KR101292837B1

KR101292837B1 - 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 조성물

Info

Publication number: KR101292837B1
Application number: KR1020110107569A
Authority: KR
Inventors: 오명숙; 박건혁
Original assignee: 경희대학교 산학협력단
Priority date: 2011-10-20
Filing date: 2011-10-20
Publication date: 2013-08-05
Anticipated expiration: 2031-10-20
Also published as: KR20130043438A

Abstract

본 발명은 가래나무(Junglans mandshurica MAXIM) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 가래나무 잎 추출물은 HS68 세포에서 H₂O₂ 자극에 대한 세포 보호 효과, ROS(Reactive oxygen species) 생성 억제효과, 콜라겐 분해 효소인 MMP-1(Matrix metalloproteinases-1)의 활성 억제효과 및 콜라겐 생합성을 증가시키는 COL1A1(pro-collagen type 1)의 발현 증가 효과를 가지므로 피부 주름 개선용, 피부 노화방지용, 피부보호용 및 색조 화장료 조성물에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 조성물{Composition for skin wrinkle improvement comprising extracts of Junglans mandshurica MAXIM as an active ingredient}

본 발명은 가래나무(Junglans mandshurica MAXIM) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물, 피부 노화방지용 화장료 조성물, 피부보호용 화장료 조성물 및 색조 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 크게 표피층, 진피층, 피하지방층으로 구성되어 있으며, 피부의 가장 기본적인 역할은 우리 몸으로부터 수분이 증발되는 것을 막아주며 외부로부터 유해성분이 침입하는 것을 막아주는 역할을 한다. 이러한 피부는 항상 외부 자극으로부터 노출되어 있기 때문에 다양한 방어 능력을 가지고 있다. 또한, 피부가 건강하고 깨끗함은 곧 사람의 아름다움과 연관되어 있다고 할 수 있다. 최근 들어, 여성뿐 아니라 남성들도 피부 노화 등 여러 가지 피부 트러블들에 대한 관심이 많아지면서 이와 관련된 제품들이 많이 개발되고 있다.

사람은 나이가 들면서 피부노화가 일어나게 되는데 그 대표적인 증상이 주름(wrinkle)이다. 주름은 나이를 나타내는 하나의 현상으로서, 주름이 생기는 대표적인 원인은 피부의 진피에서 매트릭스를 형성하는 콜라겐의 분해에 기인한다. 피부의 콜라겐은 노화가 진행됨에 따라 생성이 저하되기도 하나, 자외선 등의 외부 자극에 의해 콜라겐 분해 효소(Matrix Metallo Proteinase, MMP-1)의 활성도가 높아지면서 콜라겐이 쉽게 분해되어 주름의 생산이 증가하는 임상 보고들도 많다. 따라서, 최근에는 MMP-1의 생성의 저해 및 활성을 억제하여 근본적으로 생성되는 콜라겐의 분해를 억제하는 제품들도 많이 개발되고 있다.

MMP는 다형핵성호중구(Polymorphonuclear neutrophil), 대식세포(Macrophage), 섬유아세포(Fibroblast) 등과 같은 세포로부터 분비되는 칼슘 및 아연 의존성 엔도펩티다제(Endopeptidase)로 중성 pH에서 작용하며, 기질로서 여러 가지 세포의 기질을 이용한다. 주로 피부에서는 MMP-1, MMP-2, MMP-9 이외에 여러 가지 효소들이 작용을 하는데 콜라겐 분해와 관련되어 가장 근본적으로 작용하는 효소는 MMP-1이다. 일반적으로 콜라겐 합성을 촉진하는 종래의 물질로는 레티노이드(RE36068), TGF-β(transforming growth factor), 베툴린산(JP8-208424) 등이 있으며, MMP-1의 생성을 억제하는 물질로는 TGF-β(transforming growth factor)가 대표적으로 알려져 있으며, 그 외에도 다양한 천연물들이 MMP-1 생합성을 억제하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 주름 생성을 억제하는 방법은 콜라겐 합성을 촉진하거나, 또는 콜라겐 분해효소의 생성 및 활성을 억제하는 방법을 사용할 수 있으며, 보다 효과적이고 용이하며 안전한 주름개선을 위한 화장료의 개발이 절실이 요구되고 있다.

