KR100903654B1 - 하고초 추출물과 아데노신을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 하고초 추출물과 아데노신을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 하고초 추출물이 피부 세포의 증식을 촉진시키고 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 및 분해를 억제하며 뛰어난 항산화 효과를 가져 피부 주름을 개선시키고, 또한 아데노신이 진피층에서 DNA와 단백질 합성을 촉진시켜 피부 주름 개선과 피부 탄력 개선에 시너지 효과를 발휘함으로써, 피부 노화를 효과적으로 방지할 수 있는 화장료 조성물을 제공한다.

하고초 추출물, 아데노신, 피부 노화, 주름 개선, 탄력 개선, 화장료

Description

하고초 추출물과 아데노신을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic compositions comprising Prunella Vulgaris extract and Adenosine}

본 발명은 하고초 추출물과 아데노신을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 하고초 추출물이 피부 세포의 증식을 촉진시키고 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 및 분해를 억제하며 뛰어난 항산화 효과를 가져 피부 주름을 효과적으로 개선시키고, 또한 아데노신이 진피층에서 DNA와 단백질 합성을 촉진시켜 피부 주름 개선과 피부 탄력 개선에 시너지 효과를 발휘함으로써, 피부 노화를 효과적으로 방지할 수 있는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 인체의 가장 큰 기관으로서 전체 인체 부피의 약 16%를 차지하고 있고 외부환경과 직접 접해 있으면서 인체 안으로 침입하려는 치명적인 많은 유해인자, 예를 들면, 온도, 습도 및 자외선 등으로부터 인체를 보호하는 중요한 보호막 역할을 담당한다. 그러나 나이가 들어감에 따라 각종 오염물질, 강한 자외선, 스트레스 및 영양결핍 등으로 인해 피부 세포들이 손상을 입게 되고, 세포 증식이 제대로 이루어지지 않게 되어 피부에 주름, 탄력 손실 및 각질화 등이 발생한다.

피부의 노화는 크게 내인적 노화(intrinsic aging)와 외인적 노화(extrinsic aging)로 대별된다(Cosmetics & Toiletories, 111:31-37(1996)). 내인적 노화는 나이가 듦에 따라 피부의 생리적 기능이 점차 저하되어 자연적으로 나타나는 노화 현상으로 임상학적으로 탄력이 감소하고, 피부결이 거칠어지며, 깊은 주름이 생기며 색소가 침착되는 특징이 있다(Arch Dermatol., 130:87-95(1994)). 외인적 노화는 자외선, 활성 산소종(reactive oxygen species) 및 스트레스 등의 외인적 요인에 의해 발생하는 노화 현상을 말한다. 이러한 요인들에 의해 피부의 노화가 급속히 진행되며, 그 결과 피부 표면에 거친 주름이 생성되고 탄력이 현저히 감소하게 된다.

피부의 노화 기작을 규명하기 위한 여러 연구들이 진행되어 여러 가지 피부 노화의 원인들이 밝혀졌다. 피부가 온도의 변화, 습도의 저하 또는 바람 등에 의해 건조하게 되면 외부에 대한 방어벽으로서의 피부 생리 활성이 저하되어 노화가 촉진된다. 또한, 유해 활성산소종 또는 자유 라디칼에 피부가 노출되면 체내의 산화 작용에 의해 과산화 지질이 생성되고 피부를 구성하는 여러 단백질들의 변형을 유발하게 된다.한편 피부 진피의 대부분(피부 전체 건조 중량의 약 70-80%)을 차지하는 콜라겐과 신축성이 큰 엘라스틴 단백질은 섬유아세포에서 생성되는 주요 단백질로 피부 진피층에서 피부의 기계적 견고성, 조직의 결합력 및 탄력성 등에 관여한다(Journal of the american academy of dermatology, 21:610-613(1989)).콜라겐은 연령이 증가할수록, 그리고 자외선에 노출이 많이 될수록 양적 감소를 보인다.

콜라겐은 형태와 구조적 특징에 따라서 분류되는데 이들 중에서, 가장 특징이 잘 알려진 것은 타입 I, II, III 그리고 IV 이다. 콜라겐 타입 I과 III는 진피 층의 세포간질의 구성성분을 이루고, 콜라겐 타입 IV는 DEJ(Dermal Epidermal Junction)의 주요 구성물질이 된다. 콜라겐은 피부의 표피층과 진피층 사이에 위치하여 두 층간의 물질 투과와 수송을 조절해주며 인접한 피부세포의 분화를 조절하며 피부의 견고성을 유지시켜준다. 피부의 주요 구조적 성분인 콜라겐과 엘라스틴은 자연적 또는 외부 자극에 의해 구조가 변성되거나 생합성량이 감소하게 되는데 이로 인해 피부 노화가 가속화된다. 또한 콜라게네이즈의 발현량과 활성 역시 피부 노화를 가속화시키는 주요 요인이다.

