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KR101604244B1 - 이소포스포르아미드 머스타드의 염 및 이의 동족체 - Google Patents

이소포스포르아미드 머스타드의 염 및 이의 동족체 Download PDF

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KR101604244B1
KR101604244B1 KR1020137008586A KR20137008586A KR101604244B1 KR 101604244 B1 KR101604244 B1 KR 101604244B1 KR 1020137008586 A KR1020137008586 A KR 1020137008586A KR 20137008586 A KR20137008586 A KR 20137008586A KR 101604244 B1 KR101604244 B1 KR 101604244B1
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South Korea
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ipm
dose
tris
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존 씨. 아메디오
바바라 피. 월너
필립 비. 코마르니트스키
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지오팜 온콜로지 인코포레이티드
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Abstract

화학식 I의 화합물을 포함하며, 식염수 용액 중에서 재구성될 경우, 실온에서 약 30분 이상 동안 90% 초과의 효능(potency)를 유지하는, 동결건조물.
화학식 I
Figure 112015045089860-pat00026

상기 화학식 I에서,
A+는 염기성 아미노산, 헤테로사이클릭 아민, 또는 치환 또는 비치환된 피리딘, 구아니딘 또는 아미딘을 포함하는, 지방족 아민 및 방향족 아민의 양자화 형태 (콘쥬게이트 산) 또는 4급 형태로부터 선택되는 암모늄 종을 나타내고;
X 및 Y는 독립적으로 이탈 그룹을 나타낸다.

Description

이소포스포르아미드 머스타드의 염 및 이의 동족체{Salts of isophosphoramide mustard and analogs thereof}
관련 출원과의 교차참조
본 출원은 미국 가출원 일련 번호 제60/922,148호 (2007년 4월 6일자로 출원), 제60/927,363호 (2007년 5월 2일자로 출원), 제60/934,914호 (2007년 6월 15일자로 출원) 및 제61/001,237호 (2007년 10월 30일자로 출원)의 이득을 청구하며, 이들의 전문이 참조로 포함된다.
세계 제1차 대전시 머스타드 가스에 의해 죽은 군인의 시체 해부로부터 황 머스타드는 신속히 분열되는 세포에 대해 불균형 효과를 갖는 것으로 나타났고, 황 머스타드 화합물은 항종양 효과를 갖는 것으로 제시되었다. 실제로, 초기 연구가들은 황 머스타드를 종양에 직접 주사하여 암을 치료하는 시도를 하였다. 이러한 연구는 황 머스타드 화합물의 극심한 독성에 의해 제한되었고, 질소 머스타드 동족체 (예: 메클로레타민)는 독성이 덜한 대체물로서 연구되었다.
Figure 112013029114454-pat00001
대부분의 메클로레타민 동족체의 선택성 결여로 인하여, 종양 세포에 존재하는 고농도의 포스포르아미다제에 의해 활성화될 수 있는 포스포르아미드 화합물과 같은 전구약물이 연구되었다. 2개의 포스포르아미드 알킬화제, 사이클로포스파미드 (CPA)와 이의 이성체성 화합물인 이포스파미드 (Ifos)는 특히 효과적인 것으로 입증되었다.
Figure 112013029114454-pat00002
도 1과 관련하여, 이소포스포르아미드 머스타드 (IPM)는 CPA 및 Ifos의 통상의 대사물질이다. IPM은 CPA 및 Ifos에 의해 나타나는 항-종양 활성의 적어도 일부를 야기하는 것으로 여겨진다. 항암제로서 IPM을 직접 사용하기 위한 노력은 당해 화합물의 불안정성에 일부 기인하여 성공하지 못하였다. IPM이 합성되었고, 당해 화합물의 예비 생물학적 평가가 수행되었지만, 불행히도 IPM은 분리하여 사람을 치료하는 데 사용하기에는 너무 불안정하다.
도 1은 아크롤레인 및 이소포스포르아미드 머스타드의 제조를 포함하는, 이포스파미드의 대사작용을 도시한 반응식이다.
도 2는 IPM·Tris의 X-선 분말 회절을 나타낸다.
도 3은 IPM·Tris의 시차 주사 열량측정 (differential scanning calorimetry, DSC)을 나타낸다.
도 4는 IPM·Tris의 열중량 분석 (thermogravimetric analysis, TGA)을 나타낸다.
도 5는 결정성 IPM·Tris의 주사 전자 현미경 (SEM) 영상을 나타낸다.
도 6은 사람 MX-1 유방암 이종이식편 (xenograft)에서 IPM·(LYS)2와 IPM·Tris의 비교를 나타낸다.
도 7은 사람 MX-1 유방암 이종이식편에서 IPM·Tris의 IP 투여와 경구 투여의 항-종양 활성의 비교를 나타낸다.
도 8a는 다양한 농도의 IPM·(LYS)2로 처리했을 때의 RD 및 RH30 횡문근 육종 세포의 생존력 (viability)을 나타낸다.
도 8b는 다양한 농도의 IPM·(LYS)2로 처리했을 때의 SKES1 및 SKPNDW 유잉 육종 세포의 생존력을 나타낸다.
도 8c는 다양한 농도의 IPM·(LYS)2로 처리했을 때의 OS230, OS229, OS222 및 SaOS 골육종 세포의 생존력을 나타낸다.
도 8d는 다양한 농도의 IPM·(LYS)2로 처리했을 때의 SYO1 및 HSSYII 윤활막 육종 세포의 생존력을 나타낸다.
도 9a는 일일 1회 또는 일일 3회 다양한 농도의 IPM·(LYS)2로 처리했을 때의 RH30 횡문근 육종 세포의 생존력을 나타낸다.
도 9b는 일일 1회 또는 일일 3회 다양한 농도의 IPM·(LYS)2로 처리했을 때의 OS229 골육종 세포의 생존력을 나타낸다.
도 10은 IPM·(LYS)2의 3가지 용량 스케줄 (대조군, 175mg/kg 매일 x 1, 또는 100mg/kg 매일 x 3) 각각에 대하여, CB17 암컷 scid*/* 마우스에 이식된 사이클로포스파미드-내성 OS31 골육종 세포주에서 최대내용량 (maximum tolerated dose, MTD)으로의 투여가 유의한 종양 성장 지연을 가져옴을 나타낸다.
도 11a는 상대 종양 용적의 측면에서 CB17 암컷 scid*/* 마우스에 이식된 OS31 골육종 세포에서의 사이클로포스파미드 내성을 나타내며, 여기서 치료는 대조군과 비교했을 때, 사이클로포스파미드의 투여를 포함한다.
도 11b는 상대 종양 용적의 측면에서 CB17 암컷 scid*/* 마우스에 이식된 OS33 골육종 세포에서의 사이클로포스파미드 내성을 나타내며, 여기서 치료는 대조군과 비교했을 때, IPM·(LYS)2의 투여를 포함한다.
도 12는 CB17 암컷 scid*/* 마우스에 이식된 사이클로포스파미드 내성 OS31 골육종 세포의 치료에서 상대 종양 용적의 면에 있어서의 IPM·(LYS)2 (대조군과 비교해서 100mg/kg 매일 x 3)의 활성을 나타낸다.
도 13은 q1d x 5의 용량으로 식염수에 의한 IP 및 경구 치료에 대한 SC MX-1 유방 종양의 반응을 나타낸다.
도 14는 q1d x 5의 용량으로 IPM·Tris, IPM 및 IPM·(LYS)2에 의한 IP 치료에 대한 SC MX-1 유방 종양의 반응을 나타낸다.
도 15는 q1d x 5의 용량으로 IPM·Tris, IPM 및 IPM·(LYS)2에 의한 경구 치료에 대한 SC MX-1 유방 종양의 반응을 나타낸다.
도 16은 q1d x 5의 용량으로 식염수에 의한 IP 및 경구 치료에 대한 SC MX-1 유방 종양의 반응을 나타낸다.
도 17은 q1d x 5의 용량으로 IPM·Tris, IPM 및 IPM·(LYS)2에 의한 IP 치료에 대한 SC MX-1 유방 종양의 반응을 나타낸다.
도 18은 q1d x 5의 용량으로 IPM·Tris, IPM 및 IPM·(LYS)2에 의한 경구 치료에 대한 SC MX-1 유방 종양의 반응을 나타낸다.
도 19는 12mg/kg/일 IPM·Tris Q1Dx5 및 8mg/kg 독소루비신 Q4Dx3의 용량으로 독소루비신과 병용된 IPM·Tris에 의한 치료에 대한 MX-1 유방암 종양의 효과를 나타낸다.
도 20은 12mg/kg/일 IPM·Tris Q1Dx5 및 8mg/kg 독소루비신 Q4Dx3의 용량으로 독소루비신과 병용된 IPM·Tris의 생존에 대한 효과를 나타낸다.
도 21은 24mg/kg/일 IPM·Tris Q1Dx5 및 8mg/kg 독소루비신 Q4Dx3의 용량으로 독소루비신과 병용된 IPM·Tris에 의한 치료의 MX-1 유방암 종양에 대한 효과를 나타낸다.
도 22는 24mg/kg/일 IPM·Tris Q1Dx5 및 8mg/kg 독소루비신 Q4Dx3의 용량으로 독소루비신과 병용된 IPM·Tris의 생존에 대한 효과를 나타낸다.
도 23은 54mg/kg/일 IPM·Tris Q1Dx5 및 8mg/kg 독소루비신 Q4Dx3의 용량으로 독소루비신과 병용된 IPM·Tris에 의한 치료의 MX-1 유방암 종양에 대한 효과를 나타낸다.
도 24는 54mg/kg/일 IPM·Tris Q1Dx5 및 8mg/kg 독소루비신 Q4Dx3의 용량으로 독소루비신과 병용된 IPM·Tris의 생존에 대한 효과를 나타낸다.
도 25는 IPM·Tris/독소루비신 병용 방식 (regimen)의 독성을 나타낸다.
도 26은 54mg/kg IPM·Tris Q1Dx5 IP 및 10mg/kg 도세탁셀 Q6Dx3 IV의 용량으로 도세탁셀과 병용된 IPM·Tris에 의한 치료의 MX-1 유방암 종양에 대한 효과를 나타낸다.
도 27은 36mg/kg IP의 용량 또는 81mg/kg PO의 용량으로 투여된 IPM·Tris에 의한 치료의 MX-1 유방암 종양에 대한 효과를 나타낸다.
도 28은 36mg/kg IP의 용량 또는 81mg/kg PO의 용량으로 투여된 IPM·Tris의 생존에 대한 효과를 나타낸다.
도 29는 암컷 스프라그-돌리 래트에서 경구 및 IV 투여된 IPM·Tris의 약동학을 나타낸다.
도 30은 PO- 또는 IV-투여된 IPM·Tris의 용량 증가에 따른 AUC를 나타낸다.
도 31은 PO- 또는 IV-투여된 IPM·Tris의 용량 증가에 따른 Cmax를 나타낸다.
도 32는 25℃의 pH 7.0 완충액 중에서의 IPM의 용액 안정성을 나타낸다.
발명의 개요
본 명세서에서는 화학식 I의 결정성 화합물이 개시된다.
화학식 I
Figure 112013029114454-pat00003
상기 화학식 I에서,
A+는 지방족 암모늄 종을 나타내고;
X 및 Y는 독립적으로 이탈 그룹을 나타낸다.
특정 양태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 담체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 이러한 화합물 및 조성물의 제조 방법이 또한 기술된다.
또한, 본 명세서에서는 동결건조물 및 이소포스포르아미드 머스타드 (IPM) 및/또는 IPM 동족체, 1당량 이상의 염기 및 부형제를 포함하는 동결건조물의 제조 방법이 개시된다. 특정 양태에서, 상기 방법은 IPM의 결정성 염 또는 이의 동족체와 지방족 아민 (예: 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 (Tris)) 또는 IPM 또는 이의 동족체와 하나 이상의 지방족 아민의 혼합물 (바람직하게는, IPM 또는 이의 동족체 대 아민 또는 아민들이 약 1:1의 비이다)을 물과 접촉시키고; 생성된 혼합물을 동결건조시키는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 상기 혼합물 및 생성된 동결건조물은 부형제, 예를 들면, 만니톨, 무수 락토스, 수크로스, D(+)-트레할로스, 덱스트란 40 또는 포비돈 (PVP K24), 바람직하게는 만니톨을 포함한다.
이러한 제형에는, 바람직하게는 부형제 (예: 만니톨, 무수 락토스, 수크로스, D(+)-트레할로스, 덱스트란 40 또는 포비돈 (PVP K24), 바람직하게는 만니톨), 및 하기 화학식의 화합물을 포함하는 동결건조물이 포함된다.
Figure 112013029114454-pat00004
상기 화학식에서,
A+는 염기성 아미노산, 헤테로사이클릭 아민, 치환 및 비치환된 피리딘, 구아니딘 및 아미딘을 포함하는, 지방족 아민 및 방향족 아민의 양자화 형태 (콘쥬게이트 산) 또는 4급 형태로부터 선택되는 암모늄 종을 나타내고;
X 및 Y는 독립적으로 이탈 그룹을 나타낸다.
또한, 본 명세서에서는 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 부형제 및 본 명세서에 기재된 화합물을 포함하는, 경구 투여에 적합한 약제학적 조성물이 개시된다.
특정 양태에서, 본 발명은, 예를 들면, 본 명세서에 논의된 화합물 또는 제형에 의한 과증식성 장애의 치료 방법에 관한 것이다. 이러한 특정 양태에서, 본 발명은 급성 백혈병 (예: 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 및 골수아구성 백혈병, 전골수구성 백혈병, 골수단구성 백혈병, 단구성 백혈병 및 적백혈병), 만성 백혈병 (예: 만성 골수구성 (과립구성) 백혈병, 만성 골수성 백혈병 및 만성 림프구성 백혈병), 진성 적혈구증가증, 림프종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종 (무통성 및 고등급 형태), 다발 골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 중쇄병, 골수형성이상 증후군, 털세포 백혈병 및 척수형성 이상증을 포함하는, 백혈병으로부터 선택되는 과증식성 장애의 치료에 관한 것이다.
본 명세서에 개시된 화합물 및 조성물을 사용하여 치료할 수 있는 상태의 부가적 예로는 고형 종양, 예를 들면, 육종 및 암종이 포함되며, 이에는, 하기로 제한되지는 않지만, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 사이클로포스파미드-내성 육성 및 다른 육종, 윤활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근 육종, 횡문근 육종, 결장 암종, 림프구 악성 종양, 췌장암, 유방암, 폐암, 난소암, 전립선암, 간세포성 암종, 편평세포 암종, 기저세포 암종, 선암, 한선 암종, 피지선 암종, 유두 암종, 유두모양샘 암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 콩팥세포 암종, 간암, 담관 암종, 융모막 암종, 윌름 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 방광 암종 및 중추신경계 (Central Nervous System; CNS) 종양 (예: 신경아교종, 별아교세포종, 속질모세포종, 두개인두종, 뇌실막세포종, 솔방울샘종, 혈관모세포종, 청신경초종, 희소돌기 아교세포종, 메낭지오마 (menangioma), 흑색종, 신경모세포종 및 망막모세포종)이 포함된다.
I. IPM 염 및 이의 동족체
본 명세서에 기재된 조성물은 결정성 IPM 염 또는 이의 동족체를 포함한다. 특정 양태에서, 상기 기재된 염은 하나 이상의 양이온을 포함한다. 특정 양태에서, 상기 양이온은 아민 염기의 콘쥬게이트 산일 수 있거나 4급 암모늄 양이온일 수 있다.
특정 양태에서, 상기 기재된 결정성 화합물은 IPM 또는 이의 동족체의 염을 포함한다. 이러한 화합물에는 화학식 I의 결정성 화합물이 포함된다.
