KR101694958B1 - 천심련추출물 또는 안드로그라폴라이드 또는 이의 염을 포함하는 피부상태 개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 천심련추출물, 안드로그라폴라이드 또는 이의 염 중의 어느 하나 이상을 포함하는 줄기세포성 또는 피부세포 증식용 조성물, 및 상기 조성물을 포함하는 피부상태 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 상기 조성물은 줄기세포와 피부세포로부터 성장인자(growth factor) 분비를 유도하고 세포증식을 촉진한다. 또한, 본 발명의 상기 조성물은 피부주름의 개선, 피부노화의 억제, 피부탄력의 개선, 피부 재생, 또는 피부 표피에 유발된 상처 또는 흉터의 개선 등의 피부상태를 개선한다.

Description

천심련추출물 또는 안드로그라폴라이드 또는 이의 염을 포함하는 피부상태 개선용 조성물 {Composition for Improving Skin Conditions Comprising Andrographis paniculata Extract or andrographolide or salts thereof}

본 발명은 천심련추출물, 안드로그라폴라이드 또는 이의 염을 포함하는 줄기세포성 증진 및 피부세포 증식용 조성물, 및 상기 조성물을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물에 관한 것이다.

피부는 노화가 일차적으로 나타나는 기관으로 이를 지연 또는 예방하기 위하여 화장품 영역에서도 많은 연구가 진행되어 왔다. 통상적으로 피부노화는 25세를 전후하여 진행되기 시작하여 40세를 전후한 시기에 본격적으로 피부노화가 진행된다. 피부노화의 대표적 현상으로 피지 분비량이 감소되어 피부가 건조해지고, 세포 재생이 늦어지고, 노화 각질이 많이 쌓여서 피부가 거칠어지는 특징이 있다. 또한, 표피를 지탱해주는 콜라겐의 합성량이 감소되고 엘라스틴(탄력섬유)이 변성되어 주름이 생긴다. 아울러, 피부색이 얼룩지고 기미, 검버섯 등 과 색소 침착 증상이 나타나며, 표피가 얇아져서 피부보호 기능이 약화된다. 그 밖의 현상으로는 피부 두께의 감소와 관련된 피부 장벽작용(Barrier Effect)의 저하로 인한 피부 트러블의 증가를 들 수 있다.

피부노화와 관련된 연구는 크게 피부노화의 주요원인이 되는 자외선과 활성산소로부터 피부를 보호하는 소재, 피부주름 개선 소재, 피부탄력 증진 소재, 피부 보습력 강화소재, 기미 생성억제에 관련된 소재로 분류할 수 있다.

피부에 노화가 진행되면 진피의 변화가 현저하게 나타나며, 70세 이후 나타나는 진피위축은 대표적인 노화현상이다. 진피의 변화는 섬유아세포(fibroblast)의 숫자와 이들의 합성 능력의 감소로 인하여 세포 외 기질 중 큰 분자량을 가진 물질들의 변화로 발생된다. 그 구체적인 변화는 콜라겐 다발의 분리, 점다당질 합성감소, 콜라겐과 탄력섬유(elastin)수와 직경 감소, 콜라겐과 탄력섬유 분쇄 및 혈관의 팽창 등을 들 수 있다. 일반적으로 피부의 수분 함유량, 콜라겐 함유량 및 외부 환경에 대한 면역 작용 능력 등 여러 가지 복합적인 요인들 중 주름의 형성에 가장 큰 영향을 미치는 것은 섬유모세포의 활성으로 섬유모세포 증식과 섬유모세포에서 합성되는 콜라겐 엘라스틴등이 주요한 지표가 된다. 이와 관련하여 현재까지 천심련 추출물과 안드로그라폴라이드의 섬유아세포에 미치는 영향은 전혀 밝혀져 있지 않았다.

피부에서 줄기세포가 자리하고 있는 곳은 크게 두 세 곳이다. 첫째는 모낭과 모낭 사이의 표피(interfollicular epidermis)라고 불리우는 표피의 기저층(the basal cell layer of epidermis)에 존재한다. 둘째는 모낭(hair follicle)이다. 이 곳은 세포분화가 일어나기 전의 세포로 표피의 재생과 관련해 가장 중요한 역할을 담당하고 있는 세포가 존재한다. 셋째는 피하지방층에 존재하는 지방유래 줄기세포이다. 이처럼 피부에 존재하는 줄기세포는 피부의 건강과 직결된 전체적인 역할을 담당하고 있어 피부건강과 관련하여 가장 중요한 세포군이라 할 수 있다. 줄기세포들은 살아있는 동안 끊임없는 세포분열을 통해 증식과 여러 가지 세포 활성화물질을 분비하여 주위 세포들을 활성화시킴으로써 유해한 환경에 따른 세포들의 노화를 억제하고 문제가 있는 부위를 재생하거나 복구한다고 알려져 있다. 그러나 줄기세포 역시 세포군이기 때문에 나이에 따라 점차 그 기능을 서서히 소실하게 된다. 즉 피부의 줄기세포도 노화에 따라 그 활성이 점차 감소하기 때문에 세포분열능력이 떨어지고 점차 비활성화됨으로써 노화에 따른 주름, 검버섯, 더딘 상처치유, 더딘 복구 등의 여러 문제들이 발생하게 된다. 따라서 피부에 존재하는 줄기세포를 활성화시킬 수 있다면 줄기세포의 노화를 막고 활성을 다시 복원할 수 있을 것이다( Journal of Dermatological Science (2004) 35, 113-123).