콜라겐 합성 촉진물질로는 레티노인산(retinoic acid), 표피성장인자(Epidermal growth factor: EGF), TGF(trans- forming growth factor, 발암증식인자 Cardinale G. et al., Adv. Enzymol., 41, p. 425, 1974)가 알려져 있다. 콜라겐 합성 촉진물질로서 일본공개특허 평08-231370호[문헌 1]에는 동물 태반 유래의 단백질이 유효하다고 보고 되어 있고, 일본공개특허 평08-208424호[문헌 2]에는 베툴린산(betulinic acid)이 효과적인 것으로 보고 되어 있다. 또한, 일본공개특허 평09-40523호[문헌 3] 및 평10-36283호[문헌 4]에는 클로렐라 추출물이 콜라겐 합성을 촉진함은 물론 섬유아세포 증식 촉진 작용이 우수하다고 제시되어 있다. 특히 표피성장인자는 상피세포, 내피세포 및 섬유아세포 세포증식의 강력한 촉진제로 작용하며, 상피세포 결손 시 상피세포의 이동과 증식을 촉진시키기 때문에 상처치유 효과가 우수하다. 또한, 미국특허 제4,603,146호[문헌 5] 및 제4,877,805호[문헌 6] 등에는 레티놀이 콜라겐 합성에 매우 효과적으로 것으로 명시되어 있다.

그러나 레티놀은 콜라겐 합성을 촉진하는 물질이지만 불안정하고 피부 적용 시 자극, 발적 등의 안정성 문제로 사용량의 제한이 있으며, 클로렐라 추출물 등은 효과가 미미하여 실질적으로 피부의 콜라겐 합성을 촉진하여 피부 기능 개선 효과를 기대할 수 없다.

한편, 피부는 자외선에 노출되어 있어 활성 산소종을 만드는 광화학적 반응들이 계속해서 일어나고 있으며, 이들 활성 산소종들은 피부 세포 및 조직 손상을 주도한다. 이들은 항산화 효소와 비효소적 항산화제들로 구성된 항산화 방어망을 파괴함으로써 산화제/항산화제 균형을 산화 상태 쪽으로 기울게 한다. 따라서 건강한 신체의 보호를 위해서는 생성된 활성산소를 효율적으로 방어할 수 있는 시스템이 화장품의 처방에 반드시 포함될 필요가 있다. 즉 산화제/항산화제 밸런스가 유지되는 피부의 항산화 방어 시스템 구축이 필요하다.

지금까지 항산화작용을 갖는 것으로 알려진 물질은 아스코르빈산(ascorbic acid), 디엘-알파토코페롤(dl-α-tocopherol), 베타카로틴(β-carotene), 디부틸히드록실톨루엔(BHT) 등이 있다. 그러나 이러한 물질들은 합성품으로 사용되기 때문에 장기 사용시 또는 다량 사용시 피부 안전성의 문제를 일으킬 수 있으므로 보다 안전하고 유용하게 피부에 적용할 수 있는 새로운 항산화 화장료의 개발이 절실하게 요구되고 있다.

[문헌 1] 일본공개특허 평08-231370호

[문헌 2] 일본공개특허 평08-208424호

[문헌 3] 일본공개특허 평09-40523호

[문헌 4] 일본공개특허 평10-36283호

[문헌 5] 미국특허 제4,603,146호

[문헌 6] 미국특허 제4,877,805호

본 발명은 상기한 바와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 피부에 자극 없이 안정하게 적용될 수 있는 생약 추출물로서 하고초 추출물과 세포 내 성분으로서 아데노신을 유효성분으로서 함유시킴으로써, 상기 하고초 추출물이 피부 세포의 증식을 촉진시키고 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 및 분해를 억제하며 뛰어난 항산화 효과를 가져 피부 주름을 개선시키고, 또한 상기 아데노신이 피부 침투 시 안정성과 지속력을 향상시키며 진피층에서 DNA와 단백질 합성을 촉진시켜 피부 주름 개선과 피부 탄력 개선에 시너지 효과를 발휘하여 피부 노화를 효과적으로 방지할 수 있는 화장료 조성물을 제공하는 데 그 목적이 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 하고초 추출물과 아데노신을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