화학식 I
Figure 112013029114454-pat00005
상기 화학식 I에서,
A+는 하이드록시화 지방족 아민의 양자화 형태 (콘쥬게이트 산) 또는 4급 형태로부터 선택되는 암모늄 종을 나타내고;
X 및 Y는 독립적으로 이탈 그룹을 나타낸다.
특정 양태에서, X 및 Y는 독립적으로 할로겐이다. 바람직하게는, X 및 Y는 동일하다. 이러한 특정 양태에서, X 및 Y는 둘 모두 Cl이다.
아민 염기의 적합한 컨쥬게이트 산의 특별한 예로는, 이에 제한되지 않고, 모노-, 비스- 또는 트리스-(2-하이드록시에틸)아민, 2-하이드록시-3급-부틸아민, N,N-디메틸-N-(2-하이드록시에틸)아민 및 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄(Tris)의 컨쥬게이트 산이 포함된다. 이러한 특정 양태에서, A+는 Tris의 컨쥬게이트 산이다.
특정 양태에서, 본 발명은 IPM 또는 이의 동족체의 결정성 염을 포함하며, 상기 IPM 또는 이의 동족체와 카운터이온, 바람직하게는 Tris는 2:1 내지 1:2의 비, 바람직하게는 1:1의 비로 존재하는 화합물에 관한 것이다. 특정 양태에서, 상기 결정성 조성물은 1개보다 많은 다형 형태 (polymorphic form)의 결정들, 예를 들면, 2개, 3개, 4개 또는 심지어 5개의 다형 형태의 결정들을 포함한다. 특정한 대안적인 이러한 양태에서, 상기 결정성 조성물은 단일 다형 형태의 결정들을 포함한다. 특정 양태에서, 이러한 염은 유리 산으로서의 IPM 및 IPM 동족체보다 더 안정하다.
이러한 특정 양태에서, 상기 화합물은 IPM과 Tris의 1:1 비의 결정성 염이다. 이러한 특정 양태에서, 상기 결정성 고체의 융점은 약 100 내지 약 110℃, 약 102 내지 약 108℃, 약 103 내지 약 106℃, 또는 심지어 105 내지 106℃이다.
특정 양태에서, 상기 화합물, 예들 들면, IPM과 Tris의 1:1 비의 결정성 염은 약 80% 이상의 순도, 약 85% 이상의 순도, 90% 이상의 순도, 95% 이상의 순도, 97% 이상의 순도, 98% 이상의 순도, 또는 심지어 99% 이상의 순도이다. 이러한 특정 양태에서, 어떠한 단일 불순물도 1중량%를 초과하지 않는다. 특정 양태에서, 순도는 조성물의 모든 다른 성분들에 대하여 상대적으로 측정되는 반면, 다른 양태에서 (예: 상기 화합물이 약제학적 조성물 또는 동결건조물 혼합물의 일부인 경우), 순도가 화합물 (예: 화합물의 인-함유 분해 생성물)의 분해 생성물에 대하여 또는 화합물 제조의 부산물 (예: 화합물의 인-함유 분해 생성물)에 대하여 상대적으로 측정될 수 있으며, 이에 의해 조성물에 첨가된 다른 성분들을 의도적으로 배제시킬 수 있다.
특정 양태에서, 상기 화합물은 IPM 염 또는 이의 동족체이며, 이때 당해 염은 물의 존재하에 실온 (예: 약 23℃)에서의 반감기가 동일한 조건하에 물의 존재하에서의 IPM (즉, 유리 산으로서)의 반감기보다 더 크다. 이러한 특정 양태에서, IPM 염은 물의 존재하에서의 반감기가, 물의 존재하에서의 IPM 자체와 동일하거나 이보다 2배 더 크며, 보다 바람직하게는 5배이거나 이보다 더 크다.
특정 양태에서, 상기 화합물은 IPM 염 및 이의 동족체이며, 이때 당해 염은 물의 존재하에 실온에서 1일 이상, 2일 이상, 3일 이상, 4일 이상, 5일 이상, 6일 이상, 또는 심지어 일주일 이상 안정하다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "안정한"은 일정 기간 (예: 1개월, 2개월, 3개월, 6개월, 1년 등) 후에 IPM 염 또는 이의 동족체의 순도가 초기 순도의 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 또는 심지어 99% 이상임을 의미하며, 이것은, 예를 들면, 증기화 광 산란 검출 (ELSD)을 이용하여 고성능 액체 크로마토그래피 (High-performance liquid chromatography; HPLC)에 의해 측정될 수 있다. 이러한 검정은 예를 들면, 수중 0.005 M 헵타플루오로부티르산 및 0.1% 트리플루오로아세트산을 포함하는 이동상을 가진 C18 컬럼 및 아이소크래틱 시스템 (isocratic system)을 사용하여 수행될 수 있다.
특정 양태에서, 본 발명은 하기 화학식의 화합물을 포함하는 동결건조물에 관한 것이다.
Figure 112013029114454-pat00006
상기 화학식에서,
A+는 염기성 아미노산, 헤테로사이클릭 아민, 치환 및 비치환된 피리딘, 구아니딘 및 아미딘을 포함하는, 방족 아민 및 방향족 아민의 양자화 형태 (콘쥬게이트 산) 또는 4급 형태로부터 선택되는 암모늄 종을 나타내고;
X 및 Y는 독립적으로 이탈 그룹을 나타낸다.
본 발명의 화합물에 사용하기에 적합한 아민 염기 (및 이들의 상응하는 암모늄 이온)의 특별한 예로는, 이에 제한되지 않고, 피리딘, N,N-디메틸아미노피리딘, 디아자비사이클로노난, 디아자비사이클로운데센, N-메틸-N-에틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 모노-, 비스- 또는 트리스-(2-하이드록시에틸)아민, 2-하이드록시-3급-부틸아민, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄, N,N-디메틸-N-(2-하이드록시에틸)아민, 트리-(2-하이드록시에틸)아민 및 N-메틸-D-글루카민이 포함된다.
특정 양태에서, 본 발명은 하기 화학식의 화합물을 포함하는 동결건조물에 관한 것이다.
Figure 112013029114454-pat00007
상기 화학식과 관련하여, B는 각각의 n에 대해 독립적으로 선택되는 염기성 분자일 수 있다. 상기 화학식의 한 양태에서, B는 염기성 아미노산, 아크릴 지방족 아민, 디- 및 트리 알킬 아민, 헤테로사이클릭 지방족 아민, 방향족 아민, 치환 및 비치환된 피리딘, 사이클릭 및 아사이클릭 구아니딘과 사이클릭 및 아사이클릭 아미딘으로부터 선택될 수 있다. 통상적으로, n은 상기 화학식이 상이한 염기성 분자를 포함할 수 있도록 1 내지 약 3이다. 상기 화학식을 계속 참조해 보면, X 및 Y는 이탈 그룹이다. 당해 기술분야의 통상의 숙련가는 제시된 이소포스포르아미드 머스타드 구조가 산성 양성자를 포함하며, 그 자체는 생리학적 pH에서, 염기 (예: B)의 존재하에 이의 콘쥬게이트 염기로서 주로 존재함을 이해할 것이다. 마찬가지로, 염기성 그룹인 B는 생리학적 pH에서, 이소포스포르아미드 머스타드 및 이소포스포르아미드 머스타드 동족체의 존재하에 이의 콘쥬게이트 산으로서 주로 존재한다. 개시된 화합물의 예시적 양태가 하기 표 1에 도시되어 있다.
표 1
Figure 112013029114454-pat00008
II. 조성물 및 방법
특정 양태에서, 본 발명은 IPM 염 또는 이의 동족체 및 약제학적 희석제 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 이러한 특정 양태에서, 상기 약제학적 조성물은 용액, 바람직하게는 IPM 또는 IPM 동족체를 포함하는 식염수 용액이다. 이러한 특정 양태에서, 용액 중 IPM 염 또는 IPM 동족체 염의 농도는 약 3mg/mL 내지 약 30mg/mL이거나 심지어는 더 크다. 이러한 식염수 용액은, 예를 들면, 본 명세서에 기재된 화학식 I의 결정성 화합물 또는 IPM 또는 IPM 동족체의 동결건조물을, 예를 들면, 실온에서 교반하면서, 식염수 용액 중에 용해시킴으로써 제조될 수 있다. 이러한 특정 양태에서, 상기 식염수 용액은 염화나트륨 농도가 약 0.5%, 0.9%, 2.5%, 2.7%, 3.0%, 4.0%, 또는 심지어 5.0%가 되도록 제조된다.
특정 양태에서, 본 명세서에 기재된 화학식 I의 결정성 화합물 또는 IPM 또는 IPM 동족체의 동결건조물로부터 수성 용액이 제조될 수 있다. 이러한 수성 용액 (예: 물이나 등장 식염수 용액 중)은 실온에서 약 60분 이상, 약 80분 이상, 약 100분 이상, 약 120분 이상, 약 140분 이상, 또는 심지어 실온에서 약 160분 이상 동안 안정하다.
특정 양태에서, 화학식 I의 결정성 화합물 (예: IPM과 Tris의 염)은 물에서의 용해도가 약 30mg/mL 이상, 약 40mg/mL 이상, 약 50mg/mL 이상, 약 60mg/mL 이상, 약 70mg/mL 이상, 또는 심지어 약 80mg/mL 이상이다. 특정 양태에서, 화학식 I의 결정성 화합물 (예: IPM과 Tris의 염)은 물에서의 용해도가 약 200mg/mL 이상, 약 500mg/mL 이상, 약 800mg/mL 이상, 약 1000mg/mL 이상, 약 1200mg/mL 이상, 또는 심지어 약 1400mg/mL 이상이다. 특정 양태에서, 수중 상기 결정성 화합물의 용액의 pH는 약 4.5 내지 약 10, 예를 들면, 약 5.0 내지 8.5, 바람직하게는 약 5.0 내지 약 7.0이다. 특정 양태에서, 이러한 용액의 pH는 약 5.0이다.
특정 양태에서, 본 발명은 화학식 I의 결정성 화합물 및 식염수 용액을 포함하는 키트에 관한 것이다.
본 명세서에 기재된 동결건조물은 1당량 이상의 염기와 제형화된 IPM 및 IPM 동족체를 포함한다. IPM 및 이의 동족체는 산에 불안정하고 산성이기 때문에, 현재 개시된 동결건조물은 더 큰 안정성뿐만 아니라 다른 이점도 제공한다. 합성, 안정성 및 생체이용가능성 측면에서 상기 기재된 제형의 이점은 본 개시의 고려시 당해 기술분야의 통상의 숙련가에게 명백할 것이다. 1당량 이상의 염기와 제형화된 IPM 및 IPM 동족체의 부가적 이점으로는 물이나 체액 중에서의 증가된 용해도를 들 수 있다.
특정 양태에서, 상기 기재된 동결건조물은 하나 이상의 양이온을 포함하는 이소포스포르아미드 머스타드 또는 이소포스포르아미드 머스타드 동족체의 염이다. 한 양태에서, 상기 양이온은 아민 염기의 콘쥬게이트 산이거나, 4급 암모늄 양이온일 수 있다. 이소포스포르아미드 머스타드 및 이의 동족체에 대한 적절한 카운터이온은, 염기성 아미노산, 지방족 아민, 헤테로사이클릭 아민, 방향족 아민, 피리딘, 구아니딘 및 아미딘을 포함하는, 염기의 콘쥬게이트 산 (본 명세서에 사용된 바와 같이, 아민을 의미하는 용어는 해당 문맥이 유리 아민이 의도됨을 명백히 지시하지 않는 한, 이들의 콘쥬게이트 산을 포함하는 것으로 이해해야 한다)을 포함한다. 지방족 아민 중, 아사이클릭 지방족 아민 및 사이클릭과 아사이클릭 디- 및 트리-알킬 아민이 상기 기재된 화합물에 사용하기에 특히 적합하다. 또한, 4급 암모늄 카운터 이온은 사용될 수 있는 적절한 카운터이온의 예이다. 특정 양태에서, 이러한 동결건조물은 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 부형제에는, 하기로 제한되지는 않지만, 만니톨, 무수 락토오스, 수크로오스, D(+)-트레할로스, 덱스트란 40 및 포비돈 (PVP K24)이 포함된다.
특정 양태에서, 상기 화합물 및 조성물 (예: 본 명세서에 기재된 동결건조물)은 실온에서 2주 이상, 3주 이상, 1개월 이상, 2개월 이상, 3개월 이상, 또는 심지어 6개월 이상 동안 안정하다. 특정 양태에서, 상기 염은 더 낮은 온도 (예: 0℃, 2℃, 4℃, 6℃ 등)에서 2주 이상, 3주 이상, 1개월 이상, 2개월 이상, 3개월 이상, 또는 심지어 6개월 이상 동안 안정하다. 이러한 특정 양태에서, 상기 화합물 및 조성물 (예: 상기 동결건조물)은 더 낮은 온도 (예: 약 0℃ 내지 약 20℃, 약 0℃ 내지 약 10℃, 또는 심지어 약 2℃ 내지 약 8℃)에서 1개월 이상, 2개월 이상, 4개월 이상, 또는 심지어 6개월 이상 안정하다. 특정 양태에서, 상기 동결건조물은 IPM 염 또는 이의 동족체를 포함한다. 특정 양태에서, 상기 동결건조물은 IPM·Tris 또는 IPM(LYS)2, 바람직하게는 IPM·Tris를 포함하고, 특히 바람직한 양태에서, 이러한 조성물은 벌킹제 (예: 만니톨)를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 상기 기술된 염은 2급 아민 또는 암모늄 그룹을 포함할 수 있다. 한 양태에서, 본 명세서에 기재된 동결건조물은 이소포스포르아미드 머스타드 또는 이소포스포르아미드 머스타드 동족체의 각각의 당량에 대하여 아민을 1당량 초과하여 포함한다. 이러한 양태는 아민 대 이소포스포르아미드 머스타드 또는 이소포스포르아미드 머스타드 동족체가 비-정수 (non-integer) 비인 것들을 포함한다. 특정 양태에서, 상기 동결건조물은 아민 대 이소포스포르아미드 머스타드 또는 이소포스포르아미드 머스타드 동족체의 비가 2:1 또는 3:1이다. 수행 양태에서, 이소포스포르아미드 머스타드 1당량당 2당량의 아민 염기를 함유하는 염을 제조하였다. 특정 양태에서, 이소포스포르아미드 머스타드 및 이소포스포르아미드 머스타드 동족체 염을 형성하는데 사용되는 아민 염기는 하나 초과의 아미노 그룹을 포함하는데; 이러한 염기는 "다염기성"이라 불릴 수 있다. 보다 구체적으로, 사용될 수 있는 다염기성 염기의 특정 예는 2개의 아미노 그룹을 가지는데; 이러한 화합물은 "이염기성"이라 불릴 수 있다. 예를 들면, 한 적합한 이염기성 분자는 N,N-디메틸아미노피리딘이며, 이는 2개의 염기성 아미노 그룹을 포함한다. 본 명세서에 기재된 동결건조물의 특정 양태는 이소포스포르아미드 머스타드 또는 이소포스포르아미드 머스타드 동족체 및 1당량의 이염기성 염기를 포함한다.
본 명세서에 기재된 특정한 이소포스포르아미드 머스타드 및 이소포스포르아미드 머스타드 동족체 동결건조물은 2개의 이탈 그룹을 포함한다. 이론에 제한됨 없이, 2개의 이탈 그룹은 생체내에서 생체 분자 친핵체 (예: 핵산 및 단백질)에 의해 치환되고, 이에 의해 생체 분자가 가교결합된다. 용어 "이탈 그룹"은 친핵체에 의해 치환될 수 있는 그룹을 의미한다. 현재 개시된 화합물과 관련하여, 이탈 그룹은, 치환되어 아지리디늄 중간체를 형성하거나, 생체 분자 친핵체 (예: 핵산 친핵체)에 의해 직접 치환되어, 예를 들면, 7-알킬화 구아니디늄 종을 형성할 수 있는 그룹을 의미한다. 적절한 이탈 그룹의 예로는 할로겐 및 설포네이트 (-SO2R)가 포함된다. 개시된 이소포스포르아미드 동족체 염의 한 양태에서, 상기 화합물은 "혼합된" 이탈 그룹 화합물이며, 이에는 2개의 상이한 유형의 이탈 그룹 (예: 할로겐 및 설포네이트) 또는 2개의 상이한 할로겐 (예: 브로마이드 및 클로라이드)이 포함된다. 미국 특허 제6,197,760호 (Struck)는 이러한 혼합된 이탈 그룹 화합물의 제조 방법을 교시하고 있다.
