KR101188060B1

KR101188060B1 - 항 ａ 베타 항체 제형

Info

Publication number: KR101188060B1
Application number: KR1020077019596A
Authority: KR
Inventors: 도나 루이시; 니콜라스 더블유 와른; 안젤라 캔터
Original assignee: 와이어쓰 엘엘씨; 얀센 알츠하이머 이뮤노테라피
Priority date: 2005-01-28
Filing date: 2006-01-27
Publication date: 2012-10-24
Also published as: JP2008528612A; WO2006083689A3; CN103768009A; AU2006211184A1; AU2006211184B2; CN103768009B; UA87549C2; HK1196570A1; IL184599A0; CA2593122A1; AR052198A1; JO2740B1; EP2392353A1; HK1118723A1; EP1853310A2; US20100166752A1; UY29351A1; DK1853310T3; MX2007009050A; JP4977625B2

Abstract

본 발명은 Aβ 결합 폴리펩티드, 예를 들어 Aβ 항체의 안정성을 유지하기 위한 제형을 제공한다. 예시적 제형은 등장화제, 예를 들어 만니톨과, 완충제 또는 아미노산, 예를 들어 히스티딘을 포함한다. 다른 예시적 제형은 부산물 형성, 예를 들어 고분자량의 폴리펩티드 응집체, 저분자량의 폴리펩티드 분해 단편 또는 그의 혼합물의 형성을 저해하기에 충분한 양의 산화방지제를 포함한다. 본 발명의 제형은 등장화제, 예를 들어 만니톨과, 완충제 또는 아미노산, 예를 들어 히스티딘을 선택적으로 포함한다. 본 제형은 여러 상이한 투여 경로에 적합하다.

알츠하이머병, 아밀로이드 베타, 항 Aβ 항체, 안정화된 제형, 안정제, 산화방지제, 등장화제, 완충제

Description

항 Ａ 베타 항체 제형{ANTI A BETA ANTIBODY FORMULATION}

관련 출원

본 출원은 발명의 명칭이 "항 A 베타 항체 제형(Anti A Beta Antibody Formulation)"인 미국 가출원 제60/648,631호 (2005년 1월 28일자로 출원)의 이득을 청구한다. 상기 특허 출원의 전체 내용은 본원에 참고로 포함된다.

알츠하이머병 (Alzheimer's disease, "AD")은 아밀로이드 플라크, 신경원 섬유뭉치 (neurofibrillary tangles) 및 상당한 뉴런 손실의 발생을 특징으로 하는 신경퇴행성 질병이다. 노인성 플라크의 주요 성분인 β-아밀로이드 단백질 (Aβ 펩티드로도 칭해짐)은 알츠하이머병의 병인에 연루되어 있다 (Selkoe (1989) Cell 58:611-612; Hardy (1997) Trends Neurosci. 20:154-159). β-아밀로이드는 배양된 뉴런에 직접적으로 유독하고 (Lorenzo and Yankner (1996) Ann. NY Acad. Sci 777:89-95) 다양한 매개체를 통하여 간접적으로 유독한 (Koh et al. (1990) Brain Research 533:315-320; Mattson et al. (1992) J. Neurosciences 12:376- 389) 것으로 밝혀졌다. 부가적으로, PDAPP 생쥐 및 쥐 모델을 비롯한 생체 내 모델에 의하면 β-아밀로이드는 학습 장애, 인지 능력 저하 (altered cognitive function), 및 해마 장기간 강화 (long-term hippocampal potentiation)의 저해에 결부되어 있다 (Chen et al. (2000) Nature 408:975-985; Walsh et al. (2002) Nature 416:535-539). 따라서, β-아밀로이드의 수준을 변경하여 잠재적으로 중증도를 감소시키거나 심지어 질환 그 자체를 저지하는 치료법에 많은 관심이 집중되었다.

PDAPP 생쥐 및 쥐 실험 모델에 있어서 성공적인 연구에 응답하여 최근에 나타난 한 가지 AD 치료 전략은 개체를 면역화하여 항체와 같은 면역글로불린을 제공하거나 (치료용 면역글로불린이 대상에게 투여되는 수동 면역의 경우에서와 같이), β-아밀로이드에 특이적인 면역글로불린을 생성 (대상의 면역계를 활성화하여 투여된 항원에 대한 면역글로불린을 생성하는 능동 면역)하는 것이다. 상기 항체는 다시 β-아밀로이드 응집을 방지하거나 ((Solomon et al. (1997) Neurobiology 94: 4109-4112) 미세신경교 세포를 자극하여 플라크를 식균 작용 및 제거 (Bard et al. (2000) Nature Medicine 6: 916-919)함으로써 플라크 존재 (plaque burden)를 감소시키는 것을 돕는다. 또한 예로서, 인간화 항 Aβ 펩티드 IgG1 단일클론 항체 (인간화 3D6 항체)는 인간 Aβ 펩티드에 선택적으로 결합함으로써 AD를 효과적으로 치료할 수 있다.

단백질, 특히 항체에 있어서 생물학적으로 활성인 채 남아있기 위해서는, 제형은 이 단백질의 아미노산의 적어도 코어 서열의 배좌 완전성을 온전하게 보존하는 동시에, 단백질의 다수의 작용기가 분해되지 않게 하여야 한다. 단백질의 분해 경로는 화학적 불안정성 (즉, 결합 형성 또는 절단에 의해 단백질을 변형시켜 새로운 화학적 실체 (entity)를 생성하는 것을 포함하는 임의의 과정) 또는 물리적 불안정성 (즉, 단백질의 고차 구조의 변화)을 포함할 수 있다. 화학적 불안정성은 탈아미드화, 라세믹화, 가수분해, 산화, 베타 제거 또는 디술피드 교환으로부터 생 길 수 있다. 물리적 불안정성은 예를 들어 변성, 응집, 침전 또는 흡착으로부터 생길 수 있다. 단백질 약품의 안정성에 대한 일반적인 개관에 대해서는, 예를 들어 문헌[Manning, et al. (1989) Pharmaceutical Research 6:903-918]을 참조한다. 또한, 캐리어 폴리펩티드가 제형 중에 포함되지 않을 경우 안정성을 유지하는 것이 바람직하다.

가능한 단백질 불안정성 발생이 널리 인정되지만, 특정 단백질에 있어서 특정 불안정성에 대한 쟁점을 예측하는 것은 불가능하다. 임의의 이러한 불안정성은 잠재적으로 저하된 활성, 증가된 독성 및/또는 증가된 면역원성을 갖는 폴리펩티드 부산물 또는 유도체의 형성으로 이어질 수 있다. 실제, 폴리펩티드 침전은 혈전 형성, 투여 형태의 비균질성 및 면역 반응에 이를 수 있다. 따라서, 폴리펩티드의 임의의 약학적 제형의 안정성 및 효능은 그의 안정성에 직접적으로 관련된다.

따라서, 보관 및 전달시 생물학적 폴리펩티드, 예를 들어 Aβ 결합 폴리펩티드의 안정성 및 생물학적 활성을 유지할 뿐만 아니라 다양한 치료적 투여 경로에도 적합한 제형에 대한 필요성이 계속적으로 존재한다.

발명의 개요

본 발명은 혼입된 생물학적 활성 단백질, 특히 Aβ 결합 단백질 또는 폴리펩티드, 예를 들어 Aβ 항체 또는 그의 단편 또는 부분의 안정성을 제공하고 그의 생물학적 활성이 유지되도록 설계된 제형을 제공한다. 또한, 본 발명은 요망되지 않는 폴리펩티드 부산물의 형성에 대하여 저항성을 갖는, 예를 들어 안정화된 액체 폴리펩티드 제형과 같은 폴리펩티드 제형을 제공한다.

치료용의 항원-결합 폴리펩티드의 완전성이 특히 중요한데, 이는 폴리펩티드가 보관 동안 부산물, 예를 들어 응집체 또는 분해 단편을 형성할 경우, 생활성이 손실됨으로써 이 분자의 단위 용량 당 치료 활성을 위태롭게 할 수 있기 때문이다. 또한, 특수 기능용, 소정의 생물학적 징후에 있어서의 전달 및 사용용, 예를 들어 신경퇴행성 질병 치료용의 치료용 폴리펩티드를 안정화하는 것이 중대하게 요망되는데, 여기서 폴리펩티드는 혈뇌 장벽 (blood-brain-barrier, BBB)을 횡단하여 표적 항원에 결합하여야 한다.

일 태양에 있어서, 본 발명은 적어도 하나의 Aβ 결합 폴리펩티드, 적어도 하나의 등장화제 (tonicity agent) - 여기서, 등장화제는 제형이 투여에 적합하게 되게 하기에 충분한 양으로 존재함 - , 및 생리학적으로 적합한 pH를 유지하기에 충분한 양의 적어도 하나의 완충제를 포함하는 안정화된 제형을 제공한다. 본 제형은 동결 건조 제형 또는 액체 제형일 수 있다. 몇몇 제형은 적어도 하나의 산화방지제, 예를 들어 아미노산 산화방지제, 예를 들어 메티오닌을 포함한다. 몇몇 제형에 있어서, 등장화제는 만니톨 또는 NaCl이다. 몇몇 제형에 있어서, 적어도 하나의 완충제는 숙시네이트, 인산나트륨, 또는 히스티딘과 같은 아미노산이다. 바람직한 제형은 적어도 하나의 안정제, 예를 들어 폴리소르베이트 80을 또한 포함한다. 몇몇 제형에 있어서, 안정제는 폴리소르베이트 80이며, 산화방지제는 메티오닌이며, 등장화제는 만니톨, 소르비톨 또는 NaCl이며, 완충제는 히스티딘이다. 몇몇 제형에 있어서, 적어도 하나의 Aβ 결합 폴리펩티드는 항 Aβ 항체, 항 Aβ 항체 Fv 단편, 항 Aβ 항체 Fab 단편, 항 Aβ 항체 Fab'(2) 단편, 항 Aβ 항체 Fd 단편, 단쇄 항 Aβ 항체 (scFv), 단일 도메인 항 Aβ 항체 단편 (Dab), 항 Aβ 항체 유래의 적어도 하나의 상보성 결정 영역 (complementarity determining region, CDR)을 포함하는 항체 베타-플리티드 시트형 (beta-pleated sheet) 폴리펩티드, 및 항 Aβ 항체 유래의 적어도 하나의 항체 CDR을 포함하는 구형외 (non-globular) 폴리펩티드로 구성된 군으로부터 선택된다. 몇몇 제형에 있어서, 적어도 하나의 Aβ 결합 폴리펩티드는 예를 들어 Aβ, 또는 그의 Fab, Fab'(2) 또는 Fv 단편의 잔기 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 15-24, 16-24, 16-21, 19-22, 33-40, 33-42 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항 Aβ 항체이다. 예시적 항 Aβ 항체는 Aβ의 잔기 1-10, 예를 들어 Aβ의 잔기 1-7, 1-5, 3-7, 또는 3-6 내의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 다른 예시적 항 Aβ 항체는 Aβ의 잔기 13-28, 예를 들어 Aβ의 잔기 16-21 또는 19-22 내의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 또 다른 예시적 항 Aβ 항체는 Aβ의 C 말단 에피토프, 예를 들어 Aβ의 33-40 또는 33-42에 특이적으로 결합한다. 바람직한 항 Aβ 항체는 인간화 항 Aβ 항체, 예를 들어 인간화 3D6 항체, 인간화 10D5 항체, 인간화 12B4 항체, 인간화 266 항체, 인간화 12A11 항체, 또는 인간화 15C11 항체를 포함한다.

몇몇 제형에 있어서, 항 Aβ 항체는 Aβ의 잔기 1-7 내의 잔기 및 잔기 13-28 내의 잔기를 포함하는 불연속 에피토프에 결합한다. 이러한 몇몇 제형에 있어서, 항체는 2특이성 항체 또는 국제 특허 공개 제WO03/070760호에 개시된 방법으로 제조된 항체이다. 이러한 몇몇 제형에 있어서, 에피토프는 불연속 에피토프이다. 바람직한 제형에 있어서, 항 Aβ 항체는 인간화 3D6 항체, 인간화 10D5 항체, 인간 화 12B4 항체, 인간화 266 항체, 인간화 12A11 항체, 또는 인간화 15C11 항체이다.

당 항체의 이소타입은 IgM, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 임의의 기타 약학적으로 허용가능한 이소타입일 수 있다. 바람직한 제형에 있어서, 이소타입은 인간 IgG1 또는 인간 IgG4이다. 몇몇 액체 제형에 있어서, 항 Aβ 항체의 농도는 약 0.1 mg/ml 내지 약 60 mg/ml, 약 40 mg/ml 내지 약 60 mg/ml, 약 50 mg/ml, 약 30 mg/ml, 약 17 mg/ml 내지 약 23 mg/ml, 약 20 mg/ml, 약 17 mg/ml, 약 10 mg/ml, 약 5 mg/ml, 약 2 mg/ml, 또는 약 1 mg/ml, 바람직하게는 약 17 mg/ml 내지 약 23 mg/ml이다.

몇몇 제형에 있어서, 적어도 하나의 등장화제는 D-만니톨이며, 약 1% (w/v) 내지 약 10% (w/v), 약 2% (w/v) 내지 약 6% (w/v), 또는 바람직하게는 약 4% (w/v)의 농도로 존재한다. 몇몇 제형에 있어서, 적어도 하나의 완충제는 히스티딘이며, 약 0.1 mM 내지 약 25 mM, 약 5 mM 내지 약 15 mM, 바람직하게는 약 5 mM 또는 약 10 mM의 농도로 존재한다. 다른 제형에 있어서, 적어도 하나의 완충제는 숙시네이트이며, 약 0.1 mM 내지 약 25 mM, 예를 들어 약 10 mM의 농도로 존재한다. 몇몇 제형에 있어서, 산화방지제는 메티오닌이며, 약 0.1 mM 내지 약 25 mM, 약 5 mM 내지 약 15 mM, 또는 바람직하게는 약 10 mM의 농도로 존재한다. 바람직한 제형에 있어서, 안정제는 폴리소르베이트 80이며, 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.01% (w/v), 약 0.005% (w/v) 내지 약 0.01% (w/v), 또는 약 0.005% (w/v)의 농도로 존재한다. 당 제형의 pH는 약 5 내지 7, 약 5.5 내지 약 6.5, 약 6.0 내지 약 6.5, 약 6.2, 약 6.0, 또는 약 5.5, 바람직하게는 약 6.0일 수 있다.

바람직한 제형은 pH가 약 6.0 내지 약 6.5이며, Aβ의 잔기 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 15-24, 16-24, 16-21, 19-22, 33-40 및 33-42로 구성된 군으로부터 선택되는 잔기 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항 Aβ 항체, 예를 들어 약 2% (w/v) 내지 약 6%의 농도의 만니톨, 예를 들어 약 0.1 mM 내지 약 25 mM 농도의 히스티딘, 약 0.1 mM 내지 약 25 mM 농도의 메티오닌, 및 안정제를 포함한다. 바람직하게는, 안정제는 약 0.001% 내지 약 0.01% (w/v)의 폴리소르베이트 80이다.

본 제형은 혼입된 폴리펩티드의 안정성을 제공하고 그의 생물학적 활성을 유지하도록 설계된 안정화된 액체 폴리펩티드 제형일 수 있다. 본 제형은 치료적 활성 Aβ-결합 폴리펩티드 및 제형의 보관 동안 폴리펩티드의 부산물의 형성을 감소시키기에 충분한 양의 산화방지제를 포함한다.

몇몇 액체 폴리펩티드 제형은 요망되지 않는 부산물, 예를 들어 고분자량의 폴리펩티드 응집체, 저분자량의 폴리펩티드 분해 산물, 또는 그 혼합물의 형성에 대하여 안정하다.

치료용 항원 결합 폴리펩티드가 항체인 제형에 있어서, 최소화될 전형적인 고분자량 응집체는 예를 들어 항체:항체 복합체, 항체:항체 단편 복합체, 항체 단편:항체 항체 단편 복합체, 또는 그 혼합물이다. 일반적으로, 고분자량의 복합체 또는 부산물은 분자량이 항원 결합 폴리펩티드의 단량체보다 크며, 예를 들어, IgG 항체의 경우, 약 150 kD 초과이다. 이러한 항체 제형에 있어서, 최소화될 전형적인 저분자량의 폴리펩티드 분해 산물은, 예를 들어 항체 경쇄로 구성된 복합체, 항체 중쇄로 구성된 복합체, 항체의 경쇄와 중쇄의 복합체, 또는 그 혼합물이다. 일 반적으로, 저분자량의 복합체 또는 부산물은 분자량이 항원 결합 폴리펩티드의 단량체보다 작으며, 예를 들어, IgG 항체의 경우, 약 15O kD 미만이다.

항-Aβ 항체의 바람직한 안정화 제형은 산화방지제로서 요망되지 않는 부산물의 형성을 저해하기에 충분한 양의 메티오닌, 예를 들어 제형이 투여에 적합하게 되도록 하기에 충분한 양의 등장화제, 및 예를 들어 생리학적으로 적합한 pH를 유지하기에 충분한 양의 아미노산 또는 그의 유도체를 포함한다.

몇몇 제형은 냉동될 때 안정하다. 본 제형은 비경구 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 두개내 투여, 또는 경막외 투여, 바람직하게는 정맥내 투여 또는 피하 투여에 적합할 수 있다. 몇몇 제형은 대상의 뇌 또는 척수액으로의 표적화된 전달에 적합할 수 있다. 본 제형에는 실질적으로 방부제가 없을 수 있다. 몇몇 제형은 적어도 약 12개월, 적어도 약 18개월, 적어도 약 24개월, 또는 적어도 약 30개월 동안 안정하다. 몇몇 제형은 약 -8O℃ 내지 약 4O℃, 약 O℃ 내지 약 25℃, 약 O℃ 내지 약 10℃, 바람직하게는 약 - 8O℃ 내지 약 -5O℃ 또는 약 2℃ 내지 약 8℃에서 안정하다.

몇몇 제형은 냉동 온도 초과의 온도 내지 약 1O℃의 온도에서 적어도 약 12개월 동안 안정하며, pH가 약 5.5 내지 약 6.5이다. 이러한 제형은 약 1 mg/ml 내지 약 30 mg/ml의 농도의 적어도 하나의 Aβ 항체, 약 4% (w/v)의 농도의 만니톨, 또는 약 150 mM 농도의 NaCl, 약 5 mM 내지 약 10 mM의 농도의 히스티딘 또는 숙시네이트, 및 10 mM의 메티오닌을 포함한다. 하나의 이러한 제형은 약 6.0의 pH, 약 1 mg/ml의 Aβ 항체, 약 10 mM의 히스티딘 및 약 4% (w/v)의 만니톨을 가진다. 다 른 제형은 약 2℃ 내지 8℃의 온도에서 적어도 약 24개월 동안 안정하며, 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.01% (w/v)의 농도의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 이러한 제형 중 몇몇은 pH가 약 6.0 내지 약 6.5이며, 약 10 mM의 히스티딘, 약 4% (w/v)의 만니톨 및 약 1 mg/ml, 약 2 mg/ml 또는 약 5 mg/ml Aβ 항체를 포함한다. 다른 이러한 제형은 약 10 mM의 히스티딘, 약 4% (w/v)의 만니톨, 약 0.005% (w/v)의 폴리소르베이트 80 및 약 10 mg/ml, 약 20 mg/ml 또는 30 mg/ml의 Aβ 항체 - 바람직하게는 약 6.0 내지 약 6.2의 pH - 를 포함한다.

이러한 제형 중 항 Aβ 항체는 바람직하게는 인간화 3D6 항체, 인간화 10D5 항체, 인간화 12B4 항체, 인간화 266 항체, 인간화 12A11 항체, 또는 인간화 15C11 항체이다. 하나의 이러한 제형은 pH가 약 6.0 내지 6.5이며, 약 10 mM의 히스티딘, 약 4% (w/v)의 만니톨, 및 인간화 3D6 항체, 인간화 10D5 항체, 인간화 12B4 항체, 및 인간화 12A11 항체로 구성된 군으로부터 선택되는 약 2 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 Aβ 항체를 포함한다. 다른 이러한 제형은 pH가 약 6.0 내지 6.5이며, 약 10 mM의 히스티딘, 약 150 mM의 NaCl, 및 인간화 12B4 항체 및 인간화 12A11 항체로 구성된 군으로부터 선택되는 약 2 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 Aβ 항체를 포함한다. 또 다른 이러한 제형은 pH가 약 6.0 내지 6.5이며, 약 10 mM의 히스티딘, 약 4% (w/v)의 만니톨, 및 인간화 266 항체 및 인간화 15C11 항체로 구성된 군으로부터 선택되는 약 2 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 Aβ 항체를 포함한다.

바람직한 제형은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 적어도 약 24개월 동안 안정하며, pH가 약 5.5 내지 약 6.5이고, 약 2 mg/ml 내지 약 23 mg/ml, 바람직하게 는 약 17 mg/ml 내지 약 23 mg/ml의 인간화 3D6 항체, 약 10 mM의 히스티딘 및 약 10 mM의 메티오닌을 포함한다. 바람직하게는, 본 제형은 약 4% (w/v)의 만니톨을 추가로 포함한다. 본 제형은 바람직하게는 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.01% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80, 더 바람직하게는 약 0.005% (w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 이러한 제형에 있어서, 인간화 3D6 항체는 약 20 mg/ml 내지 약 23 mg/ml의 농도로 존재할 수 있다.

다른 제형은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 적어도 약 24개월 동안 안정하며, pH가 약 5.5 내지 약 6.5이고, 약 2 mg/ml 내지 약 23 mg/ml의 인간화 3D6 항체, 약 10 mM의 숙시네이트, 약 10 mM의 메티오닌, 약 4% (w/v)의 만니톨 및 약 0.005% (w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 이러한 제형 중 몇몇 제형에 있어서, 인간화 3D6 항체의 농도는 약 17 mg/ml 내지 약 23 mg/ml의 농도로 존재한다.

다른 바람직한 제형은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 적어도 약 24개월 동안 안정하며, pH가 약 6.0 내지 약 6.5이고, 약 2 mg/ml 내지 약 30 mg/ml의 인간화 266 항체, 약 10 mM의 히스티딘 및 약 10 mM의 메티오닌을 포함한다. 이러한 제형 중 몇몇 제형은 약 4% (w/v)의 만니톨을 추가로 포함한다. 이러한 제형 중 몇몇 제형은 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.01% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80, 예를 들어 약 0.005% (w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 이러한 제형 중 몇몇 제형에 있어서, 인간화 266 항체는 약 17 mg/ml 내지 약 23 mg/ml 또는 약 20 mg/ml 내지 약 23 mg/ml의 농도로 존재한다.

또 다른 제형은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 적어도 약 24개월 동안 안정 하며, pH가 약 6.0 내지 약 6.5이고, 약 2 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 인간화 266 항체, 약 10 mM의 숙시네이트, 약 10 mM의 메티오닌, 약 4% (w/v)의 만니톨 및 약 0.005% (w/v)의 폴리소르베이트를 포함한다.

