KR101425331B1

KR101425331B1 - 펩티드를 함유하는 항비듬 조성물

Info

Publication number: KR101425331B1
Application number: KR1020137017050A
Authority: KR
Inventors: 부르크하르트 리브만; 하이케 브뤼저; 하이코 바르크; 다니엘 휘메리히; 후베르투스 페터 벨
Original assignee: 바스프 에스이
Priority date: 2007-12-21
Filing date: 2008-12-19
Publication date: 2014-08-01
Anticipated expiration: 2028-12-19
Also published as: KR101417202B1; US20100310644A1; CA2708554A1; RU2010129845A; US8765688B2; WO2009080306A8; RU2491052C2; BRPI0821553A2; JP5688293B2; CA2708554C; JP2011508728A; CN101903011A; KR20130083484A; EP2224901A1; CN101903011B; WO2009080306A1; KR20100101155A

Abstract

본 발명은 특히 헤어 및 피부 화장품에서 사용될 수 있는 조성물에서의 특정 펩티드의 용도, 및 상기 펩티드-함유 조성물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 신체 또는 환경에 축적되지 않는 비듬의 억제 또는 치료용 활성 성분으로서의 상기 펩티드의 용도에 관한 것이다. 추가로, 본 발명은 이러한 조성물의 제조, 사용되는 펩티드 그 자체, 그의 제조 및 상기 펩티드에 대한 뉴클레오티드 서열의 코딩, 상기 펩티드에 대한 분배 시스템, 및 적합한 추가 펩티드를 동정하기 위한 스크리닝 방법에 관한 것이다.

Description

펩티드를 함유하는 항비듬 조성물 {ANTI-DANDRUFF COMPOSITIONS CONTAINING PEPTIDES}

본 발명은 헤어 및 피부 화장품에서 특히 사용될 수 있는 조성물에서의 특정 펩티드의 용도, 및 상기 펩티드-함유 조성물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 신체 또는 환경에 축적되지 않는, 비듬의 억제 또는 치료용 활성 성분인 상기 펩티드의 보존제 또는 예방제로서의 용도에 관한 것이다. 추가로, 본 발명은 이러한 조성물의 제조, 사용되는 펩티드 그 자체, 그의 제조, 및 상기 펩티드에 대한 코딩 뉴클레오티드 서열, 상기 펩티드에 대한 분배 시스템 및 적합한 다른 펩티드를 동정하기 위한 스크리닝 방법에 관한 것이다.

화장품 분야에서, 미생물의 활성은 원치않는 변화, 예컨대 체취, 비듬 형성을 유발할 수 있거나 또는 염증 및 반점이 초래될 수 있다. 선행 문헌에는 제제, 예를 들어 화장품 또는 의약에서의 항미생물성 및/또는 항진균성 물질의 용도가 개시되어 있다. 그러나, 활성 성분에 저항적인 세균 또는 진균 균주의 진화로 인해 새로운 항미생물성 및/또는 항진균성 조성물의 개발이 끊임없이 필요하다. 특히 흥미로운 것은, 인간 건강에 부정적 효과를 나타내지 않고 유해한 세균에 대해 우수한 활성 범위를 나타내는 신규한 항미생물성 및 항진균성 화합물 각각의 개발이다.

다양한 항미생물성 펩티드는 문헌에 이미 기재되어 있고, 개관에 요약되어 있다 (문헌 [Hancock, R.E.W. and Lehrer, R. 1998 in Trends in Biotechnology, 16: 82-88]; [Hancock, R.E.W. and Sahl, H.G. 2006 in Nature Biotechnology, 24: 1551-1557]).

2개의 효과적인 펩티드를 조합시킨 융합 펩티드 역시 문헌에 기재되어 있다. 웨이드(Wade) 등은 히알로포라 세크로피아(Hyalophora cecropia)로부터의 세크로핀 A 및 벌독 멜리틴의 다양한 융합물의 항균 효과에 대해 보고하였다 (문헌 [Wade, D. et al., 1992, International Journal of Peptide and Protein Research, 40: 429-436]). 신(Shin) 등은 20개 아미노산으로 구성된, 히알로포라 세크로피아로부터의 세크로핀 A 및 크세노푸스 라에비스(Xenopus laevis)로부터의 마가이닌 2의 융합 펩티드의 항균 효과를 기재하였다. 세크로핀 A는 37개 아미노산으로 구성되고, 그램-음성 세균에 대해 활성을 나타내지만, 그램-양성 세균에 대한 활성은 보다 낮다. 마가이닌 2는 23개 아미노산으로 구성되고, 세균뿐만 아니라 종양 세포주에 대해서도 활성적이다. 세크로핀 A 및 멜리틴의 융합과 비교하여, 이 융합물은 필적하는 항균 효과에 대해 상당히 낮은 용혈능을 나타낸다 (문헌 [Shin, S.Y. Kang, J.H., Lee, M.K., Kim, S.Y., Kim, Y., Hahm, K.S., 1998, Biochemistry and Molecular Biology International, 44: 1119-1126]).

US 2003/0096745 A1 및 US 6,800,727 B2는 20개 아미노산으로 구성된 상기 융합 펩티드, 및 아미노산, 특히 양으로 하전된 아미노산 및 소수성 아미노산의 교환의 결과로서 보다 양으로 하전되고 보다 소수성인 상기 융합물의 변이체를 청구한다.

상기 세크로핀-A-마가이닌-2 융합 펩티드의 추가 개발은 신 등에 의해 1999년에 기재되었다. 여기서, 구조물 P18 (HT2, 서열 3)은 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) 및 바실루스 수브틸리스(Bacillus subtilis)에 대한 항균 활성이 손상되지는 않았지만 출발 융합물에 비해 낮은 용혈능을 갖는 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Shin et al. 1999 Journal of Peptide Research, 53: 82-90]).

추가로, 신 등은 2001년에 다른 표적 세균, 예컨대 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 또는 프로테우스 불가리스(Proteus vulgaris)에의 항균 활성에 대해 구조물 P18 및 유사 구조물의 활성을 연구하였다 (문헌 [Shin et al., 2001, Journal of Peptide Research, 58: 504-514]).

진균에 대한 P18의 효능에 대한 첫번째 실험은 신 등에 의해 2002년 1월에 공개되었다. 여기서, 마가이닌 2와 비교하여 칸디다 알비칸스(Candida albicans)에 대한 펩티드 P18의 우수한 효능이 확립되었다 (문헌 [Shin et al., 2002, Biochemical and Biophysical Research Communications, 290: 558-562]).

칸디다 알비칸스 이외에, 아스코마이세테스(Ascomycetes) 아스페르길루스 플라부스(Aspergillus flavus), 푸사리움 옥시스포룸(Fusarium oxysporum) 및 바시디오마이세테스(Basidiomycete) 트리코스포론 베이겔리이(Trichosporon beigelii)가 P18 및 상기 펩티드의 변이체로 억제된다. 그러나, 가장 효과적인 억제는 P18로 달성된다 (문헌 [Lee et al., 2004, Biotechnology Letters, 26: 337-341]). 그러나, 친지질성 진균, 특히 말라세지아(Malassezia) 속의 억제는 교시되어 있지 않다. 또한, 공지된 상업적 항진균성 물질과 비교하여, 세크로핀-마가이닌 융합물의 보다 효과적인 영향을 입증하는 실험은 기재되어 있지 않다.

말라세지아 속은 인간 피부 상의 정상 정주 세균총(resident flora)에 부분적으로 속한 친지질성 진균이다. 다수의 대표적인 것은 필수적으로 친지질성이며, 말라세지아 파키데르마티스(M. pachydermatis)만이 임의로 친지질성인 것으로서 기재된다. 그럼에도 불구하고, 말라세지아 종과 관련된 장애가 기재된다. 이들로는 전풍, 아토피 피부염, 두부 비강진, 지루 및 피티로스포룸 모낭염 또는 말라세지아 모낭염 (말라세지아 종이 병원체임)이 포함된다 (문헌 [Cutsem et al., 1990, Journal of the American Academy of Dermatology, 22: 993-998], [Nenoff et al., 2007, Aktuelle Dermatologie, 33: 26-32]). 치료를 위해서는, 항곰팡이성 살진균제가 일반적으로 사용된다. 이의 예는 케토코나졸, 클림바졸, 아연 피리티온, 피록톤 올라민, 황화셀레늄 또는 몇몇 천연 추출물 (예를 들어, 쥬니퍼 오일, 로즈마리 오일)이며, 이들은 종종 예를 들어 항비듬 샴푸 제제에서 한 자리수의 ％ (w/w) 범위로 첨가된다.

그러나, 비듬의 억제, 치료 또는 예방에 대해 기재된 물질들 중 몇몇은 독물학적으로 허용되지 않거나, 또는 화장 제제로는 충분히 효과적이지 않다 (Kosmetische Medizin 5+6/2006).

말라세지아 푸르푸르(Malassezia furfur) 종은 다른 말라세지아 종과 비교하여 다수의 항진균제에 대해 덜 민감하다 (문헌 [Nenoff et al., 2007, Aktuelle Dermatologie, 33: 26-32]). 또한, 낮은 농도로도 칸디다 알비칸스의 성장을 상당히 억제하는 물질은 높은 농도에서라도 말라세지아 푸르푸르의 성장을 단지 예방하기만 한다고 기재되어 있다. 따라서, 네노프(Nenoff) 등은 약 152-269 μg/ml 농도에서 피토스핑고신에 의한 칸디다 알비칸스의 억제를 기재한 반면, 말라세지아 푸르푸르의 억제는 염기성 피토스핑고신의 경우 대략 25배 더 높은 농도 (6250 μg/ml)에서만 일어나거나 또는 말라세지아 푸르푸르는 피토스핑고신 염에 대해 저항적인 것처럼 보인다 (문헌 [Nenoff et al., 2002, Acta Derm Venerol, 82:170-173]).

유사한 관찰이 한슨(Hanson) 등에 의해 1989년에 펩티드 실로푼진(cilofungin)에 대해 이루어졌다. 칸디다 알비칸스 균주의 76％가 0.62 μg/ml의 실로푼진 농도에서 성장하지 못한 반면, 필수적으로 친지질성인 말라세지아 푸르푸르는 상기 농도에서는 억제되지 않는다. 말라세지아 푸르푸르에 대한 실로푼진의 최소 억제 농도는 제시되지 않았다. 이는 0.31 μg/ml 내지 40 μg/ml의 연구된 범위 내에 명백히 있지 않다 (문헌 [Hanson et al., 1989, Antimicrobial agents and chemotherapy, 33:1391-1392]).

2006년에, 로페즈-가르시아(Lopez-Garcia) 등은 세크로핀 P1 및 마가이닌 2로의 말라세지아 푸르푸르의 성장 억제를 기재하였다. 여기서, 25 μM의 농도에서 세크로핀 P1의 중간 정도의 항진균 효과 및 마가이닌 2의 비교할 수 있을 만큼 우수한 효과가 발견되었다 (문헌 [Lopez-Garcia et al., 2006, Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 57:877-882]).

EP-A-0 866 804에는 화장 또는 제약 제제에서 활성 성분으로서의, 인간 피부로부터의 베타-디펜신의 용도가 기재되어 있다. 그러나, 선행 문헌의 항진균 활성 성분과의 내부 비교는 제공되지 않았다.

WO-A-00/032220에는 비듬 치료용 항진균 활성 성분으로서의 진균 폴리펩티드의 용도가 기재되어 있다. 그러나, 여기서도 역시 선행 문헌의 항진균 활성 성분과의 내부 비교는 제공되지 않았다.

US 2003/0096745에는 특정 미생물에 대해 항균 및 항진균 활성을 갖는 서열 KWKKLLKKPPPLLKKLLKKL의 폴리펩티드가 기재되어 있다. 항진균 활성은 칸디다 알비칸스 및 트리코스포론 베이겔리이에 대해 입증되었다. 그러나, 특히 비듬의 치료를 위한 화장 용도는 제안되지 않았다.

그러나, 항미생물성 물질의 사용, 특히 정기적인 사용은 인간에서 내성, 또는 심지어는 건강의 손상을 일으킬 수 있다. 내성은 피부 발적, 자극 또는 민감화일 수 있다. 인체로의 전신적 흡수는 신체 기능의 장애를 유발할 수 있다. 특히, 일부 항미생물성 물질의 정기적인 사용은 그의 농도의 증가를 야기할 수 있다. 공지된 하나의 예는 파라벤이다 (문헌 [Dabre et al., 2004, Journal of Applied Toxicology, 24: 5-13]). 따라서, 적용에 따라, 인체 또는 환경에 축적될 수 있다.

또한, 항미생물성 물질의 과도하고 부적절한 사용은 표적 유기체의 저항성을 몇번이고 야기한다.

따라서, 우선적으로 항진균 효과를 가지고, 비듬을 막거나 치료하기에 적합한 신규한 항미생물성 화장 조성물을 제공할 필요가 있다. 특히, 이들은 자연 환경에서 분해될 수 있기 때문에, 신체 내에 축적되지 않아도 된다.

특히, 지금까지 공지된 통상적인 비듬방지제보다 비듬에 대해 더 효과적이고, 구체적으로는 비듬 진균 말라세지아 푸르푸르 및 기타 말라세지아 종에 대해 효과적인 항진균 활성 성분을 제공할 필요가 있다. 바람직하게는, 천연 피부 세균총은 손상되지 않아야 하고, 활성 성분은 또한 신체 또는 환경에 축적되지 않아야 하며, 자연 환경에서 분해될 것이다.

따라서, 본 발명의 목적은 비듬, 특히 두피 비듬을 막고/거나 억제하고/거나 치료하기 위한 신규한 효과적 및 생물분해성 활성 성분을 제공하는 것이다. 유리하게는, 활성 성분 화합물은 화장 및/또는 피부화장 제형 또는 제제를 제조하는데 적합한 것으로 확인된 것이다. 추가로, 활성 성분의 전신 흡수는 피해야 한다. 또한, 제제는 세포독성이 낮거나 또는 없도록 보장되어야 한다. 특히, 활성 성분은 효모 진균 말라세지아 푸르푸르, 및 또한 기타 말라세지아 종, 특히 필수적으로 친지질성인 종에 대해 효과적이어야 한다.

발명의 요약

상기 목적은 첨부된 특허청구 범위의 정의에 따른 화장 조성물에 의해 달성된다.

놀랍게도, 청구된 구조 또는 구조 모티프를 갖는 하나 이상의 펩티드를 포함하는 조성물이 우수한 피부 적합성과 함께, 친지질성 진균 종, 특히 말라세지아 푸르푸르에 대해 적절한 효과를 갖는 것으로 밝혀졌다. 추가로, 생물분해성은 통상적인 항비듬 활성 성분, 예컨대 아연 피리티온과 비교하여 보다 빠르게 진행하는 것으로 발견되었다. 추가로, 놀랍게도, 효과는 펩티드 세크로핀 A 또는 마가이닌 II 단독으로 달성되는 효과보다 우수한 것으로 밝혀졌다.

발명의 상세한 설명

1. 일반적 정의

"헬릭스 브레이커(helix breaker)"는 본 발명에 따른 펩티드 내 절편을 의미하며, 이는 펩티드 쇄의 상기 절편의 영역에서 나선형 제2 구조의 형성을 억제한다. 그러나, 헬릭스 브레이커로부터 멀리 떨어진 헬릭스 구조의 형성은 억제되지 않는다. 전형적인 헬릭스 브레이커는 당업자에게 공지되어 있다. 특히, 아미노산 프롤린은 헬릭스 브레이커의 특성을 갖는 펩티드 빌딩 블록이다. 프롤린-함유 펩티드 단편에 대해서도 마찬가지이다.

본 발명의 맥락에서, "소수성 아미노산"은 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌 및 트립토판이다.

본 발명의 맥락에서, "친수성 아미노산"은 구체적으로, 극성 측쇄를 갖는 아미노산, 예컨대 세린, 트레오닌, 시스테인, 티로신, 아스파라긴 및 글루타민; 산성 아미노산, 예컨대 아스파르트산 및 글루탐산; 및 특히 염기성 아미노산, 예컨대 리신, 아르기닌 및 히스티딘이다.

"알파-헬릭스 팔을 형성할 수 있는"은 적합한 조건 하에서 나선형 구조의 형성을 촉진시키는 서열이다. 헬릭스 구조의 형성에 대한 인공적인 적합한 조건은, 예를 들어 알파-헬릭스 형성을 촉진시키는 트리플루오로아세트산 기재의 용매 시스템, 및 또한 SDS이다.

"알파-헬리시티 백분율"은 원편광 이색성 (CD) 분석법의 도움으로 측정된 측정값을 의미하는 것으로 이해되며, 여기서, 측정될 샘플은 1 mm의 경로 길이를 갖는 측정 셀을 사용하여 표준 조건 하에서, 예컨대, 특히, 10 mM 인산나트륨 완충액 (pH 7.0) 중 50％ (v/v) 트리플루오로아세트산 또는 10 mM 인산나트륨 완충액 (pH 7.0) 중 30 mM SDS 및 100 μg/ml의 펩티드 농도에서 수득된다. 계산은 하기 식에 따라 행해졌다:

％ 헬리시티 = 100 ([Θ] - [Θ]⁰)/[Θ]¹⁰⁰

식 중,

[Θ]은 222 nm에서 실험적으로 측정된 타원율(ellipticity)이고;

[Θ]⁰은 222 nm 및 0％ 헬리시티에서의 타원율이고;

[Θ]¹⁰⁰은 222 nm 및 100％ 헬리시티에서의 타원율이다.

적합한 측정 조건은 예를 들어, 거명에 의해 참고로 명백히 제공된 문헌 [Shin et al., 1999, Journal of Peptide Research, 53:82-90]에 기재되어 있다.

"반복 서열 모티프"는 직접적으로 또는 간접적으로, 즉, 본원에 정의된 "링커(linker) 기"를 통해 서로 연결된, 바람직하게는 동일한 펩티드 서열의 선형 배열을 의미하는 것으로 이해된다.

용어 "돌연변이체" 및 "변이체"는 동의어로 사용된다. 이는 여전히 요망되는 활성을 나타내고 이에 따라 항비듬 펩티드로서의 적용가능성을 나타내는, 하기에서 보다 상세하게 기재되는 특히 "기능적" 또는 "기능적 등가" 변형체를 의미하는 것으로 이해된다.

용어 "화장", "피부화장" 또는 "피부과학"은 역시 동의어로 사용된다.

"융합 생성물"은 펩티드 및 단백질의 공유 또는 비공유 결합 ("융합 펩티드") 및 펩티드 및 중합체의 공유 또는 비공유 결합 ("융합 중합체")을 의미하는 것으로 이해된다. 연결되는 구성성분은 비가역적으로 또는 가역적으로, 즉, 생물학적으로, 특히 효소적으로 절단가능하게 서로 결합된다.

2. 바람직한 실시양태

본 발명은 첫째로, 하기 화학식 I의 하나 이상의 서열 모티프를 포함하는 펩티드를 화장용 담체 중에 포함하는 화장 조성물을 제공한다:

<화학식 I>

식 중,

"HB"는 1개 내지 5개, 특히 1개, 2개 또는 3개의 연속 아미노산 잔기를 포함하고, 헬릭스 브레이커의 기능을 갖는 부분 서열 모티프이고,

"Hel1" 및 "Hel2"는 본질적으로 친수성 잔기 및 프롤린을 제외한 소수성, 특히 염기성 잔기로부터 선택되는 5개 내지 15개, 예컨대 6개 내지 12개, 특히 8개, 9개 또는 10개의 연속 아미노산 잔기를 각각 포함하고, 각각의 경우 알파-헬릭스 팔을 형성할 수 있는, 동일하거나 상이한 부분 서열 모티프이고, 여기서, 상기 헬릭스 팔 중 적어도 하나는 그의 축 투영(axial projection)에서, 즉, "나선형 휠" 다이아그램에 상응하는 평면도에서 소수성, 특히 염기성, 및 친수성 헬릭스 반쪽으로의 불완전한 분리를 갖는다. 여기서, 예를 들어 1, 2, 3 또는 4-위치의 반쪽 유형 (소수성 또는 친수성)은 다른 유형 (각각 친수성 또는 소수성)의 아미노산 잔기가 차지할 수 있다.

대조적으로, 완전히 분리된 소수성 및 친수성 헬릭스 반쪽은 오로지 상기 정의에 따른 소수성 또는 친수성 아미노산 잔기로만 구성될 것이다. 언급된 완전히 친수적으로/소수적으로 분리된 헬릭스의 한 예는 서열 모티프 KLKKLLKK이다.

"헬릭스 반쪽"은 본원에서 반드시 숫자상 절반, 즉, 헬릭스의 아미노산의 총 개수의 1/2을 의미하지는 않는 것으로 이해된다. 두 반쪽의 숫자상 크기는 예를 들어 1개 내지 3개 아미노산만큼 차이날 수 있다.