특정 양태에서, 개시된 염의 동결건조물은 이소포스포르아미드 머스타드 그 자체의 동결된 제제와 비교하여, 재구성 안정성 (reconstitutional stability)을 개선시킨다. 이러한 특정 양태에서, 개시된 IPM 또는 이의 동족체의 염과 부형제로부터 제조되고 (예를 들면, IPM 또는 이의 동족체와 Tris로부터, 임의로 부형제 (예: 만니톨과 같은 벌킹제)를 포함하여 제조된다), 식염수 용액 (바람직하게는 5% 염화나트륨) 중에서 재구성된 동결건조물은 약 30분 이상, 약 60분 이상, 약 90분 이상, 약 120분 이상, 약 140분 이상, 또는 심지어 약 160분 이상 동안 90% 초과의 효능 (potency)를 유지한다.
이러한 특정 양태에서, IPM 또는 이의 동족체의 염 (예: IPM·Tris) 또는 IPM 또는 이의 동족체의 염으로부터 제조된 동결건조물 (예: IPM·Tris 및 임의 부형제 (예: 만니톨과 같은 벌킹제)을 식염수 용액 중에 용해시킬 경우, 실온에서 약 30분 이상, 약 60분 이상, 약 90분 이상, 약 3시간 이상, 또는 심지어 약 4.5시간 이상 동안 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 심지어 99% 이상의 순도를 유지한다. 특정 양태에서, 이러한 재구성된 용액은 동일한 조건하에 재구성된 IPM·(LYS)2 용액보다 더 안정하다. 이러한 특정 양태에서, 재구성된 IPM·(LYS)2는 IPM 또는 이의 동족체의 염보다 1.25배 이상, 1.5배 이상, 2배 이상, 또는 심지어 3배 또는 4배 이상 빨리 분해된다.
상기 동결건조물이 IPM 또는 이의 동족체의 염 및 부형제를 포함하는 특정 양태 (예를 들면, IPM 또는 이의 동족체, Tris 및 만니톨을 포함하는 동결건조물)에서, 당해 혼합물은 물에서의 용해도가 약 30mg/mL 이상, 약 40mg/mL 이상, 약 50mg/mL 이상, 약 60mg/mL 이상, 약 70mg/mL이상, 또는 심지어 약 80mg/mL 이상이다.
특정 양태에서, 개시된 IPM 또는 이의 동족체의 염의 동결건조물은 이소포스포르아미드 머스타드 그 자체 (즉, 유리 산으로서)의 동결건조된 제제보다 더 안정하다. 특정한 바람직한 이러한 양태에서, 상기 기재된 염의 동결건조물은 이소포스포르아미드 머스타드 그 자체의 동결건조된 제제보다, 바람직하게는 2배 이상, 보다 바람직하게는 5배 이상 더 긴 저장 수명을 갖는다. 특정 양태에서, 상기 동결건조물은 IPM의 Tris 염으로부터 형성되며, 이것은 용해 전에 결정성일 수도 있고 아닐 수도 있다.
상기 기술된 바와 같이, 특정 양태에서, 이러한 동결건조물은 부형제, 예를 들면, 벌킹제, 바람직하게는 만니톨을 추가로 포함한다. 특정 양태에서, 상기 동결건조물은 만니톨, 무수 락토스, 수크로스, D(+)-트레할로스, 덱스트란 40 및 포비돈 (PVP K24)으로부터 선택되는 벌킹제, 바람직하게는 만니톨을 포함한다. 특정 양태에서, 이러한 벌킹제의 첨가는 벌킹제의 부재하에서의 동결건조물 제형에 비하여 동결건조물의 안정성을 개선시킬 수 있다. 이러한 특정 양태에서, 이러한 동결건조물은 약 -70℃, 약 -20℃, 또는 심지어 5℃에서, 예를 들면, 1개월, 2개월, 3개월, 6개월, 9개월, 1년, 또는 심지어 2년 이상의 기간에 걸쳐 안정하다.
상기 동결건조물이 벌킹제 (예: 만니톨)를 포함하는 이러한 특정 양태에서, 당해 동결건조물은 약 1% 내지 약 10% 또는 약 1% 내지 약 5%(w/v) 벌킹제 (예: 만니톨)를 포함한다. 동결건조 전이나 재구성시, 이러한 조성물은 약 15 내지 약 25mg/mL의 IPM 및/또는 약 0.5 내지 약 1.5 M, 바람직하게는 IPM에 대하여 대략 등몰량의 아민 (예: Tris)을 포함할 수 있다. 특정 양태에서, 동결건조화 전에 상기 용액을 제조할 경우, 별도의 성분으로서 IPM 및 아민 (예: Tris)을 첨가하는 대신에, 이들은 본 명세서에 기재된 결정성 IPM·Tris 염의 형태로 함께 첨가된다.
특정 양태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 동결건조물 및 식염수 용액을 포함하는 키트에 관한 것이다.
본 명세서에 기재된 화합물은 경구, 국소, 경피, 비경구, 흡입을 통해 또는 분무로 투여할 수 있으며, 통상의 비독성의 약제학적으로 허용되는 담체, 보조제 및 비히클을 함유하는 용량 단위 제형으로 투여될 수 있다.
특정 양태에서, 상기 기재된 IPM 염 및 이의 동족체의 주사를 통한 비경구 투여가 바람직하다. 특정 양태에서, 상기 기재된 IPM 염 및 이의 동족체의 경구 투여가 바람직하다. 특정 양태에서, 경구 (PO) 투여된 IPM 염 및 이의 동족체는 정맥내 (IV) 투여에서 관찰된 것과 유사한 약동학적 (PK) 파라미터를 보여준다. 이들 제제는 특별한 질환, 환자의 상태, 화합물의 독성 및 당해 기술분야의 통상의 숙련가가 인지할 수 있는 다른 요인에 따라, 단일 용량으로 또는 만성적으로 제공될 수 있다.
투여되는 화합물 또는 화합물들의 치료학적 유효량은 상기 제시된 원하는 효과 및 제시된 요인에 따라 달라질 수 있다.
개체에 투여하기 위한 약제학적 조성물은 선택되는 분자 외에도, 담체, 농후화제, 희석제, 완충제, 방부제 및 표면 활성제 등을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 또한 하나 이상의 부가적 활성 성분 (예: 항미생물제, 소염제 및 마취제 등)을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 부가적 성분 (예: 담체)을 포함할 수 있다. 이들 제형에 유용한 약제학적으로 허용되는 담체가 통상적이다. 문헌[참조: Remington's Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 21th Edition (2006)]은 본 명세서에 기재된 화합물의 약제학적 전달에 적합한 조성물 및 제형을 기술하고 있다.
일반적으로, 담체의 특성은 사용되는 특별한 투여 방식에 따라 좌우된다. 예를 들면, 비경구 제형은 대개, 비히클로서 약제학적으로 및 생리학적으로 허용되는 유체 (예: 물, 생리 식염수, 균형 염 용액, 수성 덱스트로스, 글리세롤 등)를 포함하는 주사 가능한 유체를 함유한다. 고체 조성물 (예: 분말, 환제, 정제 또는 캅셀제 형태)의 경우에, 통상의 비독성 고체 담체는, 예를 들면, 약제학적 등급의 만니톨, 락토스, 전분 또는 마그네슘 스테아레이트를 포함할 수 있다. 생리학적으로 중성인 담체 외에도, 투여되는 약제학적 조성물은 소량의 비독성 보조제 물질, 예를 들면, 습윤제 또는 유화제, 방부제 및 pH 완충제 등 (예: 나트륨 아세테이트 또는 소르비탄 모노라우레이트)을 함유할 수 있다.
특정 양태에서, 개시된 화합물은 경구 용량형, 예를 들면, 환제, 정제 또는 캅셀제로 제형화된다. 특정 양태에서, 상기 경구 용량형은 캅셀제이다.
특정 양태에서, 이러한 경구 용량형은 하나 이상의 부형제, 활탁제, 희석제, 윤활제 및/또는 붕해제를 포함한다. 이러한 특정 양태에서, 적합한 부형제, 활탁제, 희석제, 윤활제 및/또는 붕해제에는, 하기로 제한되지는 않지만, 탈크, 발연 이산화규소, 전분, 규산칼슘, 탄산마그네슘, 산화마그네슘, 마그네슘 라우릴 설페이트, 나트륨 라우릴 설페이트, 락토스, 미세결정성 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스, 덱스트로스, 글루과정, 수크로스, 전분, 전분 유도체, 탄산칼슘, 이염기성 인산칼슘, 탄산마그네슘, 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트, 나트륨 스테아릴 푸마레이트, 폴리에틸렌 글리콜 4000, 폴리에틸렌 글리콜 6000, 나트륨 벤조에이트, 경질 광물유, 수소화 식물유, 스테아르산, 글리세릴 베헤네이트, 불용성 이온 교환 수지, 나트륨 전분 글리콜레이트, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스 (크로스카르멜로스 나트륨), 검 (예: 한천, 구아, 크산탄), 알긴산, 나트륨 알기네이트 및 크로스포비돈이 포함된다.
이러한 특정 양태에서, 상기 경구 용량형은 본 명세서에 기재된 화합물 및 하나 이상의 부형제, 활탁제, 희석제, 윤활제 및/또는 붕해제; 바람직하게는 흡습 활성제 (hygroscopic active agent)와 제형화하기에 적합한 하나 이상의 부형제, 활탁제, 희석제, 윤활제 및/또는 붕해제를 포함한다. 이러한 특정 양태에서, 상기 경구 용량형은 미세결정성 셀룰로오스, 락토스, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 마그네슘 스테아레이트, 이염기성 인산칼슘, 나트륨 전분 글리콜레이트, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 및 만니톨로부터 선택되는 하나 이상의 부형제, 활탁제, 희석제, 윤활제 및/또는 붕해제를 포함한다.
특정 양태에서, 개시된 화합물은 사람 개체에 투여하기 위하여 제형화된다. 이러한 양태의 측면에서, 약제학적 조성물은 IPM 염 또는 이의 동족체의 화합물을 약 0.1 내지 약 250mg/mL, 예를 들면, 약 20 내지 약 100mg/mL로 포함한다.
한 측면에서, 약제학적 조성물의 특정 양태는 단위 용량형 (unit dosage form)으로 제형화된다. 예를 들면, 이러한 단위 용량형은 용량 단위당 개시된 IPM 염 또는 이의 동족체를 약 1 내지 약 100mg 또는 100 내지 약 1500mg, 예를 들면, 약 5 내지 약 200mg 또는 200 내지 약 1500mg으로 함유할 수 있다. 특정 양태에서, 용량 단위는 개시된 IPM 염 또는 이의 동족체를 약 15mg, 약 30mg, 약 45mg, 약 60mg, 약 75mg, 또는 심지어 약 77mg으로 포함할 수 있다.
어떤 양태에서, 본 발명의 화합물은, 예를 들면, 다공성 리포좀[예: DepoForm (SkyePharma, Inc, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)]을 포함하는 주사된 및/또는 이식된 약물 데포우를 통해 전달된다 (참조: Chamberlain et al. Arch. Neuro. 1993, 50, 261-264; Katri et al. J. Pharm. Sci. 1998, 87, 1341-1346; Ye et al., J. Control Release 2000, 64, 155-166; 및 Howell, Cancer J. 2001, 7, 219-227).
개시된 화합물 및 조성물 중 하나 이상을 개체에 투여함으로써 비정상적이거나 병리학적인 증식 활성 또는 이상증식 (neoplasia)을 특징으로 하는 상태를 치료하는 방법이 본 명세서에 기술되어 있다.
개시된 방법에 따라 치료할 수 있는 상태는 비정상적인 세포 성장 및/또는 미분화를 특징으로 하는 것, 예를 들면, 암 및 다른 신생 상태 (neoplastic condition)를 포함한다. 기술된 화합물 및 조성물을 사용하여 치료할 수 있는 증식성 질환의 전형적인 예가 하기에 열거되어 있다.
본 명세서에 기재된 화합물 및 조성물을 사용하여 치료할 수 있는 혈액학적 종양의 예로는 급성 백혈병 (예: 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 및 골수아구성 백혈병, 전골수구성 백혈병, 골수단구성 백혈병, 단구성 백혈병 및 적백혈병), 만성 백혈병 (예: 만성 골수구성 (과립구성) 백혈병, 만성 골수성 백혈병 및 만성 림프구성 백혈병), 진성 적혈구증가증, 림프종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종 (무통성 및 고등급 형태), 다발 골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 중쇄병, 골수형성이상 증후군, 털세포 백혈병 및 척수형성 이상증을 포함하는, 백혈병이 포함된다.
개시된 화합물 및 조성물을 사용하여 치료할 수 있는 상태의 부가적 예로는 고형 종양, 예를 들면, 육종 및 암종이 포함되며, 이에는 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 사이클로포스파미드 (CPA)-내성 육성 및 다른 육종, 윤활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근 육종, 횡문근 육종, 결장 암종, 림프구 악성 종양, 췌장암, 유방암, 폐암, 난소암, 전립선암, 간세포성 암종, 편평세포 암종, 기저세포 암종, 선암, 한선 암종, 피지선 암종, 유두 암종, 유두모양샘 암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 콩팥세포 암종, 간암, 담관 암종, 융모막 암종, 윌름 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 방광 암종 및 CNS 종양 (예: 신경아교종, 별아교세포종, 속질모세포종, 두개인두종, 뇌실막세포종, 솔방울샘종, 혈관모세포종, 청신경초종, 희소돌기 아교세포종, 메낭지오마 (menangioma), 흑색종, 신경모세포종 및 망막모세포종)이 포함된다.
특정 양태에서, 본 명세서에 기재된 화합물은 CPA 및/또는 Ifos 내성 종양 성장에 대하여 단독으로의 CPA 또는 Ifos보다 우수하다. 따라서, 본 명세서에 기재된 방법의 한 측면은 CPA 및/또는 Ifos 내성 신생 상태를 갖는 개체를 본 명세서에 기재된 IPM 염 또는 이의 동족체로 치료함을 포함한다.
어떤 양태에서, 본 명세서에 기재된 화합물은 CPA 및/또는 Ifos와 비교하여, 감소된 독성을 나타낸다. 예를 들면, 높은 용량의 CPA 및/또는 Ifos는 특정 대사물질 (예: 클로로아세트알데하이드 및 아크롤레인)의 존재로 인해 증가된 신장, 방광 및/또는 중추 신경계 독성을 초래할 수 있다. 어떤 양태에서, 본 발명의 화합물은 효능을 유지하면서 이들 또는 다른 독성 대사물질의 생성을 감소시키거나 피할 수 있다. 이에 따라, 본 발명의 화합물은 유해한 부작용, 예를 들면, CPA 및/또는 Ifos의 대사물질에 관계될 수 있는 신장, 방광 또는 중추 신경계의 정상 세포의 죽음을 감소시키면서 치료학적 치료를 제공할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 CPA 및/또는 Ifos의 대체물로 유용하다.
