JPS6316380B2

JPS6316380B2 -

Info

Publication number: JPS6316380B2
Application number: JP55123585A
Authority: JP
Inventors: Hamao Umezawa; Tomio Takeuchi; Hiroshi Osanawa; Hironobu Iinuma; Setsuko Kunimoto
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date: 1980-09-08
Filing date: 1980-09-08
Publication date: 1988-04-08
Also published as: IT1209896B; CA1175763A; ES8302090A1; DK157890B; SE8105079L; DK157890C; AT376239B; US4416899A; GB2084999A; ES505256A0; DE3134353A1; NL8104069A; DK394281A; KR870001373B1; ATA386081A; DE3134353C2; KR830007834A; FR2489819B1; CH655498B; AU7489281A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は式で表わされる新規抗生物質BMG162−aF2または
その医薬的に許容される塩、その製造法及びそれ
を有効成分とする制癌剤に関するものである。 BMG162−aF2はバチルス属に属するBMG162
−aF2生産菌株を培養し、BMG162−aF2を蓄積
せしめ、この培養物からBMG162−aF2を採取す
ることにより得られるものである。バチルス属に属するBMG162−aF2の生産菌の
一例としては、本発明者らによつて昭和53年８月
に栃木県大平山で採取した土壤試料より分離した
菌株バチルス（Bacillus）BMG162−aF2（微工
研菌寄第5230号）がある。この菌株の菌学的性状
は次のとおりである。 BMG162−aF2株の菌学的性状１形態 BMG162−aF2株は、グラム染色不定の有芽
胞桿菌で、菌体の大きさは、0.6〜0.8×２〜3.5
ミクロンである。周鞭毛を有し、活発な運動性
を示す。芽胞の形は、卵円形でその位置は中立
（central）（中立はエス・テー・コーワン及び
ケイ・ジエー・ステイール著、坂崎利一訳；医
学細菌同定の手びき、近代出版、1978年より引
用した。）でありその大きさは0.5〜0.7×1.0〜
1.5ミクロンであり、菌体はめいりように膨隆
している。芽胞は、その側部に、クリスタルバ
イオレツトでカヌーの形によく染まる部分
（Parasporal body）を有し、耐熱性である。
抗酸性染色は染まらない。２各種培地における生育状態肉汁ゼラチン穿刺培養以外は、すべて37℃で
培養した。 (1) 肉汁寒天平板培養コロニーは光沢のない不透明な円形で、辺
縁は不期則、色は茶白（Brownish White）
を示す。 (2) 肉汁寒天斜面培養培地の表面を拡散増殖し、不透明で乾いた
感じの表面をしている。その色は、茶白
（Brownish White）である。 (3) 肉汁液体培養培養１日目で培地全体が濁り、２日目にな
ると培地表面に菌膜が出来始める。３日目に
なると、培地表面を菌膜がおゝい、培地は澄
み、試験管底部に菌体が沈澱してくる。 (4) 肉汁ゼラチン穿刺培養 20℃で培養すると、培養１日目で穿刺にそ
つて増殖が認められ、２日目になると、その
部分に陥没が始まる。６日目頃になるとゼラ
チンの液化が始まる。その型は、ロート状で
ある。一方、30℃で培養すると、２日目から
菌膜ができ始め、４日目から液化が始まる。
ゼラチンの液化は７日目で完了した。 (5) BCPミルク培養５日目頃から、ブロムクレゾールパー