이때, 상기 하고초 추출물은 ⅰ) 피부 세포의 증식 촉진 작용, ⅱ) 콜라겐 합성 촉진 작용, ⅲ) 콜라게네이즈 억제 작용, ⅳ) 항산화 작용, 또는 ⅴ) 상기 ⅰ) 내지 ⅳ)의 조합의 작용을 나타내는 유효성분으로 함유되고, 상기 아데노신은 피부 침투 시의 안정성과 지속력 향상, 그리고 진피층에서 DNA와 단백질 합성의 촉진을 위한 유효성분으로 함유된다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은, 조성물 총 중량에 대해서 0.001 ~ 20.0 중량%의 하고초 추출물과 0.001 ~ 5.0 중량%의 아데노신을 함유하는 것이 바람직하 며, 상기 하고초 추출물은 열수 추출된 것이 좋다.

본 발명에 따르면, 상기 하고초 추출물이 피부 세포의 증식을 촉진시키고 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 및 분해을 억제하며 뛰어난 항산화 효과를 가져 피부 주름을 개선시킨다. 또한, 상기 아데노신은 피부 침투 시 안정성과 지속력을 향상시키며 진피층에서 DNA와 단백질 합성을 촉진시켜 피부 주름 개선과 피부 탄력 개선에 시너지 효과를 발휘하여 피부 노화를 효과적으로 방지한다.

아울러, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부에 자극이 없고 안정하며 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 또는 분무제 등의 제형으로 유용하게 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명자들은 천연에서 자생하는 동식물들을 대상으로 항노화 효능 물질을 탐색하기 위하여 연구를 수행하였고, 그 결과 하고초 추출물이 피부 세포의 증식 촉진, 콜라겐 합성 촉진 및 분해 억제, 항산화 효능이 뛰어난 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다. 또한, 아데노신은 세포 내 성분이기 때문에 피부 침투 시 안정성과 지속력이 뛰어나고, 진피층에서 DNA와 단백질 합성을 촉진하여 주름 개선에 도움을 주어 피부 개선에 시너지 효과를 발휘함을 알 수 있었다.

하고초(夏枯草, Prunella vulgaris)는 다년생 초본식물 중 꿀풀과 식물로서 5~6월까지 피고 여름이면 시든다고 하여 '하고초(夏枯草)'라고 부른다. 높이는 30~40센티미터이며 잎은 긴 달걀 모양 또는 긴 타원형이고 마주 붙어 나며 전체에 짧은 털이 있고 줄기는 네모지며 끝이 뾰족하고 이 모양의 톱니가 있거나 없다. 줄기의 윗부분에 길이 약 6센티미터 되는 꽃 이삭을 이루고 가지색의 작은 꽃이 원기둥 모양에 기와를 엎어 놓은 모양으로 배열되어 조밀하게 모여 핀다. 꽃이 핀 다음 꽃이삭이 붙은 윗부분 전초의 줄기를 베어 잎이 붙은 채로 말려서 약재로 사용하기도 한다. 하고초의 성분으로는 트리트페노이드사포닌(Triterpenoidsaponin), 올레아놀산, 우르솔산(Ursolic acid), 루틴(Rutin), 히프로사이드(Hyperoside), 시스-카페인산(Cis-caffeic acid), 트랜스-카페인산(Trans-caffeic acid), 비타민 B(Vitamin B), 비타민 C(Vitamin C), 비타민 K(Vitamin K), 카로틴 (Carotene), 수지, 아마로이드(Amaroid), 탄닌(Tannin), 정유, 알카로이드(Alkaloid), 클로로겐산 (Chlorogenic acid)，수용성 염류(약 3.5%, 그 중 68%는 염화칼륨) 등이 알려져 있고 로스마린산(Rosmarinic acid)이 존재하는 것도 밝혀져 있다[한국유용식물자원 연구총람, 한국화학연구소 1988, 하고초성분연구 이작평외 3인, 북경의과대학학보 1991, 중약대사전]. 하고초는 한방에서 만성적인 종기, 두창, 급성 유선염 및 임파선 결핵등에 이용되어 왔으며 징가(아랫배에 담음이나 어혈로 생긴 덩어리)를 파괴하며 각기를 제거하고 온몸이 저리고 마비되는 것을 치료하는데 사용되어 왔다.