예를 들어, 본 발명의 화합물은 혈액 세포 및 골수 이식 환자들을 준비함에 있어 유용하다. CPA 및 Ifos가 혈액 세포 및 골수 이식에 흔히 사용되며, 본 발명의 화합물은, 예를 들면, 본 발명의 화합물의 감소된 독성 프로파일 및/또는 증가된 효능에 의한 대체 이점을 나타낸다. 추가로, 본 발명의 화합물은 또한 혈액 세포 및 골수 이식에서 CPA 및 Ifos가 부적절한 경우, 예를 들면, 높은 용량의 CPA 및 Ifos가 너무 독성이 강한 것으로 입증된 경우에 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물은 이식하기 수 분, 수 시간, 수 일, 수 주 또는 수 개월 전에, 특히 이식하기 수 일 또는 수 주 전에 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 혈액 세포 또는 골수 이식의 준비에서 단일, 다회 및/또는 반복 용량형으로 및/또는 다른 제제와 조합하여 투여될 수 있다.
특정 양태에서, 본 발명의 화합물은, 예를 들어 CPA 및/또는 Ifos의 대체물로서, 혈액 세포 및 골수 이식을 위한 방식을 조정하는 데 유용하다. 또한, 본 발명의 화합물은 CPA 및 Ifos와 조합하여 흔히 사용되는 보호 수단 (예: 메스나 (mesna) 및 정맥내 수분보급 (intravenous hydration))을 사용하지 않고 투여될 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 화합물은, 예를 들면, 혈액 세포 및 골수 이식 환자 준비시에 그리고 혈액 세포 및 골수 이식을 위한 방식 조정시에, CPA 및/또는 Ifos와 병용될 수 있다. 본 발명의 화합물 중 하나 이상을 CPA 및/또는 Ifos와 병용하여 포함하는 조성물은 단독으로의 CPA 및/또는 Ifos에 비하여 감소된 독성 및/또는 증가된 효능와 같은 부가적 이점을 제공한다.
상기 방법의 특정 양태에서, 개체는, 개시된 IPM 염 또는 이의 동족체 약 0.2 내지 약 20mg/kg/일을 투여받는다. 예를 들면, 개시된 화합물 약 0.5 내지 약 10mg/kg/일, 예컨대, 약 1 내지 약 7.5mg/kg/일이 개체에 투여될 수 있다.
특정 양태에서, IPM, 이의 동족체 또는 이의 염이 약 1.0g 초과, 약 1.5g 초과, 2.0g 초과, 또는 심지어 약 2.5g 초과의 용량 (예: 일일 용량)으로 개체에 투여된다. 특정 양태에서, 상기 IPM 염은 IPM·Tris이며, 예를 들면, 약 2.0g 이하, 약 2.5g 이하, 또는 심지어 3.0g 이하이다.
특정 양태에서, IPM 또는 이의 동족체가 염으로서 개체에 투여되는데, 이때 IPM 또는 이의 동족체의 용량 (예: 일일 용량) (즉, 단지 염의 IPM 음이온만을 고려하고, 조성물의 카운터이온 또는 다른 성분의 중량은 고려하지 않는다)이 약 0.4g 초과, 약 0.6g 초과, 약 0.8g 초과, 또는 심지어 약 1.0g이 되도록 한다. 특정 양태에서, IPM이 본 명세서에 기재된 조성물로 약 0.4g 초과, 약 0.6g 초과, 약 0.8g 초과, 또는 약 1.0g 초과의 용량으로, 예를 들면, 약 2.0g 이하, 약 2.5g 이하, 또는 심지어 3.0g 이하의 용량으로 투여된다.
특정 양태에서, IPM 염 또는 이의 동족체의 과정은 IPM 또는 이의 동족체의 총량 (즉, 단지 염의 IPM 음이온만을 고려하고, 조성물의 카운터이온 또는 다른 성분의 중량은 고려하지 않는다)을 약 0.8g 초과, 약 1.0g 초과, 약 1.5g 초과, 또는 심지어 약 2.0g 초과로 포함할 수 있다.
특정 양태에서, IPM 염 또는 이의 동족체의 용량이 주 1회, 주 3회, 주 5회, 일일 1회, 또는 심지어 일일 2회 투여될 수 있으며, 바람직하게는 일일 1회이다. 이러한 특정 양태에서, IPM 염 또는 이의 동족체의 과정이 투여될 수 있으며, 이때 한 과정은 2회 이상의 연속적 용량이다. 특정 양태에서, 치료 과정은 IPM 염 또는 이의 동족체의 용량을 일일 1회 2일, 3일, 4일, 또는 심지어 5일 동안, 바람직하게는 3일 동안 투여함을 포함할 수 있다. 이러한 용량들은 연속적 또는 비-연속적인 날로 투여될 수 있다.
특정 양태에서, 단일 용량 (예: 일일 용량)은 하나 초과의 용량형을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단일 용량은 2개 이상의 캅셀제, 정제 또는 환제를 포함할 수 있다. 특정 양태에서, 다회 용량형을 포함하는 일일 용량이 1회에 전부 투여되거나, 당해 용량형의 일부씩을 하루를 통하여 간격을 두고 투여할 수 있다.
상기 방법의 또 다른 양태에서, 개체는 본 명세서에 기재된 IPM 염 또는 이의 동족체를 약 1 내지 약 1500mg/m2, 예를 들면, 약 1 내지 약 700mg/m2, 약 5 내지 약 1000mg/m2, 약 5 내지 약 700mg/m2, 약 5 내지 약 500mg/m2, 약 600 내지 약 1200mg/m2, 약 100 내지 약 1500mg/m2, 약 30 내지 약 600mg/m2, 약 10 내지 약 600mg/m2 또는 약 10 내지 약 100mg/m2의 용량 (예: 일일 용량)으로 투여받는다. 예를 들면, 약 10mg/m2, 약 12, 또는 심지어 14mg/m2이다.
본 명세서에 기재된 과증식성 장애를 치료하는 방법의 특정 양태에서, 개시된 화합물을 개체에 일일 다회 용량 스케줄로 투여한다. 이러한 양태에서, 상기 화합물은 2일 이상 그리고 5일의 상이한 날만큼 많이 투여한다. 일일 다회 용량 스케줄의 한 측면에서, 상기 화합물은 연속적인 날로, 예를 들면, 2 내지 5일 연속으로 개체에 투여된다. 대안적으로, 상기 화합물은 비-연속적인 날로, 예를 들면, 격일로 개체에 투여된다.
상기 방법의 특정 양태에서, 현재 개시된 화합물 및 조성물 외에도, 하나 이상의 부가적인 치료학적 제제가 개체에 투여된다. 예를 들면, 사용될 수 있는 부가적인 치료학적 제제에는 미소관 (microtubule) 결합제, DNA 삽입제 또는 가교결합제, DNA 합성 억제제, DNA 및/또는 RNA 전사 억제제, 항체, 효소, 효소 억제제, 유전자 조절제 및/또는 혈관신생 억제제가 포함된다.
미소관 결합제는 튜불린과 상호작용하여 미소관 형성을 안정화하거나 탈안정화시킴으로써 세포 분열을 억제하는 제제를 의미한다. IPM, 동족체 또는 이의 염과 함께 사용될 수 있는 미소관 결합제의 예로는, 이에 제한되지 않고, 파클리탁셀, 도세탁셀, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈 (나벨빈), 에포틸론, 콜키신, 돌라스타틴 15, 노코다졸, 포도필로톡신 및 리족신이 포함된다. 이러한 화합물의 동족체 및 유도체가 또한 사용될 수 있으며, 당해 기술분야의 통상의 숙련가에게 공지되어 있다. 예를 들면, 본 발명의 화합물 내로 혼입시키기에 적합한 에포틸론 및 에포틸론 동족체가 본 명세서에 참조로 포함된 국제 공개 공보 제WO 2004/018478호에 기술되어 있다. 탁소이드 (예: 파클리탁셀 및 도세탁셀)는 현재 개시된 화합물에서 치료학적 제제로서 특히 유용한 것으로 현재 여겨진다. 파클리탁셀의 동족체를 포함하는, 부가적인 유용한 탁소이드의 예는 미국 특허 제6,610,860호 (Holton), 제5,530,020호 (Gurram et al.) 및 제5,912,264호 (Wittman et al.)에 의해 교시되어 있으며, 이들 특허는 전체적으로 각각 본 명세서에 참조로 포함된다.
적합한 DNA 및/또는 RNA 전사 조절제에는, 이에 제한되지 않고, 악티노마이신 D, 다우노루비신, 독소루비신 및 이들의 유도체와 동족체가 포함되는데, 이러한 DNA 및/또는 RNA 전사 조절제는 현재 개시된 화합물과 병용하기에 적합하다.
상기 기재된 화합물 내로 혼입될 수 있는 DNA 삽입제 및 가교결합제에는, 이에 제한되지 않고, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 미토마이신 (예: 미토마이신 C), 블레오마이신, 클로람부실, 사이클로포스파미드 및 이들의 유도체와 동족체가 포함된다.
치료학적 제제로서 사용하기에 적합한 DNA 합성 억제제에는, 이에 제한되지 않고, 메토트렉세이트, 5-플루오로-5'-데옥시우리딘, 5-플루오로우라실 및 이들의 동족체가 포함된다.
현재 개시된 화합물과 병용하기에 적합한 효소 억제제의 예로는, 이에 제한되지 않고, 캄프토테신, 에토포시드, 포메스탄, 트리코스타틴 및 이들의 유도체와 동족체가 포함된다.
현재 개시된 화합물과 병용하기에 적합한, 유전자 조절에 영향을 주는 치료학적 제제에는 하나 이상의 유전자의 증가되거나 감소된 발현을 유발하는 제제, 예를 들면, 이에 제한되지 않고, 랄록시펜, 5-아자시티딘, 5-아자-2'-데옥시시티딘, 타목시펜, 4-하이드록시타목시펜, 미페프리스톤 및 이들의 유도체와 동족체가 포함된다.
혈관신생 억제제는 당해 기술분야에 공지되어 있으며, 적합한 혈관신생 억제제의 예로는, 이에 제한되지 않고, 안지오스타틴 K1-3, 스타우로스포린, 제니스테인, 푸마길린, 메드록시프로게스테론, 수라민, 인터페론-알파, 메탈로프로테이나제 억제제, 혈소판 인자 4, 소마토스타틴, 트로모보스폰딘, 엔도스타틴, 탈리도미드 및 이들의 유도체와 동족체가 포함된다.
상기 분류 중 하나 이상에 속하거나 속하지 않을 수 있는, 다른 치료학적 제제, 특히 항-종양제가 또한 현재 개시된 화합물과 병용하여 투여하기에 적합하다. 예로서, 이러한 제제에는 아드리아마이신, 아피게닌, 라파마이신, 제불라린, 시메티딘 및 이들의 유도체와 동족체가 포함된다.
특정 양태에서, 상기 IPM 염 또는 이의 동족체가 DNA 및/또는 RNA 전사 조절제 (예: 독소루비신)와 병용하여 투여된다. 특정한 대안적인 양태에서, 상기 IPM 염 또는 이의 동족체가 미소관 결합제 (예: 도세탁셀 또는 파클리탁셀)와 병용하여 투여된다.
특정 양태에서, 상기 IPM 염 또는 이의 동족체와 나머지 치료학적 제제(들)의 병용물의 치료학적 효과가, 2개 이상의 제제가 동일한 양으로 개별적으로 투여될 경우 개개의 효과의 합보다 크다는 의미에서, 본 명세서에 기술된 병용물은 사실상 상승적일 수 있다.
이러한 특정 양태에서, 이러한 상승적 효과는 상기 IPM 염 또는 이의 동족체의 치료학적 용량 미만 (sub-therapeutic dose)의 투여를 허용할 수 있다. 이러한 특정 양태에서, 치료학적 용량 미만의 투여는 높은 용량의 IPM 염 또는 이의 동족체와 관련된 부작용을 감소시키거나 피할 수 있으며, 예를 들면, 본 발명의 방법은 통상의 항암제가 더 낮은 용량에서 더 큰 효과를 발휘할 수 있게 됨에 따라 기존의 병용 요법에 비하여 유리할 수 있다.
특정 양태에서, 상기 부가적 제제의 효능은 IPM 염 또는 이의 동족체와 병용하여 투여될 경우 개선된다. 이러한 특정 양태에서, 상기 부가적 제제는 화학요법제이며, 이에는, 하기로 제한되지는 않지만, 미소관 결합제, DNA 삽입제 또는 가교제, DNA 합성 억제제, DNA 및/또는 RNA 전사 억제제, 항체, 효소, 효소 억제제, 유전자 조절제 및/또는 혈관신생 억제제가 포함된다. 이러한 특정 양태에서, 미소관 결합제 (예: 도세탁셀 도는 파클리탁셀)의 효능은 IPM 염 또는 이의 동족체와 병용하여 투여될 경우 개선된다. 특정한 대안적인 이러한 양태에서, DNA 및/또는 RNA 전사 억제제 (예: 독소루비신)의 효능은 IPM 염 또는 이의 동족체와 병용하여 투여될 경우 개선된다. 특정 양태에서, 상기 IPM 염 또는 이의 동족체는 IPM·Tris이다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "치료학적 용량 미만"은 종양 용적을 안정화하거나 감소시킬 수 있지만, 당해 용량에서 효과적인 치료로 고려되지 않을 용량이나 심지어는 단독으로는 어떠한 측정 가능한 치료학적 효과도 제공하지 않는 용량까지도 포함한다.
특정 양태에서, 상기 IPM 염 또는 이의 동족체가 약 100 내지 약 500mg, 약 150 내지 약 400mg, 또는 심지어 약 175 내지 약 300mg의 용량으로 투여된다. 특정 양태에서, 상기 IPM 염 또는 이의 동족체가 약 150mg, 약 175mg, 약 185mg, 약 190mg, 약 200mg, 약 225mg, 약 250mg, 약 275mg, 약 285mg, 약 290mg, 또는 심지어 약 300mg의 용량으로 투여된다. 이러한 특정 양태에서, 이러한 용량들로 투여되는 상기 IPM 염 또는 이의 동족체가 경구 투여된다.
이러한 특정 양태에서, 상기 IPM 염 또는 이의 동족체가 독소루비신과 병용하여 약 100 내지 약 200mg, 약 110 내지 약 180mg, 또는 심지어 약 115 내지 약 150mg의 용량으로 투여된다. 이러한 특정 양태에서, 상기 IPM 염 또는 이의 동족체가 독소루비신과 병용하여 약 100mg, 약 110mg, 약 115mg, 약 125mg, 약 135mg, 약 140mg, 약 145mg, 약 155mg, 약 165mg, 약 175mg, 약 185mg, 또는 심지어 약 200mg의 용량으로 투여된다.
이러한 특정 양태에서, 상기 IPM 염 또는 이의 동족체가 도세탁셀과 병용하여 약 50mg 내지 약 200g, 약 75mg 내지 약 195mg, 또는 심지어 약 80mg 내지 약 190mg의 용량으로 투여된다. 이러한 특정 양태에서, IPM 염 또는 이의 동족체가 도세탁셀과 병용하여 약 50mg, 약 70mg, 약 80mg, 약 90mg, 약 95mg, 약 100mg, 약 110mg, 약 120mg, 약 130mg, 약 140mg, 약 150mg, 약 160mg, 약 170mg, 약 180mg, 약 190mg, 또는 심지어 약 200mg의 용량으로 투여된다.
III. 정의
하기의 용어 설명 및 실시예는 본 발명의 화합물, 조성물 및 방법을 보다 잘 기술하고, 본 개시의 실행시 당해 기술분야의 통상의 숙련가를 가이드하기 위해 제공된다. 또한, 본 개시에 사용된 용어는 단지 특별한 양태 및 실시예를 기술하기 위한 목적이며, 제한하고자 함이 아니다.
본 명세서에서 범위는 "약" 하나의 특정 값으로부터 및/또는 "약" 다른 특정 값까지와 같이 표현할 수 있다. 이러한 범위를 나타낼 때, 또 다른 양태는 상기 하나의 특정 값으로부터 및/또는 상기 나머지 다른 특정 값까지를 포함한다. 유사하게, 앞에 오는 "약"의 사용에 의해, 값들이 근사치로 표현된 경우, 당해 특정 값이 또 다른 양태를 형성함이 이해될 것이다. 이들 각각의 범위의 종점들은 나머지 다른 종점과 관련하여, 그리고 나머지 다른 종점과 독립적으로 둘 모두에 대하여 유의함이 추가로 이해될 것이다.
