KR100590141B1

KR100590141B1 - 화장제 조성물

Info

Publication number: KR100590141B1
Application number: KR1020017003077A
Authority: KR
Inventors: 로니 린 웨인카우프; 우마 산타남; 라우라 로즈 팰런커; 토마스 유진 제뉴아리오; 아니타 마리아 브링커
Original assignee: 유니레버 엔.브이.
Priority date: 1998-09-10
Filing date: 1999-05-05
Publication date: 2006-06-15
Anticipated expiration: 2019-05-05
Also published as: TW550072B; ZA200101828B; MXPA01002531A; ES2181501T3; EP1109527A2; CZ2001886A3; US6022896A; WO2000015179A3; CA2343130C; CA2343130A1; EP1109527B1; AR018357A1; CZ293631B6; DE69902473T2; KR20010086399A; CN1325297A; JP4129121B2; DE69902473D1; RU2217125C2; PL346866A1

Abstract

본 발명은 알파 히드록시산을 함유하고 추가로 항-자극/항-자상제로서 페트로셀린산을 함유하는 조성물에 관한 것이다.

알파-히드록시산, 페트로셀린산, 항자상제, 항자극제

Description

화장제 조성물 {Cosmetic Composition}

본 발명은 알파 히드록시산에 의해 유도되는 피부 자극 또는 자상(刺傷)을 감소 또는 제거하기 위한 조성물 및 방법에서 페트로셀린산의 용도에 관한 것이다.

알파 히드록시산 (AHA)는 광손상되거나 또는 자연적으로 노화된 피부의 외양 개선, 피부 미백, 노인 반점의 치료 등과 같은 화장제의 유용성을 제공하는 것으로 알려져 있다. 유감스럽게도, 이를 고농도로 사용하면 도포할 때 때때로 피부 자극, 예를 들어 피부 홍화 및 자상감이 일어날 수 있다. 문헌 [Kligman AM, J. Geriatr. Dermatol. 1997; 5(3): 128-131]을 참조한다. 자극은 조성물 중 활성 성분의 양을 낮춤으로써 또는 활성 성분이 피부에 녹아들어가는 것을 감소시킴으로써 개선할 수 있다. 상기 두가지 접근법의 심각한 결점은 효능이 감소된다는 것이다. AHA에 의한 자극은 조성물의 pH를 높여 감소시킬 수 있으나, 이러한 방법은 피부에 AHA가 녹아들어가는 것을 감소시켜 활성을 감소시킨다. AHA의 효능을 유지하면서 그의 자극을 감소 또는 제거하는 것이 요구된다.

유럽 특허 출원 제0631722호 [존슨 앤드 존슨 (Johnson & Johnson)]에는 레티놀에 의한 피부의 자극을 감소시키는 글리콜산의 용도가 기재되어 있다. 미국 특허 제5,516,793호 [두피 (Duffy)]에는 AHA를 포함한 다양한 국소 성분들에 의해 야기되는 자극을 개선하기 위한 아스코르브산의 용도가 기재되어 있다.

피부용 화장제 조성물 중에서 페트로셀린산이 풍부한 오일, 예를 들어 고수풀씨 오일의 용도는 유럽 특허 출원 공개 제0709084 A2호에 기재되어 있다. 유럽 특허 출원 공개 제0709084호에는 보습제로서 고수풀씨 오일의 용도를 교시하고 있으나, 자극을 감소시키는 페트로셀린산의 특성은 기재하고 있지 않다. 또한, 다양한 첨가제, 예를 들어 히드록시산 (n-옥타노일 5-살리실산)과 같은 각질용해제가 임의로 존재할 수 있다고 언급되어 있다. 살리실산은 알파 히드록시산과 다른 방식으로 작용하는 것으로 공지된 베타 히드록시산이며 자극성이 덜한 것으로 간주된다.

상기 언급된 방법에는 화장제 조성물 중 AHA 및 고수풀씨 오일 또는 페트로셀린산의 조합물은 기재되어 있지 않고, AHA의 사용과 관련된 자극 또는 자상을 감소시키기 위한 페트로셀린산의 용도가 교시되어 있지 않다.

<발명의 요약>

본 발명은 알파 히드록시산 (AHA)을 함유하고 추가로 페트로셀린산을 함유하는 조성물을 본 발명의 일부로서 포함한다.