본 발명에 따르면, 위와 같은 하고초 추출물은 피부 세포의 증식 촉진 작용, 콜라겐 합성 촉진 작용, 콜라게네이즈 억제 작용, 및 항산화 작용이 우수하여 피부 주름을 개선시키고 피부의 탄력을 증진시킨다.

또한, 아데노신은 유전자인 DNA를 구성하고 있는 요소 중 하나로 아데 닌(Adenine)이라는 염기와 라이보즈(ribose)라는 당이 결합한 화합물이다. 아데노신은 당에 세개의 인산(phosphate)이 붙으면 세포 내 에너지의 주 근원인 ATP(adenosine 5'-triphosphate)가 된다. 이에 따라 아데노신은 신체를 구성하면서 모든 대사가 원활하게 진행되는데 결정적인 역할을 하는 중요한 요소로 알려져 있다. 본 발명에 따르면, 위와 같은 아데노신은 세포 내 성분이기 때문에 피부 침투 시 안정성과 지속력이 뛰어나며 진피층에서 DNA와 단백질 합성을 촉진함으로써 피부 주름 개선에 상승 작용을 한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 위와 같은 하고초 추출물과 아데노신을 유효성분으로 함유한다.

상기 하고초 추출물은 당업계에서 공지된 다양한 추출 방법을 이용하여 제조할 수 있으며, 예를 들어 다음과 같이 제조할 수 있다.

하고초를 물로 깨끗이 세척한 후, 그늘에서 건조한다. 건조한 하고초를 추출용기에 넣고, 적당량의 추출 용매에 적절한 온도에서 일정 시간 추출한다. 이때, 상기 추출물을 여과하고, 진공회전증발기 등을 이용하여 농축할 수 있다.

상기 추출 용매로는 물(정제수), 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 극성용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 에탄올을 첨가하여 열수 추출하는 것이 좋다. 상기 추출 용매의 양은 하고초 건조 중량의 2 ~ 10 배로 하는 것이 좋으며, 상기 추출 방법은 중탕 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출 등의 추출 방법을 사용할 수 있으며, 예를 들어 중탕 추출의 추출방법으로 1회 내지 5회 추출될 수 있다. 추출 시의 침적 온도는 30 ~ 70℃로 할 수 있으며, 보다 바람직하게는 40 ~ 60℃이며, 가장 바람직하게는 50℃ 정도로 유지하는 것이 부패, 변색 및 변취의 예방에 가장 효과적이다. 그리고 침적 시간은 5 ~ 20 시간, 바람직하게는 10 시간이 좋다. 이와 같이 하고초 추출물을 수득한 후, 거름종이 등을 이용하여 고형분을 제거하고, 현탁액을 원심 분리시키고, 상층액을 감압 여과할 수 있다. 그리고 상기 여과된 추출물을 진공회전농축기로 20 ~ 100℃, 바람직하게는 50 ~ 70℃에서 감압 농축할 수 있다.

본 발명에서 상기 하고초 추출물은 상기 나열한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 것이면 본 발명에 포함하며, 또한 상기 하고초 추출물은 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 구체적으로, 본 발명에 사용되는 하고초 추출물은 추출 용매에 의한 추출물을 그대로 사용하거나, 추출한 후 정제 과정, 예를 들어 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막 등의 분리막을 막 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등의 정제 과정을 추가적으로 실시하여 사용할 수 있다. 아울러, 상기 하고초 추출물은 감압 증류 및 동결 건조(또는 분무 건조 등) 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조된 다음, 조성물에 그대로 함유되거나, 또는 용매에 희석되어 함유될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 하고초 추출물을 전체 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 20.0 중량%를 포함하는 것이 바람직하다. 이때, 하고초 추출물을 0.001 중량% 미만으로 포함할 경우에는 하고초 추출물 함유에 따른 피부 세포의 증식 촉진 효과, 콜라겐 합성 촉진 효과, 콜라게네이즈 억제 효과 및 항산화 효과가 미미하며, 20.0 중량%를 초과하여 포함할 경우에는 초과 투입에 따른 상승효과가 적어 경제적이지 못할 수 있다. 하다. 더욱 바람직하게는 상기 하고초 추출물을 0.01 ~ 10.0 중량%, 더더욱 바람직하게는 0.1 ~ 5.0 중량%를 포함하는 것이 좋다. 또한, 상기 아데노신은 전체 화장료 조성물에 대하여 0.001 ~ 5.0 중량%로 포함되는 것이 좋다. 이때, 아데노신의 함량이 0.001 중량% 미만이면 아데노신 함유에 따른 피부 침투 시 안정성과 지속력, 그리고 진피층에서 DNA와 단백질 합성 촉진효과가 미미하며, 5.0 중량%를 초과하면 초과 투입에 따른 상승효과가 적어 경제적이지 못할 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 하고초 추출물 및 아데노신 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 함유제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클렌징 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정된 것은 아니다.