초기 줄기세포 화장품은 인체 유래의 동물성 세포나 그 부산물을 이용해 만들어졌으나 이들의 안전성 논란으로 인해, 줄기세포 배양액에 있는 피부유용 성분과 똑같은 성분을 개발하는 방식과 줄기세포를 활성화하는 성분을 탐색하는 방식으로 줄기세포 소재들이 개발되고 있다.

이와 관련하여 대한민국 공개특허 제10-2010-0042708호는 아멘토플라본을 유효성분으로 함유하고, 알파6 인테그린(α6 integrin)의 발현을 증가시켜 피부 각질 줄기세포(keratinocyte stem cell, KSC)의 증식을 촉진하는 피부 재생 촉진용 조성물을 개시하고 있으며, 대한민국 공개특허 제10-2010-0018278호는 인간 피부 각질 줄기세포(Epidermal Keratinocyte Stem Cells, KSC)의 수를 증가시켜 디커신(Decursin)을 유효성분으로 하는 화장료 또는 약학 조성물에 관하여 개시하고 있다.

그러나, 현재까지 천심련 추출물과 안드로그라폴라이드의 줄기세포의 증식 및 피부재생 효능에 대하여 알려진 바가 없다.

이에 본 발명자들은 천연 유래 소재를 대상으로 줄기세포 활성화와 피부세포 활성화 효능을 살펴본 결과, 천심련 추출물 및 이로부터 분리된 안드로그라폴라이드가 가장 우수한 활성 효능이 있는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 하나의 목적은 천심련 추출물, 또는 안드로그라폴라이드 또는 이의 염을 유효성분으로 하는 줄기세포성 증진용 조성물 또는 피부세포 증식용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 조성물을 포함하는 피부상태 개선용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 피부상태 개선용 조성물의 약제, 화장료, 및/또는 식품에 대한 용도를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 줄기세포성 증식용 조성물 또는 피부세포 증식용 조성물을 개체에 투여하여 개체의 피부상태를 개선하는 방법을 제공하는 것이다.

하나의 양태로서, 본 발명은 천심련 추출물, 안드로그라폴라이드 및 안드로그라폴라이드의 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 지방유래 줄기세포 또는 표피유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 천심련(穿心蓮, Andrographis paniculata)은 쥐꼬리망초과(Acanthaceae)의 일년생 초목으로 인도 전역, 특히 남부의 들판이나 숲속의 그늘지고 수분이 충분한 곳에서 주로 자라는 식물이다. 키는 0.3-1.0미터, 줄기는 진한 녹색으로 굵기 2-6mm이며, 잎은 길이 8cm, 폭 2.5cm의 버들잎 모양으로 뽀족하고, 꽃은 흰색 또는 연분홍빛 꽃잎에 자색 반점이 있다. 천심련은 모든 식물 부위의 맛이 극히 쓰므로, 'Maha-tita'(King of bitters)라고 알려져 있으며, 님나무보다 크기는 훨씬 작지만 모양이 비슷하고 쓴 맛으로 인해 'bhui-neem'이라고도 불린다. 이러한 천심련은 항암, 항염증, 항균, 항바이러스 작용 등이 알려져 있으며 민간약재로서 면역증, 이담, 해열 작용 등에 사용되어 왔다.

본 발명의 천심련 추출물은 상기한 천심련의 전초, 잎, 뿌리, 줄기, 꽃 등을 통상의 방법에 의하여 추출하거나 이로부터 분리된 줄기세포성 증식 및 피부세포 증식 활성을 가지고, 피부 상태를 개선하는 물질을 말한다. 또한, 상기 추출물은 통상의 방법에 의하여 천심련 추출물로부터 추출한 추출액뿐만 아니라 이의 건조 분말 또는 이를 이용하여 제형화 된 모든 형태를 말한다.

본 발명에서 천심련 추출물은 물 또는 유기 용매를 사용하여 추출할 수 있는데, 추출한 액은 액체 형태로 사용하거나 또는 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다. 상기 유기용매는 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합용매이며, 추출물의 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 추출하는 유기용매에 따라 추출물의 유효성분의 추출정도와 손실정도가 차이가 날 수 있으므로, 알맞은 유기용매를 선택하여 사용하도록 한다. 추출 방법은 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출 등이 있다.

여과는 추출액으로부터 부유하는 고체 입자를 제거하는 과정으로, 면, 나일론 등을 이용하여 입자를 걸러 내거나 한외여과, 냉동여과법, 원심분리법 등을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 크로마토그래피)에 의한 분리 과정을 추가로 포함할 수 있다. 여액을 건조하는 단계는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조, 감압건조, 포말건조, 고주파건조, 적외선건조 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 경우에 따라, 최종 건조된 추출물을 분쇄하는 공정을 추가할 수 있다.