다른 바람직한 제형은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 적어도 약 24개월 동안 안정하며, pH가 약 6.0 내지 약 6.5이고, 약 2 mg/ml 내지 약 30 mg/ml의 인간화 12A11 항체, 약 10 mM의 히스티딘 및 약 10 mM의 메티오닌을 포함한다. 이러한 제형 중 몇몇 제형은 약 150 mM의 NaCl을 포함한다. 이러한 제형은 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.01% (w/v) 농도의 폴리소르베이트 80, 예를 들어 약 0.005% (w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함할 수 있다. 이 제형 중 몇몇 제형에 있어서, 인간화 12A11 항체는 약 17 mg/ml 내지 약 23 mg/ml 또는 약 20 mg/ml 내지 약 23 mg/ml의 농도로 존재한다.

또 다른 제형은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 적어도 약 24개월 동안 안정하며, pH가 약 6.0 내지 약 6.5이고, 약 2 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 인간화 12A11 항체, 약 5 mM의 히스티딘, 약 10 mM의 메티오닌, 약 4% (w/v)의 만니톨 및 약 0.005% (w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함한다.

본 발명은 약 -50℃ 내지 약 -80℃에서 해동될 때 안정하고, pH가 약 6.0이며, 약 40 내지 약 60 mg/ml의 항 Aβ 항체, 약 1.0 mg/ml 내지 약 2.0 mg/ml의 히스티딘, 약 1.0 mg/ml 내지 2.0 mg/ml의 메티오닌 및 약 0.05 mg/ml의 폴리소르베이트 80을 포함하는 제형도 제공한다. 바람직하게는, 만니톨은 함유하지 않는다. 바람직하게는, Aβ 항체는 인간화 3D6 항체 또는 인간화 266 항체이다.

본 발명은 항 Aβ 항체, 만니톨 및 히스티딘을 포함하는 액체 제형도 제공한다. 이러한 제형 중 몇몇 제형에 있어서, 항 Aβ 항체는 약 1 mg/ml 내지 약 30 mg/ml로 존재한다. 바람직하게는, 만니톨은 제형의 등장성을 유지하기에 충분한 양으로 존재한다. 바람직하게는, 히스티딘은 생리학적으로 적합한 pH를 유지하기에 충분한 양으로 존재한다. 하나의 그러한 제형은 약 20 mg/mL의 항 Aβ 항체, 약 10 mM의 L-히스티딘, 약 10 mM의 메티오닌, 약 4%의 만니톨을 포함하며, pH가 약 6이다. 다른 그러한 제형은 약 30 mg/mL의 항 Aβ 항체, 약 10 mM의 숙시네이트, 약 10 mM의 메티오닌, 약 6% 만니톨을 포함하며, pH가 약 6.2이다. 또 다른 그러한 제형은 약 20 mg/mL의 항 Aβ 항체, 약 10 mM의 L-히스티딘, 약 10 mM의 메티오닌, 약 4%의 만니톨, 약 0.005%의 폴리소르베이트 80을 포함하며, pH가 약 6이다. 다른 그러한 제형은 약 10 mg/mL의 항 Aβ 항체, 약 10 mM의 숙시네이트, 약 10 mM의 메티오닌, 약 10%의 만니톨, 약 0.005%의 폴리소르베이트 80을 포함하며, pH가 약 6.5이다.

또 다른 그러한 제형은 약 5 mg/mL 내지 약 20 mg/mL의 항 Aβ 항체, 약 5 mM 내지 약 10 mM의 L-히스티딘, 약 10 mM의 메티오닌, 약 4%의 만니톨, 약 0.005%의 폴리소르베이트 80을 포함하며, pH가 약 6.0 내지 약 6.5이다. 또 다른 그러한 제형은 약 5 mg/mL 내지 약 20 mg/mL의 항 Aβ 항체, 약 5 mM 내지 약 10 mM의 L-히스티딘, 약 10 mM의 메티오닌, 약 150 mM의 NaCl, 약 0.005%의 폴리소르베이트 80을 포함하며, pH가 약 6.0 내지 약 6.5이다.

본 발명은 정맥내 투여에 적합하며, 약 20 mg/mL의 항 Aβ 항체, 약 10 mM의 L- 히스티딘, 약 10 mM의 메티오닌, 약 4%의 만니톨을 포함하고, pH가 약 6인 제형도 제공한다. 바람직하게는, 이러한 제형은 약 0.005%의 폴리소르베이트 80을 포함한다.

본 발명은 약학적 액체 제형 중 항원 결합 폴리펩티드, 예를 들어 항체의 안정성을 증가시키는 방법을 제공하며, 여기서, 이 폴리펩티드는 그렇지 않을 경우 액체 제형 형태로 보관하는 동안 부산물 형성을 나타낸다. 따라서, 본 방법은 제형 내로 산화방지제, 예를 들어 메티오닌 또는 그의 유사체를 부산물 형성량을 감소시키기에 충분한 양으로 혼입하는 단계를 포함한다.

본 발명은 약 -50℃ 내지 약 -80℃의 온도에서 보관되고, 이어서 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 보관될 인간화 항 Aβ 항체의 안정성을 유지하는 방법으로서, (i) 약 40 mg/ml 내지 약 60 mg/ml의 인간화 항 Aβ 항체, 약 1 mg/ml 내지 약 2 mg/ml의 L-히스티딘, 약 1 mg/ml 내지 약 2 mg/ml의 메티오닌 및 약 0.05 mg/ml의 폴리소르베이트 80을 조합하는 단계; (ii) pH를 약 6.0으로 조정하는 단계; (iii) 동결용기 (cryovessel) 내로 여과하고 냉동시키는 단계; (iv) 해동시키는 단계; (v) 만니톨 또는 NaCl 및 희석제를 약 4%의 만니톨 또는 약 150 mM의 NaCl, 약 2 mg/ml 내지 약 20 mg/ml의 인간화 항 Aβ 항체; 약 5 mM 내지 약 10 mM의 히스티딘; 약 10 mM의 메티오닌 및 약 0.005%의 폴리소르베이트 80의 최종 농도를 생성하기에 충분한 양으로 첨가하는 단계; (vi) 여과하는 단계; (vii) 유리 바이알로 옮기고 밀봉하는 단계; 및 (viii) 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 보관하는 단계를 포함하는 방법도 제공한다.

본 발명은 또한 본원에 기술된 제형을 포함하는 용기와, 사용 설명서를 포함하는 키트를 제공한다.

또한, 본 발명은 약 10 mg 내지 약 250 mg의 항 Aβ 항체, 약 4%의 만니톨 또는 약 150 mM의 NaCl, 약 5 mM 내지 약 10 mM의 히스티딘 또는 숙시네이트, 및 약 10 mM의 메티오닌의 제형을 포함하는 약학적 단위 투여 형태를 제공한다. 이러한 약학적 단위 투여 형태 중 몇몇은 약 0.001% 내지 약 0.1%의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 이러한 약학적 단위 투여 형태 중 몇몇은 약 40 mg 내지 약 60 mg, 약 60 mg 내지 약 80 mg, 약 80 mg 내지 약 120 mg, 약 120 mg 내지 약 160 mg, 또는 약 160 mg 내지 약 240 mg의 항 Aβ 항체를 포함한다. 이러한 제형 중 몇몇은 환자에게의 투여 이전에 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 유리 바이알 중에 유지될 수 있다.

또한, 본 발명은 약 10 mg 내지 약 250 mg의 인간화 항 Aβ 항체, 약 4%의 만니톨 또는 약 150 mM의 NaCl, 약 5 mM 내지 약 10 mM의 히스티딘, 및 약 10 mM의 메티오닌을 포함하는 제형을 포함하는 유리 바이알을 포함하는 치료용 제품을 제공한다. 이러한 치료용 제품 중 몇몇은 환자에 있어서 약 0.15 mg/kg 내지 약 5 mg/kg의 용량의 성취에 필요한 적절한 부피에 대한 사용 설명서를 포함하는 사용에 대한 라벨링을 추가로 포함한다. 일반적으로, 바이알은 1 mL, 2 mL, 5 mL, 10 mL, 25 mL 또는 50 mL 바이알이다. 그러한 치료용 제품 중 몇몇 제품의 용량은 약 0.5 mg/kg 내지 약 3 mg/kg, 바람직하게는 약 1 mg/kg 내지 약 2 mg/kg이다. 몇몇 이러한 치료용 제품에 있어서, 항 Aβ 항체의 농도는 약 10 mg/ml 내지 약 60 mg/ml, 바람직하게는 약 20 mg/ml이다. 치료용 제품은 바람직하게는 약 0.005%의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 몇몇 이러한 치료용 제품의 제형은 피하 투여 또는 정맥내 투여용이다.

본 발명은 또한 Aβ 침착을 특징으로 하는 질환의 예방적 치료 또는 치료적 치료 방법으로서, 본원에 기술된 약학적 단위 투여 형태를 정맥내 또는 피하 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

본 발명의 다른 특징 및 이점은 하기의 상세한 설명 및 청구의 범위로부터 명백해질 것이다.

도 1에는 IgG 항체의 예측되는 구조와, 사슬내 및 사슬간 디술피드 결합의 대략적인 위치, 글리코실화 부위 (육각형 기호), 상보성 결정 영역 (CDR), 골격 영역 (흐리게 처리함 (shaded)), 및 불변 영역의 개략도가 도시되어 있다.

도 2에는 인간화 3D6 버전 2 (hu3D6.v2) 항 Aβ 항체의 경쇄 및 중쇄의 전 아미노산 서열, 각각 서열 번호 1 및 서열 번호 2의 서열이 도시되어 있다. 경쇄 상보성 결정 영역 (complementarity determining regions, CDR), 즉, CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 잔기 위치 24-39, 55-61, 및 94-102 (상부 패널)에 존재한다. 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR), 즉, CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 잔기 위치 40-44, 50-65, 및 99-108 (하부 패널)에 존재한다. 예측된 분자내 디술피드 결합은 연루된 시스테인 잔기들의 연결에 의해 도시되어 있다. 분자간 디술피드 결합을 형성할 것으로 기대되는 시스테인은 밑줄로 처리되어 있으며, 그 연결이 나타내어져 있 다. 항체 중쇄의 N-결합 글리코실화 콘센서스 (consensus) 부위는 잔기 위치 299-301 (하부 패널)에서 이탤릭체로 나타내어져 있다. 예측된 중쇄 C-말단 라이신은 괄호 안에 예시되어 있다.

도 3에는 본 발명에 따라 제조되고 5℃에서 보관된 항체 제형 (폴리소르베이트 80 (PS80)을 포함하거나 포함하지 않음)에 있어서 예측되는 저장 기간이 그래프로 도시되어 있다.

도 4에는 본 발명에 따라 제조되고 25℃에서 보관된 항체 제형 (PS80을 포함하거나 포함하지 않음)에 있어서 예측되는 저장 기간이 그래프로 도시되어 있다.

도 5에는 본 발명에 따라 제조되고 40℃에서 보관된 항체 제형 (PS80을 포함하거나 포함하지 않음)에 있어서 예측되는 저장 기간이 그래프로 도시되어 있다.

도 6에는 본 발명에 따라 제조되고 5℃에서 보관된, PS80을 포함하는 제형의 분해 예측치가 그래프로 도시되어 있다.

도 7에는 본 발명에 따라 제조되고, 5℃에서 보관되며, 분석 상의 가변성의 최소화를 위하여 재프로세싱된, PS80을 포함하는 제형의 크기 배제 크로마토그래피 (size exclusion chromatography, SEC) 분석이 그래프로 도시되어 있다.

도 8에는 본 발명에 따라 제조되고 5℃에서 보관된, PS80을 포함하지 않는 제형의 분해 예측치가 그래프로 도시되어 있다.

도 9에는 PS80의 존재에 의해 항체 단량체 프로필의 변화 없이 안정화된 폴리펩티드 제형 내에서 발견되는 부산물이 고분자량의 화학종으로부터 저분자량의 화학종으로 변경됨을 나타내는 크로마토그램이 도시되어 있다.

도 10에는 자유 메티오닌과 같은 산화방지제의 첨가시, IgG4를 포함하는 폴리펩티드 제형 중 요망되지 않는 부산물, 특히 고분자량의 폴리펩티드 응집체의 형성이 저해되는 것이 그래프로 도시되어 있다.

도 11에는 자유 메티오닌과 같은 산화방지제의 첨가시, IgG2를 포함하는 폴리펩티드 제형 중 요망되지 않는 부산물, 특히 고분자량의 폴리펩티드 응집체의 형성이 저해되는 것이 그래프로 도시되어 있다.

본 명세서 및 청구의 범위의 명확한 이해를 제공하기 위하여, 다음 정의가 하기에 편리하게 제공된다.

본원에 사용되는 바와 같이, "아밀로이드 생성성 질환 (amyloidogenic disease)"라는 용어는 불용성 아밀로이드 원섬유 (amyloid fibrils)의 형성 또는 침착과 관련되거나 그에 의해 야기되는 임의의 질환을 포함한다. 예시적 아밀로이드 생성성 질환은 전신성 아밀로이드증, 알츠하이머병, 성인형 당뇨병 (mature onset diabetes), 파킨슨병 (Parkinson's disease), 헌팅톤병 (Huntington's disease), 전측두 치매, 및 프라이온-관련성 전염성 해면상 뇌증 (인간에 있어서의 쿠루병 (kuru) 및 크로이츠펠트-야콥병 (Creutzfeldt-Jacob disease)과, 각각 양 및 소에 있어서의 스크래피 (scrapie) 및 BSE)을 포함하지만, 이로 한정되지는 않는다. 상이한 아밀로이드 생성성 질환은 침착되는 상기 원섬유의 폴리펩티드 성분의 성질에 의해 규정되거나 이 성질을 특징으로 한다. 예를 들어, 알츠하이머병에 걸린 대상 또는 환자에 있어서, β-아밀로이드 단백질 (예를 들어, 야생형, 변이형, 또는 절단형 β-아밀로이드 단백질)은 아밀로이드 침착물의 특징적인 폴리펩티드 성분이다. 따라서, 알츠하이머병은 예를 들어, 대상 또는 환자의 뇌에서 "Aβ의 침착을 특징으로 하는 질환" 또는 "Aβ의 침착과 관련된 질환"이다.

"β-아밀로이드 단백질", "β-아밀로이드 펩티드", "β-아밀로이드", "Aβ" 및 "Aβ 펩티드"라는 용어는 본원에서 서로 바꾸어서 사용될 수 있다.

"Aβ 결합 폴리펩티드"는 Aβ 펩티드(들) 또는 상기 Aβ 펩티드 내의 에피토프(들)에 특이적으로 결합할 수 있는 폴리펩티드를 포함한다. 일반적으로, Aβ 결합 폴리펩티드는 면역글로불린 또는 면역글로불린 유사 도메인의 적어도 기능성 부분, 예를 들어, 폴리펩티드에 특이적 결합 특성을 부여하는 하나 이상의 가변 영역 또는 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 수용체를 포함한다. 바람직한 항원 결합 폴리펩티드는 항체, 예를 들어 IgM, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4를 포함한다.

"항체"라는 용어는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역 활성 부분 (항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 분자)을 나타내며, 이는 단일클론 항체 (전장 단일클론 항체를 포함함), 다클론 항체, 다중특이성 (multispecific) 항체 (예를 들어, 2특이성 항체), 키메라 항체, CDR-그래프팅된 (grafted) 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 및 단쇄 항체 (scFv)를 포함한다. 본원에 사용되는 바와 같이, "단일클론 항체" 또는 "단일클론 항체 조성물"이라는 용어는 표적 항원의 특정 에피토프, 예를 들어 Aβ의 에피토프(들)를 인식하여 그에 결합할 수 있는 단지 하나의 종의 항원 결합 부위를 포함하는 항체 분자 집단을 나타낸다. 이와 같이, 단일클론 항체 조성물은 일반적으로 그가 면역반응하는 특정 표적 항원에 대하여 단일한 결합 특이성 및 친화성을 나타낸다. "단쇄 항체"라는 용어는 중쇄 및 경쇄로 구성된 개의 폴리펩티드 사슬의 구조를 갖는 단백질을 나타내며, 상기 사슬들은 예를 들어 사슬간 펩티드 링커에 의해 안정화되는데, 이는 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 가진다. 표적 항원에 특이적인 단쇄 항체의 제조 기술은 예를 들어 미국 특허 제4,946,778호에 기술되어 있다. "항체 단편"이라는 용어는 F(ab')2 단편, Fab 단편, Fab' 단편, Fd 단편, Fv 단편, 및 단일 도메인 항체 단편 (domain antibody fragment, DAb)을 포함한다. 면역글로불린의 면역 활성 부분은 예를 들어 F(ab) 및 F(ab')2 단편을 포함한다. Fab 단편의 제작 방법은 예를 들어 문헌[Huse, et al. (1989) Science 246: 1275 1281]에 기술되어 있다. 다른 항체 단편은 당업계에 공지된 기술에 의해 생성될 수 있으며, 이 단편은 (i) 항체 분자의 펩신 절단에 의해 생성되는 F(ab')2 단편; (ii) F(ab')2 단편의 디술피드 가교체를 감소시킴으로써 생성되는 Fab 단편; (iii) 파파인 및 환원제로 항체 분자를 처리함으로써 생성되는 Fab' 단편; 및 (iv) Fv 단편을 포함하지만, 이로 한정되는 것은 아니다. 다양한 단편이 당업계에 의해 인지되는 재조합체 조작 기술에 의해 또한 생성될 수 있다. 비-인간 항체는 예를 들어 미국 특허 제5,225,539호에 개시되어 있는 기술에 의해 "인간화될" 수 있다. 하나의 방법에 있어서, 비-인간 CDR은 인간 항체 또는 콘센서스 (consensus) 항체 골격 서열 내로 삽입된다. 이어서 추가의 변화가 항체 골격 내로 도입되어 친화성 또는 면역원성을 조정할 수 있다.

"도메인"이라는 용어는 면역글로불린 폴드를 포함하는 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드의 구형 영역을 나타낸다. 면역글로불린 폴드는 β-플리티드 시트 이차 구조로 이루어지며, 단일 디술피드 결합을 포함한다. 도메인은 또한 본원에서 "불변" 도메인의 경우 다양한 클래스의 구성원의 도메인 내의 서열 변이의 상대적인 결여를 기초로 하여, 또는 "가변" 도메인의 경우 다양한 클래스의 구성원의 도메인 내의 유의한 변이를 기초로 하여 "불변" 또는 "가변" 도메인으로 칭해진다. 항체 또는 폴리펩티드 "도메인"은 흔히 당업계에서 항체 또는 폴리펩티드 "영역"으로 서로 바꾸어서 칭해질 수 있다. 항체 경쇄의 "불변" 도메인은 "경쇄 불변 영역", "경쇄 불변 도메인", "CL" 영역 또는 "CL" 도메인으로 서로 바꾸어서 칭해질 수 있다. 항체 중쇄의 "불변" 도메인은 "중쇄 불변 영역", "중쇄 불변 도메인", "CH 영역", "CH" 도메인으로 서로 바꾸어서 칭해질 수 있다. 항체 경쇄의 "가변" 도메인은 "경쇄 가변 영역", "경쇄 가변 도메인", "VL" 영역, 또는 "VL" 도메인으로 서로 바꾸어서 칭해질 수 있다. 항체 중쇄의 "가변" 도메인은 "중쇄 불변 영역", "중쇄 불변 도메인", "VH" 영역" 또는 "VH" 도메인으로 서로 바꾸어서 칭해질 수 있다.

"영역"이라는 용어는 항체 사슬 또는 항체 사슬 도메인의 부분 또는 일부 (예를 들어, 본원에 정의된 바와 같이 중쇄 또는 경쇄의 부분 또는 일부 또는 불변 또는 가변 도메인의 부분 또는 일부)과, 상기 사슬 또는 부분의 보다 별개의 부분 또는 일부를 또한 나타낼 수 있다. 예를 들어, 경쇄 및 중쇄 또는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인은, 본원에 정의된 바와 같이, "골격 영역" 또는 "FR" 사이에 산재된 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"을 포함한다.

"항 Aβ 항체"라는 용어 (및 그의 단편)는 Aβ 펩티드의 에피토프(들)에 결합할 수 있는 항체 (및 그의 단편)를 포함한다. 항 Aβ 항체는, 예를 들어 미국 특허 공보 제20030165496A1호, 미국 특허 공보 제20040087777A1호, 국제 특허 공개 제WO02/46237A3호, 및 국제 특허 공개 제WO04/080419A2호에 개시된 항체를 포함한다. 다른 항 Aβ 항체는 예를 들어 둘 모두의 발명의 명칭이 "베타 아밀로이드 펩티드를 인식하는 인간화 항체 (Humanized Antibodies that Recognize Beta Amyloid Peptide)"인 국제 특허 공개 제WO03/077858A2호 및 국제 특허 공개 제WO04/108895 A2호, 발명의 명칭이 "항-Aβ 항체 (Anti-Aβ Antibodies)"인 국제 특허 공개 제WO03/016466A2호, 발명의 명칭이 "아밀로이드 베타 펩티드를 봉쇄하는 인간화 항체 (Humanized Antibodies that Sequester Amyloid Beta Peptide)"인 국제 특허 공개 제WO0162801 A2호, 및 발명의 명칭이 "인간화 항체 (Humanized Antibodies)"인 국제 특허 공개 제WO02/088306A2호, 및 발명의 명칭이 "항-Aβ 항체 및 그의 용도 (Anti-Aβ Antibodies and Their Use)"인 국제 특허 공개 제WO03/070760A2호에 개시되어 있다.

"단편"이라는 용어는 온전하거나 완전한 항체 또는 항체 사슬보다 적은 아미노산 잔기를 포함하는 항체 또는 항체 사슬의 부분 또는 일부를 나타낸다. 단편은 온전하거나 완전한 항체 또는 항체 사슬의 화학적 처리 또는 효소적 처리를 통하여 얻어질 수 있다. 또한, 단편은 재조합 수단에 의해 얻어질 수 있다. 예시적 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fabc 및/또는 Fv 단편을 포함한다. "항원 결합 단편"이라는 용어는 항원에 결합하거나, 특이적 항원 결합을 위하여 온전한 항체로부터 유래되고 온전한 항체와 경쟁하는 면역글로불린 또는 항체의 폴리펩티드 단편을 나타낸다.

"배좌"라는 용어는 단백질 또는 폴리펩티드, 예를 들어 항체, 항체 사슬, 그의 도메인 또는 영역의 삼차 구조를 나타낸다. 예를 들어, "경쇄 (또는 중쇄) 배좌"라는 어구는 경쇄 (또는 중쇄) 가변 영역의 삼차 구조를 나타내며, "항체 배좌" 또는 "항체 단편 배좌"라는 어구는 항체 또는 그의 단편의 삼차 구조를 나타낸다.