본 발명은 둘째로, 하기 화학식 I의 하나 이상의 서열 모티프를 포함하는 펩티드를 화장용 담체 중에 포함하며, 상기 펩티드가 50％ (v/v) 트리플루오로아세트산, pH 7.0에서 약 25 내지 98％, 예컨대 30 내지 80％ 또는 30 내지 60％의 알파-헬리시티 백분율 (％ 헬리시티); 또는 30 mM SDS, pH 7.0에서 약 10 내지 70％ 또는 12 내지 55％ 또는 12 내지 40％의 ％ 헬리시티 값 (각각의 경우 CD 분광법에 의해 측정됨)을 갖는 화장 조성물을 제공한다:

<화학식 I>

식 중,

"Hel1" 및 "Hel2"는 본질적으로 친수성 잔기 및 프롤린을 제외한 소수성, 특히 염기성 잔기로부터 선택되는 5개 내지 15개, 예컨대 6개 내지 12개, 특히 8개, 9개 또는 10개의 연속 아미노산 잔기를 각각 포함하고, 각각의 경우 알파-헬릭스 팔을 형성할 수 있는, 동일하거나 상이한 부분 서열 모티프이다.

본 발명은 셋째로, 하기 서열 1에 따른 서열 또는 동일하거나 상이할 수 있는 반복 서열 모티프를 갖는 하나 이상의 펩티드 및/또는 그의 돌연변이체 또는 유도체를 화장용 담체 중에 포함하는 화장 조성물을 제공한다:

식 중,

X₁₀은 펩티드 결합이거나, 또는 1개 또는 2개의 임의의 염기성 또는 소수성 아미노산 잔기 또는 1개 또는 2개의 프롤린 잔기이고,

X₁ 내지 X₉는 프롤린을 제외한, 임의의 염기성 아미노산 잔기 또는 소수성 아미노산 잔기이다.

특히, 본 발명은 하기 서열 2에 따른 서열 또는 동일하거나 상이한 반복 서열 모티프를 갖는 하나 이상의 펩티드 및/또는 그의 돌연변이체 또는 유도체를 포함하는, 상기 정의에 따른 조성물을 제공한다:

식 중,

X₁은 리신, 아르기닌 또는 페닐알라닌이고,

X₂는 리신 또는 트립토판이고,

X₃은 류신 또는 리신이고,

X₄는 페닐알라닌 또는 류신이고,

X₅는 류신 또는 리신이고,

X₆은 류신 또는 리신이고,

X₇은 히스티딘 또는 리신이고,

X₈은 알라닌, 류신, 발린 또는 세린이고,

X₉는 류신 또는 리신이고,

X₁₁은 프롤린 또는 화학 결합이고,

X₁₂는 프롤린 또는 화학 결합이다.

상기 서열 또는 서열 3에 따른 반복 서열 모티프 및/또는 그의 돌연변이체 또는 유도체의 비제한적 예는 하기와 같다:

P18 KWKLFKKIPKFLHLAKKF-NH₂ (서열 3)

RP18 RWKLFKKIPKFLHLAKKF (서열 4)

KKFP18 FKKLFKKIPKFLHAAKKF (서열 5)

KKLP18 KWKLLKKIPKFKKLALKF (서열 6)

AP18 KWKLFKKIPKFLHAAKKF (서열 7)

KFLP18 KWKKFLKIPKFLHAAKKF (서열 8)

KLLP18 KWKKLLKIPKFLHAAKKF (서열 9)

본 발명에 따른 조성물은 특히, 복수개, 예컨대 특히 2개 내지 10개 또는 3개 내지 5개의 화학식 I의 펩티드, 또는 서열 1 내지 9에 따른 펩티드 또는 그의 돌연변이체 또는 유도체가 링커 기를 통해 펩티드에 의해 서로 연결된, 반복 서열 모티프를 갖는 펩티드를 포함할 수 있다.

여기서, "링커 기"는 바람직하게는 알라닌, 글리신, 트레오닌 및 세린으로부터 선택되는, 예를 들어 GGSGGT, GGSGGS, 또는 폴리-알라닌 링커 및 폴리-글리신 링커 (여기서, "폴리"는 2개 내지 10개임); 또는 Asp, Pro, Asn 및 Gly로부터 선택되는, 예를 들어 Asp-Pro 및 Asn-Gly의 연속적인 동일하거나 상이한 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.

추가로, C-말단 카르복실기가 아미드화된 펩티드가 사용될 수 있다.

본 발명은 또한, 적절한 경우, 하나 이상의 화장용, 바람직하게는 펩티드성 보조제 또는 활성 성분 및 상기 정의에 따른 하나 이상의 펩티드의 절단가능한 융합 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 제공한다. 이러한 활성 성분의 예는 히드로포빈, 케라틴 결합 도메인, 알부민, 락토페린, 아비딘, 항체, 바람직하게는 케라틴-결합 항체, 표면에 대한 결합 펩티드, 바람직하게는 케라틴-결합 펩티드, 실크 단백질, 스파이더 실크 단백질, 바람직하게는 C16, 콜라겐, 피브로넥틴, 케라틴, 엘라스틴, 다른 구조적 단백질, 바람직하게는 헤어 및 피부 구조 단백질, 피부 및 헤어 구조 단백질에 대한 결합 단백질, 에나멜-빌딩 단백질, 아멜로게닌, 에나멜-빌딩 단백질의 결합 단백질, 아멜로게닌의 결합 단백질이며, 이러한 융합물은 영구적일 수 있거나 또는 절단가능하다.

본 발명은 또한 하나 이상의 화장용 중합체 및 상기 정의에 따른 하나 이상의 펩티드의 융합 중합체를 제공한다. 이러한 중합체의 예는 폴리히드록시알카노에이트, 히알루론산, 글루칸, 스페로글루칸, 셀룰로스, 크산탄, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리글리세롤, 폴리리신 및 실리콘이며, 이는 공유 또는 비공유 결합으로서 존재한다.

추가로, 상기 언급된 펩티드는 또한 화장/제약 활성 성분, 예컨대 판테놀, 비사볼롤, 레티놀, 카로테노이드, 단백질 가수분해물에의 공유 결합으로서 조성물 중에 제공될 수 있는 것으로 여겨질 수 있다.

본 발명은 또한, 하나 이상의 다른 화장 또는 제약 활성 성분, 예를 들어, 하나 이상의 항염증 활성 성분, 원치않는 미생물, 예컨대 특히 말라세지아 푸르푸르의 성장 및/또는 병리생리학적 활성을 억제하는 항미생물 활성 성분 및/또는 피지-조절 활성 성분을 추가로 포함하는, 상기 정의에 따른 조성물을 제공한다.

항염증 활성 성분의 예는 코르티코이드 (예를 들어, 코르티손), 아자티오프린, 비사볼롤, 시클로스포린 A, 아세틸살리실산, 이부프로펜, 판테놀, 카모마일 추출물 또는 알로에 추출물 등이다.

항미생물제의 예는 당업자에게 공지된 통상적 보존제, 예컨대 알콜, p-히드록시벤조산 에스테르, 이미다졸리닐우레아, 포름알데히드, 소르브산, 벤조산, 살리실산 등이다. 이러한 탈취 물질은 예를 들어, 아연 리시놀레에이트, 트리클로산, 운데실렌산 알킬올아미드, 트리에틸 시트레이트, 클로르헥시딘 등이다 (또한 하기 섹션 3.5 참조). 이들은 또한 아졸 (케토코나졸, 클림바졸), 아연 피리티온, 황화셀레늄 등을 포함한다.

피지-조절 활성 성분의 예는 아젤라산, 세바스산, 칼륨알레자오일디글리시네이트, 10-히드록시데칸산, 1,10-데칸디올, 알루미늄 염, 유사 알루미늄클로로히드레이트 등이다.

펩티드는 본 발명에 따른 조성물 중에, 각각의 경우 최종 조성물의 총 중량을 기준으로 0.0001 내지 50 중량％, 특히 0.001 내지 10 중량％, 특히 0.005 내지 0.1 중량％의 분획으로 존재한다.

본 발명의 추가 측면은 표준 조건 하에서 측정되는 경우, 말라세지아 푸르푸르에 대해 약 1500 내지 0.1 μM, 예를 들어 500 내지 1 μM, 100 내지 5 μM 또는 50 내지 10 μM의 최소 억제 농도를 나타내는, 상기 정의된 바와 같은 하나 이상의 펩티드를 함유하는 조성물에 관한 것이다. 상기 문맥에서 표준 조건은 600 nm에서 0.1의 초기 광학 밀도를 나타내고, 말라세지아 푸르푸르 배양 배지 중에 상기 최소 농도로 함유된 상기 펩티드와 함께 24시간 인큐베이션시킨 후에 배양 배지 μl 당 1 미만의 상기 미생물의 집락-형성 단위 (CFU)를 함유하는 말라세지아 푸르푸르 배양물에 관한 것이다.

본 발명은 추가로, 비듬, 특히 두피 비듬의 치료 또는 예방에 대한 화장 조성물을 제조하기 위한, 임의로 하나 이상의 추가의 통상적, 예를 들어 저분자량 항진균제, 예를 들어 케토코나졸, 클림바졸, 아연피리티온 또는 셀레노술파이드와 조합된, 상기 정의에 따른 펩티드 또는 상기 정의에 따른 융합 폴리펩티드의 용도를 제공하며, 여기서, 펩티드는 구체적으로 친지질성 진균, 특히 말라세지아 푸르푸르 및 말라세지아 속의 다른 종의 성장 및/또는 병리생리학적 활성을 억제하거나, 또는 펩티드가 보존제로서 존재하는 화장 조성물을 제조하는데 사용된다.

이와 관련하여, 다양한 천연 피부 미생물은 비듬의 치료 동안에 그의 성장 및/또는 활성이 본질적으로 억제되지 않거나 또는 약간만 억제된다.

본 발명은 추가로 상기 정의에 따른 펩티드를 하나 이상의 통상적 화장용 보조제, 및 적절한 경우, 추가의 화장 또는 제약 활성 성분과 함께 제제화하여 목적하는 투여 형태를 제공하는, 상기 정의에 따른 화장 조성물의 제조 방법을 제공한다.

본 발명은 추가로 상기 정의에 따른 펩티드, 및 또한 상기 펩티드를 코딩하는 핵산, 및 또한 엄격 조건 하에서 상기 코딩 핵산과 혼성화시킨 상보적 핵산을 제공한다.

추가로, 본 발명은 상기 정의에 따른 상보적 핵산을 프로브로서 사용하여, 핵산-함유 샘플을 엄격 조건 하에서 프로브를 사용하여 혼성화 서열에 대해 스크리닝하는, 항비듬 펩티드에 대한 스크리닝 방법에 관한 것이다.

마지막으로, 본 발명은 펩티드, 및 적절한 경우 존재하는 추가 성분이 예를 들어, 그 안에 (용해, 현탁, 분산된 상태로) 제공되는 리포솜, 제올라이트, 시클로덱스트린, 폴리에틸렌이민-기재 벡터 시스템과 결합된, 상기 정의에 따른 펩티드를 방출시키기 위한 분배 시스템을 제공한다.

P18 (서열 3)은 히알로포라 세크로피아로부터의 세크로핀 A의 단편 및 크세노푸스 라에비스로부터의 마가이닌으로부터의 융합 펩티드로부터 유래된, 18개 아미노산의 쇄 길이를 갖는 펩티드이다. 살진균 활성은 실험에서 칸디다 알비칸스, 트리코스포론 베이겔리이, 아스페르길루스 플라부스 및 푸사리움 옥시스포룸에 대해 발견되었다 (문헌 [Lee et al., (2004) Biotechnology Letters, 26:337-341]). 그러나, 당업자는 다른 미생물에 대한 살진균성 물질의 효과는 매우 상이할 수 있음을 인지한다. 특히, 친지질성 진균 말라세지아 푸르푸르 및 말라세지아 속의 친지질성 종에 대한 효과는 예를 들어 칸디다 알비칸스에 대한 효과와 상당히 다를 수 있다 (문헌 [Hanson et al., (1989) Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 33:1391-1392]; [Nenhoff et al., (2002) Acta Derm Venereol., 82:170-173]). 따라서, 본 발명에 따라 관찰된 P18 및 본원에 기재된 종의 구조적으로 및 기능적으로 관련된 펩티드의 효과는 당업자에게는 충분히 놀랄 만한 일이다.

추가의 특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 펩티드의 제2 구조는 헬릭스-브레이킹 아미노산에 의해 중간에서 2개의 헬릭스로 분할된 나선형이다. "나선형 휠"로서의 기재에서, 소수성 아미노산, 특히 류신 잔기는 한쪽 면 (또는 헬릭스의 반쪽)에서 우세하고, 양으로 하전된 아미노산, 특히 리신 잔기는 다른쪽 면에서 우세하다.

본 발명에 따른 펩티드는 특히 D- 및/또는 L-아미노산, 특히 L-아미노산으로 구성된다.

본원에 기재된 펩티드 및/또는 그의 유도체는 그 자체로 공지된 방식으로, 예컨대 화학적 고상 합성, 액체 합성을 통하거나 또는 재조합 생성물 균주 또는 세포 배양물을 사용하여 생명공학적으로 제조할 수 있다.

3. 본 발명의 추가 실시양태

3.1 추가의 적합한 서열 모티프의 예

3.1.3 서열 모티프 HEL1-HB-HEL2

추가의 비제한적 예로서 하기가 언급될 수 있다:

또한, 본 발명은 C-말단이 아미드화되지 않고, 그 결과, 서열이 카르복시기 (그의 염의 형태로 또는 유리 산으로서)에 의해 종결된 상기 서열을 포함한다.

3.1.4 서열 3의 변형

이 변형에서, 서열 3에 따른 펩티드는 그의 N-말단 및/또는 C-말단 상의 임의의 특정 아미노산 잔기에 의해 연장된다. 부가적 잔기의 비제한적 예로는 Asp, Pro, Asn 및 Gly가 포함된다. N- 및 C-말단이 동시에 연장되는 경우, 부가적 N-말단 잔기는 바람직하게는 Pro 또는 Gly이고, 상응하는 C-말단 잔기는 각각 Asp 및 Asn이다.

추가의 비제한적 예로서 하기가 언급될 수 있다:

또한, C-말단이 아미드화되지 않고, 그 결과, 서열이 카르복시기 (그의 염의 형태 또는 유리 산으로)에 의해 종결된 상기 서열이 포함된다.

3.2 본 발명에 따른 펩티드의 추가 변형

상기 도시된 펩티드 서열 이외에, 바람직하게는, 상기 서열의 기능적 등가물, 기능적 유도체 및 염이 또한 제공된다.

본 발명에 따라, "기능적 등가물"은 또한, 상기 언급된 아미노산 서열의 하나 이상의 서열 위치에서 하나의 구체적으로 명시된 것을 제외한 다른 아미노산을 갖지만, 그럼에도 불구하고 비듬의 예방, 억제 및 치료 특성을 갖는 돌연변이체를 특히 의미하는 것으로 이해된다. 따라서, "기능적 등가물"은 하나 이상의 아미노산의 부가, 치환, 결실 및/또는 역전에 의해 획득가능한 돌연변이체를 포함하며, 상기 변화는 이들이 본 발명에 따른 특성의 프로파일을 갖는 돌연변이체를 유도한다면 임의의 서열 위치에서 일어날 수 있다. 기능적 등가물은 특히, 돌연변이체와 변형되지 않은 폴리펩티드간의 반응성 패턴이 정성적으로 일치하는 경우에도 존재한다.

상기 의미에서 "기능적 등가물"은 또한, 기재된 폴리펩티드의 "전구체" 및 또한 폴리펩티드의 "기능적 유도체" 및 "염"이다.

여기서, "전구체"는 요망되는 생물학적 활성을 갖거나 갖지 않는, 폴리펩티드의 천연 또는 합성 전구체이다.

적합한 아미노산 치환의 예는 하기 표에 제시된다:

"염"이란 표현은 본 발명에 따른 펩티드 분자의 카르복실기의 염, 및 또한 아미노기의 산 부가염 둘 다를 의미하는 것으로 이해된다. 카르복실기의 염은 그 자체로 공지된 방식으로 제조될 수 있고, 무기 염, 예를 들어 나트륨, 칼슘, 암모늄, 철 및 아연 염, 및 또한 유기 염기, 예를 들어, 아민, 예컨대 트리에탄올아민, 아르기닌, 리신, 피페리딘 등과의 염을 포함한다. 산 부가염, 예를 들어 염산 또는 황산과 같은 무기 산과의 염, 및 아세트산 및 옥살산과 같은 유기 산과의 염이 마찬가지로 본 발명에 의해 제공된다.

본 발명에 따른 폴리펩티드의 "기능적 유도체" (또는 "유도체") 역시 공지된 기술을 사용하여 관능적 아미노산 측쇄기 상에서 또는 그의 N 또는 C 말단 상에서 제조될 수 있다. 이러한 유도체는 예를 들어, 카르복실산기의 지방족 에스테르, 암모니아 또는 1급 또는 2급 아민과의 반응에 의해 수득할 수 있는 카르복실산기의 아미드; 아실기와의 반응에 의해 제조된, 유리 아미노기의 N-아실 유도체, 또는 아실기와의 반응에 의해 제조된, 유리 히드록시기의 O-아실 유도체를 포함한다. 추가로, 1개 내지 5개, 예를 들어 2개, 3개 또는 4개의 임의의 D- 또는 L-아미노산 잔기는 추가로 N 및/또는 C 말단에서 공유 (펩티드에 의해) 결합될 수 있거나, 또는 1개 내지 5개, 예를 들어 1개, 2개, 3개 또는 4개의 잔기는 N-말단 및/또는 C-말단에서 결손될 수 있다.

추가의 N-말단 및/또는 C-말단 잔기의 비제한적 예는 Asp, Pro, Asn, Gly를 포함한다. N-말단 및 C-말단이 동시에 연장되는 경우, N-말단 잔기는 바람직하게는 Pro 또는 Gly일 수 있고, 상응하는 C-말단 잔기는 바람직하게는 각각 Asp 및 Asn일 수 있다.

기재된 항미생물성 펩티드의 아미노산 서열의 변이체, 및 추가 단백질 또는 펩티드 서열과의 융합을 통해, 특정 표면, 예를 들어 피부, 손톱, 헤어를 구체적으로 인지하거나, 또는 이들 표면 또는 거기에 존재하는 수용체에 의해 인지되고 결합되는 구조를 생성할 수 있다.

결과적으로, 기재된 항미생물성 펩티드를 목적하는 작용 부위로 보다 효과적으로 유도하고/거나 그의 흡수를 개선시킬 수 있다. 기재된 항미생물성 펩티드에의 결합 단백질의 커플링 및/또는 융합을 통해 야기된 단백질-펩티드 융합 생성물은 적절한 작용 부위, 예를 들어 미생물 표면 또는 신체 구역에 보다 표적화된 방식으로 유도되고/거나, 이들 부위에 오래 잔존하여 확대되고 개선된 펩티드 효과를 야기할 것이다. 추가로, 기재된 항미생물성 펩티드의 아미노산 서열의 변이체, 및/또는 추가 단백질 또는 펩티드 서열과의 융합을 통해 펩티드를 표적화된 방식으로 목적하는 작용 부위에 유도하여, 예를 들어 보다 높은 펩티드 특이성, 보다 낮은 펩티드 소비 또는 펩티드 용량, 및 또한 보다 빠르거나 큰 펩티드 효과를 달성할 수 있다.

3.3 본 발명에 따른 핵산, 발현 구조물, 벡터 및 미생물

3.3.1 핵산:

본 발명은 추가로 본 발명에 따라 사용되는 펩티드 및 융합 펩티드를 코딩하는 핵산 분자를 포함한다.

본원에서 언급된 모든 핵산 서열 (단일- 및 이중-가닥 DNA 및 RNA 서열, 예를 들어, cDNA 및 mRNA)은 뉴클레오티드 빌딩 블록으로부터 화학적 합성에 의해, 예를 들어 이중 나선의 각각의 겹쳐진 상보적 핵산 빌딩 블록의 단편 축합에 의해 그 자체로 공지된 방식으로 제조될 수 있다. 올리고뉴클레오티드의 화학적 합성은 예를 들어, 포스포아미다이트 방법에 따라 공지된 방식으로 수행할 수 있다 (문헌 [Voet, Voet, 2nd edition, Wiley Press New York, pages 896-897]). 합성 올리고뉴클레오티드의 어닐링(annealing) 및 DNA 폴리머라제의 클레나우(Klenow) 단편의 도움으로 공백의 채워짐, 결찰 반응, 및 또한 일반적인 클로닝 방법이 문헌 [Sambrook et al. (1989), Molecular Cloning: A laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press]에 기재되어 있다.

본 발명은 본 발명에 따른 폴리펩티드 또는 단백질을 코딩하는 단리된 핵산 분자, 또는 생물학적으로 활성인 그의 절편, 및 예를 들어 본 발명에 따른 코딩 핵산의 동정 또는 증폭에 대한 혼성화 프로브 또는 프라이머로서 사용될 수 있는 핵산 단편 모두를 제공한다.