이때, 본 발명에 따른 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 클리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 및 산화아 연 등으로 이루어진 군중에서 선택된 하나 이상이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글라이콜, 1,3-부틸렌 글라이콜, 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글라이콜, 및 소르비탄의 지방산 에스테르 등으로 이루어진 군중에서 선택된 하나 이상이 이용될 수 있다.

아울러, 본 발명에 따른 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 및 폴리아미드 파우더 등으로 이루어진 군중에서 선택된 하나 이상이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올, 또는 프로필렌 글라이콜과 같은 액상의 희석제, 에톡시화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

아울러, 본 발명에 따른 화장료 조성물의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방 족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레 이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 및 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등으로 이루어진 군중에서 선택된 하나 이상이 이용될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은, 구체적으로 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 또는 분무제의 제형을 가질 수 있으며, 그 제형에 있어 특별히 한정되지 않고 화장료의 용도 또는 사용 목적 등에 따라 다양하게 제조될 수 있다.

본 발명에 화장료 조성물은 하고초 추출물과 아데노신의 시너지 효과에 의해 피부 주름 및 탄력을 효과적으로 개선시킨다. 이는 하기의 실시예에 명시되어 있다.

이하, 본 발명의 실시예를 예시한다. 하기의 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위해 제공되는 것으로서, 본 발명의 기술적 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[제조예 1]

< 하고초 추출물의 제조 >

하고초 50 g을 파쇄기를 이용하여 곱게 파쇄하여 100% 에탄올 200ml에 침지시켜 50℃ 수욕조에서 10시간 동안 온탕하였다. 얻어진 추출액을 실온으로 냉각시키고 거름종이로 여과하여 여과액을 취하였다. 다음으로 질소를 사용하여 여과액 에서 에탄올을 증발시켜 농축한 다음, 이를 10% 에탄올에 녹여 추출물을 제조하였다.

[실험예 1]

< 피부 세포 증식 효과 실험 >

하고초 추출물이 피부 세포 증식에 미치는 효과를 알아보기 위하여 인체 정상 섬유아세포(한국세포주은행)를 96-웰 마이크로 플레이트(96-well microplate)의 각 웰에 1 x 10⁴ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma사)에서 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 이어, 상기 하고초 추출물이 50 ~ 500㎍/㎖로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 하고초 추출물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 24시간 동안 추가로 배양하였다. 그런 다음, MTT 용액(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일) 2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드: 5 mg/㎖)을 각각 10 ㎕씩 첨가하고, 4시간 동안 배양한 후, 배지를 제거하고, 각 웰 당 100 ㎕의 DMSO 용액을 가하여 20분 동안 진탕 시키고, 마이크로 플레이트 판독기 (microplate reader, Molecular Devices, 미합중국)를 이용하여 570 nm에서 상층액의 흡광도를 측정하였다. 측정값을 하기의 수학식 1에 대입하여 세포 증식 효과를 산출하고, 그결과를 하기 [표 1]에 나타내었다.

하고초 추출물(㎍/㎖)	세포증식효과 (%)
대조군	-
50	38.2
100	51.9
200	70.5
300	75.8
500	83.7

상기 [표 1]에 나타난 바와 같이, 하고초 추출물을 처리하지 않은 대조군과 비교하여, 하고초 추출물이 처리된 실험군의 경우 매우 높은 섬유아세포 증식 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

[실험예 2]

< 콜라겐 합성 증진 효과 실험 >

인체 정상 섬유아세포(한국세포주은행)를 96-웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 2 x 10⁴ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 이어, 상기 제조한 하고초 추출물이 50 ~ 500㎍/㎖로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 추출물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 키트(Takara, 일본국)를 이용하여 측정함으로써 새로 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. 측정된 양은 ng/2x10⁴ 세포로 환산하였으며, 그 결과를 하기 [표 2]에 나타내었다.

