 락트산-글라이콜산 폴리머를 포함한다. 비제한적인 대표적 비-생분해성 조제물은 폴리글라이세린 지방산 에스터를 포함한다. 이러한 조제물의 특정 제조방법은, 예를 들어 EP 1 125 584 A1에 기재된다.
하나 이상의 용기를 포함하는 약제학적 투약량 팩이 또한 제공되며, 각각은 FGFR1 ECD, FGFR1 ECD 융합 분자, 및/또는 적어도 하나의 추가적인 치료제의 1 이상의 용량을 함유한다. 일부 실시형태에서, 투약량 팩은 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자를 함유하지만, 임의의 추가적인 치료제, 예컨대 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 에토포사이드, 토포테칸, 소라페닙, VEGF 길항물질, 항-VEGF 항체, VEGF 트랩 또는 베바시주맙은 함유하지 않는다. 다른 실시형태에서, 투약량 팩은 적어도 하나의 추가적인 치료제를 함유하지만, FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자를 함유하지 않는다. 다른 실시형태에서, 투약량 팩은 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 적어도 하나의 추가적인 치료제를 함유하되, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자는 적어도 하나의 추가적인 치료제로부터 별개의 용기 내에 있다. 다른 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자는 적어도 하나의 추가적인 치료제와 동일한 용기 내에 있다. 특정 실시형태에서 2 이상의 추가적인 치료제가 공급되며, 2 이상의 추가적인 치료제는 별개의 또는 동일한 용기 내에 있을 수 있다. 특정 실시형태에서, 단위 투약량이 제공되되, 단위 투약량은 하나 이상의 추가적인 작용제와 함께 또는 추가적인 작용제 없이 FGFR1 ECD, FGFR1 ECD 융합 분자, 및/또는 적어도 하나의 추가적인 치료제를 포함하는 조성물의 사전결정된 양을 함유한다. 특정 실시형태에서, 이러한 단위 투약량은 주사를 위해 1회용의 사전충전된(prefilled) 주사기로 공급된다. 다양한 실시형태에서, 단위 투약량 중에 함유된 조성물은 식염수, 수크로스 등; 완충제, 예컨대 포스페이트 등을 포함할 수 있고/있거나; 안정하고 효과적인 pH 범위 내에서 조제된다. 대안적으로, 특정 실시형태에서, 조성물은 적절한 액체, 예를 들어 멸균수의 첨가시 재구성될 수 있는 동결건조 분말로서 제공될 수 있다. 특정 실시형태에서, 조성물은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 수크로스 및 알기닌을 포함하는 단백질 응집을 억제하는 하나 이상의 물질을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 조성물은 헤파린 및/또는 프로테오글라이칸을 포함한다. 일부 실시형태에서, 투약량 팩은 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및/또는 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 에토포사이드, 토포테칸, 소라페닙, VEGF 길항물질, 항-VEGF 항체, VEGF 트랩 및 베바시주맙으로부터 선택된 적어도 하나의 추가적인 치료제를 포함한다.
일부 실시형태에서, 투약량 팩은 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자를 적어도 하나의 추가적인 치료제와 함께 환자에게 투여하기 위한 설명서를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 설명서는 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자의 적어도 1 용량이 적어도 하나의 추가적인 치료제와 동시에 투여되어야 한다는 것을 표시한다. 일부 실시형태에서, 설명서는 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자의 적어도 1 용량이 적어도 하나의 추가적인 치료제와 동시에 투여되어야 한다는 것을 표시한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "설명서"는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 라벨, 포장 삽입물, 컴퓨터로 판독가능한 매체(예를 들어, 디스켓, 컴팩트 디스크 또는 DVD), 인터넷 상과 같이 원격으로 입수가능한 설명서 등을 포함한다. 투약량 팩이 설명서에 대한 접근, 설명서에 대한 연결(예컨대 인터넷 웹주소(uniform resource locator 또는 url)) 또는 설명서의 사본을 얻기 위한 다른 체계(예컨대 리턴 리플라이 카드(return reply card), 설명서가 요청될 수 있는 물리적 주소, 설명서가 요청될 수 있는 이메일 주소, 설명서를 얻기 위해 전화를 걸 수 있는 전화번호 등)를 제공할 때, 투약량 팩은 설명서를 포함하는 것으로 고려된다.
FGFR1 ECD 및 FGFR1 ECD 융합분자
비제한적인 대표적 FGFR1 ECD는 전장 FGFR1 ECD, FGFR1 ECD 단편 및 FGFR1 ECD 변이체를 포함한다. FGFR1 ECD는 신호 펩타이드를 포함하거나 또는 결여할 수 있다. 대표적인 FGFR1 ECD는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 서열번호 1, 2, 3 및 4로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 FGFR1 ECD를 포함한다.
비제한적인 대표적 FGFR1 ECD 단편은 아미노산 339(신호 펩타이드가 없는 성숙 형태의 제1 아미노산으로부터 카운팅)에서 끝나는 인간 FGFR1 ECD을 포함한다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 단편은 아미노산 339 내지 아미노산 360(신호 펩타이드가 없는 성숙 형태의 제1 아미노산으로부터 카운팅)에서 끝난다. 대표적인 FGFR1 ECD 단편은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 서열번호 3 및 4로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 FGFR1 ECD 단편을 포함한다.
일부 실시형태에서, FGFR1 ECD는 서열번호 1 내지 4로부터 선택된 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD는 서열번호 1 내지 4로부터 선택된 서열로 이루어진다. FGFR1 ECD가 서열번호 1 내지 4로부터 선택된 서열로 "이루어질 때", FGFR1 ECD는 글라이코실화 및 시알산화와 같은 다양한 번역후 변형을 함유할 수도 있고, 함유하지 않을 수도 있다. 다시 말해서, FGFR1 ECD가 특정 아미노산 서열로 이루어질 때, 이는 연속적 아미노산 서열에서 추가적인 아미노산을 함유하지 않지만, 아미노산 측쇄, N-말단의 아미노 기, 및/또는 C-말단의 카복시기에 대한 변형을 함유할 수 있다.
일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자는 신호 펩타이드를 포함한다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자는 신호 펩타이드가 없다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자의 FGFR1 ECD 부분은 서열번호 1 내지 4로부터 선택된 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자의 FGFR1 ECD 부분은 서열번호 1 내지 4로부터 선택된 서열로 이루어진다. FGFR1 ECD 융합 분자의 FGFR1 ECD 부분이 서열번호 1 내지 4로부터 선택된 서열로 "이루어질 때", FGFR1 ECD 융합 분자의 FGFR1 ECD 부분은 글라이코실화 및 시알산화와 같은 다양한 번역후 변형을 함유할 수도 있고, 또는 함유하지 않을 수도 있다. 다시 말해서, FGFR1 ECD 융합 분자의 FGFR1 ECD 부분이 특정 아미노산 서열로 이루어질 때, 연속적 아미노산 서열에서 FGFR1으로부터 추가적인 아미노산을 함유하지 않지만, 아미노산 측쇄, N-말단의 아미노 기, 및/또는 C-말단의 카복시 기에 대한 변형을 함유할 수 있다. 추가로, FGFR1 ECD는 융합 분자에 연결되기 때문에, FGFR1 ECD의 N- 및/또는 C-말단에서 추가적인 아미노산일 수 있지만, 해당 아미노산은 FGFR1 서열로부터 유래되지 않지만, 예를 들어 링커 서열 또는 융합 상대 서열로부터 유래될 수 있다.
일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 융합 분자의 융합 상대 부분은 Fc, 알부민 및 폴리에틸렌 글라이콜로부터 선택된다. 비제한적인 대표적 융합 상대는 본 명세서에서 논의된다.
본 발명자는 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자 및 도세탁셀, 파클리탁셀, 빈크리스틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 독소루비신, 5-플루오로유라실(5-FU), 류코보린, 페메트렉세드, 소라페닙, 에토포사이드, 토포테칸, 혈관내피 성장인자(VEGF) 작용물질, VEGF 트랩, 항-VEGF 항체 및 베바시주맙으로부터 선택된 적어도 하나의 추가적인 치료제의 투여가 암 치료에 유용하다는 것을 발견하였다. 일부 실시형태에서, FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자는 도세탁셀과 함께 투여된다.
융합 상대 및 컨쥬게이트
본 명세서에서 논의되는 바와 같이, FGFR1 ECD는 적어도 하나의 융합 상대와 조합될 수 있는데, 이는 FGFR1 ECD 융합 분자를 야기한다. 이들 융합 상대는 정제를 용이하게 할 수 있고, FGFR1 ECD 융합 분자는 생체내에서 증가된 반감기를 나타낼 수 있다. FGFR1 ECD의 적합한 융합 상대는, 예를 들어 폴리머, 예컨대 수용성 폴리머, 면역글로뷸린의 불변 도메인; 인간 혈청 알부민(human serum albumin, HSA)의 모두 또는 부분; 페투인 A; 페투인 B; 류신 지퍼 도메인; 테트라넥틴 트라이머화 도메인; 만노스 결합 단백질(또한 만노스 결합 렉틴으로서 공지됨), 예를 들어, 만노스 결합 단백질 1; 및 본 명세서에 기재되고 미국특허 제6,686,179호에 추가로 기재되는 Fc 영역을 포함한다. 비제한적인 대표적 FGFR1 ECD 융합 분자는, 예를 들어, 미국특허 제7,678,890호에 기재된다.
FGFR1 ECD 융합 분자는 FGFR1 ECD에 폴리아미노산 또는 분지점 아미노산을 부착함으로써 제조될 수 있다. 예를 들어, 폴리아미노산은 (융합 분자를 통해 달성된 이점에 더하여) FGFR1 ECD의 순환 반감기를 증가시키는 작용을 하는 담체 단백질일 수 있다. 본 발명의 치료적 목적을 위하여, 이러한 폴리아미노산은 이상적으로는 중화 항원 반응 또는 다른 역반응을 만들지 않거나 또는 중화 항원 반응 또는 다른 역반응을 갖는 것이어야 한다. 이러한 폴리아미노산은 혈청 알부민(예컨대 HSA), 추가적인 항체 또는 이것의 일부, 예를 들어 Fc 영역, 페투인 A, 페투인 B, 류신 지퍼 핵인자 에리트로이드 유도체-2(NFE2), 망막신경 류신 지퍼, 테트라넥틴, 또는 다른 폴리아미노산, 예를 들어 리신으로부터 선택될 수 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 폴리아미노산의 부착 위치는 N 말단 또는 C 말단에, 또는 이들 사이의 다른 위치에 있을 수 있고, 또한 화학적 링커 모이어티에 의해 선택 분자에 연결될 수 있다.
폴리머
폴리머, 예를 들어 수용성 폴리머는 생리적 환경에서 전형적으로 발견되는 것과 같은 수성 환경 내 FGFR1 ECD 융합 분자의 침전을 감소시키는 융합 상대로서 유용할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 폴리머는 치료 제품 또는 조성물의 제조를 위해 약제학적으로 허용가능할 것이다.
적합한, 임상적으로 허용가능한 수용성 폴리머는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 폴리에틸렌 글라이콜(PEG), 폴리에틸렌 글라이콜 프로피온알데하이드, 에틸렌 글라이콜/프로필렌글라이콜의 공중합체, 모노메톡시-폴리에틸렌 글라이콜, 카복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올(PVA), 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-다이옥솔란, 폴리-1,3,6-트라이옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체,폴리(β-아미노산)(호모폴리머 또는 무작위 공중합체 중 하나), 폴리(n-비닐 피롤리돈) 폴리에틸렌 글라이콜, 폴리프로필렌글라이콜 호모폴리머(PPG) 및 다른 폴리알킬렌 옥사이드, 폴리프로필렌옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화된 폴리올(POG)(예를 들어, 글라이세롤) 및 다른 폴리옥시에틸화된 폴리올, 폴리옥시에틸화된 솔비톨 또는 폴리옥시에틸화된 글루코스, 콜라닌산 또는 다른 탄수화물 폴리머, 피콜 또는 덱스트란 및 이들의 혼합물을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은, 폴리에틸렌 글라이콜(PEG)은 모노-(C1-C10) 알콕시- 또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글라이콜과 같은 다른 단백질을 유도체화하기 위해 사용한 형태 중 어떤 것을 포함하는 것을 의미한다. 폴리에틸렌 글라이콜 프로피온알데하이드는 수중에서 그것의 안정성에 기인하여 제조에서 이점을 가질 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 폴리머, 예를 들어 수용성 폴리머는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지되거나 또는 분지되지 않을 수 있다. 일부 실시형태에서, 폴리머는 약 2 kDa 내지 약 100 kDa의 평균 분자량을 가진다(용어 "약"은 폴리머의 제조에서, 일부 분자가 언급한 분자량보다 더 많이 나가고, 일부는 더 적게 나가는 것을 표시한다). 각 폴리머의 평균 분자량은 약 5 kDa 내지 약 50 kDa, 또는 약 12 kDa 내지 약 25 kDa일 수 있다. 일반적으로, 더 높은 분자량 또는 더 많은 분지가 있을수록, 더 높은 폴리머:단백질 비를 가진다. 원하는 치료 프로파일; 예를 들어, 지속 방출의 지속; 만약에 있다면 생물학적 활성의 효과; 조작의 용이함; 항원성의 정도 또는 결여; 및 FGFR1 ECD 상에서 폴리머의 다른 공지된 효과에 의존하여 다른 크기가 또한 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 폴리머는 전형적으로 폴리펩타이드의 기능적 또는 항원성 도메인 상에서 효과의 고려에 의해 FGFR1 ECD에 전형적으로 부착된다. 일반적으로, 화학적 유도체화는 활성화된 폴리머 분자와 단백질을 반응시키기 위해 사용되는 임의의 적합한 조건 하에서 수행될 수 있다. 활성 모이어티에 폴리머를 연결하기 위해 사용될 수 있는 활성화기는 설폰, 말레이미드, 설프하이드릴, 티올, 트라이플레이트, 트레실레이트, 아지디린, 옥시란 및 5-피리딜을 포함한다.