본 발명에 따른 핵산 분자는 유전자의 코딩 영역의 3' 및/또는 5' 말단의 번역되지 않은 서열을 추가로 포함할 수 있다.

"단리된" 핵산 분자는 핵산의 천연 공급원에 존재하는 다른 핵산 분자로부터 분리되고, 또한 재조합 기술에 의해 생성되는 경우에는 다른 세포 물질 또는 배양 배지를 본질적으로 함유하지 않을 수 있거나, 또는 화학적으로 합성되는 경우에는 화학적 전구체 또는 다른 화학물질을 함유하지 않을 수 있다.

본 발명에 따른 핵산 분자는 표준 분자생물학 기술 및 본 발명에 따라 제공된 서열 정보에 의해 단리될 수 있다. 예를 들어, cDNA는 혼성화 프로브로서 구체적으로 개시된 완전 서열 또는 그의 절편 중 하나, 및 표준 혼성화 기술을 사용하여 적합한 cDNA 라이브러리로부터 단리될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd edition, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989]에 기재된 바와 같음). 또한, 개시된 서열 또는 그의 절편 중 하나를 포함하는 핵산 분자는 상기 서열에 근거하여 생성된 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하여 폴리머라제 사슬 반응에 의해 단리될 수 있다. 이러한 방식으로 증폭된 핵산은 적합한 벡터로 클로닝될 수 있고, DNA 서열 분석에 의해 특성화될 수 있다. 본 발명에 따른 올리고뉴클레오티드는 또한 표준 합성 방법에 의해, 예를 들어 자동 DNA 합성장치를 사용하여 제조될 수 있다.

본 발명은 추가로, 구체적으로 기재된 뉴클레오티드 서열 또는 그의 절편에 상보적인 핵산 분자를 포함한다.

본 발명에 따른 뉴클레오티드 서열은, 다른 세포형 및 유기체에서 동종 서열의 동정 및/또는 클로닝에 대해 사용될 수 있는 프로브 및 프라이머의 생성을 가능케 한다. 이러한 프로브 및 프라이머는 통상적으로, 엄격 조건 하에서 적어도 약 12개, 바람직하게는 적어도 약 25개, 예를 들어 약 40개, 50개 또는 75개의, 본 발명에 따른 핵산 서열의 센스 가닥 또는 상응하는 안티센스 가닥의 연속 뉴클레오티드를 혼성화시키는 뉴클레오티드 서열 범위를 포함한다.

또한, 본 발명에 따라, 소위 잠재성 돌연변이를 포함하거나, 또는 천연 발생 변이체, 예를 들어 스플라이스(splice) 변이체 또는 그의 대립형질 변이체와 같은, 특정 공급원 유기체 또는 숙주 유기체의 코돈 사용법에 따라 구체적으로 명시된 서열과 비교하여 변형된 핵산 서열이 포함된다. 보존적 뉴클레오티드 치환에 의해 획득할 수 있는 서열이 또한 제공된다 (즉, 해당 아미노산이 동일한 전하, 크기, 극성 및/또는 용해도의 아미노산에 의해 대체됨).

본 발명은 또한 서열 다형성에 의해 구체적으로 개시된 핵산으로부터 유래된 분자를 제공한다. 이러한 유전적 다형성은 자연적 변이로 인해 집단 내 개체 사이에 존재할 수 있다. 상기 자연적 변이는 통상적으로, 유전자의 뉴클레오티드 서열에서 1 내지 5％의 차이를 야기한다.

추가로, 본 발명은 또한 상기 언급된 코딩 서열과 혼성화시키거나 또는 거기에 상보적인 핵산 서열을 포함한다. 이들 폴리뉴클레오티드는 게놈 또는 cDNA 라이브러리를 스크리닝하는 경우에 발견될 수 있고, 적절한 경우, 적합한 프라이머를 사용하여 PCR에 의해 그로부터 복제된 다음 예를 들어 적합한 프로브를 사용하여 단리될 수 있다. 다른 가능성은 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 사용한 적합한 미생물의 형질전환, 미생물 및 이에 따른 폴리뉴클레오티드의 복제 및 이의 후속적 단리이다. 또한, 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드는 화학적 방법으로 합성될 수 있다.

폴리뉴클레오티드에 "혼성화"시킬 수 있는 특성은 엄격 조건 하에서 실질적으로 상보적인 서열에 결합시키면서 상보적이지 않은 파트너 사이의 비특이적 결합은 상기 조건 하에서 일어나지 않는, 폴리- 또는 올리고뉴클레오티드의 능력을 의미하는 것으로 이해된다. 상기 목적상, 서열은 70-100％, 바람직하게는 90-100％ 상보적이어야 한다. 서로에 특이적으로 결합할 수 있는 상보적 서열의 특성은, 예를 들어 노던 또는 사우던 블롯(Northern or Southern blot) 기술에서, 또는 PCR 또는 RT-PCR에서 프라이머 결합 동안에 이용된다. 통상적으로, 상기 목적상, 30개 염기쌍 길이 초과의 올리고뉴클레오티드가 사용된다. 엄격 조건은 예를 들어 노던 블롯 기술에서, 비특이적 혼성화된 cDNA 프로브 또는 올리고뉴클레오티드의 용리에 대해 50-70℃, 바람직하게는 60-65℃의 고온 세척 용액, 예를 들어 0.1％ SDS를 함유한 0.1 x SSC 완충액 (20 x SSC: 3 M NaCl, 0.3 M Na 시트레이트, pH 7.0)의 사용을 의미하는 것으로 이해된다. 상기 언급된 바와 같이, 이러한 공정에서, 고도의 상보적 핵산만이 서로에 결합된 채로 남아있다. 엄격 조건의 확립은 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들어 문헌 [Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6]에 기재되어 있다.

3.3.2 발현 구조물 및 벡터:

본 발명은 또한 조절 핵산 서열의 유전적 제어 하에, 본 발명에 따른 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 발현 구조물, 및 또한 하나 이상의 상기 발현 구조물을 포함하는 벡터를 제공한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 상기 구조물은 프로모터인 특정 코딩 서열의 5' 상류 및 종결자인 서열 3' 하류, 및 또한 적절한 경우, 각 경우에 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 추가의 통상적 조절 요소를 포함한다. "작동가능한 연결"은 조절 요소 각각이 코딩 서열의 발현 동안 그의 기능을 의도한 대로 수행할 수 있도록 프로모터, 코딩 서열, 종결자, 및 적절한 경우 추가의 조절 요소의 순차적 배열을 의미하는 것으로 이해된다. 작동가능하게 연결가능한 서열의 예는 표적화 서열 및 또한 인핸서, 폴리아데닐화 신호 등이다. 추가의 조절 요소는 선별가능한 마커, 증폭 신호, 복제 기점 등을 포함한다. 적합한 조절 서열은 예를 들어, 문헌 [Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San diego, CA (1990)]에 기재되어 있다.

인공 조절 서열 이외에, 천연 조절 서열도 여전히 실질적 구조 유전자의 상류를 나타낼 수 있다. 유전적 변형을 통해, 이러한 천연 조절은 적절한 경우 변경될 수 있고, 유전자의 발현은 증가 또는 감소된다. 그러나, 유전자 구조물은 디자인이 보다 단순, 즉, 추가의 조절 신호가 구조 유전자의 상류에 삽입되지 않고, 천연 프로모터는 그의 조절과 함께 제거되지 않는다. 대신, 천연 조절 서열은 돌연변이되어 조절이 더이상 일어나지 않고 유전자 발현이 증가 또는 감소되게 한다. 핵산 서열은 유전자 구조물 중에 1회 이상 복제되어 존재할 수 있다.

사용될 수 있는 프로모터의 예는 cos, tac, trp, tet, trp-tet, lpp, lac, lpp-lac, lacIq, T7, T5, T3, gal, trc, ara, SP6, 그램-음성 세균에서 유리하게 사용되는 람다-PR 또는 람다-PL 프로모터; 및 또는 그램-양성 프로모터 amy 및 SPO2, 효모 프로모터 ADC1, MFa, AC, P-60, CYC1, GAPDH 또는 식물 프로모터 CaMV/35S, SSU, OCS, lib4, usp, STLS1, B33, not 또는 유비퀴틴 또는 파세올린 프로모터이다. 특히 바람직하게는, 유도가능 프로모터, 예를 들어 광- 및 특히 온도-유도가능 프로모터, 예컨대 P_rP_l 프로모터의 사용이 제시된다. 기본적으로, 조절 서열을 갖는 모든 천연 프로모터가 사용될 수 있다. 추가로, 합성 프로모터가 또한 유리하게 사용될 수 있다.

특정 조절 서열은 핵산 서열의 표적화된 발현 및 단백질 발현이 가능해지도록 의도된다. 숙주 유기체에 따라, 이는 예를 들어, 유전자가 오로지 도입 후에만 발현 또는 과다발현되는 것, 또는 즉시 발현되고/거나 과다발현되는 것을 의미할 수 있다.

여기서, 조절 서열 또는 인자는 바람직하게는 발현에 대해 유리한 영향을 미쳐 이를 증가 또는 감소시킬 수 있다. 따라서, 조절 요소는 유리하게는, 강한 전사 신호, 예컨대 프로모터 및/또는 "인핸서"를 사용함으로써 전사 수준을 증대시킬 수 있다. 그러나, 또한, 예를 들어 mRNA의 안정성을 개선시켜 번역을 향상시킬 수도 있다.

발현 카세트는 적합한 코딩 뉴클레오티드 서열을 갖는 적합한 프로모터, 및 종결자 신호 또는 폴리아데닐화 신호를 융합시켜 제조한다. 상기 목적상, 예를 들어 문헌 [T. Maniatis, E.F. Fritsch and J. Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989)] 및 [T.J. Silhavy, M.L. Berman and L.W. Enquist, Experiments with Gene Fusions, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1984)] 및 [Ausubel, F.M. et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience (1987)]에 기재된 바와 같이, 통상적 재조합 및 클로닝 기술이 사용된다.

발현에 대해, 재조합 핵산 구조물 또는 유전자 구조물은 유리하게는, 적합한 숙주 유기체에 숙주에서 유전자의 최적 발현을 촉진하는 숙주-특이적 벡터로 삽입된다. 벡터는 당업자에게 익히 공지되어 있고, 예를 들어 문헌 ["Cloning Vectors" (Pouwels P. H. et al., ed., Elsevier, Amsterdam-New York-Oxford, 1985)]에서 발견될 수 있다. 플라스미드 이외에, 벡터는 또한 당업자에게 공지된 모든 다른 벡터, 예를 들어 파지(phage), 바이러스, 예컨대 SV40, CMV, 바쿨로바이러스 및 아데노바이러스, 트랜스포손, IS 요소, 파스미드, 코스미드, 및 선형 또는 원형 DNA를 의미하는 것으로 이해된다. 이들 벡터는 숙주 유기체에서 자동 복제될 수 있거나, 또는 염색체에 의해 복제될 수 있다.

3.3.3 언급될 수 있는 적합한 발현 벡터의 예:

통상적 융합 발현 벡터, 예컨대 pGEX (파마시아 바이오테크 인코포레이티드(Pharmacia Biotech Inc); 문헌 [Smith, D.B. and Johnson, K.S. (1988) Gene 67:31-40]), pMAL (메사츄세츠주 베벌리에 소재한 뉴 잉글랜드 바이오랩스(New England Biolabs)) 및 pRIT 5 (뉴저지주 피스카타웨이에 소재한 파마시아) (글루타티온-S-트랜스퍼라제 (GST), 말토스 E 결합 단백질 또는 단백질 A가 재조합 표적 단백질에 융합됨).

비-융합 단백질 발현 벡터, 예컨대 pTrc (문헌 [Amann et al., (1988) Gene 69:301-315]) 및 pET 11d (문헌 [Studier et al. Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, California (1990) 60-89]).

효모 에스. 세레비시아에(S. cerevisiae)에서의 발현에 대한 효모 발현 벡터, 예컨대 pYepSec1 (문헌 [Baldari et al., (1987) Embo J. 6:229-234]), pMFa (문헌 [Kurjan and Herskowitz (1982) Cell 30:933-943]), pJRY88 (문헌 [Schultz et al., (1987) Gene 54:113-123]) 및 pYES2 (캘리포니아주 샌 디에고에 소재한 인비트로겐 코포레이션(Invitrogen Corporation)). 다른 진균, 예컨대 사상균에서 사용하기에 적합한 벡터 구조물에 대한 벡터 및 방법은 문헌 [van den Hondel, C.A.M.J.J. & Punt, P.J. (1991) "Gene transfer systems and vector development for filamentous fungi, in: Applied Molecular Genetics of Fungi, J.F. Peberdy et al., eds., S. 1-28, Cambridge University Press: Cambridge]에 상세하게 기재된 것을 포함한다.

배양된 곤충 세포 (예를 들어, Sf9 세포)에서 단백질의 발현에 대해 이용가능한 바쿨로바이러스 벡터는 pAc 종 (문헌 [Smith et al., (1983) Mol. Cell Biol. 3:2156-2165]) 및 pVL 종 (문헌 [Lucklow and Summers, (1989) Virology 170:31-39])을 포함한다.

식물 발현 벡터, 예컨대 문헌 [Becker, D., Kemper, E., Schell, J. and Masterson, R. (1992) "New plant binary vectors with selectable markers located proximal to the left border", Plant Mol. Biol. 20:1195-1197]; 및 [Bevan, M.W. (1984) "Binary Agrobacterium vectors for plant transformation", Nucl. Acids Res. 12:8711-8721]에 상세하게 기재된 것.

포유동물 발현 벡터, 예컨대 pCDM8 (문헌 [Seed, B. (1987) Nature 329:840]) 및 pMT2PC (문헌 [Kaufman et al. (1987) EMBO J. 6:187-195]).

원핵 및 진핵 세포에 대한 추가의 적합한 발현 시스템은 문헌 [Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T., Molecular cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989]의 제16장 및 제17장에 기재되어 있다.

3.3.4 재조합 미생물:

본 발명에 따른 벡터의 도움으로, 예를 들어, 본 발명에 따른 하나 이상의 벡터로 전환되고, 본 발명에 따른 폴리펩티드를 생성하는데 사용될 수 있는 재조합 미생물을 제조할 수 있다. 상기 기재된 본 발명에 따른 재조합 구조물은 유리하게는 적합한 숙주 시스템에 도입되고 발현된다. 이러한 맥락에서, 특정 발현 시스템에서 상기 핵산을 발현시키기 위해, 당업자에게 공지된 통상적 클로닝 및 형질감염 방법, 예를 들어 동반침전, 원형질체 융합, 전기천공, 레트로바이러스성 형질감염 등의 사용이 바람직하다. 적합한 시스템은 예를 들어 문헌 [Current Protocols in Molecular Biology, F. Ausubel et al., ed., Wiley Interscience, New York 1997] 또는 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd edition, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989]에 기재되어 있다.

본 발명에 따라, 동종 재조합 미생물의 제조가 또한 가능하다. 이에 대해, 본 발명에 따른 유전자의, 또는 적절한 경우, 본 발명에 따른 서열을 변형, 예를 들어 기능적으로 파괴시키기 위해 하나 이상의 아미노산 결실, 부가 또는 치환이 도입된 코딩 서열의 하나 이상의 절편을 포함하는 벡터가 제조된다 ("녹아웃" 벡터). 도입된 서열은 예를 들어, 관련 미생물로부터의 상동체일 수 있거나, 또는 포유류, 효모 또는 곤충원으로부터 유래될 수 있다. 별법으로, 내인성 유전자가 돌연변이되거나 또는 동종 재조합시 다르게 변형되지만 기능적 단백질은 여전히 코딩할 수 있도록 하는, 동종 재조합에 대해 사용되는 벡터가 고안될 수 있다 (예를 들어, 결과적으로 내인성 단백질의 발현이 변형되는 방식으로 상류 조절 영역이 변형될 수 있음). 본 발명에 따른 유전자의 변형된 절편은 동종 재조합 벡터 내에 있다. 동종 재조합에 대해 적합한 벡터의 구조는 예를 들어 문헌 [Thomas, K.R. and Capecchi, M.R. (1987) Cell 51:503]에 기재되어 있다.

적합한 숙주 유기체는 기본적으로, 본 발명에 따른 핵산, 그의 대립형질 변이체, 그의 기능적 등가물 또는 유도체의 발현을 가능케 하는 모든 유기체이다. 숙주 유기체는 예를 들어, 세균, 진균, 효모, 식물 또는 동물 세포를 의미하는 것으로 이해된다. 바람직한 유기체는 세균, 예컨대 에스케리키아 속의 세균, 예를 들어 에스케리키아 콜라이, 스트렙토마이세스, 바실루스 또는 슈도모나스, 진핵 미생물, 예컨대 사카로마이세스 세레비시아에, 아스페르길루스, 동물 또는 식물로부터의 고등 진핵 세포, 예를 들어 Sf9 또는 CHO 세포이다.

성공적으로 형질전환된 유기체의 선별은, 벡터 또는 발현 카세트에 존재하는 마커 유전자에 의해 착수될 수 있다. 이러한 마커 유전자의 예는 항생제 저항성에 대한 유전자, 및 발색 반응을 촉매하여 형질전환된 세포의 착색을 야기하는 효소에 대한 유전자이다. 이어서, 이들은 자동 세포 분류에 의해 선별될 수 있다. 벡터로 성공적으로 형질전환되고, 적절한 항생제 저항성 유전자 (예를 들어, G418 또는 히그로마이신)를 보유하는 미생물은 적절한 항생제-포함 배지 또는 영양 배지에 의해 선별될 수 있다. 세포 표면 상에 존재하는 마커 단백질은 친화성 크로마토그래피에 의해 선별용으로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 서열에 대한 별법의 제조 방법으로서, 그 자체로 공지된 화학적 합성법, 예컨대 고상 합성 또는 액상 합성을 참조할 수 있다.

3.4 폴리펩티드의 재조합 조제:

본 발명에 따라 사용되는 펩티드는, 폴리펩티드를 생성하는 미생물을 배양시키고, 적절한 경우, 폴리펩티드의 발현을 유도한 다음 이를 배양물로부터 단리시키는, 그 자체로 공지된 방식으로의 재조합 기술을 사용하여 제조할 수 있다. 폴리펩티드는 또한 필요한 경우, 상기 방식으로 산업적 규모로 제조할 수 있다.

재조합 미생물은 공지된 방법으로 배양시키고 발효시킬 수 있다. 세균은 예를 들어 TB 또는 LB 배지에서, 20 내지 40℃의 온도 및 6 내지 9의 pH에서 복제될 수 있다. 적합한 배양 조건은, 예를 들어 문헌 [T. Maniatis, E.F. Fritsch and J. Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989)]에 상세하게 기재되어 있다.

폴리펩티드가 배양 배지 중에서 분비되지 않는 경우, 세포를 파괴시키고 공지된 단백질 단리 방법에 의해 용해물로부터 생성물을 수득한다. 별법으로, 세포는 고주파수 초음파, 고압 (예를 들어, 프렌치(French) 압력 세포에서), 삼투압, 세제, 용해효소 또는 유기 용매의 작용, 균질화기, 또는 열거된 방법 중 2개 이상의 조합에 의해 파괴될 수 있다.

폴리펩티드는 공지된 크로마토그래피 방법, 예컨대 분자체 크로마토그래피 (겔 여과), 예컨대 Q-세파로스 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피 및 소수성 크로마토그래피에 의해, 및 다른 통상적 방법, 예컨대 초미세여과, 결정화, 염석, 투석 및 천연 겔 전기영동에 의해 정제될 수 있다. 적합한 방법은 예를 들어 문헌 [Cooper, F. G., Biochemische Arbeitsmethoden, Verlag Walter de Gruyter, Berlin, New York] 또는 [Scopes, R., Protein Purification, Springer Verlag, New York, Heidelberg, Berlin]에 기재되어 있다.

특정 뉴클레오티드 서열에 의해 cDNA를 연장시키고, 이에 따라 예를 들어 간단한 정제에 대해 역할을 하는, 변형된 폴리펩티드 또는 융합 단백질을 코딩하는 벡터 시스템 또는 올리고뉴클레오티드의 사용은 재조합 단백질의 단리에 대해 특히 유리하다. 이러한 유형의 적합한 변형체는, 예를 들어 앵커(anchor)로서 작용하는 소위 "태그", 예를 들어 헥사-히스티딘 앵커로서 공지된 변형체, 또는 항체의 항원으로서 인지될 수 있는 에피토프이다 (예를 들어, 문헌 [Harlow, E. and Lane, D., 1988, Antibodies: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor (N.Y.) Press]에 기재됨). 상기 앵커는 예를 들어 크로마토그래피 컬럼에 충전될 수 있는 고상 지지체, 예를 들어 중합체 매트릭스에 단백질을 부착시키기 위해 사용될 수 있거나, 또는 마이크로티터(microtiter) 플레이트 또는 다른 지지체 상에서 사용될 수 있다.