항체의 "특이적 결합"이라는 용어는 항체가 특정 항원 또는 에피토프에 대하여 감지가능한 친화성을 나타낸다는 것을 의미한다. 예시적 실시 형태에 있어서, 항체는 교차 반응성을 전혀 나타내지 않는다 (예를 들어, Aβ외 펩티드 또는 Aβ 상의 원거리이거나 먼 에피토프와 교차 반응하지 않음). "감지가능"하거나 바람직한 결합은 10^-6, 10^-7, 10^-8, 10^-9 M, 또는 10^-10 M의 친화도로 결합하는 것을 포함한다. 10^-7 M 초과, 바람직하게는 10^-8 M 초과의 친화도가 더 바람직하다. 본원에 나타낸 것의 중간 값도 본 발명의 범주 이내인 것으로 하려 하며, 바람직한 결합 친화도는 친화도의 범위로서, 예를 들어 10^-6 내지 10^-10 M, 바람직하게는 lO^-7 내지 10^-10 M, 더 바람직하게는 10^-8 내지 10^-10 M로 나타낼 수 있다. "유의한 교차 반응성"을 나타내지 않는 항체는 바람직하지 못한 실체 (예를 들어, 바람직하지 못한 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드)에 결합하지 않는 것이다. 예를 들어, Aβ에 특이적으로 결합하는 항체는 Aβ에 감지가능하게 결합하지만, Aβ외 단백질 또는 펩티드 (예를 들어, 플라크에 포함된 Aβ외 단백질 또는 펩티드)와는 유의하게 반응하지 않는다. 특정 에피토프에 특이적인 항체는, 예를 들어 동일 단백질 또는 펩티드 상의 원거리이거나 상이한 에피토프와는 유의하게 교차 반응하지 않는다. 특이적 결합은 그러한 결합을 측정하는 당업계에 의해 인지되는 임의의 수단에 따라 측정될 수 있다. 바람직하게는, 특이적 결합은 Scatchard 분석법 및/또는 경쟁 결합 분석법에 따라 측정된다.

결합 단편은 재조합 DNA 기술, 또는 온전한 면역글로불린의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성된다. 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fabc, Fv, 단쇄, 및 단쇄 항체를 포함한다. "2특이성" 또는 "2작용성" 면역글로불린 또는 항체 이외에, 면역글로불린 또는 항체는 동일한 그의 결합 부위들 각각을 갖는 것으로 이해된다. "2특이성" 또는 "2작용성 항체"는 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍 및 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공 하이브리드 (hybrid) 항체이다. 2특이성 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 결합을 포함하는 다양한 방법으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990)]; 문헌[Kostelny et al., J. Immunol 148, 1547-1553 (1992)]을 참조한다.

"항원"은 항체가 특이적으로 결합하는 항원 결정 부위 (determinant)를 포함하는 분자 (예를 들어, 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 탄수화물 또는 작은 분자)이다.

"에피토프" 또는 "항원 결정 부위"라는 용어는 면역글로불린 또는 항체 (또는 그의 항원 결합 단편)가 특이적으로 결합하는 항원 상의 부위를 나타낸다. 에피토프는 단백질의 삼차 폴딩에 의해 놓여진 인접 아미노산 또는 비인접 아미노산 둘 모두로부터 형성돌 수 있다. 인접 아미노산으로부터 형성되는 에피토프는 일반적으로 변성 용제에의 노출시 유지되며, 반면, 삼차 폴딩에 의해 형성되는 에피토프는 일반적으로 변성 용제를 이용한 처리시 손실된다. 에피토프는 일반적으로 독특한 공간적 배좌의 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개의 아미노산을 포함한다. 에피토프의 공간적 배좌의 결정 방법은 예를 들어 x-선 결정법 및 2차원 핵 자기 공명법을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)]을 참조한다.

"안정화된 제형" 또는 "안정화된 액체 폴리펩티드 제형"이라는 용어는 그 안의 폴리펩티드가 보관시에 그의 물리적 및 화학적 아이덴티티 (identity) 및 완전성을 본질적으로 유지하는 제형을 포함한다. 단백질 안정성을 측정하는 다양한 분석 기술은 당업계에서 이용가능하며, 본원에 기술되어 있다 (문헌[Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991)] 및 문헌[Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)]에 개관됨). 안정성은 선택된 온도에서 선택된 시간 동안 측정될 수 있다. 신속한 시험에 있어서, 제형은 보다 높거나 "높아진" 온도, 예를 들어 4O℃에서 2주 내지 1개월 또는 그 이상 동안 유지될 수 있는데, 이 시간에서 안정성이 측정된다. 예시적 실시 형태에 있어서, 제형은 폴리펩티드 성분의 부산물, 예를 들어 고분자량의 응집 생성물, 저분자량의 분해 또는 단편화 생성물, 또는 그의 혼합물의 형성에 대하여 저항력이 있다. "안정성"이라는 용어는 시간이 지나도 분자 화학종, 예를 들어 항체가 그의 원래의 화학적 아이덴티티, 예를 들어 일차, 이차 및/또는 삼차 구조를 유지하는 시간의 길이를 나타낸다.

"부산물"이라는 용어는 주어진 제형 중 치료용 폴리펩티드의 비율을 줄이거나 감소시키는 요망되지 않는 생성물을 포함한다. 전형적인 부산물은 치료용 폴리펩티드의 응집체, 치료용 폴리펩티드의 단편 (예를 들어, 탈아미드화 또는 가수분해에 의한 폴리펩티드의 분해에 의해 생성됨), 또는 그의 혼합물을 포함한다.

"고분자량의 폴리펩티드 응집체"라는 용어는 치료용 폴리펩티드의 응집체, 치료용 폴리펩티드의 단편 (예를 들어, 예컨대 가수분해에 의한 폴리펩티드의 ㅂ부분해에 의해 생성됨), 또는 그의 혼합물 - 이는 그 후 응집됨 - 을 포함한다. 일반적으로, 고분자량의 응집체는 치료용 폴리펩티드 단량체보다 큰 분자량을 갖는 복합체이다. 항체, 예를 들어 IgG 항체의 경우, 이러한 응집체는 약 150 kD보다 크다. 그러나, 다른 치료용 폴리펩티드, 예를 들어 단쇄 항체 - 이는 일반적으로 분자량이 25 kD임 - 의 경우, 그러한 응집체는 분자량이 약 25 kD보다 크다.

"저분자량의 폴리펩티드 분해 산물"이라는 용어는, 예를 들어, 예컨대 탈아미드화 또는 가수분해에 의해 생기는 치료용 폴리펩티드의 단편을 포함한다. 일반적으로, 저분자량의 분해 산물은 치료용 폴리펩티드 단량체보다 작은 분자량을 갖는 복합체이다. 항체, 예를 들어 IgG 항체의 경우, 그러한 분해 산물은 약 150 kD 미만이다. 그러나, 다른 치료용 폴리펩티드, 예를 들어 단쇄 항체 - 이는 일반적으로 분자량이 25 kD임 - 의 경우, 그러한 응집체는 분자량이 약 25 kD 미만이다.

"투여 경로"라는 용어는 치료용 폴리펩티드를 예를 들어 비경구 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 두개내 투여 또는 경막외 투여에 의해 전달하기 위한, 당업계에 의해 인지되는 투여 경로를 포함한다. 신경퇴행성 질환을 치료하기 위한 치료용 폴리펩티드의 투여에 있어서, 정맥내, 경막외, 또는 두개내 경로가 요망될 수 있다.

본원에 사용되는 바와 같이, "치료"라는 용어는, 질환, 질환의 증상, 또는 질환에 대한 소질을 고치거나, 치유하거나, 완화시키거나, 지연시키거나, 경감시키거나, 변경하거나, 치료하거나, 개량하거나, 개선하거나 그에 영향을 줄 목적으로, 질환, 질환의 증상 또는 질환에 대한 소질을 갖는 환자에게 치료제를 적용 또는 투여하거나, 환자 유래의 단리된 조직 또는 세포주에 치료제를 적용 또는 투여하는 것으로서 정의된다.

"유효 용량" 또는 "유효 투여량"이라는 용어는 요망되는 효과를 성취하거나 적어도 부분적으로 성취하기에 충분한 양으로 정의된다. "치료적 유효 용량"은 이미 질환을 앓고 있는 환자에서 그 질환 또는 그의 합병증을 치유하거나 적어도 부분적으로 저지하기에 충분한 양으로 정의된다. 이러한 용도에 있어서의 유효량은 감염의 중증도 및 환자 그 자신의 면역계의 종합적인 상태에 따라 달라진다.

"환자"라는 용어는 예방적 치료 또는 치료적 치료를 받는 인간 및 기타 포유류 대상을 포함한다.

본원에 사용되는 바와 같이, "투여 단위 형태" (또는 "단위 투여 형태")라는 용어는 치료할 환자의 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 별개인 단위를 나타내며, 각각의 단위는 약학적 담체, 희석제 또는 부형제와 결부된, 요망되는 치료 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 활성 화합물을 포함한다. 본 발명의 단위 투여 형태에 대한 명세 사항은 활성 화합물의 독특한 특성과, 성취될 특정 치료 효과, 및 환자 치료용 활성 화합물과 같은 화합물 분야에서 고유한 제한 사항에 의해 지시되며, 직접적으로 그에 의존적이다.

본 발명의 제형 중 활성 성분 (예를 들어 Aβ 폴리펩티드)의 실제 투여 수준은 환자에 대하여 유독함이 없이, 요망되는 특정 환자에 대한 치료 응답, 조성물, 및 투여 양식을 성취하기에 효과적인 활성 성분의 양이 얻어지도록 변할 수 있다. 선택된 투여 수준은 이용되는 본 발명의 특정 조성물의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 이용되는 특정 화합물의 분비율, 치료 지속 기간, 기타 약물, 이용되는 특정 조성물과 조합되어 사용되는 화합물 및/또는 물질, 치료되는 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 종합 건강, 및 이전 병력, 및 의약 분야에 잘 알려져 있는 유사 요인을 비롯한 다양한 약동학적 요인에 따라 달라진다.

본원에 사용되는 바와 같이, "희석제"라는 용어는 본원에 기술되어 있는 예시적이거나 대략적인 농도(들)을 변경하거나 성취하는 데에 적합한 용액을 나타낸다.

개관

본 발명은 Aβ 결합 폴리펩티드, 특히 항 Aβ 항체와, 그의 일부 및/또는 단편를 위한 제형을 제공한다. 소정 태양에 있어서, 본 발명은 치료용의 안정화된 액체 폴리펩티드 제형을 제공한다. 특히, 본 발명은 Aβ 결합 폴리펩티드, 예를 들어 항체, 및 그의 항원 결합 단편의 안정화, 아밀로이드 생성성 질환 및/또는 질병의 치료에서의 용도를 제공한다. 특히, 본 발명은 치료용 활성 폴리펩티드가 장기간에 걸쳐 안정하도록 안정화되고 다양한 투여 경로를 통하여 투여될 수 있는 제형을 제공한다. 이는 특히 아밀로이드 생성성 질환 및/또는 질병의 치료에서 사용할 예정인 Aβ 결합 폴리펩티드 (예를 들어, 항체)에 있어서 특히 주요한 것이다. 다른 태양에 있어서, 본 발명은 예를 들어 다양한 스트레스, 예를 들어 냉동, 동결 건조, 열, 및/또는 재구성에 대하여 안정한, 독특하게 안정한 항체 제형을 제공한다. 또한, 본 발명의 예시적 제형은 장기간에 걸쳐 (예를 들어, 제형이 보관되는 1년 또는 그 이상), 그리고 심지어 불리한 온도에서도 항체의 안정성, 생물학적 활성, 순도 및 품질을 유지할 수 있다. 또한, 본 발명의 예시적 제형은 대상 또는 환자 (예를 들어, 대상 또는 환자에게 정맥 투여), 예를 들어 아밀로이드 생성성 질환 또는 질병에 걸렸거나 걸릴 것으로 예측되는 인간에게 투여하기에 적합하다.

제형

일 태양에 있어서, 본 발명은 Aβ 결합 폴리펩티드, 등장화제 - 여기서, 등장화제는 안정화된 제형이 정맥내 주입에 적합하게 되도록 하기에 충분한 양으로 존재함 - 및 아미노산 또는 그의 유도체 - 여기서, 아미노산 또는 그의 유도체는 생리학적으로 적합한 pH를 유지하기에 충분한 양으로 존재함 - 를 포함하는 안정화된 제형을 제공한다. 예시적 실시 형태에 있어서, 본 발명은 항 Aβ 항체, 만니톨 및 히스티딘을 포함하는 안정화된 제형을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 Aβ 결합 폴리펩티드, 안정화된 제형이 정맥내 주입에 적합하게 되도록 하기에 충분한 양으로 존재하는 등장화제 및 아미노산 또는 그의 유도체 - 여기서, 아미노산 또는 그의 유도체는 생리학적으로 적합한 pH를 유지하기에 충분한 양으로 존재함 - 를 포함하는 안정화된 제형을 제공한다. 예시적 실시 형태에 있어서, 등장화제는 만니톨이다. 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 아미노산은 히스티딘이다.

다른 태양에 있어서, 본 발명은 Aβ 결합 폴리펩티드를 포함하는 안정화된 제형을 제공한다. 본 발명의 제형 중 안정화에 적합한 Aβ 결합 폴리펩티드는 항체 및 그의 단편을 포함하며, 특히, 아밀로이드 생성성 질환 또는 질병에 연루된 치료제 표적에 결합할 수 있는 항체를 포함한다. 따라서, 치료용 폴리펩티드는, 본 발명에 따라 안정화되어, 부산물, 일반적으로 고분자량의 응집체, 저분자량의 분해 단편, 또는 그 혼합물의 형성이 그러한 부산물의 형성이 저해되도록 하기에 충분한 양의 산화방지제의 첨가에 의해 회피된다. 하기에 논의된 바와 같이, 산화방지제는 요망되지 않는 부산물의 요망되는 저해를 얻기에 충분한 농도의 메티오닌 및 그의 유사체를 포함한다. 선택적으로, 본 발명의 안정화된 폴리펩티드 제형은 등장화제 - 여기서, 등장화제는 안정화된 제형이 여러 상이한 투여 경로, 예를 들어 정맥내 주입에 적합하게 되도록 하기에 충분한 양으로 존재함 - , 및 아미노산 또는 그의 유도체 - 여기서, 아미노산 또는 그의 유도체는 생리학적으로 적합한 pH를 유지하기에 충분한 양으로 존재함 - 를 추가로 포함한다. 예시적 실시 형태에 있어서, 본 발명은 항 Aβ 항체, 메티오닌, 만니톨 및 히스티딘을 포함하는 안정화된 제형을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 치료적 활성 Aβ 결합 폴리펩티드 - 여기서, 이 폴리펩티드는 보관 동안 부산물을 형성할 수 있음 - , 및 산화방지제 - 여기서, 산화방지제는 제형의 보관 동안 부산물 형성을 감소시키기에 충분한 양으로 존재함 - 를 포함하는 안정화된 액체 제형을 제공한다. 예시적 실시 형태에 있어서, 산화방지제는 메티오닌 또는 그의 유사체이다.

본 발명의 몇몇 실시 형태에 있어서, Aβ 결합 폴리펩티드는 항체, 항체 Fv 단편, 항체 Fab 단편, 항체 Fab'(2) 단편, 항체 Fd 단편, 단쇄 항체 (scFv), 단일 항체 단편 (Dab), 적어도 하나의 항체의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 베타-플리티드 시트형 폴리펩티드, 및 적어도 하나의 항체의 상보성 결정 영역을 포함하는 구형외 폴리펩티드로 구성된 군으로부터 선택된다. 본 발명의 예시적 실시 형태에 있어서, Aβ 결합 폴리펩티드는 약 0.1 mg/ml 내지 약 60 mg/ml로 존재한다. 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 본 발명의 제형은 Aβ 결합 폴리펩티드를 약 30 mg/ml로 포함한다. 또 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 본 발명의 제형은 Aβ 결합 폴리펩티드를 약 20 mg/ml로 포함한다. 추가의 예시적 실시 형태에 있어서, 본 발명의 제형은 Aβ 결합 폴리펩티드를 약 17 mg/ml로 포함한다.

본 발명의 예시적 실시 형태에 있어서, Aβ 결합 폴리펩티드는 항 Aβ 항체이다. 본 발명의 몇몇 실시 형태에 있어서, 항 Aβ 항체는 인간화 3D6 항체, 인간화 10D5 항체, 인간화 12B4 항체, 인간화 266 항체, 인간화 12A11 항체, 및 인간화 15C11 항체로 구성된 군으로부터 선택된다. 본 발명의 예시적 실시 형태에 있어서, 항 Aβ 항체는 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 16-21, 19-22, 33-40, 및 33-42로 구성된 군으로부터 선택되는 Aβ 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다. 본 발명의 몇몇 실시 형태에 있어서, 항 Aβ 항체는 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로 구성된 군으로부터 선택되는 아형의 것이다. 본 발명의 특정 실시 형태에 있어서, 항 Aβ 항체는 인간 IgG1 아형의 것이다.

Aβ 폴리펩티드는 고분자량의 폴리펩티드 응집체, 저분자량의 폴리펩티드 분해 산물, 및 그의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 부산물을 형성할 수도 있다. 고분자량의 응집체는 항체: 항체 복합체, 항체:항체 단편 복합체, 항체 단편: 항체 단편 복합체, 및 그의 조합을 포함할 수 있다. 저분자량의 폴리펩티드 분해 산물은 항체 경쇄, 항체 중쇄, 항체의 경쇄와 중쇄의 복합체, 항체 단편, 및 그의 조합을 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시 형태에 있어서, 본 발명에 따른 액체 제형은 Aβ 결합 폴리펩티드, 만니톨 및 히스티딘을 포함한다. 본 발명의 예시적 실시 형태에 있어서, Aβ 결합 폴리펩티드는 항 Aβ 항체이다. 본 발명의 몇몇 예시적 실시 형태에 있어서, 항 Aβ 항체는 인간화 3D6 항체, 인간화 10D5 항체, 인간화 12B4 항체, 인간화 266 항체, 인간화 12A11 항체, 및 인간화 15C11 항체로 구성된 군으로부터 선택된다. 본 발명의 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 항 Aβ 항체는 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 16-21, 19-22, 33-40, 및 33-42로 구성된 군으로부터 선택되는 Aβ 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다. 본 발명의 몇몇 실시 형태에 있어서, 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로 구성된 군으로부터 선택되는 아형의 것이다. 본 발명의 특정 실시 형태에 있어서, 항체는 IgG1 아형의 것이다.

본 발명의 예시적 실시 형태에 있어서, 항 Aβ 항체는 약 0.1 mg/ml 내지 약 200 mg/ml로 존재한다. 본 발명의 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 항 Aβ 항체는 약 20 mg/ml로 존재한다.

본 발명의 몇몇 실시 형태에 있어서, 본 발명의 제형은 제형의 등장성을 유지하기에 충분한 양의 만니톨을 포함한다. 본 발명의 예시적 실시 형태에 있어서, 만니톨은 약 2% (w/v) 내지 약 10% (w/v)로 존재한다. 본 발명의 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 만니톨은 약 4% (w/v)로 존재한다. 또 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 만니톨은 약 6% (w/v)로 존재한다. 추가의 예시적 실시 형태에 있어서, 만니톨은 약 10% (w/v)로 존재한다.

본 발명의 몇몇 실시 형태에 있어서, 본 발명의 제형은 생리학적으로 적합한 pH를 유지하기에 충분한 양의 히스티딘을 포함한다. 본 발명의 예시적 실시 형태에 있어서, 히스티딘은 약 0.1 mM 내지 약 25 mM로 존재한다. 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 히스티딘은 약 1O mM로 존재한다.

본 발명의 일 실시 형태에 있어서, 본 발명의 제형은 약 0.1 mM 내지 약 25 mM의 숙시네이트를 포함한다. 본 발명의 예시적 실시 형태에 있어서, 숙시네이트는 약 10 mM로 존재한다.

본 발명의 몇몇 실시 형태에 있어서, 본 발명의 제형은 산화방지제를 추가로 포함한다. 예시적 실시 형태에 있어서, 산화방지제는 메티오닌 또는 그의 유사체이다. 본 발명의 일 실시 형태에 있어서, 메티오닌 또는 그의 유사체는 약 0.1 mM 내지 약 25 mM로 존재한다. 다른 실시 형태에 있어서, 메티오닌 또는 유사체는 약 10 mM로 존재한다.

본 발명의 몇몇 실시 형태에 있어서, 제형은 안정제를 추가로 포함한다. 본 발명의 예시적 실시 형태에 있어서, 안정제는 폴리소르베이트 80이다. 몇몇 실시 형태에 있어서, 폴리소르베이트 80은 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.01% (w/v)로 존재한다. 다른 실시 형태에 있어서, 폴리소르베이트 80은 약 0.005% (w/v)로 존재한다. 본 발명의 또 다른 실시 형태에 있어서, 폴리소르베이트 80은 약 0.01% (w/v)로 존재한다.

본 발명의 몇몇 실시 형태에 있어서, 제형의 pH는 약 5 내지 약 7이다. 본 발명의 예시적 실시 형태에 있어서, 제형의 pH는 약 5.5이다. 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 제형의 pH는 약 6.0이다. 또 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 제형의 pH는 약 6.2이다. 추가의 예시적 실시 형태에 있어서, 제형의 pH는 약 6.5이다.

몇몇 실시 형태에 있어서, 제형은 냉동에 대하여 안정하다. 본 발명의 다른 실시 형태에 있어서, 제형은 정맥내 투여에 적합하다. 본 발명의 예시적 실시 형태에 있어서, 제형은 근육내 또는 피하 투여에 적합하다. 예시적 실시 형태에 있어서, 제형은 대상의 뇌에 전달하기에 적합하다.

본 발명의 몇몇 실시 형태에 있어서, 제형은 대상의 척수액에 전달하기에 적합하다. 다른 실시 형태에 있어서, 제형에는 방부제가 실질적으로 없다.

본 발명의 몇몇 실시 형태에 있어서, 제형은 적어도 약 12개월 동안 안정하다. 몇몇 실시 형태에 있어서, 제형은 적어도 약 18개월 동안 안정하다. 본 발명의 몇몇 실시 형태에 있어서, 제형은 적어도 약 24개월 동안 안정하다. 본 발명의 몇몇 실시 형태에 있어서, 제형은 적어도 약 30개월 동안 안정하다.

본 발명의 예시적 실시 형태에 있어서, 제형은 약 -8O℃ 내지 약 4O℃에서 안정하다. 몇몇 예시적 실시 형태에 있어서, 제형은 약 O℃ 내지 약 25℃에서 안정하다. 바람직하게는, 제형은 약 2℃ 내지 약 8℃에서 안정하다.

본 발명의 특정 실시 형태에 있어서, 정맥내 투여에 적합한 제형은 약 20 mg/mL의 항 Aβ 항체, 약 10 mM의 L-히스티딘, 약 10 mM의 메티오닌, 약 4%의 만니톨을 포함하며, pH가 약 6이다. 다른 특정 실시 형태에 있어서, 정맥내 투여에 적합한 제형은 약 30 mg/mL의 항 Aβ 항체, 약 10 mM의 L-히스티딘, 약 10 mM의 메티오닌, 약 6%의 만니톨을 포함하며, pH가 약 6.2이다. 정맥내 투여에 적합한 바람직한 제형은 약 20 mg/mL의 항 Aβ 항체, 약 10 mM의 L-히스티딘, 약 10 mM의 메티오닌, 약 4%의 만니톨, 약 0.005%의 폴리소르베이트 80을 포함하며, pH가 약 6이다. 본 발명의 추가의 예시적 실시 형태에 있어서, 정맥내 투여에 적합한 제형은 약 10 mg/mL의 항 Aβ 항체, 약 10 mM의 L-히스티딘, 약 10 mM의 메티오닌, 약 10%의 만니톨, 약 0.005%의 폴리소르베이트 80을 포함하며, pH가 약 6.5이다.