또한, 본 발명은 페트로셀린산을 국소 도포하여 AHA를 함유하는 조성물에 의해 유도되는 자극을 감소시키는 것을 포함하는, 상기 조성물의 국소 도포에 의해 유도되는 자극 또는 자상을 감소시키기 위한 화장법을 포함한다. 본 발명의 방법에 따라, 페트로셀린산은 AHA와 동일한 조성물 중에 공존할 수 있거나, 또는 별도의 조성물로 도포될 수 있다.

본 발명에 따라 페트로셀린산을 국소 도포함으로써 AHA의 국소 도포에 의해 유도되는 자극 또는 자상이 감소 또는 제거된다. 본 발명의 일부로서 모든 공지된 항-자극제가 AHA 유도된 자극을 개선하지는 않는 것이 발견되기에 이르렀다.

이에 따라 또한, 본 발명은 화장제 조성물 중에서 AHA 유도된 자극 또는 자상 감소를 위한 페트로셀린산의 용도를 포함한다.

모든 양은 달리 언급하지 않는 한 조성물의 중량에 의한다.

페트로셀린산 (CH₃(CH₂)₁₀CH=CH(CH₂)₄COOH)은 본 발명의 조성물의 필수 성분이다.

본 발명의 조성물 중 페트로셀린산의 양은 일반적으로 조성물의 0.05 중량% 내지 20 중량%, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 10 중량%, 가장 바람직하게는 0.5 중량% 내지 5 중량%이다.

AHA는 증식을 증대시키고, 각질세포에서 세라미드 생합성을 증가시키고, 표피의 두께를 증가시키고, 정상 피부의 박리를 증가시켜 더 부드럽고 젊어보이는 피부를 생성한다.

AHA는 입체이성질체 (DL, D 또는 L)의 조합물일 수 있다.

AHA는 하기 화학식을 갖는다.

상기 식에서, M은 수소 또는 탄소원자수 1 내지 27의 포화 또는 불포화된 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소쇄이다.

더욱 바람직하게는, 히드록시산은 락트산, 2-히드록시옥탄산, 히드록시라우르산, 글리콜산, 및 이들의 혼합물로부터 선택된다. 입체이성질체가 존재하는 경우, L-이성질체가 가장 바람직하다.

조성물의 pH에 따라, 히드록시산은 염, 예를 들어 암모늄 또는 칼륨 또는 나트륨염으로서 존재할 수 있다.

본 발명의 조성물이 2.5 내지 10의 일반적인 범위 내의 pH를 가질수 있더라도, 본 발명의 조성물은 산성 pH (특히 히드록시산을 함유하는 경우)일때, 가장 바람직하게는 pH 3 내지 4일때 특히 유용한데, 이때 조성물이 특히 효율적이기 때문이다. 불행히도, 조성물은 상기 pH에서도 또한 자극성이다.

본 발명의 조성물의 특별한 장점은 히드록시산 또는 레티노이드를 피부 자극을 일으키지 않으면서 다량 사용할 수 있다는 것이다. 본 발명에 따른 조성물 중에 존재하는 히드록시산 성분의 양은 0.01 내지 20 중량%, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 12 중량%, 가장 바람직하게는 2 내지 12 중량%인 것이 바람직하다.

페트로셀린산 항-자극제를 함유하는 본 발명의 조성물은 글리콜산 및(또는) 락트산을 함유하는 것이 가장 바람직한데, 이 성분들은 자극을 일으키는 것으로 발견되었지만 화장제 유용성을 전달하는데 특히 효율적인 것으로 발견되었기 때문이다.

또한, 본 발명의 피부 보호 조성물은 불활성이고, 통상적으로 다량으로 존재하는 성분이며, 활성 또는 작용 성분을 전달하는 기능을 하는 화장에 허용가능한 비히클 또는 담체를 포함한다.

물 이외의 비히클은 액상 또는 고상 피부연화제, 용매, 습윤제, 증점제 및 분말을 포함할 수 있다. 특히 바람직한 비수성 담체는 폴리디메틸실록산 및(또는) 폴리디메틸 페닐 실록산이다. 본 발명의 실리콘은 25 ℃에서 약 10 내지 10,000,000 센티스토크 범위의 점도를 가진 것일 수 있다. 특히 바람직한 것은 저점도 및 고점도 실리콘의 혼합물이다. 이러한 실리콘은 제너럴 일렉트릭 캄파니 (General Electric Company)로부터 등록상표 비카실 (Vicasil), SE 및 SF로, 다우 코닝 캄파니 (Dow Corning Company)로부터 200 및 550 시리즈로 시판되고 있다. 본 발명의 조성물 중에 사용할 수 있는 실리콘의 함량 범위는 조성물의 5 내지 95 중량%, 바람직하게는 25 내지 90 중량%이다. 비히클의 양은 총 조성물의 약 2 내지 약 99 중량%, 바람직하게는 약 50 내지 약 99 중량%, 가장 바람직하게는 약 80 내지 약 99 중량%일 수 있다.