가래나무(Junglans mandshurica MAXIM)는 가래나무목 가래나무과의 낙엽 활엽 교목으로, 한국(중부 이북),·중국 북동부, 시베리아(아무르·우수리) 등지에 많이 서식하는 나무로서 추자목(楸子木)이라고도 하고 열매를 추자(楸子)라 한다. 산기슭의 양지쪽에서 자라고 높이가 20m 정도이며 나무껍질은 암회색이며 세로로 터진다. 잎은 홀수 깃꼴겹 잎이다. 작은 잎은 7∼17개이며, 긴 타원형 또는 달걀 모양 타원형으로 길이 7∼28 cm, 나비 10 cm 정도이다. 잔 톱니가 있고 앞면은 잔털이 있으나 점차 없어지고, 뒷면은 털이 있거나 없는 것도 있으며 잎맥 위에 선모(腺毛)가 있다. 꽃은 단성화로서 4월에 피는데, 수꽃이삭은 길이 10∼20 cm이고, 수술은 12∼14개이며 암꽃이삭에 4∼10개의 꽃이 핀다. 열매는 핵과로서 달걀 모양 원형이고, 길이가 4∼8 cm이며 9월에 익는다. 외과피에는 선모가 빽빽히 나고, 내과피는 흑갈색인데 매우 굳으며 양끝이 뾰족하다. 나무의 변재는 회백색, 심재는 회갈색으로 질이 치밀하고 질기며 뒤틀리지 않아 가구재·기계재·총대·조각재로 쓰인다.

한방에서는 봄에서 가을 사이에 수피를 채취하여 말린 것을 추피(楸皮)라 하며 수렴과 해열, 눈을 맑게 하는 등의 효능이 있어 장염·이질(적리)·설사·맥립종, 눈이 충혈하고 붓는 통증 등에 처방한다. 열매는 날 것으로 그냥 먹거나 요리하여 먹고, 기름을 짜서 먹기도 한다. 어린 잎은 삶아서 먹을 수 있다. 수피는 섬유로도 사용한다. 핵과가 긴 타원형이고 양끝이 좁으며 능각(稜角)이 다소 뚜렷하지 않은 것을 긴가래나무(J.m.for.stenocarpa)라고 하고, 핵과에 능선(稜線)이 없고 하나의 꽃이삭에 암꽃이 12∼20개씩 달리는 것을 왕가래나무 (J.m.var. sieboldiana)라고 한다. 가래 열매는 호두와 마찬가지로 폐를 튼튼하게 하고 기침을 멎게 하며 기억력을 좋게 하고 머리를 맑게 하는 등의 약효가 있으나 민간 의학에서는 가래 열매 보다는 가래나무 껍질을 추목피(楸木皮)라 하여 약으로 더 많이 사용되며, 가래나무 껍질은 항암 작용이 뛰어난 것으로 알려져 있다. 한편, 대한민국 공개특허 제10-2011-0093754 (공개일 2011년 08월 18일)에는 가래나무 열매의 과즙을 이용하여 식물 유래 천연 염색제의 유효성분으로 이용될 수 있음을 개시하고 있으나, 아직까지 가래나무 추출물의 항주름 효과에 대해서는 밝혀진바 없다.

이에 본 발명자들은 피부 주름 개선을 위한 천연 식물 추출물을 개발하고자 연구한 결과, 가래나무 잎 추출물이 세포 보호효과, ROS(Reactive oxygen species) 생성 억제효과, 콜라겐 분해 효소인 MMP-1(Matrix metalloproteinases-1)의 활성 억제효과 및 콜라겐 생합성을 증가시키는 COL1A1(pro-collagen type 1)의 발현 증가 효과를 가지므로, 이를 피부 주름 개선, 피부 노화방지, 피부 보호 및 색조 화장료 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 목적은, 가래나무(Junglans mandshurica MAXIM) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물, 피부주름 개선용 약학적 조성물, 피부 주름 개선용 건강식품용 조성물 및 피부 주름개선용 피부 외용제를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화방지용 화장료 조성물, 피부 노화방지용 약학적 조성물, 피부 노화방지용 건강식품용 조성물 및 피부 노화방지용 피부 외용제를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보호용 화장료 조성물, 피부 보호용 약학적 조성물, 피부 보호용 건강식품용 조성물 및 피부 보호용 피부 외용제를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 가래나무 추출물을 함유하는 색조 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 가래나무(Junglans mandshurica MAXIM) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 건강식품용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 피부 외용제를 제공한다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화방지용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화방지용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화방지용 건강식품용 조성물을 제공한다.