동시에, 이들 앵커는 또한 단백질을 인식시키는데 사용될 수 있다. 또한, 단백질의 인식에 대해서는, 통상적인 마커, 예컨대 형광 염료, 기질과의 반응 후 탐지가능한 반응 생성물을 형성하는 효소 마커, 또는 방사성 표지를 단독으로, 또는 단백질을 유도체화시키는 앵커와 조합하여 사용할 수 있다.

3.5 본 발명에 따른 조성물의 실시양태

3.5.1 용도 및 제제의 일반적 분야

본 발명에 따른 항미생물성 펩티드는 인간 화장품, 특히 스킨케어 및 헤어케어, 및 또한 동물 케어에서 광범위한 용도를 가질 뿐만 아니라 약리적으로 사용될 수도 있다.

본 발명에 따른 화장 조성물은 특히 피부 화장, 네일 화장, 헤어 화장, 피부과학, 위생 또는 제약 조성물이다. 특히, 본 발명에 따른 항미생물성 펩티드는 피부 화장품, 네일 화장품 및/또는 헤어 화장품에 대해, 또는 구강 관리 조성물로서 사용된다. 이는 모발 및 피부에 (예를 들어, 비듬 형성), 손톱에 (예를 들어, 손톱 부서짐의 증가, 두꺼워진 손톱) 손상을 유발하거나, 또는 가려움 또는 화끈거림을 유발하는 원치않는 미생물의 성장을 억제시킬 수 있다.

추가 실시양태에 따라, 본 발명에 따른 헤어 화장 또는 피부 화장 제제는 특히 피부 또는 헤어의 관리 또는 보호에서 역할을 하며, 에멀젼, 분산액제, 현탁액제, 수성 계면활성제, 밀크, 로션, 크림, 발삼, 연고, 젤, 과립제, 파우더, 스틱 제제, 예컨대 립스틱, 폼, 에어로졸 또는 스프레이의 형태이다. 이러한 제제는 국소 제제로 매우 적합화된다. 적합한 에멀젼은 수중유형 에멀젼 및 유중수형 에멀젼 또는 미세에멀젼이다.

대체로, 헤어 화장 또는 피부 화장 제제는 피부에 (국소적으로) 또는 헤어에의 용도에 대해 사용된다. 이와 관련하여, "국소 제제"는 활성 성분을 미세한 분포로 피부에 도포하기에 적합한 제제를 의미하는 것으로 이해된다. 상기 목적상 적합한 것은 예를 들어, 수성 및 수성-알콜성 용액제, 스프레이, 폼, 폼 에어로졸, 연고, 수성 젤, O/W 또는 W/O 유형의 에멀젼, 미세에멀젼 또는 화장 스틱 제제이다.

본 발명에 따른 화장 조성물의 한 실시양태에 따라, 이는 담체를 포함한다. 바람직한 담체는 물, 기체, 물-기재 액체, 오일, 젤, 에멀젼 또는 미세에멀젼, 분산액, 또는 이들의 혼합물이다. 상기 담체는 우수한 피부 적합성을 나타낸다. 수성 젤, 에멀젼 또는 미세에멀젼은 국소 제제에 대해 특히 유리하다.

통상적인 첨가제 및 보조제 이외에, 본 발명에 따른 화장 조성물은 화장적으로 및/또는 피부과학적으로 활성인 성분을 추가로 포함할 수 있다.

적합한 추가 활성 성분의 예는 하기와 같다:

적합한 화장적으로 및/또는 피부과학적으로 활성인 성분은 예를 들어, 착색 활성 성분, 피부 및 헤어 색소침착제, 염색제, 태닝제, 표백제, 케라틴-경화 물질, 항미생물 활성 성분, 포토필터 활성 성분, 방충제 활성 성분, 충혈 물질, 각질용해적 및 각질형성적으로 효과적인 물질, 항비듬 활성 성분, 소염제, 케라틴화 물질, 항산화 활성 성분, 및 자유 라디칼 제거제로서 작용하는 활성 성분, 피부를 촉촉하게 하거나 또는 피부를 촉촉하게 유지하는 물질, 재지방(refatting) 활성 성분, 항홍반성 또는 항알레르기성 활성 성분, 분지형 지방산, 예컨대 18-메틸에이코산산, 및 이들의 혼합물이다.

UV 선으로의 천연 또는 인공 조사 없이 피부의 태닝에 대해 적합한 인공적 피부-태닝 활성 성분은 예를 들어, 디히드록시아세톤, 알록산 및 호두껍질 추출물이다. 적합한 케라틴-경화 물질은 일반적으로, 발한억제제로서 사용될 수도 있는 활성 성분, 예를 들어 칼륨 알루미늄 술페이트, 알루미늄 히드록시클로라이드, 알루미늄 락테이트 등이다.

미생물을 박멸하거나 또는 그의 성장을 억제하기 위해 사용되는 항미생물 활성 성분. 이들은 따라서, 보존제, 및 체취의 형성 또는 세기를 줄이는 탈취 물질 둘 다로 작용한다. 이들로는 예를 들어, 당업자에게 공지된 통상적 보존제, 예컨대 p-히드록시벤조산 에스테르, 이미다졸리닐우레아, 포름알데히드, 소르브산, 벤조산, 살리실산 등이 포함된다. 상기 탈취 물질은 예를 들어, 아연 리시놀레에이트, 트리클로산, 운데실렌산 알킬올아미드, 트리에틸 시트레이트, 클로르헥시딘 등이다.

헤어 화장, 네일 화장 또는 피부 화장 제제의 제조에 대해 적합한 보조제 및 첨가제는 당업자에게 잘 알려져 있고, 화장품에 대한 편람, 예를 들어 문헌 [Schrader, Grundlagen and Rezepturen der Kosmetika [Fundamentals and formulations of cosmetics], Huethig Verlag, Heidelberg, 1989, ISBN 3-7785-1491-1]에서 발견될 수 있다. 보조제 및 첨가제는 바람직하게는, 화장용으로 및/또는 제약상 허용되는 보조제이다. 제약상 허용가능한 것은 약학 분야, 식품 공학 및 관련 분야에서 유용한 것으로 공지된 보조제, 특히 관련된 약전 (예를 들어, DAB, Ph. Eur., BP, NF)에 열거된 것, 및 특성이 생리적 용도를 방해하지 않는 기타 보조제이다.

적합한 보조제는 윤활제, 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 보존제, 항산화제, 항자극제, 킬레이트제, 에멀젼 안정화제, 막 형성제, 젤 형성제, 악취 차폐제, 히드로콜로이드, 용매, 용해도 촉진제, 중화제, 침투 가속화제, 안료, 4급 암모늄 화합물, 재지방제 및 과지방제(superfatting agent), 연고, 크림 또는 오일 기재 물질, 실리콘 유도체, 안정화제, 멸균제, 추진제, 건조제, 유백제, 증점제, 왁스, 연화제, 백유일 수 있다. 이와 관련된 실시양태는, 예를 들어 문헌 [Fiedler, H. P. Lexikon der Hilfsstoffe fur Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete [Lexicon of auxiliaries for pharmacy, cosmetics and related fields], 4th edition, Aulendorf: ECV-Editio-Kantor-Verlag, 1996]에 제시된 바와 같은 과학기술 지식을 기초로 한다.

추가의 적합한 첨가제는 향료 오일, 헤어 중합체, 헤어 및 스킨 컨디셔너, 그래프트 중합체, 수용성 또는 수분산성 실리콘-함유 중합체, 광보호제, 표백제, 치료제, 착색제, 염색제, 태닝제, 염료, 점도 조절제, 보습제, 재지방제, 콜라겐, 단백질 가수분해물, 지질, 항산화제, 소포제, 대전방지제, 완화제, 연화제, 퍼옥시드 분해제로부터 선택된다.

적합한 보조제 및 첨가제의 특정 예는 하기와 같다 (이들은 또한 본 발명에 따른 펩티드에 공유 또는 비공유 결합될 수 있음):

(1) 아미노산 (예를 들어, 글리신, 히스티딘, 티로신, 트립토판) 및 그의 유도체, 이미다졸 (예를 들어, 우로칸산) 및 그의 유도체, 펩티드, 예컨대 D,L-카르노신, D-카르노신, L-카르노신 및 그의 유도체 (예를 들어, 안세린), 카로티노이드, 카로텐 (예를 들어, β-카로텐, 리코펜) 및 그의 유도체, 클로로겐산 및 그의 유도체, 리포산 및 그의 유도체 (예를 들어, 디히드로리포산), 아우로티오글루코스, 프로필티오우라실 및 다른 티올 (예를 들어, 티오로독신, 글루타티온, 시스테인, 시스틴, 시스타민 및 그의 글리코실, N-아세틸, 메틸, 에틸, 프로필, 아밀, 부틸, 및 라우릴, 팔미토일, 올레일, γ-리놀레일, 콜레스테릴 및 글리세릴 에스테르) 및 그의 염, 디라우릴 티오디프로피오네이트, 디스테아릴 티오디프로피오네이트, 티오디프로피온산 및 그의 유도체 (에스테르, 에테르, 펩티드, 지질, 뉴클레오티드, 뉴클레오시드 및 염), 및 특히 매우 낮은 허용량 (예를 들어, pmol 내지 μmol/kg 범위)의 술폭스이민 화합물 (예를 들어, 부티오닌 술폭스이민, 호모시스테인 술폭스이민, 부티오닌 술폰, 펜타-, 헥사-, 헵타티오닌 술폭스이민), 또한 (금속) 킬레이트제 (예를 들어, α-히드록시 지방산, 팔미트산, 피트산, 락토페린), α-히드록시산 (예를 들어, 시트르산, 락트산, 말산), 훔산, 담즙산, 담즙 추출물, 빌리루빈, 빌리베르딘, EDTA 및 그의 유도체, 불포화 지방산 및 그의 유도체 (예를 들어, γ-리놀렌산, 리놀레산, 올레산), 엽산 및 그의 유도체, 유비퀴논 및 유비퀴놀 및 그의 유도체, 비타민 C 및 그의 유도체 (예를 들어, 나트륨 아스코르베이트, 아스코르빌 팔미테이트, Mg 아스코르빌 포스페이트, 아스코르빌 아세테이트), 토코페롤 및 유도체 (예를 들어, 비타민 E 아세테이트, 토코트리엔올), 비타민 A 및 유도체 (비타민 A 팔미테이트), 및 벤조인 수지의 코니페릴 벤조에이트, 루틴산 및 그의 유도체, α-글리코실루틴, 페룰산, 푸르푸릴리덴글루시톨, 카르노신, 부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, 노르디히드로구아이악산, 노르디히드로구아이아레트산, 트리히드록시부티로페논, 요산 및 그의 유도체, 만노스 및 그의 유도체, 아연 및 그의 유도체 (예를 들어, ZnO, ZnSO₄), 셀레늄 및 그의 유도체 (예를 들어, 셀레노메티오닌), 스틸벤 및 그의 유도체 (예를 들어, 스틸벤 옥시드, 트랜스-스틸벤 옥시드)로부터 선택되는 항산화제.

(2) 퍼옥시드 분해제, 즉, 퍼옥시드를 분해할 수 있는 화합물, 특히 바람직하게는 지질 퍼옥시드. 이는 예를 들어, 피리딘-2-티올-3-카르복실산, 2-메톡시피리미디놀카르복실산, 2-메톡시피리딘카르복실산, 2-디메틸아미노피리미디놀카르복실산, 2-디메틸아미노피리딘카르복실산과 같은 유기 물질을 포함하는 것으로 이해된다.

(3) 증점제, 예컨대 가교 폴리아크릴산 및 그의 유도체, 다당류 및 그의 유도체, 예컨대 크산탄 고무, 한천 한천, 알기네이트 또는 틸로스, 셀룰로스 유도체, 예를 들어 카르복시메틸셀룰로스 또는 히드록시카르복시메틸셀룰로스, 지방 알콜, 모노글리세리드 및 지방산, 폴리비닐 알콜 및 폴리비닐피롤리돈. 비이온성 증점제를 사용하는 것이 바람직하다.

(4) E 번호와 함께 하기 열거된 보존제

본 발명에 따라, 화장품에서 통상적인 보존제 또는 보존적 보조제, 예컨대 디브로모디시아노부탄 (2-브로모-2-브로모메틸-글루타로디니트릴), 3-요오도-2-프로피닐 부틸카르바메이트, 2-브로모-2-니트로프로판-1,3-디올, 이미다졸리디닐우레아, 5-클로로-2-메틸-4-이소티아졸린-3-온, 2-클로로아세트아미드, 벤즈알코늄 클로라이드, 벤질 알콜, 포름알데히드 공여체가 또한 적합하다.

보존제로서 또한 적합한 것은 페닐 히드록시알킬 에테르, 특히 다수의 미생물에 대한 그의 살균 및 살진균 효과 때문에 상표명 페녹시에탄올로 공지된 화합물이다.

다른 항미생물제가 또한 본 발명에 따른 제제 중에 혼입되기에 적합하다. 유리한 물질은 예를 들어, 2,4,4'-트리클로로-2'-히드록시디페닐 에테르 (이르가산), 1,6-디(4-클로로페닐바이구아니도)-헥산 (클로르헥시딘), 3,4,4'-트리클로로카르바닐리드, 4급 암모늄 화합물, 정향 오일, 민트 오일, 백리향 오일, 트리에틸 시트레이트, 파르네솔 (3,7,11-트리메틸-2,6,10-도데카트리엔-1-올), 및 또한 특허 공개 명세서 DE-37 40 186, DE-39 38 140, DE-42 04 321, DE-42 29 707, DE-43 09 372, DE-44 11 664, DE-195 41 967, DE-195 43 695, DE-195 43 696, DE-195 47 160, DE-196 02 108, DE-196 02 110, DE-196 02 111, DE-196 31 003, DE-196 31 004 및 DE-196 34 019, 및 특허 명세서 DE-42 29 737, DE-42 37 081, DE-43 24 219, DE-44 29 467, DE-44 23 410 및 DE-195 16 705에 기재된 활성 성분 및 활성 성분의 조합물이다. 탄산수소나트륨이 또한 유리하게 사용된다. 항미생물성 폴리펩티드 역시 또한 사용될 수 있다.

(5) UV-B 및/또는 UV-A 영역에서 UV 선을 흡수하는 포토필터 활성 성분. 적합한 UV 필터는 예를 들어, 2,4,6-트리아릴-1,3,5-트리아진이며, 여기서, 아릴기는 각각의 경우 바람직하게는 히드록시, 알콕시, 구체적으로는 메톡시, 알콕시카르보닐, 구체적으로는 메톡시카르보닐 및 에톡시카르보닐, 및 이들의 혼합물로부터 선택되는 하나 이상의 치환기를 가질 수 있다. 또한 적합하게는, p-아미노벤조산 에스테르, 신남산 에스테르, 벤조페논, 캄포르 유도체, 및 UV 선을 차단하는 안료, 예컨대 이산화티탄, 활석 및 산화아연이다.

적합한 UV 필터 물질은 바람직한 특정 UV-A 및 UV-B 필터 물질이다. 예는 하기와 같다:

추가로, 본 발명에 따른 화장 및 피부과학 제제는 유리하게는, UV 선을 차단하고, 아연 (ZnO), 티탄 (TiO₂), 철 (예를 들어, Fe₂O₃), 지르코늄 (ZrO₂), 규소 (SiO₂), 망간 (예를 들어, MnO), 알루미늄 (Al₂O₃), 세륨 (예를 들어, Ce₂O₃) 산화물, 상응하는 금속의 혼합된 산화물, 및 상기 산화물의 혼합물의 군으로부터 선택된, 물에 불용성이거나 난용성인 금속 산화물 및/또는 다른 금속 화합물을 기재로 한 무기 안료를 포함할 수 있다.

여기서, 무기 안료는 코팅된 형태로 존재, 즉, 표면-처리될 수 있다. 이러한 표면 처리는 예를 들어, DE-A-33 14 742에 기재된 바와 같은 그 자체로 공지된 방법에 의해 소수성 박막을 가진 안료를 제공한다.

(6) 방충제 활성 성분, 즉, 특정 동물, 특히 곤충을 인간으로부터 멀리 떨어뜨릴 수 있거나 또는 쫓아버릴 수 있는 화합물. 이들로는 예를 들어, 2-에틸-1,3-헥산디올, N,N-디에틸-m-톨루아미드 등이 포함된다. 피부를 통해 혈류를 자극하는 적합한 충혈 물질은 예를 들어, 에센셜 오일, 예컨대 난쟁이-소나무 침엽 추출물, 라벤더 추출물, 로즈마리 추출물, 쥬니퍼 베리 추출물, 마로니에 추출물, 자작나무 잎 추출물, 건초 꽃잎 추출물, 에틸 아세테이트, 캄포르, 멘톨, 페퍼민트 오일, 로즈마리 추출물, 유칼립투스 오일 등이다. 적합한 각질용해 및 각질형성 물질은 예를 들어, 살리실산, 칼슘 티오글리콜레이트, 티오글리콜산 및 그의 염, 황 등이다. 적합한 항비듬 활성 성분은 예를 들어, 황, 황 폴리에틸렌 글리콜 소르비탄 모노올레에이트, 황 리시놀 폴리에톡실레이트, 아연 피리티온, 알루미늄 피리티온 등이다. 피부 자극을 중화하는 적합한 소염제는 예를 들어, 알란토인, 비사볼롤, 드라고산톨, 카모마일 추출물, 판테놀 등이다.

(7) 화장용으로 또는 제약상 허용되는 중합체, 예컨대 양이온성, 양쪽성 및 중성 중합체.

적합한 중합체는 예를 들어, INCI 상표명 폴리쿼터늄(Polyquaternium)을 갖는 양이온성 중합체, 예를 들어 비닐피롤리돈/N-비닐이미다졸리움 염의 공중합체 (루비쿼트(Luviquat) FC, 루비쿼트 HM, 루비쿼트 MS, 루비쿼트 케어(Care)), 디에틸 술페이트와 함께 4급화된 N-비닐피롤리돈/디메틸아미노에틸 메타크릴레이트의 공중합체 (루비쿼트 PQ 11), N-비닐카프로락탐/N-비닐피롤리돈/N-비닐이미다졸리움 염의 공중합체 (루비쿼트 E 홀드(Hold)), 양이온성 셀룰로스 유도체 (폴리쿼터늄-4 및 -10), 아크릴아미도 공중합체 (폴리쿼터늄-7) 및 키토산이다.

적합한 양이온성 (4급화된) 중합체는 또한 메르쿼트(Merquat) (디메틸디알릴암모늄 클로라이드 기재 중합체), 가프쿼트(Gafquat) (폴리비닐피롤리돈과 4급 암모늄 화합물과의 반응에 의해 형성된 4급 중합체), 중합체 JR (양이온성 기를 갖는 히드록시에틸셀룰로스) 및 식물 기재 양이온성 중합체, 예를 들어 구아르 중합체, 예컨대 로디아(Rhodia)로부터의 재규어(Jaguar) 등급이다.

추가의 적합한 중합체는 또한 중성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈, N-비닐피롤리돈 및 비닐 아세테이트 및/또는 비닐 프로피오네이트의 공중합체, 폴리실록산, 폴리비닐카프로락탐, 및 N-비닐피롤리돈과의 기타 공중합체, 폴리에틸렌이민 및 그의 염, 폴리비닐아민 및 그의 염, 셀룰로스 유도체, 폴리아스파르트산 염 및 그의 유도체이다. 이들로는 예를 들어, 루비플렉스(Luviflex)® 스윙(Swing) (폴리비닐 아세테이트 및 폴리에틸렌 글리콜의 부분적으로 비누화된 공중합체, BASF)이 포함된다.

적합한 중합체는 또한 비이온성, 수용성 또는 수분산성 중합체 또는 올리고머, 예컨대 폴리비닐카프로락탐, 예를 들어 루비스콜(Luviskol)® 플러스(Plus) (BASF), 또는 폴리비닐피롤리돈 및 특히 비닐 에스테르 (예컨대, 비닐 아세테이트)와의 그의 공중합체, 예를 들어 루비스콜 ® VA 37 (BASF), 폴리아미드, 예를 들어 DE-A-43 33 238에 기재된 바와 같은 이타콘산 및 지방족 디아민 기재의 것이다.

적합한 중합체는 또한 양쪽성 또는 쯔비터이온성(zwitterionic) 중합체, 예컨대 상표명 암포메르(Amphomer) (네셔널 스타치(National Starch)) 하에 입수가능한 옥틸아크릴아미드/메틸 메타크릴레이트/tert-부틸아미노에틸 메타크릴레이트-히드록시프로필 메타크릴레이트 공중합체, 및 또한 예를 들어 독일 특허 출원 DE 39 29 973, DE 21 50 557, DE 28 17 369 및 DE 37 08 451에 개시된 바와 같은 쯔비터이온성 중합체이다. 아크릴아미도프로필트리메틸암모늄 클로라이드/아크릴산 또는 메타크릴산 공중합체, 및 그의 알칼리 금속 및 암모늄 염이 바람직한 쯔비터이온성 중합체이다. 추가로, 적합한 쯔비터이온성 중합체는 상표명 아메르세테(Amersette) (아메르콜(AMERCHOL))로 시판중인 메타크로일에틸베타인/메타크릴레이트 공중합체, 및 히드록시에틸 메타크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트, N,N-디메틸아미노에틸 메타크릴레이트 및 아크릴산의 공중합체 (조르다폰(Jordapon) (D))이다.