본 발명에 따라, 비히클은 비히클의 60 중량% 이상이 물인 것이 바람직하다. 본 발명의 조성물은 히드록시산의 피부 전달을 개선하기 위해 오일-물 에멀젼인 것이 바람직하다 (문헌 [Sah A., "An in-vitro study of the effect of formulation variables and product structure on the delivery of alpha-hydroxy acid (Lactic acid) to skin", MS Thesis, Department of Pharmaceutical Sciences of the College of Pharmacy, University of Cincinnati, OH, July 1996] 참조). 이러한 개선된 전달은 종종 자극/자상의 증가를 동반하므로 상기 에멀젼 중에서 페트로셀린산의 사용을 특히 중요하게 만든다. 본 발명에 따른 바람직한 수중유 (oil-in-water) 에멀젼에서, 물은 본 발명의 에멀젼의 50 중량% 이상, 가장 바람직하게는 조성물의 50 내지 70 중량%를 차지한다.

임의의 피부에 유용한 재료 및 화장용 보조제

본 발명의 화장제 조성물 중에는 다양한 유형의 활성 성분이 존재할 수 있다. 활성제는 피부연화제나 조성물의 물성을 개선시키는 성분이라기보다는 피부 유용제로서 정의된다. 이의 일반적인 예에는 주름방지 (anti-wrinkle) 화합물 및 선스크린 및 태닝제 (tanning agent)가 포함되지만, 이러한 범주로 제한되지 않는다.

선스크린에는 자외광 차단에 통상적으로 사용되는 물질이 포함된다. 이러한 화합물의 예를 들면 이산화 티탄, PABA의 유도체, 신나메이트 및 살리실레이트가 있다. 예를 들어, 옥틸 메톡시신나메이트 및 2-히드록시-4-메톡시 벤조페논 (옥시벤존으로도 공지되어 있음)을 사용할 수 있다. 옥틸 메톡시신나메이트 및 2-히드록시-4-메톡시 벤조페논은 각각 등록상표 파르솔 (Parsol) MCX 및 벤조페논-3으로 각각 상업적으로 시판된다. 에멀젼에 사용되는 선스크린의 정확한 양은 UV 방사로부터 원하는 보호 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 화장제 조성물의 다른 기능성 성분으로는 증점제를 들 수 있다. 증점제는 통상적으로 조성물의 0.1 내지 20 중량%, 바람직하게는 약 0.5 중량% 내지 10 중량%의 양으로 존재할 것이다. 증점제의 예를 들면 B.F. 굿리치 캄파니 (B.F. Goodrich Company)에서 등록상표 카르보폴 (Carbopol)로 시판하는 가교결합된 폴리아크릴레이트 물질이다. 크산탄, 카라기난, 젤라틴, 카라야, 펙틴 및 로커스트 빈 검과 같은 검을 사용할 수 있다. 특정 환경하에서 실리콘 또는 피부연화제으로서 작용하는 물질에 의해 증점 기능이 달성될 수 있다. 예를 들어, 10 센티스토크가 넘는 실리콘 검 및 글리세롤 스테아레이트와 같은 에스테르는 두가지 기능을 수행한다.

본 발명의 화장제 조성물에는 분말을 혼입할 수 있다. 이들 분말에는 백악, 활석, 백토, 카올린, 전분, 스멕타이트 점토, 화학적으로 개질된 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 유기적으로 개질된 몬모릴로나이트, 수화된 알루미늄 실리케이트, 퓸드 실리카, 알루미늄 전분 옥테닐 숙시네이트 및 이들의 혼합물이 포함된다.

다른 소량의 보조 성분들도 또한 화장제 조성물에 혼입될 수 있다. 이 성분들에는 착색제, 유백제 및 향료가 포함될 수 있다. 이러한 기타 성분 물질의 양은 조성물의 0.001 중량% 내지 20 중량% 범위일 수 있다.

조성물의 용도

본 발명에 따른 조성물은 주로 인간 피부에 대한 국소 도포용 제품으로, 특히 피부 컨디셔닝제 및 유연제, 및 주름지거나 노화된 피부의 외양을 예방 또는 감소시키기 위한 제제로서 사용될 것이다.