본 발명의 안드로그라폴라이드(andrographolide)는 디테르펜 락톤(diterpenoid lactone) 계열의 물질로서, 하기 화학식 1의 구조를 가지며, 그 IUPAC명은 3-[2-[decahydro-6-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-5,8a-dimethyl-2-methylene-1- napthalenyl]ethylidene]dihydro-4-hydroxy-2(3H)-furanone으로 분자량은 350.45g/mol이다.

[화학식 1]

상기 안드로그라폴라이드는 항암효능이 대표적으로 알려져 있으며, 이외에도 항염효능과 항알러지 효능이 알려져 있다. 하지만 본 발명에서와 같은 피부에 존재하는 줄기세포성 증식 효능 및 피부 증식 효능에 대하여 알려진 바가 없다.

본 발명의 안드로그라폴라이드는 예를 들어 쥐꼬리망초과(Acanthaceae) 식물인 천심련(穿心蓮, Andrographis paniculata)으로부터 추출 또는 정제하거나, 시판품을 구입함으로써 용이하게 얻을 수 있다.

안드로그라폴라이드를 얻기 위한 구체적인 추출 방법은, 건조시킨 천심련을 분쇄하고, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름 또는 1,3-부틸렌글리콜 등의 추출 용매로 순차적으로 추출하여 수득하는 것을 예시할 수 있다.

안드로그라폴라이드를 얻기 위한 구체적인 정제 방법은 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등에 의한 방법을 예시할 수 있다.

안드로그라폴라이드를 얻기 위한 시판품의 구체적 예는, 시그마사, 알드리치사, 칼바이오켐사 등으로부터 공급되고 있는 「안드로그라폴라이드」를 예시할 수 있다.

본 발명에서 사용하는 안드로그라폴라이드는 상기한 추출, 정제품, 합성품 및 시판품 중 어느 것을 사용해도 되고, 안드로그라폴라이드를 함유하는 식물의 추출물 등을 사용해도 된다. 예를 들어, 상기 서술한 천심련은 잎 및 뿌리 등에 안드로그라폴라이드가 함유되어 있는 것으로 알려져 있다(Jayakumar T et al., Evidence-Based Complementary Alternative Medicine, 2013, 2013:846740).

본 발명의 안드로그라폴라이드는 약학적, 화장품학적 및/또는 식품학적으로 허용되는 염의 형태 또는 체내에서 안드로그라폴라이드가 되는 형태(예로, 프로드러그)일 수 있다. 그와 같은 염으로는 약학적, 화장품학적 및/또는 식품학적으로 허용되는 유리산(free acid)에 의해 형성되는 산부가염 또는 염기에 의해 형성되는 금속염이 있다. 상기 유리산은 무기산과 유기산이 사용될 수 있다. 무기산의 예로는 염산, 황산, 브롬산, 아황산 또는 인산 등이 사용될 수 있다. 유기산의 예로는 구연산, 초산, 말레인산, 후마산, 글루콘산, 메탄술폰산 등이 사용될 수 있다. 상기 금속염은 알칼리 금속염 또는 알칼리 토금속염이 있으며, 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염이 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 천심련 추출물, 안드로그라폴라이드 및 이의 염은 줄기세포성 증진 효능을 가지고 있다.

본 발명에 있어서, 줄기세포성(stemness)은 줄기세포의 자기재생능력과 항상성을 지니며 줄기세포의 활성이 있는 상태를 말한다. 또한, 줄기세포성 증진이란 줄기세포의 활성이 증가하는 것을 의미하며, 이로부터 세포성장인자의 분비를 유도하고 세포증식 등이 촉진된다.

하나의 구체적 예로서, 천심련 추출물 및 안드로그라폴라이드를 지방유래 줄기세포 또는 표피유래 줄기세포에 일정 농도별로 각각 처리한 경우 처리하지 않은 경우와 대비하여 농도 의존적으로 줄기세포의 생존 및 증식이 증가한다.

또 하나의 구체적 예로서, 상기 줄기세포는 피하 지방층에 존재하는 지방유래 줄기세포(Adipose derived stem cells; ADSCs) 및 표피 기저층에 존재하는 표피유래 줄기세포(Epidermal stem cells; EpSCs) 이다. 지방유래 줄기세포는 바람직하게 인간의 지방유래 줄기세포(human adipose derived stem cells; hADSCs)이다. 표피유래 줄기세포는 바람직하게 인간의 표피유래 줄기세포(human epidermal stem cells; hEpSCs)이다.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 천심련 추출물, 안드로그라폴라이드 및 안드로그라폴라이드의 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 피부세포 증식용 조성물을 제공한다.

상기한 천심련 추출물, 안드로그라폴라이드 및 이의 염은 상술한 바와 같다.

본 발명에 있어서, 피부세포 증식은 피부세포의 활성이 증가하는 것을 말한다. 피부세포의 활성이 증가함으로써 성장인자의 분비를 유도하고 세포증식 등이 촉진되며, 세포외기질(extracellular matrix; ECM)을 이루고 있는 콜라겐, 엘라스틴, 하이알루론산 등의 성분의 합성을 촉진한다.