본 발명의 폴리머는 전형적으로 아미노산 또는 반응성 티올기의 알파(α) 또는 엡실론(ε) 아미노기에서 비상동 폴리펩타이드에 부착되지만, 또한 폴리머기는 적합한 반응 조건 하에 폴리머 기에 부착되기에 충분히 반응성인 단백질의 임의의 반응기에 부착될 수 있다는 것이 고려된다. 따라서, 폴리머는 유리 아미노 또는 카복실기와 같은 반응기를 통해 FGFR1 ECD에 공유적으로 결합될 수 있다. 유리 아미노기를 갖는 아미노산 잔기는 리신 잔기 및 N-말단의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 유리 카복실기를 갖는 것은 아스팔트산 잔기, 글루탐산 잔기 및 C-말단의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 반응성 티올기를 갖는 것은 시스테인 잔기를 포함한다.
수용성 폴리머와 같은 폴리머와 컨쥬게이트된 융합분자의 제조방법은 일반적으로 (a) 조건 하에 FGFR1 ECD를 폴리머와 반응시킴으로써 폴리펩타이드가 하나 이상의 폴리머에 부착되는 단계 및 (b) 반응 생성물을 얻는 단계를 수반할 것이다. 각 컨쥬게이션에 대한 반응 조건은 임의의 당업계에 공지된 것 또는 이후에 개발된 것으로부터 선택될 수 있지만, 변형되는 단백질을 불활성화하는 반응 조건, 예컨대 온도, 용매 및 pH 수준에 노출은 회피되거나 또는 제한되도록 선택되어야 한다. 일반적으로, 반응을 위한 최적의 반응 조건은 공지된 변수 및 원하는 결과에 기반하여 경우에 따라 결정될 것이다. 예를 들어, 폴리머:폴리펩타이드 컨쥬게이트의 비가 클수록, 컨쥬게이트된 생성물의 백분율은 더 커진다. 최적의 비(과량의 미반응 폴리펩타이드 또는 폴리머가 없는 반응의 효능에 대해)는 유도체화의 요망되는 정도(예를 들어, 모노-, 다이-, 트라이- 등), 선택된 폴리머의 분자량, 폴리머가 분지 또는 미분지인지 여부 및 사용된 반응 조건과 같은 인자에 의해 결정될 수 있다. 폴리머(예를 들어, PEG) 대 폴리펩타이드의 비는 일반적으로 1:1 내지 100:1의 범위에 있을 것이다. 하나 이상의 정제된 컨쥬게이트는 특히, 투석, 염석, 초미세여과, 이온-교환 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피 및 전기영동을 포함하는 표준 정제 기법에 의해 각 혼합물로부터 제조될 수 있다.
구체적으로는 N-말단의 화학적으로 변형된 FGFR1 ECD가 요망될 수 있다. 분자량, 분지 등에 의해 폴리머를 선택할 수 있으며, 반응 혼합물 내 폴리머 대 FGFR1 ECD 분자의 비율, 수행되는 반응의 유형 및 선택된 N-말단의 화학적으로 변형된 FGFR1 ECD를 얻는 방법을 선택할 수 있다. N-말단의 화학적으로 변형된 FGFR1 ECD 제제를 얻는 방법(필요하다면 다른 모노유도체화된 모이어티로부터 이 모이어티를 분리시키는 것)은 화학적으로 변형된 단백질 분자로부터 N-말단의 화학적으로 변형된 FGFR1 ECD 물질의 정제에 의할 수 있다.
선택적인 N-말단의 화학적 변형은 특정 단백질에서 유도체화를 위해 이용가능한 상이한 유형의 1차 아미노기(N-말단에 대해 리신)의 차별적인 반응성을 이용하는 환원성 알킬화에 의해 수행될 수 있다. 적절한 반응 조건 하에서, 카보닐 기-함유 폴리머를 갖는 N 말단에서 단백질의 실질적으로 선택적인 유도체화가 달성된다. 예를 들어, 리신 잔기의 ε-아미노 기와 단백질의 N-말단 잔기의 α-아미노기 사이의 pKa 차이를 이용하는 pH에서 반응을 수행함으로써 단백질의 N 말단에 폴리머를 선택적으로 부착할 수 있다. 이러한 선택적 유도체화에 의해, 단백질에 폴리머의 부착이 제어되며: 폴리머와의 컨쥬게이션은 대부분 단백질의 N 말단에서 일어나고, 리신 측쇄 아미노기와 같은 다른 반응기의 유의한 변형은 일어나지 않는다. 환원성 알킬화를 사용하여, 폴리머는 상기 기재한 유형을 가질 수 있고, 단백질에 커플링을 위해 하나의 반응성 알데하이드를 가져야 한다. 단일 반응성 알데하이드를 함유하는 폴리에틸렌 글라이콜 프로피온알데하이드가 또한 사용될 수 있다.
한 실시형태에서, 본 발명은 모노- 또는 폴리- (예를 들어, 2-4) PEG 모이어티를 포함하는 화학적으로 유도체화된 FGFR1 ECD를 고려한다. 페길화는 임의의 이용가능한 페길화 반응에 의해 수행될 수 있다. 페길화된 단백질의 제조방법은 조건 하에서 폴리펩타이드를 폴리에틸렌 글라이콜(예컨대 PEG의 반응성 에스터 또는 알데하이드 유도체)과 반응시킴으로써 단백질이 하나 이상의 PEG 기에 부착되는 단계; 및 (b) 반응 생성물(들)을 얻는 단계를 일반적으로 포함할 것이다. 일반적으로, 최적의 반응 조건은 알여진 변수 및 원하는 결과에 기반하여 경우에 따라 결정될 것이다.
당업계에 공지된 다수의 PEG 부착 방법이 있다. 예를 들어, EP 0 401 384; 문헌[Malik et al., Exp . Hematol ., 20:1028-1035 (1992); Francis, Focus on Growth Factors, 3(2):4-10 (1992)]; EP 0 154 316호; EP 0 401 384호; WO 92/16221호; WO 95/34326호; 및 페길화에 대해 본 명세서에 인용된 다른 간행물을 참조한다.
페길화는, 예를 들어 반응성 폴리에틸렌 글라이콜 분자와 아실화 반응 또는 알킬화 반응을 통해 수행될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 단백질 생성물은 페길화된 단백질을 포함하되, PEG 기(들)은 아실 또는 알킬 기를 통해 부착된다. 이러한 생성물은 모노-페길화 또는 폴리-페길화(예를 들어, 2 내지 6 또는 2 내지 5개 PEG 기를 함유하는 것)될 수 있다. PEG 기는 일반적으로 아미노산의 α- 또는 ε-아미노기에서 단백질에 부착되지만, 이는 또한 적합한 반응 조건 하에 PEG 기에 부착되기에 충분히 반응성인 단백질에 부착된 임의의 아미노기에 PEG 기가 부착될 수 있다는 것을 고려한다.
아실화에 의한 페길화는 일반적으로 폴리에틸렌 글라이콜(PEG)의 활성 에스터 유도체를 FGFR1 ECD와 반응시키는 단계를 수반한다. 아실화 반응을 위해, 선택된 폴리머(들)는 전형적으로 단일 반응성 에스터기를 가진다. 임의의 공지된 또는 이후에 발견된 반응성 PEG 분자는 페길화 반응을 수행하기 위하여 사용될 수 있다. 적합한 활성화된 PEG 에스터의 예는 N-하이드록시숙신이미드(NHS)로 에스터화된 PEG이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은, 아실화는, 제한 없이, 치료적 단백질과 폴리머 사이의 다음의 결합 유형, 예컨대 PEG, 아마이드, 카바메이트, 우레탄 등을 포함하는 것으로 고려되며, 예를 들어, 문헌[Chamow, Bioconjugate Chem ., 5:133-140 (1994)]을 참조한다. 반응 조건은 임의의 현재 공지된 것 또는 이후에 개발되는 것으로부터 선택될 수 있지만, 변형되는 폴리펩타이드를 불활성화시키는 조건, 예컨대 온도, 용매 및 pH를 회피하여야 한다.
아실화에 의한 페길화는 일반적으로 폴리-페길화된 단백질을 야기할 것이다. 연결하는 결합은 아마이드일 수 있다. 얻어진 생성물은 실질적으로 단지(예를 들어, > 95%) 모노-, 다이- 또는 트라이-페길화될 수 있다. 그러나, 더 높은 정도의 페길화를 갖는 일부 종은 사용되는 구체적 반응 조건에 의존하는 양으로 형성될 수 있다. 원한다면, 더 정제된 페길화된 종이 특히 투석, 염석, 초미세여과, 이온-교환 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피 및 전기영동을 포함하는 표준 정제 기법에 의해 혼합물(특히 미반응 종)로부터 분리될 수 있다.
알킬화에 의한 페길화는 환원제의 존재에서 PEG의 말단 알데하이드 유도체를 폴리펩타이드와 반응시키는 단계를 일반적으로 수반한다. 환원성 알킬화 반응에 대해, 선택된 폴리머(들)는 단일 반응성 알데하이드기를 가져야한다. 대표적인 반응성 PEG 알데하이드는 수 안정성인 폴리에틸렌 글라이콜 프로피온알데하이드, 또는 모노 C1-C10 알콕시 또는 이것의 아릴옥시 유도체이고, 예를 들어 미국특허 제5,252,714호를 참조한다.
마커
게다가, 본 발명의 FGFR1 ECD는 융합된 폴리펩타이드의 정제를 용이하게 하는 펩타이드와 같은 마커 서열에 융합될 수 있다. 마커 아미노산 서열은 pQE 벡터(Qiagen, Mississauga, Ontario, Canada)에서 제공된 태그와 같은 헥사-히스티딘 펩타이드일 수 있는데, 특히 이 중 다수는 상업적으로 입수가능하다. 문헌[Gentz et al., Proc . Natl . Acad . Sci . 86:821-824 (1989)]에 기재된 바와 같이, 예를 들어 헥사-히스티딘은 융합 단백질의 편리한 정제를 제공한다. 정제에 유용한 다른 펩타이드 태그인 혈구응집소(hemagglutinin, HA) 태그는 인플루엔자 HA 단백질로부터 유래된 에피토프에 대응한다(Wilson et al., Cell 37:767 (1984)). 이들 상기 융합 중 어떤 것은 본 명세서에 기재된 FGFR1 ECD를 사용하여 유전자조작될 수 있다.
올리고머화 도메인 융합 상대
다양한 실시형태에서, 올리고머화는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 다가성(multivalency), 증가된 결합 강도 및 상이한 도메인의 조합된 기능을 포함하여 융합 단백질에 일부 기능적 이점을 제공한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 융합 상대는 올리고머화 도메인, 예를 들어 다이머화 도메인을 포함한다. 대표적인 올리고머화 도메인은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 알파-나선 코일드-코일 도메인(coiled-coil domain)을 포함하는 코일드-코일 도메인; 콜라겐 도메인; 콜라겐-유사 도메인; 및 특정 면역글로뷸린 도메인을 포함한다. 대표적인 코일드-코일 폴리펩타이드 융합 상대는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 테트라넥틴 코일드-코일 도메인; 연골 올리고머 매트릭스 단백질의 코일드-코일 도메인; 안지오포이에틴 코일드-코일 도메인; 및 류신 지퍼 도메인을 포함한다. 대표적인 콜라겐 또는 콜라겐-유사 올리고머화 도메인은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 콜라겐에서 발견되는 것, 만노스 결합 렉틴, 폐 계면활성제 단백질 A 및 D, 아디포넥틴(adiponectin), 피콜린(ficolin), 콘글루티닌(conglutinin), 대식세포 스캐빈저(macrophage scavenger) 수용체 및 에밀린을 포함한다.