プル（BCP）が青変し、12日目頃からペプ
トン化が始まつた。 (6) サブロー・デキストロース寒天培地および
サブロー・デキストロース・ブロスサブロー・デキストロース寒天斜面および
サブロー・デキストロース・ブロス（ペプト
ン10ｇ、デキストロース40ｇ、寒天15ｇ、精
製水1000ml、PH無修正、サブロー・デキスト
ロース・ブロスは斜面培地から寒天を除いた
もの）に各30℃、および37℃で培養し、液体
培地の場合は生育を認めないが、斜面培地で
は斜面の下部にやゝ弱い発育を呈した。３生理的性質以下特に記さない限り、培養温度はすべて37
℃である。 (1) 硝酸塩の還元硝酸塩肉汁培地（肉エキス10ｇ、ペプトン
10ｇ、NaCl5ｇ、KNO₃1ｇ、精製水1000ml、
PH7.2）で培養すると、培養１、３、５日目
のいずれの培養液でも、亜硝酸塩を検出し
た。培養５日目では、特に顕著な反応を示
し、培養液に試薬を添加すると、赤褐色の沈
澱を生じた。 (2) 脱窒反応脱窒反応試験を駒形らの方法（長谷川武治
編著；微生物の分類と同定、223頁、東京大
学出版会、1975年）で行なつた結果、陰性で
あつた。 (3) MRテストブドウ糖５ｇ、ペプトン７ｇ、塩化ナトリ
ウム５ｇ、精製水1000ml、PH7.5の培地で30
℃培養し、１、２、５日目にそれぞれメチル
レツド試験を行なつたが、いずれの場合も陽
性であつた。 (4) VPテストブドウ糖５ｇ、ペプトン７ｇ、塩化ナトリ
ウム５ｇ、精製水1000ml、PH7.5の培地で30
℃培養し、１、２、５日目にそれぞれ試験し
たが、いずれも陰性であつた。 (5) インドールの生成ポリペプトン20ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、
精製水1000ml、PH7.4の培地で培養すると１
〜２日では、インドールの生成を認めなかつ
たが、培養５日目でそれを認めた。 (6) 硫化水素の生成 TSI寒天培地（Triple sugar iron agar、
栄研）で、７日間培養したが、硫化水素の生
成を認めなかつた。 (7) デンプンの加水分解可溶性デンプンを0.2％含んだ肉汁寒天平
板に画線培養して、１、２、３、５、６、
13、15日目にそれぞれヨード・ヨードカリ液
で試験したが、そのいずれの場合もデンプン
の分解を認めなかつた。 (8) クエン酸の利用コーザーのクエン酸塩培地（Koser
citrate medium）及びクリステンセン培地
（Christensen agar）で５日間培養したが、
両培地とも生育しなかつた。 (9) 無機窒素源の利用基礎培地（ブドウ糖10ｇ、KH₂PO₄1ｇ、
MgSO₄・7H₂O0.5ｇ、KCl0.2ｇ、精製水
1000ml、PH7.2）に窒素源（NaNO₃1ｇ、
（NH₄）₂SO₄0.78ｇ、グルタミン酸ナトリウ
ム1.7ｇ）を加え試験したが、いずれの窒素
源の場合も増殖を認めなかつた。 (10) 色素の生成キングＡ寒天培地（栄研）で１夜培養後、
室温に６日間放置、一方、キングＢ寒天培地
（栄研）で６日間培養したが、そのいずれに
も溶解性色素を認めなかつた。 (11) ウレアーゼ尿素培地（栄研）で、24時間培養したが、
ウレアーゼ陰性であつた。 (12) オキシダーゼ肉汁寒天斜面培地で１夜培養した新鮮菌
を、チトクローム・オキシダーゼ試験紙（日
水）で試験した結果オキシダーゼ反応陽性で
あつた。 (13) カタラーゼ肉汁寒天斜面培地で１夜培養した新鮮菌に
ついて、３％過酸化水素水でカタラーゼ試験
を行うと、気泡を認め陽性であつた。 (14) 生育の範囲滅菌後PHがそれぞれPH3.0、4.0、5.0、6.0、
6.8、7.8、8.2、8.8の肉汁ブイヨン培地でそ
れぞれ24時間培養すると、PH5.0〜8.2の範囲
で生育を認めた。生育の最適PHはPH6.0〜7.8
である。又肉汁ブイヨン培地に接種後、９、
15、20、24、27、30、37、40、45、50℃の各
温度で、それぞれ24時間培養すると、15〜40