적합한 중합체는 또한 비이온성의 실록산-함유 수용성 또는 수분산성 중합체, 예를 들어 폴리에테르 실록산, 예컨대 테고프렌(Tegopren) ® (골드슈미트(Goldschmidt)) 및 베시(Besi) (바커(Wacker))이다.

3.5.2 본 발명에 따른 특정 조성물

바람직한 실시양태에 따라, 본 발명에 따른 조성물은 스킨 또는 헤어 클렌징 조성물이다.

바람직한 스킨 또는 헤어 클렌징 조성물은 젤과 같은 점도의 액체 비누, 예컨대 투명한 비누, 고급 비누, 데오도란트 비누, 크림 비누, 베이비 비누, 피부 보호 비누, 연마 비누 및 합성세제, 반죽용 비누, 소프트 비누 및 세정용 페이스트, 필링 비누, 축축한 와이프, 액체 세정제, 샤워 및 목욕 제제, 예컨대 세정용 로션, 샤워 배스 및 샤워 젤, 폼 배스, 오일 배스 및 스크럽 제제, 쉐이빙 폼, 쉐이빙 로션 및 쉐이빙 크림이다.

추가의 바람직한 실시양태에 따라, 본 발명에 따른 조성물은 샤워 젤, 샴푸 제제 또는 목욕 제제이다. 이러한 제제는 하나 이상의 항미생물성 펩티드, 및 통상적으로는 염기 계면활성제로서 음이온성 계면활성제 및 공-계면활성제로서 양쪽성 및/또는 비이온성 계면활성제를 포함한다. 추가의 적합한 활성 성분 및/또는 보조제는 일반적으로, 지질, 향료 오일, 염료, 유기 산, 보존제 및 항산화제, 및 또한 증점제/젤 형성제, 스킨 컨디셔너 및 보습제로부터 선택된다.

i) 피부에 적용하기 위한 조성물에 대한 특정 실시양태:

적합한 피부 화장 조성물은 예를 들어, 페이스 토닉, 페이스 마스크, 데오도란트 및 다른 화장 로션이다. 색조 화장품에서 사용하기 위한 조성물은, 예를 들어 컨실링 스틱, 무대 메이크업, 마스카라 및 아이쉐도우, 립스틱, 콜 펜슬, 아이라이너, 블러셔, 파우더 및 아이브로우 펜슬을 포함한다.

추가로, 본 발명에 따른 피부과학 제제는 모공 클렌징을 위한 코팩에서, 항여드름 조성물, 방충제, 쉐이빙 조성물, 애프터쉐이브 및 프리쉐이브 케어 조성물, 애프터선 케어 조성물, 제모 조성물, 헤어 염색제, 개인용 케어 조성물, 풋 케어 조성물에서, 및 베이비 용품에서 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 스킨케어 조성물은 특히 W/O 또는 O/W 스킨 크림, 데이 앤드 나이트 크림, 아이 크림, 페이스 크림, 주름방지 크림, 선스크린 크림, 모이스쳐라이징 크림, 미백 크림, 자가-태닝 크림, 비타민 크림, 스킨 로션, 케어 로션 및 모이스쳐라이징 로션이다.

피부 화장 및 피부과학 조성물은 바람직하게는, 하나 이상의 펩티드를 조성물의 총 중량을 기준으로 약 0.0001 내지 50 중량％, 바람직하게는 0.001 내지 10 중량％, 매우 특히 바람직하게는 0.0057 내지 0.1 중량％의 양으로 포함한다.

적용 영역에 따라, 본 발명에 따른 피부 화장 조성물은 스킨케어에 적합한 형태로, 예를 들어 크림, 폼, 젤, 스틱, 무스, 밀크, 스프레이 (펌프 스프레이 또는 추진체-함유 스프레이)로서 적용될 수 있다.

본 발명에 따른 펩티드 및 적합한 담체 이외에, 피부 화장 제제는 상기 기재된 바와 같은 피부 화장품에 통상적인 추가의 활성 성분 및 보조제를 또한 포함할 수 있다. 이들로는 바람직하게는, 유화제, 보존제, 향료 오일, 화장용 활성 성분, 예컨대 피탄트리올, 비타민 A, E 및 C, 레티놀, 비사볼롤, 판테놀, 광보호제, 표백제, 착색제, 염색제, 태닝제, 콜라겐, 효소, 단백질 가수분해물, 안정화제, pH 조절제, 염료, 염, 증점제, 젤 형성제, 점도 조절제, 실리콘, 보습제, 재지방제 및 추가의 통상적 첨가제가 포함된다.

피부 화장 및 피부과학 조성물의 바람직한 오일 및 지방 성분은 상기 언급된 미네랄 및 합성 오일, 예를 들어 파라핀, 실리콘 오일 및 8개 이상의 탄소 원자를 갖는 지방족 탄화수소, 동물 및 식물성 오일, 예를 들어 해바라기 오일, 코코넛 오일, 아보카도 오일, 올리브 오일, 라놀린, 또는 왁스, 지방산, 지방산 에스테르, 예를 들어 C₆-C₃₀-지방산의 트리글리세리드, 왁스 에스테르, 예를 들어 호호바 오일, 지방 알콜, 바셀린, 수소화된 라놀린 및 아세틸화된 라놀린, 및 이들의 혼합물이다.

특정 특성을 확립시키기 위해, 예를 들어 촉감, 확산 거동, 물 저항성 및/또는 활성 성분 및 보조제, 예컨대 안료의 결합을 개선시키기 위해, 피부 화장 및 피부과학 제제는 실리콘 화합물을 기재로 한 컨디셔닝 물질을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 실리콘 화합물은 예를 들어, 폴리알킬실록산, 폴리아릴실록산, 폴리아릴알킬실록산, 폴리에테르 실록산 또는 실리콘 수지이다.

화장 또는 피부과학 제제는 당업자에게 공지된 통상적 방법에 따라 제조된다.

본 발명에 따른 피부과학 조성물을 제조하기 위해, 활성 성분을 적합한 보조제 (부형제)와 함께 혼합시키거나 또는 희석시킬 수 있다. 부형제는 활성 성분에 대해 비히클, 담체 또는 매질로서 작용할 수 있는 고체, 반고체 또는 액체 물질일 수 있다. 추가 보조제의 혼합은 필요한 경우, 당업자에게 공지된 방식으로 일어난다. 추가로, 중합체 및 분산액제는 약학에서 보조제로서, 바람직하게는 고체 약물 형태에 대해 (a) 코팅제(들) 또는 (a) 결합제(들)로서 또는 이에 적합하다. 이들은 또한 크림에서, 및 정제 코팅제 및 정제 결합제로서 사용될 수 있다.

바람직하게는, 화장 및 피부과학 조성물은 에멀젼 형태, 특히 유중수형 (W/O) 또는 수중유형 (O/W) 에멀젼으로서 존재한다. 그러나, 다른 유형의 제제, 예를 들어 젤, 오일, 올레오젤, 복합 에멀젼, 예를 들어 W/O/W 또는 O/W/O 에멀젼 형태, 무수 연고 또는 연고 베이스 등을 선택하는 것이 또한 가능하다. 유화제-무함유 제제, 예컨대 히드로분산액, 히드로젤 또는 피커링(Pickering) 에멀젼이 또한 유리한 실시양태이다.

에멀젼의 제조는 공지된 방법으로 수행된다. 본 발명에 따른 하나 이상의 펩티드 이외에, 에멀젼은 일반적으로 통상의 구성성분, 예컨대 지방 알콜, 지방산 에스테르, 특히 지방산 트리글리세리드, 지방산, 라놀린 및 그의 유도체, 천연 또는 합성 오일 또는 왁스 및 유화제를 물의 존재하에 포함한다. 에멀젼의 유형에 대해 특수한 첨가제의 선택 및 적합한 에멀젼의 제조는 예를 들어, 거명에 의해 참고로 명백히 제공된 문헌 [Schrader, Grundlagen and Rezepturen der Kosmetika [Fundamentals and formulations of cosmetics], Huethig Buch Verlag, Heidelberg, 2nd edition, 1989, third part]에 기재되어 있다.

예를 들어, 스킨 크림 등에 대해 W/O 에멀젼으로서 적합한 에멀젼은 일반적으로, 적합한 유화제 시스템에 의해 오일 또는 지방 상에 유화된 수성 상을 포함한다. 고분자전해질 복합체가 상기 수성 상을 제조하는데 사용될 수 있다.

에멀젼의 지방 상으로 존재할 수 있는 바람직한 지방 성분은 탄화수소 오일, 예컨대 파라핀 오일, 푸르셀린(Purcellin) 오일, 퍼히드로스쿠알렌 및 상기 오일 중 미정질 왁스의 용액; 동물 또는 식물성 오일, 예컨대 스윗 아몬드 오일, 아보카도 오일, 칼로필룸 오일, 라놀린 및 그의 유도체, 피마자 오일, 참깨 오일, 올리브 오일, 호호바 오일, 카리테 오일, 홉로스테투스 오일, 대기압 하에서 증류 시작점이 약 250℃이고 증류 종말점이 410℃인 미네랄 오일, 예를 들어 바셀린 오일, 포화 또는 불포화 지방산의 에스테르, 예컨대 알킬 미리스테이트, 예를 들어 이소프로필, 부틸 또는 세틸 미리스테이트, 헥사데실 스테아레이트, 에틸 또는 이소프로필 팔미테이트, 옥탄산 또는 데칸산 트리글리세리드 및 세틸 리시놀레에이트이다.

지방 상은 또한, 다른 오일에 가용성인 실리콘 오일, 예컨대 디메틸폴리실록산, 메틸페닐폴리실록산 및 실리콘 글리콜 공중합체, 지방산 및 지방 알콜을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 펩티드 이외에, 왁스, 예를 들어 카르나우바 왁스, 칸델릴라 왁스, 비즈왁스, 미정질 왁스, 오조케라이트 왁스, 및 Ca, Mg 및 Al 올레에이트, 미리스테이트, 리놀레에이트 및 스테아레이트를 또한 사용할 수 있다.

추가로, 본 발명에 따른 에멀젼은 O/W 에멀젼의 형태일 수 있다. 이러한 유형의 에멀젼은 통상적으로 오일 상, 물 상에 오일 상을 안정화시키는 유화제, 및 보통 농후한 형태로 존재하는 수성 상을 포함한다. 적합한 유화제는 바람직하게는 O/W 유화제, 예컨대 폴리글리세롤 에스테르, 소르비탄 에스테르 또는 부분적으로 에스테르화된 글리세리드이다.

추가의 바람직한 실시양태에 따라, 본 발명에 따른 조성물은 샤워 젤, 샴푸 제제 또는 목욕 제제이다.

이러한 제제는 본 발명에 따른 하나 이상의 펩티드, 및 통상적으로는 염기 계면활성제로서 음이온성 계면활성제 및 공-계면활성제로서 양쪽성 및/또는 비이온성 계면활성제를 포함한다. 추가의 적합한 활성 성분 및/또는 보조제는 일반적으로, 지질, 향료 오일, 염료, 유기 산, 보존제 및 항산화제, 및 증점제/젤 형성제, 스킨 컨디셔너 및 보습제로부터 선택된다.

상기 제제는 바람직하게는, 제제의 총 중량을 기준으로 2 내지 50 중량％, 바람직하게는 5 내지 40 중량％, 특히 바람직하게는 8 내지 30 중량％의 계면활성제를 포함한다.

바디 클렌징 조성물에서 통상적으로 사용되는 모든 음이온성, 중성, 양쪽성 또는 양이온성 계면활성제는 세정, 샤워 및 목욕 제제에서 사용될 수 있다.

적합한 음이온성 계면활성제는 예를 들어, 알킬 술페이트, 알킬 에테르 술페이트, 알킬술포네이트, 알킬아릴술포네이트, 알킬 숙시네이트, 알킬 술포숙시네이트, N-알코일 사르코시네이트, 아실 타우레이트, 아실 이소티오네이트, 알킬 포스페이트, 알킬 에테르 포스페이트, 알킬 에테르 카르복실레이트, 알파-올레핀술포네이트, 특히 알칼리 금속 및 알칼리 토금속 염, 예를 들어 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 및 또한 암모늄 및 트리에탄올아민 염이다. 알킬 에테르 술페이트, 알킬 에테르 포스페이트 및 알킬 에테르 카르복실레이트는 분자에 1개 내지 10개의 에틸렌 옥시드 또는 프로필렌 옥시드 단위, 바람직하게는 1개 내지 3개의 에틸렌 옥시드 단위를 가질 수 있다.

이들로는 예를 들어, 나트륨 라우릴 술페이트, 암모늄 라우릴 술페이트, 나트륨 라우릴 에테르 술페이트, 암모늄 라우릴 에테르 술페이트, 나트륨 라우릴 사르코시네이트, 나트륨 올레일 숙시네이트, 암모늄 라우릴 술포숙시네이트, 나트륨 도데실벤젠술포네이트, 트리에탄올아민 도데실벤젠술포네이트가 포함된다.

적합한 양쪽성 계면활성제는 예를 들어, 알킬베타인, 알킬아미도프로필베타인, 알킬술포베타인, 알킬 글리시네이트, 알킬 카르복시글리시네이트, 알킬 암포아세테이트 또는 -프로피오네이트, 알킬 암포디아세테이트 또는 -디프로피오네이트이다.

예를 들어, 코코디메틸술포프로필베타인, 라우릴베타인, 코카미도프로필베타인 또는 나트륨 코캄포프로피오네이트가 사용될 수 있다.

적합한 비이온성 계면활성제는 예를 들어, 선형 또는 분지형일 수 있는 알킬 쇄에 6개 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 지방족 알콜 또는 알킬페놀과, 에틸렌 옥시드 및/또는 프로필렌 옥시드의 반응 생성물이다. 알킬렌 옥시드의 양은 알콜 1 몰 당 약 6 내지 60 몰이다. 또한 적합하게는, 알킬아민 옥시드, 모노- 또는 디알킬알칸올아민, 폴리에틸렌 글리콜의 지방산 에스테르, 에톡실화 지방산 아미드, 알킬 폴리글리코시드 또는 소르비탄 에테르 에스테르이다.

추가로, 세정, 샤워 및 목욕 제제는 통상적 양이온성 계면활성제, 예를 들어, 4급 암모늄 화합물, 예를 들어 세틸트리메틸암모늄 클로라이드를 포함할 수 있다.

추가로, 샤워 젤/샴푸 제제는 증점제, 예를 들어 염화나트륨 PEG-55, 프로필렌 글리콜 올레에이트, PEG-120 메틸글루코스 디올레에이트 및 기타, 및 또한 보존제, 추가 활성 성분 및 보조제 및 물을 포함할 수 있다.

ii) 헤어 트리트먼트 조성물에 대한 특정 실시양태

추가의 바람직한 실시양태에 따라, 본 발명에 따른 조성물은 헤어 트리트먼트 조성물이다.

본 발명에 따른 헤어 트리트먼트 조성물은 바람직하게는, 본 발명에 따른 하나 이상의 펩티드를 조성물의 총 중량을 기준으로 약 0.0001 내지 50 중량％, 바람직하게는 0.001 내지 10 중량％, 특히 바람직하게는 0.0057 내지 0.1 중량％의 양으로 포함한다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 헤어 트리트먼트 조성물은 세팅 폼, 헤어 무스, 헤어 젤, 샴푸, 헤어스프레이, 헤어 폼, 최종 플루이드, 파마 웨이브에 대한 중화제, 헤어 염색제 및 표백제 또는 "핫-오일(hot-oil) 트리트먼트" 형태이다. 사용 영역에 따라, 헤어 화장 제제는 (에어로졸) 스프레이, (에어로졸) 폼, 젤, 젤 스프레이, 크림, 로션 또는 왁스로서 적용될 수 있다. 여기서, 헤어스프레이는 에어로졸 스프레이, 및 또한 추진체 기체가 없는 펌프 스프레이 둘 다를 포함한다. 헤어 폼은 에어로졸 폼, 및 또한 추진체 기체가 없는 펌프 폼 둘 다를 포함한다. 헤어스프레이 및 헤어 폼은 바람직하게는, 수용성 또는 수분산성 성분을 우세하게 포함하거나 또는 오로지 이들만 포함한다. 본 발명에 따른 헤어스프레이 및 헤어 폼에서 사용되는 화합물이 수분산성인 경우, 이들은 보통 1 내지 350 nm, 바람직하게는 1 내지 250 nm의 입자 직경을 갖는 수성 미세분산액제의 형태로 적용될 수 있다. 상기 제제의 고체 함량은 통상적으로 약 0.5 내지 20 중량％ 범위이다. 상기 미세분산액제는 통상적으로는 그의 안정화에 대해 유화제 또는 계면활성제를 필요로 하지 않는다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 헤어 화장 제제는 a) 0.0001 내지 50 중량％의 본 발명에 따른 하나 이상의 펩티드, b) 20 내지 99.95 중량％의 물 및/또는 알콜, c) 0 내지 50 중량％의 하나 이상의 추진체 기체, d) 0 내지 5 중량％의 하나 이상의 유화제, e) 0 내지 3 중량％의 하나 이상의 증점제, 및 또한 25 중량％ 이하의 추가 성분을 포함한다.

알콜은 화장품에서 통상적인 모든 알콜, 예를 들어 에탄올, 이소프로판올, n-프로판올을 의미하는 것으로 이해된다.

여기서, 매우 특수한 특성이 설정되는 경우에 본 발명에 따른 펩티드와 조합하여 사용될 수 있는, 화장품에서 공지된 모든 스타일링 및 컨디셔너 중합체가 또한 포함된다.

적합한 통상적 헤어 화장용 중합체는 예를 들어, 거명에 의해 참고로 제공된 상기 언급된 양이온성, 음이온성, 중성, 비이온성 및 양쪽성 중합체이다.

특정 특성을 확립시키기 위해, 제제는 또한 실리콘 화합물을 기재로 한 컨디셔닝 물질을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 실리콘 화합물은 예를 들어, 폴리알킬실록산, 폴리아릴실록산, 폴리아릴알킬실록산, 폴리에테르 실록산, 실리콘 수지 또는 디메티콘 코폴리올 (CTFA) 및 아미노관능성 실리콘 화합물, 예컨대 아모디메티콘 (CTFA)이다.

본 발명에 따른 중합체는 헤어스타일링 제제, 특히 헤어스프레이 (에어로졸 스프레이 및 추진체 기체가 없는 펌프 스프레이) 및 헤어 폼 (에어로졸 폼 및 추진체 기체가 없는 펌프 폼)에서 응고제로서 특히 적합하다.

바람직한 실시양태에서, 스프레이 제제는 a) 0.0001 내지 50 중량％의 본 발명에 따른 하나 이상의 폴리펩티드, b) 20 내지 99.9 중량％의 물 및/또는 알콜, c) 0 내지 70 중량％의 하나 이상의 추진체, d) 0 내지 20 중량％의 추가 성분을 포함한다.

추진체는 헤어스프레이 또는 에어로졸 폼에 대해 통상적으로 사용되는 추진체이다. 바람직하게는, 프로판/부탄 혼합물, 펜탄, 디메틸 에테르, 1,1-디플루오로에탄 (HFC-152 a), 이산화탄소, 질소 또는 압축 공기이다.

본 발명에 따른 바람직한 에어로졸 헤어 폼 제제는 a) 0.0001 내지 50 중량％의 본 발명에 따른 하나 이상의 펩티드, b) 55 내지 99.8 중량％의 물 및/또는 알콜, c) 5 내지 20 중량％의 추진체, d) 0.1 내지 5 중량％의 유화제, e) 0 내지 10 중량％의 추가 성분을 포함한다.

사용될 수 있는 유화제는 헤어 폼에서 통상적으로 사용되는 모든 유화제이다. 적합한 유화제는 비이온성, 양이온성 또는 음이온성 또는 양쪽성일 수 있다.

비이온성 유화제의 예 (INCI 명명법)는 라우레트, 예를 들어 라우레트-4; 세테트, 예를 들어 세테트-1, 폴리에틸렌 글리콜 세틸 에테르, 세테아레트, 예를 들어 세테아레트-25, 폴리글리콜 지방산 글리세리드, 히드록실화된 레시틴, 지방산의 락틸 에스테르, 알킬 폴리글리코시드이다.

양이온성 유화제의 예는 세틸디메틸-2-히드록시에틸암모늄 디히드로겐포스페이트, 세틸트리모늄 클로라이드, 세틸트리모늄 브로마이드, 코코트리모늄 메틸 술페이트, 쿼터늄-1 내지 x (INCI)이다.