또한, 또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화방지용 피부 외용제를 제공한다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보호용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보호용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보호용 건강식품용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보호용 피부 외용제를 제공한다.

아울러, 본 발명은 가래나무 추출물을 함유하는 색조 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 가래나무 추출물은 세포 보호효과, ROS(Reactive oxygen species) 생성 억제효과, 콜라겐 분해 효소인 MMP-1(Matrix metalloproteinases-1)의 활성 억제 효과 및 피부세포에서 콜라겐 생합성을 증가시켜 피부의 주된 구성성분이 콜라겐을 증가시키는 COL1A1(pro-collagen type 1)의 발현 증가 효과를 가지므로 상기 가래나무 잎 추출물을 피부 주름 개선용, 피부 노화방지용, 피부 보호용 및 색조 화장료 조성물에 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.

도 1은 HS68 세포주에서 가래나무 잎 추출물의 세포 보호효과를 확인한 도이다;
JWLE: 가래나무 잎 추출물 처리군;
NAC: 양성대조군인 N-아세틸시스테인(N-Acetyl-L-Cysteine) 처리군; 및
GREEN tea: 양성대조군인 녹차 처리군.
도 2는 HS68 세포주에서 H₂O₂ 자극에 대한 가래나무 추출물의 세포 보호효과를 나타낸 도이다;
JWLE: 가래나무 잎 추출물 처리군;
NAC: N-아세틸시스테인(N-Acetyl-L-Cysteine) 처리군; 및
GREEN tea: 녹차 처리군.
도 3A는 HS68 세포주에서 H₂O₂ 자극에 의해 과생성되는 ROS(Reactive Oxygen Species)에 대한 가래나무 잎 추출물의 효과를 나타낸 도이다;
JWLE: 가래나무 잎 추출물 처리군; 및
GREEN tea: 녹차 처리군.
도 3B는 현광 현미경으로 확인한 세포 사진을 나타낸 도이다;
Control: 무처리군;
H₂O₂: H₂O₂ 처리군;
GREEN tea + H₂O₂: 녹차 및 H₂O₂ 동시처리군;
JWLE 50 + H₂O₂: 본 발명의 가래나무 잎 추출물 50 ug/ml 및 H₂O₂ 동시처리군;
JWLE 100 + H₂O₂: 본 발명의 가래나무 잎 추출물 100 ug/ml 및 H₂O₂ 동시처리군; 및
JWLE 200 + H₂O₂: 본 발명의 가래나무 잎 추출물 200 ug/ml 및 H₂O₂ 동시처리군.
도 4는 HS68 세포주에서 H₂O₂ 자극에 의해 증가한 MMP-1(Matrix metalloproteinases-1)에 대한 가래나무 잎 추출물의 효과를 나타낸 도이다;
JWLE: 가래나무 잎 추출물 처리군;
NAC: N-아세틸시스테인(N-Acetyl-L-Cysteine) 처리군; 및
GREEN tea: 녹차 처리군.
도 5는 HS68 세포주에서 H₂O₂ 자극에 의해 감소한 COL1A1(pro-collagen type 1)에 대한 가래나무 잎 추출물의 효과를 나타낸 도이다;
JWLE: 가래나무 잎 추출물 처리군; 및
GREEN tea: 녹차 처리군.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 가래나무(Junglans mandshurica MAXIM) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 가래나무 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다:

1) 가래나무에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;

2) 단계 1)의 추출물을 식힌 후 여과하는 단계;

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압농축하는 단계; 및

4) 단계 3)의 농축된 추출물을 건조 분말화하는 단계.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 가래나무는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다.

상기 가래나무는 가래나무 가지, 줄기, 뿌리 또는 잎을 이용하는 것이 바람직하고, 가래나무 잎을 이용하는 것이 가장 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

상기 추출용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 상기 알코올로는 C₁ 내지 C₄의 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 추출방법으로는 진탕 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 추출 용매를 가래나무 분량에 2 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 추출온도는 상온 내지 100℃인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 2 내지 5일인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 회수는 1 내지 3회인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 단계 4)의 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 가래나무 잎에 70% 에탄올을 시료의 10배 양으로 상온에서 침출시켜 감압 여과하여, 가래나무 추출물을 얻었다.