하고초 추출물(㎍/㎖)	콜라겐 합성량 (ng/2x104)
대조군	102
50	110
100	124
200	148
300	162
500	190

상기 [표 2]에 나타난 바와 같이, 하고초 추출물의 농도가 증가함에 따라 콜라겐의 합성량이 증가함을 알 수 있었다. 이에 하고초 추출물은 탁월한 콜라겐 합성 증진 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

[실험예 3]

< 콜라게네이즈 억제 효과 실험 >

상기 하고초 추출물의 콜라게네이즈 생성 저해능을 다음과 같이 측정하였다.

시험은 2.5 %의 우태아 혈청이 함유된 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 함유된 96웰 평판배양기 (96-well microtiter plate)에 인간의 섬유아세포를 2x10⁴ 세포/웰(well)이 되도록 넣고, 70~80% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그리고 하고초 추출물을 농도별로 24시간 동안 처리한 후, 세포배양액을 채위하였다. 채위한 세포배양액을 상업적으로 이용 가능한 콜라게네이즈 측정기구 (미국 아머샴파마샤 사. Catalog #: RPN 2610)를 이용하여 콜라게네이즈 생성 정도를 측정하였다. 먼저 1차 콜라게네이즈 항체가 균일하게 도포된 96-웰 평판 (96-well plate)에 채위된 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항원-항체 반응을 항온조에서 실시하였다. 3시간 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-웰 평판 (96-well plate)에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 15분 후 발색유발물질을 넣어 실온에서 15분간 발색을 유발시키고, 다시 1M 황산을 넣어 반응(발색)을 중지시키면 반응액의 색깔은 노란색을 띄며 반응 진행의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타났다. 노란색을 띈 96-웰 평판 (96-well plate)의 흡광도를 흡광계를 이용하여 405nm에서 측정하고 콜라게네이즈의 합성 정도를 계산하였다. 이때 조성물을 처리하지 않은 군의 채위된 세포배양액의 반응 흡광도를 대조군으로 하였다. 그 결과를 하기 [표 3]에 나타내었다. 하기 [표 3]의 결과에서 발현 저해능은 비처리군(대조군)의 합성능을 100으로 하여 대비한 것이다.

하고초 추출물(㎍/㎖)	콜라게네이즈 발현 정도 (%)
대조군	100
50	94
100	88
200	80
300	70
500	65

상기 [표 3]에 나타난 바와 같이, 하고초 추출물의 농도가 증가함에 따라 세포에서의 콜라게네이즈 발현을 효과적으로 저해함을 알 수 있었다.

[실험예 4]

< 항산화 효과 실험 >

상기 하고초 추출물의 항산화 효과를 알아보기 위하여 자유라디칼 소거활성 실험(Free Radical Scavenging Activity Test)을 실시하였다. 자유라디칼 소거활성 실험은 Kim 등(Kor. J. Pharmacogn., 24(4), 299-303(1993))의 방법을 변형한 것으로써, 안정한 자유라디칼인 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl, 시그마사) 시약을 사용하였다. 2mM DPPH 용액(Blank인 경우는 에탄올) 150 ㎕에 상기 추출물을 다양한 농도로 하여, 이들을 각각 150 ㎕ 첨가하여 혼합하고, 실온에서 30분간 방치한 후 517 nm에서 흡광도를 측정한 경우를 실험군으로 설정하였으며, 이에 대한 대조군으로는 정제수를 이용한 경우로 설정하였다. 상기 실험군과 대조군에 대한 흡광도 측정 후, 하기 수학식 2를 이용하여 자유라디칼 소거활성 효과를 구하여 그 결과를 하기 [표 4]에 나타내었다.

하고초 추출물(㎍/㎖)	자유라디칼소거효과(%)
50	10.5
100	18.3
200	30.4
300	40.2
500	69.2

상기 [표 4]에 나타낸 결과를 통해 알 수 있는 바와 같이, 하고초 추출물은 자유라디칼 소거능력이 매우 탁월하다는 것을 확인할 수 있었다.

[실시예]

본 발명에 따라서 하고초 추출물과 아데노신을 함유하는 화장료의 피부 주름 및 탄력 개선 효과에 대한 임상 시험을 실시하기 위해, 하기 [표 5]에 보인 성분과 함량으로 화장료 조성물을 제조하였다. 이때, 상기 제조예 1의 하고초 추출물은 1.0 중량%, 아데노신은 0.04 중량%로 함유시켰다.

[비교예 1 및 2]

상기 실시예와 동일한 방법으로 화장료 조성물을 제조하되, 하고초 추출물만을 함유시킨 것(비교예 1)과 둘 다 함유시키지 않은 것(비교예 2)을 본 비교예로 하였다. 본 비교예들의 구체적인 성분과 함량은 하기 [표 5]와 같다.