음이온성 유화제는 예를 들어, 알킬 술페이트, 알킬 에테르 술페이트, 알킬술포네이트, 알킬아릴술포네이트, 알킬 숙시네이트, 알킬 술포숙시네이트, N-알코일 사르코시네이트, 아실 타우레이트, 아실 이세티오네이트, 알킬 포스페이트, 알킬 에테르 포스페이트, 알킬 에테르 카르복실레이트, 알파-올레핀술포네이트, 특히 알칼리 금속 및 알칼리 토금속 염, 예를 들어 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 및 또한 암모늄 및 트리에탄올아민 염의 군으로부터 선택될 수 있다. 알킬 에테르 술페이트, 알킬 에테르 포스페이트 및 알킬 에테르 카르복실레이트는 분자에 1개 내지 10개의 에틸렌 옥시드 또는 프로필렌 옥시드 단위, 바람직하게는 1개 내지 3개의 에틸렌 옥시드 단위를 가질 수 있다.

스타일링 젤에 대해 본 발명에 따른 적합한 제제는, 예를 들어 a) 0.0001 내지 50 중량％의 본 발명에 따른 하나 이상의 펩티드, b) 80 내지 99.85 중량％의 물 및/또는 알콜, c) 0 내지 3 중량％, 바람직하게는 0.05 내지 2 중량％의 젤 형성제, d) 0 내지 20 중량％의 추가 성분의 조성을 가질 수 있다.

젤 형성제의 사용은 특정 유변학적 특성 또는 젤의 다른 적용 특성을 설정하기 위해 유리할 수 있다. 사용될 수 있는 젤 형성제는 화장품에서 통상적인 모든 젤 형성제이다. 이들로는 약하게 가교된 폴리아크릴산, 예를 들어 카르보머 (INCI), 셀룰로스 유도체, 예를 들어 히드록시프로필셀룰로스, 히드록시에틸셀룰로스, 양이온성으로 개질된 셀룰로스, 다당류, 예를 들어 크산탄 고무, 카프릴산/카프르산 트리글리세리드, 나트륨 아크릴레이트 공중합체, 폴리쿼터늄-32 (및) 파라피눔 리퀴둠 (INCI), 나트륨 아크릴레이트 공중합체 (및) 파라피눔 리퀴둠 (및) PPG-1 트리데세트-6, 아크릴아미도프로필트리모늄 클로라이드/아크릴아미드 공중합체, 스테아레트-10 알릴 에테르, 아크릴레이트 공중합체, 폴리쿼터늄-37 (및) 파라피눔 리퀴둠 (및) PPG-1 트리데세트-6, 폴리쿼터늄-37 (및) 프로필렌 글리콜 디카프레이트 디카프릴레이트 (및) PPG-1 트리데세트-6, 폴리쿼터늄-7, 폴리쿼터늄-44가 포함된다.

본 발명에 따른 펩티드를 포함하는 제제는 바람직하게는, 비듬방지제로서 샴푸 제제에 사용될 수 있다. 바람직한 샴푸 제제는 a) 0.0001 내지 50 중량％의 본 발명에 따른 하나 이상의 펩티드, b) 25 내지 94.95 중량％의 물, c) 5 내지 50 중량％의 계면활성제, c) 0 내지 5 중량％의 추가 컨디셔너, d) 0 내지 10 중량％의 추가의 화장용 성분을 포함한다.

샴푸에서 통상적으로 사용되는 모든 음이온성, 중성, 양쪽성 또는 양이온성 계면활성제는 샴푸 제제에서 사용될 수 있다.

적합한 음이온성 계면활성제는 예를 들어, 알킬 술페이트, 알킬 에테르 술페이트, 알킬술포네이트, 알킬아릴술포네이트, 알킬 숙시네이트, 알킬 술포숙시네이트, N-알코일 사르코시네이트, 아실 타우레이트, 아실 이소티오네이트, 알킬 포스페이트, 알킬 에테르 포스페이트, 알킬 에테르 카르복실레이트, 알파-올레핀술포네이트, 특히 알칼리 금속 및 알칼리 토금속 염, 예를 들어 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘, 및 암모늄 및 트리에탄올아민 염이다. 알킬 에테르 술페이트, 알킬 에테르 포스페이트 및 알킬 에테르 카르복실레이트는 분자에 1개 내지 10개의 에틸렌 옥시드 또는 프로필렌 옥시드 단위, 바람직하게는 1개 내지 3개의 에틸렌 옥시드 단위를 가질 수 있다.

적합한 것은, 예를 들어 나트륨 라우릴 술페이트, 암모늄 라우릴 술페이트, 나트륨 라우릴 에테르 술페이트, 암모늄 라우릴 에테르 술페이트, 나트륨 라우로일 사르코시네이트, 나트륨 올레일 숙시네이트, 암모늄 라우릴 술포숙시네이트, 나트륨 도데실벤젠술포네이트, 트리에탄올아민 도데실벤젠술포네이트이다.

적합한 비이온성 계면활성제는 예를 들어, 선형 또는 분지형일 수 있는 알킬 쇄에 6개 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 지방족 알콜 또는 알킬페놀과, 에틸렌 옥시드 및/또는 프로필렌 옥시드의 반응 생성물이다. 알킬렌 옥시드의 양은 알콜 1 몰 당 약 6 내지 60 몰이다. 또한 적합하게는, 알킬아민 옥시드, 모노- 또는 디알킬알칸올아미드, 폴리에틸렌 글리콜의 지방산 에스테르, 알킬 폴리글리코시드 또는 소르비탄 에테르 에스테르이다.

추가로, 샴푸 제제는 통상의 양이온성 계면활성제, 예를 들어 4급 암모늄 화합물, 예를 들어 세틸트리메틸암모늄 클로라이드를 포함할 수 있다.

특정 효과를 달성하기 위해서, 샴푸 제제에서 통상적 컨디셔너가 본 발명에 따른 펩티드와 조합되어 사용될 수 있다.

이들로는 예를 들어, INCI 상표명 폴리쿼터늄을 갖는 상기 언급된 양이온성 중합체, 특히 비닐피롤리돈/N-비닐이미다졸리움 염의 공중합체 (루비쿼트 FC, 루비쿼트 HM, 루비쿼트 MS, 루비쿼트 케어), 디에틸 술페이트와 함께 4급화된 N-비닐피롤리돈/디메틸아미노에틸 메타크릴레이트의 공중합체 (루비쿼트 D PQ 11), N-비닐카프로락탐/N-비닐피롤리돈/N-비닐이미다졸리움 염의 공중합체 (루비쿼트 D 홀드), 양이온성 셀룰로스 유도체 (폴리쿼터늄-4 및 -10), 아크릴아미드 공중합체 (폴리쿼터늄-7)가 포함된다. 또한, 단백질 가수분해물, 및 또한 실리콘 화합물을 기재로 한 컨디셔닝 물질, 예를 들어 폴리알킬실록산, 폴리아릴실록산, 폴리아릴알킬실록산, 폴리에테르 실록산 또는 실리콘 수지가 사용될 수 있다. 추가의 적합한 실리콘 화합물은 디메티콘 코폴리올 (CTFA) 및 아미노관능성 실리콘 화합물, 예컨대 아모디메티콘 (CTFA)이다. 또한, 양이온성 구아르 유도체, 예컨대 구아르 히드록시프로필트리모늄 클로라이드 (INCI)가 사용될 수 있다.

본 발명은 이제 하기 비제한적 실시예를 참고로 추가로 예시될 것이다.

실험 부분

1. 시험 실시예 A

실시예 1: P18에 의한 말라세지아 푸르푸르의 억제

성장 배지: DSMZ에 따른 M472-피티로스포룸(Pityrosporum) 배지

40 g/l의 맥아 추출물

20 g/l의 소 담즙

10 g/l의 트윈(Tween) 40

성분들을 121℃, 1 bar의 초대기압에서 20분 동안 멸균시켰다.

2 g/l의 올리브 오일을 여과에 의해 멸균시키고, 오토클레이빙(autoclaving) 후 다른 성분에 첨가하였다.

이는 2-상 배지이기 때문에, 상 경계를 넓히기 위해 완전 배지를 초음파분해로 처리하였다.

한천 플레이트에 대해, 적절한 경우, 150 g/l의 한천 한천을 배지에 첨가하였다.

성장 시험을 하기와 같이 수행하였다: M472-피티로스포룸 배지를 함유한 진탕 플라스크에 말라세지아 푸르푸르를 접종하고, 30℃ 및 200 rpm에서 밤새 진탕시키면서 인큐베이션시켰다.

96-웰 마이크로티터 플레이트를 각 경우에 100 μl의 M472-피티로스포룸 배지로 충전시키고, 밤새 배양한 말라세지아 푸르푸르 현탁액을 접종하였다. 실험을 개시하고나서, 말라세지아 푸르푸르 현탁액은 0.02 (620 nm에서 측정됨)의 광학 밀도로 조정하였다. 억제제 용액의 농도는 물 또는 DMSO 중에서 1 mM이었다.

하기 배치의 성장을 광학 밀도를 측정함으로써 비교하였다:

- 억제제를 첨가하지 않은 말라세지아 푸르푸르 현탁액.

- 나머지 실험과 비교할 수 있는, 억제제는 첨가하지 않고 DMSO 2.5 μl를 첨가한 말라세지아 푸르푸르 현탁액. 이는 억제가 단지 DMSO의 영향에 기인하거나, 또는 잘못된 양의 결과가 관찰되는 것을 배제하기 위함이다.

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 25 μM의 최종 농도를 갖는 P18 수용액의 첨가.

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 25 μM의 최종 농도를 갖는 DMSO 중 P18 용액의 첨가.

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 25 μM의 최종 농도를 갖는 DMSO 중 아연 피리티온 (ZPT, 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)) 용액의 첨가.

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 25 μM의 최종 농도를 갖는 DMSO 중 케토코나졸 (시그마-알드리치) 용액의 첨가.

마이크로티터 플레이트를 30℃에서 진탕시키면서 인큐베이션시켰다.

성장을 광학 밀도를 측정함으로써 40시간에 걸쳐 관찰하였다. 이어서, 상기 현탁액 각각으로부터 10 μl를 플레이팅하고, 6일 동안 인큐베이션시킨 후에 집락을 계수하여 집락-형성 단위 (CFU)를 측정하였다. CFU를 측정하여 광학 밀도에 대한 2-상 배지 및 또한 말라세지아 푸르푸르의 성장 형태의 영향을 배제하였다. 그러나, 모든 실험에서, CFU는 측정된 성장 곡선과 관련이 있다. CFU 측정은 측정가능한 성장 없음과 비교하여 약한 성장을 탐지하는데 도움이 된다. 실험은 적어도 3회 측정하였고 독립적으로 반복하였다. 하나의 예시적 실험의 결과를 하기 표 1 및 2에 요약하였다.

광학 밀도 및 CFU에 대한 측정은 말라세지아 푸르푸르의 성장이 관찰되는 시간 동안에 걸쳐 효과적으로 억제되었음을 보여준다. 40시간까지, 이러한 억제는 아연 피리티온 (ZPT) 또는 케토코나졸과 같은 활성 성분과 비교하여 보다 효과적이었다.

실시예 2: 마가이닌 2 및 세크로핀 A와 비교하여 P18에 의한 말라세지아 푸르푸르의 억제

융합 펩티드 P18은 마가이닌 2 및 세크로핀 A로부터 유래하였다. 따라서, P18이 말라세지아 푸르푸르의 성장을 마가이닌 2 또는 세크로핀 A 단독으로보다 효과적으로 억제할 수 있는지 아닌지를 조사하였다. 이에 대해, 절차는 실시예 1에 기재된 바와 같다. DMSO 중에서 융합 펩티드 P18, 마가이닌 2 및 세크로핀 A의 1 mM 원액을 제조하였다. 성장 실험에서 펩티드의 최종 농도는 25 μM이었다. DMSO의 성장-억제 효과를 배제하기 위해, 동일한 양의 DMSO를 마찬가지로 억제제-무함유 현탁액에 첨가하였다.

하기 혼합물의 성장을 광학 밀도를 측정함으로써 비교하였다:

- 나머지 실험과 비교할 수 있는, 억제제는 첨가하지 않고 DMSO 2.5 μl를 첨가한 말라세지아 푸르푸르 현탁액. 이는 억제가 단지 DMSO의 영향에 기인한 것을 배제하기 위함이다.

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 25 μM의 최종 농도를 갖는 DMSO 중 마가이닌 2 용액의 첨가.

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 25 μM의 최종 농도를 갖는 DMSO 중 세크로핀 A 용액의 첨가.

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 25 μM의 최종 농도를 갖는 DMSO 중 펩티드 P18 (서열 3) 용액의 첨가.

예시적 실험의 실험 결과를 하기 표 3에 요약하였다.

펩티드 P18은 마가이닌 2 또는 세크로핀 A 단독으로보다 말라세지아 푸르푸르의 성장을 효과적으로 억제하는 것이 발견되었다.

실시예 3: P18의 장기 안정성

P18의 장기 안정성을 2주의 기간에 걸쳐 관찰하였다. 이에 대해, 물 중의 1 mM P18 용액을 전체 기간 동안 37℃에서 인큐베이션시켰다. 실험을 개시하고나서 2주째에, 항미생물 활성을 에스케리키아 콜라이의 성장 억제를 통해 탐지하였다. 여기서 사용되는 성장 배지는 복합 배지로서 LB 배지였다. 배지는 1 l 당 트립톤 10 g, 효모 추출물 5 g 및 NaCl 10 g을 포함하였다.

성장 시험을 하기와 같이 수행하였다: LB 배지를 함유한 진탕 플라스크에 에스케리키아 콜라이를 접종하고, 37℃ 및 200 rpm에서 진탕시키면서 밤새 인큐베이션시켰다. 96-웰 마이크로티터 플레이트를 각 경우에 100 μl의 LB 배지로 충전시키고, 밤새 배양한 에스케리키아 콜라이 현탁액을 접종하였다. 실험을 개시하고나서, 에스케리키아 콜라이 현탁액은 약 0.02 (620 nm에서 측정됨)의 광학 밀도로 조정하였다. P18 억제제 용액의 농도는 물 중에서 1 mM이었다.

- 억제제를 첨가하지 않은 에스케리키아 콜라이 현탁액.

- 에스케리키아 콜라이 현탁액 및 25 μM의 최종 농도를 갖는 P18 수용액의 첨가. P18 수용액은 새롭게 제조하였다.

- 에스케리키아 콜라이 현탁액 및 25 μM의 최종 농도를 갖는 P18 수용액의 첨가. 수성 원액은 37℃에서 2주 동안 인큐베이션시켰다.

성장을 광학 밀도를 측정함으로써 40시간에 걸쳐 관찰하였다. 항미생물 활성은 37℃에서 2주 동안 인큐베이션시킨 후에도 변화되지 않고, 40시간에 걸쳐 에스케리키아 콜라이의 성장은 효과적으로 억제된다는 것이 발견되었다. 결과는 하기 표 4에 요약하였다.

실시예 4: P18의 생물분해성

먼저, 키모트립신 (소 췌장으로부터, 시그마)을 첨가하여 펩티드 P18을 소화시켰다. 이에 대해, 1 mM P18 용액을 제조업자의 지시사항에 따라 제조하고 처리하였다. 샘플을 37℃에서 16시간 동안 인큐베이션시켰다. 사용되는 음성 대조군은 키모트립신을 첨가하지 않은 P18 용액, 또는 키모트립신만을 포함하고 P18은 포함하지 않는 대조군 용액의 샘플이다. 이어서, 에스케리키아 콜라이 세포에 대한 P18의 항미생물 활성을 조사하였다. 시험은 실시예 3에 기재된 바와 같이 수행하였다.

- 억제제를 첨가하지 않은 에스케리키아 콜라이 현탁액.

- 에스케리키아 콜라이 현탁액 및 10 μM의 최종 농도를 갖는 P18 수용액의 첨가. P18 용액은 사전에 37℃에서 16시간 동안 저장하였다.

- 에스케리키아 콜라이 현탁액 및 10 μM의 최종 농도를 갖는 P18 수용액의 첨가. P18 용액은 제조업자의 지시사항에 따라 사전에 37℃에서 16시간 동안 저장하고, 키모트립신으로 처리하였다.

- 에스케리키아 콜라이 현탁액 및 대조군으로서 키모트립신으로 소화된 P18 용액과 동일한 양의 키모트립신을 포함하는 키모트립신 수용액의 첨가. 이 용액도 또한 사전에 37℃에서 16시간 동안 저장하였다. 상기 혼합물은 키모트립신의 항미생물 효과를 배제할 수단으로 선택된다.

성장을 광학 밀도를 측정함으로써 16시간에 걸쳐 관찰하였다. 모든 샘플의 광학 밀도는 유사하게 전개, 즉, 미생물의 성장이 일어나는 것으로 발견되었다. 소화되지 않은 P18 용액이 첨가된 혼합물만이 미생물의 성장 없음 또는 강하게 억제된 미생물의 성장을 나타내었다. 이러한 결과는 세린 프로테아제, 예를 들어 키모트립신으로의 P18의 소화가 가능함을 나타내며, 상기 펩티드의 생물분해성을 입증한다. 결과는 하기 표 5에 요약하였다.

실시예 5: 그램-양성 및 그램-음성 세균의 억제

P18에 의한 성장 억제를 그램-양성 및 그램-음성 세균에 대해 조사하였다. 문헌 [Shin et al. 1999 (loc.cit.)]에는 18시간까지의 기간 안에 유기체 모델 에스케리키아 콜라이 및 바실루스 수브틸리스에 대한 억제가 이미 기록되어 있다. 그러나, 상기 문헌에서의 성장 실험은 P18에 의한 억제가 그램-양성 및 그램-음성 세균에 대해 상이하게 작용함을 보여준다.

이에 대해 사용되는 성장 배지는 유기체 에스케리키아 콜라이, 바실루스 수브틸리스 및 브레비박테리움 에피데르미디스(Brevibacterium epidermidis)에 대해 복합 배지로서 LB 배지였다. 배지는 1 l 당 트립톤 10 g, 효모 추출물 5 g 및 NaCl 10 g을 포함하였다.

성장 시험을 하기와 같이 수행하였다: 배지를 함유한 진탕 플라스크에 에스케리키아 콜라이, 바실루스 수브틸리스 또는 브레비박테리움 에피데르미디스를 접종하고, 30℃ 및 200 rpm에서 밤새 진탕시키면서 인큐베이션시켰다. 96-웰 마이크로티터 플레이트를 각 경우에 100 μl의 LB 배지로 충전시키고, 밤새 배양한 에스케리키아 콜라이, 바실루스 수브틸리스 또는 브레비박테리움 에피데르미디스 현탁액을 접종하였다. 실험을 개시하고나서, 세균 현탁액은 약 0.02 (620 nm에서 측정됨)의 광학 밀도로 조정하였다. P18 억제제 용액의 농도는 물 중에서 1 mM이었다.

- 억제제를 첨가하지 않은 세균 현탁액;

- 세균 현탁액 및 25 μM의 최종 농도를 갖는 P18 수용액의 첨가. P18 수용액은 새롭게 제조하였다.

성장을 광학 밀도를 측정함으로써 40시간에 걸쳐 관찰하였다. P18은 이 기간에 걸쳐 그램-음성 에스케리키아 콜라이의 성장을 효과적으로 억제하는 것으로 밝혀졌다. 그램-양성 세균의 성장은 초기에 억제되었다. 그러나, 40시간의 실험 기간 안에, P18로 억제되는 유기체 모델 바실루스 수브틸리스 및 브레비박테리움 에피데르미디스는 억제되지 않은 배양물에 필적하는 성장 밀도를 달성하였다. 이 결과는 그램-양성 및 그램-음성 세균에 대한 P18의 상이한 효과를 시사한다. 이러한 특성은 인간 피부 세균총이 바람직하게는 그램-양성 세균에 의해 차지되고, 그 결과 P18의 적용이 장기적으로 이를 파괴시키기 못하기 때문에 유리하다. 결과는 하기 표 6에 요약하였다.

2. 제제 실시예 A

펩티드 P18을 포함하는 피부화장 제제를 하기에 기재하였다. 펩티드 P18은 상기 기재된 모든 다른 펩티드를 대표하여 하기 실시예에서 명시된다. 본 발명에 따른 모든 다른 특정 펩티드가 하기 제시된 제법에서 또한 사용될 수 있는 것으로 당업자에 의해 인지될 것이다.

AI = 활성 성분

실시예 6: 데이 케어용 에멀젼 - O/W 유형에서의 P18의 용도

제법: 상 A 및 B를 서로 개별적으로 약 80℃로 가열하였다. 상 B를 상 A에 넣어 교반하고 균질화시켰다. 다시 상 C를 합한 상 A 및 B에 넣어 교반하고 균질화시켰다. 교반하면서 약 40℃로 냉각시키고, 상 D를 첨가하고, 상 E를 사용하여 pH를 약 6.5로 조정하고, 균질화시킨 다음 교반하면서 실온으로 냉각시켰다.

제제를 보호 기체 없이 제조하였다. 병입(Bottling)은 산소-불침투성 포장, 예를 들어 알루미늄 튜브 안에서 이루어져야 한다.