본 발명에 따른 전술한 제형의 몇몇 실시 형태에 있어서, 항 Aβ는 인간화 3D6 항체, 인간화 10D5 항체, 인간화 12B4 항체, 인간화 266 항체, 인간화 12A11 항체, 및 인간화 15C11 항체로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적 실시 형태에 있어서, 항 Aβ 항체는 Aβ의 1-7, 1-5, 3-7, 3-6, 13-28, 16-21, 19-22, 33-40, 및 33-42로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 잔기 내의 에피토프에 결합한다. 몇몇 제형에 있어서, 항 Aβ 항체는 Aβ의 13-28 내의 1-7 내의 잔기를 포함하는 불연속 에피토프에 결합한다. 이러한 몇몇 제형에 있어서, 항체는 2특이성 항체 또는 국제 특허 공개 제WO03/070760호에 개시된 공정에 의해 제조되는 항체이다. 이러한 몇몇 제형에 있어서, 에피토프는 불연속 에피토프이다.

본 발명의 다른 태양에 있어서, 약학적 단위 투여 형태는 환자에게의 이 투여 형태의 투여를 통하여 환자에서 질환을 치료하기 위한 임의의 전술한 실시 형태의 유효량의 제형을 포함한다. 예시적 실시 형태에 있어서, 약학적 단위 투여 형태는 본 발명에 따른 제형을 포함하는 용기이다. 예시적 실시 형태에 있어서, 이 용기는 약 1 mg 내지 약 2000 mg의 Aβ 결합 폴리펩티드를 포함하는 바이알이다. 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 바이알은 약 50 mg 내지 약 1500 mg의 Aβ 결합 폴리펩티드를 포함한다. 추가의 예시적 실시 형태에 있어서, 바이알은 약 5 mg 내지 약 50 mg의 Aβ 결합 폴리펩티드를 포함한다.

예시적 실시 형태에 있어서, 바이알의 부피는 약 2 내지 약 100 ml이다. 또 다른 실시 형태에 있어서, 바이알의 부피는 약 2 내지 약 10 ml이다.

몇몇 실시 형태에 있어서, 본 발명에 따른 약학적 단위 투여 형태는 환자에게의 정맥내 주입에 적합하다.

본원에 또한 기술되어 있는 것은, 본원에 기술되어 있는 같이, 약학적 단위 투여 형태와, 사용 설명서를 포함하는 키트이다. 본 발명의 일 실시 형태에 있어서, 약학적 단위 투여 형태를 포함하는 용기는 사용에 대하여 라벨링된 용기이다. 예시적 실시 형태에 있어서, 용기는 예방적 사용에 대하여 라벨링되어 있다. 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 용기는 치료적 사용에 대하여 라벨링되어 있다.

본 발명은 약학적 액체 제형에서 Aβ 결합 폴리펩티드 - 여기서, 이 폴리펩티드는 액체 제형 형태로 보관하는 동안 부산물 형성을 나타냄 - 의 안정성을 증가시키는 방법을 제공하며, 본 방법은 제형 내로 산화방지제를 폴리펩티드의 부산물 형성량을 감소시키기에 충분한 양으로 혼입하는 단계를 포함한다. 예시적 실시 형태에 있어서, Aβ 결합 폴리펩티드 성분은 항체, 항체 Fv 단편, 항체 Fab 단편, 항체 Fab'(2) 단편, 항체 Fd 단편, 단쇄 항체 (scFv), 단일 도메인 항체 단편 (Dab), 적어도 하나의 항체의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 베타-플리티드 시트형 폴리펩티드, 및 적어도 하나의 항체의 상보성 결정 영역을 포함하는 구형외 폴리펩티드로 구성된 군으로부터 선택된다. 일 실시 형태에 있어서, 부산물은 고분자량의 폴리펩티드 응집체, 저분자량의 폴리펩티드 분해 산물, 및 그의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된다. 다른 실시 형태에 있어서, 산화방지제는 메티오닌 및 그의 유사체로 구성된 군으로부터 선택된다.

몇몇 실시 형태에 있어서, 본 발명의 임의의 전술한 실시 형태에 따른 제형의 제조 방법은 제형의 부형제들을 조합하는 단계를 포함한다. 예시적 실시 형태에 있어서, 임의의 전술한 실시 형태에 따른 제형의 제조 방법은 Aβ 결합 폴리펩티드를 하나 이상의 희석제와 조합하는 단계를 포함하며, 여기서, 하나 이상의 희석제는 제형의 부형제를 포함한다.

예시적 실시 형태에 있어서, 약학적 단위 투여 형태의 제조 방법은 적합한 용기에서 임의의 전술한 실시 형태의 제형을 조합하는 단계를 포함한다. 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 임의의 전술한 실시 형태의 제형의 제조 방법은 Aβ 결합 폴리펩티드 및 적어도 일부의 제형 부형제들을, 나머지 부형제들을 포함하는 희석제와 조합하는 단계를 포함한다.

본 발명의 안정화된 제형에서 사용하기 위한 폴리펩티드

본원에 기술된 바와 같이 본 발명에 따라 제형화할 폴리펩티드는, 당업계에 잘 확립되고, 예를 들어 합성 기술 (예를 들어 재조합 기술 및 펩티드 합성 또는 이들 기술의 조합)을 포함하는 기술을 이용하여 제조하거나, 폴리펩티드의 내인성 원천으로부터 단리할 수 있다. 본 발명의 소정 실시 형태에 있어서, 선택된 폴리펩티드는 항원 결합 폴리펩티드, 더 바람직하게는 항체, 특히 항-Aβ 항체이다. 항원 결합 폴리펩티드, 특히 항체의 제조 기술은 하기에 기술되어 있다.

다클론 항체

다클론 항체는 적합한 대상을 면역원으로 면역화함으로써 제조할 수 있다. 면역화된 대상에서의 항체 역치는 표준 기술에 의해, 예를 들어 고정된 표적 항원을 이용한 효소 결합 면역흡착 분석 (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)을 이용하여 시간이 지남에 따라 모니터링할 수 있다. 요망될 경우, 표적 항원에 대하여 유도된 항체 분자는 포유류 (예를 들어, 혈액)로부터 단리하고, 잘 알려진 기술, 예를 들어 단백질 A 세파로스 크로마토그래피로 추가로 정제하여 항체, 예를 들어 IgG 분획을 얻을 수 있다. 면역화 후 적절한 시점에서, 예를 들어, 항-항원 항체 역치가 최고치일 때, 항체 생성 세포를 대상으로부터 얻고, 이를 이용하여 표준 기술, 예를 들어 하이브리도마 기술로 단일클론 항체를 제조할 수 있는데, 상기 기술은 원래 문헌[Kohler and Milstein (1975) Nature 256:495-497]에 기술되어 있다 (또한, 문헌[Brown et al. (1981) J. Immunol. 127:539-46]; 문헌[Brown et al. (1980) J. Biol. Chem .255:4980-83]; 문헌[Yeh et al. (1976) Proc. Natl. Acad. ScL USA 76:2927-31]; 및 문헌[Yeh et al. (1982) Int. J. Cancer 29:269-75] 참조). 키메라형 다클론 항체의 제조에 대해서는, Buechler 등의 미국 특허 제6,420,113호를 참조한다.

단일클론 항체

림프구와 불사화 세포주의 융합에 사용되는 다수의 잘 알려진 임의의 프로토콜을 단일클론 항체의 생성 목적에 적용할 수 있다 (예를 들어, 문헌[G. Galfre et al. (1977) Nature 266:55052]; 상기에 인용된 문헌[Gefter et al. Somatic Cell Genet.]; 상기에 인용된 문헌[Lerner, Yale J. Biol. Med.]; 상기에 인용된 문헌[Kenneth, Monoclonal Antibodies] 참조). 또한, 숙련자라면 또한 유용한 상기 방법의 다수의 변형법이 존재한다는 것을 인정할 것이다. 일반적으로, 불사성 세포주 (예를 들어, 골수종 세포주)는 림프구와 동일한 포유류 종으로부터 유래된다. 예를 들어, 쥣과 하이브리도마는 본 발명의 면역원성 제제로 면역화한 생쥐 유래의 림프구를 불사화 생쥐 세포주와 융합함으로써 제조할 수 있다. 바람직한 불사성 세포주는 생쥐 골수종 세포주이며, 상기 세포주는 하이포잔틴, 아미노프테린 및 티미딘을 포함하는 배양 배지 ("HAT 배지")에 민감하다. 임의의 다수의 골수종 세포주, 예를 들어 P3-NS1/1-Ag4-1, P3-x63-Ag8.653 또는 Sp2/O-Ag14 골수종 세포주가 표준 기술에 따른 융합 상대로 사용될 수 있다. 이러한 골수종 세포주는 ATCC로부터 입수가능하다. 일반적으로, HAT-민감성 생쥐 골수종 세포는 폴리에틸렌 글리콜 ("PEG")를 사용하여 생쥐 비장 세포에 융합된다. 융합으로부터 생기는 하이브리도마 세포는 그 후 HAT 배지를 이용하여 선발되는데, 상기 HAT 배지는 미융합되거나 비생산적으로 융합된 골수종 세포를 사멸시킨다 (미융합된 비장 세포는 수일 후 죽는데, 이는 상기 세포가 형질전환되지 않기 때문임). 본 발명의 단일클론 항체를 생산하는 하이브리도마 세포는, 표준 ELISA 분석법을 이용하여 하이브리도마 배양 상청액을 표적 항원, 예를 들어 Aβ에 결합하는 항체에 대하여 스크리닝함으로써 탐지한다.

재조합 항체

단일클론 항체-분비 하이브리도마의 제법에 대하여 대안적으로, 단일클론 ㅎ항체는 재조합 조합 면역글로불린 라이브러리 (예를 들어, 항체 파지 디스플레이 라이브러리)를 표적 항원으로 스크리닝함으로써 표적 항원에 결합하는 면역글로불린 라이브러리 구성원을 단리함에 의해 동정 및 단리할 수 있다. 파지 디스플레이 라이브러리의 생성 및 스크리닝용 키트는 구매가능하다 (예를 들어, Pharmacia의 재조합 파지 항체 시스템 (Recombinant Phage Antibody System), 카탈로그 번호: 27-9400-01; 및 Stratagene의 SurfZAP^TM 파지 디스플레이 키트 (Phage Display Kit), 카탈로그 번호: 240612). 부가적으로, 특히 항체 디스플레이 라이브러리의 생성 및 스크리닝에 사용할 수 있는 방법 및 시약의 예가 예를 들어 Ladner 등의 미국 특허 제5,223,409호; Kang 등의 국제 특허 공개 제WO 92/18619호; Dower 등의 국제 특허 공개 제WO 91/17271호; Winter 등의 국제 특허 공개 제WO 92/20791호; Markland 등의 국제 특허 공개 제WO 92/15679호; Breitling 등의 국제 특허 공개 제WO 93/01288호; McCafferty 등의 국제 특허 공개 제WO 92/01047호; Garrard 등의 국제 특허 공개 제WO 92/09690호; Ladner 등의 국제 특허 공개 제WO 90/02809호; 문헌[Fuchs et al (1991) Bio/Technology 9:1370-1372]; 문헌[Hay et al (1992) Hum. Antibod. Hybridomas 3:81-85]; 문헌[Huse et al (1989) Science 246:1275-1281]; 문헌[Griffiths et al (1993) EMBO J 12:725-734]; 문헌[Hawkins et al (1992) J. MoI. Biol. 226:889-896]; 문헌[Clarkson et al (1991) Nature 352:624-628]; 문헌[Gram et al (1992) Proc. Natl Acad. Sci USA 89:3576-3580]; 문헌[Garrad et al (1991) Bio/Technology 9:1373-1377]; 문헌[Hoogenboom et al (1991) Nuc. Acid Res. 19:4133-4137]; 문헌[Barbas et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:7978-7982]; 및 문헌[McCafferty et al Nature (1990) 348:552-554]에서 발견할 수 있다.

키메라 및 인간화 항체

부가적으로, 재조합 항체, 예를 들어 키메라 및 인간화 단일클론 항체 - 인간 및 인간외 부분 둘 모두를 포함하며, 표준 재조합 DNA 기술을 사용하여 제조할 수 있음 - 는 본 발명의 범주 이내이다.

"인간화 면역글로불린" 또는 "인간화 항체"라는 용어는 적어도 하나의 인간화 면역글로불린 또는 항체 사슬 (즉, 적어도 하나의 인간화된 경쇄 또는 중쇄)을 포함하는 면역글로불린 또는 항체를 나타낸다. "인간화 면역글로불린 사슬" 또는 "인간화 항체 사슬" (즉, "인간화 면역글로불린 경쇄" 또는 "인간화 면역글로불린 중쇄")라는 용어는 실질적으로 인간 면역글로불린 또는 항체 및 실질적으로 상보성 결정 영역 (CDR) (예를 들어, 적어도 하나의 CDR, 바람직하게는 2개의 CDR, 더바람직하게는 3개의 CDR) 유래의 가변 골격 영역을 포함하는 가변 영역을 갖는 면역글로불린 또는 항체 사슬 (즉, 각각 경쇄 또는 중쇄)을 나타내며, 이는 추가로 불변 영역을 포함한다 (예를 들어, 경쇄의 경우 적어도 하나의 불변 영역 또는 그의 일부, 그리고 중쇄의 경우 3개의 불변 영역). "인간화 가변 영역" (예를 들어, "인간화 경쇄 가변 영역" 또는 "인간화 중쇄 가변 영역")은 실질적으로 인간 면역글로불린 또는 항체로부터 유래되는 가변 골격 영역 및 실질적으로 비-인간 면역글로불린 또는 항체로부터 유래되는 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 가변 영역을 나타낸다.

"실질적으로 인간 면역글로불린 또는 항체로부터 유래되는" 또는 "실질적으로 인간"이라는 어구는, 비교 목적으로 인간 면역글로불린 또는 항체의 아미노 서열에 정렬될 경우, 이 영역이 인간 골격 또는 불변 영역 서열과 적어도 80-90%, 90-95%, 또는 95-99%의 동일성 (즉, 국소적 서열 동일성)을 공유하여, 예를 들어 보존성 치환, 콘센서스 서열 치환, 생식 세포 (germline) 치환, 역돌연변이 (backmutation) 등을 허용함을 의미한다. 보존성 치환, 콘센서스 치환, 생식 세포 치환, 역돌연변이 등의 도입은 흔히 인간화 항체 또는 사슬의 "최적화"로 칭해진다. "실질적으로 비-인간 면역글로불린 또는 항체로부터 유래된" 또는 "실질적으로 비-인간"이라는 어구는 면역글로불린 또는 항체의 서열이 비-인간 유기체, 예를 들어 비-인간 포유류의 서열과 적어도 80-95%, 바람직하게는 적어도 90-95%, 더 바람직하게는 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하다는 것을 의미한다.

따라서, 인간화 면역글로불린 또는 항체, 또는 인간화 면역글로불린 ㄸ또똔또는 항체 사슬 - CDR을 제외함 - 의 모든 영역 또는 잔기는 하나 이상의 천연 인간 면역글로불린 서열의 상응하는 영역 또는 잔기와 실질적으로 동일하다. "상응하는 영역" 또는 "상응하는 잔기"라는 용어는, 제1 서열 및 제2 서열이 비교 목적으로 최적으로 정렬될 경우, 제1 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열 상의 영역 또는 잔기와 동일한 (즉, 등가인) 위치를 점유하는 제2 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열 상의 영역 또는 잔기를 나타낸다.

"유의한 동일성"이라는 용어는, 초기 설정 갭 가중치를 이용하여 GAP 또는 BESTFIT 프로그램에 의한 것과 같이, 최적으로 정렬될 경우 2개의 폴리펩티드 서열이 적어도 50-60%의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 60-70%의 서열 동일성, 더 바람직하게는 적어도 70-80%의 서열 동일성, 더 바람직하게는 적어도 80-90%의 서열 동일성, 더욱 더 바람직하게는 적어도 90-95%의 서열 동일성, 더욱 더 바람직하게는 적어도 95%의 서열 동일성 또는 그 이상 (예를 들어, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성)을 공유한다는 것을 의미한다. "상당한 동일성"이라는 용어는, 초기 설정 갭 가중치를 이용하여 GAP 또는 BESTFIT 프로그램에 의한 것과 같이, 최적으로 정렬될 경우 2개의 폴리펩티드 서열이 적어도 80-90%의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 90-95%의 서열 동일성, 더 바람직하게는 적어도 95%의 서열 동일성 또는 그 이상 (예를 들어, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성)을 공유한다는 것을 의미한다. 서열 비교에 있어서, 일반적으로 하나의 서열이 참고 서열로 작용하며, 시험 서열이 그와 비교된다. 서열 비교 알고리즘을 이용할 경우, 시험 서열 및 참고 서열이 컴퓨터에 입력되며, 필요할 경우, 하위서열 좌표 (coordinates)가 지정되고, 서열 알고리즘 프로그램 파라미터가 지정된다. 이어서 서열 비교 알고리즘에 의해, 지정된 프로그램 파라미터에 기초하여 참고 서열에 대하여 시험 서열(들)의 서열 동일성 퍼센트가 계산된다.

비교를 위한 서열들의 최적 정렬은, 예를 들어 문헌[Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)]의 국소적 호몰로지 알고리즘, 문헌[Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970)]의 호몰로지 정렬 알고리즘, 문헌[Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988)]의 유사성 검색 방법, 이들 알고리즘의 컴퓨터화된 구현 (Wisconsin Genetics Software Package 내의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA, Genetics Computer Group, 미국 위스콘신주 매디슨 사이언스 드라이브 575 소재)에 의해, 또는 시각적 점검에 의해 (일반적으로 문헌[Ausubel et al, Current Protocols in Molecular Biology]을 참조) 행할 수 있다. 서열 동일성 및 서열 유사성 퍼센트를 결정하는 데에 적합한 알고리즘의 일례로는 BLAST 알고리즘이 있으며, 이는 문헌[Altschul et al, J. Mol. Biol. 215:403 (1990)]에 기술되어 있다. BLAST 분석 수행용 소프트웨어는 NCBI (National Center for Biotechnology Information)를 통하여 공적으로 입수가능하다 (NIH (National Institutes of Health)의 NCBI 인터넷 서버를 통하여 공적으로 접근가능함). 일반적으로, 초기 설정 프로그램 파라미터는, 맞춤형 파라미터도 이용될 수 있지만, 서열 비교의 수행을 위하여 이용될 수 있다. 아미노산 서열에 있어서, BLASTP 프로그램에서는 초기 설정값으로서 3의 단어길이 (W), 10의 기대치 (E), 및 BLOSUM62 스코어링 매트릭스가 이용된다 (문헌[Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci USA 89:10915 (1989)] 참조).

바람직하게는, 동일하지 않은 잔기 위치는 보존성 아미노산 치환이 다르다. 아미노산 치환을 보존성 또는 비보존성으로 분류할 목적에 있어서, 아미노산은 하기와 같이 분류된다: 군 I (소수성 측쇄): leu, met, ala, val, leu, ile; 군 II (중성 친수성 측쇄): cys, ser, thr; 군 III (산성 측쇄): asp, glu; 군 IV (염기성 측쇄): asn, gin, Ms, lys, arg; 군 V (사슬 배향에 영향을 주는 잔기): gly, pro; 및 군 VI (방향족 측쇄): trp, tyr, phe. 보존성 치환은 동일 종류 내의 아미노산들 사이의 치환을 포함한다. 비-보존성 치환은 이들 종류 중 하나의 구성원을 다른 것의 구성원과 교환하는 것으로 구성된다.

바람직하게는, 인간화 면역글로불린 또는 항체는 상응하는 비-인간화 항체의 친화성의 3배, 4배 또는 5배 이내인 친화성으로 항원에 결합한다. 예를 들어, 비인간화 항체의 결합 친화성이 10^-9 M일 경우, 인간화 항체의 결합 친화성은 적어도 3 x 10^-8 M, 4 x 10^-8 M, 5 x 10^-8 M, 또는 10^-9 M이다. 면역글로불린 또는 항체 사슬의 결합 특성을 기술할 때, 사슬은 "직접적으로 항원 (예를 들어, Aβ)에 결합하는" 그의 능력에 기초하여 기술될 수 있다. 사슬은 온전한 면역글로불린 또는 항체 (또는 그의 항원 결합 단편)에 특이적 결합 특성 또는 결합 친화성을 부여할 경우 "직접적으로 항원에 결합하는"이라고 한다. 돌연변이 (예를 들어, 역돌연변이)는 이것이 상기 사슬을 포함하는 온전한 면역글로불린 또는 항체 (또는 그의 항원 결합 단편)의 결합 친화성에 상기 돌연변이가 결여된 등가의 사슬을 포함하는 항체 (또는 그의 항원 결합 단편)의 결합 친화성에 비하여 대략 소정 크기 이상의 크기로 영향을 줄 경우 (예를 들어 감소시킬 경우) 중쇄 또는 경쇄가 직접적으로 항원에 결합하는 능력에 실질적으로 영향을 준다고 한다. 돌연변이는, 돌연변이가 상기 사슬을 포함하는 온전한 면역글로불린 또는 항체 (또는 그의 항원 결합 단편)의 결합 친화성에 상기 돌연변이가 결여된 등가의 사슬을 포함하는 항체 (또는 그의 항원 결합 단편)의 결합 친화성의 단지 2배, 3배 또는 4배로 영향을 줄 경우 (예를 들어, 감소시킬 경우) "사슬의 직접적인 항원 결합 능력에 실질적으로 영향을 주지 않는다" (예를 들어, 감소시키지 않음).

"키메라 면역글로불린" 또는 항체라는 용어는 가변 영역이 제1 종으로부터 유래되고 불변 영역이 제2 종으로부터 유래된 면역글로불린 또는 항체를 나타낸다. 키메라 면역글로불린 또는 항체는 예를 들어 유전 공학에 의해 상이한 종에 속하는 면역글로불린 유전자 절편으로부터 제작될 수 있다. "인간화 면역글로불린" 또는 "인간화 항체"라는 용어는 하기에 정의된 바와 같ㅇ 키메라 면역글로불린 또는 항체를 포함하려는 것은 아니다. 인간화 면역글로불린 또는 항체가 그의 제작에 있어서 키메라이지만 (즉, 하나 초과의 단백질 종 유래의 영역을 포함함), 이는 본원에 정의된 바와 같이 키메라 면역글로불린 또는 항체에서 발견되지 않는 부가적인 특징부 (즉, 공여체 CDR 잔기 및 수용체 골격 잔기를 포함하는 가변 영역)를 포함한다.