또한, 본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에서, HS68 세포에서 상기 제조된 가래나무 추출물의 세포 보호효과를 확인한 결과, 본 발명의 가래나무 추출물을 전처리는 세포 생존율에 영향을 미치지 않는 것을 확인하였다(도 1 참조).

또한, 본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에서, HS68 세포에서 상기 제조된 가래나무 추출물의 H₂O₂ 자극에 대한 세포 보호 효과를 확인한 결과, 본 발명의 가래나무 추출물의 농도의존적으로 유의적인 세포 보호효과를 나타내는 것을 확인하였다(도 2 참조).

또한, 본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에서, HS68 세포에서 상기 제조된 가래나무 추출물의 H₂O₂에 의해 증가한 ROS(Reactive Oxygen Species) 과생성에 대한 효과를 확인한 결과, 본 발명의 가래나무 추출물은 H₂O₂에 의해 증가한 ROS의 과생성을 농도의존적으로 억제하는 것을 확인하였다(도 3 참조).

또한, 본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에서, HS68 세포에서 상기 제조된 가래나무 추출물의 H₂O₂에 의해 증가하는 MMP-1(Matrix Metallo Proteinase)의 억제 효과를 확인한 결과, 본 발명의 가래나무 추출물 전처리는 증가한 MMP-1 농도의존적으로 억제하는 것을 확인하였다. (도 4 참조).

또한, 본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에서, HS68 세포에서 상기 제조된 가래나무 추출물의 H₂O₂에 의해 감소한 COL1A1(Pro-collagen type 1)의 증가효과를 확인한 결과, 본 발명의 가래나무 추출물은 감소한 COL1A1의 유의적인 증가효과를 나타내는 것을 확인하였다(도 5 참조).

따라서, 가래나무 추출물은 우수한 세포보호 효과, ROS 억제 효과, MMP-1의 억제 효과 및 COL1A1 보호 효과를 가지고 있어, 주름 억제 효과가 우수하므로, 피부 주름 개선에 효과적인 화장료 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 상기 화장료 조성물은 본 발명의 가래나무 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.

본 발명의 가래나무 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 있어서, 통상적으로 함유되는 화장료 조성물에 본 발명의 추출물이 1 내지 15 중량%, 바람직하게는 2 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있다.

본 발명의 가래나무 추출물은 우수한 세포보호 효과, ROS 억제 효과, MMP-1의 억제 효과 및 COL1A1 보호 효과를 가지고 있어, 주름 억제 효과가 우수하므로, 피부 주름 개선용 약학적 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 의해 정제, 캅셀제, 산제, 과립제, 현탁제, 유제, 시럽제, 기타 액제로 제형화될 수 있다.

구체적으로 본 발명의 약학적 조성물은 경구 투여용 제형, 예를 들면 정체, 트로치제(troches), 로젠지(lozenge), 수용성 또는 우성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제(elixirs)로 제제화된다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제하기 위해 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀롤로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕해제, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유가 함유된다. 캡슐제형의 경우는 상기에서 언급한 물질 이외에도 지방유와 같은 액체 담체를 함유한다.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 가래나무 추출물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 현탁액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제제한다.

본 발명에 따른 유효성분의 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증 정도에 따라 적절히 선택되나, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 ㎏당 본 발명의 추출물을 0.0001 ~ 500 ㎎의 양으로 1회 내지 수회 나누어 투여할 수 있으며, 0.001 ~ 100 ㎎의 양으로 투여하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름개선용 건강식품용 조성물을 제공한다.

본 발명의 가래나무 추출물은 우수한 세포보호 효과, ROS 억제 효과, MMP-1의 억제 효과 및 COL1A1 보호 효과를 가지고 있어, 피부 주름개선용 건강식품으로서 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 건강식품은 가래나무 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 가래나무 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.

상기 외에 본 발명의 가래나무 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 가래나무 추출은 천연 과일 주스, 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름개선용 피부 외용제를 제공한다.

본 발명의 가래나무 추출물은 우수한 세포보호 효과, ROS 억제 효과, MMP-1의 억제 효과 및 COL1A1 보호 효과를 가지고 있어, 피부 주름개선용 피부 외용제로서 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 가래나무 추출물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

상기 피부 외용제에 가래나무 추출물의 투여량은 0.0001 내지 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 0.001 내지 10 ㎎/㎏이며, 이에 제한되는 것은 아니다. 투여량은 특정 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 투여기간, 제거율, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화방지용 피부 외용제를 제공한다.

