KR101582490B1 - 인플루엔자 바이러스의 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 바이러스 백신 - Google Patents
인플루엔자 바이러스의 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 바이러스 백신 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101582490B1 KR101582490B1 KR1020140044214A KR20140044214A KR101582490B1 KR 101582490 B1 KR101582490 B1 KR 101582490B1 KR 1020140044214 A KR1020140044214 A KR 1020140044214A KR 20140044214 A KR20140044214 A KR 20140044214A KR 101582490 B1 KR101582490 B1 KR 101582490B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- virus
- vaccine
- present
- recombinant
- influenza
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 101
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 72
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 title claims abstract description 57
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims abstract description 58
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims abstract description 58
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims abstract description 58
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims abstract description 58
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims abstract description 19
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 35
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 12
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 12
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 12
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 12
- 229940124873 Influenza virus vaccine Drugs 0.000 claims description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 10
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 abstract description 31
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 15
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 abstract description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 23
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 17
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 17
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 15
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 14
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 9
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 8
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 7
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710102873 Polymerase basic protein 2 Proteins 0.000 description 4
- 101710085035 RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit Proteins 0.000 description 4
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 3
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101150103639 PB1 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 2
- 101100028758 Influenza A virus (strain A/Swine/Wisconsin/1/1967 H1N1) PB1-F2 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 101150080862 NA gene Proteins 0.000 description 2
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 2
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- SUNMBRGCANLOEG-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichloroacetone Chemical compound ClCC(=O)CCl SUNMBRGCANLOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNBCLPGEMZEWLU-QXFUBDJGSA-N 2-chloro-n-[[(2r,3s,5r)-3-hydroxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl]acetamide Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CNC(=O)CCl)[C@@H](O)C1 SNBCLPGEMZEWLU-QXFUBDJGSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 101100268670 Caenorhabditis elegans acc-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000288673 Chiroptera Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 208000032163 Emerging Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- MQUQNUAYKLCRME-INIZCTEOSA-N N-tosyl-L-phenylalanyl chloromethyl ketone Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)N[C@H](C(=O)CCl)CC1=CC=CC=C1 MQUQNUAYKLCRME-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- 101150118742 NP gene Proteins 0.000 description 1
- 101150076514 NS gene Proteins 0.000 description 1
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 description 1
- 101150105115 PA gene Proteins 0.000 description 1
- 101150030427 PB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 241000725681 Swine influenza virus Species 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- 229940103272 aluminum potassium sulfate Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940000351 hemocyte Drugs 0.000 description 1
- 210000003677 hemocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J potassium aluminium sulfate Chemical compound [Al+3].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 201000009890 sinusitis Diseases 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229940126577 synthetic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
본 발명은 각기 다른 아형의 인플루엔자 바이러스에 대한 교차 면역반응에 효과가 있는 신규한 인플루엔자 바이러스, 이를 유효성분으로 함유하는 백신 및 상기 백신을 개체에 투여하여 인플루엔자 바이러스 감염 질환을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스는 각기 다른 두 가지 아형(subtype)에서 유래된 헤마글루티닌 HA1 영역과 HA2 영역을 융합하여 제조한 키메릭 헤마글루티닌 유전자를 포함함으로써 다양한 종류의 아형(subtype) 및 계통(clade)을 가진 바이러스에 대해 교차 면역반응 효과를 나타냄에 따라, 광범위한 중화 항체 효과를 가진 바이러스 백신의 용도로서 매우 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 각기 다른 아형의 인플루엔자 바이러스에 대한 교차 면역반응에 효과가 있는 신규한 인플루엔자 바이러스, 이를 유효성분으로 함유하는 백신 및 상기 백신을 개체에 투여하여 인플루엔자 바이러스 감염 질환을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다.
인플루엔자 바이러스는 직경이 약 125nm인 입자 크기를 갖는 RNA 외피 바이러스이다. 바이러스는 기본적으로 리피드 이중층 구조 및 외부 글리코단백질을 갖는 바이러스 외피에 의해 둘러쌓여진 내부 뉴클레오캡시드 또는 핵단백질과 결합된 리보핵산(RNA)의 코어로 이루어져 있다. 바이러스 외피의 내부층은 주로 매트릭스 단백질로 이루어지며, 외부층은 주로 숙주-유래 리피드 물질로 이루어진다.
인플루엔자 바이러스 게놈은 11개의 단백질 (HA, NA, NP, M1, M2, NS1, NEP, PA, PB1, PB1-F2, PB2)를 코드화시키는 8개의 단일 RNA 가닥 상에 함유된다. 게놈의 분절화 성질은 세포 공동서식 동안 상이한 바이러스 균주 사이에서 전체 유전자의 교환을 허용한다. 8개의 RNA 분절은 혈구응집소를 인코딩하는 HA; 뉴라미니다아제를 인코딩하는 NA; 핵단백질을 인코딩하는 NP; 동일한 RNA 분절로부터 상이한 해독 구조를 사용함으로써 2개의 매트릭스 단백질 (M1 및 M2)을 인코딩하는 M; 동일한 RNA 분절로부터 상이한 해독 구조를 사용함으로써 2개의 독특한 비구조 단백질 (NS1 및 NEP)을 인코딩하는 NS; RNA 폴리머라아제를 인코딩하는 PA; 동일한 RNA 분절로부터 상이한 해독 구조를 사용함으로써 RNA 폴리머라아제 및 PB1-F2 단백질 (아팝토시스를 유도함)을 인코딩하는 PB1; 및 RNA 폴리머라아제를 인코딩하는 PB2로 이루어져 있다.
이러한 인플루엔자 바이러스는 두 개의 표면 당단백질인, 헤마글루티닌(Hemagglutinin: HA) 및 뉴라미니다아제(Neuraminidase: NA)로 구성된 고도의 다형성 입자로서, 헤마글루티닌은 바이러스의 숙주 세포에의 부착과 바이러스의 세포 침투 동안 바이러스-세포막의 융합을 매개하며, 이러한 표면 단백질, 특히 헤마글루티닌은 인플루엔자 서브타입의 항원 특이성을 결정하는 것으로 알려져 있다.
인플루엔자 바이러스는 항원의 차이에 기초하여 A형, B형 및 C형으로 분류한다. 인플루엔자 A 바이러스는 서브타입 또는 타입, 지리적 기원, 균주 번호 및 단리 연도를 포함하는 명명법에 의하여, 예를 들면 A/베이징/353/89로 기술된다. 적어도 16개의 HA 서브타입(H1-H16)과 9개의 NA 서브타입(N1-N9)이 있다. 모든 서브타입은 조류에서 발견되나, H1-H3 및 N1-N2는 인간, 돼지 및 말에서 발견된다[참고 문헌 : Murphy and Webster, orthomyxoviruses, in Virology, ed. Fields, B.N., Knipe, D.M., Chanock,R.M., 1091-1152(Raven Press, New York, (1990)].최근 HA서브타입의 경우 H18, NA N11까지도 발견되었다는 보고가 있다[참고: Suxiang Tong et al,"New World Bats Harbor Diverse Influenza A Viruses" PLoS Pathogens,(October 2013)].
인플루엔자는 인수 공통 전염병으로서, 인플루엔자 바이러스는 변이성이 크며 한 종에서 다른 종으로 바로 전파될 수 있는 가능성을 가지고 있어, 고병원성 인플루엔자의 세계적인 전파를 해결하는 일이 큰 과제로 떠오르고 있다. 수의분야와 관련하여 인플루엔자 바이러스는 거의 모든 포유류에 감염을 일으키므로 숙주 범위가 넓은 질병에 속한다. 돼지, 닭과 같은 산업동물의 경우 단일 감염으로 소모성 질병 혹은 다른 바이러스 및 세균과 혼합 감염됨으로써 농가에 막대한 경제적 피해를 주기 때문에, 지속적인 생독 및 사독백신을 통한 주기적인 백신접종을 실시하고 있다.
본 발명자들은 다양한 아형을 가지고 있는 A형 인플루엔자를 보다 효과적으로 예방 및 치료할 수 있는 백신을 개발하기 위하여 노력하였으며, 그 결과 각기 다른 두 가지 아형(subtype)에서 유래된 헤마글루티닌 HA1 영역과 HA2 영역을 융합하여 제조한 키메릭 헤마글루티닌 유전자를 포함하는 재조합 인플루엔자 바이러스의 경우 H1N1 혈청형, H5N1혈청형 및 H5N2 혈청형을 가진 A형 인플루엔자 바이러스 모두에 대해 교차 면역반응을 효과적으로 형성하는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은, 각기 다른 두 가지 아형(subtype)의 키메릭 헤마글루티닌 유전자를 포함하는 재조합 인플루엔자 바이러스를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은, 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 바이러스 백신을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 조성물을 이용하여 인플루엔자 바이러스 감염 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 각기 다른 두 가지 아형(subtype)의 키메릭 헤마글루티닌 유전자를 포함하는 재조합 인플루엔자 바이러스(기탁번호: KCTC12567BP)를 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 키메릭 헤마글루티닌 유전자는 A/Korea/CJ01/09 (H1N1) 유래의 HA1 및 융합펩티드 유전자 영역과; A/EM/Korea/W150/06 (H5N1) 유래의 HA2 엑토도메인 유전자 영역이 융합된 형태일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 키메릭 헤마글루티닌 유전자는 서열번호 3으로 표시되는 폴리뉴클레오티드로 이루어질 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 바이러스는 헤마글루티닌 유전자 외에 6개 혹은 7개(NA 유전자도 바뀔 수 있다는 가정하에)의 다른 유전자는 A/Puerto Rico/08/34 (H1N1)로부터 유래될 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 A/Puerto Rico/08/34 (H1N1)로부터 유래된 6개 혹은 7개의 유전자는 서열번호 4 내지 서열번호 10의 폴리뉴클레오티드로 이루어질 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 바이러스를 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 백신을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 백신은 바이러스를 약독화된 생독 백신, 사독 백신 또는 서브유닛 백신(면역원성 단편)일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 바이러스는 H1N1 혈청형, H5N1혈청형 및 H5N2 혈청형을 가진 A형 인플루엔자 바이러스 모두에 대해 교차 면역반응을 형성할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 백신을 인간을 제외한 개체에 투여하여 인플루엔자 바이러스 감염 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스(기탁번호: KCTC12567BP)는 각기 다른 두 가지 아형(subtype)에서 유래된 헤마글루티닌 HA1 및 융합 펩타이드 영역과 HA2 영역을 융합하여 제조한 키메릭 헤마글루티닌 유전자를 포함함으로써 다양한 종류의 아형(subtype) 및 계통(clade)을 가진 바이러스에 대해 교차 면역반응 효과를 나타냄에 따라, 광범위한 중화 항체 효과를 가진 바이러스 백신의 용도로서 매우 유용하게 사용될 수 있다.