용어 "아사이클릭 지방족 아민"은 지방족 그룹 중 하나 이상이 아사이클릭인, 상기와 같은 지방족 아민을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "지방족 아민"은 화학식 NR1R2R3의 화합물을 의미하며, 여기서 R1 -3중 하나 이상은 지방족 그룹이다.
본 명세서에서 용어 "혈관신생 억제제"는 하기로 제한되는 것은 아니지만, 생체 분자 (예: 펩티드, 단백질, 효소, 다당류, 올리고뉴클레오티드, DNA, RNA, 재조합 벡터 및 혈관 성장을 억제하는 기능을 갖는 소분자)를 포함하는, 분자를 의미하는 것으로 사용된다. 혈관신생은 특정한 병리학적 과정, 예를 들면, 당뇨성 망막증, 만성 염증성 질환, 류마티스 관절염, 치매, 건선, 위궤양 및 대부분의 유형의 사람의 고형 종양과 같은 질환에 관여하는 병리학적 과정에 관련되어 있다.
용어 "헤테로사이클릭 아민"은 화학식 NR1R2R3의 화합물을 의미하며, 여기서, R1-3중 하나 이상은 헤테로사이클릭 그룹이거나, R1, R2 및/또는 R3은 이들의 공통된 질소 원자와 함께 환을 형성한다.
용어 "이탈 그룹"은 친핵체에 의해 치환될 수 있는 그룹을 의미한다. 현재 개시된 화합물과 관련하여, 이탈 그룹은, 치환되어 아지리디늄 중간체를 형성하거나, 생체 분자 친핵체 (예: 핵산 친핵체)에 의해 직접 치환되어, 예를 들면, 7-알킬화 구아니디늄 종을 형성할 수 있는 그룹을 의미한다. 적합한 이탈 그룹의 예로는 할로겐 및 설포네이트 (-SO2R)가 포함된다. 개시된 이소포스포르아미드 동족체 염의 특정 양태에서, 상기 화합물은 "혼합된" 이탈 그룹 화합물이며, 이에는 2개의 상이한 유형의 이탈 그룹 (예: 할로겐 및 설포네이트) 또는 2개의 상이한 할로겐 (예: 브로마이드 및 클로라이드)이 포함된다. 미국 특허 제6,197,760호 (Struck)는 이러한 혼합된 이탈 그룹 화합물의 제조 방법을 교시하고 있다.
"이상증식 (neoplasia)"은 비정상적이고 조절되지 않는 세포 성장 과정을 의미한다. 이상증식은 과증식성 장애의 한 예이다. 이상증식의 생성물은 신생물 (종양)로, 이는 과도한 세포 분열로부터 일어나는 비정상적인 조직 성장이다. 전이되지 않는 종양은 "양성"이라 불린다. 주변 조직을 침습하고/하거나, 전이될 수 있는 종양은 "악성"이라 불린다.
용어 "임의" 또는 "임의로"는, 이어서 기재되는 사건 또는 상황이 필요할 수 있지만 일어나지 않을 수 있고, 당해 기재는 상기 사건 또는 상황이 발생되는 경우 및 발생되지 않는 경우를 포함함을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "안정한"은 화합물이 5일 이상에 걸쳐, 또는 규정된 기간에 걸쳐 5% 이하, 바람직하게는 2% 이하, 또는 심지어 1% 이하로 분해됨을 의미한다. 이러한 분해는 1H NMR, HPLC 또는 다른 적합한 수단에 의해 모니터링될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 그리고 당해 기술분야에서 잘 이해되는 바와 같이, "치료"는 유익하거나 원하는 결과 (임상 결과를 포함한다)를 얻기 위한 접근이다. 유익하거나 원하는 임상 결과에는 하기로 제한되지는 않지만, 하나 이상의 증상 또는 상태의 완화 또는 개선, 질환 정도의 감소, 질환의 안정화 (즉, 더 나빠지지 않는) 상태, 질환의 확산 방지, 질환 진행의 지연 또는 감속, 질환 상태의 개선 또는 고식 및 관해 (부분적이든 전체적이든)가, 검지될 수 있든 검지될 수 없든 간에 포함된다. "치료"는 또한 치료를 받지 않을 경우 예상되는 생존과 비교하여, 연장된 생존을 의미할 수 있다.
IV. 실시예
전술한 기재를 하기의 비제한적인 예로 추가로 설명한다.
실시예 1
반응기를 Tris (103.3mg) 및 MeCN (3mL)로 충전하고, 이어서 MeCN (3mL) 중 IPM (200.5mg)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 이어서, 고체를 여과에 의해 수집하고, 케이크를 MeCN으로 세정하였다. 이 케이크를 진공하에 건조시켜 일정한 중량으로 하여 최종 생성물 (296mg)을 수득하였다. 이 최종 생성물에 X-선 분말 회절을 실시하여 결정성임을 확인하였다 (도 2). 이 결정성은 DSC에서 날카로운 피크가 105.77 에서 나타난 것에 의해 추가로 뒷받침되었다 (도 3). 추가로, IPM·Tris 염은 TGA에 의해 약 125℃에서 0.7692%의 중량 손실을 보여주었다 (도 4). 마지막으로, SEM은 IPM·Tris는 판상 (plate-like)의 결정 형상을 가짐을 보여주었다.
결정성 IPM·Tris의 안정성은 1H NMR로 모니터링하였으며, 실온에서 최대 6일 동안 안정하게 유지되는 것으로 확인되었다. 결정 구조의 안정성은 DSC로 모니터링하였는데, 이것은 IPM·Tris 결정이 실온에서 10일 과정에 걸쳐 물을 흡수하지 않거나 구조에 변화가 없음을 나타내었다.
실시예 2
반응기를 Tris (8.563g) 및 DMF (40mL)로 충전하고 가열하여 맑은 용액을 형성하였다. 이 용액을 실온으로 냉각시킨 후에, IPM을 첨가하였다. 혼합물을 교반하여 맑은 용액을 형성하였다. 다음에, 아세토니트릴 (40mL) 및 소량의 시드를 이 용액에 첨가하고, 이어서 MTBE (240mL)를 서서히 첨가하여 슬러리를 수득하였다. 이 슬러리를 추가 시간 동안 교반하고, 이 시점에서 여과에 의해 침전을 수집하고, 필터 케이크를 MTBE (80mL)로 세정하였다. 이 필터 케이크를 실온에서 진공하에 건조시켜 일정한 중량으로 하여 최종 생성물을 수득하였다 (23.2g).
실시예 3
생체내 통과로부터의 MX-1 사람 유방 종양의 30 내지 40mg의 단편을 nu/nu 마우스의 유방 지방 패드에 피하 이식하고, 치료를 시작하기 전에 75 내지 200mg의 중량에 도달하게 두었다. 종양 이식 후 10일째에 치료를 개시하였으며; 매일 1회 5일 동안 복강내 투여하였다. IPM·(LYS)2 (43% IPM 및 57% Lys) 및 IPM·Tris는 용량을 IPM으로 정규화했을 때, MX-1 종양에 대하여 유사한 활성을 보여주었다 (도 6 참조).
실시예 4
생체내 통과로부터의 MX-1 사람 유방 종양의 30 내지 40mg의 단편을 nu/nu 마우스의 유방 지방 패드에 피하 이식하고, 치료를 시작하기 전에 75 내지 200mg의 중량에 도달하게 두었다. 종양 이식 후 10일째에 치료를 개시하였으며; 매일 1회 5일 동안 복강내 투여 또는 구강 투여하였다. 각각의 투여에 대하여 최대내용량에 있는 IPM·Tris (실시예 1에 기술된 바와 같이 제조할 수 있다)는 경구 투여 또는 전신 투여했을 때, MX-1 종양에 대하여 동등하게 활성화되었다 (도 7 참조).
실시예 5
세포 증식 검정
미량배양 테트라졸륨법 (microculture tetrazolium method)에 의해 성장 억제를 측정하였다. 간단히 설명하면, 세포를 100 μL의 배지 중 500 세포/웰의 밀도로 96-웰 평판 바닥 마이크로타이터 플레이트에 시딩하였다. 밤새 항온배양 후에, IPM·(LYS)2를 함유하는 100 μL의 배지를 첨가하여 규정된 최종 농도 및 200　μL/웰의 최종 부피를 달성하였다. 데이터 점들은 평균 생존력 및 오차 바 (3중으로 행해진 각 실험의 표준 편차)를 나타낸다. 120시간째에, 3-[4,5-디메틸트리아존-2-일]-2,5-디페닐 테트라졸륨 브로마이드 (MTT, Sigma, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)의 포르마진으로의 미토콘드리아 전환에 의해, 처리한 세포 및 처리하지 않은 세포의 상대 대사 활성을 측정하였다. 약물 처리의 완료 후에, 250 μg의 MTT를 각각의 웰에 첨가하고, 37℃, 5% CO2에서 6시간 동안 항온배양하였다. 포르마진 결정을 DMSO 중에 용해시켰으며, 595 nm에서의 광학 밀도를 VERSAmax 광학광도계 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA)에서 측정하였다. 생존력은 처리한 샘플의 595 nm에서의 흡광도를 대조군 샘플의 570 nm에서의 흡광도로 나눈 것으로 정의하였다. IC50은 처리한 세포의 생존력이 대조군의 생존력의 50%가 되는 농도 (처리군/대조군 = 0.5)로 정의하였다.
쥐 이종이식 모델
CB17 암컷 scid*/* 마우스 (Taconic Farms, 미국 뉴욕주 저먼타운 소재)에 종양 피하 옆구리 종양을 이식하였다. 이 OS31 종양주는 St. Judes Children's Cancer Research Hospital에서 확립되었으며, 이전에 기술되었다 (20). OS1 종양을 이식하는 경우에는, 마우스를 4% 이소플루란으로 마취시켰다. 마우스 옆구리에 작은 절개를 만든 후에, 4 mm x 4 mm 단면의 종양을 피하 이식하였다.
CB17 암컷 scid*/* 마우스 (Taconic Farms, 미국 뉴욕주 저먼타운 소재)를 2사이클 동안 21일마다 1일째를 시작으로 꼬리정맥 주사를 통하여 1일 또는 3일 동안 매일 IPM·(LYS)2로 처리하였다. 5마리의 비-종양 마우스를 각각의 처리군에 할당하였다. 마우스를 75mg/kg/일, 100mg/kg/일, 150mg/kg/일 또는 200mg/kg/일의 IPM·(LYS)2 중 어느 하나로 처리하였다. 독성 사건은 무작위화 경우에 또는 사망시에 중량 손실이 동물 체중의 20% 이상인 경우로 정의하였다. MTD는 독성이 일어나지 않는 최고 용량으로 정의하였다.
종양이 직경 약 0.20 내지 0.7 cm이었을 때, 종양 마우스를 5 내지 8마리의 마우스 집단으로 무작위화하여 1개의 처리군과 1개의 대조군으로 하였다. 처리한 마우스는 1일과 21일째를 시작으로 5일 동안 매일 복강내 주사로 90mg/kg/일의 용량으로 타시도틴을 투여받았다. 구형 종양임을 가정하여, 종양의 용적을 하기 식에 의해 측정하였다: mm3 = */6(D)d2 (여기서, D는 최대 직경이고, d는 D에 수직인 직경이다). 용적은 임의의 주어진 시점에서의 종양 용적을 시작 종양 용적으로 나눈 상대 종양 용적 (relative tumor volume, RTV)으로 표현된다. 처리군 마우스 및 대조군 마우스에 대한 RTV를 최소 주당 1회로 측정하였다.
마우스에서의 종양 반응의 평가 및 통계학적 고찰
Houghton 등에 의해 이미 정의된 기준을 이용하여, 진행성 질환은 전체 연구 기간 동안 원래의 종양 용적으로부터의 퇴행이 50% 미만이고 (RTV>0.5), 연구 기간의 종결시 종양 용적의 증가가 25% 초과인 (RTV>1.25) 경우로 정의된다. 안정된 질환은 전체 연구 기간을 통하여 종양 퇴행이 원래의 종양 용적의 50%를 초과하지 않고 (RTV>0.5), 연구 기간의 종결시 종양 용적의 증가가 25% 미만인 (RTV<1.25) 경우로 정의된다. 부분 반응은 종양 용적의 퇴행이 50% 초과이지만 (RTV<0.5), 측정 가능한 종양 종괴가 0.10 cm3 초과인 경우로 정의된다. 치료 기간 동안 (6주) 임의의 시점에서 측정 가능한 종양 종괴의 상실 (0.10 cm3 미만)은 완전 반응 (complete response, CR)으로 정의되었다. 지속된 CR은 6주의 연구 기간 동안 재-성장 없이 치료의 개시 후 임의의 시점에서 측정 가능한 종양 종괴의 상실 (0.10 cm3 미만)로 정의되었다. 9주 전에 또는 종양이 초기 용적의 4배에 도달되기 전에 사망한 마우스는 제외시켰다.
통계학적 분석은 무사건 생존 (event-free survival, EFS)에 기초하였다. 사건은 4배의 상대 종양 용적 (즉, 시작 종양 용적의 4배) 또는 사망으로 정의된다. EFS는 연구 개시로부터 사건까지의 시간으로 정의된다. 연구 기간의 종결인 6주까지 사건에 도달되지 않은 종양의 경우에는, 이의 EFS 시간을 그 시간에서 제외시켰다. 처리군과 대조군 사이의 무사건 생존 분포를 비교하기 위해서 정확한 로그-순위 검정을 이용하였다. 추가로, 윌콕시안-만-휘트니 검정을 이용하여 대조군 및 처리군 마우스에 대한 22일째의 RTV를 비교하였다. 이것은 타시도틴의 1사이클 후 및 처리하지 않은 마우스에 대한 사건의 발생시 또는 그 부근에서의 종양 용적을 비교할 수 있게 한다.
생물학적 데이터
사용한 종양 세포주에는 RD 및 RH30 횡문근 육종주 (American Type Culture Collection, 미국 버지니아주 마나사스 소재), Saos-2 골육종주, SKPNDW 및 SKES1 유잉의 육종주 및 HSSYII 및 SYOI 윤활막 육종주가 포함된다. 이들 세포를 10% 소태아 혈청 (Invitrogen, 미국 캘리포니아주 칼스바드 소재), 0.5% 페니실린/스트렙토마이신 (Invitrogen, 미국 캘리포니아주 칼스바드 소재) 및 1% 글루타민 (Invitrogen, 미국 캘리포니아주 칼스바드 소재)으로 보충된 MEM (Saos-2, SYO-1, HSSY-II), DME (SK-PN-DW, RD) 또는 RPMI (RH30)의 배지에서 37℃, 5% CO2에서 단층으로 성장시켰다. 이들 결과가 하기에 나타나 있다 (도 8 및 9).
Figure 112013029114454-pat00009
사이클로포스파미드 (CPA) 및 이포스파미드 (IFOS)에 대한 내성은 암 치료에서 극복해야 할 주요 장애물이다. CPA-내성 사람 육종 세포의 이종이식편을 가진 마우스는 IPM·(LYS)2로 처리했을 때, 육종 성장에서 5배보다 더 많이 감소되었으며; CPA 치료는 어떠한 효과도 없었다 (도 10 내지 12).