성 분	함량 (중량%)
	실시예	비교예 1	비교예 2
바세린	7.0	7.0	7.0
유동파라핀	5.0	5.0	5.0
밀납	2.0	2.0	2.0
폴리솔베이트-60	2.0	2.0	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.5	2.5	2.5
스쿠알란	3.0	3.0	3.0
프로필렌글리콜	6.0	6.0	6.0
글리세린	4.0	4.0	4.0
트리에탄올아민	0.5	0.5	0.5
카르복시비닐폴리머	0.5	0.1	0.1
토코페롤아세테이트	0.1	0.1	0.1
정제수	To 100	To 100	To 100
하고초 추출물	1.0	1.0	-
아데노신	0.04	-	-
향, 방부제	미량	미량	미량

[실험예 5]

< 피부주름 개선 효과 실험 >

상기 실시예 및 비교예 1, 2에 따른 화장료 조성물의 피부주름 개선 효과를 알아보기 위하여 건강한 35세에서 50세의 여성 30명을 대상으로 다음과 같이 측정하였다.

먼저 세 그룹으로 나누고, A 그룹(10명)에는 실시예를, B 그룹(10명)에는 비교예 1을, C 그룹(10명)에는 비교예 2의 제형을 안면부에 하루 2회씩(아침 및 저녁) 3개월간 도포하게 하였다. 3개월 후 주름의 개선 정도를 피험자의 설문 및 주름의 영상 분석을 통해 평가하였다.

피험자의 설문은 사용전과 비교하여 개선 없음, 약간의 개선, 중등도의 개선, 상당한 개선의 4단계로 판단하였으며, 그 결과는 하기 [표 6]에 나타내었다.

주름의 영상분석에 의한 평가는 실험이 시작되기 전 눈 밑의 레플리카를 채취하고 실험이 종료된 직후의 레플리카를 눈 밑의 동일 부위에서 채취하여 영상분석을 통해 주름의 2차원적 분석으로 주름의 밀도를 측정하였다. 영상분석에 의한 주름 밀도의 측정 결과는 사용 전에 대한 주름 밀도에 대한 감소율로 하였으며, 그 결과는 하기 [표 7]에 나타내었다.

시료	개선 없음 (명)	약간의 개선 (명)	중등도의 개선 (명)	상당한 개선 (명)
실시예	1	1	4	4
비교예 1	1	3	4	2
비교예 2	7	3	-	-

시료	주름 밀도 감소율 (%)
실시예	45
비교예 1	35
비교예 2	10

상기 [표 6] 및 [표 7]의 결과에 나타난 바와 같이, 하고초 추출물과 아데노신을 동시에 함유한 실시예의 경우, 그렇지 않은 비교예 1 및 2보다 피부주름 개선 효과가 매우 우수함을 알 수 있었다.

[실험예 6]

< 피부탄력 효과 실험 >

상기 실시예 및 비교예 1, 2에 따른 화장료 조성물의 피부탄력 증진 효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 측정하였다.

먼저, 20세 이상의 건강한 여성 30명(평균연령 37세)을 세 그룹으로 나누고, A 그룹(10명)에는 실시예를, B 그룹(10명)에는 비교예 1를, C 그룹(10명)에는 비교예 2의 제형을 눈가를 중심으로 온도 24-26℃, 습도 75%의 조건에서 하루 2회씩 (아침 및 저녁) 12주간 도포하게 한 후, 피부탄력 측정기(Cutometer MPA580, Conrage + Khazaka사, 독일연방국)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다. 시험결과는 cutometer MPA580의 R8(R8(12주)-R8(0주)) 값으로 계산하여, 그 결과를 하기 [표 8]에 나타내었다. 이때, R8 값은 피부점탄성(Vicoelasticity)의 성질을 나타낸다.

시료	피부탄력 효과
실시예	0.67
비교예 1	0.55
비교예 2	0.27

상기 [표 8]의 결과에 나타난 바와 같이, 하고초 추출물과 아데노신을 동시에 함유한 실시예의 경우, 그렇지 않은 비교예 1 및 2보다 피부탄력 증진 효과가 매우 증가함을 확인할 수 있었다.

[실험예 7]

< 제형의 안정성 실험 >

하고초 추출물과 아데노신을 함유한 화장료 조성물의 안정성을 시험하기 위해 하기와 같은 방법으로 실시하였다.