도 1A는 일반적인 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌 유전자 구조를 모식화하여 나타낸 것이며, 도 2B는 본 발명의 HA1/HA2 헤마글루티닌 유전자 구조를 모식화하여 나타낸 것이다.
도 2는 역유전학(Reverse Genetics) 시스템으로 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스를 제조하는 과정을 간략하게 나타낸 모식도이다.
도 3은 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 효능을 확인하기 위하여 실험동물인 마우스에 백신 스케쥴을 도식화하여 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음 동종 바이러스인 maCA04(H1N1);마우스 적응(mouse-adapted) CA04를 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 체중변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음 동종 바이러스인 maCA04(H1N1)를 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음 이종 바이러스인 고병원성 W150(H5N1)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 체중변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음 이종 바이러스인 고병원성 W150(H5N1)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음, 다른 계통(clade) 바이러스인 고병원성 VN1203(H5N1)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 체중변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 9는 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음, 다른 계통(clade) 바이러스인 고병원성 VN1203(H5N1)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 10은 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음, 이형 바이러스인 ma81(H5N2)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 체중변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 11은 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음, 이형 바이러스인 ma81(H5N2)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 역유전학(Reverse Genetics) 시스템으로 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스를 제조하는 과정을 간략하게 나타낸 모식도이다.
도 3은 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 효능을 확인하기 위하여 실험동물인 마우스에 백신 스케쥴을 도식화하여 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음 동종 바이러스인 maCA04(H1N1);마우스 적응(mouse-adapted) CA04를 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 체중변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음 동종 바이러스인 maCA04(H1N1)를 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음 이종 바이러스인 고병원성 W150(H5N1)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 체중변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음 이종 바이러스인 고병원성 W150(H5N1)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음, 다른 계통(clade) 바이러스인 고병원성 VN1203(H5N1)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 체중변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 9는 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음, 다른 계통(clade) 바이러스인 고병원성 VN1203(H5N1)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 10은 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음, 이형 바이러스인 ma81(H5N2)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 체중변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 11은 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 중화 항체에 대한 능력 검증을 위해, 재조합 인플루엔자 바이러스 백신을 마우스 1차 또는 2차 접종한 다음, 이형 바이러스인 ma81(H5N2)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
하나의 양태로서, 본 발명은 키메릭 헤마글루티닌 유전자를 포함하는 재조합 인플루엔자 바이러스(기탁번호: KCTC12567BP)에 관한 것이다.
"헤마글루티닌(hemagglutinin)"은 인플루엔자 바이러스의 표면 당단백질 중 하나로서 바이러스의 숙주 세포에의 부착과 바이러스의 세포 침투 동안 바이러스-세포막의 융합을 매개하며, 인플루엔자 서브타입의 항원 특이성을 결정하는 인플루엔자 바이러스의 표면 항원단백질이다.
본 발명에서 상기 키메릭 헤마글루티닌 유전자는 A/Korea/CJ01/09 (H1N1) 유래의 HA1 및 융합펩티드 유전자 영역과; A/EM/Korea/W150/06 (H5N1) 유래의 HA2 엑토도메인 유전자 영역이 융합된 형태이다.
본 발명의 상기 키메릭 헤마글루티닌 유전자는 서열번호 3의 폴리뉴클레오티드 서열 또는 서열번호 3의 뉴클레오타이드 서열과 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 98.5%, 적어도 99%, 적어도 99.2%, 적어도 99.4%, 적어도 99.6%, 적어도 99.8% 또는 적어도 99.9%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스는 상기 키메릭 헤마글루티닌 유전자 외의 6개 혹은 7개의 다른 유전자는 현재 인체백신의 백본(backbone) 바이러스로 이용되는 A/Puerto Rico/08/34 (H1N1)로부터 유래된 것을 이용할 수 있다.
자세하게는, A/Puerto Rico/08/34 (H1N1)로부터 유래된 7개의 유전자로서 NA(서열번호 4), M(서열번호 5), NP(서열번호 6), NS(서열번호 7), PA(서열번호 8), PB1(서열번호 9) 및 PB2(서열번호 10) 유전자를 이용할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 본 발명자들은 상기한 키메릭 헤마글루티닌 유전자와 이외 7개의 유전자를 A/Puerto Rico/08/34 (H1N1)로부터 제공받아 역유전학(Reverse Genetics) 시스템을 이용하여 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스를 제조하였으며, 이를 'cHA H1/H5N1'로 명명하였다. 또한, 본 바이러스를 2014년 3월 14일자로 한국생명공학연구원 미생물자원센터(KCTC)에 기탁하였으며, 기탁번호 KCTC12567BP를 부여받았다.
또 다른 양태로서, 본 발명은 감수성 숙주 동물을 감염시키고 질병을 일으킬 수 있는 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 백신에 관한 것이다. 바람직하게, 본 발명의 백신은 상기 cHA H1/H5N1 바이러스(기탁번호: KCTC12567BP)를 유효성분으로 포함할 수 있다.
본 발명의 백신이 면역 반응을 일으킬 수 있는 숙주 동물은 인간, 개, 고양이, 돼지, 말, 닭, 오리, 칠면조, 페럿 등을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 인간이다.
본 발명의 백신은 약독화된 생독 백신 또는 사독 백신, 서브유닛 백신(subunit vaccine), 합성 백신(synthetic vaccine) 또는 유전공학 백신(genetic engineering vaccine)일 수 있으나, 효과적인 면역 반응을 유도하는 생독 백신이 바람직하다.
본 발명에서 사용된 용어 "생독 백신"이란 살아있는 바이러스 활성성분을 포함하는 백신을 의미한다. 또한 용어 "약독화된(attenuation)"이란 살아있는 병원체의 독성을 인공적으로 약하게 한 것으로, 병원체의 필수 대사에 관여하는 유전자를 변이시켜 체내에서 질병을 일으키지 못하고 면역 체계만을 자극해서 면역성을 유도하는 것을 의미한다. 바이러스의 약독화는 자외선(UV) 조사, 약품처리 또는 시험관 내 고차 연속 계대배양에 의해 달성될 수 있다. 약독화는 또한 명확한 유전 변화를 만듦으로써, 예를 들어 독성을 제공하는 것으로 알려진 바이러스 서열의 특정 결실 또는 바이러스 게놈 내로의 서열의 삽입에 의해 달성될 수 있다.
용어 "사독 백신"이란 불활화 백신 또는 사균 백신이라고도 하며, 죽은 바이러스를 포함한 백신이다. 이의 예로는 전 바이러스 백신(whole-virus vaccine)과 분할 백신(split vaccine)이 있으며, 이들은 공지된 방법으로 용이하게 제조가능하다. 예컨대 전 바이러스 백신은 바이러스 전체에 포르말린을 처리하여 제조할 수 있으며, 분할 백신은 바이러스에 에테르를 처리하여 외피만을 분쇄, 수득하여 제조할 수 있다.
용어 "서브유닛 백신"은 바이러스의 구성성분 중 면역기능을 일으킬 수 있는 항원 성분만을 추출하여 제조한 백신으로, 바이러스 방어에 필요한 항원 부위에 대해서면 면역형성을 유도함으로써 부작용을 최소화할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 키메릭 헤마글루티닌(HA) 단백질을 추출하여 사용할 수 있다.
"유전공학 백신"은 바이러스의 병원성을 일으키는 특이 유전자를 변형하거나 제거한 것일 수 있다.
또한 본 발명의 백신으로 사용되는 바이러스 폴리펩티드(키메릭 헤마글루티닌) 또는 이의 단편들은 업계에 공지된 방법을 이용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 바이러스 폴리펩티드는 고체상 합성 방법을 이용하여 합성될 수 있으며, 재조합 DNA 기술을 이용하여 생성될 수도 있다.
본 발명의 백신은 나출된(naked) 핵산 조성물들도 포함할 수 있다. 본 발명의 일실시예에서, 핵산은 본 발명의 재조합 인플루엔자 바이러스의 키메릭 헤마글루티닌(HA) 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 핵산 백신접종 방법들은 업계에 공지되어 있는 방법을 통해 실시할 수 있다. 예를 들어, 미국등록특허 제6,063,385호 및 제6,472,375호에 설명되어 있다. 상기 핵산은 플라스미드 또는 유전자 발현 카세트(expression cassette)의 형태일 수 있다. 일실시예에서, 상기 핵산은 동물에 투여되는 리포좀에 둘러싸여진 채로 제공된다.