하나의 구체적 예로서, 천심련 추출물 및 안드로그라폴라이드를 섬유아세포에 일정 농도별로 각각 처리한 경우 처리하지 않은 경우와 대비하여 농도 의존적으로 세포의 생존 및 증식이 증가한다.

상기한 양태에 따르면, 본 발명의 상기 줄기세포성 증진 조성물 및/또는 피부세포 증식 조성물은 피부상태의 개선 용도를 나타낸다.

본 발명에 있어서, 상기 피부상태의 개선은 줄기세포 또는 피부세포의 기능 저하 또는 손실 등의 원인에 의하여 피부의 외관 및 촉감에 나타나는 현상을 완화, 억제 또는 향상하는 것을 의미한다. 여기서, 상기 줄기세포는 하나의 구체적 예로서, 피하 지방층에 존재하는 지방유래 줄기세포(Adipose derived stem cells; ADSCs) 및 표피 기저층에 존재하는 표피유래 줄기세포(Epidermal stem cells; EpSCs) 이다.

구체적으로, 피부줄기세포 또는 피부세포의 기능 저하 또는 손실 등의 원인에 의하여 주름의 발생, 피부 노화, 피부 탄력 감소, 피부 표피 등에 유발된 상처 또는 흉터 등이 발생한다. 이에 본 발명의 피부상태의 개선은 피부주름의 개선, 피부노화의 억제, 피부탄력의 개선, 피부 재생, 및 피부 표피에 유발된 상처 또는 흉터의 개선 등을 포함하는 의미이다.

한편, 본 발명의 줄기세포성 증진 조성물 및/또는 피부세포 증식 조성물은 피부상태의 개선 용도를 나타내므로, 본 발명은 피부상태의 개선을 위한 화장료, 약제, 및 식품 조성물로서 제공할 수 있다.

하나의 구체적 양태로서, 본 발명의 피부상태 개선용 조성물은 피부에 직접 적용되는 화장료 조성물로 제공될 수 있다.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 이용되는 경우에는, 상술한 피부상태 개선용 조성물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함한다. 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있는데, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분과 담체 성분 이외에, 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.

다른 하나의 구체적 양태로서, 본 발명의 피부상태 개선용 조성물은 피부에 직접 적용되는 약제학적 조성물로 제공될 수 있다.

본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 이용되는 경우에는, 상술한 피부상태 개선용 조성물 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

상기 약제학적 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 비경구, 경구 등의 다양한 경로로 투여될 수 있으며, 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하 주사에 의해 투여될 수 있다.

상기 약제학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서 약학적으로 유효한 양은 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 종류 및 이의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강 및 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 특정 추출물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 사용된 특정 추출물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 일반적으로, 성인에게 1일에 0.1 내지 1000mg/kg, 바람직하게는 10 내지 100mg/kg의 용량을, 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다.

상기 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 치료 목적에 따라 약제학 분야에서 통상적인 제제로 제형화될 수 있는데, 예를 들어, 정제, 캅셀제, 산제, 과립, 현탁제, 유제, 시럽제, 유탁제, 경고제, 연고제, 스프레이제, 오일제, 겔제, 주정제, 틴크제, 욕제, 리니먼트제, 로션제, 패취제, 패드제, 크림제 등으로 제형화될 수 있다. 또한, 환부에 직접 도포하는 국소투여를 목적으로 하는 피부 외용제로서 바람직하게 사용될 수 있는데, 이 경우 연고제, 로션제, 스프레이제, 젤 등의 형태가 바람직하다. 이들 피부외용제는 또한 치료 부위에 직접 적용될 수 있는 지지 기재(support base) 또는 매트릭스 등에 포함될 수 있으며, 지지기재의 예는 거즈 또는 붕대를 포함한다.

다른 하나의 구체적 양태로서, 본 발명의 피부상태 개선용 조성물은 기능성 식품 조성물로 제공될 수 있다.

본 발명이 기능성 식품 조성물의 형태로 제공되는 경우 상술한 피부 상태 개선용 조성물 이외에 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함할 수 있다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분인 천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드 또는 이의 염 이외에 향미제 또는 천연 탄수화물을 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 예를 들어, 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등); 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등); 올리고당; 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등); 및 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)을 포함한다. 향미제로서 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등) 및 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)을 이용할 수 있다. 식품에 대한 용이한 접근성을 고려한다면, 본 발명의 기능성 식품 조성물은 피부상태 개선 용도로 매우 유용하다.

본 발명의 바람직한 구현예에 의하면, 상기 기능성 식품 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 파우더, 바, 캔디, 아이스크림, 오일, 및 분말 유탁액 스프레이로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 갖는다.

본 발명의 천심련 추출물, 안드로그라폴라이드 및 이의 염은 천연물로부터 유래하여 독성 및 부작용이 거의 없고, 오래전부터 식용으로 사용되었을 뿐만 아니라 피부 누적 자극 시험에서도 이미 안전성이 검증되었기 때문에 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있으므로 상기한 바와 같은 약제학적 조성물, 화장료 조성물 또는 식품 조성물에 안전하게 적용할 수 있다.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 천심련 추출물, 안드로그라폴라이드 및 이의 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 피부상태 개선용 조성물을 개체에 투여하여 개체의 피부상태를 개선하거나 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명에 있어서, '개체'는 피부의 불량한 상태, 예를 들어 주름, 노화, 피부 저탄력, 상처, 흉터 등을 개선 또는 예방하고자 하는 인간을 포함한 포유동물, 예를 들어 개, 돼지, 말, 소 등을 의미한다.