사람의 임상 시도
안정성 및 용량-범위 단계 I 연구에서는 IPM·(LYS)2를 4주 (1사이클)마다 3일 동안 연속해서 매일 투여하는 것을 이용하였다. 이들 결과는 육종 (IFOS 치료에 실패한 개체를 1 이상 포함한 2/11 개체) 및 중피종 (광범위한 안정된 질환을 가진 1 개체)에서의 임상 활성의 증거를 보여주었다. 이 스케줄에서의 IPM·(LYS)2의 최대내용량 (MTD)은 400mg/m2/일이었다. 골수 독성 및 출혈성 방광염 (방광 독성) 또는 CNS 독성은 거의 없었다. 이 용량 제한 독성은 전해질 불균형을 특징으로 하였다. 이 MTD는 25g/m2 초과의 IFOS 용량에 필적하며, 이 용량은 50%의 사람 육종 세포주를 살해하는 용량보다 25배 더 높은 혈청 수준을 달성한다.
실시예 6
재료 및 방법
실험 동물: 생후 5 내지 6주된 수컷 CD2F1 마우스를 Frederick Cancer Research and Development Center (미국 메릴랜드주 프레데릭 소재)로부터 구매하였다.
종양 모델: 23-게이지 바늘을 사용하여 백만개의 P388 뮤린 백혈병 세포를 마우스에 IP 이식하였다. P388 종양주는 생체내 통과로서 유지하였다. 종양 이식 당일을 0일째로 지정하고, 종양 이식 후 1일째에 치료를 개시하였다. 충분한 마리수의 마우스에 이식하여, 체중이 가능한 한 좁은 범위 내에 있는 동물들을 이번 시험을 위해 선택하였다.
약물 제형: 100mg의 미리 칭량된 바이알로 공급되는 IPM·(LYS)2를 치료 첫째날 (1일째)에 70mg/mL의 농도로 식염수 중에 제형화하였다. 이어서, 이 용액의 일부를 46.65, 23.35, 14, 9.35, 4.65 및 2.8mg/mL의 더 낮은 용량 농도로 희석하였다. 이어지는 치료 일들에, IPM·(LYS)2를 14mg/mL로 제형화하고, 이어서 이 용액의 일부를 더 낮은 용량 농도로 희석하였다. 모든 주사는 정확한 체중에 기초하여 투여하였으며, 이때 주사량은 0.2mL/10g 체중이었다.
약물 치료: 이번 연구는 치료 첫째날에 집단당 8마리의 마우스로 된 8개의 치료군과 10마리의 마우스로 된 2개의 비히클-처리된 대조군의 총 84마리의 마우스로 구성되었다. IPM·(LYS)2를 PO 투여로 1400, 933 및 467mg/kg의 용량 및 IP 투여로 280mg/kg의 용량으로 1일째에 단일 주사 (q1d x 1)로 투여하였다. IPM·(LYS)2를 또한 PO 투여로 280, 187 및 93mg/kg/용량의 용량 및 IP 투여로 56mg/kg/용량의 용량으로 5일 동안 연속해서 매일 (q1d x 5) 투여하였다. 하나의 대조군은 식염수를 1일째에 단일 주사로 PO 투여하여 처리하였다. 제2 대조군은 식염수를 q1d x 5 치료 스케줄로 PO 투여하여 처리하였다.
연구 지속기간: 이번 연구는 종양 이식 후 61일째에 종결하였다. 빈사 상태로 된 동물은 연구 종결 전에 안락사시켰다.
평가된 파라미터: 비특이적 사망수, 사망의 중간일 (median day) 및 사망의 중간일을 기준으로 하여 퍼센트로 표현된 수명의 증가 (%ILS); 중간 생존 시간 (median survival time) 및 중간 생존 시간을 기준으로 하여 계산된 %ILS.
통계학적 분석: 집단 간의 생존 데이터를 통계학적으로 비교하기 위해서, 생명표 분석 (계층화된 카플란-메이어 (Kaplan-Meier) 추정에 이어 맨틀-핸젤 (Mantel-Haenszel) 로그-순위 검정이 뒤따름)에서 종점으로서 개개의 동물의 생존 시간을 사용하였다. 생명표 분석은 종점에 도달하지 않은 동물들은 배제시켜 사용하여 집단 간의 생존 데이터를 비교할 수 있게 한다.
결과
비히클-처리된 대조군 둘 모두에서 사망의 중간일은 11.0이었으며, 이때 사망은 10일째 내지 14일째에 일어났다. 복수가 모든 동물에 존재하였다.
1일째에 제공된 단일 치료로서 PO 투여된 IPM·(LYS)2는 1400 및 933mg/kg의 용량에서 마우스에 독성을 나타내었다. 1400mg/kg의 용량으로 치료받은 집단에서는, 1마리의 동물이 사망하였으며, 4마리의 동물은 5일째에 빈사로 인해 안락사시켰으며, 2마리의 동물은 6일째에 안락사시켰으며, 마지막 동물은 10일째에 사망하였다. 933mg/kg의 용량으로 치료받은 집단에서는, 6마리의 동물을 빈사로 인해 5일째에 안락사시켰으며, 이 집단에 남아 있던 2마리의 동물은 9일째에 사망하였다. 부검은 이들 2개의 치료군에서 종양이 존재하지 않음을 나타내었다. 동물의 사망 또는 안락사 전에, 24% 및 22%의 유의한 체중 손실이 IPM·(LYS)2을 각각 1400 및 933mg/kg의 용량으로 투여받은 집단에서 관찰되었다. 단일 PO 치료로서 467mg/kg의 용량으로 투여된 IPM·(LYS)2는 더 우수한 내성을 나타냈지만; 2마리의 동물을 빈사로 인해 8일째에 안락사시켰다. 이 집단의 경우 평균 체중에 있어서의 최대 손실은 8%였다. 이 집단에 남아 있던 6마리의 동물은 11일째 내지 15일째에 사망하였으며, 부검시에 복수가 존재한다는 것이 측정되었다. 이 치료군에 대한 ILS는 이의 계산이 사망의 중간일을 기준으로 하든 중간 생존 시간을 기준으로 하든 9%였다. 이 집단에 대한 생존 데이터와 비히클-처리된 대조군 (집단 1, q1d x 1로 처리됨)의 생존 데이터의 통계학적 비교는 차이가 유의하지 않음을 나타내었다.
단일 주사로 280mg/kg의 용량으로 IP 투여된 IPM·(LYS)2는 사망 없이 그리고 평균 체중에 있어서의 손실을 최소한으로 한 상태로 (4%, 1g) 내성을 나타내었다. 이 집단에 대한 사망의 중간일은 34.5였으며, 이때 ILS는 214%였다. 중간 생존 시간은 38.0일이었으며, 이때 ILS는 245%였다. 추가로, 2마리의 동물은 연구가 종결되는 61일째까지 생존하였다. 부검은 어떠한 종양도 존재하지 않음을 나타내었다. 이 치료군과 비히클-처리된 대조군 (집단 1, q1d x 1로 처리됨)에 대한 생존 데이터의 통계학적 분석은 차이가 유의함을 나타내었다.
q1d x 5 치료 스케줄로 280, 187 및 93mg/kg/용량의 용량으로 PO 투여된 IPM·(LYS)2는 치료-관련 사망없이 내성을 나타내었다. 평균 체중에 있어서의 최소한의 손실 (4%, 1g)이 IPM·(LYS)2를 280mg/kg/용량의 용량으로 투여받은 집단에서 관찰되었다. 2개의 더 낮은 용량 집단에 대해서는 어떠한 중량 손실도 관찰되지 않았다. 280, 187 및 93mg/kg/용량의 용량에 대한 사망의 중간일 및 중간 생존 시간은 각각 17.0, 17.0 및 15.0일이었으며, 이때 ILS 값은 55%, 55% 및 36%였다. 이들 3개의 각각의 집단에 대한 생존 데이터와 비히클-처리된 대조군 (집단 6, q1d x 5로 처리됨)에 대한 생존 데이터의 통계학적 비교는 각각의 집단에 대한 수명의 증가가 통계학적으로 유의함을 나타내었다.
q1d x 5 주사 스케줄로 56mg/kg/용량의 용량으로 IP 투여된 IPM·(LYS)2는 사망의 중간일이 28.5일로 P388/0 백혈병에 대하여 매우 효과적이었다. 최초의 사망은 24일째에 일어났으며, 마지막 사망은 33일째에 일어났으며, 이 집단에서 8마리의 동물 중 4마리는 연구의 종결 시점인 61일째까지 생존하였다. 사망의 중간일을 기준으로 계산된 ILS 값은 159%였다. 이 치료군에 대한 중간 생존 시간은 47.0일 초과였으며, 이때 ILS의 계산값은 327%였다. 이 치료 방식은 치료-관련 사망 없이 그리고 평균 체중에 있어서의 4% (1g) 손실인 상태로 양호한 내성을 나타내었다. 이 집단에 대한 생존 데이터를 비히클-처리된 대조군 (집단 6, q1d x 5로 처리됨)의 생존 데이터와 통계학적으로 비교했을 때, 차이가 유의한 것으로 확인되었다.
통계학적 분석의 요약
Figure 112013029114454-pat00010

결론
IPM·(LYS)2는 1400 및 933mg/kg의 용량으로 단일 치료로서 PO 투여되었을 때, 마우스에 독성을 나타내었다. PO 투여된 467mg/kg의 용량에 의한 단일 치료는 내성을 나타냈지만, 수명에서 통계학적으로 유의하지 않은 아주 최소한의 증가를 이끌어냈을 뿐이다. 280mg/kg의 용량으로 단일 IP 주사로 투여된 IPM·(LYS)2는 매우 효과적이었으며, 두 마리는 61일째까지 생존하게 되었고, 수명에서 유의한 증가를 가져왔다.
280, 187 및 93의 용량으로 q1d x 5 스케줄로 PO 투여된 IPM·(LYS)2는 더 높은 용량에 의한 단일 치료보다 P388/0 백혈병에 대하여 훨씬 더 우수한 내성을 나타내었으며, 더 효과적이었다. PO qld x 5로 투여된 3개의 모든 용량에 의한 치료는 수명에서 통계학적으로 유의한 증가를 일으켰다. 56mg/kg/용량의 용량으로 qld x 5 치료 스케줄로 IP 투여되었을 때, IPM·(LYS)2는 수명에서 유의한 증가를 이끌어냈으며, 이 집단에서 8마리의 동물 중 4마리는 연구가 종결되는 61일째까지 생존하였다.
실시예 7
재료 및 방법
실험 동물: 생후 5주된 암컷 무흉선 NCr-nu/nu 마우스를 Taconic Farms (미국 뉴욕주 저먼타운 소재)로부터 구매하였다.
종양 모델: 생체내 통과로 유지된 MX-1 사람 유방 종양의 30 내지 40mg의 단편을 12-게이지 투관침을 사용하여 마우스의 유방 지방 패드에 피하 이식하고 성장하게 두었다. 종양 이식의 당일을 0일째로 지정하였다. 치료를 시작하기 전에 종양이 138 내지 245mg의 중량 (138 내지 245 mm3의 크기)에 도달하게 두었다. 충분한 마리수의 마우스에 이식하여, 중량 범위가 가능한 한 좁은 종양을 치료 개시 당일 (종양 이식 후 10일째)에 이번 시험을 위해 선택하였다. 적절한 크기 범위의 종양을 갖는 동물들을 다양한 치료군에 할당하여, 치료 첫째날에 중간 종양 중량은 가능한 한 서로 근접하였다 (172 내지 197mg).
약물 제형: 실시예 1에서 기술한 바와 같이 제조할 수 있는 IPM·Tris (205mg의 IPM/바이알) 및 IPM을 치료 첫째날 (10일째)에 6.0mg/mL의 농도로 식염수에서 둘 모두 제형화하고, 이어서 식염수를 사용하여 4.05, 1.8 및 1.2mg/mL의 더 낮은 용량 농도로 희석하였다. IPM·(LYS)2 (100mg IPM-라이신/바이알)을 치료 첫째날에 14mg/mL의 농도로 식염수에서 제형화하고, 이어서 식염수를 사용하여 9.35, 4.2 및 2.8mg/mL의 더 낮은 용량 농도로 희석하였다. 이어서, 각각의 농도를 매일의 사용을 위해 분취하고, 냉동시키고, -20℃에서 저장하고, 매일의 사용을 위해 해동하였다. 모든 주사는 정확한 체중에 기초하여 투여하였으며, 이때 주사량은 0.2mL/10g 체중이었다.
약물 치료: 이번 실험은 치료 첫째날에 집단당 8마리의 마우스로 된 12개의 치료군과 각각 10마리씩의 마우스로 된 2개의 비히클-처리된 대조군의 총 116마리의 마우스로 구성되었다. 모든 제제 (및 비히클)를 5일 동안 연속해서 매일 (q1d x 5) 투여하였다. IPM·Tris 및 IPM 둘 모두는 36 및 24mg/kg/용량의 용량으로 IP 투여하고, 120 및 81mg/kg/용량의 용량으로 PO 투여하였다. IPM·(LYS)2는 84 및 56mg/kg/용량의 용량으로 IP 투여하고, 280 및 187mg/kg/용량의 용량으로 PO 투여하였다. 대조군은 비히클 (식염수)로 IP 또는 PO 중 어느 하나로 처리하였다.
종양 측정 및 체중: 치료 첫째날을 시작으로 주당 2회 피하 종양을 측정하고 동물의 체중을 측정하였다. 종양 용적은 캘리퍼 측정 (mm)에 의해 측정하였으며, 타원구에 대해서는 하기 식을 사용하여 측정하였다.
L x W2 / 2 = mm3
상기 식에서, L 및 W는 각각의 측정에서 수집된 직교하는 더 큰 치수 및 더 작은 치수를 의미한다. 이 식은 단위 밀도 (1 mm3 = 1mg)임를 가정하여 종양 중량을 계산하는 데에도 사용된다.
연구 지속기간: 이번 연구는 종양 이식 후 50일째에 종결하였다. 빈사 상태로 되었거나, 종양이 궤양화되거나 4,000mg 에 도달한 동물은 연구 종결 전에 안락사시켰다.
평가된 파라미터: 비특이적 사망수, 부분 및 완전 종양 퇴행의 수, 무종양 생존자의 수 및 2 종양 종괴 배가 (doubling)에 도달하기까지의 개개의 동물의 시간을 측정하였다. 치료군 (T) 및 대조군 (C)에서 2 종양 종괴 배가에 도달하기까지의 중간 시간은 중간 종양의 성장에 있어서의 전체 지연 (T-C)을 계산하는 데 사용되었다.
통계학적 분석: 집단 간의 성장 데이터를 통계학적으로 비교하기 위해서, 스튜던트 t-검정/만 휘트니 순위 합 검정 또는 생명표 분석에서 종점으로서 2 종양 종괴 배가에 도달하기까지의 개개의 동물의 시간을 사용하였다. 생명표 분석 (계층화된 카플란-메이어 (Kaplan-Meier) 추정에 이어 맨틀-핸젤 (Mantel-Haenszel) 로그-순위 검정이 뒤따름)은 종양이 평가점에 도달하지 않은 동물들은 배제시켜 사용하여 집단 간의 성장 데이터를 비교할 수 있게 한다.
결과
비히클-처리된 대조군 둘 모두에서 종양이 모든 10마리의 마우스에서 잘 성장하였다. 중간 종양은 IP-처리된 집단 및 PO-처리된 집단에 대하여 각각 7.4 및 7.2일에 2 종양 종괴 배가에 도달하였다. 이번 연구 동안에 이들 두 집단에 대해서는 평균 체중에 어떠한 손실도 없었다.