사용시, 적합한 용기 또는 도포기로부터 소량, 예를 들어 1 내지 10 ㎖의 조성물을 피부의 노출 부위에 도포하고, 필요한 경우 다음에 손 또는 손가락 또는 적합한 기구를 사용하여 피부에 펴바르고(거나) 문지른다.

본 발명의 방법에 따라, 활성 성분에 의해 유도되는 피부 자극이 페트로셀린산의 국소 도포에 의해 감소되거나 또는 제거된다. 페트로셀린산은 활성제와 함께 공존할 수 있거나, 또는 활성제와 분리되어 피부에 도포될 수 있다.

생성물 형태 및 포장

본 발명의 국소 피부 처리 조성물은 로션, 유체 크림, 크림 또는 젤로서 제제화할 수 있다. 조성물은 그의 점도에 맞는 적합한 용기에 포장하여 소비자가 사용하도록 할 수 있다. 예를 들어, 로션 또는 유체 크림은 병 또는 롤-볼 (roll-ball) 도포기, 또는 캡슐, 또는 분사제 유도 에어로졸 장치 또는 손가락이 작용하기에 적합한 펌프가 장착된 용기에 포장할 수 있다. 조성물이 크림인 경우, 튜브 또는 뚜껑달린 단지와 같은 변형되지 않는 병 또는 짜내는 용기에 간단하게 저장할 수 있다.

또한, 본 발명은 본 명세서에 정의된 바와 같이 화장에 허용가능한 조성물을 함유하는 밀폐된 용기를 제공한다.

페트로셀린산은 AHA를 함유하는 조성물로부터 분리시켜 포장할 수 있다.

하기 특정 실시예는 본 발명을 추가로 설명하나 본 발명은 이에 국한되지 않는다.

<비교예 1>

하기 조성을 갖는 에멀젼 기재를 제조하였다.

에멀젼 기재 조성

완전한 화학명 또는 CFTA명	용인된 등록상표 및 활성제 %	중량%
물, DI		46.54
이나트륨 EDTA	세퀘스테렌 Na2	0.05
마그네슘 알루미늄 실리케이트	비검 울트라	0.6
메틸 파라벤	메틸 파라벤	0.15
디메티콘	DC 안티폼 에멀젼	0.01
부틸렌 글리콜 1,3	부틸렌 글리콜 1,3	3.0
히드록시에틸셀룰로스	나트로솔 250HHR	0.5
글리세린, USP	글리세린 USP	2.0
크산탄 검	켈트롤 1000	0.2
트리에탄올아민	트리에탄올아민 99(%)	1.2
스테아르산	프리스테렌 4911	3.0
프로필 파라벤 NF	프로필파라벤 NF	0.1
글리세릴 히드로스테아레이트	나투레켐 GMHS	1.5
스테아릴 알콜	라네트 18DEO	1.5
이소스테아릴 팔미테이트	프로타켐 ISP	6.0
C12-15 알콜 옥타노에이트	헤테스테르 FAO	3.0
디메티콘	실리콘 플루이드 200 (50 cts)	1.0
콜레스테롤 NF	콜레스테롤 NF	0.5
소르비탄 스테아레이트	소르비탄 스테아레이트	1.0
부틸화 히드록시톨루엔	엠바녹스 BHT	0.05
토코페릴 아세테이트	비타민 E 아세테이트	0.1
PEG-100 스테아레이트	MYRJ 59	2.0
나트륨 스테아로일 락틸레이트	파티오닉 SSL	0.5
레티닐 팔미테이트	비트 A 팔미트레이트 84%	0.06
히드록시 카프릴산	히드록시 카프릴산	0.1
물, DI		99.80으로 만들기에 충분한 양
알파-비스아볼올	알파-비스아볼올	0.2
pH		7-8

하기 표 1에 추가 성분을 물 대신 첨가하였다.

하기 기재된 자극 시험 방법에 따라 기재를 시험하였다.

자극 시험 방법

4번의 노출 패치 시험: 이 시험의 목적은 패치를 반복 적용한 후 각종 시험 물질에 의해 유발되는 자극 수준을 비교하는 것이다. 시험 물질을 폐쇄된 조건에서 피부에 접촉시켜 두었다. 패널리스트의 외측 윗팔을 적용 부위로 지정하였다. 밴드형 붕대 [스캔포르 (Scanpor: 등록상표) 테이프]를 사용하여 패치 [웨브릴 (Webril: 등록상표) 패딩의 직경 18 ㎜의 원반이 장착된 25 ㎜ 힐 탑 (Hill Top: 등록상표) 챔버]를 적소에 유지하였다. 패널리스트의 양 윗팔을 사용하였다. 패치를 균형잡힌 임의의 순서로 적용하였다.