항체 Fc 면역글로뷸린 도메인 융합 상대
융합 상대로서 사용될 수 있는 다수의 Fc 도메인은 당업계에 공지되어 있다. 일부 실시형태에서, 융합 상대는 Fc 면역글로뷸린 도메인이다. Fc 융합 상대는 자연적으로 발생하는 항체, 이것의 변이체 또는 이것의 단편에서 발견되는 야생형 Fc일 수 있다. 비제한적인 대표적 Fc 융합 상대는 인간 IgG, 예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 힌지 및 CH2 및 CH3 불변 도메인을 포함하는 Fc를 포함한다. 추가적인 대표적 Fc 융합 상대는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 인간 IgA 및 IgM을 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 융합 상대는, 예를 들어 IgG1(예를 들어, 서열번호 8을 참조)에서 C237S 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fc 융합 상대는 미국특허 제6,900,292호에 기재된 바와 같이 P331S 돌연변이를 갖는 인간 IgG2의 힌지, CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 특정 대표적인 Fc 도메인 융합 상대는 서열번호 8 내지 10에 나타낸다.
알부민 융합 상대 및 알부민-결합 분자 융합 상대
일부 실시형태에서, 융합 상대는 알부민이다. 대표적인 알부민은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 알부민에 융합된 폴리펩타이드의 혈청 반감기 또는 생체이용성을 증가시킬 수 있는 인간 혈청 알부민(HSA) 및 HSA의 단편을 포함한다. 일부 실시형태에서, 융합 상대는 알부민-결합 분자, 예를 들어 알부민과 결합하는 액체 또는 다른 분자와 컨쥬게이트되는 알부민 또는 분자와 결합하는 펩타이드와 같은 알부민-결합 분자이다. 일부 실시형태에서, HSA를 포함하는 융합 분자는, 예를 들어 미국특허 제6,686,179호에 기재된 것과 같이 제조된다.
융합 상대의 대표적인 부착
융합 상대는 FGFR1 ECD의 N 말단 또는 C 말단에 공유적으로 또는 비-공유적으로 부착될 수 있다. 부착은 또한 N 말단 또는 C 말단 이외의 FGFR1 ECD 내 위치에서, 예를 들어 아미노산 측쇄(예를 들어 시스테인, 리신, 세린 또는 트레오닌의 측쇄)를 통해 생길 수 있다.
공유 또는 비공유적 부착 실시형태에서, 링커는 융합 상대와 FGFR1 ECD 사이에 포함될 수 있다. 이러한 링커는 적어도 하나의 아미노산 또는 화학적 모이어티로 구성될 수 있다. FGFR1 ECD에 융합 상대를 공유적으로 부착시키는 대표적인 방법은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 융합 상대 및 단일 아미노산 서열로서 FGFR1 ECD의 번역 및 FGFR1 ECD에 융합 상대의 화학적 부착을 포함한다. 융합 상대 및 FGFR1 ECD가 단일 아미노산 서열로서 번역될 때, 추가적인 아미노산은 융합 상대와 링커로서 FGFR1 ECD 사이에 포함될 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 그것을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 기반으로 선택되어 단일 발현 작제물(expression construct)(예를 들어, 특정 제한 부위를 함유하는 폴리뉴클레오타이드는 융합 상대를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드와 FGFR1 ECD를 암호화하는 폴리뉴틀레오타이드 사이에 위치될 수 있되, 제한 부위를 함유하는 해당 폴리뉴클레오타이드는 짧은 아미노산 링커 서열을 함유함) 내로 융합 상대 및/또는 FGFR1 ECD를 클로닝 시키는 것을 용이하게 한다. 융합 상대 및 FGFR1 ECD이 화학적 수단에 의해 공유적으로 결합될 때, 다양한 크기의 링커는 전형적으로 커플링 반응 동안 포함될 수 있다.
FGFR1 ECD에 융합 상대를 비공유적으로 부착시키는 대표적인 방법은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 결합 쌍을 통한 부착을 포함한다. 대표적인 결합쌍은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 바이오틴과 아비딘 또는 스트렙타비딘, 항체와 그것의 항원 등을 포함한다.
공동번역 및 번역후 변형
본 발명은 번역 동안 또는 번역 후 차별적으로 변형된, 예를 들어 글라이코실화, 아세틸화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백질 분해 절단 또는 항체 분자 또는 다른 세포 리간드에 결합에 의한 FGFR1 ECD 및 FGFR1 ECD 융합 분자의 투여를 포함한다. 임의의 수많은 화학적 변형이, 이에 제한되는 것은 아니지만, 시아노겐 브로마이드, 트립신, 키모트립신, 파파인, V8 프로테아제에 의한 특이적 화학적 절단; NABH4; 아세틸화; 포밀화; 산화; 환원; 및/또는 튜니카마이신의 존재에서 대사적 합성을 포함하는 공지된 기법에 의해 수행될 수 있다.
본 발명에 의해 포함된 추가적인 번역 후 변형은, 예를 들어 N-말단의 또는 C-말단의 단부를 처리하는 예를 들어 N-연결되거나 또는 O-연결된 탄수화물 쇄, 아미노산 백본에 화학적 모이어티의 부착, N-연결되거나 또는 O-연결된 탄수화물 쇄의 화학적 변형 및 원핵 숙주 세포 발현의 결과로서 N-말단의 메티오닌 잔기의 첨가 또는 결실을 포함한다. FGFR1 ECD 및 FGFR1 ECD 융합 분자의 다양한 번역후 변형의 비제한적 논의는, 예를 들어 미국특허 제7,678,890호에서 찾을 수 있다.
FGFR1 ECD 및 FGFR1 ECD 융합 분자 발현 및 생성 벡터
FGFR1 ECD를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터가 제공된다. FGFR1 ECD 융합 분자를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터가 또한 제공된다. 이러한 벡터는, 이에 제한되는 것은 아니지만, DNA 벡터, 파지 벡터, 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 등을 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 CHO 또는 CHO-유래 세포에서 폴리펩타이드의 발현을 최적화하도록 선택된다. 대표적인 이러한 벡터는, 예를 들어 문헌[Running Deer et al., Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004)]에 기재된다.
일부 실시형태에서, 벡터는 인간을 포함하는 동물에서 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자의 생체내 발현을 위해 선택된다. 일부 이러한 실시형태에서, 폴리펩타이드의 발현은 조직-특이적 방식으로 작용하는 프로모터의 제어 하에 있다. 예를 들어, 간-특이적 프로모터는, 예를 들어 국제특허출원 공개 WO 2006/076288호에 기재된다. 다양한 발현 벡터의 비제한적 논의는, 예를 들어 미국특허 제7,678,890호에서 발견될 수 있다.
숙주 세포
다양한 실시형태에서, FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자는 원핵 세포, 예컨대 박테리아 세포에서; 또는 진핵 세포, 예컨대 진균 세포, 식물 세포, 곤충 세포 및 포유류 세포에서 발현될 수 있다. 이러한 발현은, 예를 들어 당업계에 공지된 절차에 따라 수행될 수 있다. 폴리펩타이드를 발현시키기 위하여 사용될 수 있는 대표적인 진핵 세포는, 이에 제한되는 것은 아니지만, COS 7 세포를 포함하는 COS 세포; 293-6E 세포를 포함하는 293 세포; CHO-S를 포함하는 CHO 세포 및 DG44 세포; 및 NSO 세포를 포함한다. 일부 실시형태에서, 특정 진핵 숙주 세포는 FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자에 대한 어떤 원하는 번역 후 변형을 만드는 그것의 능력에 기반하여 선택된다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, CHO 세포는 293 세포에서 생성된 동일 폴리펩타이드보다 더 높은 수준의 시알릴화를 갖는 FGFR1 ECD 및/또는 FGFR1 ECD 융합 분자를 생성한다.
원하는 숙주 세포 내로 핵산의 도입은 이에 제한되는 것은 아니지만, 인산칼슘 트랜스펙션, DEAE-덱스트란 매개 트랜스펙션, 양이온성 지질-매개된 트랜스펙션, 전기천공법, 형질도입, 감염 등을 포함하는, 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 수행될 수 있다. 비제한적인 대표적 방법은, 예를 들어 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)]에 기재된다. 핵산은 당업계에 공지된 방법에 따라 요망되는 숙주 세포 내에서 일시적으로 또는 안정하게 트랜스펙션될 수 있다. 숙주 세포 및 숙주 세포 내 폴리펩타이드 방법의 비제한적 논의는, 예를 들어 미국특허 제7,678,890호에서 찾을 수 있다.
일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 당업계에 공지된 방법에 따라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 분자로 유전자조작되거나 또는 트랜스펙션된 동물의 생체내에서 생성될 수 있다.
FGFR1 ECD 폴리펩타이드의 정제
FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 정제될 수 있다. 이러한 방법은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 친화성 매트릭스 또는 소수성 상호작용 크로마토그래피의 사용을 포함한다. 적합한 친화성 리간드는 FGFR1 ECD 또는 융합 상대의 임의의 리간드를 포함한다. FGFR1에 결합하는 항체의 경우에 적합한 친화성 리간드는, 이에 제한되는 것은 아니지만, FGFR1 그 자체 및 이것의 단편을 포함한다. 추가로, 단백질 A, 단백질 G, 단백질 A/G 또는 항체 친화성 컬럼은 FGFR1 ECD 융합 분자를 정제하기 위하여 Fc 융합 상대에 결합을 위해 사용될 수 있다. FGFR1 ECD에 대한 항체는 또한 FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자를 정제하기 위하여 사용될 수 있다. 소수성 상호작용 크로마토그래피, 예를 들어 뷰틸 또는 페닐 컬럼은 또한 일부 폴리펩타이드를 정제하기에 적합할 수 있다. 폴리펩타이드를 정제하는 다수의 방법은 당업계에 공지되어 있다. 다양한 폴리펩타이드 정제 방법의 비제한적 논의는, 예를 들어 미국특허 제7,678,890호에서 찾을 수 있다.
실시예
이하에 논의되는 실시예는 순수하게 본 발명을 예시하는 것으로 의도되며, 어떤 방법으로 본 발명을 제한하는 것으로 고려되어서는 안 된다. 실시예는 이하의 실시예가 수행되는 모든 또는 유일한 실험인 것을 나타내는 것으로 의도되지 않는다. 사용한 숫자(예를 들어 양, 온도 등)에 대해 정확성을 보장하기 위한 노력을 하였지만, 일부 실험적 오차 및 편차가 고려되어야 한다. 달리 표시되지 않는다면, 부분은 중량부이며, 분자량은 중량 평균 분자량이고, 온도는 섭씨이며, 압력은 대기압이거나 대기압 근처이다.
실시예 1: H1703 비소세포 폐( NSCLC ) 이종이식 모델에서 FGFR1 - ECD .339- Fc 및 도세탁셀의 투여
6주령의 암컷 SCID 마우스를 찰스 리버 레버러토리즈(Charles River Laboratories)(매사추세츠주 윌밍턴에 소재)로부터 구입하였고, 연구 시작 전 1주일 동안 적응시켰다. 인간 비소세포 폐암(NSCLC) 세포주 H1703를 종양 모델로서 사용하였고, ATCC(버지니아주 매너서스에 소재; 카탈로그 번호 CRL-5889)로부터 구입하였다. 5% CO2와 함께 습한 분위기 중의 37℃에서 RPMI + 10% FBS + 1% L-글루타민의 3회 통과동안 세포를 배양시켰다. 배양시킨 세포가 85 내지 90% 컨플류언스(confluence)에 도달하였을 때, 세포를 채취하였고, 밀리리터 당 2.5×107개 세포에서 50% 매트리겔(Matrigel)을 함유하는 차가운 Ca2 + 및 Mg2 + 유리 인산염 완충 식염수(PBS) 중에서 재현탁시켰다. 2.5×106 세포/100㎕/마우스에서 마우스의 오른쪽 옆구리에 걸쳐 피하로 세포를 이식하였다. 종양 이식 후 제1일에, 마우스를 그룹 당 10마리 마우스에서 체중에 따라 무작위화하였다.