또한, 본 발명의 백신은 추가적으로 용매, 면역증강제(adjuvant) 및 부형제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 더 포함할 수 있다. 상기 용매로는 생리식염수 또는 증류수가 있으며, 면역증강제로는 프레운즈(Freund's) 불완전체 또는 완전체 어쥬번트, 알루미늄 하이드록사이드 겔과 식물성 및 광물성 오일 등이 있으며, 부형제로는 알루미늄 포스페이트, 알루미늄 하이드록사이드 또는 알루미늄 포타슘 설페이트가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 당해 분야의 통상의 지식을 가진 자가 기술자에게 잘 알려진 백신 제조에 사용되는 물질을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 백신은 키메릭 헤마글루티닌 유전자를 포함하는 재조합 인플루엔자 바이러스를 23~28 HAU(hemagglutination unit, 혈구응집 단위)로 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 다만, 백신의 혈구응집 단위가 23 HAU 미만인 경우, 투여 대상 개체에 효과적으로 항체형성을 유도하지 못할 수 있으며, 28 HAU을 초과하는 경우, 효율대비 비경제적일 수 있다.
본 발명의 백신은 경구형 또는 비경구형 제제로 제조할 수 있으며, 바람직하게는 비경구형 제제인 주사액제로 제조하며, 진피내, 근육내, 복막내, 비강 또는 경막외(eidural) 경로로 투여할 수 있다.
또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 백신을 인플루엔자 바이러스 감염이 의심되는 개체에 투여하여 인플루엔자 바이러스 감염 질환을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에서 용어 "인플루엔자 바이러스 감염 질환"이란 인플루엔자 바이러스의 감염으로 유발되는 질환으로서, 부비강염, 발작적 천식, 중이염, 낭성 섬유종, 기관지염, 폐렴, 설사 등을 예시할 수 있으나(Pitkaranta와 Hayden, 1998. Ann. Med.), 본 발명은 이들에 제한되지 않는다.
본 발명에서 용어, "개체"란 인플루엔자 바이러스에 이미 감염되었거나 감염될 수 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미한다. 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물을 개체에 투여함으로써, 상기 질환을 효율적으로 예방 및 치료할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물로 다양한 인플루엔자 바이러스 아형 또는 변이형의 인플루엔자 바이러스로 감염된 인간을 치료할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물로 다양한 인플루엔자 바이러스 아형 또는 변이형의 조류 인플루엔자로 감염된 닭 또는 돼지를 치료할 수 있다. 본 발명의 조성물은 기존의 인플루엔자 바이러스 감염 질환 치료제와 병행하여 투여할 수 있다.
본 발명에서 용어 "예방"이란 조성물의 투여에 의해 인플루엔자 바이러스 감염을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 본 발명에서 용어 "치료"란 조성물의 투여에 의해 인플루엔자 바이러스 감염에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 용어 "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체의 종류 및 중증도, 연령, 성별, 감염된 바이러스 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로, 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예들은 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<
실시예
1>
실험에 필요한 바이러스 준비
<1-1> A/
Korea
/
CJ01
/09 (
H1
/
N1
) 바이러스 분리
충북대학교 병원에 신종플루 증상으로 입원한 환자에서 채취한 비후두 분비물을 10% Penicillin-Streptomycin (Gibco)항생제가 포함된 세포배양 배지에 넣고 혼탁액을 제조한 다음 원심분리법을 이용하여, 비분비물을 제거한 후 상층액을 MDCK(Madin-Darby canine kidney) 세포에 감염시킨 다음 48시간 동안 CO2 세포배양기에서 배양하여 바이러스를 분리하였다. 분리된 바이러스는 RT-PCR과 유전자 분석을 통해 신종 인플루엔자 바이러스임을 확인하였다.
상기에서 분리한 국내, 사람 신종인플루엔자 바이러스를 “A/Korea/CJ01/09 (H1N1)”라 명명하였고, 이를 국제기탁기관인 한국생명공학연구소 미생물자원센터(Korean Collection for Type Cultures)에 2010년 4월 27일자로 기탁하였으며, 그로부터 기탁번호 KCTC 11690 BP를 부여받았다.
<1-2> A/
EM
/
Korea
/
W150
/06 (
H5N1
) 및 A/
Puerto
Rico
/08/34 (
H1N1
) 바이러스 준비
A/Puerto Rico/08/34 (H1N1) 바이러스는 Dr. Robert G. Webster, Division of Virology, Department of Infectious Diseases, St. Jude Children’s Research Hospital, Memphis, TN 38105로부터 수득하였으며, A/EM/Korea/W150/06 (H5N1)바이러스는 본 실험실에서 분리하였다. 본 바이러스는 2006년 분리된 고병원성 바이러스로 야생조류의 분변에서 채취하여 분리하였다. 10% Penicillin-Streptomycin (Gibco)항생제가 포함된 세포배양 배지에 넣고 혼탁액을 제조한 다음 원심분리법을 이용하여, 비분비물을 제거한 후 상층액을 MDCK(Madin-Darby canine kidney) 세포에 감염시킨 다음 48시간 동안 CO2 세포배양기에서 배양하여 바이러스를 분리하였다. 분리된 바이러스는 RT-PCR과 유전자 분석을 통해 고병원성 H5N1 바이러스 인 것을 확인하였다.[참고: Youn-Jeong Lee et al,"Highly Pathogenic Avian Influenza Virus (H5N1) in Domestic Poultry and Relationship with Migratory Birds, South Korea" Emerging infectious diseases,(March 2008)]
<
실시예
2>
본 발명의
키메릭
헤마글루티닌
유전자를 포함하는 재조합 바이러스 제조
본 발명자들은 A형 인플루엔자 바이러스의 각기 다른 아형(subtype) 및 각기 다른 그룹형(clade)의 인플루엔자에 대한 교차 면역반응(cross-protection) 효과를 가지는 범 중화 항체를 개발하기 위하여, 먼저 헤마글루티닌의 HA1(globular head domain)과 HA2(stalk region) 유전자간 영역을 각각 두 가지 아형(혈청형)으로부터 분리 융합하여 키메릭 헤마글루타닌 유전자를 제조하였으며, 이를 현재 인체백신의 백본 바이러스(A/Puerto Rico/08/34 (H1N1))에 포함시켜 재조합 바이러스를 제조하였다.
<2-1>
키메릭
헤마글루티닌
유전자 제조
먼저, 본 발명자들은 키메릭 헤마글루티닌 유전자를 제조하기 위하여, A/Korea/CJ01/09 (H1N1)의 HA1 및 fusion peptide 유전자 영역(서열번호 1)과; A/EM/Korea/W150/06 (H5N1)의 HA2 Ectodomain 유전자 영역(서열번호 2)을 융합하여 하나의 키메릭 H1/H5 헤마글루티민 유전자를 제조하였다.
A/Korea/CJ01/09 (H1N1)는 Bm HA 1F (5‘-TAT TCG TCT CAG GGA GCA AAA GCA GGG G- 3‘)와 HA1을 특정하게 인식하는 프라이머(5’-CAT TCC CTG CCA TCC CCC TTC AAT GAA ACC- 3‘)를 사용하여 A/Korea/CJ01/09 (H1N1)의 HA1 및 fusion peptide 유전자 영역(서열번호 1)을 만들고, HA2를 특정하게 인식하는 프라이머(5’-GGT TTC ATT GAA GGG GGA TGG CAG GGA ATG- 3‘)와 Bm NS 890R(5’-ATA TCG TCT CGT ATT AGT AGA AAC AAG GGT GTT TT- 3‘) A/EM/Korea/W150/06 (H5N1)의 HA2 Ectodomain 유전자 영역(서열번호 2)을 사용하여 각각의 유전자 단편을 만들고 PCR 과정을 통하여 융합, 증폭과정을 거쳐 본 발명의 키메릭 유전자(서열번호 3)를 제조하였다.
<2-2>
키메릭
헤마글루티닌
유전자를 포함하는 재조합 바이러스 제조
상기 실시예<2-1>에서 준비한 본 발명의 키메릭 헤마글루티닌 유전자(서열번호 3) 및 A/Puerto Rico/08/34의 NA(서열번호 4), M(서열번호 5), NP(서열번호 6), NS(서열번호 7), PA(서열번호 8), PB1(서열번호 9), PB2(서열번호 10) 유전자를 각각 발현벡터 vPHW2000(사용논문:J Gen Virol. 2013 Jun;94(Pt 6):1230-5. doi: 10.1099/vir.0.051284-0. Epub 2013 Mar 13.)에 삽입하여 준비하였다. 상기 서열번호 3~10의 유전자가 각각 삽입되어 있는 발현벡터들을 형질감염 시약 TransIT-LT1 transfection reagent (Mirus Bio)를 이용하여 함께 모두 혼합한 후 40분간 실온에 놓아두었다.
24시간 전에 준비해 둔 Vero 세포(ATCCCCL-81™)에 벡터 혼합액을 조심스럽게 넣은 다음 6시간 후에 배양액을 무혈청 배양액(GIBCO™ Opti-MEM I Reduced-Serum Medium (1X) liquid)으로 교체해 주었다. 형질감염 후 36시간이 지나면 0.2μg/ml의 L-1-tosylamido-2-phenylehtyl chlorometyl ketone(TPCK)-트립신(Sigma-Aldrich)를 함유하는 Opti-MEM I 1ml를 형질감염된 세포에 첨가해주고, 48시간이 지난 후부터 10일령 SPF 유정란을 이용하여 상층액을 접종하였으며, 48시간 후 상기 유정란에서 본 발명의 재조합 바이러스를 분리하였으며, 이렇게 분리된 재조합 바이러스는 ‘cHA H1/H5N1’라 명명하였으며, 불활성화하여 하기 실험에서 사용하였다.
상기 방법에 따라 제조한 본 발명의 재조합 바이러스는 2014년 3월 14일자로 한국생명공학연구원 미생물자원센터(KCTC)에 기탁하였으며, 기탁번호 KCTC12567BP를 부여받았다.