월요일 아침 9시 정각에 패치를 적용하고, 화요일 아침 9시 정각에 제거하였다 (24 시간 동안 노출). 새로운 세트의 패치를 화요일 오후 3시 정각에 적용하고, 수요일 아침 9시 정각에 제거하였다 (18 시간 노출). 세번째 세트의 패치를 수요일 오후 3시 정각에 적용하고, 목요일 아침 9시 정각에 제거하였다. 최종 세트의 패치를 목요일 오후 3시 정각에 적용하고, 금요일 아침 9 정각에 제거하였다 (18시간 동안 노출).

패치를 제거할 때마다, 그 부위를 온수로 헹구고 두드려 건조시켰다. 그 다음, 시험 부위를 외과용 피부 표시펜으로 표시하여 등급 매김과 후속적인 패치 적용을 위해 위치를 확실히 해두었다. 다시 패치를 적용하기 전, 시험한 화요일, 수요일, 목요일 및 금요일 오후 3시에 시험 부위를 평가하였다.

시험 부위에 중간 정도의 홍화, 건조, 및(또는) 가려움과 같은 피부 자극이 예상되었다. 시험 부위의 팽윤 가능성도 있었다. 임의의 시험에서 평가시 중간 정도의 홍화 또는 임의의 팽윤이 나타나는 경우, 이러한 특정 시험 부위는 패치를 다시 적용하지 않아야 한다.

각 팔의 시험 부위를 일정한 조명 아래서 2명의 숙련된 판정인이 시각적으로 등급을 정하였다. 시험 부위를 중증도의 순서대로 등급을 정하였다. 첫번째 평가 기간에 반응의 등급을 정하는 판정인이 연구 기간 동안 매일 계속 그 부위의 등급을 정하였다.

반응의 등급을 정할때, 가장 심각한 반응을 나타내는 부위에 가장 낮은 점수를 주었다. 두번째로 가장 심각한 반응을 나타내는 부위에 두번째로 가장 낮은 점수를 주는 식으로 계속하였다. 무리하게 등급을 매기지는 않았다. 둘 이상의 부위가 반응이 없거나 동일한 반응 (부위간 상이점이 없음)을 나타내는 경우, 평균 등급을 지정하였다. 부위의 자극 정도 때문에 부위에 패치를 적용하지 않는 경우, 그 부위는 투여를 중단할 때 받은 등급을 그대로 보유했다.

통계학적 분석

패치 처치로부터 얻은 등급 결과를 비모수적인 통계학적 방법으로 통계적으로 비교하였다. 항-자극제를 함유하는 시험 물질들을 프리드만 순위 합 (Friedman's Rank Sum)을 사용하여 히드록시산 및(또는) 레티노이드 만을 함유하는 상응하는 대조군과 비교하였다. 패널리스트가 블록으로서 기능하도록 하면서 (즉, 각 패널리스트에게 각 시험 처치를 시험함) 프리드만 분석을 사용하여 각 평가점에서 처리군을 조성물 2 (대조군)과 비교하였다. 0.1 미만의 p 값에서 통계학적 유의하다고 고려된다.

자극 시험 방법을 사용하여 표 1에 기재된 성분들을 함유하는 조성물을 시험하였다. 20 개의 물질들을 시험하였다. 등급의 합이 높을수록, 자극의 중증도가 덜하였다.

자극 시험 결과
조성물 번호	성분	등급의 합 (4 번)
1	기본 조성물	68.5^*
2	대조군: 기본 조성물+8% 글리콜산 및 0.075% 레티놀	46.5
3	조성물 2+3% 블랙 커란트 씨드 오일 (Black Currant Seed Oil)	58.0
4	조성물 2+1% 샘부쿠스(Sambucus)	44.5
* 조성물 2보다 현저하게 덜 자극성임

표 1의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 4번의 노출 후, 8% 글리콜산과 0.075 % 레티놀 (조성물 2)가 기본 조성물 1에 비해 현저하게 더 자극성이었다. 1% 샘부쿠스 또는 3% 블랙 커란트 씨드 오일은 자극을 상당히 감소시키지 못했다. 알파-히드록시산에 의해 자극이 야기된다는 문제가 있더라도, 샘부쿠스 및 블랙 커란트와 같이 잘 알려진 항-자극제를 도포하여 해결될 수는 없다.