실시예 7: 보호 데이 크림 - O/W 유형에서의 P18의 용도

제법: 상 A 및 B를 서로 개별적으로 약 80℃로 가열하였다. 상 B를 상 A에 넣어 교반하고 균질화시켰다. 상 C를 합한 상 A 및 B에 혼입시키고 균질화시켰다. 교반하면서 약 40℃로 냉각시켰다. 상 D를 첨가하고, 상 E를 사용하여 pH를 약 6.5로 조정하고, 균질화시켰다. 교반하면서 실온으로 냉각시켰다.

실시예 8: 페이스 클렌징 로션 - O/W 유형에서의 P18의 용도

제법: 상 A를 용해시켰다. 상 B를 상 A에 넣고 교반한 다음, 상 C를 합한 상 A 및 B에 혼입시켰다. 상 D를 용해시키고, 합한 상 A, B 및 C에 넣어 교반하고 균질화시켰다. 이어서, 15분 동안 교반하였다.

실시예 9: 데일리 케어 바디 스프레이에서의 P18의 용도

제법: 상 A의 성분을 칭량한 다음 용해시켜 투명한 용액을 제공하였다.

실시예 10: 스킨케어 젤에서의 P18의 용도

제법: 상 A를 용해시켜 투명한 용액을 제공하였다. 상 B를 팽윤시키고, 상 C를 사용하여 중화시켰다. 상 A를 균질화된 상 B 안에 넣어 교반하고 균질화시켰다.

실시예 11: 애프터쉐이브 로션에서의 P18의 용도

제법: 상 A의 성분을 혼합하였다. 상 B를 용해시키고, 상 A에 혼입시킨 다음 균질화시켰다.

실시예 12: 애프터선 로션에서의 P18의 용도

제법: 상 A의 성분을 혼합하였다. 상 B를 상 A에 넣어 교반하고 균질화시켰다. 상 C를 사용하여 중화시킨 다음 다시 균질화시켰다.

실시예 13: 선스크린 로션에서의 P18의 용도

제법: 상 A 및 B의 성분을 서로 개별적으로 약 80℃로 가열하였다. 상 B를 상 A에 넣어 교반하고 균질화시켰다. 상 C를 약 80℃로 가열한 다음, 합한 상 A 및 B에 넣어 교반하고 균질화시켰다. 교반하면서 약 40℃로 냉각시키고, 상 D를 첨가한 다음 다시 균질화시켰다.

실시예 14: 선스크린 로션 - O/W 유형에서의 P18의 용도

제법: 상 A를 약 80℃로 가열한 다음, 상 B에 넣어 3분 동안 교반하고 균질화시켰다. 마찬가지로, 상 C를 80℃로 가열한 다음, 합한 상 A 및 B에 넣어 교반하고 균질화시켰다. 약 40℃로 냉각시키고, 다시 상 D에 넣어 교반하고 균질화시켰다.

실시예 15: 선스크린 로션 - O/W 유형에서의 P18의 용도

실시예 16: 풋 밤에서의 P18의 용도

제법: 상 A 및 B의 성분을 서로 개별적으로 약 80℃로 가열하였다. 상 B를 상 A에 넣어 교반하고 균질화시켰다. 교반하면서 약 40℃로 냉각시키고, 상 C 및 D를 첨가한 다음, 잠시 후균질화시켰다. 교반하면서 실온으로 냉각시켰다.

실시예 17: 비사볼롤을 함유한 W/O 에멀젼에서의 P18의 용도

제법: 상 A 및 B를 서로 개별적으로 약 85℃로 가열하였다. 상 B를 상 A에 넣어 교반하고 균질화시켰다. 교반하면서 약 40℃로 냉각시키고, 상 C를 첨가하고, 다시 잠시 동안 균질화시켰다. 교반하면서 실온으로 냉각시켰다.

실시예 18: 응고제를 함유한 폼 컨디셔너

제법: 상 A의 성분을 함께 칭량하고, 모든 성분들이 용해될 때까지 교반한 다음 병에 담았다.

실시예 19: 폼 컨디셔너

제법: 상 A의 성분을 함께 칭량하고, 모든 성분들이 용해될 때까지 교반하여 투명한 용액을 제공하고, 이를 병에 담았다.

실시예 20: 폼 컨디셔너

실시예 21: 스타일링 폼

제법: 상 A의 성분을 혼합하였다. 상 B의 성분을 순차적으로 첨가하고 용해시켰다. 상 C와 함께 병에 담았다.

실시예 22: 스타일링 폼

실시예 23: 스타일링 폼

제법: 상 A의 성분을 혼합하였다. 상 B의 성분을 용해시켜 투명한 용액을 제공한 다음, 상 B를 상 A에 넣어 교반하였다. pH를 6 내지 7로 조정하고, 상 C와 함께 병에 담았다.

실시예 24: 스타일링 폼

제법: 상 A의 성분을 혼합하였다. 상 B의 성분을 순차적으로 첨가하고 용해시켰다. 상 C를 A 및 B의 혼합물 중에 용해시킨 다음, pH를 6 내지 7로 조정하였다. 상 D와 함께 병에 담았다.

실시예 25: 스타일링 폼

제법: 상 A의 성분을 혼합하였다. 상 B의 성분을 순차적으로 첨가하고 용해시켰다. 상 C를 상 A 및 B의 혼합물 중에 용해시킨 다음, pH를 6 내지 7로 조정하였다. 상 D와 함께 병에 담았다.

실시예 26: 스타일링 폼

제법: 상 A를 가용화시켰다. 상 B를 칭량하고 상 A 중에 용해시켜 투명한 용액을 제공하였다. pH를 6 내지 7로 조정하고, 상 C와 함께 병에 담았다.

실시예 27: 스타일링 폼

실시예 28: 스타일링 폼

실시예 29: 스타일링 폼

실시예 30: 케어 샴푸

제법: 상 A의 성분을 혼합하고 용해시켰다. pH를 시트르산을 사용하여 6 내지 7로 조정하였다.

실시예 31: 샤워 젤

실시예 32: 샴푸

실시예 33: 샴푸

제법: 상 A의 성분을 칭량하고 용해시켰다. pH를 6 내지 7로 조정하였다. 상 B를 첨가하고 약 50℃로 가열하였다. 교반하면서 실온으로 냉각시켰다.

실시예 34: 모이스쳐라이징 바디케어 크림

제법: 상 A 및 B를 개별적으로 약 80℃로 가열하였다. 상 B를 잠시 예비균질화시킨 다음, 상 B를 상 A에 넣어 교반하고 다시 균질화시켰다. 약 40℃로 냉각시키고, 상 C를 첨가한 다음 다시 충분히 균질화시켰다. pH를 시트르산을 사용하여 6 내지 7로 조정하였다.

실시예 35: 모이스쳐라이징 바디케어 크림

제법: 상 A 및 B를 개별적으로 약 80℃로 가열하였다. 상 B를 상 A에 넣어 교반하고 균질화시켰다. 교반하면서 약 40℃로 냉각시키고, 상 C를 첨가한 다음 다시 균질화시켰다. 교반하면서 실온으로 냉각시켰다.

실시예 36: 리퀴드 메이크업 - O/W 유형

제법: 상 A 및 B를 개별적으로 약 80℃로 가열하였다. 상 B를 상 A에 넣어 교반하고 균질화시켰다. 교반하면서 약 40℃로 냉각시키고, 상 C 및 D를 첨가한 다음 다시 완전히 균질화시켰다. 교반하면서 실온으로 냉각시켰다.

실시예 37: 피부화장 제제

본 발명에 따른 펩티드 P18을 포함하는 본 발명에 따른 피부화장 제제를 하기에 기재하였다. 농도는 본 발명에 따라 달라질 수 있다.

하기 데이타는 중량부이다.

실시예 38: 선스크린 화장 제제

하기 제제는 하나 이상의 무기 안료, 바람직하게는 산화아연 및/또는 이산화티탄, 및 유기 UV-A 및 UV-B 필터의 조합물을 포함하는 선스크린 화장 제제를 기재한다.

하기 제시된 제제는 당업자에게 공지된 통상적 방식으로 제조한다.

P18의 함량은 활성 성분의 100％를 지칭한다. 본 발명에 따른 활성 성분은 순수한 형태 또는 수용액의 형태로 사용될 수 있다. 수용액의 경우, 특정 제제에서의 물 요구량의 함량은 조절될 것이다.

실시예 39: 헤어 토닉에서의 P18의 용도

제법: 상 A를 혼합하였다. 상 B를 첨가하고 모든 성분들이 용해될 때까지 교반하였다. pH를 7.0으로 조정하였다.

실시예 40: 헤어 젤에서의 P18의 용도

제법: 상 A의 성분들을 칭량하고 균질화시켰다. 상 B를 상 A 중에 용해시키고 교반하였다. pH를 6.9로 조정하였다.

3. 시험 실시예 B

실시예 41: 말라세지아 푸르푸르에 대해 시험된 P18의 장기 안정성

보다 긴 시간 동안의 저장이 필요할 수 있기 때문에, 하기에서 1 mM P18 펩티드 용액 (P18 서열 H-KWKLFKKIPKFLHLAKKF - NH₂)을 37℃에서 12주 동안 저장하고, 말라세지아 푸르푸르에 대한 저장액의 항진균 활성을 새롭게 제조된 1 mM P18 펩티드 용액의 활성과 비교하였다. 이는 성장 시험 동안 내내 행해졌고, 시험은 하기와 같이 수행하였다:

성장 배지: DSMZ에 따른 M472-피티로스포룸 배지

40 g/L의 맥아 추출물

20 g/L의 소 담즙

10 g/L의 트윈 40

성분들을 121℃, 1 bar의 초대기압에서 20분 동안 멸균시켰다.

2 g/L의 올리브 오일 (여과에 의해 멸균시키고, 오토클레이빙 후 다른 성분에 첨가함)

96-웰 마이크로티터 플레이트를 각 경우에 100 μl의 M472-피티로스포룸 배지로 충전시키고, 밤새 배양한 말라세지아 푸르푸르 현탁액을 접종하였다. 실험을 개시하고나서, 말라세지아 푸르푸르 현탁액은 0.02 (600 nm에서 측정됨)의 광학 밀도로 조정하였다. 억제제 용액의 농도는 물 중에서 1 mM이었다.

하기 배치의 성장을 비교하였다:

- 억제제를 첨가하지 않은 말라세지아 푸르푸르 현탁액.

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 50 μM의 최종 농도를 갖는 새로운 P18 수용액의 첨가.

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 25 μM의 최종 농도를 갖는 새로운 P18 수용액의 첨가.

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 50 μM의 최종 농도를 갖는, 37℃에서 12주 동안 저장된 P18 용액의 첨가.

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 25 μM의 최종 농도를 갖는, 37℃에서 12주 동안 저장된 P18 용액의 첨가.

성장을 광학 밀도를 측정함으로써 24시간에 걸쳐 관찰하였다. 이어서, 상기 현탁액 각각으로부터 1 μl 및 5 μl를 플레이팅하고, 6일 동안 인큐베이션시킨 후에 집락을 계수하여 집락-형성 단위 (CFU)를 측정하였다. CFU를 측정하여 광학 밀도에 대한 2-상 배지 및 또한 말라세지아 푸르푸르의 성장 형태의 영향을 배제하였다. 실험은 적어도 3회 측정하였다.

성장 시험의 결과는 집락 형성 단위로서 측정된 말라세지아 푸르푸르의 성장이 12주 동안 저장된 P18 펩티드 용액뿐만 아니라 새로운 P18 펩티드 용액에 의해 효과적으로 억제되었음을 나타낸다. 이는 P18 펩티드 용액의 저장이 용액의 활성에 영향을 미치지 않고, 이에 따라 용액을 상기 기간 동안 저장할 수 있음을 의미한다.

실시예 42: P18의 제제가능성

펩티드 P18의 제제가능성을 3 종류의 샴푸 기본 제제에서 시험하였다. 이에 대해, 제1 단계에서, 하기 조성을 갖는 제제를 제조하였다:

성분들을 혼합하고 용해시켰다. pH를 NaOH를 사용하여 6 내지 7로 조정하였다. 하기에서, 100 mM의 펩티드 P18 (P18 서열 H-KWKLFKKIPKFLHLAKKF - NH₂) 용액을 2개 제조하였다. 한 용액은 용매로서 DMSO를 사용하여 제조하였고, 다른 용액은 물을 사용하여 제조하였다. 상응하는 부피의 100 mM 펩티드 용액을 제제 각각에 첨가하여 제제 31-1 및 31-2의 최종 농도가 10 mM이 되도록 하고, 제제 31-3에서 펩티드 P18의 최종 농도는 5 mM이 되도록 하였다. 이렇게 얻어진 제제는 투명하고 균질하였다.

실시예 43: 성분으로서 P18을 함유하는 샴푸 기본 제제의 효과

이 실험의 목적은 성분으로서 펩티드 P18 (P18 서열 H-KWKLFKKIPKFLHLAKKF - NH₂)을 함유하는 샴푸 기본 제제의 효과를 분석하기 위한 것이다. 이를 위해, 이 실험에서는 펩티드 P18을 제제에 직접 첨가하였다. 제1 단계에서, 하기 조성을 갖는 제제를 제조하였다:

성분 텍사폰 NSO 및 테고 베타인 L7을 혼합하고 용해시켰다. pH를 NaOH를 사용하여 6 내지 7로 조정하였다. 하기에서, 펩티드 P18 (P18 서열 H-KWKLFKKIPKFLHLAKKF - NH₂)의 100 mM 수용액을 제조하였다. 상응하는 부피의 100 mM P18 펩티드 용액을 제제에 첨가하여 제제 31-3에서 펩티드 P18의 최종 농도가 5 mM이 되도록 하였다. 상기 기재된 바와 같이, 이렇게 얻어진 제제는 투명하고 균질하였다. 이어서, 진균 말라세지아 푸르푸르에 대한 제제의 효능을 펩티드 P18을 함유하지 않는 샴푸 기본 제제와 비교하였다.

요약하면, 시험을 하기와 같이 수행하였다:

성장 배지: DSMZ에 따른 M472-피티로스포룸 배지

40 g/L의 맥아 추출물

20 g/L의 소 담즙

10 g/L의 트윈 40

성분들을 121℃, 1 bar의 초대기압에서 20분 동안 멸균시켰다.

96-웰 마이크로티터 플레이트를 각 경우에 170 μl의 M472-피티로스포룸 배지로 충전시키고, 밤새 배양한 말라세지아 푸르푸르 현탁액 10 μl를 접종하였다. 이는 0.02 - 0.1 (620 nm에서 측정됨)의 광학 밀도에 상응하였다. 샴푸 기본 제제 20 μl 및 성분으로서 P18을 함유하는 샴푸 기본 제제 31-3 20 μl를 각각 상기 혼합물에 첨가하였다.

따라서, 요약하면, 하기 혼합물을 이 실험에서 비교하였다:

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 20 μl의 샴푸 기본 제제 31-3의 첨가

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 성분으로서 P18을 함유하는 20 μl의 샴푸 기본 제제 31-3의 첨가

인큐베이션시킨지 24시간 후, 배지 10 μl 중에 각각의 현탁액 1 μl를 재현탁시킨 다음 수득한 현탁액을 플레이팅하여 집락-형성 단위 (CFU)를 측정하였다. 6일 동안 인큐베이션시킨 후, 플레이트 상의 집락을 계수하였다. CFU를 측정하여 광학 밀도에 대한 2-상 배지 및 또한 말라세지아 푸르푸르의 성장 형태의 영향을 배제하였다. 실험은 적어도 2회의 독립적 실험으로, 각각 이중 측정하여 수행하였다.

결과는 샴푸 기본 제제 31-3 자체가 이미 말라세지아 푸르푸르에 대해 측정가능한 성장 억제 효과를 가짐을 나타낸다. 그러나, 성분으로서 P18을 함유하는 샴푸 기본 제제 31-3으로는 측정가능한 성장이 전혀 없다. 이는 펩티드 P18의 항진균 효과가 상기 제제에서 유지된다는 것을 보여준다. 말라세지아 푸르푸르의 성장은 측정되지 않았기 때문에, 사실상 훨씬 낮은 농도의 성분 P18 또는 필적하는 펩티드 또는 다른 필적하는 제제가 말라세지아 푸르푸르 및 기타 말라세지아 종의 성장을 억제하는데 사용될 수 있다고 여겨질 수 있다.

실시예 44: 중량％ (％(중량/중량))를 기준으로 동등한 농도의 펩티드 P18, 아연피리티온, 클림바졸 및 케토코나졸로의 말라세지아 푸르푸르의 성장 억제

진균 말라세지아 푸르푸르의 성장을 억제하는, 펩티드 P18 (P18 펩티드 서열 H - KWKLFKKIPKFLHLAKKF - NH₂) 및 현재 시판되는 비듬방지 샴푸 성분의 몰 질량은 매우 상이하다. 펩티드 P18은 2300 g/mol의 몰 질량을 가지고, 아연피리티온은 317 g/mol의 몰 질량을 가지고, 케토코나졸은 531 g/mol의 몰 질량을 가지고, 클림바졸은 292 g/mol의 몰 질량을 갖는다. 말라세지아 푸르푸르의 성장 억제를 분석하는 실험이 이전의 실시예에서 필적하는 몰 농도로 수행되었기 때문에, 이 실시예에서는 말라세지아 푸르푸르의 성장 억제를 중량％ (％(중량/중량))를 기준으로 동등한 농도의 펩티드 P18, 아연피리티온, 클림바졸 및 케토코나졸을 사용하여 분석하였다. 이에 대해, 절차는 하기와 같다:

성장 배지: DSMZ에 따른 M472-피티로스포룸 배지

40 g/L의 맥아 추출물

20 g/L의 소 담즙

10 g/L의 트윈 40

성분들을 121℃, 1 bar의 초대기압에서 20분 동안 멸균시켰다.

96-웰 마이크로티터 플레이트를 각 경우에 100 μl의 M472-피티로스포룸 배지로 충전시키고, 밤새 배양한 말라세지아 푸르푸르 현탁액을 접종하였다. 실험을 개시하고나서, 말라세지아 푸르푸르 현탁액은 0.02 (600 nm에서 측정됨)의 광학 밀도로 조정하였다. 억제제 용액의 농도는 펩티드 18의 경우 DMSO 중에서 1 mM이었고, 아연피리티온, 케토코나졸 및 클림바졸의 경우 DMSO 중에서 10 mM이었다. DMSO 최종 농도는 모든 실험에서 동일하게 유지하였다. 이는 P18을 함유하는 혼합물과의 비교가능성을 확실하게 하기 위해, 상응하는 부피의 DMSO가 보다 높은 농도의 아연피리티온, 케토코나졸 또는 클림바졸 농축물의 경우에서 혼합물에 첨가된다는 것을 의미한다.

하기 배치의 성장을 광학 밀도를 측정함으로써 비교하였다:

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 50 μM (0.0115 ％(w/w)와 동등함)의 최종 농도를 갖는 P18 용액의 첨가

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 362 μM의 최종 농도를 갖는 아연피리티온 (ZPT) 용액의 첨가 (50 μM의 펩티드 P18을 함유하는 혼합물과 비교)

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 216 μM의 최종 농도를 갖는 케토코나졸 용액의 첨가 (50 μM의 펩티드 P18을 함유하는 혼합물과 비교)

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 390 μM의 최종 농도를 갖는 클림바졸 용액의 첨가 (50 μM의 펩티드 P18을 함유하는 혼합물과 비교)

인큐베이션시킨지 24시간 후, 각 현탁액으로부터의 배지 10 μl를 한천 플레이트 상에 플레이팅하여 집락-형성 단위 (CFU)를 측정하였다. 6일 동안 인큐베이션시킨 후, 플레이트 상의 집락을 계수하였다. CFU를 측정하여 광학 밀도에 대한 2-상 배지 및 또한 말라세지아 푸르푸르의 성장 형태의 영향을 배제하였다. 실험은 적어도 2회의 독립적 실험으로, 각각 이중 측정하여 수행하였다.

실험 기간 안에, 펩티드 P18의 첨가는 CFU를 감소시키고, 그 결과로서 말라세지아 푸르푸르의 성장이 기준 물질 아연피리티온, 클림바졸 및 케토코나졸보다 효과적으로 억제된다는 사실이 관찰되었다.

이러한 결과는 중량％ (％(w/w))를 기준으로 동등한 농도를 갖는 아연피리티온, 클림바졸 및 케토코나졸과 비교하여 펩티드 P18에 의한 말라세지아 푸르푸르의 효과적인, 적어도 필적하는 성장 억제를 나타낸다.