본 발명에 있어서, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 개체에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 활성 물질이 표적 대상, 예를 들어, 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.

본 발명의 상기 방법에 의하여 상술한 개체의 피부 주름, 피부 노화, 피부 저탄력, 상처, 흉터 등과 같은 피부상태 또는 이들로부터 발생하는 질환, 질병 또는 이상은 본 발명의 피부상태 개선용 조성물의 개체 내 투여에 의하여 개선, 호전, 예방 또는 치료 등의 목적을 달성할 수 있음은 상술한 내용 및 하기에 기술된 실시예 등을 통하여 당업계의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 이해될 것임은 물론이다.

본 발명의 천심련추출물, 안드로그라폴라이드 또는 안드로그라폴라이드의 염을 유효성분으로 포함하는 조성물은 줄기세포와 피부포의 증식촉진능 및 활성화능을 가지므로, 피부 주름의 개선, 피부노화 억제, 피부탄력의 개선, 피부 재생 효능, 상처 및 흉터 치유 등의 피부 상태의 개선 효과를 나타낸다.

도 1은 본 발명에 따른 천심련추출물 또는 안드로그라폴라이드를 포함하는 무혈청배지에서 인간 지방유래줄기세포 (ADSC)의 세포증식 효과를 측정한 결과이다. 여기서, CM은 음성대조군이고, EGF(Epidermal Growth Factor)는 양성대조군이다.
도 2는 본 발명에 따른 천심련추출물 또는 안드로그라폴라이드를 포함하는 무혈청배지에서 인간 표피유래 줄기세포 (EpSCs)의 세포증식능 효과를 측정한 결과이다. 여기서, CM은 음성대조군이고, EGF(Epidermal Growth Factor)는 양성대조군이다.
도 3은 천심련추출물 또는 안드로그라폴라이드의 3D dermal lattice의 수축 촉진 효과를 보여주는 결과이다. 여기서, TGF-β (Tumor growth factor beta)는 양성대조군이다.
도 4는 천심련추출물에 의해서 분비되는 싸이토카인 VEGF의 증가분석결과이다.
도 5는 안드로그라폴라이드에 의해서 분비되는 싸이토카인 VEGF의 증가분석결과이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 천심련 추출물 및 안드로그라폴라이드 제조

천심련 전초를 깨끗이 세척한 후 음건하고 마쇄한 다음, 건조된 시료 1kg과 보조용매 에탄올(99.5%) 500 내지 700 ㎖를 초임계 유체 추출반응기 (Natex, Austria)에 넣고 반응기 내의 온도가 40℃, 압력이 10MPa, S/F 비(Supercritical fluid kg / Feed kg) 35가 되는 조건하에서 총 40kg의 이산화탄소를 사용하여 추출하였다. 이어서, 이산화탄소, 에탄올 및 원료의 혼합물을 분리 장치를 통과시키고, 혼합물의 압력과 온도를 변화시켜 이산화탄소로부터 추출물을 분리하였다. 얻어진 추출물의 에탄올을 제거하기 위하여 감압농축하여 천심련 추출물 121.4g을 제조하였다.

또한, 천심련으로부터 안드로그라폴라이드를 분리 획득하기 위하여, 상기 천심련 건조추출물을 용매 분획을 통하여 헥산 및 클로로포름 분획을 제거하고, 얻은 분획을 수포화된 부탄올로 3회 분획하여 부탄올 분획 24g을 얻었다. 이후, 상기 부탄올 분획을 실리카겔 컬럼크로마토그래피와 고속액체크로마토그래피(HPLC)로 정제한 다음, 재결정 방법을 이용하여 안드로그라폴라이드 280mg을 얻었다. 이와 같이 얻어진 안드로그라폴라이드는 통상의 방법인 질량분석과 NMR 및 HPLC를 통해 그 구조 및 함량(99.8% 이상)을 확인하였다.

실시예 2: 천심련추출물 또는 안드로그라폴라이드 줄기세포의 세포증식능 측정

2-1. 세포, 배지 및 배양방법

본 발명자들은 피부줄기세포를 활성화할 수 있는 소재를 찾기 위해 혈청이 첨가되지 않은 무혈청 배지에서 줄기세포를 배양하면서 배지에 식물성 물질을 첨가하여 양호한 줄기세포 성장이 이루어지는 물질들을 스크리닝하였다. 줄기세포로는 인간 지방유래 줄기세포(Human adipose-derived stem cells, ADSCs)와 표피유래 줄기세포(Epidermal Stem cells, EpSCs)를 사용하였다.