<비교예 2>

표 2에 기재된 성분들을 함유하는 조성물 1, 5 및 11 내지 14를 실시예 1에 기재된 자극 시험 방법을 사용하여 시험하였다. 17종의 기재를 시험하였다. 얻어진 결과를 표 2에 요약하였다. 등급의 합이 높을수록, 자극이 적다.

자극 시험 결과
조성물 번호	성분	등급의 합(4 번)
1	기본 조성물	74.5^a
5	기본 조성물+8% 글리콜산+0.075% 레티놀	61.5
11	조성물 5+1% 녹차	51.0
12	조성물 5+0.1% K2 글리시르레틴산	54.5
13	조성물 5+3% 켄치 (Quench) T^*	58.5
14	조성물 5+3% 폴리올 예비중합체-2^**	57.0
a 조성물 5보다 통계학적으로 덜 자극성임 * 센터켐(Centerchem)으로부터 구입한 항-자극제 (물, 부틸렌 글리콜, 콜라 빈 추출물, 과라나 추출물 및 마테 추출물을 함유) ** 페네덤사 (Penederm, Inc.)로부터 구입한 항-자극제 (CFTA명은 PPG-12/SMDI)

표 2의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 시험한 공지된 어떠한 항-자극제로써도 (8% 글리콜산과 0.075 % 레티놀을 함유하는) 조성물 5에 의해 유도된 자극을 현저히 감소시킬 수 없었다.

<실시예 3>

하기 실시예에서는 AHA의 국소 도포에 의해 각질층으로부터 IL1-알파가 방출된다는 것을 증명하였다.

각질층은 예비염증성 시토킨 IL-1α의 저장소이다 [L. Wood, P. Elias, C. Calhoun, J. Tsai, C. Grunfeld, K. Feingold. Barrier Disruption Stimulates Interleukin-1α Expression and Release from a Pre-Formed Pool in Murine Epidermis. J. Invest. Dermatol. 1-6:397-403, 1996]. 하기 실시예에서는 AHA의 국소 적용으로 인해 인간 피부에서 IL-1α의 방출이 유도된다는 것을 설명하였다.

IL-1α의 생체외 면역조직화학적 염색:

8% 글리콜산 (GA) pH 3.8을 추가로 함유하는 기본 조성물 (비교예 1 참조), 또는 비히클 크림 (기본 조성물) 또는 8% 락트산 (LA) 수용액, pH 3.8, 또는 트리스 완충액 (pH 7.6)을 사용하여 얼음 위에서 30 분간 인간 사체 피부를 처리하였다. 8 ㎜ 펀치 조직검사편을 취하여 포르말린 중에 고정하였다. 5μ섹션을 다중클론성 항-인간 IL-1α(R&D 시스템, 1/50 희석액)과 함께 인큐베이션하고, 제조자 [벡터 랩 (Vector Labs)]의 지시에 따라 아비딘-비오틴-호스-래디시 과산화효소 착물 방법을 사용하고, 색소원으로서 3-아미노-9-에틸 카르바졸을 사용하여 현상하였다. 이미지프로 플러스 (ImagePro Plus) 3판 [메릴랜드주 실버 스프링에 소재하는 미디아 사이버네틱스 (Media Cybernetics)]를 사용하여 IL-1α에 대한 양성 표지 (염색 영역 %)의 강도를 정량화하였다. 얻어진 결과를 표 3에 요약하였다.

	8% 락트산	트리스 완충액	8% 글리콜산 크림	비히클 크림
염색 영역%	42.7±12^*	14.2±10.4	48.4±15.4^**	2.5±1.7
* t-시험에 의해 트리스 완충액과 비교하여 현저함, p<0.01 ** t-시험에 의해 비히클과 비교하여 현저함, p<0.03

표 3의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 8% 락트산으로 처리하자 그의 대조군인 트리스 완충액과 비교하여 IL-1알파 염색이 증가하였다. 또한, 8% 글리콜산 크림으로 인해 비히클과 비교하여 IL-1알파 염색이 현저하게 증가하였다. AHA, (글리콜산 및 L-락트산)의 국소 도포는 표피에서 IL-1알파의 즉각적인 방출을 자극하는 것으로 나타났다. 다량의 IL-1알파가 각질 세포나 그 주위에 저장된다고 알려져 있기 때문에 각질층이 IL-1알파의 가장 명백한 쏘스일 것이다.