<
실시예
3>
본 발명의
키메릭
헤마글루티닌
유전자를 포함하는 재조합 바이러스의
마우
스 동물실험을 통한 항원성 평가
본 발명에서 개발된 재조합 백신 후보주 바이러스 cHA H1/H5N1의 항원성을 평가화하기 위하여, 실시예 2에서 제조한 재조합 바이러스(기탁번호: KCTC12567BP)를 10일령의 SPF 유정란에 10개씩 접종하고 48시간 후에 요수를 검출하여 0.5% 칠면조 RBC로 헤마글루티닌 테스트를 통해 역가를 확인하였다. 분리된 요수를 0.025% 농도로 포르말린을 처리하고 72시간 동안 4℃에서 보관한 후 완전히 불활화되어 증식 가능한 바이러스가 없는 것을 10일령 SPF 유정란에 접종하여 확인하였다.
20% 수크로오스 쿠션을 넣은 SW28 스윙로터 버켓(Beckman, USA)에 불활화된 바이러스 요수를 넣고 25,000rpm에서 3시간동안 침강시켜 바이러스만 순수하게 분리하였다. 분리된 바이러스는 단백질량을 측정한 후 헤마글루티닌 단백질의 농도가 1.7μg/1ml 및 3.5μg/1ml가 되도록 만들어 백신으로 이용하였다.
원하는 농도의 바이러스 용액을 4주령의 BALB/C 마우스에 헤마글루티닌 단백질의 함량(1.7μg/0.1ml, 3.5μg/0.1ml)에 따라 1차 근육접종 함으로써 항원성을 평가하였으며, 이후 2주가 경과한 시점에 동일한 방법으로 2차 접종을 실시하였다.
상기 1차 및 2차 접종 후 2주가 경과한 시점에 마우스의 혈청을 채취하여 중화항체에 대한 능력 검증을 실시하였으며, 백신 효과가 입증되는지 확인하기 위하여 동종 및 이종, 이형 바이러스에 감염시킨 후 몸무게 변화와 생존율을 측정하였다. 모든 실험에서는 대조군으로 A/Korea/CJ01/09 (H1N1) 바이러스만을 접종한 그룹과 PBS로 접종한 두 개의 그룹을 포함시켰다. 또한 감염 3, 5, 7일 후 마우스의 폐 조직을 채취하여 바이러스의 역가를 측정하였다. 본 실험에서 사용된 마우스는 각 그룹당(실험군 및 대조군의 마우스 사용량은 동일함) 폐조직 채취용 3마리씩(3, 5, 7일간 1일 3마리씩: 총 9마리의 마우스 사용)과 몸무게 변화 및 생존율에 5마리 사용하였다.
| 바이러스 약칭 | 바이러스 정식 명칭 및 구입처 |
| maCA04(H1N1) | A/California/04/09(H1N1);mouse-adaptation strain; (주)아이디 바이오, 충북대학교 |
| W150(H5N1) | A/EM/Korea/W150/06 (H5N1);(주)바이오리더스, (주)아이디 바이오, |
| VN1203(H5N1) | A/Viet Nam/1203/2004(H5N1);(주)바이오리더스, 국제 백신연구소 |
| ma81(H5N2) | A/aquatic bird/Korea/MA81/2007(H5N2);(주)바이오리더스, (주)아이디 바이오, 충북대학교 |
<3-1> 백신접종 후 동종 바이러스 감염에 따른 마우스의 몸무게 및 생존율 측정
본 발명의 키메릭 헤마글루티닌 유전자를 포함하는 재조합 바이러스 백신의 범 인플루엔자 중화 능력효력을 검증하기 알아보기 위하여, 상기 과정을 통해 제조된 본 발명의 재조합 바이러스 백신을 마우스에 접종한 다음 동종 바이러스인 maCA04(H1N1)를 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 체중변화 및 생존율을 측정하였다.
그 결과 도 4에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 재조합 바이러스로 1차 및 2차 백신 실시한 실험군에서 동종 바이러스에 대하여 감염 후 7일까지 약간의 체중변화는 발생하였으나, 14일이 경과한 시점에는 대부분의 마우스에서 몸무게가 회복되는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 도 5에서 나타낸 바와 같이, 생존율을 100%인 것을 모니터링할 수 있었다.
<3-2> 백신접종 후 이종 바이러스 감염에 따른 마우스의 몸무게 및 생존율 측정
본 발명의 키메릭 헤마글루티닌 유전자를 포함하는 재조합 바이러스 백신의 범 인플루엔자 중화 능력효력을 검증하기 알아보기 위하여, 상기 과정을 통해 제조된 본 발명의 재조합 바이러스 백신을 마우스에 접종한 다음 이종 바이러스인 고병원성 W150(H5N1)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 체중변화 및 생존율을 측정하였다.
그 결과 본 발명의 재조합 바이러스로 1차 백신 실시한 실험군에서 바이러스의 감염이 일어나면 2일째 경과 후부터 체중이 감소하기 시작하여 10일째 모두 죽는 것을 볼 수 있었으나(도 6A 참조), 2차 백신 실시 후에는 11일째 몸무게의 20% 가량이 감소하며, 14일이 경과한 시점에는 90%까지 회복되는 것을 확인할 수 있었다(도 6B 참조).
또한, 도 7에서 나타낸 바와 같이, 2차 백신 후 바이러스 감염 시에는 헤마글루타닌의 함량이 높은 백신에서의 생존율은 100%로 나타나는 반면, 헤마글루타닌 함량이 낮은 백신에서의 생존율이 50%로 낮은 것을 확인할 수 있었다.
<3-3> 백신접종 후 다른 계통(
clade
) 바이러스 감염에 따른 마우스의 몸무게 및 생존율 측정
본 발명의 키메릭 헤마글루티닌 유전자를 포함하는 재조합 바이러스 백신의 범 인플루엔자 중화 능력효력을 검증하기 알아보기 위하여, 상기 과정을 통해 제조된 본 발명의 재조합 바이러스 백신을 마우스에 접종한 다음, 다른 계통(clade) 바이러스인 고병원성 VN/1203(H5N1)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 체중변화 및 생존율을 측정하였다.
그 결과 도 8에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 재조합 바이러스로 1차 백신 실시한 실험군에서 1차 백신 후 바이러스 감염이 일어나고, 2일째부터 몸무게가 감소하기 시작하였으며, 12일이 경과 후에는 체중을 회복하는 것으로 나타났다.
또한, 도 9에서는 타나낸 바와 같이, 1차 백신을 실시한 실험군에서는 감염 후 12일이 경과한 시점에 마우스가 모두 죽었으나, 2차 백신을 실시한 실험군에서는 마우스가 100% 생존하는 것을 확인할 수 있었다.
<3-4> 백신접종 후 이형 바이러스 감염에 따른 마우스의 몸무게 및 생존율 측정
본 발명의 키메릭 헤마글루티닌 유전자를 포함하는 재조합 바이러스 백신의 범 인플루엔자 중화 능력효력을 검증하기 알아보기 위하여, 상기 과정을 통해 제조된 본 발명의 재조합 바이러스 백신을 마우스에 접종한 다음, 헤마글루티닌 및 뉴라미다아제 유전자가 모두 다른 이형 바이러스인 ma81(H5N2)을 100MLD50의 양으로 감염한 뒤 14일 동안 마우스의 체중변화 및 생존율을 측정하였다.
그 결과 1차 백신 후 대조군에서는 체중이 모두 감소하는 양상을 보였으며, 감염 7일째는 모두 사망하는 것으로 나타났다(도 10A 및 도 11A 참조). 반면에 본 발명의 재조합 바이러스로 1차 백신 실시한 실험군에서는 감염 7일째에 마우스가 100% 생존하는 것을 확인할 수 있었다(도 11A 참조).
또한, 2차 백신 후에는 대조군인 A/Korea/CJ01/09 (H1N1) 바이러스의 헤마글루티닌 함량이 높은 백신 그룹에서 급격한 체중변화가 나타났으나 8일째부터는 회복하는 것을 볼 수 있었으며, 생존율을 30% 가량으로 나타났다. 반면에, 본 발명의 재조합 바이러스로 2차 백신 실시한 실험군에서는 감염 후 시간경과에 따른 큰 체중변화 및 생존율의 변화가 나타나지 않아, 본 발명의 재조합 바이러스 백신이 효과가 탁월한 것을 확인할 수 있었다(도 10B 및 도 11B 참조).
<3-4> 백신접종 후 다양한 바이러스 감염에 따른 바이러스의
역가
측정
본 발명의 재조합 바이러스 백신을 마우스에 접종한 다음 maCA04(H1N1), W150(H5N1;clade 2.2), VN/1203(H5N1;clade 1) 및 ma81(H5N2) 바이러스 각각으로 마우스를 감염시킨 후 3, 5, 7일 후 마우스 폐조직을 채취하여 바이러스의 역가를 측정하였다. 마우스는 마취제를 이용하여 마우스 체중 ㎏당 30~40㎎으로 복강 마취를 실시한 후 비강 내 접종(intranasal inoculation)을 통하여 100MLD50 30ul를 감염시켰다. MLD50 는 마우스가 50% 치사할 수 있는 바이러스의 역가를 나타내며, 본 실험에서는 MLD50의 100배에 해당하는 양을 감염시켰다. 이에 따른 바이러스 역가를 측정하기 위하여 폐조직을 채취하기 위한 마우스는 바이러스 감염 후 3, 5, 7일 째에 대조군 및 실험군에서 3마리씩 폐 조직을 채취하였다.