FGFR1-ECD.339-Fc를 3 ㎎/㎖에서 PBS 중에서 조제하였고, 4주 동안 1주 2회 15㎎/㎏(300 ㎍/100 ㎕/마우스)에서 복강내로(i.p.) 투여하였다. 도세탁셀을 토론토 리서치 케미컬스(Toronto Research Chemicals)(캐나다 온타리오주 노스욕에 소재; 카탈로그 번호 D494420)로부터 구입하였고, 5% 트윈(Tween) 80 및 5% 글루코스를 함유하는 H2O 중에서 조제하였다. 도세탁셀을 3주마다 1회 2회 용량에 대해 25 ㎎/㎏(인간에서 동등 내지 약 75 ㎎/㎡)에서 i.p.로 투여하였다. 조합 그룹에서, FGFR1-ECD.339-Fc 및 도세탁셀은 도세탁셀 하루 전에 FGFR1-ECD.339-Fc이 동시에 또는 순차적으로 제공되었거나, 또는 그 반대이었다. 인간 알부민을 그리폴스 USA(Grifols USA)(캘리포니아주 로스 앤젤레스에 소재; 카탈로그 번호 NDC 61953-0002-1)로부터 구입하였고, 3 ㎎/㎖에서 PBS 중에서 조제하였으며, 300 ㎍/100 ㎕/마우스(15㎎/㎏)에서 음성 대조군으로서 사용하였다. 마우스의 각 세트에 대한 투약 스케줄을 표 2에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00002
마우스의 종양 용적 및 체중을 연구 내내 1주 2회 모니터링하였다. 외부 캘리퍼스(external caliper)에 의해 종양 용적을 측정하여 가장 긴 세로 직경(길이) 및 가장 긴 가로 직경(폭)을 결정한다. 그 다음에 다음의 식을 사용하여 종양 용적을 계산한다:
종양 용적(㎣) = (길이 × 폭 2 )/2
제38일에, 알부민 그룹 내 평균 종양 용적이 850㎣에 도달되었을 때, 아이소플루란 흡입에 의해 마우스를 마취시키고, 경추탈골시켰다.
각 마우스의 세트에 대해 연구 동안의 평균 종양 용적을 도 1에 나타낸다. 해당 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc 및 도세탁셀의 순차적 투여는 두 약물 중 하나의 단독보다 종양 성장을 더 억제하였다. 더 나아가, 해당 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc 및 도세탁셀의 동시 투여는 종양 성장을 억제하는 것에서 순차적 투여보다 더 효과적이었다. 연구 과정에 걸쳐 체중손실이 없다는 것을 관찰하였다(데이터 미제시).
제38일에 마우스 각 그룹의 종양 용적을 일원분산분석(one-way ANOVA) 다음에 터키 검정(Tukey's test)에 의해 분석하였다. 해당 분석의 결과를 표 3에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00003
FGFR1-ECD.339-Fc 단독의 투여는 33%(p<0.01) 종양 성장 억제를 야기하였고, 도세탁셀 단독의 투여는 74%(p<0.001) 종양 성장 억제를 야기하였다. FGFR1-ECD.339-Fc의 순차적 투여는 우선 88%(p<0.001) 종양 성장 억제를 야기하였고, 도세탁셀에 의한 순차적 투여는 우선 91%(p<0.001) 종양 성장 억제를 야기하였다. 최종적으로, FGFR1-ECD.339-Fc과 도세탁셀의 동시 투약은 96%(p<0.001) 종양 성장 억제를 야기하였다.
단편적 종양 용적 분석을 사용하여 FGFR1-ECD.339-Fc 및 도세탁셀의 순차적 및 동시 조합에서 향상된(부가적 또는 상승적) 또는 감소된(길항적) 종양 성장 억제 정도를 평가하였다. 해당 분석 결과를 표 4에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00004
해당 결과는 FGFR1-ECD.339-Fc 및 도세탁셀의 동시 투여가 종양 성장의 상승적 억제를 야기하는 한편, FGFR1-ECD.339-Fc 및 도세탁셀의 순차적 투여가 부가적 억제를 야기한다는 것을 입증한다.
실시예 2: H520 비소세포 폐암( NSCLC ) 이종이식 모델에서 FGFR1 - ECD .339- Fc 및 페메트렉세드의 투여
6 내지 8주령 암컷 SCID 마우스를 찰스 리버 레버러토리즈(매사추세츠주 윌밍턴에 소재)로부터 구입하였고, 연구 시작 전 1주일 동안 적응시켰다. 편평 세포 폐암 세포주 NCI-H520를 종양 모델로서 사용하였고, ATCC(버지니아주 매너서스에 소재; 카탈로그 번호 HTB-182)로부터 구입하였다. 5% CO2와 함께 습한 분위기 중의 37℃에서 RPMI + 10% FBS + 1% L-글루타민의 3 내지 4회 통과동안 세포를 배양시켰다. 배양시킨 세포가 85 내지 90% 컨플류언스에 도달하였을 때, 세포를 채취하였고, 3.5×107 세포/㎖에서 50% 매트리겔(Matrigel)을 함유하는 차가운 Ca2 + 및 Mg2 + 유리 PBS 중에서 재현탁시켰다. 3.5×106 세포/100㎕/마우스에서 마우스의 오른쪽 옆구리에 걸쳐 피하로 세포를 이식하였다. 종양 이식 후 제1일에, 마우스를 그룹 당 10마리 마우스에서 체중에 따라 무작위화하였다. 종양 이식 후 제1일에 모든 그룹에 대한 투약을 시작하였다.
FGFR1-ECD.339-Fc를 3 ㎎/㎖에서 PBS 중에서 조제하였고, 6주 동안 1주 2회 15㎎/㎏(300 ㎍/100 ㎕/마우스)에서 복강내로(i.p.) 투여하였다. 페메트렉세드 이나트륨을 피셔 사이언티픽(펜실베니아주 피츠버그에 소재; 카탈로그 번호 NC9564691)으로부터 구입하였고, 식염수 USP(Saline USP) 중에서 12.5 ㎎/㎖, 25 ㎎/㎖ 및 50 ㎎/㎖로 조제하였다. 페메트렉세드를 제1주에 5일 동안 매일, 제2주에 5일 동안 매일 62.6 ㎎/㎏(1.25 mg/100 ㎕/마우스); 125 ㎎/㎏(2.5 mg/100 ㎕/마우스); 및 250 ㎎/㎏(5 ㎎/100 ㎕/마우스)의 3가지 상이한 투약량 수준에서 i.p.로 투여하였다. 조합 그룹에서, FGFR1-ECD.339-Fc 및 페메트렉세드는 단일 작용제로서 주어질 때와 동일한 스케줄로 투여하거나, 제1일, 제4일, 제8일 및 제11일에 동시에 투여하였다. 인간 알부민을 그리폴스 USA(캘리포니아주 로스앤젤레스에 소재; 카탈로그 번호 NDC 61953-0002-1)로부터 구입하였고, 3 ㎎/㎖에서 PBS 중에서 조제하였으며, 300 ㎍/100 ㎕/마우스(15㎎/㎏)에서 음성 대조군으로서 사용하였다. 마우스의 각 세트에 대한 투약 스케줄을 표 5에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00005
마우스의 종양 용적 및 체중을 연구 내내 1주 2회 모니터링하였다. 종양 용적을 측정하였고, 실시예 1에서 기재한 방법 및 식을 사용하여 계산하였다.
다음의 징후 중 어떤 것이 연구가 끝나기 전 관찰되었을 때 동물을 마취시켰다: 초기 체중의 ≥15%의 체중 손실; 종양 표면적의 ≥30%의 종양 궤양; 마우스가 빈사상태임; 또는 개개의 종양 용적이 ≥2000 ㎣. 아이소플루란 흡입에 의해 마우스를 마취시켰고, 경추탈골시켰다.
저 페메트렉세드 투약량 그룹, 중간 페메트렉세드 투약량 그룹 및 고 페메트렉세드 투약량 그룹에 대해 연구 내내 평균 종양 용적을 도 2a, 3a, 및 4a에서 각각 나타낸다. 도 2b, 3b 및 4b는 연구 과정에 걸쳐 각 그룹에서 마우스의 체중을 나타낸다. 250 ㎎/㎏ 페메트렉세드가 용량의 투여 후 체중 손실에 기반하여 마우스에서 최대 관용 용량에 접근하는 것으로 나타났다. 도 4b를 참조한다.
저용량 또는 중간 용량에서 FGFR1-ECD.339-Fc 또는 페메트렉세드 중 하나의 단독 투여는 연구 과정에 걸쳐 종양 억제를 야기하였다. 가장 높은 용량의 페메트렉세드는 단독으로 종양 성장을 억제하는 것으로 나타나지 않았다. FGFR1-ECD.339-Fc 및 페메트렉세드의 동시 투약은 종양 성장의 더 큰 억제를 야기하였지만, FGFR1-ECD.339-Fc와 가장 큰 용량의 페메트렉세드의 조합에 의해 종양 억제는 통계적으로 유의하지 않았다.
체중 그래프는 마우스가 저용량 및 고용량의 페메트렉세드를 충분히 관용한다는 것을 나타낸다. 고용량의 페메트렉세드에서, 마우스는 초기에 유의한 체중을 상실하였다. 따라서 처음 5일 투약 후 투약을 중단하였다. 따라서 고용량 그룹에서, 동물은 단지 처음 5회 용량을 받았고, 두 번째 5회 용량은 생략하였다.
제49일에 마우스의 각 그룹의 종양 용적을 일원분산분석 다음에 터키 검정에 의해 분석하였다. 해당 분석 결과를 표 6에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00006
FGFR1-ECD.339-Fc 단독의 투여는 31%(p>0.05) 종양 성장 억제를 초래하였고, 62.5, 125 또는 250 ㎎/㎏에서 페메트렉세드 단독의 투여는 각각 40, 24 또는 1%(p>0.05) 종양 성장 억제를 초래하였다. FGFR1-ECD.339-Fc(15 ㎎/㎏) 및 62.5, 125 또는 250㎎/㎏에서 페메트렉세드의 동시 투약은 각각 68%(p< 0.01), 57%(p<0.05) 또는 46%(p>0.05) 종양 성장 억제를 초래하였다.
단편적 종양 용적 분석을 사용하여 FGFR1-ECD.339-Fc 및 페메트렉세드의 투여 후 향상된(부가적 또는 상승적) 또는 감소된(길항적) 종양 성장 억제 정도를 평가하였다. 해당 분석 결과를 표 7에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00007
해당 결과는 FGFR1-ECD.339-Fc 및 페메트렉세드의 투여가 종양 성장의 부가적 억제를 야기한다는 것을 입증한다.
실시예 3: A549 비소세포 폐암( NSCLC ) 이종이식 모델에서 다양한 화학치료제와 조합한 FGFR1-ECD.339-Fc의 투여
6주령 암컷 SCID 마우스를 찰스 리버 레버러토리즈(매사추세츠주 윌밍턴에 소재)로부터 구입하였고, 연구 시작 전 1주일 동안 적응시켰다. ATCC(버지니아주 매너서스에 소재; 카탈로그 번호 CCL-185)로부터 구입한 A549 세포를 5% CO2와 함께 습한 분위기 중의 37℃에서 RPMI + 10% FBS + 1% L-글루타민의 3회 통과동안 세포를 배양시켰다. 배양시킨 세포가 85 내지 90% 컨플류언스에 도달하였을 때, 세포를 채취하였고, 밀리리터 당 5×107 세포에서 50% 매트리겔을 함유하는 차가운 Ca2 + 및 Mg2+ 유리 인산염 완충 식염수(PBS) 중에서 재현탁시켰다. 5×106 세포/100㎕/마우스에서 마우스의 오른쪽 옆구리에 걸쳐 피하로 세포를 이식하였다. 종양 이식 후 제1일에, 마우스를 그룹 당 10마리 마우스에서 체중에 따라 무작위화하였다.
마우스의 종양 용적 및 체중을 각 연구 내내 1주 2회 모니터링하였다. 실시예 1에 기재한 방법 및 식을 사용하여 종양 용적을 측정하였고, 계산하였다.
각 연구의 마지막에 마우스의 각 그룹의 종양 용적을 일원분산분석 다음에 터키 검증에 의해 분석하였다. 단편적 종양 용적 분석을 사용하여 그 다음에 하나 이상의 추가적인 화학치료제 분자와 함께 FGFR1-ECD.339-Fc의 투여 후 달성된 향상된(부가적 또는 상승적) 또는 감소된(길항적) 종양 성장 억제 정도를 평가하였다.
특정 연구를 상세하게 설명하며, 각 조합의 결과는 이하에서 논의한다.