AHA로 처리한 후 방출된 IL-1알파에 의해 아라키돈산 캐스케이드가 촉발되어, 아라키돈산이 프로스타글란딘 E2 (PGE2)와 같은 각종 염증성 대사산물로 전환될 수 있게 되었다. 프로스타글란딘은 염증에 중심 역활을 하므로, 병인론 및 자극 치료와 관련되어 있다 [Kupper T, Immunology: The Role of Cells and Cytokines in Immunity and Inflammation Oppenheim JJ and Shevach EJ, eds. Oxford University Press, New York, 1990, pp. 285-305].

<실시예 4>

하기 실시예에서는 AHA에 의해 IL-1알파가 방출되고 IL-1알파에 의해 야기되는 PGE2 유도를 페트로셀린산이 효과적으로 억제할 수 있다는 것을 증명하였다. 따라서, AHA에 의해 야기되는 자극을 감소시키는데 페트로셀린산이 효과적일 것이다.

신생아 인간 피부 섬유아세포 (5-9 계대 배양)을 96-웰 조직 배양 처리된 플레이트 [미국 뉴욕주에 소재하는 코닝 코스타 (corning-Costar)]에 1개의 웰 당 7500 개의 세포 밀도로 심었다. 사용한 배양액은 2 mM L-글루타민, 10 % 소태아혈청, 및 항생 및 항진균성 용액 [모두 다 메릴랜드주 게티스버그에 소재하는 깁코/라이프 테크놀로지스 (Gibco/Life Technologies)에서 시판]이 보충된, 글루코스 고함량의 둘베코 변형 이글 세포배양액 (DMEM)(깁코/라이프 테크놀로지스)이었다. 48 시간 후, 각 웰을 무혈청 DMEM 200 ㎕로 2회 세정하고, DMEM+ 1 ng/㎖의 IL-1알파 및(또는) 활성제 함유 L-글루타민 200 ㎕를 세포에 투여하였다. 6시간 후, 세포를 생존도에 대해 정성적으로 현미경으로 관찰하고, 배양액을 수거하여 분석할 때까지 냉동하였다. 각 처리를 4회 수행하였다.

상업적인 PGE2 키트 [영국 버킹엄셔에 소재하는 아메르샴 (Amersham)]을 사용하여 효소 면역측정법을 수행하였다. PGE2-특이 항체를 미량역가 웰 세트 상에 미리 도포하였다. 상기 검정은 한정량의 웰에 결합된 PGE2-특이 항체에 대한 비표지된 PGE2 (표준 또는 샘플)과 고정된 양의 과산화효소 표지된 PGE2 사이의 경쟁을 기초로 하였다. 0, 1, 2, 4, 8, 16 및 32 pg/웰 또는 50 ㎕ 배지/웰의 표준물에 pH 7.5의 0.1 M 인산염 완충액 50 ㎕/웰을 4 ℃에서 3시간 동안 적용하였다. 인큐베이션이 끝날 무렵, 호스래디시 과산화효소-공액 PGE2 50 ㎕/웰을 모든 웰에 첨가하고 플레이트를 4 ℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 0.5 % 트윈 (Tween) 20을 함유하는 pH 7.5의 0.01 M 인산염 완충액 300 ㎕/웰로 플레이트들을 4회 세척하였다. 20 % 디메틸포름아미드 중 3,3,5,5-테트라메틸벤지딘/과산화수소 기재 150 ㎕/웰을 첨가하고, 플레이트를 실온에서 정확히 30 분 동안 인큐베이션하였다. 1M 황산 100 ㎕/웰을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 다이나테크 (Dynatech) MR7000 마이크로플레이트 분광광도계 (버지니아주 챈틸리에 소재하는 다이나테크)를 사용하여 450 ㎚에서 흡광도를 읽어 웰 중 색상을 정량화하였다. 표준 곡선을 플로팅하고, 샘플 중 PGE2의 양을 곡선으로부터 외삽하였다.

IL-1알파-유도된 PGE2를 억제하는 화합물의 성능으로 시험 화합물의 항-염증 잠재력을 평가하였다. 스튜던트 t-시험을 사용하여 통계학적 유의성을 결정하였다. 얻어진 결과를 표 4에 요약하였다.

처리	PGE2 pg/㎖	IL-1알파와 비교한 감소율 (%)
대조군	267.6±48.6
IL-1α	598.2±118.3
IL-1α+0.01% 페트로셀린산	201.2±40.1	120 %^*
IL-1α+0.001% 페트로셀린산	308.3±97.2	80 %
^* IL-1알파 단독에 대한 값과 비교했을때 p<0.05에서 통계학적으로 유의함

표 4의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 페트로셀린산은 AHA에 의해 IL-1알파가 야기되고 차례로 IL-1알파에 의해 야기되는 PGE2의 유도를 효과적으로 억제한다. 따라서, 페트로셀린산은 AHA에 의해 야기된 자극 감소에 효과적일 것이다.