36 및 24mg/kg/용량의 용량으로의 IPM·Tris의 복강내 투여는 각각 10.2 및 7.7일의 종양 성장 지연 (T-C)을 이끌어냈다. 더 높은 용량에서는 무종양 생존자가 한 마리였다. 용량 둘 모두는 평균 체중에 있어서의 최대 손실이, 36 및 24mg/kg/용량의 용량에 대하여 각각 10% (2g) 및 0%인 상태로 내성을 나타내었다. 36 및 24mg/kg/용량의 용량으로의 IPM의 복강내 투여는 각각 5.2 및 2.6일의 종양 성장 지연을 이끌어냈다. 용량 둘 모두는 평균 체중에 있어서의 최대 손실이, 36 및 24mg/kg/용량의 용량에 대하여 각각 0% 및 5% (1g)인 상태로 내성을 나타내었다. IPM에 대하여 2 종양 종괴 배가에 도달하기까지의 시간은 IPM·Tris의 상응하는 용량에 대한 것보다 통계학적으로 더 적었다 (36mg/kg/용량의 용량에 대해서는 p = 0.000; 24mg/kg/용량의 용량에 대해서는 p = 0.021). 36 및 24mg/kg/용량의 IPM 용량에 상응하는 84 및 56mg/kg/용량의 용량으로의 IPM·(LYS)2의 복강내 투여는 각각 24.3 및 9.0일의 종양 성장 지연을 이끌어냈다. IPM·(LYS)2의 더 높은 용량은 독성을 나타냈으며 - 두 마리의 마우스는 20일째에 사망하였고, 두 마리는 빈사 또는 과도한 체중 손실로 인해 안락사시켰다. IPM·(LYS)2의 더 낮은 용량은 평균 체중에 있어서의 최대 손실이 15% (3g)인 상태로 내성을 나타내었다. 내성을 나타낸 IPM·(LYS)2의 용량은, IPM·Tris에 대하여 상응하는 용량인 24mg/kg/용량 (p=0.766)에서의 활성과 유사한 활성을 나타내었으며, IPM에 대하여 상응하는 용량인 24mg/kg/용량 (p=0.0047)에서의 활성보다 우수한 활성을 나타내었다.
120 및 81mg/kg/용량의 용량으로의 IPM·Tris의 경구 투여는 각각 8.7 및 9.0일의 종양 성장 지연을 이끌어냈다. IPM·Tris의 더 높은 용량은 평균 체중에 있어서의 최대 손실을 15% (3g)로 이끌어냈으며, 이때 한 마리의 마우스는 14g 미만의 체중으로 인해 안락사시켰다. 더 낮은 용량은 평균 체중에 있어서의 최대 손실이 10% (2g)인 상태로 내성을 나타내었다. 120 및 81mg/kg/용량의 용량으로의 IPM의 경구 투여는 각각 4.6 및 4.0일의 종양 성장 지연을 이끌어냈다. 용량 둘 모두는 평균 체중에 있어서의 최대 손실이 5% (1g)인 상태로 내성을 나타내었다. 2 종양 종괴 배가에 도달하기까지의 시간은 IPM·Tris의 상응하는 용량 (120mg/kg/용량의 용량에 대해서는 p = 0.1174; 81mg/kg/용량의 용량에 대해서는 p = 0.1152)에 대한 시간과 통계학적으로 상이하지 않았다. 120 및 81mg/kg/용량의 IPM 용량에 상응하는 280 및 187mg/kg/용량의 용량으로의 IPM·(LYS)2의 경구 투여는 각각 5.0 및 3.5일의 종양 성장 지연을 이끌어냈다. 용량 둘 모두는 평균 체중에 있어서의 최대 손실이 5% (1g) 및 0%인 상태로 내성을 나타내었다. IPM·(LYS)2의 더 높은 용량은, IPM·Tris 및 IPM 둘 모두에 대하여 상응하는 용량인 120mg/kg/용량 (각각 p = 0.1000 및 p = 0.9143)에서의 활성과 유사한 활성을 나타내었다. IPM·(LYS)2의 더 낮은 용량은, IPM·Tris에 대해서는 상응하는 용량인 81mg/kg/용량 (p = 0.0290)에서의 활성보다 저하된 활성을, 그리고 IPM에 대해서는 상응하는 용량인 81mg/kg/용량 (p = 0.3073)에서의 활성과 유사한 활성을 나타내었다.
통계학적 분석의 요약 표
Figure 112013029114454-pat00011
1 생명표 분석
2 만-휘트니 순위 합 검정
3 스튜던트 t-검정
MX-1 사람 유방 종양 이식편의 (1) 비히클 - IP 및 PO, (2) IP의 IPM·Tris, IPM 및 IPM·(LYS)2, 그리고 (3) PO의 IPM·Tris, IPM 및 IPM·(LYS)2에 의한 치료에 대한 반응이 각각 도 13, 14, 15에 도시되어 있다.
결론
등가의 IPM 용량의 IP 투여의 경우, IPM·Tris의 항종양 활성은 IPM (용량 둘 모두)에 대한 활성보다 우수하였으며, IPM·(LYS)2 (용량 둘 모두)에 대한 활성과 유사하였다. 등가의 IPM 용량의 PO 투여의 경우, IPM·Tris의 항종양 활성은 IPM (용량 둘 모두)에 대한 활성과 유사하며, 더 높은 용량에서의 IPM·(LYS)2에 대한 활성과 유사하며, 더 낮은 용량에서의 IPM·(LYS)2에 대한 활성보다 우수하였다.
실시예 8
재료 및 방법
실험 동물: 생후 5주된 암컷 무흉선 NCr-nu/nu 마우스를 Harlan (미국 알라바마주 프라트빌 소재)으로부터 구매하였다.
종양 모델: 생체내 통과로 유지된 MX-1 사람 유방 종양의 30 내지 40mg의 단편을 12-게이지 투관침을 사용하여 마우스의 유방 지방 패드에 피하 이식하고 성장하게 두었다. 종양 이식의 당일을 0일째로 지정하였다. 치료를 시작하기 전에 종양이 133 내지 245mg의 중량 (133 내지 245 mm3 의 크기)에 도달하게 두었다. 충분한 마리수의 마우스에 이식하여, 중량 범위가 가능한 한 좁은 종양을 치료 개시 당일 (종양 이식 후 6일째)에 이번 시험을 위해 선택하였다. 적절한 크기 범위의 종양을 갖는 동물들을 다양한 치료군에 할당하여, 치료 첫째날에 중간 종양 중량은 가능한 한 서로 근접하였다 (144 내지 162mg).
약물 제형: 실시예 1에서 기술한 바와 같이 제조할 수 있는 IPM·Tris (205mg의 IPM/바이알, Cardinal Health)를 매 치료일마다 13.5mg/mL의 농도로 식염수에서 제형화하고, 이어서 식염수를 사용하여 9, 6, 4.05, 2.7, 1.8 및 1.2mg/mL의 더 낮은 용량 농도로 희석하였다. IPM (Eagle-Picher Pharmaceutical Service)을 매 치료일마다 6.0mg/mL의 농도로 식염수에서 제형화하고, 이어서 식염수를 사용하여 4.05, 1.8 및 1.2mg/mL의 더 낮은 용량 농도로 희석하였다. IPM·(LYS)2 (100mg IPM-라이신/바이알, University of Iowa)을 매 치료일마다 14mg/mL의 농도로 식염수에서 제형화하고, 이어서 식염수를 사용하여 9.35, 4.2 및 2.8의 더 낮은 용량 농도로 희석하였다. 모든 투약 용액은 제형 후에 동결상태로 유지하고, 30분 이내에 투여하였다. 모든 주사는 정확한 체중에 기초하여 투여하였으며, 이때 주사량은 0.2mL/10g 체중이었다.
약물 치료: 이번 실험은 치료 첫째날에 집단당 8마리의 마우스로 된 16개의 치료군과 각각 10마리씩의 마우스로 된 2개의 비히클-처리된 대조군의 총 148마리의 마우스로 구성되었다. 모든 제제 (및 비히클)를 5일 동안 연속해서 매일 (q1d x 5) 투여하였다. IPM·Tris는 81, 54, 36, 및 24mg/kg/용량의 용량으로 IP 투여하고, 270, 180, 120 및 81mg/kg/용량의 용량으로 PO 투여하였다. IPM은 36 및 24mg/kg/용량의 용량으로 IP 투여하고, 120 및 81mg/kg/용량의 용량으로 PO 투여하였다. IPM·(LYS)2는 84 및 56mg/kg/용량의 용량으로 IP 투여하고, 280 및 187mg/kg/용량의 용량으로 PO 투여하였다. 대조군은 비히클 (식염수)로 IP (집단 번호 1) 또는 PO (집단 번호 10) 중 어느 하나로 처리하였다.
종양 측정 및 체중: 치료 첫째날을 시작으로 주당 2회 피하 종양을 측정하고 동물의 체중을 측정하였다. 종양 용적은 캘리퍼 측정 (mm)에 의해 측정하였으며, 타원구에 대해서는 하기 식을 사용하여 측정하였다.
L x W2 / 2 = mm3
상기 식에서, L 및 W는 각각의 측정에서 수집된 직교하는 더 큰 치수 및 더 작은 치수를 의미한다. 이 식은 단위 밀도 (1 mm3 = 1mg)임를 가정하여 종양 중량을 계산하는 데에도 사용된다.
연구 지속기간: 이번 연구는 종양 이식 후 52일째에 종결하였다. 빈사 상태로 되었거나, 종양이 궤양화되거나 4,000mg에 도달한 동물은 연구 종결 전에 안락사시켰다.
평가된 파라미터: 비특이적 사망수, 부분 및 완전 종양 퇴행의 수, 무종양 생존자의 수 및 2 종양 종괴 배가에 도달하기까지의 개개의 동물의 시간을 측정하였다. 치료군 (T) 및 대조군 (C)에서 2 종양 종괴 배가에 도달하기까지의 중간 시간은 중간 종양의 성장에 있어서의 전체 지연 (T-C)을 계산하는 데 사용되었다.
통계학적 분석: 집단 간의 성장 데이터를 통계학적으로 비교하기 위해서, 스튜던트 t-검정/만 휘트니 순위 합 검정에서 종점으로서 2 종양 종괴 배가에 도달하기까지의 개개의 동물의 시간을 사용하였다.
결과
비히클-처리된 대조군 둘 모두에서 종양이 모든 10마리의 마우스에서 잘 성장하였다. 중간 종양은 IP-처리된 집단 및 PO-처리된 집단에 대하여 각각 9.2 및 8.9일에 2 종양 종괴 배가에 도달하였다. 이번 연구 동안에 이들 두 집단에 대해서는 평균 체중에 어떠한 손실도 없었다.
81mg/kg/용량의 용량으로의 IPM·Tris의 복강내 투여는 마우스에 독성을 나타냈으며, 3마리의 사망과 빈사 및 20% (4.5g)의 평균 체중에 있어서의 최대 손실로 인한 1마리의 안락사를 이끌어냈다. 54, 36, 및 24mg/kg/용량의 더 낮은 용량은, 평균 체중에 있어서의 최대 손실이 각각 5% (1.2g), 6% (1.3g) 및 1% (0.2g)인 상태로 내성을 나타내었다. 54, 35 및 24mg/kg/용량의 용량은 각각 4.4, 3.3 및 0.9일의 종양 성장 지연을 이끌어냈다. 36 및 24mg/kg/용량의 용량으로의 IPM의 복강내 투여는 각각 1.1 및 0.3일의 종양 성장 지연을 이끌어냈다. 용량 둘 모두는 평균 체중에 있어서의 최대 손실이, 36 및 24mg/kg/용량의 용량에 대하여 각각 8% (1.8g) 및 2% (0.4g)인 상태로 내성을 나타내었다. IPM에 대하여 2 종양 종괴 배가에 도달하기까지의 시간은 IPM·Tris의 최고 내성 용량에 대한 것보다는 통계학적으로 더 적었지만, IPM·Tris의 상응하는 용량과는 통계학적으로 동일하였다 (54mg/kg/용량의 용량에 대해서는 p =0.0148; 36mg/kg/용량의 용량에 대해서는 p = 0.1879). 36 및 24mg/kg/용량의 IPM 용량에 상응하는 84 및 56mg/kg/용량의 용량으로의 IPM·(LYS)2의 복강내 투여는 각각 0.5 및 0.3일의 종양 성장 지연을 이끌어냈다. 용량 둘 모두는 평균 체중에 있어서의 최대 손실이, 36 및 24mg/kg/용량의 용량에 대하여 각각 1% (0.3g) 및 0%인 상태로 내성을 나타냈다. IPM·(LYS)2에 대하여 2 종양 종괴 배가에 도달하기까지의 시간은 IPM·Tris의 최고 내성 용량에 대한 것보다는 통계학적으로 더 적었지만, IPM·Tris의 상응하는 용량과는 통계학적으로 동일하였다 (54mg/kg/용량의 용량에 대해서는 0.0104; 36mg/kg/용량의 용량에 대해서는 0.1578).
270, 180 및 120mg/kg/용량의 용량으로의 IPM·Tris의 경구 투여는 마우스에 독성을 나타냈으며, 각각 8마리의 사망/빈사로 인한 안락사, 7마리의 사망 및 3마리의 사망을 이끌어냈다. 180 및 120mg/kg/용량의 용량은 평균 체중에 있어서의 최대 손실을 각각 23% (5.3g) 및 20% (4.7g)로 이끌어냈다. 81mg/kg/용량의 최저 용량은 평균 체중에 있어서의 최대 손실이 10% (2.2g)인 상태로 내성을 나타내었다. 81mg/kg/용량의 용량은 2.6일의 종양 성장 지연을 이끌어냈다. 120mg/kg/용량의 용량으로의 경구 투여는 마우스에 독성을 나타냈으며, 2마리의 사망과 18% (3.8g)의 평균 체중에 있어서의 최대 손실을 이끌어냈다. 81mg/kg/용량의 더 낮은 용량은 평균 체중에 있어서의 최대 손실이 9% (2g)인 상태로 내성을 나타냈으며, 2.3일의 종양 성장 지연을 이끌어냈다. 2 종양 종괴 배가에 도달하기까지의 시간은 IPM·Tris의 상응하는 용량에 대한 시간과 통계학적으로 상이하지 않았다 (81mg/kg/용량의 용량에 대해서 p = 0.2932). 120 및 81mg/kg/용량의 IPM 용량에 상응하는 280 및 187mg/kg/용량의 용량으로의 IPM·(LYS)2의 경구 투여는 각각 3.9 및 4.7일의 종양 성장 지연을 이끌어냈다. 용량 둘 모두는 평균 체중에 있어서의 최대 손실이 14% (3g) 및 7% (1.6g)인 상태로 내성을 나타내었다. IPM·(LYS)2의 더 낮은 용량은, IPM·Tris에 대하여 상응하는 용량인 81mg/kg/용량 (p = 0.8785)에서의 활성과 유사한 활성을 나타내었다.
통계학적 분석의 요약 표
Figure 112013029114454-pat00012
1 만-휘트니 순위 합 검정
2 스튜던트 t-검정
MX-1 사람 유방 종양 이식편의 (1) 비히클 - IP 및 PO, (2) IP의 IPM·Tris, IPM 및 IPM·(LYS)2, 그리고 (3) PO의 IPM·Tris, IPM 및 IPM·(LYS)2에 의한 치료에 대한 반응이 각각 도 16, 17, 18에 도시되어 있다.
결론
등가의 IPM 용량의 IP 투여의 경우, IPM·Tris의 항종양 활성은 IPM 및 IPM·(LYS)2 (더 높은 용량) 둘 모두에 대한 활성과 유사하였다. 더 낮은 용량은 이번 연구에서 MX-1 종양에 대하여 비활성이었다. IPM·Tris의 최고 내성 용량은 IPM 또는 IPM·(LYS)2 중 어느 것의 최고 시험 용량보다 우수하였다. 등가의 IPM 용량의 PO 투여의 경우, IPM·Tris의 항종양 활성은 더 낮은 용량에서의 IPM 및 IPM·(LYS)2 둘 모두에 대한 활성과 유사하였다. 120mg/kg/용량의 용량은 IPM·Tris 및 IPM 둘 모두의 경우 마우스에 독성을 나타내었다.
등가의 IPM 용량의 IP 투여에 대한 앞서의 MX-1 연구 (실시예 7)에서, IPM·Tris의 항종양 활성은 IPM (용량 둘 모두)에 대한 활성보다 우수하였으며, IPM·(LYS)2 (용량 둘 모두)에 대한 활성과 유사하였다. 등가의 IPM 용량의 PO 투여의 경우, IPM·Tris의 항종양 활성은 IPM (용량 둘 모두)에 대한 활성과 유사하며, 더 높은 용량에서의 IPM·(LYS)2에 대한 활성과 유사하며, 더 낮은 용량에서의 IPM·(LYS)2에 대한 활성보다 우수하였다.