인간 지방유래 줄기세포는 인비트로겐(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)으로부터 구입을 하였고, MesenPro RS배지에 2% MesenPro RS Growth supplement (10 ml), 1% GlutaMAX (5 ml)를 첨가하여 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다. 신생아 포피(Neonatal foreskin)에서 분리한 인간 표피유래 줄기세포 (Epidermal Stem cells, EpSCs)는 Kim 등(Cell Mol Life Sci, 2004, 61:2774-2781)의 시험방법을 참고하여 Type 4 콜라겐이 코팅된 배양용기를 통해 배양 초기에 배양용기에 부착된 세포를 분리하였다. 상기 초기에 부착된 세포는 줄기세포능(stemness)과 관련된 α6 integrin (CD49f)과 β1 integrin (CD29)을 풍부하게 가진 세포로, EpiLife 배양액(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)에서 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다.

상기 인간 지방유래 줄기세포 및 인간 표피유래 줄기세포에 시험물질을 1, 10, 30ppm 농도별로 처리하고 3일 배양 후 세포생존능을 측정하였다.

2-2. 세포증식능(cell proliferation) 측정

세포증식능은 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 분석을 통해 측정하였다. MTT 분석은 테트라졸륨환(tetrazolium ring)을 포함하는 기질(substrate)이 미토콘드리아 탈수소효소에 의해 청색의 포르마잔(formazan)으로 변환되는 것에 기초한 분석방법이다. 청색 포르마잔의 수준을 분광학적으로 측정한 후 이를 세포밀도의 간접적인 지표로 사용하였다. 간략하게 설명하면, 세포들을 37℃에서 MTT (1 mg/㎖)에 3 시간 동안 노출시킨 후, 배지를 제거하고 세포들을 DMSO (dimethyl sulfoxide)로 용해시켰다. 완전 용해된 후 청색 포르마잔의 존재는 파장 570 nm에서의 흡광도를 측정함으로서 분광학적으로 측정하였다.

MTT 분석법을 사용하여 줄기세포의 증식에 미치는 천심련추출물 또는 안드로그라폴라이드의 영향을 평가한 결과, 천심련추출물 및 안드로그라폴라이드는 지방 유래 줄기세포(ADSCs)와 표피유래 줄기세포의 증식을 농도의존적으로 증가시켰다(도 1 및 2 참조).

실시예 3: 천심련추출물 또는 안드로그라폴라이드의 섬유아세포의 세포증식능 효과확인

인간 섬유아세포 (normal human primary dermal fibroblast, NHF from Ajou university)는 아주대 피부과에서 분양된 세포를 사용하였다. NHF 세포는 DMEM 배지에 10% FBS(50 ml), 1% penicillin, streptomycin(5 ml)을 첨가하여 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다. 시험물질은 1, 10, 30ppm 농도별로 처리하고 3일 배양 후 세포증식능을 측정하였다. 섬유아세포의 세포증식능 측정결과 하기 표 1에 나타난 것처럼 처리농도에 따라 섬유아세포의 세포증식이 대조군과 비교하여 유의미하게 증가하는 결과를 보였다.

종류	세포증식능 정도(%)
무처리군(음성대조군)	100
천심련 추출물(10 ppm)	115
천심련 추출물(30 ppm)	114
안드로그라폴라이드(10 ppml)	117
안드로그라폴라이드(30 ppml)	120

실시예 4: 천심련추출물 또는 안드로그라폴라이드의 3D dermal lattice 수축 효과확인

섬유아세포에서 콜라겐, 엘라스틴, 하이알루론산을 포함하는 ECM (Extracellular matrix) 생합성 촉진은 피부에 있어 주름을 방지하고 완화하는 주요 지표이다. 주름은 통상적으로 콜라겐과 엘라스틴 등 진피 내 구성성분의 생합성이 감소하여 발생하는 것으로 알려져 있다. 따라서 진피층에 존재하는 섬유아세포에 의한 진피구성성분 (ECM) 합성이 촉진되면 주름억제는 물론 생성된 주름도 개선될 수 있다.

섬유아세포가 배양된 3D dermal lattice는 섬유아세포 활성의 확인과 상처치료 효능확인에 주로 사용되는 시험방법(Tse R, Howard J, Wu Y, Gan BS. Enhanced Dupuytren's disease fibroblast populated collagen lattice contraction is independent of endogenous active TGF-beta2.BMC Musculoskelet Disord. 2004 Nov 12;5(1):41.)으로 콜라겐 겔내 세포외기질성분 (ECM)이 증가하면 겔의 수축이 일어난다. 사람의 정상 섬유아세포(Human normal fibroblast)가 포함된 콜라겐 겔을 만들기 위하여 콜라겐 용액과 상기 콜라겐 용액의 4배 농도의 DMEM 배지, 10% FBS(Fetal Bovine Serum), 그리고 세포부유액 30 ㎕를 섞은 후 24-well 배양접시에서 4시간동안 배양하여 굳힌 다음 (gelatinization) 천심련추출물 또는 안드로그라폴라이드를 1ppm, 10ppm 및 30ppm의 농도로 상기 콜라겐 겔에 스프레이하였다. 이후 6일 동안 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양에서 정치하여 콜라겐 겔에 노출시킨 후, 천심련 추출물 및 안드로그라폴라이드가 섬유아세포가 포함된 콜라겐 겔의 수축 정도에 미치는 영향을 관찰하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3에 나타난 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 천심련추출물 및 안드로그라폴라이드는 대조군에 비해서 30ppm에서 약 26%와 10%정도 감소시켜 천심련추출물 및 안드로그라폴라이드는 콜라겐 겔의 수축을 증가시킨다는 것을 알 수 있었다. 한편, 양성대조군인 TGFβ-1 (Transforming Growth Factor beta-1) 역시 섬유아세포의 콜라겐 겔의 수축을 증가시켰다.