이러한 키메라 및 인간화 단일클론 항체는 당업계에 공지된 재조합 DNA 기술에 의해, 예를 들어 Robinson 등의 국제 특허 제PCT/US86/02269호; Akira 등의 유럽 특허 출원 제184,187호; Taniguchi, M.의 유럽 특허 출원 제171,496호; Morrison 등의 유럽 특허 출원 제173,494호; Neuberger 등의 국제 특허 공개 제WO 86/01533호; Cabilly 등의 미국 특허 제4,816,567호; Cabilly 등의 유럽 특허 출원 제125,023호; 문헌[Better et al. (1988) Science 240:1041-1043]; 문헌[Liu et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci USA 84:3439-3443]; 문헌[Liu et al. (1987) J. Immunol. 139:3521-3526]; 문헌[Sun et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:214- 218]; 문헌[Nishimura et al. (1987) Cane. Res. 47:999-1005]; 문헌[Wood et al. (1985) Nature 314:446-449]; 및 문헌[Shaw et al. (1988) J. Natl. Cancer Inst. 80:1553-1559]; 문헌[Morrison, S. L. (1985) Science 229:1202-1207]; 문헌[Oi et al. (1986) BioTechniques 4:214]; Winter의 미국 특허 제5,225,539호; 문헌[Jones et al. (1986) Nature 321:552-525]; 문헌[Verhoeyan et al (1988) Science 239:1534]; 및 문헌[Beidler et al. (1988) J. Immunol. 141:4053-4060]에 기술된 방법을 사용하여 제조할 수 있다.

트랜스제닉 ( transgenic ) 동물 및 파지 디스플레이 유래의 인간 항체

대안적으로는, 면역화시, 내인성 면역글로불린 생성의 부재 하에 인간 항체의 완전한 레퍼토리를 생성할 수 있는 트랜스제닉 동물 (예를 들어, 생쥐)를 생성하는 것은 현재 가능하다. 예를 들어, 키메라 및 생식 세포 돌연변이 생쥐에서 항체 중쇄 결합 영역 (J_H) 유전자의 동형 접합적 결실에 의해 내인성 항체 생성이 완전히 저해된다는 것이 기술되었다. 이러한 생식 세포 돌연변이 생쥐에서 인간 생식 세포 면역글로불린 유전자 배열의 이동에 의해 항원 공격시 인간 항체가 생성된다. 예를 들어, 미국 특허 제6,150,584호; 동 제6,114,598호; 및 동 제5,770,429호를 참조한다.

완전 인간 항체는 파지 디스플레이 라이브러리로부터도 유래될 수 있다 (문헌[Hoogenboom et al, J. Mol. Biol., 227:381 (1991)]; 문헌[Marks et al, J. Mol. Biol., 222:581- 597 (1991)]). 키메라 다클론 항체도 파지 디스플레이 라이브러리로부터 얻어질 수 있다 (Buechler 등의 미국 특허 제6,420,113호).

2특이성 항체, 항체 융합 폴리펩티드, 및 단쇄 항체

2특이성 항체 (BsAb)는 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대하여 결합 특이성을 갖는 항체이다. 이러한 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로부터 유래될 수 있다 (예를 들어, F(ab)'2 2특이성 항체). 2특이성 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 전장 2특이성 항체의 전통적인 제법은 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공동 발현에 기초하며, 여기서, 2개의 사슬은 상이한 특이성을 가진다 (문헌[Millstein et al, Nature, 305:537-539 (1983)]). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류 때문에, 이러한 하이브리도마 (쿼드로마 (quadroma))는 상이한 항체 분자의 잠재적인 혼합물을 생성한다 (국제 특허 공개 제WO 93/08829호 및 문헌[Traunecker et al, EMBO J., 10:3655-3659 (1991)] 참조).

2특이성 항체는 가교 결합 항체 또는 "헤테로콘쥬게이트" 항체도 포함한다. 예를 들어, 헤테로콘쥬게이트에 있어서의 항체들 중 하나는 아미딘에 커플링될 수 있으며, 다른 하나는 비오틴 또는 기타 페이로드 (payload)에 커플링될 수 있다. 헤테로콘쥬겡트 항체는 임의의 편리한 가교 결합 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 적합한 가교 결합제는, 다수의 가교 결합 기술과 함께 당업계에 잘 알려져 있으며, 미국 특허 제4,676,980호에 개시되어 있다.

또 다른 실시 형태에 있어서, 항체는 페이로드, 예를 들어, 반응성, 탐지성 또는 작용성 부분, 예를 들어 면역독소에 화학적 또는 유전적으로 융합되어 항체 융합 폴리펩티드를 생성할 수 있다. 이러한 페이로드는 예를 들어 면역독소, 화학요법제, 및 방사성 동위 원소를 포함하며, 이들 모두는 당업계에 잘 알려져 있다.

단쇄 항체도 본 발명에 따른 안정화에 적합하다. 단편은 중쇄 가변 도메인 (V_H)이 경쇄 가변 도메인 (V_L)에 링커에 의해 연결된 것을 포함하는데, 상기 링커는 각각의 가변 영역이 서로와 접속되어 V_L 및 V_H 영역이 유래되는 부모 항체의 항원 결합 포켓을 재생성한다. 문헌[Gruber et al, J. Immunol., 152:5368 (1994)]을 참조한다.

임의의 전술한 폴리펩티드 분자는 단독으로 또는 조합되어 본 발명에 따른 안정화된 제형으로서 제조하기에 적합하다는 것이 이해된다.

항 Aβ 항체

일반적으로, 본 발명의 제형은 Aβ 펩티드의 표적화에 의해 아밀로이드 생성성 질환, 특히 알츠하이머병을 치료하기 위한 다양한 항체를 포함한다.

"Aβ 항체", "항 Aβ 항체" 및 "항 Aβ"라는 용어는 본원에서 서로 바꾸어서 사용되어 인간 아밀로이드 전구체 단백질 (amyloid precursor protein, APP), Aβ 단백질 또는 이 둘 모두의 하나 이상의 에피토프 또는 항원 결정 부위에 결합하는 항체를 나타낼 수 있다. 예시적 에피토프 또는 항원 결정 부위는 APP 내에서 ㅂ바발견될 수 이Tw만, 바람직하게는 APP의 Aβ 펩티드 내에서 발견된다. APP의 다수의 이소형 (isoform), 예를 들어 APP⁶⁹⁵, APP⁷⁵¹ 및 APP⁷⁷⁰이 존재한다. APP 내의 아미노산은 APP⁷⁷⁰ 이소형의 서열에 따른 번호가 할당된다 (예를 들어, GenBank 등록 번호 P05067을 참조). 현재 인간에서 존재하는 것으로 공지된 APP의 특정 이소형의 예로는 문헌[Kang et. al. (1987) Nature 325:733-736]에 기술되고 "정상" APP로 나타내어지는 695개의 아미노산의 폴리펩티드; 문헌[Ponte et al. (1988) Nature 331:525-527 (1988)] 및 문헌[Tanzi et al. (1988) Nature 331 :528-530]에 기술된 751개의 아미노산의 폴리펩티드; 및 문헌[Kitaguchi et. al. (1988) Nature 331:530-532]에 기술된 770개의 아미노산의 폴리펩티드가 있다. 생체 내 또는 원위치에서 상이한 세크레타아제 (secretase) 효소에 의한 APP의 단백질 분해에 의한 프로세싱의 결과로서, Aβ는 길이가 40개의 아미노산인 "짧은 형태"와, 길이가 42-43개의 아미노산 범위인 "긴 형태" 둘 모두로 발견된다. 짧은 형태인 Aβ40은 APP의 잔기 672-711로 구성된다. 긴형태, 예를 들어 Aβ42 또는 Aβ43은 각각 잔기 672-713 또는 672-714로 구성된다. APP의 소수성 도메인 부분은 Aβ의 카르복시 말단에서 발견되며, 특히 긴 형태의 경우 Aβ가 응집하는 능력을 설명할 수도 있다. Aβ 펩티드는 인간 및 기타 포유류의 체액, 예를 들어 뇌척수액 - 정상 개체 및 아밀로이드 생성성 질병을 앓고 있는 개체 둘 모두를 포함함 - 에서 발견되거나 그로부터 정제될 수 있다.

"β-아밀로이드 단백질", "β-아밀로이드 펩티드", "β-아밀로이드", "Aβ" 및 "Aβ 펩티드"라는 용어는 본원에서 서로 바꾸어서 사용될 수 있다. Aβ 펩티드 (예를 들어, Aβ39, Aβ40, Aβ41, Aβ42 및 Aβ43)는 APP의 39-43개의 아미노산의 ~4-kDa의 내부 단편이다. 예를 들어, Aβ40은 APP의 잔기 672-711로 구성되며, Aβ42는 APP의 잔기 672-713으로 구성된다. Aβ 펩티드는 APP의 세크레타아제 절단으로부터 생기는 펩티드와, 이 절단 생성물과 동일하거나 본질적으로 동일한 서열을 갖는 합성 펩티드를 포함한다. Aβ 펩티드는 다양한 원천, 예로부터 조직, 세포주, 또는 체액 (예를 들어, 혈청 또는 뇌척수액)으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, Aβ는 APP-발현 세포, 예를 들어, APP_717V _->F로 안정하게 트랜스펙션된 중국 햄스터 난소 (Chinese hamster ovary, CHO) 세포로부터 유래될 수 있는데, 이는 예를 들어 문헌[Walsh et al, (2002), Nature, 416, pp 535-539]에 기술된 바와 같다. Aβ 제제는 이전에 기술된 방법을 사용하여 조직 원천으로부터 유래할 수 있다 (예를 들어, 문헌[Johnson- Wood et al, (1997), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:1550] 참조). 대안적으로는, Aβ 펩티드는 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 합성할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Fields et al, Synthetic Peptides: A User's Guide, ed. Grant, W.H. Freeman & Co., New York, NY, 1992, p 77]을 참조한다. 따라서, 펩티드는, 예를 들어, Applied Biosystems의 펩티드 합성기 모델 (Peptide Synthesizer Model) 430A 또는 431 상의 측쇄 보호된 아미노산을 이용하여, t-Boc 또는 F-moc 화학 반응에 의해 보호된 α-아미노기를 이용하여 자동화된 Merrifield 고체상 합성 기술을 사용하여 합성할 수 있다. 보다 긴 펩티드 항원은 잘 알려진 재조합 DNA 기술을 사용하여 합성할 수 있다. 예를 들어, 펩티드 또는 융합 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 합성 또는 분자 클로닝되고 적합한 숙주 세포에 의한 트랜스펙션 및 비상동성 발현에 적합한 발현 벡터에 삽입할 수 있다. Aβ 펩티드는 또한 정상 유전자의 Aβ 영역 내의 돌연변이로부터 생기는 관련 Aβ 서열을 나타낸다.

Aβ 항체가 결합하는 예시적 에피토프 또는 항원 결정 부위는 인간 아밀로이드 전구체 단백질 (APP) 내에서 발견될 수 있지만, 바람직하게는 APP의 Aβ 펩티드 내에서 발견된다. Aβ 내의 예시적 에피토프 또는 항원 결정 부위는 Aβ의 N-말단, 중앙 영역, 또는 C-말단 내에 위치한다. "N-말단 에피토프"는 Aβ의 N-말단 내에 위치하거나 그를 포함하는 에피토프 또는 항원 결정 부위이다. 예시적 N-말단 에피토프는 Aβ의 아미노산 1-10 또는 1-12 내의 잔기, 바람직하게는 of Aβ, 바람직하게는 Aβ42의 잔기 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 2-6, 2- 7, 3-6, 또는 3-7로부터의 잔기를 포함한다. 다른 예시적 N-말단 에피토프는 Aβ의 잔기 1-3에서 출발하여 잔기 7-11에서 종결된다. 부가적인 예시적 N-말단 에피토프는 Aβ의 잔기 2-4, 5, 6, 7 또는 8, Aβ의 잔기 3-5, 6, 7, 8 또는 9, 또는 Aβ42의 잔기 4-7, 8, 9 또는 10을 포함한다. "중앙 에피토프"는 Aβ 펩티드의 중앙부 또는 중간부 내에 위치하는 잔기를 포함하는 에피토프 또는 항원 결정 부위이다. 예시적 중앙 에피토프는 Aβ의 아미노산 13-28 내의 잔기, 바람직하게는 Aβ의 잔기 14-27, 15-26, 16-25, 17-24, 18-23, 또는 19-22로부터의 잔기를 포함한다. 다른 예시적 중앙 에피토프는 Aβ의 아미노산 16-24, 16-23, 16-22, 16-21, 18-21, 19-21, 19-22, 19-23, 또는 19-24 내의 잔기를 포함한다. "C-말단" 에피토프 또는 항원 결정 부위는 Aβ 펩티드의 C-말단 내에 위치하거나 그를 포함하며, Aβ의 아미노산 33-40, 33-41, 또는 33-42 내의 잔기를 포함한다. "C-말단 에피토프"는 Aβ 펩티드의 C-말단 내에 (예를 들어, Aβ의 대략적인 아미노산 30-40 또는 30-42 내에) 위치하는 잔기를 포함하는 에피토프 또는 항원 결정 부위이다. 부가적인 예시적 C-말단 에피토프 또는 항원 결정 부위는 Aβ의 잔기 33-40 또는 33-42를 포함한다.

항체가 특정된 잔기, 예를 들어 Aβ 3-7 내의 에피토프에 결합한다고 할때, 이는 항체가 특정된 잔기 (즉, 이 예에서는 Aβ 3-7)를 포함하는 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다는 것을 의미한다. 이러한 항체는 Aβ 3-7 내의 모든 잔기와 접촉할 필요는 없다. 또한, Aβ 3-7 내의 모든 단일 아미노산 치환 또는 결실이 결합 친화성에 유의하게 영향을 줄 필요도 없다. 다양한 실시 형태에 있어서, Aβ 항체는 말단-특이성을 갖는다. 본원에 사용되는 바와 같이, "말단-특이성"이라는 용어는 Aβ 펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 특이적으로 결합하지만, 동일한 잔기를 포함하는 보다 긴 Aβ 종 또는 APP에 존재할 경우 이 잔기를 인식하지는 않는 항체를 나타낸다. 다양한 실시 형태에 있어서, Aβ 항체는 "C-말단-특이성"을 가진다. 본원에 사용되는 바와 같이, "C 말단-특이성"이라는 용어는 항체가 Aβ 펩티드의 자유 C-말단을 특이적으로 인식함을 의미한다. C 말단-특이성 Aβ 항체의 예는 잔기 40에서 종결되는 Aβ 펩티드를 인식하지만, 잔기 41, 42 및/또는 43에서 종결되는 Aβ 펩티드는 인식하지 못하는 것; 잔기 42에서 종결되는 Aβ 펩티드를 인식하지만, 잔기 40, 41 AC/또는 43에서 종결되는 Aβ 펩티드는 인식하지 못하는 것 등을 포함한다.

일 실시 형태에 있어서, Aβ 항체는 3D6 항체 또는 그의 변이체, 또는 10D5 항체 또는 그의 변이체일 수 있으며, 이 둘 모두는 미국 특허 공보 제20030165496A1호, 미국 특허 공보 제20040087777A1호, 국제 특허 공개 제WO02/46237A3호 및 국제 특허 공개 제WO04/080419A2호에 개시되어 있다. 3D6 및 10D5 항체에 대한 설명은, 예를 들어 국제 특허 공보 제WO02/088306A2호 및 국제 특허 공보 제WO02/088307A2호에서도 발견할 수 있다. 부가적인 3D6 항체는 미국 특허 출원 제11/303,478호 및 국제 특허 출원 제PCT/US05/45614호에 개시되어 있다. 3D6은 인간 β-아밀로이드 펩티드 내에 위치하는 N-말단 에피토프, 구체적으로는 잔기 1-5에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체 (mAb)이다. 그에 비해, 10D5는 인간 β-아밀로이드 펩티드 내에 위치하는 N-말단 에피토프, 구체적으로는 잔기 3-6DP 특이적으로 결합하는 mAb이다. 3D6 단일클론 항체를 생산하는 세포주 (RB96 3D6.32.2.4)는 부다페스트 조약의 협정에 의해 2003년 4월 8일자로 미국 20108 버지니아주 마나사스 소재의 ATCC (American Type Culture Collection)에 기탁되었으며, 수탁 번호는 PTA-5130이다. 10D5 단일클론 항체를 생산하는 세포주 (RB44 10D5.19.21)는 부다페스트 조약의 협정에 의해 2003년 4월 8일자로 ATCC에 기탁되었으며, 수탁 번호는 PTA-5129이다.

예시적인 변이체형 3D6 항체는 예를 들어 서열 번호 3 또는 서열 번호 5로 나타내어져 있는 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 인간화 경쇄와, 서열 번호 4 또는 서열 번호 6으로 나타내어져 있는 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 인간화 중쇄를 갖는 것이다. 다른 예시적인 변이체형 3D6 항체는 예를 들어 서열 번호 7로 나타내어져 있는 인간화 경쇄 아미노산 서열과, 서열 번호 8로 나타내어져 있는 인간화 중쇄 아미노산 서열을 갖는 것이다.

예시적인 변이체형 10D5 항체는 서열 번호 9 또는 서열 번호 11에 나타내어져 있는 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 인간화 경쇄와, 서열 번호 10 또는 서열 번호 12에 나타내어져 있는 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 인간화 중쇄를 갖는 것이다. 다른 예시적인 변이체형 10D5 항체는, 예를 들어 서열 번호 13에 나타내어져 있는 인간화 경쇄 아미노산 서열과, 서열 번호 14에 나타내어져 있는 인간화 중쇄 아미노산 서열을 갖는 것이다. 이러한 변이체형 항체는 WO02/088306A2에 추가로 기술되어 있다.

다른 실시 형태에 있어서, 항체는 미국 특허 공보 제20040082762A1호 및 국제 특허 공개 제WO03/077858A2호에 개시되어 있는 바와 같이 12B4 항체 또는 그의 변이체일 수 있다. 12B4는 인간 β-아밀롱드 펩티드 내에 위치하는 N-말단 에피토프, 구체적으로는 잔기 3-7에 특이적으로 결합하는 mAb이다.

예시적인 변이체형 12B4 항체는 서열 번호 15 또는 서열 번호 17에 나타내어져 있는 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 인간화 경쇄 (또는 경쇄)와, 서열 번호 16, 서열 번호 18 또는 서열 번호 19에 나타내어져 있는 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 인간화 중쇄를 갖는 것이다.

또 다른 실시 형태에 있어서, 항체는 미국 특허 공보 제20050118651 A1호, 미국 특허 출원 제11/303,478호, 국제 특허 공개 제WO04/108895A2호, 및 국제 특허 출원 제PCT/US05/45614호에 개시되어 있는 바와 같이, 12A11 항체 또는 그의 변이체일 수 있다. 12A11은 인간 β-아밀로이드 펩티드 내에 위치하는 N-말단 에피토프, 구체적으로는 잔기 3-7에 특이적으로 결합하는 mAb이다. 12A11 단일클론 항체를 생산하는 세포주는 부다페스트 조약의 협정에 의해 2005년 12월 12일자로 ATCC에 기탁되었으며, 수탁 번호는 ______이다.

예시적인 변이체형 12A11 항체는 서열 번호 20에 나타내어져 있는 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 인간화 경쇄와, 서열 번호 21, 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 26, 서열 번호 27, 서열 번호 28, 서열 번호 29, 서열 번호 30, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 34, 서열 번호 35, 서열 번호 36, 서열 번호 37, 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 또는 서열 번호 41에 나타내어져 있는 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 인간화 중쇄를 갖는 것이다.

또 다른 실시 형태에 있어서, 항체는 미국 특허 출원 제11/304,986호 및 국제 특허 출원 제PCT/US05/45515호 - 발명의 명칭이 "베타 아밀로이드 펩티드를 인식하는 인간화 항체 (Humanized Antibodies that Recognize Beta Amyloid Peptide)"임 - 에 개시되어 있는 바와 같이, 6C6 항체 또는 그의 변이체일 수 있다. 6C6은 인간 β-아밀로이드 펩티드 내에 위치하는 N-말단 에피토프, 구체적으로는 잔기 3-7에 특이적으로 결합하는 mAb이다. 항체 C6C를 생산하는 세포주는 부다페스트 조약의 협정에 의해 2005년 11월 1일자로 ATCC에 기탁되었으며, 등록 번호 PTA-7200이 할당되었다.

또 다른 실시 형태에 있어서, 항체는 미국 특허 출원 제11/304,986호 및 국제 특허 출원 제PCT/US05/45515호 - 발명의 명칭이 베타 아밀로이드 펩티드를 인식하는 인간화 항체 (Humanized Antibodies that Recognize Beta Amyloid Peptide)"임 - 에 개시되어 있는 바와 같이, 2H3이다. 2H3은 인간 β-아밀로이드 펩티드 내에 위치하는 N-말단 에피토프, 구체적으로는 잔기 2-7에 특이적으로 결합하는 mAb이다.

또 다른 실시 형태에 있어서, 항체는 미국 특허 출원 제______호에 개시되어 있는 바와 같이 3A3 항체일 수 있다. 3A3은 인간 β-아밀로이드 펩티드 내에 위치하는 N-말단 에피토프, 구체적으로는 잔기 3-7에 특이적으로 결합하는 mAb이다.

2H3 및 3A3을 생산하며, ATCC 등록 번호가 각각 ______ 및 ______인 세포주는 부다페스트 조약의 협정에 의해 2005년 12월 12일자로 기탁되었다.

또 다른 실시 형태에 있어서, 항체는 미국 특허 출원 제11/304,986호 및 국제 특허 출원 제PCT/US05/45515호 - 발명의 명칭이 베타 아밀로이드 펩티드를 인식하는 인간화 항체 (Humanized Antibodies that Recognize Beta Amyloid Peptide)"임 - 에 개시되어 있는 바와 같이, 15C11 항체 또는 그의 변이체일 수 있다. 15C11은 인간 β-아밀로이드 펩티드 내에 위치하는 중앙 에피토프, 구체적으로는 잔기 19-22에 특이적으로 결합하는 mAb이다. 15C11 단일클론 항체를 생산하는 세포주는 부다페스트 조약의 협정에 의해 2005년 12월 12일자로 ATCC에 기탁되었으며, 수탁 번호는 ______이다.

또 다른 실시 형태에 있어서, 항체는 미국 특허 공보 제20050249725 A1호, 및 국제 특허 공개 제WO01/62801 A2호에 공개된 바와 같이 266 항체일 수 있다. 266은 인간 β-아밀로이드 펩티드 내에 위치하는 중앙 에피토프, 구체적으로는 잔기 16-24에 특이적으로 결합하는 mAb이다. 266 단일클론 항체를 생산하는 세포주는 부다페스트 조약의 협정에 의해 2004년 7월 20일자로 ATCC에 기탁되었으며, 수탁 번호는 PTA-6123이다.