℃の範囲で生育を認めた。生育の最適温は、
37℃前後である。 (15) 酸素に対する態度１％ブドウ糖肉汁寒天培地に、菌液を懸濁
後、高層に固めて培養すると、培地表面とそ
れに近い部分によく生育した。TEP寒天培
地（栄研）で嫌気培養すると、生育を認め
た。 (16) Ｏ−Ｆテスト（Hugh−Leifson試験）好気的条件及び嫌気的条件のどちらの場合
も、ブドウ糖を分解し、酸を生成した。 (17) 炭素化合物の利用炭素化合物の利用を飯塚・駒形の方法（長
谷川武治編著；微生物の分類と同定、230頁、
東京大学出版会、1975年）で試験すると、グ
ルコース、グリセリン、コハク酸ナトリウム
を利用し、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリ
ウム、パラヒドロキシ安息香酸ナトリウムを
利用しなかつた。 (18) 糖類からの酸およびガスの生成基礎培地（リン酸二アンモニウム１ｇ、塩
化ナトリウム0.2ｇ、硫酸マグネシウム・７
水塩0.2ｇ、酵母エキス0.2ｇ、寒天15ｇ、ブ
ロムクレゾールパープル0.2％水溶液４ml、
精製水1000ml、PH7.2）に、別に滅菌した糖
をそれぞれ最終濃度が１％になるように無菌
的に加え、斜面に固めた後、BMG162−aF2
株をそれぞれ画線培養し、40日間にわたつ
て、酸の生成を観察した。その結果Ｄ−グル
コース、Ｄ−マンノース、Ｄ−フラクトー
ス、Ｄ−マンニツト、麦芽糖、トレハロー
ス、グリセリンからは、それぞれ酸を生成し
たが、Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース、
Ｄ−ガラクトース、ラムノース、Ｄ−ソルビ
ツト、イノシツト、乳糖、シヨ糖、ラフイノ
ース、デンプンからは、いずれも酸を生成し
なかつた。一方、ガスの生成は、基礎培地（ペプトン
10ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、ブロムチモール
ブルー0.008ｇ、精製水1000ml、PH7.2）に上
記と同様に各糖を加え、ダーラム管を使用し
て２週間にわたつて観察した。その結果上記
の糖のいずれからも、ガスの生成を認めなか
つた。 (19) グルコン酸の酸化試験グルコン酸塩培地（栄研）を使用して、グ
ルコン酸の酸化試験を行なつた結果、陰性で
あつた。 (20) ジヒドロキシアセトンの生成酵母エキス10ｇ、グリセリン20ｇ、寒天15
ｇ、精製水1000ml、PH7.0の培地で、３、５、
10、24日間それぞれ培養し、フエーリング氏
液を用いて、ジヒドロキシアセトンの生成を
調べたが、いずれの培養からもその生成を観
察できなかつた。 (21) 塩化ナトリウムの耐性基礎培地（トリプテイケース
（Trypticase.BBL）10ｇ、精製水1000ml、
PH7.0）に、２、５、７％の各濃度になるよ
うに塩化ナトリウムを加え、菌液を接種後、
静置培養し、４日間にわたつて菌の増殖を観
察した。その結果、基礎培地と塩化ナトリウ
ムを２％含む培地では、それぞれ菌の増殖を
認めたがそれ以上の塩化ナトリウム濃度では
いずれも菌の生育を認めなかつた。 (22) 馬尿酸の分解試験ハートインフユジヨンブイヨン培地
（Difco）1000mlに馬尿酸ナトリウム10ｇを
加えた培地（PH7.4）で４日間培養し、塩化
第二鉄水溶液を用いて、馬尿酸の分解を調べ
たが、陰性であつた。 (23) フエニルピルビン酸（PPA）試験酵母エキス３ｇ、DL−フエニルアラニン
２ｇ、リン酸一水素ナトリウム１ｇ、塩化ナ
トリウム５ｇ、寒天12ｇ、精製水1000ml、PH
7.3組成の斜面培地に、濃厚に接種し、24時
間培養後、10％塩化第二鉄水溶液で試験した
結果、陰性であつた。 (24) チロシンの溶解性試験チロシン寒天培地（肉汁寒天培地1000ml、
チロシン５ｇ、PH7.2）で、30℃および37℃、
２〜４日間培養した頃、よりチロシンの溶解