실시예 5: 천심련추출물 또는 안드로그라폴라이드에 의해서 분비되는 싸이토카인 VEGF의 증가분석

피부세포가 활성화가 되면 혈관내피 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF)는 피부 세포의 증식, 성장, 분화에 다양한 영향을 미치며, 노화세포를 새로운 세포로 전환시켜 피부를 젊게 유지시켜 준다. 이에 천심련 추출물 및 안드로그라폴라이에 의한 혈관내피 성장인자의 분비 정도를 조사하였다.

구체적으로, DMEM 기본배지에 10% FBS, 1% 페니실린(penicillin), 및 스트렙토마이신(streptomycin)이 포함된 배지에서 배양된 섬유아세포 배양액과 Epilife 배지에 Growth supplement가 추가된 배지에서 배양된 표피유래 줄기세포 배양액을 25 ㎕씩 멤브레인 필터(막 여과기)가 아래 깔린 96 well 플레이트에 분주한 후에 분주된 배지들 각각에 비드 혼합물 25 ㎕와 바이오틴이 결합된 혼합물(Biotin-Conjugate Mixture, eBioscience) 50 ㎕를 분주하였다. 이후 접착 필름을 위에 붙인 뒤, 빛이 들어가지 않게 은박지를 씌워 상온(18-25℃)에서 쉐이커 위에 올려 놓고 500 rpm으로 두 시간 동안 반응시켰다. 다음으로, 분석 버퍼(1X) 100 ㎕를 넣은 뒤 진공으로 세척한 후에 이를 한 번 더 반복한 후 바닥에 물기가 남지 않도록 휴지로 닦아서 남은 물기를 제거하였다. 다음으로, 분석 버퍼(1X)를 100 ㎕ 씩 분주 한 뒤에 미리 제조한 스트렙트아비딘-PE 용액을 50 ㎕씩 분주하여 섞고나서 접착 필름을 위에 붙인 뒤, 은박지를 씌워 상온에서 한 시간 동안 500 rpm으로 쉐이커 위에 놓고 반응시켰다. 필름을 제거 한 뒤, 분석 버퍼(1X)를 200 ㎕ 씩 분주하고 파이펫팅으로 섞어서 200 ㎕씩 1.5 ㎖ 튜브로 옮겨서 희석한 후에 튜브에 분석 버퍼 100 ㎕ 씩 넣고 손가락으로 가볍게 쳐서 섞어 준 뒤, FACS 분석을 하였다. 그 분석 결과를 도 4 및 5에 나타내었다. 도 4 및 5에 나타난 것처럼 피부세포활성 및 증식에 관여하는 VEGF가 천심련 추출물 및 안드로그라폴라이드의 처리농도에 따라 증가하는 결과를 보였다.

실시예 6 : 천심련 추출물 및 안드로그라폴라이드의 인체 피부에 대한 안전성 확인 실험

6-1. 천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드를 포함한 피부 외용제의 제조

천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드가 인체피부에 안전한지 확인하기 위하여, 하기 표 2의 성분 및 함량으로 천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드 0.1 중량%를 함유한 피부 외용제를 제조한 다음 피부 안전성 검증 실험을 수행하였다. 먼저, 스쿠알렌을 베이스로 정제수, 글리세린, 부틸렌글리콜을 혼합하여 약 70℃의 온도에서 용해한 다음(수상파트), 상기 세 성분과 트리메탄올아민을 제외한 나머지 성분을 약 70℃의 온도에서 용해하였다(유상파트). 그 후, 상기 오일파트를 수상파트에 첨가시켜 호모믹서(Tokushu Kika사, 일본)로 교반하여 1차 유화한 다음, 트리메탄올아민을 최종 첨가하였다.

성분	함량 (%)
	시험군 1	시험군 2	대조군
정제수	71	71	71
글리세린	8.0	8.0	8.0
부틸렌글리콜	4.0	4.0	4.0
천심련 추출물	0.1	0	0
안드로그라폴라이드	0	0.1	0
카프릴릭 카프리 트리글리세라이드	8.0	8.0	8.0
스쿠알란	5.0	5.0	5.0
세테아릴 글루쿠사이드	1.5	1.5	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4	0.4	0.4
세테아릴 알코올	1.0	1.0	1.0
트리메탄올아민	0.1	0.1	0.1
총중량	100	100	100

6-2. 피부누적 자극 실험

상기 6-1의 방법으로 제조한 피부 외용제를 건강한 30명의 성인을 대상으로 윗팔뚝 부위에 격일로 총 9회의 24시간 누적 첩포를 시행하여 천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드가 피부에 자극을 주는지의 여부를 측정하였다. 대조군으로는 스쿠알란 베이스로 천심련 추출물 및 안드로그라폴라이드가 함유되지 않은 피부 외용제를 사용하였다.