측정된 바이러스 역가는 하기 표 2에서 나타내었다.
| challenge virus and HA content | A/Korea/CJ01/09 (H1N1) 백신 접종 | 본 발명의 재조합 바이러스 백신 접종 | ||||
| Days post infection | Days post infection | |||||
| 3일 | 5일 | 7일 | 3일 | 5일 | 7일 | |
| 1차 백신 그룹 | ||||||
| 1.7μg HA | ||||||
| maCA04 (H1N1) | 3.8 | 2.8 | 1.3 | 4.3 | 3.8 | 1.0 |
| W150 (H5N1) | 5.5 | 4.5 | 4.5 | 5.5 | 5.5 | 4.5 |
| VN1203 (H5N1) | 5.5 | 5.5 | 4.5 | 4.5 | 5.5 | 5.5 |
| ma81 (H5N2) | 8.5 | 4.5 | 4.5 | 6.5 | 4.5 | 2.5 |
| 3.5μg HA | ||||||
| maCA04 (H1N1) | 3.6 | 1.7 | 0.7 | 4.0 | 3.8 | 1.4 |
| W150 (H5N1) | 4.5 | 5.5 | 3.5 | 4.5 | 3.5 | 2.5 |
| VN1203 (H5N1) | 4.5 | 5.5 | 5.5 | 4.5 | 4.5 | 3.5 |
| ma81 (H5N2) | 5.5 | 4.5 | 1.5 | 4.5 | 4.5 | 0.7 |
| 2차 백신 그룹 | ||||||
| 1.7μg HA | ||||||
| maCA04 (H1N1) | 2.8 | 1.7 | 0.7 | 4.3 | 2.8 | 0.7 |
| W150 (H5N1) | 3.5 | 5.5 | 3.5 | 2.5 | 2.5 | 0.7 |
| VN1203 (H5N1) | 3.5 | 4.5 | 5.5 | 4.5 | 2.5 | 0.7 |
| ma81 (H5N2) | 3.5 | 6.5 | 5.5 | 5.5 | 5.5 | 0.7 |
| 3.5μg HA | ||||||
| maCA04 (H1N1) | 1.7 | 1.7 | 0.7 | 3.0 | 1.7 | 0.7 |
| W150 (H5N1) | 3.5 | 2.5 | 0.7 | 2.5 | 1.7 | 0.7 |
| VN1203 (H5N1) | 3.5 | 4.5 | 4.5 | 2.5 | 1.3 | 0.7 |
| ma81 (H5N2) | 4.3 | 2.8 | 1.7 | 2.5 | 2.5 | 0.7 |
| mock-vaccination group | Days post infection | ||
| 3일 | 5일 | 7일 | |
| maCA04 (H1N1) | 3.3 | 3.3 | 1.7 |
| W150 (H5N1) | 4.7 | 5.3 | 4 |
| VN1203 (H5N1) | 4.3 | 4.5 | 6.3 |
| ma81 (H5N2) | 5.5 | 7.5 | 4.5 |
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
<110> I.D.BIO.
<120> Novel virus vaccine to form cross-protection against multiple
subtypes of influenza viruses
<130> PN1312-424
<160> 10
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 1068
<212> DNA
<213> plynucelotide sequence of A/Korea/CJ01/09(H1N1) derived HA1 and fusion peptide gene region
<400> 1
atgaaggcaa tactagtagt tctgctatat acatttgcaa ccgcaaatgc agacacatta 60
tgtataggtt atcatgcaaa caattcaaca gacactgtag acacagtact agaaaagaat 120
gtaacagtaa cacactctgt taaccttcta gaagacaagc ataacgggaa actatgcaaa 180
ctaagagggg tagccccatt gcatttgggt aaatgtaaca ttgctggctg gatcctggga 240
aatccagagt gtgaatcact ctccacagca agctcatggt cctacattgt ggaaacatct 300
agttcagaca atggaacgtg ttacccagga gatttcatcg attatgagga gctaagagag 360
caattgagct cagtgtcatc atttgaaagg tttgagatat tccccaagac aagttcatgg 420
cccaatcatg actcgaacaa aggtgtaacg gcagcatgtc ctcatgctgg agcaaaaagc 480
ttctacaaaa atttaatatg gctagttaaa aaaggaaatt catacccaaa gctcagcaaa 540
tcctacatta atgataaagg gaaagaagtc ctcgtgctat ggggcattca ccatccatct 600
actagtgctg accaacaaag tctctatcag aatgcagatg catatgtttt tgtggggaca 660
tcaagataca gcaagaagtt caagccggaa atagcaataa gacccaaagt gagggatcaa 720
gaagggagaa tgaactatta ctggacacta gtagagccgg gagacaaaat aacattcgaa 780
gcaactggaa atctagtggt accgagatat gcattcgcaa tggaaagaaa tgctggatct 840
ggtattatca tttcagatac accagtccac gattgcaata caacttgtca gacacccaag 900
ggtgctataa acaccagcct cccatttcag aatatacatc cgatcacaat tggaaaatgt 960
ccaaaatatg taaaaagcac aaaattgaga ctggccacag gattgaggaa tgtcccgtct 1020
attcaatcta gaggcctatt tggggccatt gccggtttca ttgaaggg 1068
<210> 2
<211> 633
<212> DNA
<213> polynucletide sequence of A/EM/Korea/W150/06(H5N1) derived HA2 ectodomain gene region
<400> 2
ggatggcagg gaatggtaga tggttggtat ggataccacc atagcaacga gcaggggagt 60
gggtacgctg cagacaaaga atccactcaa aaggcaatag atggagtcac caataaagtc 120
aactcgatca ttgacaaaat gaacactcaa tttgaggccg ttggaaggga atttaataac 180
ttagaaagga gaatagagaa tttaaacaag aagatggaag acggatttct agatgtctgg 240
acttataatg ctgaacttct ggttctcatg gaaaatgaga gaactctaga ctttcatgac 300
tcaaatgtca agaaccttta cgacaaggtc cgactacagc ttagggataa tgcaaaggag 360
cttggtaacg gttgtttcga gttctatcac agatgtgata atgaatgtat ggaaagtgta 420
agaaacggaa cgtatgacta cccgcagtat tcagaagaat caagattaaa aagagaggaa 480
ataagtggag taaaattgga atcaatagga acttatcaaa tactgtcaat ttattcaaca 540
gtggcgagct ccctagcact ggcaatcatg gtggctggtc tatctttatg gatgtgttcc 600
aatggatcgt tacaatgcag aatttgcatt taa 633
<210> 3
<211> 1699
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Chimeric hemagglutinin gene polynucleotide sequence
<400> 3
atgaaggcaa tactagtagt tctgctatat acatttgcaa ccgcaaatgc agacacatta 60
tgtataggtt atcatgcaaa caattcaaca gacactgtag acacagtact agaaaagaat 120
gtaacagtaa cacactctgt taaccttcta gaagacaagc ataacgggaa actatgcaaa 180
ctaagagggg tagccccatt gcatttgggt aaatgtaaca ttgctggctg gatcctggga 240
aatccagagt gtgaatcact ctccacagca agctcatggt cctacattgt ggaaacatct 300
agttcagaca atggaacgtg ttacccagga gatttcatcg attatgagga gctaagagag 360
caattgagct cagtgtcatc atttgaaagg tttgagatat tccccaagac aagttcatgg 420
cccaatcatg actcgaacaa aggtgtaacg gcagcatgtc ctcatgctgg agcaaaaagc 480
ttctacaaaa atttaatatg gctagttaaa aaaggaaatt catacccaaa gctcagcaaa 540
tcctacatta atgataaagg gaaagaagtc ctcgtgctat ggggcattca ccatccatct 600
actagtgctg accaacaaag tctctatcag aatgcagatg catatgtttt tgtggggaca 660
tcaagataca gcaagaagtt caagccggaa atagcaataa gacccaaagt gagggatcaa 720
gaagggagaa tgaactatta ctggacacta gtagagccgg gagacaaaat aacattcgaa 780
gcaactggaa atctagtggt accgagatat gcattcgcaa tggaaagaaa tgctggatct 840
ggtattatca tttcagatac accagtccac gattgcaata caacttgtca gacacccaag 900
ggtgctataa acaccagcct cccatttcag aatatacatc cgatcacaat tggaaaatgt 960
ccaaaatatg taaaaagcac aaaattgaga ctggccacag gattgaggaa tgtcccgtct 1020
attcaatcta gaggcctatt tggggccatt gccggtttca ttgaaggggg atggcaggga 1080
atggtagatg gttggtatgg ataccaccat agcaacgagc aggggagtgg gtacgctgca 1140
gacaaagaat ccactcaaaa ggcaatagat ggagtcacca ataaagtcaa ctcgatcatt 1200
gacaaaatga acactcaatt tgaggccgtt ggaagggaat ttaataactt agaaaggaga 1260
atagagaatt taaacaagaa gatggaagac ggatttctag atgtctggac ttataatgct 1320
gaacttctgg ttctcatgga aaatgagaga actctagact ttcatgactc aaatgtcaaa 1380
cctttacgac aaggtccgac tacagcttag ggataatgca aaggagcttg gtaacggttg 1440
tttcgagttc tatcacagat gtgataatga atgtatggaa agtgtaagaa acggaacgta 1500
tgactacccg cagtattcag aagaatcaag attaaaaaga gaggaaataa gtggagtaaa 1560
attggaatca ataggaactt atcaaatact gtcaatttat tcaacagtgg cgagctccct 1620
agcactggca atcatggtgg ctggtctatc tttatggatg tgttccaatg gatcgttaca 1680
atgcagaatt tgcatttaa 1699
<210> 4
<211> 1373
<212> DNA
<213> polynucleotide sequence of A/Puerto Rico/08/34(H1N1) derived NA gene
<400> 4
atgaatccaa atcagaaaat aataaccatt ggatcaatct gtctggtagt cggactaatt 60
agcctaatat tgcaaatagg gaatataatc tcaatatgga ttagccattc aattcaaact 120
ggaagtcaaa accatactgg aatatgcaac caaaacatca ttacctataa aaatagcacc 180
tgggtaaagg acacaacttc agtgatatta accggcaatt catctctttg tcccatccgt 240
gggtgggcta tatacagcaa agacaatagc ataagaattg gttccaaagg agacgttttt 300
gtcataagag agccctttat ttcatgttct cacttggaat gcaggacctt ttttctgacc 360
caaggtgcct tactgaatga caagcattca agtgggactg ttaaggacag aagcccttat 420
agggccttaa tgagctgccc tgtcggtgaa gctccgtccc cgtacaattc aagatttgaa 480
tcggttgctt ggtcagcaag tgcatgtcat gatggcatgg gctggctaac aatcggaatt 540
tcaggtccag ataatggagc agtggctgta ttaaaataca acggcataat aactgaaacc 600