상기 실시예 및 비교예 1, 2에 따른 화장료 조성물을 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관하고, 또한 4℃로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고 내에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관한 후, 변색 및 변취, 분리정도를 비교 측정하였다. 그 결과를 하기 [표 9]에 평균치로 나타내었다. 이때, 제품 변색 및 변취, 분리정도를 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다.

0 : 변화 없음

1 : 극히 조금 분리(변색)

2 : 조금 분리(변색)

3 : 조금 심하게 분리(변색)

4 : 심하게 분리(변색)

5 : 극히 심하게 분리(변색)

구분	제형의 안정성
	실시예		비교예 1		비교예 2
	45℃	4℃	45℃	4℃	45℃	4℃
변색	0.5	0	0.4	0	0	0
변취	0.3	0	0.2	0	0	0
분리	0	0	0	0	0	0

상기 [표 9]에서 알 수 있는 바와 같이, 실시예와 비교예는 45℃에서 변색이나 변취, 분리 현상이 거의 없이 안정하였다. 이는 하고초 추출물과 아데노신이 제형 내에서 안정한 상태로 존재함을 나타낸다.

이상의 결과를 통해 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따라서 하고초 추출물과 아데노신을 동시에 함유하는 화장료 조성물은 시너지 작용에 의해 피부 주름 개선 효과와 탄력효과가 매우 우수함을 알 수 있다. 또한, 화장료 조성물은 제형 안정성을 가짐을 알 수 있다.

이하에서는, 상기한 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명의 하고초 추출물과 아데노신을 함유하는 화장료 조성물의 제형예를 제시한다. 그러나 본 발명의 조성물을 하기의 제형예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.

[제형예 1]

< 유연화장수(스킨로션) >

하기 [표 10]에 보인 성분과 함량으로 유연화장수(스킨로션)를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
하고초 추출물	0.5
아데노신	0.04
1.3-부틸렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
올레일알코올	0.1
폴리솔베이트 20	0.5
에탄올	15.0
벤조페논-9	0.05
향,방부제	미량
정제수	to 100

[제형예 2]

< 영양화장수(밀크로션) >

하기 [표 11]에 보인 성분과 함량으로 유영양화장수(밀크로션)를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
하고초 추출물	1.0
아데노신	0.04
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	1.2
토코페닐아세테이트	3.0
유동파라핀	5.0
스쿠알란	3.0
마카다이아너트오일	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.0
카르복시비닐 폴리머	1.0
비에치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향,방부제	미량
정제수	to 100

[제형예 3]

< 영양크림 >

하기 [표 12]에 보인 성분과 함량으로 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
하고초 추출물	2.0
아데노신	0.04
세토스테아릴알콜	2.0
글리세릴스테아레이트	1.5
트리옥타노인	5.0
폴리솔베이트 60	1.2
솔비탄스테아레이트	0.5
스쿠알란	5.0
유동 파라핀	3.0
싸이클로메치콘	3.0
비에이치티이	0.05
델타-토코페롤	0.2
농글리세린	4.0
1,3-부틸렌글리콜	2.0
산타검	0.1
EDTA-2Na	0.05
향, 방부제	미량
정제수	to 100

[제형예 4]

< 마사지크림 >

하기 [표 13]에 보인 성분과 함량으로 마사지크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
하고초 추출물	0.5
아데노신	0.04
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	0.5
밀납	2.0
토코페릴아세테이트	0.1
폴리솔베이트 60	3.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.5
세테아릴알코올	2.0
유동파라핀	30.0
카르복시비닐폴리머	0.5
향, 방부제	미량
정제수	to 100

[제형예 5]

< 팩 >

하기 [표 14]에 보인 성분과 함량으로 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
하고초 추출물	1.0
아데노신	0.04
프로필렌글리콜	2.0
글리세린	4.0
카르복시비닐 폴리머	0.3
에탄올	7.0
피이지-40 히드로게네이티드 캐스터 오일	0.8
트리에탄올아민	0.3
비에치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향, 방부제	미량
정제수	to 100

Claims (6)

1. 하고초 추출물과 아데노신을 유효성분으로 함유하고,

   상기 하고초 추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 20.0 중량 %로 함유하고, 상기 아데노신은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 5.0 중량 %로 함유하며,

   상기 하고초 추출물과 상기 아데노신은 25:1의 중량비로 함유하여 피부주름을 개선하도록 하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 삭제
6. 제1항에 있어서,

   상기 화장료 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 또는 분무제의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.