본 발명의 가래나무 추출물은 우수한 세포보호 효과, ROS 억제 효과, MMP-1의 억제 효과 및 COL1A1 보호 효과를 가지고 있어, 피부 노화방지용 화장료 조성물, 약학적 조성물, 건강식품용 조성물 및 피부 외용제로서 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 가래나무 추출물은 우수한 세포보호 효과, ROS 억제 효과, MMP-1의 억제 효과 및 COL1A1 보호 효과를 가지고 있어, 피부 보호용 화장료 조성물, 약학적 조성물, 건강식품용 조성물 및 피부 외용제로서 유용하게 사용될 수 있다.

또한, 본 발명은 가래나무 추출물을 함유하는 색조 화장료 조성물을 제공한다.

상기 본 발명의 색조 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 모든 제형으로 제조할 수 있으며, 립스틱, 아이라이너, 메이크업 파운데이션, 마스카라, 볼터치 및 아이쉐도우로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형에 사용되는 것이 바람직하다.

본 발명의 가래나무 추출물은 진한 녹색을 띄고 있으므로, 색조 화장품에 쓰이고 있는 화학성 색소원료(청색 1호 브릴리안트블루 FCF, 청색 2호 인디고 카르민, 녹색 404호 프탈로시아닌 블루)를 대체하는 색조 화장료 조성물에 유용하게 이용할 수 있다.

본 발명의 가래나무 추출물을 이용한 색조 화장료 조성물에서, 가래나무 추출물의 함량은 전체 화장료 조성물에 대하여 0.0001 내지 50 중량%로 포함될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 0.0001 내지 30 중량%으로 포함되는 것이나, 이에 한정하지 않는다.

이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 가래나무( Junglans mandshurica MAXIM ) 추출물의 제조

가래나무는 강원도 횡성군 가래나무 재배지에서 구입하였다.

가래나무의 잎은 70% 에탄올을 시료의 10배 양으로 하여 상온에서 24시간 동안 침출시킨 다음, 감압여과하여(Whatman filter paper #2), 건조 분말화(수득률 5.16%)하여 -20℃에서 보관하였고, 실험시 용시조제하여 사용하였다.

< 실험예 1> 가래나무 추출물의 세포 보호 효과 확인

상기 <실시예 1>에서 제조된 가래나무 추출물의 H₂O₂자극에 대한 인간 피부 섬유아세포(Human dermal fibroblasts; HS68)의 보호 효과를 확인하였다.

구체적으로, HS68 세포를 플레이트에 0.5 × 10⁴세포/웰로 씨딩(seeding)하고, 12시간 동안 배양한 후, FBS free DMEM 배지로 50, 100, 200 및 400 ug/ml 농도로 희석한 가래나무 추출물 각각 농도별로 전처리한 다음, 700 ㎛ H₂O₂를 처리하거나 비처리하여 배양하였다. 이후, 1 mg/mL의 MTT를 처리하고 2시간 후, 세포에 MTT 처리로 인해 생성된 포마잔(formazan)을 DMSO로 녹이고 OD 570nm에서 그 흡광도를 측정하여, H₂O₂ 자극에 대한 HS68 세포의 생존률을 확인하였다.

상기 얻어진 결과 및 이하 모든 결과에 대한 통계처리는 GraphPad Prism 프로그램을 사용하여 실시하였으며, one-way analysis of vatiance(ANOVA)를 이용하여 평균값의 유의성을 5% 미만의 한계로 조사하였다.

그 결과, 도 1 및 도 2에 나타낸 바와 같이, HS68 세포에 각각의 가래나무 추출물을 처리한 경우, 추출물 자체는 세포 생존율에 영향을 미치지 않았다(도 1).

또한, 각각의 가래나무 추출물을 전처리한 경우, H₂O₂ 독성에 대하여 세포 보호 효과를 나타내었다(도 2). 특히 가래나무 추출물 100 ug/ml 처리군에서 가장 좋은 효과를 보였으며, 이 수치는 양성 대조군인 항산화제 NAC(N-아세틸시스테인, N-Acetyl-L-Cysteine) 및 녹차와 비교해본 결과, 유의적인 세포 보호효과를 나타내는 것을 확인하였다(도 2).