A. FGFR1-ECD.339-Fc 및 시스플라틴
FGFR1-ECD.339-Fc를 4 ㎎/㎖에서 0.9% 염화나트륨 주입 USP(뉴욕주 멜빌에 소재한 Henry Schein, Inc.; 카탈로그 번호 1533826)에서 조제하였고, 6주 동안 1주 2회 20 ㎎/kg(400 ㎎/100 ㎖/마우스)에서 복강내로(i.p.) 투여하였다. 시스플라틴을 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)(미주리주 세인트 루이스에 소재; 카탈로그 번호 P4394)로부터 구입하였고, 0.9% 식염수 중에서 조제하였으며, 6주 동안 1주마다 1회 3.5 ㎎/㎏(마우스 당 17 ㎍/100 ㎕)에서 i.p.로 투여하였다. 음성 대조군으로서 식염수를 사용하였고, 6주 동안 1주 2회 마우스 당 100㎕에서 i.p.로 투여하였다.
제42일에, 비히클 군의 평균 종양 용적이 1300㎣에 도달되었을 때, 아이소플루란 흡입에 의해 마우스를 마취시키고, 경추탈골시켰다.
마우스의 각 세트에 대한 연구 내내 평균 종양 용적을 도 5에 나타낸다. 해당 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc 및 시스플라틴의 투여는 약물 중 하나의 단독보다 종양 성장을 더 억제하였다. 추가로, 마우스는 해당 연구과정에 걸쳐 체중이 상실되지 않았다(데이터 미제시).
제42일에 각 그룹의 마우스의 종양 용적을 일원분산분석 다음에 터키 검정에 의해 분석하였다. 해당 분석의 결과를 표 8에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00008
FGFR1-ECD.339-Fc 및 시스플라틴의 조합이 향상된(부가적 또는 상승적) 또는 감소된(길항적) 항종양 활성을 야기하는지 여부를 결정하기 위하여, 실시예 1에서 기재한 바와 같이 단편적 종양 용적을 분석하였다. 해당 분석의 결과를 표 9에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00009
해당 결과는 FGFR1-ECD.339-Fc 및 시스플라틴의 조합이 해당 실험에서 종양 성장의 부가적 억제를 야기한다는 것을 나타낸다.
B. FGFR1-ECD.339-Fc 및 파클리탁셀
FGFR1-ECD.339-Fc 및 파클리탁셀의 조합을 상기 기재한 A549 인간 비소세포 폐암 이종이식 모델에서 시험하였다. FGFR1-ECD.339-Fc를 3 ㎎/㎖에서 주입 USP용 0.9% 식염수 중에서 조제하였다. 베드포드 레버러토리즈(Bedford Laboratories)(오하이오주 베드포드에 소재; 카탈로그 번호 1075029)로부터 파클리탁셀을 구입하였고, 18 ㎎/㎏의 용량에 대해 3.6 ㎎/㎖에서 5% 덱스트로스를 함유하는 주사용 0.9% 식염수 중에서 조제하였다. FGFR1-ECD.339-Fc를 5주 동안 1주 2회 15 ㎎/㎏에서 복강내로(i.p.) 투여하였다. 파클리탁셀을 제8일, 제12일 및 제15일에 18 ㎎/㎏에서 i.p.로 투여하였다.
비히클 대조군 그룹 내 평균 종양 용적이 ~500 ㎣에 도달되었을 때, 아이소플루란 흡입에 의해 마우스를 마취시키고, 경추탈골시켰다.
마우스의 각 세트에 대해 연구동안의 평균 종양 용적을 도 6에 나타낸다. 해당 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc와 파클리탁셀의 조합은 약물 중 하나의 단독보다 종양 성장을 더 억제하였다. 추가로, 마우스는 연구 과정에 걸쳐 체중이 손실되지 않았다(데이터 미제시).
FGFR1-ECD.339-Fc와 파클리탁셀의 조합이 부가적, 상승적 또는 길항적 활성을 야기하는지 여부를 결정하기 위하여, 제31일 및 제38일에 단편적 종양 용적을 실시예 1에 기재한 바와 같이 분석하였다. 해당 분석의 결과를 표 10에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00010
해당 결과는 FGFR1-ECD.339-Fc 및 파클리탁셀의 투여가 종양 성장의 부가적 억제를 야기한다는 것을 나타낸다.
C. FGFR1-ECD.339-Fc 및 5-FU
FGFR1-ECD.339-Fc와 5-플루오로유라실(5-FU)의 조합을 상기 기재한 A549 인간 비소세포 폐암 이종이식 모델에서 시험하였다. 3 ㎎/㎖에서 주사 USP용 0.9% 식염수 중에서 FGFR1-ECD.339-Fc를 조제하였다. 5-FU를 시그마-알드리치(미주리주 세인트 루이스에 소재; 카탈로그 번호 F6627)로부터 구입하였고, 처음에 저장용액으로서 50 ㎎/㎖의 농도에서 다이메틸 설폭사이드(DMSO, 미주리주 세인트 루이스에 소재한 시그마-알드리치; 카탈로그 번호 D8418-50) 중에 용해시켰다. 저장 용액을 6.6 ㎎/㎖(33 ㎎/㎏ 투약을 위해)로 0.9% 염화나트륨 주사 USP 중에서 추가로 희석시켰다. FGFR1-ECD.339-Fc를 4주 동안 1주 2회 15 ㎎/㎏에서 복강내로(i.p.) 투여하였다. 5-FU를 3주 동안 1주 2회 33 ㎎/㎏에서 i.p.로 투여하였다.
제31일에 아이소플루란 흡입에 의해 마우스를 마취시키고, 경추탈골시켰다.
마우스의 각 세트에 대한 연구 동안 평균 종양 용적을 도 7에 나타낸다. 해당 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc와 5-FU의 조합은 약물 단독보다 종양 성장을 더 크게 억제하였다. 추가로, 마우스는 해당 연구 과정에 걸쳐 체중이 손실되지 않았다(데이터 미제시).
FGFR1-ECD.339-Fc와 5-FU의 조합이 부가적, 상승적 또는 길항적 활성을 야기하는지 여부를 결정하기 위하여, 제31일에 단편적 종양 용적을 실시예 1에 기재한 바와 같이 분석하였다. 해당 분석의 결과를 표 11에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00011
해당 결과는 FGFR1-ECD.339-Fc 및 5-FU의 투여가 해당 실험에서 종양 성장의 상승적 억제를 야기한다는 것을 나타낸다. 본 발명자들은 20 ㎎/㎏ 또는 50 ㎎/㎏ 5-FU를 사용하는 유사한 실험이 상승작용을 야기하지 않는다는 것을 주목한다(데이터 미제시).
D. FGFR1-ECD.339-Fc 및 도세탁셀
FGFR1-ECD.339-Fc 및 도세탁셀의 조합을 상기 기재한 A549 인간 비소세포 폐암 이종이식 모델에서 시험하였다. FGFR1-ECD.339-Fc를 3 ㎎/㎖로 PBS 중에서 조제하였고, 4주 동안 1주 2회 15 ㎎/㎏(300 ㎍/100 ㎕/마우스)에서 복강내로(i.p.) 투여하였다. 도세탁셀을 4주 동안 1주 2회 3 ㎎/㎏ 또는 10 ㎎/㎏에서 i.p.로 투여하였다.
그룹의 평균 종양 용적이 1000 ㎣에 도달되었을 때, 알부민 대조군 내 마우스를 제32일에 아이소플루란 흡입에 의해 마취시키고 경추탈골시켰다.
마우스의 각 세트에 대해 연구 동안 평균 종양 용적을 도 8a(3 ㎎/㎏ 도세탁셀) 및 8b(10 ㎎/㎏ 도세탁셀)에 나타낸다. 해당 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc와 도세탁셀의 조합은 도세탁셀의 투약량 중 하나에서 약물 중 하나의 단독보다 종양 성장을 더 크게 억제하였다. 추가로, 마우스는 도세탁셀의 투약량 중 하나에서 해당 연구의 과정에 걸쳐 체중이 손실되지 않았다(데이터 미제시).
FGFR1-ECD.339-Fc와 도세탁셀의 조합이 부가적, 상승적 또는 길항적 활성을 야기하는지 여부를 결정하기 위하여, 제32일에 단편적 종양 용적을 실시예 1에 기재한 바와 같이 분석하였다. 해당 분석의 결과를 표 12에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00012
해당 결과는 FGFR1-ECD.339-Fc 및 도세탁셀의 투여가 해당 실험에서 종양 성장의 부가적 억제를 야기한다는 것을 나타낸다.
E. FGFR1-ECD.339-Fc 및 빈크리스틴
FGFR1-ECD.339-Fc와 빈크리스틴의 조합을 상기 기재한 A549 인간 비소세포 폐암 이종이식 모델에서 시험하였다. 15 ㎎/㎏(마우스 당 300㎍/200㎕)에서 투여를 위해 1.5 ㎎/㎖, 또는 20 ㎎/㎏(마우스 당 400 ㎍/200 ㎕)에서 투여를 위해 2 ㎎/㎖에서 주사 USP용 0.9% 식염수 중에서 FGFR1-ECD.339-Fc를 조제하였다. 빈크리스틴을 플루카-시그마(Fluka-Sigma)(미주리주 63103 세인트 루이스에 소재, 카탈로그 번호 V8879)로부터 얻었고, 1 ㎎/㎏(마우스 당 0.02 ㎍/100 ㎕) 또는 1.5 ㎎/㎏(마우스 당 0.03 ㎍/200 ㎕)에서 각각 투여를 위해 0.1 ㎎/㎖ 또는 0.15 ㎎/㎖로 주사 USP용 0.9% 식염수 중에서 조제하였다.
제1 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc를 6주 동안 제1일에 시작하여 1주마다 2회 15 ㎎/㎏에서 복강내로(i.p.) 투여하였고, 빈크리스틴을 제8일, 제15일 및 제22일에 1 ㎎/㎏에서 i.p.로 투여하였다. 제2 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc를 7주 동안 제19일에 시작하여 1주 2회 20 ㎎/㎏에서 복강내로(i.p.) 투여하였고, 빈크리스틴을 제27일, 제34일 및 제41일에 1.5 ㎎/㎏에서 i.p.로 투여하였다.
제1 실험으로부터 마우스를 종양 이식 후 제46일에 마취시켰다. 제2 연구에서, 알부민 대조군의 마우스 및 FGFR1-ECD.339-Fc 기의 마우스를 종양 이식 후 제70일에 마취시킨 한편, 빈크리스틴-처리군 마우스를 종양 이식 후 제77일에 마취시켰다. 모든 마우스를 아이소플루란 흡입에 의해 마취시키고, 경추탈골시켰다.
마우스의 각 세트에 대한 연구 동안 평균 종양 용적을 도 9a(1 ㎎/㎏ 빈크리스틴; 제1일에 시작한 투약) 및 도 9b(1.5 ㎎/㎏ 빈크리스틴; 제19일에 시작한 투약)에 나타낸다. 해당 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc와 빈크리스틴의 조합은 약물 중 하나의 단독보다 및 투약 스케줄 중 하나에서 종양 성장을 더 억제하였다. 추가로, 저용량의 빈크리스틴에서, 마우스는 체중이 손실되지 않았다(데이터 미제시). 고용량의 빈크리스틴에서, 고용량이 최대 관용 용량과 더 가깝다는 것을 나타낸다. 도 9c를 참조한다.
FGFR1-ECD.339-Fc와 빈크리스틴의 조합이 부가적, 상승적 또는 길항적 활성을 야기하는지 여부를 결정하기 위하여, 제1 실험에 대해 제39일 및 제46일 및 제2 실험에 대해 제70일에 단편적 종양 용적을 실시예 1에 기재한 바와 같이 분석하였다. 해당 분석의 결과를 표 13에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00013
해당 결과는 FGFR1-ECD.339-Fc 및 빈크리스틴의 투여가 저용량의 빈크리스틴에서 종양 성장의 부가적 억제 및 고용량의 빈크리스틴에서 종양 성장의 상승적 억제를 야기한다는 것을 나타낸다.
F. FGFR1-ECD.339-Fc, 카보플라틴 및 파클리탁셀
FGFR1-ECD.339-Fc, 카보플라틴과 파클리탁셀의 조합을 상기 기재한 A549 인간 비소세포 폐암 이종이식 모델에서 시험하였다. FGFR1-ECD.339-Fc를 3 ㎎/㎖(15 ㎎/㎏에서 투여를 위해)에서 주사 USP용 0.9% 식염수 중에서 조제하였다. 카보플라틴을 시그마-알드리치(미주리주 63103 세인트루이스에 소재, 카탈로그 번호 C2538)로부터 얻었고, 25 ㎎/㎏(마우스 당 500 ㎍/200㎕)에서 투여를 위해 2.5 ㎎/㎖에서 주사 USP용 0.9% 식염수 중에서 조제하였다. 파클리탁셀을 LC 레버러토리즈(메사추세츠주 01801 우번에 소재; 카탈로그 번호 P-9600)로부터 얻었고, 저장액으로서 20 ㎎/㎖에서 50.3% 크레모포(Cremophor)(등록상표) 및 49.7% 무수 알코올의 용액 중에서 조제하였다. 저장 용액을 30 ㎎/㎏(마우스 마다 600 ㎍/200 ㎕)에서 투여를 위해 3 ㎎/㎖에서 주사 USP용 0.9% 식염수 중의 5% 덱스트로스 중에서 추가로 희석시켰다.