예시적인 변이체형 266 항체는 서열 번호 42 또는 서열 번호 44로 나타내어져 있는 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 인간화 경쇄와, 서열 번호 43 또는 서열 번호 45로 나타내어져 있는 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 인간화 중쇄를 갖는 것이다. 다른 예시적인 변이체형 266 항체는 예를 들어 서열 번호 46로 나타내어져 있는 인간화 경쇄 아미노산 서열과, 서열 번호 47로 나타내어져 있는 인간화 중쇄 아미노산 서열을 갖는 것이다. 이러한 변이체형 항체는 미국 특허 공보 제20050249725 A1호, 및 국제 특허 공개 제WO01/62801A2호에 추가로 개시되어 있다.

또 다른 실시 형태에 있어서, 항체는 미국 특허 출원 제11/304,986호 및 국제 특허 출원 제PCT/US05/45515호 - 발명의 명칭이 베타 아밀로이드 펩티드를 인식하는 인간화 항체 (Humanized Antibodies that Recognize Beta Amyloid Peptide)"임 - 에 개시되어 있는 바와 같이, 2B1 항체 또는 그의 변이체일 수 있다. 2B1은 인간 β-아밀로이드 펩티드 내에 위치하는 중앙 에피토프, 구체적으로는 잔기 19-23에 특이적으로 결합하는 mAb이다.

또 다른 실시 형태에 있어서, 항체는 미국 특허 출원 제11/304,986호 및 국제 특허 출원 제PCT/US05/45515호 - 발명의 명칭이 베타 아밀로이드 펩티드를 인식하는 인간화 항체 (Humanized Antibodies that Recognize Beta Amyloid Peptide)"임 - 에 개시되어 있는 바와 같이, 1C2 항체 또는 그의 변이체일 수 있다. 1C2는 인간 β-아밀로이드 펩티드 내에 위치하는 중앙 에피토프, 구체적으로는 잔기 16-23에 특이적으로 결합하는 mAb이다.

또 다른 실시 형태에 있어서, 항체는 미국 특허 출원 11/304,986 및 국제 특허 출원 제PCT/US05/45515호 - 발명의 명칭이 베타 아밀로이드 펩티드를 인식하는 인간화 항체 (Humanized Antibodies that Recognize Beta Amyloid Peptide)"임 - 에 개시되어 있는 바와 같이, 9G8 항체 또는 그의 변이체일 수 있다. 9G8은 인간 β-아밀로이드 펩티드 내에 위치하는 중앙 에피토프, 구체적으로는 잔기 16-21에 특이적으로 결합하는 mAb이다.

항체 2B1, 1C2 및 9G8을 생산하는 세포주는 부다페스트 조약의 협정에 의해 2005년 11월 1일자로 ATCC에 기탁되었으며, 각각 등록 번호 PTA-7202, PTA-7199 ㅁ및 PTA-7201이 할당되었다.

본 발명에서 사용하기 위한, 인간 β-아밀로이드 펩티드에 위치하는 C-말단 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체는, 발명의 명칭이 "β A4 펩티드에 특이적인 단일클론 항체 369.2B (Monoclonal antibody 369.2B specific for β A4)"인 미국 특허 제5,786,180호에 개시되어 있는 바와 같이, 369.2B를 포함하지만, 이로 한정되는 것은 아니다. 본 발명에서 사용하기 위한 항체에 대한 추가의 설명은 예를 들어 문헌[Bussiere et al., Am. J. Pathol. 165(3):987-95 (2004)], 문헌[Bard et al., PNAS 100(4):2023-8 (2003)], 문헌[Kajkowski et al., J. Biol. Chem. 276(22): 18748-56 (2001)], 문헌[Games et al., Ann. NY Acad. Sci. 920:274-84 (2000)], 문헌[Bard et al., Nat. Med. 6(8):916-9 (2000)] 및 발명의 명칭이 "Effecting rapid improvement of cognition in a subject having Alzheimer's disease, Down's syndrome, cerebral amyloid angiopathy, or mild cognitive impairment, comprises administering anti-A beta antibody"인 국제 특허 공개 제WO03015691A2호에서 발견할 수 있다. 본 발명에서 사용하기 위한 항체 단편에 대한 추가의 설명은 예를 들어 문헌[Bales et al., Abstract P4-396, page S587, presented at Poster Session P4: Therapeutics and Therapeutic Strategies-Therapeutic Strategies, Amyloid-Based] 및 문헌[Zameer et al., Abstract P4-420, page S593, presented at Poster Session P4: Therapeutics and Therapeutic Strategies-Therapeutic Strategies, Amyloid-Based]에서 발견할 수 있다.

본 발명에서 사용하기 위한 항체는 재조합적 방법 또는 합성에 의해 제조할 수 있다. 예를 들어, 항체는 예를 들어 CHO 세포, NIH 3T3 세포, PER.C6 (등록상표) 세포, NSO 세포, VERO 세포, 닭 배아 섬유모세포 (chick embryo fibroblasts) 또는 BHK 세포를 사용하여 재조합 세포 배양 과정에 의해 제조할 수 있다. 또한, Aβ 펩티드에 결합하는 일차적인 기능적 특성이 유지되는 사소한 변형을 갖는 항체가 본 발명에 의해 고려된다. 특정 실시 형태에 있어서, 항체는 Aβ 펩티드에 선택적으로 결합하는 인간화 항 Aβ 펩티드 3D6 항체이다. 더 구체적으로는, 인간화 항 Aβ 펩티드 3D6 항체는 (예를 들어, 알츠하이머병을 앓고 있는 환자에서의) 뇌에서 플라크 침착물에서 발견되는 인간 β-아밀로이드 1-40 또는 1-42 펩티드 내에 위치하는 NH₂-말단 에피토프, 예를 들어, 아미노산 잔기 1-5에 특이적으로 결합하도록 설계된다.

도 1에는 예시적인 인간화 항 Aβ 펩티드 항체의 예측 구조의 개략도가 제공되어 있다. 상응하는 발현 벡터의 DNA 서열로부터 예측되는 h3D6v2 경쇄 및 중쇄의 전 아미노산 서열이 도 2 (여기서, 잔기는 경쇄 및 중쇄의 NH₂-말단에서 잔기 번호 1로서 시작되어 번호가 매겨짐)와, 각각 서열 번호 1 및 서열 번호 2에 예시되어 있다. 중쇄 DNA 서열에 의해 코딩되는 마지막 아미노산 잔기, Lys⁴⁴⁹는 h3D6v2의 성숙한 분비형에서 발견되지 않았으며, 특정 이론에 구애되고자 함이 없이, 이는 아마 CHO 세포 프로테아제에 의해 세포내 프로세싱 동안 제거된 것 같다. 따라서, h3D6v2 중쇄의 COOH-말단은 선택적으로 Gly⁴⁴⁸이다. COOH-말단 라이신의 프로세싱은 재조합 항체 및 혈장 유래 항체에서 발견되었으며, 그의 기능에 영향을 주지는 않는 것으로 나타났다 (문헌[Harris (1995) J. Chromatogr. A. 705:129-134]). 정제된 h3D6v2는 중쇄의 Fc 부분에의 N-결합 글리칸의 부가에 의해 번역후 변형되는데, 상기 Fc 부분은 단일한 n-글리코실화 콘센서스 부위를 포함하는 것으로 공지되어 있다. N-글리코실화 부위는 포유류 IgG 단백질의 유사한 N-글리코실화 부위에서 일반적으로 관찰되는 3개의 주요 복합 비안테나리 중성 올리고당 (complex biantennary neutral oligosaccharide) 구조를 나타낸다.

다른 예시적인 인간화 항 Aβ 펩티드 항체는 인간화 3D6 버전 1 (hu3D6v1)로서, 이는 경쇄의 위치 1에서의 D->Y 치환을 제외하고는 도 2에 나타내어진 서열을 갖는다.

본 발명의 다양한 실시 형태에 있어서, 항 Aβ 항체 (예를 들어, 인간화 항 Aβ 펩티드 3D6 항체)는 약 0.1 mg/ml 내지 약 100 mg/ml, 약 0.1 mg/ml 내지 약 75 mg/ml, 약 0.1 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 약 0.1 mg/ml 내지 약 40 mg/ml, 약 0.1 mg/ml 내지 약 30 mg/ml, 약 10 mg/ml 내지 약 20 mg/ml, 약 20 mg/ml 내지 30 mg/ml, 또는 그 이상, 예를 들어, 최대 약 100 mg/ml까지, 약 200 mg/ml까지, 약 500 mg/ml까지, 또는 약 1000 mg/ml까지 또는 그 이상으로 존재한다. 바람직하게는, 항 Aβ 항체는 약 17 mg/ml 내지 약 23 mg/ml의 농도로 존재한다. 다양한 실시 형태에 있어서, 항 Aβ 항체는 약 1, 2, 5, 10, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 또는 30 mg/ml로 존재한다. 특정 실시 형태에 있어서, 항체 (예를 들어, 인간화 항 Aβ 펩티드 3D6 항체)는 약 17 mg/ml로 존재한다. 다른 특정 실시 형태에 있어서, 항체 (예를 들어, 인간화 항 Aβ 펩티드 3D6 항체)는 약 20 mg/ml로 존재한다. 다른 특정 실시 형태에 있어서, 항체 (예를 들어, 인간화 항 Aβ 펩티드 3D6 항체) 약 30 mg/ml로 존재한다. 상기에 열거된 농도에 대한 중간 범위, 예를 들어, 약 12 mg/ml 내지 약 17 mg/ml도 본 발명의 일부인 것으로 의도된다. 예를 들어, 상기에 열거된 임의의 값들의 조합을 상한치 및/또는 하한치로 하는 값의 범위를 포함시키려 한다.

부형제

다양한 실시 형태에 있어서, 본 발명은 완충제, 산화방지제, 등장화제 및 안정제를 포함하지만 이로 한정되지는 않는 다양한 부형제를 포함할 수도 있는 제형을 제공한다. 또한, 본 제형은 부가적인 pH 조정제 (예를 들어, HCl) 및 희석제 (예를 들어, 물)을 포함할 수도 있다. 다른 실시 형태에 있어서, 상이한 형태의 히스티딘이 pH 조절용으로 사용될 수 있다. 부분적으로는, 부형제는 (예를 들어, 단백질의 적당한 배좌를 유지함으로써) 항체의 안정성 및 생물학적 활성을 유지하고/하거나, pH를 유지하는 역할을 한다.

완충제

본 발명의 다양한 태양에 있어서, 제형은 완충화제 (완충제)를 포함한다. 완충제는 생리학적으로 적합한 pH를 유지하는 역할을 한다. 또한, 완충제는 제형의 등장성 및 화학적 안정성을 증강시키는 역할을 할 수 있다. 일반적으로, 제형은 pH가 생리학적으로 적합하여야 한다. 본 발명의 다양한 실시 형태에 있어서, 제형의 pH는 약 5 내지 약 7, 약 5.5 내지 약 6.5, 바람직하게는 약 6.0 내지 약 6.5이다. 특정 실시 형태에 있어서, 제형의 pH는 약 6이다. 상기에 열거된 pH 수준에 대하여 중간인 범위, 예를 들어, 약 pH 5.2 내지 약 pH 6.3, 바람직하게는 6.0 또는 pH 6.2도 본 발명의 일부인 것으로 의도된다. 예를 들어, 상기에 열거된 임의의 값들의 조합을 상한치 및/또는 하한치로 하는 값의 범위를 포함시키려 한다. pH는 필요할 경우 당분야에 공지된 기술로 조정할 수 있다. 예를 들어, 필요할 경우 HCl을 첨가하여 pH를 요망되는 수준으로 조정할 수 있거나, 상이한 형태의 히스티딘을 사용하여 pH를 요망되는 수준으로 조정할 수 있다.

완충제는 숙시네이트 (소듐 또는 포스페이트), 히스티딘, 포스페이트 (소듐 또는 포타슘), 트리스 (트리스 (히드록시메틸) 아미노메탄), 디에탄올아민, 시트레이트, 기타 유기 산 및 그의 혼합물을 포함할 수 있지만, 이로 한정되는 것은 아니다. 바람직한 실시 형태에 있어서, 완충제는 히스티딘 (예를 들어, L-히스티딘)이다. 다른 특정 실시 형태에 있어서, 완충제는 숙시네이트이다. 다른 실시 형태에 있어서, 제형은 제형을 생리학적으로 적합한 pH에서 유지하기에 충분한 양으로 존재하는 히스티딘과 같은 아미노산을 포함한다. 히스티딘은 생리학적 pH 범위에서 완충 능력을 갖는 예시적 아미노산이다. 히스티딘은 그의 완충 능력이 그의 이미다졸 기로부터 스패닝하여 유래된다. 하나의 예시적인 실시 형태에 DtDJ서, 완충제는 L-히스티딘 (염기)이다 (예를 들어, C₆H₉N₃O₂, FW: 155.15). 다른 실시 형태에 있어서, 완충제는 L-히스티딘 모노클로라이드 일수화물이다 (예를 들어, C₆H₉N₃O₂.HCl.H₂O, FW: 209.63). 다른 예시적 실시 형태에 있어서, 완충제는 L-히스티딘 (염기)과 L-히스티딘 모노클로라이드 일수화물의 혼합물이다.

일 실시 형태에 있어서, 완충제 (예를 들어, L-히스티딘 또는 숙시네이트)의 농도는 약 0.1 mM 내지 약 50 mM, 약 0.1 mM 내지 약 40 mM, 약 0.1 mM 내지 약 30 mM, 약 0.1 mM 내지 약 25 mM, 약 0.1 mM 내지 약 20 mM, 또는 약 5 mM 내지 약 15 mM, 바람직하게는 5 mM 또는 10 mM로 존재한다. 다양한 실시 형태에 있어서, 완충제는 약 6 mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM, 11 mM, 12 mM, 13 mM, 14 mM, 또는 15 mM로 존재할 수 있다. 특정 실시 형태에 있어서, 완충제는 약 10 mM로 존재한다. 상기에 열거된 농도에 대하여 중간 범위, 예를 들어 약 12 mM 내지 약 17 mM도 본 발명의 일부인 것으로 의도된다. 예를 들어, 상기에 열거된 임의의 값들의 조합을 상한치 및/또는 하한치로 하는 값의 범위를 포함시키려 한다. 소정 실시 형태에 있어서, 완충제는 생리학적으로 적합한 pH를 유지하기에 충분한 양으로 존재한다.

등장화제

본 발명의 다양한 태양에 있어서, 제형은 등장화제를 포함한다. 부분적으로는, 등장화제는 제형의 등장성의 유지 및 단백질 수준의 유지에 기여한다. 부분적으로는, 등장화제는 제형 중에 존재하는 치료적 활성 폴리펩티드의 수준, 비 또는 비율의 보존에 기여한다. 본원에 사용되는 바와 같이, "등장화제"라는 용어는 유체 환경 또는 용액 중 생물학적 성분의 거동을 나타낸다. 등장액은 혈장과 동일한 삼투압을 보유하며, 그래서 대상의 혈장의 삼투압을 변화시킴이 없이 대상 내로 정맥내 주입될 수 있다. 실제, 본 발명에 따른 일 실시 형태에 있어서, 등장화제는 제형이 정맥내 주입에 적합해지도록 하기에 충분한 양으로 존재한다. 흔히, 등장화제는 증량제 (bulking agent)로서의 역할도 한다. 이와 같이, 등장화제는 단백질이 다양한 스트레스, 예를 들어 냉동 및 전단을 극복하도록 한다.

등장화제는 CaCl₂, NaCl, MgCl₂, 락토스, 소르비톨, 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 라피노스, 폴리에틸렌 글리콜, 히드록시에틸 전분, 글리신 및 그의 혼합물을 포함할 수 있지만, 이로 한정되는 것은 아니다. 바람직한 실시 형태에 있어서, 등장화제는 만니톨이다 (예를 들어, D-만니톨, 예를 들어, C₆H₁₄O₆, FW: 182.17).

일 실시 형태에 있어서, 등장화제는 약 2% 내지 약 6% (w/v), 또는 약 3% 내지 약 5% (w/v)로 존재한다. 다른 실시 형태에 있어서, 등장화제는 약 3.5% 내지 약 4.5% (w/v)로 존재한다. 다른 실시 형태에 있어서, 등장화제는 약 20 mg/ml 내지 약 60 mg/ml, 약 30 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 또는 약 35 mg/ml 내지 약 45 mg/ml로 존재한다. 바람직하게는, 등장화제는 약 4% (w/v) 또는 약 40 mg/ml로 존재한다. 다른 I특정 실시 형태에 있어서, 등장화제는 약 6% (w/v)로 존재한다. 또 다른 특정 실시 형태에 있어서, 등장화제는 약 10% (w/v)로 존재한다.

상기에 열거된 농도에 대하여 중간 범위, 예를 들어, 약 3.2% 내지 약 4.3% (w/v) 또는 약 32 내지 약 43 mg/ml도 본 발명의 일부인 것으로 의도된다. 예를 들어, 상기에 열거된 임의의 값들의 조합을 상한치 및/또는 하한치로 하는 값의 범위를 포함시키려 한다. 등장화제는 제형의 긴장성을 유지하도록 충분한 양으로 존재하여야 한다.

산화방지제

본 발명의 다양한 태양에 있어서, 제형은 부분적으로는 (예를 들어, 산화의 방지에 의해) 제형이 보존되도록 산화방지제를 포함한다.

산화방지제는 GLA (감마-리놀렌산)-리포산, DHA (도코사헥사엔오익산)-리포산, GLA-토코페롤, 디-GLA-3,3'-티오디프로피온산, 및 일반적으로, 예를 들어, 임의의 GLA5 DGLA (디호모-감마-리놀렌산), AA (아라키돈산), SA (살리실산), EPA (에이코사펜타엔오익산) 또는 DHA (도코사헥사엔오익산) - 이들이 화학적으로 결합될 수 있는 임의의 천연 또는 합성 산화방지제를 포함함 - 를 포함하지만, 이로 한정되는 것은 아니다. 이들은 페놀 산화방지제 (예를 들어, 유제놀, 카라오식산, 카페익산, BHT (부틸화 히드록시아니솔), 갈릭산, 토코페롤, 토코트리엔올 및 플라베노이드 산화방지제 (예를 들어, 미리세틴 및 피세틴)), 폴리엔 (예를 들어, 레틴산), 불포화 스테롤 (예를 들어, Δ⁵-아베노스테롤), 유기황 화합물 (예를 들어, 알리신), 테르펜 (예를 들어, 제라니올, 아비에틱산) 및 아미노산 산화방지제 (예를 들어, 메티오닌, 시스테인, 카르노신)을 포함한다. 일 실시 형태에 있어서, 산화방지제는 아스코르브산이다. 바람직하게는, 산화방지제는 메티오닌, 또는 그의 유사체, 예를 들어, 셀레노메티오닌, 히드록시 메틸 부탄산, 에티오닌, 또는 트리플루오로메티오닌이다.

일 실시 형태에 있어서, 산화방지제 (예를 들어, 메티오닌, 예를 들어 L-메티오닌, 예를 들어 CH₃SCH₂CH₂CH(NH₂)CO₂H, FWM49.21)는 약 0.1 mM 내지 약 50 mM, 약 0.1 mM 내지 약 40 mM, 약 0.1 mM 내지 약 30 mM, 약 0.1 mM 내지 약 20 mM, 또는 약 5 mM 내지 약 15 mM로 존재한다. 다양한 실시 형태에 있어서, 산화방지제는 약 5 mM, 6 mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM, 10 mM, 11 mM, 12 mM, 13 mM, 14 mM, 또는 15 mM로 존재한다. 바람직하게는, 산화방지제는 약 10 mM로 존재한다. 다른 특정 실시 형태에 있어서, 산화방지제는 약 15 mM로 존재한다. 상기에 열거된 농도에 대하여 중간 범위, 예를 들어 약 12 mM 내지 약 17 mM도 본 발명의 일부인 것으로 의도된다. 예를 들어, 상기에 열거된 임의의 값들의 조합을 상한치 및/또는 하한치로 하는 값의 범위를 포함시키려 한다. 소정 실시 형태에 있어서, 산화방지제는 부분적으로 산화의 방지에 의해 제형을 보존하도록 충분한 양으로 존재하여야 한다.

안정제

본 발명의 다양한 태양에 있어서, 제형은 계면활성제로도 공지된 안정제를 포함한다. 안정제는 제형 중 생물학적 분자 및/또는 일반적인 약학적 부형제와 상호작용하여 그를 안정화시키는 특정한 화학적 화합물이다. 소정 실시 형태에 있어서, 안정제는 저온 보관과 함께 이용될 수 있다. 일반적으로 안정제는 공기/용액 계면에 의해 유발되는 스트레스 및/또는 용액/표면에 의해 유발되는 스트레스로부터 단백질을 보호하는데, 이는 그렇지 않을 경우 단백질 응집으로 이어진다.

안정제는 글리세린, 폴리소르베이트, 예를 들어 폴리소르베이트 80, 디카르복실산, 옥살산, 숙신산, 아디프산, 푸마르산, 프탈산 및 그의 조합을 포함할 수 있지만, 이로 한정되는 것은 아니다. 바람직한 실시 형태에 있어서, 안정제는 폴리소르베이트 80이다.

일 실시 형태에 있어서, 안정제 (예를 들어, 폴리소르베이트 80)의 농도는 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.01% (w/v), 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.009% (w/v), 또는 약 0.003% (w/v) 내지 약 0.007% (w/v)이다. 바람직하게는, 안정제의 농도는 약 0.005% (w/v)이다. 다른 특정 실시 형태에 있어서, 안정제는 약 0.01% (w/v)로 존재한다. 상기에 열거된 농도에 대하여 중간 범위, 예를 들어, 약 0.002% (w/v) 내지 약 0.006% (w/v)도 본 발명의 일부인 것으로 의도된다. 예를 들어, 상기에 열거된 임의의 값들의 조합을 상한치 및/또는 하한치로 하는 값의 범위를 포함시키려 한다. 안정제는 Aβ 결합 폴리펩티드 (예를 들어, 항 Aβ 항체)를 안정화시키기에 충분한 양으로 존재하여야 한다.

다른 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정제, 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16^th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 기술된 것이 본 제형에 포함될 수 있되, 단, 이들은 제형의 요망되는 특성에 악영향을 주지 않는다. 특정 실시 형태에 있어서, 제형은, 대안적인 실시 형태에서 방부제가 필요할 경우 첨가될 수 있기는 하지만, 방부제가 실질적으로 없다. 예를 들어, 제형이 동결 건조될 경우, 동결 보호제 또는 동결 건조 보호제가 포함될 수 있다.