따라서, 가래나무 추출물 자체는 HS68 세포에 독성을 나타내지 않고, H₂O₂ 독성에 대한 HS68 세포의 보호 효과를 나타냄을 확인하였다.

< 실험예 2> HS68 세포에서 가래나무 추출물의 ROS 과생성 억제 효과 확인

HS68 세포에서 H₂O₂에 의해 과생성된 ROS(Reactive Oxygen Species)에 대한 가래나무 추출물의 효과를 확인하기 위하여, HS68 세포에 50, 100 및 200 ug/mL의 가래나무 추출물과 700 ㎛ H₂O₂를 처리한 후, 25 uM H₂ DCF-DA를 넣고 30분 동안 배양한 다음, 여기(excitation) 480nm, 방출(emission) 530nm에서 형광도를 측정하여 DCF 형광 강도(DCF fluorescence intensity)를 비교하였다.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 가래나무 추출물은 대조군에 비하여 50, 100 및 200 ug/mL의 농도에서 농도의존적으로 H₂O₂에 의해 과생성된 ROS를 효과적으로 억제할 뿐 아니라, 유의적인 세포 보호 효과를 나타내는 것을 확인하였다(도 3).

따라서, 가래나무 추출물은 인간 피부 섬유아세포(HS68)에서 H₂O₂에 의해 과생성된 ROS의 억제 효과가 있음을 확인하였다.

< 실험예 3> HS68 세포에서 가래나무 추출물의 MMP -1 억제 효과

가래나무 추출물의 MMP-1(Matrix Metallo Proteinase) 효소 활성에 대한 효과를 확인하기 위하여, HS68 세포를 100 mm 디쉬에 0.3 × 10⁵/디쉬로 씨딩한 후, 12시간 동안 배양한 후, FBS free DMEM 배지에 50, 100 및 200 ug/mL으로 희석한 가래나무 추출물 각각을 농도별로 전처리한 다음, 700 ㎛ H₂O₂를 처리하거나 비처리하여 배양하였다. 이후, 배지를 수집하여 MMP-1 Kit(Amersham bioscience)를 이용하여 배지 내 분비된 MMP-1의 양을 측정하였다.

그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이 가래나무 추출물은 H₂O₂에 의해 증가한 MMP-1에 대하여 농도 의존적인 MMP-1 효소 활성을 억제 효과를 확인하였다(도 4).

따라서, 본 발명의 가래나무 추출물이 콜라겐 분해 효소인 MMP-1을 억제함으로써, 주름 생성을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다.

< 실험예 4> HS68 세포에서 가래나무 추출물의 COL1A1 ( pro - collagen type 1) 보호 효과 확인

가래나무 추출물의 피부세포에서 콜라겐을 생합성하는 COL1A1에 대한 효과를 확인하기 위하여, 상기 <실시예 3>과 동일한 방법으로, HS68 세포에 가래나무 추출물을 각각 50, 100 및 200 ug/mL 전처리한 다음, 700 ㎛ H₂O₂를 처리하거나 비처리하여 배양하였다. 그런 다음 반응이 끝난 세포를 수집한 후, 세포의 전체 단백질을 이용하여 COL1A1 단백질 발현을 측정하였다.

구체적으로, 수집한 세포를 단백질 정량 후 전기 영동장치를 이용하여 15% SDS-아크릴아미드 겔(SDS-acrylamide gel)에 로딩하고 멤브레인(membrane)에 이동시킨 후 1차 항체로 COL1A1(Abnova)(1:500), β-actin(Santa cruz biotechnology) (1:2000), 2차 항체로 anti-rabbit/mouse HRP-confugated(Santa cruz biotechnology)(1:2000)를 각각 반응시켰다. 각 과정 마다 멤브레인을 TBST로 15분간 4번씩 세척하였다. 항체 반응을 마친 멤브레인은 ECL detection kit(Animal genetics)를 이용하여 LAS-4000 mini system(Fujifilm Corporation, Tokyo, 일본)을 통해 노출 되도록 하였다.

그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이 가래나무 추출물은 H₂O₂에 의해 감소한 COL1A1 대하여 농도 의존적인 COL1A1 단백질 발현 증가 효과를 나타내는 것을 확인하였다(도 5).

따라서, 본 발명의 가래나무 추출물이 콜라겐을 생합성하는 COL1A1을 보호함으로써, 주름 생성을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다.