FGFR1-ECD.339-Fc를 3주 동안 제7일에 시작하여 1주 2회 15 ㎎/㎏에서 복강내로(i.p.) 투여하였다. 카보플라틴을 3주 동안 제7일에 시작하여 1주 2회 25 ㎎/㎏에서 i.p.로 투여하였다. 파클리탁셀을 3주 동안 제8일에 시작하여 1주 2회 30 ㎎/㎏에서 i.p.로 투여하였다.
마우스를 단일 작용제 그룹에서 제34일에, 조합 그룹에서 제41일에 마취시켰다. 아이소플루란 흡입에 의해 마우스를 마취시키고, 경추탈골시켰다.
마우스의 각 세트에 대해 연구 동안 평균 종양 용적을 도 10에 나타낸다. 해당 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc, 카보플라틴 및 파클리탁셀의 조합은 약물 중 어떤 것 단독보다 종양 성장을 더 억제하였고, 또한 카보플라틴과 파클리탁셀의 조합보다 더 억제하였다. 해당 연구 과정 동안 체중 손실은 관찰되지 않았다(데이터 미제시).
FGFR1-ECD.339-Fc, 카보플라틴과 파클리탁셀의 조합이 부가적, 상승적 또는 길항적 활성을 야기하는지 여부를 결정하기 위하여, 제28일에 단편적 종양 용적을 실시예 1에 기재한 바와 같이 분석하였다. 해당 분석의 결과를 표 14에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00014
해당 결과는 FGFR1-ECD.339-Fc, 카보플라틴과 파클리탁셀의 투여가 해당 실험에서 종양 성장의 부가적 억제를 초래한다는 것을 나타낸다.
실시예 4: Colo205 결장암 이종이식 모델에서 다양한 화학치료제와 조합한 FGFR1-ECD.339-Fc의 투여
Colo205 세포를 ATCC(버지니아주 매너서스에 소재; 카탈로그 번호 CCL-222)로부터 구입하였고, RPMI1640 배지, 10% FBS, 및 1% L-글루타민 내 3회 통과동안 배양시켰다. 세포를 2천 5백만 개 세포/㎖의 농도에서 50%/v PBS 및 50%/v 매트리겔의 용액 중에서 재현탁시켰다. 이식시까지 재현탁 세포를 얼음 상에서 유지하였다. 6주령 암컷 SCID 마우스를 찰스 리버 레버러토리즈(매사추세츠주 윌밍턴에 소재)로부터 구입하였고, 연구 시작 전 1주 동안 적응시켰다. 제0일에, 2천 5백만개 세포/100㎕를 27G1/2 바늘을 사용하여 각 마우스의 오른쪽 옆구리에 걸쳐 이식하였다. 종양 이식 후 제1일에, 마우스를 체중에 따라 무작위화하였다.
마우스의 종양 용적 및 체중을 각 연구 내내 1주 2회 모니터링하였다. 종양 용적을 측정하였고, 실시예 1에서 기재한 방법 및 식을 사용하여 측정하고, 계산하였다.
각 연구의 마지막에 마우스의 각 그룹의 종양 용적을 일원분산분석 다음에 터키검정에 의해 분석하였다. 그 다음에 단편적 종양 용적 분석을 사용하여 하나 이상의 추가적인 화학치료 분자와 함께 FGFR1-ECD.339-Fc의 투여 후 달성된 향상된(부가적 또는 상승적) 또는 감소된(길항적) 종양 성장 억제를 평가하였다.
특정 연구를 상세히 설명하며, 각 조합에 대한 결과를 이하에서 논의한다.
A. FGFR1-ECD.339-Fc, 5-FU, 류코보린 및 베바시주맙
FGFR1-ECD.339-Fc를 2 ㎎/㎖에서 0.9% 염화나트륨 주사 USP(뉴욕주 멜빌에 소재한 Henry Schein, Inc; 카탈로그 번호 1533826) 중에서 조제하였고, -80℃에서 스크루 캡 원심분리 튜브에 저장하였다. 음성 대조군 시약인 인간 알부민을 그리폴스 USA(캘리포니아주 로스앤젤레스에 소재; 카탈로그 번호 NDC 61953-0002-1)로부터 구입하였고, 3 ㎎/㎖에서 PBS 중에서 조제하였다. 5-FU를 시그마-알드리치(미주리주 세인트루이스에 소재; 카탈로그 번호 F6627)로부터 구입하였고, 저장액으로서 50 ㎎/㎖의 농도에서 다이메틸설폭사이드(DMSO, 미주리주 세인트루이스에 소재한 시그마-알드리치; 카탈로그 번호 D8418-50) 중에서 처음에 용해시켰다. 저장액을 2 ㎎/㎖(10 ㎎/㎏ 투약에 대해)로, 4 ㎎/㎖(20 ㎎/㎏ 투약에 대해)로, 및 6 ㎎/㎖(30 ㎎/㎏ 투약에 대해)로 0.9% 염화나트륨 주사 USP 중에서 추가로 희석시켰다. 또한 류코보린(LV)을 시그마-알드리치(카탈로그 번호 F8259)로부터 구입하였고, 2 ㎎/㎖(10 ㎎/㎏ 투약에 대해)로, 4 ㎎/㎖(20 ㎎/㎏ 투약에 대해)로, 및 6 ㎎/㎖(30 ㎎/㎏ 투약에 대해)로 0.9% 염화나트륨 주사 USP 중에서 용해시켰다. 베바시주맙을 지넨테크(Genentech, Inc)(캘리포니아주 사우스 샌프란시스코에 소재; 카탈로그 번호 15734)로부터 구입하였고, 0.2 ㎎/㎖(1 ㎎/㎏ 투약에 대해)로 0.9% 염화나트륨 주사 USP 중에서 희석시켰다.
제1 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc를 5-FU/류코보린의 3가지 상이한 농도와 조합하였다. 제2 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc를 베바시주맙 또는 5-FU/류코보린 중 하나 또는 둘 다와 조합하였다. 실험에 대한 그룹 및 투약 스케줄을 표 15에서 나타낸다. 이중선은 두 실험으로부터 그룹을 분리시킨다.
Figure 112018044380103-pat00015
그룹 내 평균 종양 용적이 거의 600 ㎣일 때, 아이소플루란 흡입에 의해 해당 그룹 내 마우스를 마취시켰고, 경추탈골시켰다. 마우스의 각 세트에 대해 연구 동안 평균 종양 용적을 도 11에 나타낸다. 20 ㎎/㎏ 5-FU/류코보린 및 30 ㎎/㎏ 5-FU/류코보린에서, 마우스는 각각 약 3 그램 내지 약 4 그램의 체중이 손실되었다(각각 약 14% 및 19%)(데이터 미제시). 남아있는 그룹 중 어떤 것에서 마우스의 체중 손실은 관찰되지 않았다(데이터 미제시).
다양한 처리군의 유효성 순서를 2가지 방법으로 평가하였다: 1) 단일 시점(일) 상에서 각 그룹의 평균 종양 용적; 및 2) 각 그룹의 평균 종양 용적에 대해 500 ㎣에 도달하는 시간(도 11e에서 점선을 참조).
해당 방법에 따르는 실험 결과는 다양한 처리군의 항종양 효과가 다음의 순서라는 것을 나타낸다: FGFR1-ECD.339-Fc, 베바시주맙 및 5-Fu/류코보린 > FGFR1-ECD.339-Fc 및 베바시주맙 > 베바시주맙 및 5-Fu/류코보린 = 베바시주맙 > FGFR1-ECD.339-Fc > 비히클.
제24일에 제2 실험에서 마우스의 각 그룹의 평균 종양 용적을 일원분산분석 후 터키 검정에 의해 분석하였다. 해당 분석의 결과를 표 16에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00016
다양한 농도에서 FGFR1-ECD.339-Fc와 5-FU/류코보린; FGFR1-ECD.339-Fc와 베바시주맙; 또는 FGFR1-ECD.339-Fc, 베바시주맙과 5-Fu/류코보린의 투여가 부가적, 상승적 또는 길항적 활성을 야기하는지 여부를 결정하기 위하여, 단편적 종양 용적을 실시예 1에 기재한 바와 같이 분석하였다. 해당 분석의 결과를 표 17에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00017
해당 결과는 다양한 농도에서 FGFR1-ECD.339-Fc와 5-FU/류코보린; FGFR1-ECD.339-Fc와 베바시주맙; 또는 FGFR1-ECD.339-Fc, 베바시주맙과 5-Fu/류코보린의 투여가 종양 성장의 부가적 억제를 야기한다는 것을 나타낸다.
B. FGFR1-ECD.339-Fc, 5-FU, 류코보린 및 옥살리플라틴
FGFR1-ECD.339-Fc, 5-FU, 류코보린과 옥살리플라틴의 조합을 상기 기재한 Colo205 인간 결장암 이종이식 모델에서 시험하였다. FGFR1-ECD.339-Fc를 3 ㎎/㎖(15 ㎎/㎏에서 투여에 대해)에서 PBS 중에서 조제하였다. 5-FU를 시그마-알드리치(미주리주 세인트루이스에 소재; 카탈로그 번호 F6627)로부터 구입하였고, 저장액으로서 50 ㎎/㎖의 농도에서 다이메틸설폭사이드(DMSO, 미주리주 세인트루이스에 소재한 시그마-알드리치; 카탈로그 번호 D8418-50) 중에서 처음에 용해시켰다. 저장액을 2 ㎎/㎖(10 ㎎/㎏ 투약에 대해)로 0.9% 염화나트륨 주사 USP 중에서 추가로 희석시켰다. 또한 류코보린(LV)을 시그마-알드리치(카탈로그 번호 F8259)로부터 구입하였고, 2 ㎎/㎖(10 ㎎/㎏ 투약에 대해)에서 0.9% 염화나트륨 주사 USP 중에서 조제하였다. 옥살리플라틴을 LC 레버러토리즈(메사추세츠주 01801 우번에 소재; 카탈로그 번호 O-7111)로부터 얻었고, 5 ㎎/㎏(마우스 당 100 ㎍/100 ㎕), 10 ㎎/㎏(마우스 당 200 ㎍/100 ㎕) 및 15 ㎎/㎏(마우스 당 300 ㎍/100 ㎕)에서 투여를 위해 1 ㎎/㎖, 2 ㎎/㎖ 및 3 ㎎/㎖에서 5% 덱스트로스 주사(일리노이주 60015 디어필드에 소재한 백스터(Baxter); 카탈로그 번호 2B0082) 중에서 조제하였다.
FGFR1-ECD.339-Fc를 4주 동안 제1일에 시작하여 1주 2회 15 ㎎/㎏에서 복강내로(i.p.) 투여하였다. 5-FU 및 류코보린을 각각 5일 동안 매일 10 ㎎/㎏에서 i.p.로 투여하였다. 옥살리플라틴을 제1일에 1용량으로 5 ㎎/㎏, 10 ㎎/㎏ 또는 15 ㎎/㎏에서 i.p.로 투여하였다.
아이소플루란 흡입에 의해 제28일에 마우스를 마취시켰고, 경추탈골시켰다.
마우스의 각 세트에 대해 연구 동안 평균 종양 용적을 도 12에 나타낸다. 해당 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc, 5-FU, 류코보린 및 옥살리플라틴의 조합은 FGFR1-ECD.339-Fc 단독 또는 5-FU, 류코보린과 옥살리플라틴의 조합보다 종양 성장을 더 억제하였다. 마우스에서 최소 체중을 5 ㎎/㎏ 옥살리플라틴에서 관찰하였고(0.78 그램 또는 4% 체중); 중등증의 체중 손실을 10 ㎎/㎏에서 관찰하였으며(2.6 그램, 또는 13% 체중); 더 중증의 체중 손실을 1주 2회 15 ㎎/㎏ 옥살리플라틴에서 관찰하였다(3.7 그램, 또는 19% 체중). (데이터 미제시).