본 발명의 다양한 태양에 있어서, 제형은 상기 부형제 종류 중 몇몇 종류 또는 모든 종류를 선택적으로 포함한다. 일 태양에 있어서, 본 발명의 제형은 Aβ 결합 폴리펩티드 (예를 들어, 항 Aβ 항체), 만니톨 및 히스티딘을 포함한다. 특정 실시 형태에 있어서, 제형은 산화방지제, 예를 들어 메티오닌, 및/또는 안정제, 예를 들어 폴리소르베이트 80을 포함할 수 있다. 소정 실시 형태에 있어서, 제형의 pH는 약 6이다. 다른 태양에 있어서, 제형은 Aβ 결합 폴리펩티드 (예를 들어, 항 Aβ 항체), 만니톨, 히스티딘 및 메티오닌을 포함한다. 또 다른 태양에 있어서, 제형은 Aβ 결합 폴리펩티드 (예를 들어, 항 Aβ 항체), 만니톨, 히스티딘, 메티오닌 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 본 발명의 특정 태양에 있어서, 제형은 약 20 mg/ml의 Aβ 결합 폴리펩티드 (예를 들어, 항 Aβ 항체), 약 10 mM의 히스티딘, 약 10 mM의 메티오닌, 약 4%의 만니톨을 포함하며, pH가 약 6이다. 본 발명의 다른 태양에 있어서, 제형은 약 20 mg/ml의 Aβ 결합 폴리펩티드 (예를 들어, 항 Aβ 항체), 10 mM의 히스티딘, 10 mM의 메티오닌, 4% (w/v)의 만니톨, 0.005% (w/v)의 폴리소르베이트 80을 포함하며, pH가 약 6이다. 바람직한 제형은 약 17 mg/ml 내지 약 23 mg/ml의 인간화 3D6 항체, 약 10 mM의 히스티딘, 약 10 mM의 메티오닌, 약 4% (w/v)의 만니톨, 약 0.005%의 폴리소르베이트 80을 포함하며, pH가 약 5.5 내지 약 6.5이다. 다른 바람직한 제형은 약 10 mg/ml 내지 약 30 mg/ml의 인간화 266 항체, 약 10 mM의 히스티딘 또는 숙시네이트, 약 10 mM의 메티오닌, 약 4% (w/v)의 만니톨 또는 소르비톨을 포함하며, pH가 약 5.5 내지 약 6.5이다. 또 다른 바람직한 제형은 약 10 mg/ml 내지 약 30 mg/ml의 인간화 12A11 항체, 약 5 mM의 히스티딘, 약 10 mM의 메티오닌, 약 4%의 만니톨 또는 150 mM의 NaCl을 포함하며, pH가 약 5.5 내지 약 6.5이다. 다른 제형은 냉동 온도 초과의 온도 내지 약 10℃의 온도에서 적어도 약 12개월 동안 안정하며, pH가 약 5.5 내지 약 6.5이고, 적어도 하나의 약 1 mg/ml 내지 약 30 mg/ml 농도의 항 Aβ 항체, 약 4% (w/v) 농도의 만니톨 또는 약 150 mM 농도의 NaCl, 약 5 mM 내지 약 10 mM의 히스티딘 또는 숙시네이트, 및 10 mM의 메티오닌을 포함한다. 바람직하게는, 제형은 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.01% (w/v) 농도의 폴리소르베이트도 포함한다.

본 발명의 예시적 실시 형태는 흔히 벌크 약물 제품으로서 유용한 Aβ 결합 폴리펩티드 (예를 들어, 항 Aβ 항체)의 농축형 제제를 제공한다. 또한, 본 발명의 예시적 실시 형태는 냉동, 동결 건조 및/또는 재구성에 대하여 안정하다. 또한, 본 발명의 예시적 실시 형태는 장기간에 걸쳐 안정하다. 예를 들어, 본 발명의 제형은 적어도 약 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개월 동안 안정하다. 특정 실시 형태에 있어서, 본 발명의 제형은 적어도 약 12개월, 적어도 약 18개월, 적어도 약 24개월, 또는 적어도 약 30개월 동안 안정하다.

본 발명에 따르면, 제형은 약 -8O℃ 내지 약 4O℃, 약 O℃ 내지 약 25℃, 약 O℃ 내지 약 15℃, 약 0℃ 내지 약 1O℃, 바람직하게는 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 보관될 수 있다. 다양한 실시 형태에 있어서, 제형은 약 O℃, 1℃, 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃, 9℃ 또는 1O℃에서 보관될 수 있다. 특정 실시 형태에 있어서, 제형은 약 5℃에서 보관된다. 일반적으로 제형은 이러한 범위에서 안정하며 생물학적 활성을 유지한다. 상기에 열거된 온도에 대하여 중간 범위, 예를 들어 약 2℃ 내지 약 17℃도 본 발명의 일부인 것으로 의도된다. 예를 들어, 상기에 열거된 임의의 값들의 조합을 상한치 및/또는 하한치로 하는 값의 범위를 포함시키려 한다.

본 발명의 제형은 다양한 기술로 전달하기에 적합하다. 소정 실시 형태에 있어서, 본 제형은 정맥내 투여 또는 근육내 투여와 같이 비경구 투여된다. 부가적으로, 제형을 (예를 들어, 항체가 혈뇌 장벽을 횡단할 수 있도록) 뇌에 표적화하여 전달하거나 척수액에 표적화하여 전달할 수 있다. 특정 실시 형태에 있어서, 제형은 정맥내로 투여된다.

본 발명의 제형의 유효 용량은 투여 수단, 표적 부위, 환자가 인간이든지 동물이든지 간에 환자의 생리학적 상태, 투여되는 다른 의약, 및 치료가 예방적 치료인지 치료적 치료인지를 비롯한 다수의 상이한 요인에 따라 달라진다. 일반적으로, 환자는 인간이지만, 트랜스제닉 포유류를 비롯한 인간외 포유류도 치료될 수 있다. 치료 투여량은 적정하여 안전성 및 효능을 최적화할 필요가 있다.

항체를 이용한 수동 면역에 있어서, 예시적 투여량은 숙주 체중 1 kg 당 약 0.0001 mg 내지 약 100 mg, 약 0.01 mg 내지 약 5 mg, 약 0.15 mg 내지 약 3 mg, 0.5 mg 내지 약 2 mg, 바람직하게는 약 1 mg 내지 약 2 mg이다. 몇몇 예시적 실시 형태에 있어서, 투여량은 약 0.5, 0.6, 0.7, 0.75, 0.8, 0.9, 1.0, 1.2, 1.25, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.75, 1.8, 1.9, 또는 2.0 mg/kg일 수 있다. 수동 면역에 있어서의 다른 예시적 투여량은 약 1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg이다. 몇몇 예시적 실시 형태에 있어서, 투여량은 약 5, 10, 15 또는 20 mg/kg일 수 있다. 대상은 그러한 용량이 매일, 격일로, 매주, 또는 경험적 분석에 의해 결정되는 임의의 다른 일정에 따라 투여될 수 있다. 예시적 치료는 연장된 기간, 예를 들어 적어도 6개월의 연장된 기간에 걸친 다회의 투여의 투여가 수반된다. 부가적인 예시적 치료 섭생법은 매 2주 당 1회 또는 월 1회 또는 매 3개월 내지 6개월마다 1회 투여하는 것이 수반된다. 예시적인 투여량 일정은 연속일로 1-10 mg/kg 또는 15 mg/kg, 격일로 30 mg/kg, 또는 매주 60 mg/kg을 포함한다. 몇몇 방법에 있어서, 결합 특이성이 상이한 2종 이상의 단일클론 항체는 동시에 투여되며, 이 경우, 투여되는 각각의 항체의 투여량은 지시된 범위 이내이다.

항체는 일반적으로 다회 투여된다. 단일 투여들 사이의 간격은 매주, 매월 또는 매해일 수 있다. 또한, 간격은 환자에 있어서 Aβ에 대한 항체의 혈중 수준의 측정에 의해 나타내어지는 바와 같이 불규칙적일 수 있다. 몇몇 방법에 있어서, 투여량은 1-1000 ㎍/ml, 몇몇 방법에 있어서는 25-300 ㎍/ml의 혈장중 항체 농도가 성취되도록 조정된다. 대안적으로는, 항체는 서방형 제형으로 투여될 수 있으며, 이 경우, 덜 빈번한 투여가 필요하다. 투여량 및 횟수는 환자에서의 항체의 반감기에 따라 변한다. 일반적으로, 인간 항체가 최장 반감기를 나타내며, 이어서 인간화 항체, 키메라 항체, 및 비인간 항체 순이다.

투여량 및 투여 횟수는 치료가 예방적 치료인지 치료적 치료인지에 따라 변할 수 있다. 예방 용도에 있어서, 본 발명의 항체 또는 그의 칵테일을 포함하는 제형은 아직 질환 상태가 아닌 환자에게 투여되어 환자의 저항성을 증강시킨다. 이러한 양은 "예방적 유효 용량"인 것으로 정의된다. 이러한 용도에 있어서, 정확한 양은 또한 환자의 건강 상태 및 종합적인 면역성에 따라 달라지지만, 일반적으로 투약 당 0.1 내지 25 mg, 특히 투약 당 0.5 내지 2.5 mg 범위이다. 상대적으로 작은 투여량이 장기간에 걸쳐 상대적으로 드물게 투여된다. 몇몇 환자는 그의 나머지 생애 동안 계속하여 치료를 받는다.

몇몇 치료 용도에 있어서, 때로, 상대적으로 짧은 간격으로의 상대적으로 큰 투여량 (예를 들어, 약 0.5 또는 1 내지 약 200 mg/kg의 항체/투약 (예를 들어, 0.5, 1, 1.5, 2, 5, 10, 20, 25, 50, 또는 100 mg/kg) - 5 내지 25 mg/kg의 투여량이 보다 일반적으로 사용됨 - )이, 질환의 진전이 감소 또는 종결될 때까지, 바람직하게는 환자가 부분적으로 또는 완전히 개선된 질환 증상을 나타낼 때까지 필요하다. 그 후, 환자는 예방적 섭생법이 주어질 수 있다.

투여 용이성 및 투여량 균일성을 위하여 단위 투여 형태의 본 발명의 제형을 제공하는 것이 특히 유리하다. 본 발명의 제형은 캡슐, 앰풀, 동결 건조 형태, 또는 다회 투약 용기로 제시될 수도 있다. "용기"라는 용어는 예를 들어 보관을 위하여 물체 또는 액체가 두어지거나 담길 수 있는, 예를 들어 홀더, 두는 용기 (receptacle) 또는 그릇 (vessel)과 같은 것을 나타낸다. 단위 투여 형태는 본원에 기술된 임의의 제형을 포함할 수 있으며, 이는 제형화제, 예를 들어 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 함께인 활성 성분의 현탁물, 용액 또는 에멀젼을 포함한다. 예시적 실시 형태에 있어서, 약학적 단위 투여 형태는 예를 들어 정맥내 주입에 의한 환자에의 투여 이전, 적합한 희석제, 예를 들어, 살균 무발열원 물 또는 염수액을 포함하는 정맥내 적하 백 (예를 들어, 50 ml, 100 ml, 또는 250 ml, 또는 500 ml 적하 백)에 첨가될 수도 있다. 몇몇 약학적 단위 투여 형태, 특히 동결 건조 형태는 정맥내 적하 백에의 첨가 이전에 적합한 희석제를 이용한 재구성을 필요로 할 수 있다. 예시적 실시 형태에 있어서, 약학적 단위 투여 형태는 본원에 기술된 제형을 포함하는 용기이다. 예를 들어, 용기는 10 mL의 유리, 제I형, 튜빙 바이알일 수 있다. 일반적으로, 용기는 제형의 살균성 및 안정성을 유지하여야 한다. 예를 들어, 바이알은 혈청 마개로 폐쇄할 수 있다. 또한, 다양한 실시 형태에 있어서, 용기는 (예를 들어, 1회 사용에 있어서) 약 100 mg의 제형 또는 활성 성분이 꺼내 지도록 설계되어야 한다. 대안적으로는, 용기는 보다 많은 양, 예를 들어, 약 10 mg 내지 약 5000 mg, 약 100 mg 내지 약 1000 mg, 및 약 100 mg 내지 약 500 mg, 약 40 mg 내지 약 250 mg, 약 60 mg 내지 약 80 mg, 약 80 mg 내지 약 120 mg, 약 120 mg 내지 약 160 mg, 또는 그의 범위 또는 간격, 예를 들어 약 100 mg 내지 약 200 mg의 제형 또는 활성 성분에 적합할 수 있다. 상기에 열거된 양에 대하여 중간 범위, 예를 들어, 약 25 mg 내지 약 195 mg도 본 발명의 일부인 것으로 의도된다. 예를 들어, 상기에 열거된 임의의 값들의 조합을 상한치 및/또는 하한치로 하는 값의 범위를 포함시키려 한다. 특정 실시 형태에 있어서, 제형은 흔히 단위 투여 형태 중 액체로서 공급된다.

다른 태양에 있어서, 본 발명은 약학적 단위 투여 형태 (예를 들어, 본원에 개시된 제형을 포함하는 용기)와, 사용 설명서를 포함하는 키트를 제공한다. 따라서, 용기 및 키트는 다회 사용에 충분한 제형을 제공하도록 설계될 수 있다. 다양한 실시 형태에 있어서, 키트는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 희석제는 개별적이거나 조합된 부형제를 포함할 수도 있다. 예를 들어, 희석제는 긴장성 변경제, 예를 들어 만니톨, 완충제, 예를 들어 히스티딘, 안정제, 예를 들어 폴리소르베이트 80, 산화방지제, 예를 들어 메티오닌, 및/또는 그의 조합을 포함할 수 있다. 희석제는, 당업계의 숙련자가 필요하다고 여길 경우, 다른 부형제, 예를 들어 동결 보호제를 포함할 수 있다.

본 발명의 부가적인 유용한 실시 형태는 표제가 "발명의 개요"인 본 출원의 절에 나타내어져 있다.

본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 예시되는데, 실시예는 한정하는 것으로 파악되어서는 아니된다. 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 참고 문헌, 특허 및 공개된 특허 출원의 내용과, 도면은 본원에 참고로 포함된다.

일반적으로, 본 발명의 실행에서는, 달리 나타내지 않는 한, 화학, 분자 생물학, 재조합 DNA 기술, 면역학 (특히, 예를 들어, 항체 기술)의 통상적인 기술, 및 표준 폴리펩티드 제조 기술이 이용된다. 예를 들어, 문헌[[Sambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning: Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)]; 문헌[Antibody Engineering Protocols (Methods in Molecular Biology), 510, Paul, S., Humana Pr (1996)]; 문헌[Antibody Engineering: A Practical Approach (Practical Approach Series, 169), McCafferty, Ed., H Pr (1996)]; 문헌[Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow et al, C.S.H.L. Press, Pub. (1999)]; 및 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, eds. Ausubel et al., John Wiley & Sons (1992)]을 참조한다.

실시예 I. 인간화 항 A 베타 항체의 클로닝 및 발현

본 발명의 방법에 따른 제형용의 예시적 항체는 3D6이다. 3D6 mAb는 Aβ의 N-말단에 특이적이며, 아밀로이드 플라크의 식균 작용을 매개하는 것으로 밝혀졌다 (예를 들어, 식균 작용을 유발). 3D6은 분비형 APP 또는 전장 APP를 인식하지 못하며, 아미노-말단 아스파르트산을 포함하는 Aβ 종만을 탐지한다. 따라서, 3D6은 말단-특이성 항체이다. 항체 3D6을 생산하는, RB96 3D6.32.2.4로 칭해지는 세포주는 ATCC 등록 번호가 PTA-5130이며, 2003년 4월 8일자로 기탁되었다. 3D6 항체의 클로닝, 특성화 및 인간화는 미국 특허 공보 제20030165496 A1호에 개시되어 있다. 간략하게는, 항 Aβ 펩티드 쥣과 단일클론 항체 (m3D6으로 칭함)의 인간화는 m3D6의 경쇄 및 중쇄 가변 영역 (V_L 및 V_H)의 DNA 서열을 역전사-폴리머라제 연쇄 반응 (reverse transcription - polymerase chain reaction, RT-PCR)으로 단리함으로써 실시하였다. 결정된 m3D6의 V_L 및 V_H DNA 서열에 기초하여, 상동성 인간 골격 영역을 동정하였다. 인간화 항체가 Aβ 펩티드 항원과 상호작용하는 능력을 유지한다는 것을 보증하기 위하여, 주요 쥣과 V_L 및 V_H 골격 잔기들을 인간화 3D6 서열에서 유지하여 인간 카파 경쇄 및 IgG1 중쇄 서열의 맥락에서 불변 도메인 영역 (CDR)의 전체 구조를 보존하였다. 이 과정에 의해 동정되는 인간화 3D6의 V_L 및 V_H 서열을 코딩하는 DNA 서열 (5' 신호 펩티드 서열 및 3' 인트론 스플라이스-공여부 서열을 포함함)은 합성된 중복 DNA 올리고뉴클레오티드의 어닐링, 이어서 DNA 폴리머라제 충진 반응 (fill-in reaction)으로 생성시켰다. 인간화 가변 영역 서열 각각의 완전성은 DNA 서열 결정으로 확인하였다. 도 1에는 h3D6v2로 불리우는 예시적인 인간화 항 Aβ 펩티드 3D6 항체의 예측된 구조의 개략도가 도시되어 있다. 도 2에는 h3D6v2의 경쇄 AC 중쇄의 전 아미노산 서열이 확인되어 있다.

인간화 3D6 항체는 항 Aβ 항체의 경쇄 및 중쇄 유전자를 코딩하는 발현 플라스미드를 이용한 중국 햄스터 난소 (CHO) 숙주 세포 혈통의 트랜스펙션에 의해 발현시켰다. 항체를 발현하는 CHO 세포는 표준 메토트렉세이트 기반 약물 선발/유전자 증폭 절차를 이용하여 단리하였다. 요망되는 생산성 및 성장 표현형을 나타내는 CHO 세포주 클론은, 동물 또는 인간 유래의 성분이 없는 화학적으로 규정된 배지를 사용하여 선발하고 이를 이용하여 항체 발현 세포주를 확립하였다.

실시예 II. 인간화 항 Aβ 항체 약물 물질의 제조

폴리펩티드 제조 공정은 항 Aβ 항체를 안정적으로 발현하는 세포 클론의 출발 배양물의 해동으로 시작하였다. 동물 또는 인간 유래의 단백질을 전혀 포함하지 않는 화학적으로 규정된 배지를 사용하여 세포를 배양하였다. 이어서, 배양물을 확장시키고 이를 이용하여 종자용 생물반응기에 접종하고, 이를 다시 이용하여 다수의 생산용 생물반응기 사이클에 접종하였다. 생산용 생물반응기는 유가식 (fed-batch mode)으로 작동시켰다. 생산 사이클 마지막에, 조절 배지 수확물은 추가의 하류 프로세싱을 위하여 제조에 있어서 정밀여과로 투명하게 하였다.

정제 공정은 표준 크로마토그래픽 단계, 이어서 여과로 구성되었다. 정제된 항체는 한외여과로 농축시키고 폴리소르베이트-80이 없는 제형 완충제 내로 정용여과시켰다. 선택적으로, 폴리소르베이트 80 (식물 유래)을 한외여과/정용여과 잔존물 (retentate) 풀에 첨가하고, 이어서 무균 여과 (bacterial retention filtration)를 하였다. 약물 물질은 -8O℃에서 냉동시켜 보관하고, 약물 제품 - 본원에 기술된 안정화된 액체 제형을 포함함 - 으로의 추가의 제조를 위하여 보유하였다.

실시예 III. 항체 제형 및 위약의 제조

2개의 배치의 항체 약물 제품을 제조하였다. 초기 배치는 약물 물질을, 1 mL 당 20 mg의 항 Aβ 항체 활성 물질, 10 mM의 히스티딘, 10 mM의 메티오닌, 4%의 만니톨, 0.005%의 폴리소르베이트-80 - pH 6.0 - 을 포함하는 동물 및 인간용 무단백질 제형 내로 혼합함으로써 제조하였다. 약물 제품은 바이알 당 항 Aβ 항체 활성 물질 100 mg으로 바이알 내로 무균 충전시켰다. 완성된 약물 제품 바이알은 방부제를 전혀 포함하지 않으며, 단지 1회 사용용이었다.

약물 제품의 제2 배치는 폴리소르베이트-80을 포함하지 않고서 제형화 완충제를 사용하여 유사한 방법으로 제조하였다.

실시예 IV. 폴리소르베이트 -80을 포함하거나 포함하지 않는 제형의 안정성에 대한 분석

제형의 안정성, 특히 물리화학적 완정성 (예를 들어, 응집, 탈아미드화, 가수분해 및/또는 디술피드 결합 재배열)은 당업계에 잘 알려진 하기 방법으로 평가하였다: 외관; pH; 단백질 농도 (A280); 부분적으로 생활성에 대한 시험으로서 ELISA; 부분적으로 응집에 대한 시험으로서 소듐 도데실 술페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE); 부분적으로, 일반적으로 응집 및 안정성에 대한 시험으로서 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피 (SEC-HPLC); 부분적으로, 일반적으로 탈아미드화 및 안정성에 대한 시험으로서 양이온 교환 고성능 액체 크로마토그 래피 (CEX-HPLC); 펩티드 지도화. 이러한 방법으로 다양한 온도에서의 시험 조건 하에 단백질의 회수율 및 완전성을 평가하였다.

제형의 외관 분석은 다양한 시점에서의 제형의 품질의 결정을 위하여 행하였다. 분석은 미립자의 투명도, 색상 및 존재에 대한 시각적 검사에 기초하여 행하였다. 예를 들어, 유백도 (degree of opalescence)를 참고용 현탁물의 관점에서 분석하였다. 본 발명에 따라 제조된, 폴리소르베이트 80을 포함하거나 포함하지 않는 제형의 외관에 대한 분석에 의하면, 둘 모두의 제형이 각각의 하기 시점에서 -8O℃, 5℃, 25℃, 및 4O℃ 각각에서 보관될 때 허용가능하다는 것이 입증되었다: 초기, 1개월, 2개월, 3개월, 6개월, 9개월, 및 12개월.

pH 분석은 제형의 pH의 약 5.5 내지 약 6.5의 허용가능한 범위 내에서의 유지성을 결정하기 위하여 실시하였다. 본 발명에 따라 제조된, 폴리소르베이트 80을 포함하거나 포함하지 않는 제형의 pH 분석에 의하면, 둘 모두의 제형이 각각의 하기 시점에서 -8O℃, 5℃, 25℃, 및 4O℃ 각각에서 보관될 때 허용가능하다는 것이 입증되었다: 초기, 1개월, 2개월, 3개월, 6개월, 9개월, 및 12개월. 일반적으로, 이 pH의 범위는 5.8 미만이거나 6.2 초과로 되지 않는다.

A280 분석에 의한 단백질 농도에 대한 분석을 수행하여, 약 17 mg/ml 내지 약 23 mg/ml의 허용가능한 범위 내에서의 제형의 단백질 농도의 유지성을 결정하였다. 본 발명에 따라 제조된, 폴리소르베이트 80을 포함하거나 포함하지 않는 제형의 단백질 농도 분석에 의하면, 둘 모두의 제형이 각각의 하기 시점에서 -8O℃, 5℃, 25℃, 및 4O℃ 각각에서 보관될 때 일반적으로 허용가능하다는 것이 입증되었 다: 초기, 1개월, 2개월, 3개월, 6개월, 9개월, 및 12개월. 5℃, 25℃, 및 40℃에서 보관할 때 3개월의 시점에서 폴리소르베이트 80을 포함하지 않는 제형에 있어서 단백질 농도의 범위가 23 mg/ml을 약간 초과한다는 것을 제외하고는, 그렇지 않을 경우 단백질 농도는 허용가능한 범위 내에 남아 있었다. 따라서, 단백질 농도 분석에 의하면, 특히 폴리소르베이트 80을 포함하는 제형의 경우, 심지어 가속된 조건에서도 단백질의 탐지가능한 손실이 전혀 일어나지 않음이 입증되었다. 또한, 단백질 농도는 일반적으로 초기 시점 이후의 유의한 시간 또는 온도 의존성 변화를 입증하지 못하였다.