が認められた。以上の性状を要約すると、BMG162−aF2株は
通性嫌気性のグラム染色不定の有芽胞桿菌で周鞭
毛をもち、運動性を示す。芽胞は卵円形で中立
（central）、側部にクリスタルバイオレツトでカ
ヌーの形によく染まる部分（Parasporal body）
を有し、耐熱性である。菌体はめいりように膨隆
し、非抗酸性である。寒天培地で拡散増殖し、液
体培地で菌膜を形成する。ゼラチンを液化し、
BCPミルクを青変後ペプトン化する。サブロ
ー・デキストロース・ブロスでは生育しないが、
サブロー・デキストロース寒天培地では弱い発育
を認める。硝酸塩を還元し脱窒反応陰性、MRテ
スト陽性、VPテスト陰性である。インドールは
５日目で検出され、硫化水素を生成しない。デン
プンを分解せずクエン酸を利用しない。ウレアー
ゼ陰性、オキシダーゼ陽性、カタラーゼ陽性であ
る。PH5.0〜8.2の範囲で生育し、最適PHはPH6.0〜
7.8である。又15〜40℃の範囲で生育し、最適温
度は37℃前後である。嫌気性培養でも生育する。
ブドウ糖を酸化的および発酵的に分解し、酸を生
成する。Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−
フラクトース、Ｄ−マンニツト、麦芽糖、トレハ
ロース、グリセリンから、それぞれ酸を生成する
が、ガスを生成しない。グルコン酸を酸化せず、
ジヒドロキシアセトンを生成しない。塩化ナトリ
ウム濃度が５％以上になると生育しない。馬尿酸
およびフエニルアラニンを分解せず、チロシンを
溶解する。以上の性状をもとに、BMG162−aF2株を
Bergey′s Manual of Determinative
Bacteriology 8th edition（R.E.Buchanan＆N.E.
Gibbons、The Williams＆Wilkins Company、
Baltimore.1974）で検索すると、542頁Bacillus
属のなかのカタラーゼ陽性でジヒドロキシアセト
ンを生成しない種、すなわちBacillus firmus、
B.laterosporus、B.brevis、B.sphaericusが、近
縁の種として挙げられる。BMG162−aF2株の性
状を上記４種の性状と比較すると、次表のように
なる。

【表】

【表】第１表から明らかなように、BMG162−aF2株
はB.laterosporusに最もよく類似している。両者
の相異点はサブロー・デキストロース寒天培地で
の生育状態がその記載とわずかに異なるのみであ
る。本願発明者等は農林省家蓄衛生試験場東量三博
士からB.laterosporusの分与をうけ、種々比較検
討した。その結果この種の大きな特徴とされる芽
胞側面部のcanoe−shaped body（カヌーの形に
染色される部分Parasporal body）を両者にに証
明できた。又、サブロー・デキストロース寒天培
地での発育も一致した成績を示した。よつてBMG162−aF2株をバチルス・ラテロス
ポルス（Bacillus laterosporus）BMG162−aF2
と同定した。なお、BMG162−aF2株を工業技術院微生物工
業技術研究所に、昭和54年10月12日保管委託申請
し、微生物受託番号は第5230号である。本発明において用いることのできる菌株は上記
菌株、その変異株をはじめ、バチルス属に属する
BMG162−aF2生産菌のすべてが使用できる。これらの菌株を用いてBMG162−aF2を製造す
る方法を具体的に説明する。バチルス属に属するBMG162−aF2生産菌株を
栄養源含有培地に接種して好気的に発育させるこ
とによつてBMG162−aF2を含む培養物が得られ
る。栄養源としては細菌の栄養源として使用しう
るものが使用される。例えば市販されているペプ
トン、肉エキス、コーン・スチープ・リカー、綿
実粉、落花生粉、大豆粉、酵母エキス、NZ−ア
ミン、カゼインの水解物、硝酸ソーダ、硝酸アン
モニウム、硫酸アンモニウムなどの窒素源および