< 제조예 1> 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료의 제조

<1-1> 유연 화장수의 제조

상기 <실시예 1>의 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 유연 화장수는 하기 [표 1]과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량부)
본 발명의 가래나무 추출물	10.00
1,3-부틸렌글리콜	1.00
디소듐이디티에이	0.05
알란토인	0.10
디포타슘글리시리제이트	0.05
시트릭애씨드	0.01
소듐시트레이트	0.02
글리세레스-26	1.00
알부틴	2.00
하이드로제네이티드캐스터오일	1.00
에탄올	30.00
보존제	미량
착색제	미량
착향제	미량
정제수	잔량

<1-2> 영양 크림의 제조

상기 <실시예 1>의 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유한 영양크림은 하기 [표 2]의 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량부)
본 발명의 가래나무 추출물	10.0
1,3-부틸렌 글리콜	7.0
글리세린	1.0
D-판테놀	0.1
식물 추출물	3.2
마그네슘알루미늄실리케이트	0.3
PEG-40 스테아레이트	1.2
스테아릭애씨드	2.0
폴리소르베이트 60	1.5
친유형글리세릴스테아레이트	2.0
소르비탄세스퀴올리에이트	1.5
세테아릴알코올	3.0
미네랄오일	4.0
스쿠알란	3.8
카르릴릭/카프릭트리글리세라이드	2.8
식물성 오일	1.8
디메치콘	0.4
디포타슘글리시리제이트	미량
알란토인	미량
소듐 히아루로네이트	미량
토코페릴아세테이트	적량
트리에탄올아민	적량
보존제	적량
착향제	적량
정제수	잔량

< 제조예 2> 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 약제의 제조

<2-1> 시럽제의 제조

상기 <실시예 1>의 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 시럽제는 하기 [표 3]의 조성과 같이 제조하였다.

구성성분	함량(중량부)
본 발명의 가래나무 추출물	2
사카린	0.8
당	25.4
글리세린	8
향미료	0.04
에탄올	4
소르브산	0.4
증류수	60

<2-2> 정제의 제조

상기 <실시예 1>의 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 정제는 하기 [표 4]의 조성과 같이 제조하였다.

구성성분	함량(중량부)
본 발명의 가래나무 추출물	250
락토오스	175.9
감자전분	180
콜롱드성 규산	32
10% 젤라틴 용액	5
감자전분	160
활석	50
스테아르산 마그네슘	5

상기 <실시예 1>의 가래나무 추출물 250 중량부, 락토오스 175.9 중량부, 감자전분 180 중량부 및 콜로이드성 규산 32 중량부와 혼합하였다. 상기 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄하여 14 매쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조하고 여기에 감자전분 160 중량부, 활석 50 중량부 및 스테아린산 마그네슘 5 중량부를 첨가하여 얻은 혼합물을 정제로 제조하였다.

< 제조예 3> 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강식품의 제조

상기 <실시예 1>의 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.

<3-1> 밀가루 식품의 제조

상기 <실시예 1>의 가래나무 추출물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.

<3-2> 스프 및 육즙( gravies )의 제조

상기 <실시예 1>의 가래나무 추출물 0.1~5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

<3-3> 그라운드 비프(ground beef)의 제조

상기 <실시예 1>의 가래나무 추출물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

<3-4> 유제품( dairy products )의 제조

상기 <실시예 1>의 가래나무 추출물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

<3-5> 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

상기 <실시예 1>의 가래나무 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 실시예 <1-3>의 추출물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),

<실시예 1>의 가래나무 추출물(3 중량부),

영지(0.5 중량부),

지황(0.5 중량부)

< 제조예 4> 가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 음료의 제조

<4-1> 건강음료의 제조

액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 <실시예 1>의 가래나무 추출물 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.

<4-2> 야채 주스의 제조

상기 <실시예 1>의 가래나무 추출물 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 ㎖에 가하여 야채 주스를 제조하였다.

<4-3> 과일 주스의 제조

상기 <실시예 1>의 가래나무 추출물 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 ㎖ 에 가하여 과일 주스를 제조하였다.

Claims

가래나무 추출물(Junglans mandshurica MAXIM)을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 가래나무 추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
제 2항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 가래나무 추출물은 가래나무 잎 추출물인 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 약학적 조성물.
가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 건강식품용 조성물.
가래나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 피부 외용제.
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