첩포는 핀 챔버(Finn chamber, Epitest Ltd, 핀란드)를 이용하였으며, 챔버에 상기 각 피부외용제를 15㎕씩 적하한 후 첩포를 실시하였다. 매회 피부에 나타난 반응의 정도를 하기 실험식 1를 이용하여 점수화 하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

[실험식 1]

평균반응도 = [[반응지수 × 반응도 / 총피검자수 × 최고점수 (4점)] × 100] / 검사회수

이 때, 반응도에서 ± 는 1점, +는 2점 및 ++는 4점의 점수를 부여하며, 평균반응도가 3 미만일 때 안전한 조성물로 판정된다.

시험물질	반응이 나타난 피검자수(명)									평균 반응도
	1주			2주			3주
	1차	2차	3차	4차	5차	6차	7차	8차	9차
	±/+/++	±/+/++	±/+/++	±/+/++	±/+/++	±/+/++	±/+/++	±/+/++	±/+/++
대조군	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0.00
시험군 1	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0.00
시험군 2	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0/0/0	0.00

상기 표 3에 나타낸 것과 같이, 대조군, 시험군 1 및 2 모두 ±, + 및 ++에 해당하는 사람의 수가 각각 0명, 0명 및 0명으로 피부에 반응이 나타나지 않았다. 상기 기재된 실험실 1에 따라 계산한 결과 평균 반응도는 각각 0.00, 0.00, 0.00으로 모두 3 이하의 반응도를 나타나 안전한 조성물로 판단되었다.

이하, 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

제조예 1: 화장료의 제조

1-1. 유연 화장수의 제조

하기의 표 4와 같이 천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드를 유효 성분으로 포함하는 유연 화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드	0.01
글리세린	3.0
부틸렌 글리콜	2.0
프로필렌 글리콜	2.0
카복시비닐폴리머	0.1
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수	잔량
총계	100.0

1-2. 영양 화장수의 제조

하기의 표 5와 같이 천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드를 유효 성분으로 포함하는 영양 화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드	0.01
밀납	4.0
폴리소르베이트 60	1.5
소르비탄세스퀴올레이트	0.5
유동파라핀	5.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	5.0
글리세린	3.0
부틸렌 글리콜	3.0
프로필렌 글리콜	3.0
카복시비닐폴리머	0.1
트리에탄올아민	0.2
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수	잔량
총계	100.0

1-3. 영양 크림의 제조

하기의 표 6과 같이 천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드를 유효 성분으로 포함하는 영양 크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드	0.01
밀납	10.0
폴리소르베이트 60	1.5
소르비탄세스퀴올레이트	0.5
유동파라핀	10.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	5.0
글리세린	5.0
부틸렌 글리콜	3.0
프로필렌 글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수	잔량
총계	100.0

1-4. 맛사지 크림의 제조

하기의 표 7과 같이 천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드를 유효 성분으로 포함하는 맛사지 크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드	0.01
밀납	10.0
폴리소르베이트 60	1.5
소르비탄세스퀴올레이트	0.8
유동파라핀	40.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	4.0
글리세린	5.0
부틸렌 글리콜	3.0
프로필렌 글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수	잔량
총계	100.0

1-5. 팩의 제조

하기의 표 8과 같이 천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드를 유효 성분으로 포함하는 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드	0.01
폴리비닐알콜	13.0
소듐카복시메틸셀룰로스	0.2
알란토인	0.1
에탄올	5.0
노닐페닐에테르	0.3
방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수	잔량
총계	100.0

제조예 2: 약학적 제제의 제조

2-1. 산제의 제조

천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드를 유효 성분으로 포함하는 산제를 제조하기 위하여, 하기 표 9의 성분을 혼합한 다음 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

성분	함량(g)
천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드	2
유당	1

2-2. 정제의 제조

천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드를 유효 성분으로 포함하는 정제를 제조하기 위하여, 하기 표 10의 성분을 혼합한 다음 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

성분	함량(mg)
천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드	100
옥수수전분	100
유당	100
스테아린산 마그네슘	2

2-3. 캡슐제의 제조

천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드를 유효 성분으로 포함하는 캡슐제를 제조하기 위하여, 하기 표 11의 성분을 혼합한 다음 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

성분	함량(mg)
천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드	100
옥수수전분	100
유당	100
스테아린산 마그네슘	2

제조예 3: 기능성 식품의 제조

3-1. 건강 음료의 제조

천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드를 유효 성분으로 포함하는 건강 음료를 제조하기 위하여, 통상의 건강음료 제조방법에 따라 하기 표 12의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강음료를 제조하였다.

성분	함량
천심련 추출물 또는 안드로그라폴라이드	4g
구연산	1000mg
올리고당	100g
매실농축액	2g
타우린	1g
정제수를 가하여 전체	900㎖

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

1. 천심련추출물, 안드로그라폴라이드 및 안드로그라폴라이드의 염으로 이루어진 군으로부터 어느 하나 이상 선택된 물질을 유효성분으로 포함하는 인간 지방유래 줄기세포 증식용 조성물.
   
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