ataaaaagtt ggaggaagaa aatattgagg acacaagagt ctgaatgtgc ctgtgtaaat 660
ggttcatgtt ttactataat gactgatggc ccgagtgatg ggctggcctc gtacaaaatt 720
ttcaagatcg aaaaggggaa ggttactaaa tcaatagagt tgaatgcacc taattctcac 780
tatgaggaat gttcctgtta ccctgatacc ggcaaagtga tgtgtgtgtg cagagacaat 840
tggcatggtt cgaaccggcc atgggtgtct ttcgatcaaa acctggatta tcaaatagga 900
tacatctgca gtggggtttt cggtgacaac ccgcgtcccg aagatggaac aggcagctgt 960
ggtccagtgt atgttgatgg agcaaacgga gtaaagggat tttcatatag gtatggtaat 1020
ggtgtttgga taggaaggac caaaagtcac agttccagac atgggtttga gatgatttgg 1080
gatcctaatg gatggacaga gactgatagt aagttctctg tgaggcaaga tgttgtggca 1140
atgactgatt ggtcagggta tagcggaagt ttcgttcaac atcctgagct gacagggcta 1200
gactgtatga ggccgtgctt ctgggttgaa ttaatcaggg gacgacctaa ggagggaaca 1260
atctggacta gtgcgagcag catttctttt tgtggcgtga atagtgatac tgtagattgg 1320
tcttggccag acggtgctga gttgccattc agcattgaca agtagtctgt tca 1373
<210> 5
<211> 1000
<212> DNA
<213> polynucleotide sequence of A/Puerto Rico/08/34(H1N1) derived M gene
<400> 5
gtagatattg aaagatgagt cttctaaccg aggtcgaaac gtacgtactc tctatcatcc 60
cgtcaggccc cctcaaagcc gagatcgcac agagacttga agatgtcttt gcagggaaga 120
acaccgatct tgaggttctc atggaatggc taaagacaag accaatcctg tcacctctga 180
ctaaggggat tttaggattt gtgttcacgc tcaccgtgcc cagtgagcga ggactgcagc 240
gtagacgctt tgtccaaaat gcccttaatg ggaacgggga tccaaataac atggacaaag 300
cagttaaact gtataggaag ctcaagaggg agataacatt ccatggggcc aaagaaatct 360
cactcagtta ttctgctggt gcacttgcca gttgtatggg cctcatatac aacaggatgg 420
gggctgtgac cactgaagtg gcatttggcc tggtatgtgc aacctgtgaa cagattgctg 480
actcccagca tcggtctcat aggcaaatgg tgrcaacaac caatccacta atcagacatg 540
agaacagaat ggttttagcc agcactacag ctaaggctat ggagcaaatg gctggatcga 600
gtgagcaagc agcagaggcc atggaggttg ctattcgggc taggcaaatg gtgcaggcaa 660
tgagaaccat tgggactcat cctagctcca gtgctggtct gaaaaatgat cttcttgaaa 720
atttgcaggc ctatcagaaa cgaatggggg tgcagatgca acggttcaag tgatcctctc 780
attattgcct caartatcat tgggatcttg cacttgayat tgtggattct tgatcgtctt 840
tttttcaaat gcatttaccg tctctttaaa tacggtttga aaagagggcc ttctacggaa 900
ggagtgccaa agtctatgag ggaagaatat caaaaggaac agcagagtgc tgtggatgct 960
gacgatggtc attttgtcag catagagctg gagtaaaaaa 1000
<210> 6
<211> 1501
<212> DNA
<213> polynucleotide sequence of A/Puerto Rico/08/34(H1N1) derived NP gene
<400> 6
atggcgtccc aaggcaccaa acggtcttac gaacagatgg agactgatgg agaacgccag 60
aatgccactg aaatcagagc atccgtcgga aaaatgattg gtggaattgg acgattctac 120
atccaaatgt gcaccgaact caaactcagt gattatgagg gacggttgat ccaaaacagc 180
ttaacaatag agagaatggt gctctctgct tttgacgaaa ggagaaataa atacctggaa 240
gaacatccca gtgcggggaa agatcctaag aaaactggag gacctatata caggagagta 300
aacggaaagt ggatgagaga actcatcctt tatgacaaag aagaaataag gcgaatctgg 360
cgccaagcta ataatggtga cgatgcaacg gctggtctga ctcacatgat gatctggcat 420
tccaatttga atgatgcaac ttatcagagg acaagagctc ttgttcgcac cggaatggat 480
cccaggatgt gctctctgat gcaaggttca actctcccta ggaggtctgg agccgcaggt 540
gctgcagtca aaggagttgg aacaatggtg atggaattgg tcaggatgat caaacgtggg 600
atcaatgatc ggaacttctg gaggggtgag aatggacgaa aaacaagaat tgcttatgaa 660
agaatgtgca acattctcaa agggaaattt caaactgctg cacaaaaagc aatgatggat 720
caagtgagag agagccggaa cccagggaat gctgagttcg aagatctcac ttttctagca 780
cggtctgcac tcatattgag agggtcggtt gctcacaagt cctgcctgcc tgcctgtgtg 840
tatggacctg ccgtagccag tgggtacgac tttgaaagag agggatactc tctagtcgga 900
atagaccctt tcagactgct tcaaaacagc caagtgtaca gcctaatcag accaaatgag 960
aatccagcac acaagagtca actggtgtgg atggcatgcc attctgccgc atttgaagat 1020
ctaagagtat taagcttcat caaagggacg aaggtgctcc caagagggaa gctttccact 1080
agaggagttc aaattgcttc caatgaaaat atggagacta tggaatcaag tacacttgaa 1140
ctgagaagca ggtactgggc cataaggacc agaagtggag gaaacaccaa tcaacagagg 1200
gcatctgcgg gccaaatcag catacaacct acgttctcag tacagagaaa tctccctttt 1260
gacagaacaa ccattatggc agcattcaat gggaatacag agggaagaac atctgacatg 1320
aggaccgaaa tcataaggat gatggaaagt gcaagaccag aagatgtgtc tttccagggg 1380
cggggagtct tcgagctctc ggacgaaaag gcagcgagcc cgatcgtgcc ttcctttgac 1440
atgagtaatg aaggatctta tttcttcgga gacaatgcag aggagtacga caattaaaga 1500
a 1501
<210> 7
<211> 848
<212> DNA
<213> polynucleotide sequence of A/Puerto Rico/08/34(H1N1) derived NS gene
<400> 7
atggattcca acactgtgtc aagctttcag gtagattgct ttctttggca tgtccgcaaa 60
cgagttgcag accaagaact aggtgatgcc ccattccttg atcggcttcg ccgagatcag 120
aaatccctaa gaggaagggg cagcactctc ggtctggaca tcgagacagc cacacgtgct 180
ggaaagcaga tagtggagcg gattctgaaa gaagaatccg atgaggcact taaaatgacc 240
atggcctctg tacctgcgtc gcgttaccta actgacatga ctcttgagga aatgtcaagg 300
gactggtcca tgctcatacc caagcagaaa gtggcaggcc ctctttgtat cagaatggac 360
caggcgatca tggataagaa catcatactg aaagcgaact tcagtgtgat ttttgaccgg 420
ctggagactc taatattgct aagggctttc accgaagagg gagcaattgt tggcgaaatt 480
tcaccattgc cttctcttcc aggacatact gctgaggatg tcaaaaatgc agttggagtc 540
ctcatcggag gacttgaatg gaatgataac acagttcgag tctctgaaac tctacagaga 600
ttcgcttgga gaagcagtaa tgagaatggg agacctccac tcactccaaa acagaaacga 660
gaaatggcgg gaacaattag gtcagaagtt tgaagaaata agatggttga ttgaagaagt 720
gagacacaaa ctgaagataa cagagaatag ttttgagcaa ataacattta tgcaagcctt 780
acatctattg cttgaagtgg agcaagagat aagaactttc tcgtttcagc ttatttagta 840
ataaaaaa 848
<210> 8
<211> 2193
<212> DNA
<213> polynucleotide sequence of A/Puerto Rico/08/34(H1N1) derived PA gene
<400> 8
atggaagatt ttgtgcgaca atgcttcaat ccgatgattg tcgagcttgc ggaaaaaaca 60
atgaaagagt atggggagga cctgaaaatc gaaacaaaca aatttgcagc aatatgcact 120
cacttggaag tatgcttcat gtattcagat tttcacttca tcaatgagca aggcgagtca 180
ataatcgtag aacttggtga tccaaatgca cttttgaagc acagatttga aataatcgag 240
ggaagagatc gcacaatggc ctggacagta gtaaacagta tttgcaacac tacaggggct 300
gagaaaccaa agtttctacc agatttgtat gattataagg agaatagatt catcgaaatt 360
ggagtaacaa ggagagaagt tcacatatac tatctggaaa aggccaataa aattaaatct 420
gagaaaacac acatccacat tttctcgttc actggggaag aaatggccac aaaggcagac 480
tacactctcg atgaagaaag cagggctagg atcaaaacca gactattcac cataagacaa 540
gaaatggcca gcagaggcct ctgggattcc tttcgtcagt ccgagagagg agaagagaca 600
attgaagaaa ggtttgaaat cacaggaaca atgcgcaagc ttgccgacca aagtctcccg 660
ccgaacttct ccagccttga aaattttaga gcctatgtgg atggattcga accgaacggc 720
tacattgagg gcaagctgtc tcaaatgtcc aaagaagtaa atgctagaat tgaacctttt 780
ttgaaaacaa caccacgacc acttagactt ccgaatgggc ctccctgttc tcagcggtcc 840
aaattcctgc tgatggatgc cttaaaatta agcattgagg acccaagtca tgaaggagag 900
ggaataccgc tatatgatgc aatcaaatgc atgagaacat tctttggatg gaaggaaccc 960
aatgttgtta aaccacacga aaagggaata aatccaaatt atcttctgtc atggaagcaa 1020
gtactggcag aactgcagga cattgagaat gaggagaaaa ttccaaagac taaaaatatg 1080
aagaaaacaa gtcagctaaa gtgggcactt ggtgagaaca tggcaccaga aaaggtagac 1140
tttgacgact gtaaagatgt aggtgatttg aagcaatatg atagtgatga accagaattg 1200
aggtcgcttg caagttggat tcagaatgag tttaacaagg catgcgaact gacagattca 1260