생물학적 활성의 유지는, 부분적으로 ELISA 기술로 분석하였다. 생물학적 활성은 결합 단위 (binding unit, BU)/mg으로서 분석하였으며, 허용가능한 활성은 ≥2500 BU/mg 또는 50% (즉, 5000 BU/mg은 100%임)이다. 본 발명에 따라 제조된, 폴리소르베이트 80을 포함하거나 포함하지 않는 제형의 ELISA 분석에 의하면, 둘 모두의 제형이 각각의 하기 시점에서 -8O℃, 5℃, 25℃, 및 4O℃ 각각에서 보관될 때 일반적으로 허용가능하다는 것이 입증되었다: 초기, 1개월, 2개월, 3개월, 6개월, 9개월, 및 12개월. 40℃에서 보관할 때 둘 모두의 제형에 있어서 12개월의 시점에서 생물학적 활성의 범위가 50%보다 약간 작다는 것을 제외하고는, 그렇지 않을 경우 생물학적 활성은 허용가능한 범위 내에 남아 있었다.

SEC-HPLC 분석은 일반적으로 응집, 순도 및 안정성에 대한 시험으로서 행하였다. SEC-HPLC는 제2인산나트륨 완충제를 이용하여 이동상 크로마토그래피가 사용되는 조건 하에 행하는데, 이것에 의하면, SEC-HPLC 분석치가 고분자량 생성물 및 저분자량 생성물의 백분율에 비하여 IgG 단량체가 ≥ 90%인 것으로 확인될 경우 이 제형이 허용가능함을 나타낸다. 본 발명에 따라 제조된, 폴리소르베이트80을 포함하거나 포함하지 않는 제형의 SEC-HPLC 분석에 의하면, 둘 모두의 제형이 각각의 하기 시점에서 -8O℃, 5℃, 25℃, 및 4O℃ 각각에서 보관될 때 일반적으로 허용가능하다는 것이 입증되었다: 초기, 1개월, 2개월, 3개월, 6개월, 9개월, 및 12개월. 각각의 시점에서 40℃에서 보관할 때, 그리고 6개월 후 (여기서, 분석에 의하면, 각각의 시점에서 둘 모두의 제형에 있어서 적어도 10% 초과의 저분자량 생성물이 확인됨) 둘 모두의 제형에 있어서 단량체 백분율의 범위가 90%보다 작다는 것을 제외하고는, 그렇지 않을 경우 단량체의 백분율은 허용가능한 범위 이내였다. SEC-HPLC 분석에 의하면, 일반적으로 고분자량 및 저분자량 프로필이 폴리소르베이트를 포함하거나 포함하지 않는 샘플에서 시간이 지남에 따라 달라지지만, 단량체 형태의 항체는 제형을 5℃에서 보관할 때 예를 들어 12개월의 시점에서 일반적으로 일정하게 남아 있음이 입증되었다.

CEX-HPLC 분석은 일반적으로 아민화 및 안정성에 대한 시험으로서 행하였다. CEX-HPLC는 NaCl 완충제를 이용하여 이동상 크로마토그래피가 사용되는 조건 하에 행하며, 이는 참고용 표준물 프로필에 비견되거나 비견되지 않는 것으로서 분석되는 주 피크의 용출 프로필 및 체류 시간을 생성하였다. 본 발명에 따라 제조된, 폴리소르베이트 80을 포함하거나 포함하지 않는 제형의 CEX-HPLC 분석에 의하면, 둘 모두의 제형이 각각의 하기 시점에서 -8O℃, 5℃, 25℃, 및 4O℃ 각각에서 보관될 때 일반적으로 허용가능하다는 것이 입증되었다: 초기, 1개월, 2개월, 3개월, 6 개월, 9개월, 및 12개월. 각각의 시점에서 40℃에서 보관할 때, 그리고 3개월 후 둘 모두의 제형에 있어서 주 피크의 용출 프로필 및 체류 시간이 비견될만한 것이 아니라는 것을 제외하고는, 그렇지 않을 경우 주 피크는 참고용 피크에 비견될만한 것이었다.

일반적으로, 5℃에서 보관한, 폴리소르베이트 80을 포함하는 제형의 분석은 하기의 특히 중요한 결론을 허용한다: 1) 유백도, pH, ELISA, CEX-HPLC, SEC-HPLC 및 SDS PAGE 분석 모두에 의하면 제형이 9개월에 걸쳐 최소로 변화된다는 것이 나타남; 2) 5℃에서 보관한 제형은 가속된 샘플보다 참고 샘플과 9개월에 걸쳐 유사하게 보임; 3) 펩티드 지도화에 의하면 5℃에서 변화가 나타남; 및 4) 5℃에서의 SEC-HPLC 경향 데이터에 의하면 적어도 17.2개월의 안정성이 예측되지만 (도 6 참조), 컬럼, 기기 및 완충제 상의 가변성의 제거시, 데이터는 30개월 초과의 안정성의 예측을 허용함 (도 7 참조). 부가적으로, 폴리소르베이트 80을 포함하며 25℃에서 보관한 가속된 샘플은 9개월에서 모든 규격을 통과하였다.

또한, 폴리소르베이트 80을 포함하며, 5℃에서 보관한 제형의 분석은 하기의 특히 중요한 결론을 허용한다: 1) 유백도, pH 및 ELISA 분석 모두에 의하면, 제형이 9개월에 걸쳐 최소로 변화된다는 것이 나타남; 2) CEX-HPLC 및 SDS PAGE의 결과에 의하면 참고용 샘플 또는 -80℃ 대조 - 9개월에서 - 에 비견할만한 조사 결과가 나타남; 3) SEC-HPLC 분석에 의하면 9개월에 걸쳐 최소 변화가 나타나는 반면, 승온에서는 변화가 보다 두드러짐; 및 4) SEC-HPLC 경향 데이터에 의하면, 심지어 분석 상의 가변성에 대한 쟁점에서도, 적어도 18개월의 안정성이 예측됨 (도 8 참조 ).

도 3-5는 본 발명에 따라 제조되고 (PS80을 포함하거나 포함하지 않음) 각각 5℃, 25℃, 및 4O℃에서 보관한 제형의 저장 기간 예측치를 그래프로 도시한 것이다. 일반적으로, 도 3-5는, 보다 높은 온도에서의 본 발명의 보관에 의해 기대되는 저장 기간이 감소된다는 것을 나타내고 있다. 특히 도 3은 본 제형을 5℃에서 보관할 때 본 제형의 기대되는 저장 수명이 적어도 18개월이라는 것을 나타내고 있다. 도 4는 실온 (25℃)에서의 제형의 보관은 기대되는 저장 기간을 약 12개월로 감소시키는 역할을 할 수 있음을 나타내고 있다. 또한, 도 5는, 4O℃에서의 제형의 보관이 기대되는 저장 기간을 약 4개월로 감소시키는 역할을 할 수 있음을 입증하고 있다.

실시예 V. 산화방지제로서의 메티오닌의 사용시 안정성에 대한 연구

연구는 항체 제형 중 항체의 안정성의 유지에 대한 메티오닌의 영향을 ㄱ겨결정하기 위하여 행하였다. SEC-HPLC 분석은 하기의 네 가지의 항체 샘플 (항-CD22 IgG4 항체 사용) 상에서 다양한 온도에서 6개월에 걸쳐 행하였다: 20 mM의 숙시네이트 - pH: 6.0 - 를 포함하는 항체 제형; 20 mM의 숙시네이트 및 10 mM의 메티오닌을 포함하는 항체 제형; 20 mM의 숙시네이트 및 0.01%의 PS80을 포함하는 항체 제형; 및 20 mM의 숙시네이트, 10 mM의 메티오닌 및 0.01%의 PS80을 포함하는 항체 제형. 일반적으로, 그 결과에 의하면 메티오닌은 고분자량 (HMW) 형성을 ㅂ바람직하게 감소시킨다는 것이 나타났다. 또한, 메티오닌은 HMW 퍼센트의 온도 의존성 증가를 감소시킨다 (도 10 참조).

또한, pH 안정성 연구 (pH 5.8, 6.0 및 6.2에서)는 하기의 네 가지 항체 (항-B7.2 IgG2 항체) 샘플 상에서 다양한 온도 (5℃ 및 40℃)에서 6주에 걸쳐 행하였다: (1) 항체, 10 mM의 히스티딘 및 150 mM의 NaCl을 포함하는 샘플; (2) 항체, 10 mM의 히스티딘, 150 mM의 NaCl 및 0.01%의 PS80을 포함하는 샘플; (3) 항체, 10 mM의 히스티딘, 150 mM의 NaCl 및 10 mM의 메티오닌을 포함하는 샘플; 및 (4) 항체, 10 mM의 히스티딘, 150 mM의 NaCl, 10 mM의 메티오닌 및 0.01%의 PS80을 포함하는 샘플. SEC-HPLC 분석을 행하였다. 그 결과에 의하면, 메티오닌은 지시된 pH 범위, 예를 들어 약 pH 5.8 내지 약 pH 6.2에 걸쳐 부산물 형성 퍼센트 (예를 들어, HMW 부산물)의 온도 의존성 증가를 감소시킨다는 것이 입증되었다 (도 11 참조). 도 11에 도시된 바와 같이, 메티오닌을 포함하는 샘플은 40℃에서 6주 동안 유지할 때의 적은 양의 응집을 나타내었는데, 이는 5℃에서 6주 동안 유지한 샘플의 것과 유사하였다.

실시예 VI. 시차 주사 열량 측정법에 의한 IgG1 항체의 부형제에 대한 분석

단백질 약물 제형의 일차적인 목적은 단백질을 그의 천연적인, 생물학적 활성 형태로 안정화시키는 것이다. 일반적으로 이는 베이스 제형의 다양한 부형제를 스크리닝하고 이 분자의 분자량 및 활성에 대한 그의 영향을 모니터링함으로써 행할 수 있다. 이러한 파라미터는 안정성을 나타내는 것이다. 다른 안정성 측정법은 열 변성법이며, 상기 열 변성법은 다양한 생물물리학적 기술을 이용하여 모니터링할 수 있다. 일반적으로, 단백질 안정성 수준 증가는 높은 용융 온도, 변성 온도 또는 분해 온도에 기여하였다. 따라서, 대표적인 IgG1 단일클론 항체의 열 특 성은 VP-모세관 시차 주사 열량 측정계를 이용하여 다양한 부형제의 존재 하에 모니터링하였다. 구체적으로는, 10 mM의 히스티딘 (pH 6.0)을 포함하고 다양한 부형제를 포함하는 제형에 있어서 겉보기 T_m을 측정하였다. 여러 부형제가 증가되거나 감소된 열 안정성을 제공하는 것으로 밝혀졌다. 단백질 안정성 수준 증가는 높은 용융 온도에 기여하기 때문에, 대조 T_m2 / T_m3 값 (각각 74.9℃ 및 83.4℃)에 비하여 증가된 T_m2 또는 T_m3을 부여하는 샘플 중 부형제가 특히 바람직한 부형제인 것으로 여겨졌다 (하기 표 1 참조).

따라서, 부형제, 예를 들어 글루코스 (4% 및 10%의 농도로 제형화됨), 수크로스 (4% 및 10%의 농도로 제형화됨), 소르비톨 (4% 및 10%의 농도로 제형화됨), 및 만니톨 (4% 및 10%의 농도로 제형화됨)은 액체 폴리펩티드 제형, 특히 IgG 항체 제형의 안정화에서 특히 잘 작동한다는 결론이 내려졌다.

부형제에 대한 분석 결과

부형제	농도	T_m1*	T_m2*	T_m3*
히스티딘 (대조)	10 mM	-	74.9	83.4
NaCl	10 mM	69.3	74.8	82.9
	100 mM	67.9	74.4	82.4
	500 mM	66.5	74.5	81.9
	1 M	65.4	74.9	82.3
CaCl₂	10 mM	68.7	74.6	82.7
	100 mM	68.5	74.5	82.4
메티오닌	30 mM	-	74.5	83.7
비타민 C	~30 mM	52.2	68.7	-
폴리소르베이트 20	0.005%	-	74.5	83.7
	0.01%	-	74.5	83.8
	0.1%	-	74.4	83.7
폴리소르베이트 80	0.005%	-	74.6	83.8
	0.01%	-	74.5	83.7
	0.1%	-	74.5	83.7
글루코스	0.5%	-	74.7	83.8
	2%	-	74.9	83.9
	4%	-	75.0	84.3
	10%	-	75.8	84.9
수크로스	0.5%	-	74.6	83.6
	2%	-	74.8	83.8
	4%	-	75.0	83.9
	10%	-	75.5	84.4
소르비톨	0.5%	-	74.8	83.6
	2%	-	75.0	83.8
	4%	-	75.2	84.1
	10%	-	75.9	84.8
만니톨	0.5%	-	74.8	83.6
	2%	-	74.9	83.8
	4%	-	75.2	84.1
	10%	-	75.9	84.8
* 대조 (10 mM의 히스티딘, pH 6.0)에 있어서, 두 가지의 추이, T_m2 및 T_m3이 관찰되었음. 보다 빠른 추이 (T_m1)가 몇몇 부형제의 존재 하에 보임.

등가 사항

당업계의 숙련자라면, 단지 일상적인 실험을 이용하여, 본원에 개시된 본 발명의 특정 실시 형태에 대한 다수의 등가 사항을 인지하거나, 그를 규명할 수 있다. 이러한 등가 사항은 하기의 청구의 범위에 포함시키려 한다.

SEQUENCE LISTING <110> Neuralab Limited, et al. <120> ANTI A BETA ANTIBODY FORMULATION <130> ELN-046PC <140> PCT/US2006/002837 <141> 2006-01-27 <150> 60/648,631 <151> 2005-01-28 <160> 47 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic construct <400> 1 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 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antibody <220> <221> SIGNAL <222> (1)..(19) <220> <221> mat_peptide <222> (20)..(142) <400> 19 Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp -15 -10 -5 Val Leu Ser Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys -1 1 5 10 Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu 15 20 25 Ser Thr Asn Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys 30 35 40 45 Gly Leu Glu Trp Leu Gly His Ile Tyr Trp Asp Glu Asp Lys Arg Tyr 50 55 60 Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys 65 70 75 Asn Gln Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala 80 85 90 Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Arg Ile Ile Tyr Asp Val Glu Asp Tyr 95 100 105 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 110 115 120 <210> 20 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic humanized antibody <400> 20 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys 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Artificial Sequence: Synthetic humanized antibody <400> 26 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 27 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic humanized antibody <400> 27 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Val Ala His Ile 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Artificial Sequence: Synthetic humanized antibody <400> 36 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Arg Thr Thr Thr Ala Asp Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 37 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic humanized antibody <400> 37 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Phe Thr Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Val Ala His Ile 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Gly Leu Xaa Leu Val 35 40 45 Ala Gln Ile Asn Ser Val Gly Asn Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Xaa Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Xaa Xaa Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Xaa Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Xaa Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 44 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic humanized antibody <400> 44 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ile Tyr Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Ala Tyr Leu His Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Thr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 45 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic humanized antibody <400> 45 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 35 40 45 Ala Gln Ile Asn Ser Val Gly Asn Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 46 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic humanized antibody <400> 46 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ile Tyr Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Ala Tyr Leu His Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 47 <211> 442 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic humanized antibody <400> 47 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val 35 40 45 Ala Gln Ile Asn Ser Val Gly Asn Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 115 120 125 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 130 135 140 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 145 150 155 160 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 165 170 175 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 180 185 190 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 195 200 205 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 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Tyr Thr 420 425 430 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 ?? ?? ?? ?? ELN-046PC - 1 -

Claims

(a) 1 mg/ml 내지 100 mg/ml 농도의 인간화 3D6 단일클론성 항체로서, 상기 항체는 서열번호 1의 잔기 1-112의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 2의 잔기 1-119의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 인간화 3D6 단일클론성 항체;

(b) 5 mM 내지 15 mM 농도의 히스티딘;

(c) 2% (w/v) 내지 6% (w/v) 양의 만니톨;

(d) 5 mM 내지 15 mM 농도의 메티오닌; 및

(e) 0.001% (w/v) 내지 0.01% (w/v) 양의 폴리소르베이트

를 포함하며 pH가 5.5 내지 6.5인 안정한 제제.
제1항에 있어서, 히스티딘이 8 mM 내지 12 mM 농도로 존재하는 안정한 제제.
제2항에 있어서, 만니톨이 3% (w/v) 내지 5% (w/v) 양으로 존재하는 안정한 제제.
제3항에 있어서, 메티오닌이 8 mM 내지 12 mM 농도로 존재하는 안정한 제제.
제4항에 있어서, 폴리소르베이트는 0.003% (w/v) 내지 0.007% (w/v)의 양으로 존재하는 안정한 제제.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 인간화 3D6 단일클론성 항체는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 2의 잔기 1-448의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 것인 안정한 제제.
제6항에 있어서, 상기 인간화 3D6 단일클론성 항체가 17 mg/ml 내지 23 mg/ml의 농도로 존재하는 안정한 제제.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5% (w/v) 내지 4% (w/v)의 수크로스를 더 포함하는 것인 안정한 제제.
(a) 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 2의 잔기 1-448의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 20 mg/ml 농도의 인간화 3D6 단일클론성 항체;

(b) 10 mM 농도의 L-히스티딘;

(c) 4% (w/v)의 양의 D-만니톨;

(d) 10 mM 농도의 L-메티오닌; 및

(e) 0.005% (w/v) 양의 폴리소르베이트 80

을 포함하며 pH가 6.0인 안정한 제제.
(a) 10 mg 내지 250 mg 양의 인간화 3D6 단일클론성 항체로서, 상기 항체는 서열번호 1의 잔기 1-112의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 2의 잔기 1-119의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 인간화 3D6 단일클론성 항체;

(b) 5 mM 내지 15 mM 농도의 히스티딘;

(c) 2% (w/v) 내지 6% (w/v) 양의 만니톨;

(d) 5 mM 내지 15 mM 농도의 메티오닌; 및

(e) 0.001% (w/v) 내지 0.01% (w/v) 양의 폴리소르베이트

를 포함하며 pH가 5.5 내지 6.5인 안정한 약학적 제제.
제10항에 있어서, 인간화 3D6 단일클론성 항체는 80 mg 내지 120 mg의 양으로 존재하는 안정한 약학적 제제.
제10항에 있어서, 히스티딘은 8 mM 내지 12 mM 농도로 존재하고, 만니톨은 3% (w/v) 내지 5% (w/v) 양으로 존재하며, 메티오닌은 8 mM 내지 12 mM 농도로 존재하고, 폴리소르베이트는 0.003% (w/v) 내지 0.007% (w/v) 양으로 존재하는 안정한 약학적 제제.
제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간화 3D6 단일클론성 항체는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 2의 잔기 1-448의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 것인 안정한 약학적 제제.
제13항에 있어서, 상기 인간화 3D6 단일클론성 항체가 17 mg/ml 내지 23 mg/ml의 농도로 존재하는 안정한 약학적 제제.
제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5% (w/v) 내지 4% (w/v)의 수크로스를 더 포함하는 것인 안정한 약학적 제제.
(a) 100 mg의 인간화 3D6 단일클론성 항체로서, 상기 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 2의 잔기 1-448의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 것인 인간화 3D6 단일클론성 항체;

(b) 10 mM 농도의 L-히스티딘;

(c) 4% (w/v) 양의 D-만니톨;

(d) 10 mM 농도의 L-메티오닌; 및

(e) 0.005% (w/v) 양의 폴리소르베이트 80

을 포함하며 pH가 6.0인 안정한 약학적 제제.
(a) (i) 10 mg 내지 250 mg 양의 인간화 3D6 단일클론성 항체로서, 상기 항체는 서열번호 1의 잔기 1-112의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 2의 잔기 1-119의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 인간화 3D6 단일클론성 항체;

(ii) 5 mM 내지 15 mM 농도의 히스티딘;

(iii) 2% (w/v) 내지 6% (w/v) 양의 만니톨;

(iv) 5 mM 내지 15 mM 농도의 메티오닌; 및

(v) 0.001% (w/v) 내지 0.01% (w/v) 양의 폴리소르베이트

를 포함하며, pH는 5.5 내지 6.5인 안정한 제제를 함유하는 유리 바이알; 및

(b) 0.0001 mg/kg 내지 100 mg/kg의 투여량을 달성하는데 필요한 적정 부피의 사용을 위한 지시서를 포함하는 용법 라벨

을 포함하는 약학적 키트.
제17항에 있어서, 히스티딘은 8 mM 내지 12 mM 농도로 존재하고, 만니톨은 3% (w/v) 내지 5% (w/v) 양으로 존재하며, 메티오닌은 8 mM 내지 12 mM 농도로 존재하고, 폴리소르베이트는 0.003% (w/v) 내지 0.007% (w/v) 양으로 존재하는 약학적 키트.
제17항에 있어서, 상기 투여량이 0.01 mg/kg 내지 5 mg/kg인 약학적 키트.
제17항에 있어서, 상기 투여량이 5 mg/kg 또는 10 mg/kg 이상인 약학적 키트.
제17항에 있어서, 인간화 3D6 단일클론성 항체는 80 mg 내지 120 mg의 양으로 존재하는 것인 약학적 키트.
제17항에 있어서, 피하 투여로 사용되는 것인 약학적 키트.
제17항에 있어서, 정맥내 투여로 사용되는 것인 약학적 키트.
제17항에 있어서, 아밀로이드 생성성 질환 (amyloidogenic disease)을 치료하기 위하여 사용되는 것인 약학적 키트.
제24항에 있어서, 아밀로이드 생성성 질환이 알츠하이머병 (Alzheimer's disease)인 것인 약학적 키트.
제17항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간화 3D6 단일클론성 항체가 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 2의 잔기 1-448의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 것인 약학적 키트.
제26항에 있어서, 인간화 3D6 단일클론성 항체가 17 mg/ml 내지 23 mg/ml의 농도로 존재하는 것인 약학적 키트.
제17항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 0.5% (w/v) 내지 4% (w/v)의 수크로스를 더 포함하는 것인 약학적 키트.
(a) (i) 100 mg의 인간화 3D6 단일클론성 항체로서, 상기 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 2의 잔기 1-448의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 것인 인간화 3D6 단일클론성 항체;

(ii) 10 mM 농도의 L-히스티딘;

(iii) 4% (w/v) 양의 D-만니톨;

(iv) 10 mM 농도의 L-메티오닌; 및

(v) 0.005% (w/v) 양의 폴리소르베이트 80

을 포함하며 pH가 6.0인 안정한 제제를 포함하는 유리 바이알; 및

(b) 0.01 mg/kg 내지 5 mg/kg의 투여량을 달성하는데 필요한 적정 부피의 사용을 위한 지시서를 포함하는 용법 라벨

을 포함하는 약학적 키트.
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