FGFR1-ECD.339-Fc, 5-FU, 류코보린과 옥살리플라틴의 조합이 부가적, 상승적 또는 길항적 활성을 야기하는지 여부를 결정하기 위하여, 제17일에 단편적 종양 용적을 실시예 1에 기재한 바와 같이 분석하였다. 해당 분석의 결과를 표 18에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00018
해당 결과는 FGFR1-ECD.339-Fc, 5-FU, 류코보린 및 옥살리플라틴의 투여가 해당 실험에서 시험한 옥살리플라틴의 각 투약량에서 종양 성장의 부가적 억제를 야기한다는 것을 나타낸다.
실시예 5: JIMT -1 유방암 이종이식모델에서 FGFR1 - ECD .339- Fc , 독소루비신 및 파클리탁셀의 투여
6주령 암컷 SCID 마우스를 찰스 리버 레버러토리즈(매사추세츠주 윌밍턴에 소재)로부터 구입하였고, 연구 시작 전 1주 동안 적응시켰다. 인간 유방암 세포주 JIMT-1를 종양 모델로서 사용하였고, 독일생물자원센터(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH)(독일 브라운슈바익에 소재한 DMSZ; 카탈로그 번호 ACC 589)로부터 구입하였다. 5% CO2와 함께 습한 분위기 중의 37℃에서 DMEM + 10% FBS, 1% L-글루타민 및 1% 페니실린/스트렙토마이신의 10회 통과동안 세포를 배양시켰다. 배양시킨 세포가 85 내지 90% 컨플류언스에 도달하였을 때, 세포를 채취하였고, 밀리리터 당 5×107 세포에서 50% 매트리겔을 함유하는 차가운 Ca2+ 및 Mg2 + 유리 인산염 완충 식염수(PBS) 중에서 재현탁시켰다. 5×106 세포/100㎕/마우스에서 마우스의 오른쪽 옆구리에 걸쳐 피하로 세포를 이식하였다. 종양 이식 후 제1일에, 마우스를 그룹 당 10마리 마우스에서 체중에 따라 무작위화하였다.
FGFR1-ECD.339-Fc를 3 ㎎/㎖에서 주사 USP용 0.9% 식염수 중에서 조제하였고, 제7일에 시작하여 5주 동안 1주 2회 15 ㎎/㎏(300 ㎍/100 ㎕/마우스)에서 복강내로(i.p.) 투여하였다. 독소루비신을 시그마-알드리치(미주리주 세인트루이스에 소재; 카탈로그 번호 44583)로부터 얻었고, 제7일에 시작하여 5주 동안 1주 1회 0.5 ㎎/㎏(마우스 당 10 ㎍/200 ㎕)에서 투여를 위해 0.05 ㎎/㎖에서 주사 USP용 0.6% 식염수 중에서 조제하였다. 파클리탁셀을 베드포드 레버러토리즈(오하이오주 베드포드에 소재; 카탈로그 번호 1075029)로부터 얻었고, 50.3% 크레모포(Cremophor)(등록상표) 및 49.7% 무수 알코올의 용액 중에서 조제하였다. 저장액을 16.8% 크레모포(Cremophor)(등록상표) 중에서 3 ㎎/㎖ 파클리탁셀의 최종 농도로 5% 덱스트로스/주사 USP용 0.9% 식염수 중에서, 16.6% 무수 알코올, 3.3% 덱스트로스, 주사 USP용 0.6% 식염수 중에서 희석시켰다. 파클리탁셀을 제7일에 시작하여 5주 동안 1주 2회로 30 ㎎/㎏(마우스 당 60 ㎍/200 ㎕)에서 투여하였다.
마우스의 종양 용적 및 체중을 연구 내내 1주 2회 모니터링하였다. 종양 용적을 측정하였고, 실시예 1에 기재한 방법 및 식을 사용하여 계산하였다.
아이소플루란 흡입에 의해 제42일에 마우스를 마취시켰고, 경추탈골시켰다.
마우스의 각 세트에 대해 연구 내내 평균 종양 용적을 도 13에 나타낸다. 해당 실험에서, FGFR1-ECD.339-Fc, 독소루비신과 파클리탁셀의 조합은 FGFR1-ECD.339-Fc 단독 또는 FGFR1-ECD.339-Fc 없이 독소루비신과 파클리탁셀의 조합보다 종양 성장을 더 억제하였다. 연구과정에 걸쳐 체중 손실은 관찰되지 않았다(데이터 미제시).
단편적 종양 용적 분석을 사용하여 FGFR1-ECD.339-Fc, 독소루비신과 파클리탁셀의 조합에 의해 향상된(부가적 또는 상승적) 또는 감소된(길항적) 종양 성장 억제 정도를 평가하였다. 해당 분석의 결과를 표 19에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00019
해당 결과는 FGFR1-ECD.339-Fc, 독소루비신과 파클리탁셀의 조합이 해당 실험에서 종양 성장의 부가적 억제를 야기한다는 것을 입증한다.
실시예 6: H520 폐 이종이식 종양 세포를 갖는 마우스에서 FGFR1 - ECD .339- Fc 및 KDR ECD-Fc로 처리는 종양 억제를 나타내었다
제8주령의 SCID CB17 마우스에 비히클, 키나제 삽입 도메인 수용체(KDR) cDNA(캘리포니아주 사우스 샌프란시스코에 소재한 파이브 프라임 세러퓨틱스(Five Prime Therapeutics))(이는 VEGF 길항물질 및 VEGF 트랩으로서 작용하는 단백질을 발현시킴), FGFR1 cDNA(캘리포니아주 사우스 샌프란시스코에 소재한 파이브 프라임 세러퓨틱스), 또는 KDR와 FGFR1의 조합 중 하나를 실질적으로 문헌[Chen et al., Human Gene Therapy 16(1): 126-131 (2005)]에서 기재된 바와 같이 수력학적 꼬리정맥 트랜스펙션(tail vein transfection, TVT)에 의해 투여한 다음, 4일 후 5×106 H520 폐 이종이식 종양 세포를 100㎕ 전체 용적으로 매트리겔(Matrigel)의 1:1 혼합물 중에서 세포와 함께 옆구리에 피하로 접종하였다. KDR 및 FGFR1 cDNA 작제물은 각각 IgG1 Fc 도메인에 융합된 이들 각각의 세포밖 도메인을 함유한다. 대략 10일 간격으로 종양 용적을 측정하였다. 제29일에, 비히클에 비해 단일 작용제로 처리한 군에서 종양 용적이 감소되었다(맨-휘트니 검정(Mann Whitney test) P<0.05). 제29일에, 단일 작용제로 처리한 그룹에 비해 조합그룹에서 종양 용적이 감소되었다(맨 휘트니 검정 P<0.001).
실시예 7: DMS 53 소세포 폐암( SCLC ) 이종이식 모델에서 FGFR1 - ECD .339- Fc 및 시스플라틴/에토포사이드의 투여
6주령 암컷 SCID 마우스를 찰스 리버 레버러토리즈(매사추세츠주 윌밍턴에 소재)로부터 구입하였고, 연구 시작 전 1주 동안 적응시켰다. 인간 소세포 폐암(SCLC) 세포주 DMS 53을 종양 모델로서 사용하였고, ATCC(버지니아주 매너서스에 소재; 카탈로그 번호 CRL-2062)로부터 구입하였다. 5% CO2와 함께 습한 분위기 중의 37℃에서 웨이머스(Waymouth's) MB 752/1 배지 + 10% FBS + 2mM L-글루타민의 3회 통과동안 세포를 배양시켰다. 배양시킨 세포가 85 내지 90% 컨플류언스에 도달하였을 때, 세포를 채취하였고, 밀리리터 당 5×107 세포에서 50% 매트리겔을 함유하는 차가운 Ca2 + 및 Mg2 + 유리 인산염 완충 식염수(PBS) 중에서 재현탁시켰다. 5×106 세포/100㎕/마우스에서 마우스의 오른쪽 옆구리에 걸쳐 피하로 세포를 이식하였다. 종양이 100 내지 125 ㎣의 크기에 도달된 후, 마우스를 정렬시켰고, 랜덤화시켜서, 각 그룹(n=10)은 대략 동일한 평균 종양 용적을 가지며, 이하의 표 20에 따라 처리를 시작하였다.
FGFR1-ECD.339-Fc를 3 ㎎/㎖로 PBS 중에서 조제하였고, 4주 동안 1주 2회 15 ㎎/㎏(300 ㎍/100 ㎕/마우스)에서 복강내로(i.p.) 투여하였다. 1㎎/㎖의 농도로 사전조제된 시스플라틴을 플로리다주 마이애미에 소재한 아마테온(Amatheon, Inc)(카탈로그 번호 5539-0112-50)으로부터 구입하였다. 0.3 ㎎/㎖의 농도로 1.5 ㎖ 작업 용액을 위해, 0.45㎖의 시스플라틴 저장액(1㎎/㎖)을 1.05 ㎖의 5% 덱스트로스 용액에 첨가하였다. 그룹에 따라 7일 또는 21일마다 3㎎/㎏의 용량을 제공하기 위하여 각 마우스에 100 ㎕의 작업 용액(0.3 ㎎/㎖)을 투여하였다. 20㎎/㎖의 농도로 사전 조제된 에토포사이드를 아마테온(카탈로그 번호 5539-0291-01)으로부터 구입하였다. 0.8 ㎎/㎖ 농도를 지니는 3.5 ㎖ 작업 용액을 위하여 0.140 ㎖의 저장액(20㎎/㎖)을 3.36 ㎖의 5% 덱스트로스에 첨가하였다. 계속해서 3일 동안 4㎎/㎏의 용량을 제공하기 위하여 각 마우스에 50 ㎕의 작업 용액(0.8 ㎎/㎖)을 투여하였다. 그룹에 따라서 7일 또는 21일마다 에토포사이드 투약을 반복하였다. 조합 그룹에서, FGFR1-ECD.339-Fc와 시스플라틴/에토포사이드를 동시에 투여하였다. 그리폴스 USA(캘리포니아주 로스앤젤레스에 소재; 카탈로그 번호 NDC 61953-0002-1)로부터 인간 알부민을 구입하였고, 0.9% 염화나트륨으로 작업 저장액(3 ㎎/㎖)을 희석시켰고, 300 ㎍/100 ㎕/마우스(15 ㎎/㎏)에서 음성 대조군으로서 사용하였다. 마우스의 각 세트에 대한 투약 스케줄을 표 20에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00020
실시예 8: DMS 53 소세포 폐암( SCLC ) 이종이식 모델에서 FGFR1 - ECD .339- Fc 및 토포테칸의 투여
6주령 암컷 SCID 마우스를 찰스 리버 레버러토리즈(매사추세츠주 윌밍턴에 소재)로부터 구입하였고, 연구 시작 전 1주 동안 적응시켰다. 인간 소세포 폐암(SCLC) 세포주 DMS 53을 종양 모델로서 사용하였고, ATCC(버지니아주 매너서스에 소재; 카탈로그 번호 CRL-2062)로부터 구입하였다. 5% CO2와 함께 습한 분위기 중의 37℃에서 웨이머스 MB 752/1 배지 + 10% FBS + 2mM L-글루타민의 3회 통과동안 세포를 배양시켰다. 배양시킨 세포가 85 내지 90% 컨플류언스에 도달하였을 때, 세포를 채취하였고, 밀리리터 당 5×107 세포에서 50% 매트리겔을 함유하는 차가운 Ca2 + 및 Mg2 + 유리 인산염 완충 식염수(PBS) 중에서 재현탁시켰다. 5×106 세포/100㎕/마우스에서 마우스의 오른쪽 옆구리에 걸쳐 피하로 세포를 이식하였다. 종양이 100 내지 125 ㎣의 크기에 도달된 후, 마우스를 정렬시켰고, 랜덤화시켜서, 각 그룹(n=10)은 대략 동일한 평균 종양 용적을 가지며, 이하의 표 21에 따라 처리를 시작하였다.
FGFR1-ECD.339-Fc를 3 ㎎/㎖에서 PBS 중에서 조제하였고, 4주 동안 1주 2회 15 ㎎/㎏(300 ㎍/100 ㎕/마우스)에서 복강내로(i.p.) 투여하였다.