agctggatag agctcgatga gattggagaa gatgtggctc caattgaaca cattgcaagc 1320
atgagaagga attatttcac atcagaggtg tctcactgca gagccacaga atacataatg 1380
aagggggtgt acatcaatac tgccttgctt aatgcatctt gtgcagcaat ggatgatttc 1440
caattaattc caatgataag caagtgtaga actaaggagg gaaggcgaaa gaccaacttg 1500
tatggtttca tcataaaagg aagatcccac ttaaggaatg acaccgacgt ggtaaacttt 1560
gtgagcatgg agttttctct cactgaccca agacttgaac cacataaatg ggagaagtac 1620
tgtgttcttg agataggaga tatgcttata agaagtgcca taggccaggt ttcaaggccc 1680
atgttcttgt atgtgagaac aaatggaacc tcaaaaatta aaatgaaatg gggaatggag 1740
atgaggcgtt gcctcctcca gtcacttcaa caaattgaga gtatgattga agctgagtcc 1800
tctgtcaaag agaaagacat gaccaaagag ttctttgaga acaaatcaga aacatggccc 1860
attggagagt cccccaaagg agtggaggaa agttccattg ggaaggtctg caggacttta 1920
ttagcaaagt cggtattcaa cagcttgtat gcatctccac aactagaagg attttcagct 1980
gaatcaagaa aactgcttct tatcgttcag gctcttaggg acaacctgga acctgggacc 2040
tttgatcttg gggggctata tgaagcaatt gaggagtgcc tgattaatga tccctgggtt 2100
ttgcttaatg cttcttggtt caactccttc cttacacatg cattgagtta gttgtggcag 2160
tgctactatt tgctatccat actgtccaaa aaa 2193
<210> 9
<211> 2300
<212> DNA
<213> polynucleotide sequence of A/Puerto Rico/08/34(H1N1) derived PB1 gene
<400> 9
atggatgtca atccgacctt acttttctta aaagtgccag cacaaaatgc tataagcaca 60
actttccctt atactggaga ccctccttac agccatggga caggaacagg atacaccatg 120
gatactgtca acaggacaca tcagtactca gaaaagggaa gatggacaac aaacaccgaa 180
actggagcac cgcaactcaa cccgattgat gggccactgc cagaagacaa tgaaccaagt 240
ggttatgccc aaacagattg tgtattggag gcgatggctt tccttgagga atcccatcct 300
ggtatttttg aaaactcgtg tattgaaacg atggaggttg ttcagcaaac acgagtagac 360
aagctgacac aaggccgaca gacctatgac tggactctaa atagaaacca acctgctgca 420
acagcattgg ccaacacaat agaagtgttc agatcaaatg gcctcacggc caatgagtct 480
ggaaggctca tagacttcct taaggatgta atggagtcaa tgaacaaaga agaaatgggg 540
atcacaactc attttcagag aaagagacgg gtgagagaca atatgactaa gaaaatgata 600
acacagagaa caatgggtaa aaagaagcag agattgaaca aaaggagtta tctaattaga 660
gcattgaccc tgaacacaat gaccaaagat gctgagagag ggaagctaaa acggagagca 720
attgcaaccc cagggatgca aataaggggg tttgtatact ttgttgagac actggcaagg 780
agtatatgtg agaaacttga acaatcaggg ttgccagttg gaggcaatga gaagaaagca 840
aagttggcaa atgttgtaag gaagatgatg accaattctc aggacaccga actttctttc 900
accatcactg gagataacac caaatggaac gaaaatcaga atcctcggat gtttttggcc 960
atgatcacat atatgaccag aaatcagccc gaatggttca gaaatgttct aagtattgct 1020
ccaataatgt tctcaaacaa aatggcgaga ctgggaaaag ggtatatgtt tgagagcaag 1080
agtatgaaac ttagaactca aatacctgca gaaatgctag caagcatcga tttgaaatat 1140
ttcaatgatt caacaagaaa gaagattgaa aaaatccgac cgctcttaat agaggggact 1200
gcatcattga gccctggaat gatgatgggc atgttcaata tgttaagcac tgtattaggc 1260
gtctccatcc tgaatcttgg acaaaagaga tacaccaaga ctacttactg gtgggatggt 1320
cttcaatcct ctgacgattt tgctctgatt gtgaatgcac ccaatcatga agggattcaa 1380
gccggagtcg acaggtttta tcgaacctgt aagctacttg gaatcaatat gagcaagaaa 1440
aagtcttaca taaacagaac aggtacattt gaattcacaa gttttttcta tcgttatggg 1500
tttgttgcca atttcagcat ggagcttccc agttttgggg tgtctgggat caacgagtca 1560
gcggacatga gtattggagt tactgtcatc aaaaacaata tgataaacaa tgatcttggt 1620
ccagcaacag ctcaaatggc ccttcagttg ttcatcaaag attacaggta cacgtaccga 1680
tgccatagag gtgacacaca aatacaaacc cgaagatcat ttgaaataaa gaaactgtgg 1740
gagcaaaccc gttccaaagc tggactgctg gtctccgacg gaggcccaaa tttatacaac 1800
attagaaatc tccacattcc tgaagtctgc ctaaaatggg aattgatgga tgaggattac 1860
caggggcgtt tatgcaaccc actgaaccca tttgtcagcc ataaagaaat tgaatcaatg 1920
aacaatgcag tgatgatgcc agcacatggt ccagccaaaa acatggagta tgatgctgtt 1980
gcaacaacac actcctggat ccccaaaaga aatcgatcca tcttgaatac aagtcaaaga 2040
ggagtacttg aggatgaaca aatgtaccaa aggtgctgca atttatttga aaaattcttc 2100
cccagcagtt catacagaag accagtcggg atatccagta tggtggaggc tatggtttcc 2160
agagcccgaa ttgatgcacg gattgatttc gaatctggaa ggataaagaa agaagagttc 2220
actgagatca tgaagatctg ttccaccatt gaagagctca gacggcaaaa atagtgaatt 2280
tagcttgtcc ttcatgaaaa 2300
<210> 10
<211> 2280
<212> DNA
<213> polynucleotide sequence of A/Puerto Rico/08/34(H1N1) derived PB2 gene
<400> 10
atggaaagaa taaaagaact acgaaatcta atgtcgcagt ctcgcacccg cgagatactc 60
acaaaaacca ccgtggacca tatggccata atcaagaagt acacatcagg aagacaggag 120
aagaacccag cacttaggat gaaatggatg atggcaatga aatatccaat tacagcagac 180
aagaggataa cggaaatgat tcctgagaga aatgagcaag gacaaacttt atggagtaaa 240
atgaatgatg ccggatcaga ccgagtgatg gtatcacctc tggctgtgac atggtggaat 300
aggaatggac caataacaaa tacagttcat tatccaaaaa tctacaaaac ttattttgaa 360
agagtcgaaa ggctaaagca tggaaccttt ggccctgtcc attttagaaa ccaagtcaaa 420
atacgtcgga gagttgacat aaatcctggt catgcagatc tcagtgccaa ggaggcacag 480
gatgtaatca tggaagttgt tttccctaac gaagtgggag ccaggatact aacatcggaa 540
tcgcaactaa cgataaccaa agagaagaaa gaagaactcc aggattgcaa aatttctcct 600
ttgatggttg catacatgtt ggagagagaa ctggtccgca aaacgagatt cctcccagtg 660
gctggtggaa caagcagtgt gtacattgaa gtgttgcatt tgactcaagg aacatgctgg 720
gaacagatgt atactccagg aggggaagtg aggaatgatg atgttgatca aagcttgatt 780
attgctgcta ggaacatagt gagaagagct gcagtatcag cagatccact agcatcttta 840
ttggagatgt gccacagcac acagattggt ggaattagga tggtagacat ccttaggcag 900
aacccaacag aagagcaagc cgtggatata tgcaaggctg caatgggact gagaattagc 960
tcatccttca gttttggtgg attcacattt aagagaacaa gcggatcatc agtcaagaga 1020
gaggaagagg tgcttacggg caatcttcaa acattgaaga taagagtgca tgagggatat 1080
gaagagttca caatggttgg gagaagagca acagccatac tcagaaaagc aaccaggaga 1140
ttgattcagc tgatagtgag tgggagagac gaacagtcga ttgccgaagc aataattgtg 1200
gccatggtat tttcacaaga ggattgtatg ataaaagcag tcagaggtga tctgaatttc 1260
gtcaataggg cgaatcaacg attgaatcct atgcatcaac ttttaagaca ttttcagaag 1320
gatgcgaaag tgctttttca aaattgggga gttgaaccta tcgacaatgt gatgggaatg 1380
attgggatat tgcccgacat gactccaagc atcgagatgt caatgagagg agtgagaatc 1440
agcaaaatgg gtgtagatga gtactccagc acggagaggg tagtggtgag cattgaccgt 1500
tttttgagaa tccgggacca acgaggaaat gtactactgt ctcccgagga ggtcagtgaa 1560
acacagggaa cagagaaact gacaataact tactcatcgt caatgatgtg ggagattaat 1620
ggtcctgaat cagtgttggt caatacctat caatggatca tcagaaactg ggaaactgtt 1680
aaaattcagt ggtcccagaa ccctacaatg ctatacaata aaatggaatt tgaaccattt 1740
cagtctttag tacctaaggc cattagaggc caatacagtg ggtttgtaag aactctgttc 1800
caacaaatga gggatgtgct tgggacattt gataccgcac agataataaa acttcttccc 1860
ttcgcagccg ctccaccaaa gcaaagtaga atgcagttct cctcatttac tgtgaatgtg 1920
aggggatcag gaatgagaat acttgtaagg ggcaattctc ctgtattcaa ctataacaag 1980
gccacgaaga gactcacagt tctcggaaag gatgctggca ctttaactga agacccagat 2040
gaaggcacag ctggagtgga gtccgctgtt ctgaggggat tcctcattct gggcaaagaa 2100
gacaagagat atgggccagc actaagcatc aatgaactga gcaaccttgc gaaaggagag 2160
aaggctaatg tgctaattgg gcaaggagac gtggtgttgg taatgaaacg gaaacgggac 2220
tctagcatac ttactgacag ccagacagcg accaaaagaa ttcggatggc catcaattag 2280
2280
Claims (9)
- 두 가지 아형(subtype)의 키메릭 헤마글루티닌 유전자를 포함하는 재조합 인플루엔자 바이러스(기탁번호: KCTC12567BP).