두 연구를 비교했을 때, IP 투여했을 경우의 3가지 제제의 활성은 이번 연구에서 보다 낮았다 (예: 36mg/kg/용량의 용량으로의 IPM·Tris의 경우 - T-C 값 10.2일 대 3.3일; 36mg/kg/용량의 용량으로의 IPM의 경우 - T-C 값 5.2일 대 1.1일; 그리고 56mg/kg/용량의 용량으로의 IPM·(LYS)2의 경우 - T-C 값 9.0일 대 0.3일). PO 투여했을 경우의 IPM·Tris의 활성도 이번 연구에서 보다 낮았다 (IPM 및 IPM·(LYS)2에 대하여 유사한 값) (예: 81mg/kg/용량의 용량으로의 IPM·Tris의 경우 - T-C 값 9.0일 대 2.6일; 81mg/kg/용량의 용량으로의 IPM의 경우 - T-C 값 4.0일 대 2.3일; 그리고 280mg/kg/용량의 용량으로의 IPM·(LYS)2의 경우 - T-C 값 5.0일 대 3.9일). 이러한 생물학적 시스템에 따른 연구-대-연구 변동을 고려하면, 감소된 활성에 대한 이유(들)는 명확하지 않다. 이번 연구의 종양 성분에 대하여, 비히클-처리된 대조군 종양은 두 연구에서 유사한 속도로 성장하였다. 치료 첫째날에 중간 종양 중량은 이번 실시예 (144 내지162mg의 범위)에서보다 실시예 7 (172 내지 197mg의 범위)에서 약간 더 컸지만; 이러한 작은 차이는 항종양 활성에 대하여 유의한 효과를 갖지 않는다.
실시예 9
재료 및 방법
8마리의 마우스로 된 3개의 집단은 IPM·Tris (실시예 1에서 기술한 바와 같이 제조할 수 있다)로 처리하였으며, 8마리의 마우스로 된 3개의 집단은 독소루비신으로 처리하였으며, 10마리의 마우스로 된 1개의 집단은 비히클로 처리하고, 8마리의 마우스로 된 18개의 집단은 IPM·Tris/독소루비신 병용제로 처리하였다. MX-1 종양 절편 (30 내지 40mg, 생체내 통과로부터의 것임)을 암컷 무흉선 누드 마우스의 유방 지방 패드에 피하 이식하였다. IPM·Tris (또는 이의 비히클)를 3개의 용량 (12, 24 및 54mg/kg/용량)으로 5일 동안 연속해서 매일 (Q1dx5) 복강내 투여하였는데, 이때 IPM·Tris 제형은 258.9mg IPM (MW 221.02), 141.9mg Tris 염기 (MW 121.14, IPM:Tris 염기의 몰비 1:1) 및 3% 만니톨로 구성되었다. 독소루비신 (또는 이의 비히클)을 8mg/kg/용량으로 4일마다 3회 주사 (Q4dx3)로 정맥내 투여하였다. 투약 용액은 치료 당일에 제조하였으며, IPM·Tris 투약 용액은 일단 제조하고 나면 동결 상태로 유지하였다.
종양이 약 175mg의 크기 (100 내지 250mg의 범위)로 되었을 때, 치료를 시작하였다. 각각의 종양은 캘리퍼에 의해 2개의 치수로 측정하였으며, 단위 밀도 (1 mm3 = 1mg)임을 가정하여, 장타원에 대한 식인 (a x b2/2) (여기서, a는 더 긴 치수이고, b는 더 작은 치수이다)를 사용하여 종양 종괴로 전환시켰다. 종양 측정은 주당 2회 기록하였으며, 비히클-처리된 대조군과 비교하여 치료군의 종양 성장에 있어서의 지연, 부분 및 완전 퇴행 및 무종양 생존자에 의해 항종양 활성을 평가하였다. 8mg/kg/일의 독소루비신과 병용하여 IPM·Tris가 54mg/kg/일로 투여되었을 때, 병용군에서 2마리의 동물이 독성으로 인해 초기에 사망하였음에 주목한다. 결과는 도 19 내지 25에서 확인할 수 있다.
IPM·Tris과 독소루비신의 병용은 유의한 항종양 활성을 가져왔으며, 이때 이러한 병용에 의한 종양 성장 억제는 단일 제제 투여에서 관찰된 것을 초과하였으며, 이러한 병용은 단일 제제 투여에 비하여 생존을 유의하게 증가시켰다. 사실, 이러한 병용의 효과는 마찬가지 용량으로 개별적으로 투여된 이들 제제에 비하여 상승적 효능 (즉, 부가적 효능보다 높음)을 보여주는데, 이는 IPM·Tris 단독으로의 용량이 낮아서, 비히클-처리된 대조용 동물과 비교하여, 거의 또는 전혀 개선을 제공하지 않는 경우에도 그렇다. 병용군에서 동물 체중은 치료 동안에 감소하였지만 (평균 동물 체중이 투여가 종결되는 22일째에 20%로 감소되었다), 이들은 투약이 종결되자 빨리 회복하였는데 (완전한 회복은 38일째에 관찰되었다), 이는 독성이 가역적임을 시사한다. 이 데이터는 단일 제제로서 또는 병용제로서 독소루비신 또는 IPM·Tris 중 하나에 반응하는 암의 치료에 IPM·Tris와 독소루비신의 병용 치료가 유용할 수 있음을 시사하며, 이러한 암에는 이로 제한되지는 않지만, 유방암, 난소암 및 육종이 포함된다.
실시예 10
생체내 통과로부터의 MX-1 사람 유방 종양의 절편 (각각 30 내지 40mg)을 누드 마우스의 유방 지방 패드에 피하 이식하고, 치료를 개시하기 전에 75 내지 198mg의 체중에 도달하게 두었다. IPM·Tris (54mg/kg) (실시예 1에서 기술한 바와 같이 제조할 수 있다) 및 도세탁셀 (10mg/kg)을 종양 이식 후 10일째를 시작으로, 각각 Q1Dx5 IP 및 Q6Dx3 IV로 투여하였다. 도 26에서 알 수 있는 바와 같이, 2개의 제제의 병용은 단일 제제로서 투여된 둘 중 어느 하나의 제제에 비해서도 증가된 항종양 효과를 입증하였다.
실시예 11
생체내 통과로부터의 MX-1 사람 유방 종양의 절편 (각각 30 내지 40mg)을 누드 마우스의 유방 지방 패드에 피하 이식하고, 치료를 개시하기 전에 75 내지 198mg의 체중에 도달하게 두었다. 도 27에서 알 수 있는 바와 같이, IP 투여된 IPM·Tris (36mg/kg) (실시예 1에서 기술한 바와 같이 제조할 수 있다)은 PO 투여된 IPM·Tris (81mg/kg)와 대략 동일한 정도로 종양 성장을 억제하는 것으로 확인되었다. 추가로, IPM·Tris의 경구 또는 전신 투여는 MX-1 이종이식 마우스의 생존에서 유사한 증가를 가져왔다. 도 28에서 알 수 있는 바와 같이, IP 집단의 중간 생존은 39일이었으며, PO 집단의 중간 생존은 37.5일이었으며, 비히클 대조군의 중간 생존은 30일이었다. 이들 PO 및 IP 용량의 등가의 항종양 활성은 경구 및 전신 투여되는 IPM·Tris의 PK로부터 예상되는 범위 내이다.
실시예 12
스크라그-돌리 래트에 IPM·Tris (실시예 1에서 기술한 바와 같이 제조할 수 있다)를 위관영양법 (PO) 또는 볼루스 IV 주사를 통하여 매일 1회 투여하였다. IPM·Tris를 20, 30 또는 40mg/kg의 용량으로 투여하였으며, PK 평가를 위한 혈액 샘플을 투약 전과, 투약 후 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 12 및 24시간째에 후완와동 (retro orbital sinus)으로부터 획득하였다. 집단당 3마리의 동물을 각각의 시점마다 샘플링하였다. 투약 전, 0.5, 1, 2 및 4시간에 대한 PK 결과가 도 29에 도시되어 있으며, 여기서 Tmax는 약 0.5시간인 것으로 나타났다. 종결 t1/2에 대한 추산은 0.25 내지 0.64시간 범위였다. 각각의 용량에 대하여, 경구 투여된 IPM·Tris의 절대 생물학적 동등성 (absolute bioequivalence)을 (AUC 후 (post) - PO 용량) / (AUC 후 - IV 용량)으로서 추산하기 위해 AUC 값을 사용하였다. 각각의 용량에 대한 AUC 값은 도 30에 도시되어 있으며, 각각의 용량에 대한 Cmax 값은 도 31에 도시되어 있다. AUC 및 Cmax 값 둘 모두는 PO- 또는 IV-투여 IPM·Tris의 용량의 증가에 따라 선형 증가하였다.
IPM·Tris의 20, 30 및 40mg/kg PO 용량의 생체이용가능성은 각각 48%, 65% 및 73%였다. 전체 평균 생체이용가능성은 암컷에서 62%였다. 유사한 PK가 래트에서 관찰되었지만; 수컷에서의 평균 생체이용가능성은 41%로 추산되었다.
실시예 13
IPM · Tris / 만니톨 및 IPM ·( LYS ) 2 의 용액 안정성
IPM·Tris 제형의 재구성 안정성은 주사용 5% 염화나트륨 용액 중에서 평가되었다. IPM의 농도는 최대 2.0시간 동안 90% 초과의 효능을 유지하는 것으로 확인되었다.
IPM·(LYS)2 제형은 주사용 0.9% 염화나트륨 중에서 평가되었다. IPM의 농도는 최대 1.0시간 동안 90% 초과의 효능을 유지하는 것으로 확인되었다.
IPM · Tris / 만니톨의 용액 안정성
표 1은 25mL의 주사용 5% 염화 나트륨 용액의 존재하에서의 IPM·Tris/만니톨에 대한 재구성 안정성 데이터를 나타낸다. 약 1시간, 1.5시간, 2.5시간, 3.5시간, 4.0시간 및 5.0시간의 표적 시간에 분취량을 수집하였다. IPM 효능에 대하여 샘플을 분석하였다.
Figure 112013029114454-pat00013
IPM ·( LYS ) 2 의 용액 안정성
표 2는 25mL의 주사용 0.9% 염화 나트륨 용액의 존재하에서의 IPM·(LYS)2에 대한 재구성 안정성 데이터를 나타낸다. 약 1시간, 2시간, 2.5시간, 3.5시간, 4.0시간 및 5.0시간의 표적 시간에서 분취량을 수집하였다. IPM·(LYS)2 효능에 대하여 샘플을 분석하였다.
Figure 112013029114454-pat00014
결론
IPM/트로메타민/만니톨 제형은 5% 염화나트륨 용액으로 수행되는 경우, 2.0시간 동안 90% 효능을 유지한다. IPM·(LYS)2 제형은 0.9% 염화나트륨의 존재하에 1.0시간 동안 90% 효능을 유지한다. 두 제형 사이의 재구성 안정성 (90% 초과의 효능)에 있어서의 차이는 1.0시간, 즉 2배이다. 안정성 시간에 있어서의 증가는 약물 제품의 제조 및 투여 과정에서 임상의를 보조할 수 있다.
실시예 14
IPM 의 용액 안정성
IPM 제형의 재구성 안정성은 하기 표 3 및 도 32에 나타나 있는 바와 같이, 3.5시간에 걸쳐 약 25℃에서 pH 7 완충액 중에서 평가되었다.
Figure 112013029114454-pat00015
IPM · Tris / 만니톨의 용액 안정성
표 4는 25mL의 주사용 5% 염화나트륨 용액의 존재하에서의 IPM·Tris/만니톨에 대한 재구성 안정성 데이터를 나타낸다. 1.5, 3.0 및 4.5시간의 표적 시간에서 분취량을 수집하였다.
Figure 112013029114454-pat00016
IPM ·( LYS ) 2 의 용액 안정성
표 5는 25mL의 주사용 0.9% 염화나트륨 용액의 존재하에서의 IPM·(LYS)2에 대한 재구성 안정성을 나타낸다. 1.5, 3.0 및 4.5시간의 표적 시간에서 분취량을 수집하였다.
Figure 112013029114454-pat00017
실시예 15
고체 IPM · Tris 의 안정성
Figure 112013029114454-pat00018

고체 IPM · Tris / 만니톨 동결건조물의 안정성
Figure 112013029114454-pat00019

고체 IPM ·( LYS ) 2 동결건조물의 안정성
Figure 112013029114454-pat00020

실시예 16
Figure 112013029114454-pat00021
등가물
당해 기술분야의 숙련자들은 일상 실험과 동일한 정도를 이용하여, 본 명세서에 기술된 화합물 및 이의 사용 방법에 대한 수많은 등가물을 인식하거나, 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 본 발명의 범위 내인 것으로 고려되며, 하기 청구의 범위에 포함된다.
상기 인용된 모든 참조문헌 및 간행물은 본 명세서에 참조로 포함된다.

Claims (22)

  1. 화학식 I의 화합물 및 만니톨을 포함하며, 식염수 용액 중에서 재구성될 경우, 실온에서 30분 이상 동안 90% 초과의 효능 (potency)을 유지하는, 동결건조물.
    화학식 I
    Figure 712015004922553-pat00022

    상기 화학식 I에서,
    A+는 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 (Tris)의 콘쥬게이트 산을 나타내고;
    X 및 Y는 각각 클로라이드를 나타낸다.
  2. 제1항에 있어서, 식염수 용액 중에서 재구성될 경우, 실온에서 160분 이상 동안 90% 초과의 효능을 유지하는, 동결건조물.
  3. 제1항에 있어서, 부형제를 추가로 포함하는, 동결건조물.
  4. 삭제
  5. 약제학적으로 허용되는 희석제, 부형제 및 제1항의 동결건조물을 포함하는, a) 급성 백혈병, 만성 백혈병, 진성 적혈구증가증, 림프종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종, 다발 골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 중쇄병, 골수형성이상 증후군, 털세포 백혈병, 척수형성 이상증, 육종 또는 암종, 윤활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근 육종, 횡문근 육종, 결장 암종, 림프구 악성 종양, 췌장암, 유방암, 폐암, 난소암, 전립선암, 간세포성 암종, 편평세포 암종, 기저세포 암종, 선암, 한선 암종, 피지선 암종, 유두 암종, 유두모양샘 암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 콩팥세포 암종, 간암, 담관 암종, 융모막 암종, 윌름 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 방광 암종 또는 중추신경계 (Central Nervous System; CNS) 종양과 같은 과증식성 장애, 또는 b) 사이클로포스파미드 (CPA) 내성 상태의 치료를 위한 경구 투여용 약제학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 실온에서 1개월 이상 동안 안정한, 동결건조물.
  7. 제6항에 있어서, 실온에서 2개월 이상 동안 안정한, 동결건조물.
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 제6항에 있어서, 화학식 I의 화합물의 순도가, 실온에서 1개월 후에 증기화 광 산란 검출 (evaporative light scattering detection)을 이용하여 고성능 액체 크로마토그래피 (High-performance liquid chromatography; HPLC)로 측정시, 초기 순도의 97% 이상인, 동결건조물.
  16. 제1항의 동결건조물과 병용하여 화학요법제를 투여함을 포함하는, 화학요법제의 효능을 개선시키는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 화학요법제가 미소관 결합제인, 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 화학요법제가 도세탁셀인, 방법.
  19. 제16항에 있어서, 상기 화학요법제가 DNA 및/또는 RNA 전사 억제제인, 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 화학요법제가 독소루비신인, 방법.
  21. 제5항에 있어서, 화학요법제를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
  22. 삭제
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