토포테칸 분말을 시그마-알드리치 인코포레이티드(Cat No. T2705-50MG)로부터 구입하였고, 5 ㎎/㎖ 저장액을 5% 덱스트로스 용액 중에서 만들었다. 또한 5% 덱스트로스 용액으로 희석시켰다. 0.5 ㎎/㎖의 농도를 지니는 6㎖ 작업 용액을 위해 0.6㎖의 저장액(5 ㎎/㎖)을 5.4 ㎖의 5% 덱스트로스 용액에 첨가하였다. 각 마우스에 100 ㎕의 작업 용액(0.5 ㎎/㎖)을 투여하여 2.5 ㎎/㎏의 용량을 제공하였다. 토포테칸 투약을 그룹에 따라서 7일 또는 21일마다 반복하였다. 조합 그룹에서, FGFR1-ECD.339-Fc와 토포테칸을 동시에 투여하였다. 인간 알부민을 그리폴스 USA(캘리포니아주 로스앤젤레스; 카탈로그 번호 NDC 61953-0002-1)로부터 구입하였고, 0.9% 염화나트륨을 지니는 작업 저장액(3 ㎎/㎖)으로 희석시켰으며, 300 ㎍/100 ㎕/마우스(15 ㎎/㎏)에서 음성 대조군으로서 사용하였다. 마우스의 각 세트에 대한 투약 스케줄을 표 21에 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00021
서열의 표
표 22는 본 명세서에 논의된 특정 서열을 열거한다. 달리 표시되지 않는다면, FGFR1 서열은 신호 펩타이드 없이 나타낸다.
Figure 112018044380103-pat00022
Figure 112018044380103-pat00023
SEQUENCE LISTING <110> Five Prime Therapeutics, Inc. <120> FGFR1 extracellular domain combination therapies <130> P1004 <150> US 61/413,940 <151> 2010-11-15 <150> US 61/421,462 <151> 2010-12-09 <160> 10 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 374 <212> PRT <213> Human <400> 1 Met Trp Ser Trp Lys Cys Leu Leu Phe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala 1 5 10 15 Thr Leu Cys Thr Ala Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln 20 25 30 Pro Trp Gly Ala Pro Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly 35 40 45 Asp Leu Leu Gln Leu Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile 50 55 60 Asn Trp Leu Arg Asp Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg 65 70 75 80 Ile Thr Gly Glu Glu Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser 85 90 95 Gly Leu Tyr Ala Cys Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr 100 105 110 Tyr Phe Ser Val Asn Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp 115 120 125 Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr 130 135 140 Lys Pro Asn Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu 145 150 155 160 Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys 165 170 175 Pro Ser Ser Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly 180 185 190 Lys Glu Phe Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr 195 200 205 Ala Thr Trp Ser Ile Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly 210 215 220 Asn Tyr Thr Cys Ile Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr 225 230 235 240 Tyr Gln Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln 245 250 255 Ala Gly Leu Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu 260 265 270 Phe Met Cys Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu 275 280 285 Lys His Ile Glu Val Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro 290 295 300 Tyr Val Gln Ile Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu 305 310 315 320 Met Glu Val Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu 325 330 335 Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala 340 345 350 Trp Leu Thr Val Leu Glu Ala Leu Glu Glu Arg Pro Ala Val Met Thr 355 360 365 Ser Pro Leu Tyr Leu Glu 370 <210> 2 <211> 353 <212> PRT <213> Human <400> 2 Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln Pro Trp Gly Ala Pro 1 5 10 15 Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly Asp Leu Leu Gln Leu 20 25 30 Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile Asn Trp Leu Arg Asp 35 40 45 Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg Ile Thr Gly Glu Glu 50 55 60 Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser Gly Leu Tyr Ala Cys 65 70 75 80 Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Phe Ser Val Asn 85 90 95 Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 100 105 110 Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr Lys Pro Asn Pro Val 115 120 125 Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu Lys Lys Leu His Ala 130 135 140 Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys Pro Ser Ser Gly Thr 145 150 155 160 Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu Phe Lys Pro 165 170 175 Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr Ala Thr Trp Ser Ile 180 185 190 Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr Thr Cys Ile 195 200 205 Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr Tyr Gln Leu Asp Val 210 215 220 Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala 225 230 235 240 Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu Phe Met Cys Lys Val 245 250 255 Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Glu Val 260 265 270 Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro Tyr Val Gln Ile Leu 275 280 285 Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Met Glu Val Leu His 290 295 300 Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala 305 310 315 320 Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu 325 330 335 Glu Ala Leu Glu Glu Arg Pro Ala Val Met Thr Ser Pro Leu Tyr Leu 340 345 350 Glu <210> 3 <211> 360 <212> PRT <213> Human <400> 3 Met Trp Ser Trp Lys Cys Leu Leu Phe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala 1 5 10 15 Thr Leu Cys Thr Ala Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln 20 25 30 Pro Trp Gly Ala Pro Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly 35 40 45 Asp Leu Leu Gln Leu Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile 50 55 60 Asn Trp Leu Arg Asp Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg 65 70 75 80 Ile Thr Gly Glu Glu Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser 85 90 95 Gly Leu Tyr Ala Cys Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr 100 105 110 Tyr Phe Ser Val Asn Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp 115 120 125 Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr 130 135 140 Lys Pro Asn Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu 145 150 155 160 Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys 165 170 175 Pro Ser Ser Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly 180 185 190 Lys Glu Phe Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr 195 200 205 Ala Thr Trp Ser Ile Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly 210 215 220 Asn Tyr Thr Cys Ile Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr 225 230 235 240 Tyr Gln Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln 245 250 255 Ala Gly Leu Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu 260 265 270 Phe Met Cys Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu 275 280 285 Lys His Ile Glu Val Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro 290 295 300 Tyr Val Gln Ile Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu 305 310 315 320 Met Glu Val Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu 325 330 335 Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala 340 345 350 Trp Leu Thr Val Leu Glu Ala Leu 355 360 <210> 4 <211> 339 <212> PRT <213> Human <400> 4 Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln Pro Trp Gly Ala Pro 1 5 10 15 Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly Asp Leu Leu Gln Leu 20 25 30 Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile Asn Trp Leu Arg Asp 35 40 45 Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg Ile Thr Gly Glu Glu 50 55 60 Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser Gly Leu Tyr Ala Cys 65 70 75 80 Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Phe Ser Val Asn 85 90 95 Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 100 105 110 Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr Lys Pro Asn Pro Val 115 120 125 Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu Lys Lys Leu His Ala 130 135 140 Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys Pro Ser Ser Gly Thr 145 150 155 160 Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu Phe Lys Pro 165 170 175 Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr Ala Thr Trp Ser Ile 180 185 190 Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr Thr Cys Ile 195 200 205 Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr Tyr Gln Leu Asp Val 210 215 220 Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala 225 230 235 240 Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu Phe Met Cys Lys Val 245 250 255 Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Glu Val 260 265 270 Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro Tyr Val Gln Ile Leu 275 280 285 Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Met Glu Val Leu His 290 295 300 Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala 305 310 315 320 Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu 325 330 335 Glu Ala Leu <210> 5 <211> 592 <212> PRT <213> Human <400> 5 Met Trp Ser Trp Lys Cys Leu Leu Phe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala 1 5 10 15 Thr Leu Cys Thr Ala Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln 20 25 30 Pro Trp Gly Ala Pro Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly 35 40 45 Asp Leu Leu Gln Leu Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile 50 55 60 Asn Trp Leu Arg Asp Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg 65 70 75 80 Ile Thr Gly Glu Glu Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser 85 90 95 Gly Leu Tyr Ala Cys Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr 100 105 110 Tyr Phe Ser Val Asn Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp 115 120 125 Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr 130 135 140 Lys Pro Asn Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu 145 150 155 160 Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys 165 170 175 Pro Ser Ser Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly 180 185 190 Lys Glu Phe Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr 195 200 205 Ala Thr Trp Ser Ile Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly 210 215 220 Asn Tyr Thr Cys Ile Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr 225 230 235 240 Tyr Gln Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln 245 250 255 Ala Gly Leu Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu 260 265 270 Phe Met Cys Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu 275 280 285 Lys His Ile Glu Val Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro 290 295 300 Tyr Val Gln Ile Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu 305 310 315 320 Met Glu Val Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu 325 330 335 Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala 340 345 350 Trp Leu Thr Val Leu Glu Ala Leu Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr 355 360 365 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 370 375 380 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 385 390 395 400 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 405 410 415 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 420 425 430 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 435 440 445 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 450 455 460 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 465 470 475 480 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 485 490 495 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 500 505 510 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 515 520 525 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 530 535 540 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 545 550 555 560 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 565 570 575 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 580 585 590 <210> 6 <211> 571 <212> PRT <213> Human <400> 6 Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln Pro Trp Gly Ala Pro 1 5 10 15 Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly Asp Leu Leu Gln Leu 20 25 30 Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile Asn Trp Leu Arg Asp 35 40 45 Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg Ile Thr Gly Glu Glu 50 55 60 Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser Gly Leu Tyr Ala Cys 65 70 75 80 Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Phe Ser Val Asn 85 90 95 Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 100 105 110 Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr Lys Pro Asn Pro Val 115 120 125 Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu Lys Lys Leu His Ala 130 135 140 Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys Pro Ser Ser Gly Thr 145 150 155 160 Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu Phe Lys Pro 165 170 175 Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr Ala Thr Trp Ser Ile 180 185 190 Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr Thr Cys Ile 195 200 205 Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr Tyr Gln Leu Asp Val 210 215 220 Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala 225 230 235 240 Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu Phe Met Cys Lys Val 245 250 255 Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Glu Val 260 265 270 Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro Tyr Val Gln Ile Leu 275 280 285 Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Met Glu Val Leu His 290 295 300 Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala 305 310 315 320 Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu 325 330 335 Glu Ala Leu Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 340 345 350 Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 355 360 365 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 370 375 380 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 385 390 395 400 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 405 410 415 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 420 425 430 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 435 440 445 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 450 455 460 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 465 470 475 480 Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 485 490 495 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 500 505 510 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 515 520 525 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 530 535 540 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 545 550 555 560 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 565 570 <210> 7 <211> 21 <212> PRT <213> Human <400> 7 Met Trp Ser Trp Lys Cys Leu Leu Phe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala 1 5 10 15 Thr Leu Cys Thr Ala 20 <210> 8 <211> 232 <212> PRT <213> Human <400> 8 Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 9 <211> 228 <212> PRT <213> Human <400> 9 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val 1 5 10 15 Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 20 25 30 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 35 40 45 His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 50 55 60 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 65 70 75 80 Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn 85 90 95 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro 100 105 110 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 115 120 125 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 130 135 140 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 145 150 155 160 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 165 170 175 Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 180 185 190 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 195 200 205 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 210 215 220 Ser Pro Gly Lys 225 <210> 10 <211> 229 <212> PRT <213> Human <400> 10 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 115 120 125 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys 225

Claims (13)

  1. 도세탁셀과 조합하여 암 치료에 사용하기 위한, 섬유아세포 성장인자 수용체 1(Fibroblast Growth Factor Receptor 1: FGFR1) 세포밖 도메인(extracellular domain: ECD)을 포함하는 약학 조성물이며,
    상기 FGFR1 ECD는 서열번호 1 내지 4로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 FGFR1 ECD 및 도세탁셀은 동시 또는 연속 투여되는 것인 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 FGFR1 ECD가 융합 상대(fusion partner)를 더 포함하는 것인 약학 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 융합 상대가 Fc인 약학 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 FGFR1 ECD 및 Fc가 서열번호 5 및 서열번호 6으로부터 선택된 서열을 포함하는 것인 약학 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 폐암인 약학 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 암이 비소세포 폐암(NSCLC)인 약학 조성물.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FGFR1 ECD 및 도세탁셀의 조합이 마우스 이종이식 암 모델에서 종양 성장의 상승적 억제를 야기하는 것인 약학 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 암이 소세포 폐암(SCLC)이고, 마우스 이종이식 모델이 DMS 53 세포를 포함하는 것인 약학 조성물.
  9. 제7항에 있어서, 상기 암이 비소세포 폐암(NSCLC)이고, 마우스 이종이식 모델이 H1703 세포를 포함하는 것인 약학 조성물.
  10. (i) 섬유아세포 성장인자 수용체 1(FGFR1) 세포밖 도메인(ECD), 또는 (ii) FGFR1 ECD 및 융합 상대를 포함하는 섬유아세포 성장인자 수용체 1(FGFR1) 세포밖 도메인(ECD) 융합 분자, 또는 (i) 및 (ii) 둘 다, 및 (iii) 도세탁셀의 조합을 포함하는 투약량 팩(dosage pack)이며,
    상기 FGFR1 ECD는 서열번호 1 내지 4로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고,
    FGFR1 ECD 또는 FGFR1 ECD 융합 분자 또는 둘 다 및 도세탁셀을 환자에게 투여하기 위한 설명서를 더 포함하는 것인 투약량 팩.
  11. 제10항에 있어서, 상기 (i) 및 (iii)의 조합 또는 상기 (ii) 및 (iii)의 조합이 마우스 이종이식 암 모델에서 종양 성장의 상승적 억제를 야기하는 것인 투약량 팩.
  12. 제10항에 있어서, 상기 암이 소세포 폐암(SCLC)이고, 마우스 이종이식 모델이 DMS 53 세포를 포함하는 것인 투약량 팩.
  13. 제10항에 있어서, 상기 암이 비소세포 폐암(NSCLC)이고, 마우스 이종이식 모델이 H1703 세포를 포함하는 것인 투약량 팩.
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