실시예 5 내지 8에는 본 발명에 따른 국소 도포 조성물을 설명하였다. 조성물은 종래의 방법으로 가공할 수 있다. 이들은 화장용으로 적합하다. 특히, 이 조성물은 주름지고, 거칠고, 건조하며, 벗겨지기 쉬운, 노화되고(되거나) UV-손상 된 피부에 도포하여 피부의 외양 및 감촉을 개선할 뿐만 아니라, 건강한 피부에 도포하여 피부의 변형을 예방 또는 지연시키는데 적합하다.

<실시예 5>

본 발명의 범위 내의 전형적인 수중유 에멀젼은 하기와 같다:

화학명	중량%
프로필렌 글리콜	1
글리세린	1
히드록시에틸셀룰로스	0.5
마그네슘 알루미늄 실리케이트	0.5
이미다졸리디닐 우레아	0.5
사나트륨 EDTA	0.05
바셀린	2
이소프로필 팔미테이트	5
디메티콘	0.5
콜레스테롤	0.5
세틸 알콜	0.5
이소스테아르산	3
레티닐 팔미테이트	0.1
peg-40 스테아레이트	1
peg-100 스테아레이트	1
소르비탄 스테아레이트	1
페트로셀린산	0.5
글리콜산	7
수산화 암모늄	pH 4.0까지 만드는 양
물 DI	100 %까지 만드는 충분량

<실시예 6>

본 발명의 범위 내의 또다른 전형적인 수중유 에멀젼은 하기와 같다:

화학명	중량%
프로필렌 글리콜	1
히드록시에틸셀룰로스	0.5
마그네슘 알루미늄 실리케이트	0.5
이미다졸리디닐 우레아	0.2
바셀린	2
이소프로필 팔미테이트	5
디메티콘	0.5
콜레스테롤	0.5
스테아르산	3
이소스테아르산	1.5
글리세롤 스테아레이트	1.5
peg-40 스테아레이트	1
peg-100 스테아레이트	1
소르비탄 스테아레이트	1
세틸 알콜	0.5
페트로셀린산	2
글리콜산	10
수산화 암모늄	pH 3.8까지 만드는 양
물 DI	100%까지 만드는 충분량

<실시예 7>

본 발명의 범위 내의 또다른 전형적인 수중유 분산액은 하기와 같다:

화학명	중량%
이소스테아릴 네오펜타노에이트	20
peg-8 카프릴산/카프르산 글리세라이드	6
세틸 옥타노에이트	17
폴리글리세릴-6 디올레에이트	15
시클로메티콘	20
글리세릴 이소스테아레이트	0.5
이소스테아르산	0.5
세라미드 III	0.1
ppg-5-세트에트-20	3
L-락트산/칼륨 락테이트	6
히드록시카프릴산	0.1
물 DI	1.3
페트로셀린산	0.5

<실시예 8>

본 발명의 범위 내의 또다른 전형적인 수중유 에멀젼을 제조하였다:

화학명	중량%
크산탄검	0.2
이나트륨 EDTA	0.1
나트륨 PCA	0.5
디아조디닐 우레아	0.3
이산화 티탄	1
스테아르산	3
시클로메티콘	0.3
세틸 알콜	0.5
글리세릴 스테아레이트	0.5
peg-100 스테아레이트	0.5
스테아레트-2	0.2
레시틴	0.5
토코페롤	0.2
옥틸 메톡시신나메이트	6
페트로셀린산	0.5
글리콜산	3
말산	2
락트산	2
녹차 추출물	1
트리에탄올아민	pH 3.8까지 만드는 양
물 DI	100%까지 만드는 충분량

본 명세서에 설명 및 개시된 본 발명의 특정 형태는 단지 예시를 위한 것이라는 것을 이해해야 한다.

Claims

(i) 조성물의 0.01 중량% 내지 20 중량%의 양의 알파 히드록시산;

(ii) 조성물의 0.05 중량% 내지 20 중량%의 양의 페트로셀린산; 및

(iii) 화장에 허용가능한 비히클

을 포함하는 조성물.
제1항에 있어서, 히드록시산의 양이 조성물의 0.1 내지 12 중량%인 조성물.
제1항에 있어서, 히드록시산이 글리콜산, 락트산, 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
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