실시예 45: 5분 내지 1시간의 펩티드 P18을 사용한 인큐베이션 시간

펩티드 P18 (P18 펩티드 서열 H - KWKLFKKIPKFLHLAKKF - NH₂)에 의한 말라세지아 푸르푸르의 성장 억제가 이제까지는 1시간 초과의 인큐베이션 시간에 걸쳐 분석되었기 때문에, 이제 밤새 배양한 말라세지아 푸르푸르에 첨가한 후 인큐베이션의 첫 순간 (5분, 10분 및 20분)부터 처음 1시간까지 안에 펩티드 P18의 효과를 시험하고, 기준 물질 아연피리티온 (시그마 알드리치)과 비교하였다. 이에 대해, 펩티드 P18 및 기준 물질 아연피리티온을 100 μM, 200 μM 및 500 μM의 농도로 사용하였다. 실험은 하기와 같이 수행하였다:

성장 배지: DSMZ에 따른 M472-피티로스포룸 배지

40 g/L의 맥아 추출물

20 g/L의 소 담즙

10 g/L의 트윈 40

성분들을 121℃, 1 bar의 초대기압에서 20분 동안 멸균시켰다.

96-웰 마이크로티터 플레이트를 각 경우에 100 μl의 M472-피티로스포룸 배지로 충전시키고, 밤새 배양한 말라세지아 푸르푸르 현탁액을 접종하였다. 실험을 개시하고나서, 말라세지아 푸르푸르 현탁액은 0.1 (600 nm에서 측정됨)의 광학 밀도로 조정하였다.

하기 배치의 성장을 비교하였다:

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 5분, 10분, 20분 및 60분 후에 플레이팅한, 100 μM의 최종 농도를 갖는 펩티드 P18의 첨가

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 5분, 10분, 20분 및 60분 후에 플레이팅한, 200 μM의 최종 농도를 갖는 펩티드 P18의 첨가

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 5분, 10분, 20분 및 60분 후에 플레이팅한, 500 μM의 최종 농도를 갖는 펩티드 P18의 첨가

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 5분, 10분, 20분 및 60분 후에 플레이팅한, 100 μM의 최종 농도를 갖는 아연피리티온의 첨가

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 5분, 10분, 20분 및 60분 후에 플레이팅한, 200 μM의 최종 농도를 갖는 아연피리티온의 첨가

- 말라세지아 푸르푸르 현탁액 및 5분, 10분, 20분 및 60분 후에 플레이팅한, 500 μM의 최종 농도를 갖는 아연피리티온의 첨가

상기 제시된 인큐베이션 시간 후, 각 현탁액으로부터 50 μl를 플레이팅하고, 6일 동안 인큐베이션시킨 후 집락을 계수하여 집락-형성 단위 (CFU)를 측정하였다. CFU를 측정하여 광학 밀도에 대한 2-상 배지 및 또한 말라세지아 푸르푸르의 성장 형태의 영향을 배제하였다. 실험은 독립적으로 반복하였다. 하기에, 1000개 미만의 집락을 나타내고 이에 따라 유의한 성장 억제를 나타내는 집락-형성 단위가 제시되었다.

결과는 펩티드 P18로의 처음 10분의 인큐베이션 후 살아있는 말라세지아 푸르푸르 세포의 개수가 아연피리티온으로의 인큐베이션에 비해 이미 상당히 감소되었음을 보여준다. 훨씬 낮은 농도의 펩티드 P18로의 60분의 인큐베이션 후, 집락-형성 단위는 보다 짧은 인큐베이션 시간과 비교하여 상당히 감소되었다. 이는 펩티드 P18의 작용 메카니즘이 아연피리티온의 작용 메카니즘과 분명히 다르며, 펩티드 P18이 짧은 인큐베이션 시간 후에서조차 말라세지아 푸르푸르에 대해 효과적이라는 것을 의미한다.

실시예 46: P18 변이체의 효과

말라세지아 푸르푸르에 대한 하기 P18 변이체의 억제 효과를 분석하였다:

H-KWKLFKKIPKFLHLAKKF - NH₂ (P18; 아미드화된 카르복시-말단)

H-KWKLFKKIPKFLHLAKKF - OH (P18-OH; 변형되지 않은 카르복시-말단)

H-PKWKLFKKIPKFLHLAKKFD - OH (P18AC-OH; 변형되지 않은 카르복시-말단)

H-PKWKLFKKIPKFLHLAKKFN - NH₂ (P18AC-NH₂; 아미드화된 카르복시-말단)

실험은 하기와 같이 수행하였다:

성장 배지: DSMZ에 따른 M472-피티로스포룸 배지

40 g/L의 맥아 추출물

20 g/L의 소 담즙

10 g/L의 트윈 40

성분들을 121℃, 1 bar의 초대기압에서 20분 동안 멸균시켰다.

펩티드 변이체를 1 mM의 최종 농도로 디메틸술폭시드 (DMSO) 중에 용해시켰다. 임의로, DMSO는 생략할 수 있고, 순수한 펩티드 수용액을 대신 사용할 수 있었다. 상기 용액 5 μl를 100 μl의 말라세지아 푸르푸르 현탁액 (50 μM의 최종 농도를 갖는 펩티드 P18)에 첨가하였다. 기준 혼합물에는 펩티드 P18을 함유하지 않는 동일한 양의 DMSO를 첨가하였다.

24시간 후, 각 현탁액으로부터 10 μl를 플레이팅하고, 6일 동안 인큐베이션시킨 후 집락을 계수하여 집락-형성 단위 (CFU)를 측정하였다. 각각의 경우 3개의 동일한 혼합물로 2회 독립적 실험을 수행하였고, 집락-형성 단위 개수의 평균치를 구하였다.

실험은 용매 DMSO 그 자체가 이미 CFU를 감소시킨다는 것을 보여준다. 그러나, 모든 P18 변이체는 DMSO와 비교하여 말라세지아 푸르푸르에 대해 증가된 억제 효과를 나타냈고, P18AC-OH; P18-OH; P18의 순서로 효능이 증가한다. 상기 순서에 따라, 펩티드 분자에서 음으로 하전된 카르복실기의 개수는 감소한다. 따라서, 약한 음전하를 갖는 펩티드 변이체가 가장 효과적이라고 추론될 수 있다.

실시예 47: 샴푸 기본 제제의 존재하에 말라세지아 푸르푸르에 대한 펩티드 P18의 효과의 역동학

아연피리티온 및 클림바졸과 비교하여 펩티드 P18 (H-KWKLFKKIPKFLHLAKKF-NH₂; 아미드화된 카르복시-말단)의 효과를 샴푸 기본 제제의 존재하에 및 상이한 인큐베이션 시간에서 시험하였다 (표 14). 실험은 하기와 같이 수행하였다:

하기 샴푸 기본 제제를 제조하였다:

성분 텍사폰 NSO 및 테고 베타인 L7을 혼합하고 용해시켰다. pH를 NaOH를 사용하여 6 내지 7로 조정하였다.

말라세지아 푸르푸르에 대한 P18, ZPT 및 클림바졸의 효과를 하기와 같이 분석하였다:

성장 배지: DSMZ에 따른 M472-피티로스포룸 배지

40 g/L의 맥아 추출물

20 g/L의 소 담즙

10 g/L의 트윈 40

성분들을 121℃, 1 bar의 초대기압에서 20분 동안 멸균시켰다.

96-웰 마이크로티터 플레이트를 각 경우에 100 μl의 M472-피티로스포룸 배지로 충전시키고, 밤새 배양한 말라세지아 푸르푸르 현탁액을 접종하였다. 실험을 개시하고나서, 말라세지아 푸르푸르 현탁액은 0.1 (600 nm에서 측정됨)의 광학 밀도로 조정하였다. 10％ (v/v)의 샴푸 기본 제제 31-3을 말라세지아 푸르푸르 현탁액에 첨가하였다 (표 14 참조).

펩티드 P18을 230 g/l의 농도로 물 중에 용해시켰다. 활성 성분 아연피리티온 및 클림바졸을 230 g/l의 농도로 DMSO 중에 용해시켰으며, 활성 성분은 부분적으로 불용성으로 현탁된 채로 남아있었다. 펩티드 용액 및 활성 성분 용액 각각을 2.3 g/l; 1.15 g/l; 0.46 g/l 및 0.23 g/l의 최종 농도로, 샴푸 기본 제제를 함유하는 말라세지아 푸르푸르 현탁액에 첨가하였다.

상기 혼합물을 5분; 10분; 20분; 60분 및 24시간 동안 인큐베이션시킨 후, 각 현탁액으로부터 1 μl를 플레이팅하고, 6일 동안 인큐베이션시킨 후 집락을 계수하여 집락-형성 단위를 측정하였다.

이 시험에서 P18은 아연피리티온 또는 클림바졸과 비교하여 탁월한 특성을 보여준다는 사실이 관찰되었다.

실시예 48: 말라세지아 푸르푸르에 대해 시험된 샴푸 기본 제제에서의 펩티드 P18의 장기 안정성

샴푸 기본 제제에서의 펩티드 P18 (H - KWKLFKKIPKFLHLAKKF - NH₂; 아미드화된 카르복시-말단)의 장기 안정성을 시험하였다.

하기 샴푸 기본 제제를 제조하였다:

성분 텍사폰 NSO 및 테고 베타인 L7을 혼합하고 용해시켰다. pH를 NaOH를 사용하여 6 내지 7로 조정하였다. 하기에서, 100 mM의 수성 P18 펩티드 용액을 제조하였다. 상응하는 부피의 100 mM P18 펩티드 용액을 각 제제에 첨가하여 표 15에 제시된 바와 같은 최종 농도의 펩티드 P18을 수득하였다.

제제를 40℃에서 저장하였다.

0일; 12일 및 22일 후, 말라세지아 푸르푸르에 대한 제제의 효과를 분석하였다.

성장 배지: DSMZ에 따른 M472-피티로스포룸 배지

40 g/L의 맥아 추출물

20 g/L의 소 담즙

10 g/L의 트윈 40

성분들을 121℃, 1 bar의 초대기압에서 20분 동안 멸균시켰다.

10％ (v/v)의 저장된 제제 31-1-10; 31-3-5; 31-3-2 (표 15)를 말라세지아 푸르푸르 현탁액에 첨가하였다.

24시간 후, 집락-형성 단위 (CFU)를 측정하였다. 이에 대해, 각 현탁액으로부터 1 μl 및 10 μl를 플레이팅하고, 6일 동안 인큐베이션시킨 후 집락을 계수하였다.

P18이 시험된 조건에서 안정한 특성을 나타내는 것으로 관찰되었다.

실시예 49: 샴푸 기본 제제의 존재하에 P18 펩티드의 최소 억제 농도 (MIC)의 측정

샴푸 기본 제제 31-3 (표 16)의 존재하에 펩티드 P18 (H - KWKLFKKIPKFLHLAKKF - NH₂; 아미드화된 카르복시-말단)의 최소 억제 농도 (MIC)를 하기와 같이 시험하였다:

하기 샴푸 기본 제제를 제조하였다:

성분 텍사폰 NSO 및 테고 베타인 L7을 혼합하고 용해시켜 샴푸 기본 제제를 제조하였다. pH를 NaOH를 사용하여 6 내지 7로 조정하였다.

말라세지아 푸르푸르에 대한 펩티드의 효과를 하기와 같이 분석하였다:

성장 배지: DSMZ에 따른 M472-피티로스포룸 배지

40 g/L의 맥아 추출물

20 g/L의 소 담즙

10 g/L의 트윈 40

성분들을 121℃, 1 bar의 초대기압에서 20분 동안 멸균시켰다.

96-웰 마이크로티터 플레이트를 각 경우에 170 μl의 M472-피티로스포룸 배지로 충전시키고, 밤새 배양한 말라세지아 푸르푸르 현탁액 10 μl를 접종하였다. 이는 620 nm에서 측정된 0.02 - 0.1의 광학 밀도에 상응한다. 샴푸 기본 제제 31-3 20 μl를 상기 혼합물에 첨가하였다. 펩티드 P18을 10 mM의 농도로 DMSO 중에 용해시켰다. 상응하는 양의 P18 용액을 첨가하여 표 17에 제시된 바와 같은 최종 농도를 수득하였다.

24시간 동안 인큐베이션시킨 후, 배지 10 μl 중에 각각의 현탁액 1 μl를 재현탁시킨 다음 수득한 현탁액을 플레이팅하여 집락-형성 단위 (CFU)를 측정하였다. 6일 동안 인큐베이션시킨 후, 플레이트 상의 집락을 계수하였다. 실험은 이중 측정하여 수행하였다.

결과는 말라세지아 푸르푸르의 성장이 100 μM 이상의 P18 농도에 의해 완전히 억제되었음을 나타낸다. 따라서, 샴푸 기본 제제 31-3의 존재하에 최소 억제 농도는 50 μM 내지 100 μM이다. 이는 샴푸 제제를 함유하지 않는 혼합물과 비교하여 (실시예 41 참조), 활성이 사용되는 샴푸 기본 제제에 의해 약간 감소되지만, 펩티드 P18의 항진균 효과가 상기 제제에서 유지됨을 보여준다.

실시예 50: 펩티드 P18 및 통상의 살진균 활성 성분의 조합.

통상의 살진균 활성 성분 아연피리티온, 케토코나졸 또는 클림바졸, 및 펩티드 P18 (H - KWKLFKKIPKFLHLAKKF - NH₂; 아미드화된 카르복시-말단)을 일정 비율로 포함하는 활성 성분의 조합물의 효과를 수용액에서, 및 하기와 같은 샴푸 제제 31-3의 존재하에 시험하였다.

하기 샴푸 기본 제제를 제조하였다:

말라세지아 푸르푸르에 대한 펩티드 P18 및 상기 통상적 작용제의 효과를 하기와 같이 분석하였다:

성장 배지: DSMZ에 따른 M472-피티로스포룸 배지

40 g/L의 맥아 추출물

20 g/L의 소 담즙

10 g/L의 트윈 40

성분들을 121℃, 1 bar의 초대기압에서 20분 동안 멸균시켰다.

96-웰 마이크로티터 플레이트를 각 경우에 170 μl의 M472-피티로스포룸 배지로 충전시키고, 밤새 배양한 말라세지아 푸르푸르 현탁액 10 μl를 접종하였다. 이는 620 nm에서 측정된 0.02 - 0.1의 광학 밀도에 상응한다. 샴푸 기본 제제 31-3 또는 별법으로 물 20 μl를 상기 혼합물에 첨가하였다. 펩티드 P18을 10 mM의 농도로 물 중에 용해시켰다. 통상의 살진균 활성 성분을 10 mM의 농도로 DMSO 중에 용해시켰다. 상응하는 양의 P18 용액 및 통상의 살진균 활성 성분 용액을 상기 혼합물에 첨가하여 표 19에 제시된 바와 같은 최종 농도를 수득하였다.

24시간 동안 인큐베이션시킨 후, 배지 10 μl 중에 각각의 현탁액 1 μl를 재현탁시킨 다음 수득한 현탁액을 플레이팅하여 집락-형성 단위 (CFU)를 측정하였다. 6일 동안 인큐베이션시킨 후, 플레이트 상의 집락을 계수하였다.

P18 및 통상의 살진균 활성 성분의 조합은 단독으로 취해진 통상의 살진균 활성 성분과 비교하여 탁월한 특성을 나타냄이 입증되었다.

4. 제제 실시예 B

펩티드 P18을 포함하는 화장용 항비듬 샴푸 제제를 하기에 기재하였다. 펩티드 P18은 상기 기재된 모든 다른 펩티드를 대표하여 하기 실시예에서 명시된다. 본 발명에 따른 모든 다른 특정 펩티드가 하기 제시된 제법에서 또한 사용될 수 있는 것으로 당업자에 의해 인지될 것이다.

펩티드 P18은 제제에 함유된 유일한 활성 성분일 수 있거나, 또는 다른 항비듬 활성 성분 (기재사항 참조)과 조합하여 사용될 수 있다.

실시예 51:

제법: 상 A의 성분을 혼합하고 용해시켰다. pH를 상 B를 사용하여 5 내지 7로 조정하였다. 사나트륨 EDTA 및/또는 염화나트륨을 통해 점도를 조정할 수 있었다. 바람직한 점도는 5000 내지 15000 mPas이다.

실시예 52:

제법: 상 A의 성분을 혼합하고 용해시켰다. pH를 상 B를 사용하여 5 내지 7로 조정하였다. 셀룰로스 고무 및/또는 아크릴레이트/베헤네트-25 메타크릴레이트 공중합체를 통해 점도를 조정할 수 있었다. 바람직한 점도는 5000 내지 15000 mPas이다.

실시예 53:

제법: 상 A의 성분을 혼합하고 용해시켰다. pH를 상 B를 사용하여 5 내지 7로 조정하였다. 카르보머 및/또는 수산화나트륨을 통해 점도를 조정할 수 있었다. 바람직한 점도는 5000 내지 15000 mPas이다.

실시예 54:

제법: 상 A의 성분을 혼합하고 용해시켰다. pH를 상 B를 사용하여 5 내지 7로 조정하였다. 카르보머를 통해 점도를 조정할 수 있었다. 바람직한 점도는 5000 내지 15000 mPas이다.

실시예 55:

제법: 상 A의 성분을 혼합하고 용해시켰다. pH를 상 B를 사용하여 5 내지 7로 조정하였다. 바람직한 점도는 5000 내지 15000 mPas이다.

실시예 56:

실시예 57:

실시예 58:

실시예 59:

실시예 60:

실시예 61:

실시예 62:

실시예 63:

실시예 64:

제법: 상 A의 성분을 혼합하고 용해시켰다. pH를 상 B를 사용하여 5 내지 7로 조정하였다. 탄산마그네슘 수산화물 및/또는 나트륨 폴리나프탈렌술포네이트를 통해 점도를 조정할 수 있었다. 바람직한 점도는 5000 내지 15000 mPas이다.

실시예 65:

실시예 66:

달리 제시되지 않는다면, 용어 P18은 서열 3의 펩티드를 지칭한다.

본원에서 인용된 문서의 개시내용은 참고로 도입되어 있다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims

하기 서열 4726 또는 4727에 따른 서열 또는 반복 서열 모티프를 갖는 펩티드를 화장용 담체 중에 포함하는, 비듬의 개선 또는 예방을 위한 화장 조성물:
제1항에 있어서, 서열 4726에 따른 복수개의 펩티드 또는 서열 4727에 따른 복수개의 펩티드가 링커(linker) 기를 통해 함께 펩티드 연결된, 반복 서열 모티프를 갖는 펩티드를 포함하는 화장 조성물.
제2항에 있어서, 링커가 1개 내지 10개의 연속적인 동일하거나 상이한 아미노산 잔기를 포함하는 화장 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 표준 조건 하에서, 말라세지아 푸르푸르(Malassezia furfur)에 대해 1500 내지 0.1 μM의 최소 억제 농도를 나타내며, 상기 표준 조건은, 600 nm에서 0.1의 초기 광학 밀도를 나타내고, 말라세지아 푸르푸르 배양 배지 중에 상기 최소 농도로 함유된 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 하나 이상의 펩티드와 함께 24시간 인큐베이션시킨 후에 배양 배지 μl 당 1 미만의 말라세지아 푸르푸르 집락-형성 단위 (CFU)를 함유하는 말라세지아 푸르푸르 배양물에 관한 것인, 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에서 기재된 하나 이상의 펩티드를 함유하는 화장 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 화장용 보조제, 또는 히드로포빈, 알부민, 락토페린, 아비딘, 항체, 케라틴-결합 항체, 케라틴-결합 펩티드, 실크 단백질, 스파이더 실크 단백질, 유전자조작된 스파이더 실크 단백질 C16, 콜라겐, 피브로넥틴, 케라틴, 엘라스틴, 에나멜-빌딩 단백질, 아멜로게닌, 에나멜-빌딩 단백질의 결합 단백질 또는 아멜로게닌의 결합 단백질로부터 선택된 하나 이상의 화장용 활성 성분, 및 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에서 정의된 하나 이상의 펩티드의, 펩티드 및 단백질의 공유 또는 비공유 결합 생성물 또는 펩티드 및 중합체의 공유 또는 비공유 결합 생성물을 포함하는 화장 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 코르티코이드, 코르티손, 아자티오프린, 비사볼롤, 시클로스포린 A, 아세틸살리실산, 이부프로펜, 판테놀, 카모마일 추출물 또는 알로에 추출물로부터 선택된 하나 이상의 항염증 활성 성분을 추가로 포함하는 화장 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 알콜, p-히드록시벤조산 에스테르, 이미다졸리닐우레아, 포름알데히드, 소르브산, 벤조산, 살리실산, 아연 리시놀레에이트, 트리클로산, 운데실렌산 알킬올아미드, 트리에틸 시트레이트, 클로르헥시딘, 아졸, 케토코나졸, 클림바졸, 아연 피리티온 또는 황화셀레늄으로부터 선택된, 말라세지아 푸르푸르 또는 기타 말라세지아 종의 성장 또는 활성 또는 둘 다를 억제하는 항미생물 활성 성분을 추가로 포함하는 화장 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 아젤라산, 세바스산, 칼륨알레자오일디글리시네이트, 10-히드록시데칸산, 1,10-데칸디올 또는 알루미늄클로로히드레이트로부터 선택된 피지-조절 활성 성분을 추가로 포함하는 화장 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드가 최종 조성물의 총 중량을 기준으로 0.0001 내지 50 중량％의 분율로 존재하는 화장 조성물.
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