- 제1항에 있어서,
상기 키메릭 헤마글루티닌 유전자는 A/Korea/CJ01/09 (H1N1) 유래의 HA1 및 융합펩티드 유전자 영역과; A/EM/Korea/W150/06 (H5N1) 유래의 HA2 엑토도메인 유전자 영역이 융합된 형태인 것을 특징으로 하는 재조합 인플루엔자 바이러스. - 제1항에 있어서,
상기 키메릭 헤마글루티닌 유전자는 서열번호 3으로 표시되는 폴리뉴클레오티드로 이루어진 것을 특징으로 하는 재조합 인플루엔자 바이러스. - 제1항에 있어서,
상기 바이러스는 헤마글루티닌 유전자 외에 7개의 다른 유전자는 A/Puerto Rico/08/34 (H1N1)로부터 유래된 것을 특징으로 하는 재조합 인플루엔자 바이러스. - 제4항에 있어서,
상기 A/Puerto Rico/08/34 (H1N1)로부터 유래된 7개의 유전자는 서열번호 4 내지 서열번호 10 까지의 폴리뉴클레오티드로 이루어진 것을 특징으로 하는 재조합 인플루엔자 바이러스. - 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 바이러스를 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 백신.
- 제6항에 있어서,
상기 백신은 바이러스를 약독화시킨 생독 백신 또는 사독 백신인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 백신. - 제6항에 있어서,
상기 바이러스가 H1N1 혈청형, H5N1혈청형 및 H5N2 혈청형을 가진 A형 인플루엔자 바이러스 모두에 대해 교차 면역반응을 형성하는 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 백신. - 제6항의 백신을 인간을 제외한 개체에 투여하여 인플루엔자 바이러스 감염 질환을 예방 또는 치료하는 방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020140044214A KR101582490B1 (ko) | 2014-04-14 | 2014-04-14 | 인플루엔자 바이러스의 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 바이러스 백신 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020140044214A KR101582490B1 (ko) | 2014-04-14 | 2014-04-14 | 인플루엔자 바이러스의 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 바이러스 백신 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20150118400A KR20150118400A (ko) | 2015-10-22 |
| KR101582490B1 true KR101582490B1 (ko) | 2016-01-19 |
Family
ID=54426859
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020140044214A Active KR101582490B1 (ko) | 2014-04-14 | 2014-04-14 | 인플루엔자 바이러스의 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 바이러스 백신 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101582490B1 (ko) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102103638B1 (ko) * | 2018-06-01 | 2020-04-22 | 연세대학교 산학협력단 | 저온 적응된 약독화 바이러스를 이용한 유니버설 독감 백신 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013081463A2 (en) | 2011-12-02 | 2013-06-06 | Aimm Therapeutics B.V. | Influenza a virus specific antibodies |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CU23576A1 (es) | 2006-02-28 | 2010-09-30 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Antígenos vacunales quiméricos contra el virus de la influenza aviar |
| EP1925318A1 (en) * | 2006-11-20 | 2008-05-28 | Paul-Ehrlich-Institut | Recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA)-based vaccine for the avian flu |
| EP2072058A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-24 | Avir Green Hills Biotechnology Research Development Trade Ag | Modified influenza virus |
| KR101183251B1 (ko) * | 2010-05-31 | 2012-09-27 | 대한민국 | Ａ／Ｋｏｒｅａ／ＣＪ01／09 및 Ａ／ｓｗｉｎｅ／Ｋｏｒｅａ／ＣＡＮ01／04의 유전자를 포함하는 재조합 돼지 신종인플루엔자 Ａ 바이러스 및 이를 포함하는 돼지 인플루엔자 바이러스 백신 |
| KR101170113B1 (ko) * | 2010-05-31 | 2012-07-31 | 충북대학교 산학협력단 | Ａ／Ｋｏｒｅａ／ＣＪ01／09 및 Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／08／34의 유전자를 포함하는 재조합 돼지 신종인플루엔자 Ａ 바이러스 및 이를 포함하는 돼지 인플루엔자 바이러스 백신 |
-
2014
- 2014-04-14 KR KR1020140044214A patent/KR101582490B1/ko active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013081463A2 (en) | 2011-12-02 | 2013-06-06 | Aimm Therapeutics B.V. | Influenza a virus specific antibodies |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20150118400A (ko) | 2015-10-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Advances in development and application of influenza vaccines | |
| US11180737B2 (en) | Generation of infectious influenza viruses from virus-like particles | |
| JP2021036878A (ja) | ワクチン開発のための改善されたｂ型インフルエンザウイルス複製 | |
| Tabynov et al. | Novel influenza virus vectors expressing Brucella L7/L12 or Omp16 proteins in cattle induced a strong T-cell immune response, as well as high protectiveness against B. abortus infection | |
| JP2021536228A (ja) | ヘマグルチニン（ｈａ）タンパク質内の非ドミナントエピトープに対する免疫応答を誘起するためのベクター | |
| JP6875274B6 (ja) | ピチンデウイルスのリバースジェネティクス系及び使用方法 | |
| KR102027758B1 (ko) | 약독화된 돼지 인플루엔자 백신 및 이의 제조 방법 및 용도 | |
| JP2017529084A5 (ko) | ||
| AU2016308917A1 (en) | Live-attenuated vaccine having mutations in viral polymerase for the treatment and prevention of canine influenza virus | |
| KR101835989B1 (ko) | 인플루엔자 바이러스의 다중 아형 h3 및 h7 에 대한 다중 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 인플루엔자 바이러스 및 이를 포함하는 백신 | |
| Choi et al. | Development of a dual-protective live attenuated vaccine against H5N1 and H9N2 avian influenza viruses by modifying the NS1 gene | |
| US20230355740A1 (en) | Compositions and methods of use thereof for prevention and treatment of influenza infections | |
| KR101908905B1 (ko) | 인플루엔자 바이러스의 h9 및 h5의 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 인플루엔자 바이러스 및 이를 포함하는 백신 | |
| KR101582490B1 (ko) | 인플루엔자 바이러스의 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 바이러스 백신 | |
| US20090191158A1 (en) | Defective interfering virus | |
| KR101855006B1 (ko) | 생산능이 향상된 재조합 조류 인플루엔자 바이러스 및 이를 포함하는 백신 조성물 | |
| US10272149B2 (en) | Modified bat influenza viruses and their uses | |
| KR102370100B1 (ko) | 이종 인플루엔자 a 바이러스에 대한 면역/치료반응을 형성하는 신규한 재조합 인플루엔자 바이러스 및 이를 포함하는 유전자 전달체 및 치료백신 | |
| US12090199B2 (en) | H5N6 recombinant influenza virus, a composition for preparing the same, and a vaccine composition containing the same | |
| US11214799B2 (en) | HA-specific influenza virus attenuated vaccine comprising mutations in segment 7, and uses therefor | |
| US20230321215A1 (en) | Avian influenza vaccines and methods of making same | |
| KR101443983B1 (ko) | Mdck 세포 특이적으로 증식성이 향상된 다중 돌연변이 인플루엔자 a 바이러스 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| PA0109 | Patent application |
Patent event code: PA01091R01D Comment text: Patent Application Patent event date: 20140414 |
|
| PA0201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| PE0902 | Notice of grounds for rejection |
Comment text: Notification of reason for refusal Patent event date: 20150708 Patent event code: PE09021S01D |
|
| PG1501 | Laying open of application | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| PE0701 | Decision of registration |
Patent event code: PE07011S01D Comment text: Decision to Grant Registration Patent event date: 20151222 |
|
| GRNT | Written decision to grant | ||
| PR0701 | Registration of establishment |
Comment text: Registration of Establishment Patent event date: 20151229 Patent event code: PR07011E01D |
|
| PR1002 | Payment of registration fee |
Payment date: 20151230 End annual number: 3 Start annual number: 1 |
|
| PG1601 | Publication of registration | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190910 Year of fee payment: 5 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20190910 Start annual number: 5 End annual number: 5 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20211228 Start annual number: 7 End annual number: 7 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20240103 Start annual number: 9 End annual number: 9 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20241224 Start annual number: 10 End annual number: 10 |