市販されているグリセリン、蔗糖、澱粉、グルコ
ース、マルトース、糖蜜などの炭化水素、あるい
は脂肪などの炭素源および食塩、燐酸塩、炭酸カ
ルシウム、硫酸マグネシウムなどの無機塩を使用
できる。その他、必要に応じて微量の金属塩その
他を添加することもできる。これらのものは生産
菌が利用し、BMG162−aF2の生産に役立つもの
であればよく、公知の細菌の培養材料はすべて用
いることができる。BMG162−aF2の大量生産に
は液体培養が好ましく、培養温度は生産菌が発育
し、BMG162−aF2を生産する範囲で適用でき、
通常15〜40℃、好ましくは20〜40℃、殊に好まし
いのは20〜35℃である。培地のPHは通常5.0〜
8.2、好ましくは6.0〜7.8である。培養は普通
BMG162−aF2が充分蓄積するまで続けられる。
例えば、グリセリン2.0％、デキストリン2.0％、
ペプトン1.0％、酵母エキス0.3％、硫酸アンモニ
ウム0.2％、炭酸カルシウム0.2％からなる液体培
地（最適には約PH7.4）に寒天斜面培地で培養し
たBMG162−aF2株を接種し、27℃で好気的に回
転振盪培養を行なうと培養１日目から目的とする
抗生物質の蓄積が認められた。BMG162−aF2の
定量法は、試験菌としてバチルス・サブチリス
PCI219株を使用する通常の円筒平板法によつて
行なう。バチルス属に層するBMG162−aF2生産
菌株の培養にあたつては、上記の振盪培養のほか
に、一般に微生物の通気撹拌培養に用いられるジ
ヤー培養器、または大型のステンレススチール製
タンク培養槽なども大量生産のために使用され
る。大量培養の場合には、上記液体培地中で20〜
40時間振盪培養した培養液を種培養液とし、これ
を0.5〜2.0％（容量）接種するのが好ましい。
BMG162−aF2の採取は、通常BMG162−aF2生
産菌の培養液より、カルボン酸を活性基とする
弱陽イオン交換体を用いる塔クロマトグラフイー
によつて行なわれる。弱陽イオン交換体として
は、アンバーライトICR−50、CG−50（ロ
ーム・アンド・ハース社製）、レワチツトCNP
（バイエル社製）、CM−セフアデツクス（フア
ルマシア社製）などのＨ型、Na型、NH₄型など
およびそれらの混合型が用いられる。吸着された
BMG162−aF2の溶出は、塩酸水、酢酸水等の酸
または食塩等の塩類を含む水で展開することによ
り行なわれる。上述の抽出法、分離法または精製
法に加え、ゲル過法、限外過法を適宜組合わ
せあるいは繰返すことによつて純粋に採取するこ
とができる。 BMG162−aF2は遊離形では不安定なため塩酸
塩として採取され、また吸湿性のため水和物を形
成している。このBMG162−aF2の塩酸塩の水和
物の理化学的性状は次の通りである。白色粉末で著しい吸湿性のため融点を測定する
ことはできない。比施光度は〔α〕²⁴ _D＝−11゜（Ｃ
＝1.0、水）を示す。BMG162−aF2塩酸塩の水
和物での元素分析は実験値：C37.55％、H7.89
％、N17.52％、Cl18.61％、理論値
（C₁₇H₃₇N₇O₄・3HCl・2H₂O）：C37.20％、H8.08
％、N17.86％、Cl19.38％である。（水分含量は測
定条件により変化する。）プロトン核磁気共鳴ス
ペクトルは第１図に示すとおりである。 ¹³C核磁
気共鳴スペクトルは第２図に示すとおりである。
¹⁵N核磁気共鳴スペクトルは第３図に示すとお
りであり、窒素が７個観察される（グアニジル基
の３個の窒素は２本のシグナルとして観察され
る）。紫外線吸収曲線は末端吸収のみを示す。赤
外部吸収曲線は第４図に示すとおりである。
BMG162−aF2の塩酸塩を１規定酢酸中で105℃、
1.5時間の熱分解をすることにより、グリオキサ
リルスペルミジンおよび３−ヒドロキシ−７−グ
アニジノヘプタン酸アミドが得られる。これらか
ら構造研究の結果、BMG162−aF2の構造が前記
のとおりであることが決定された。BMG162−
aF2の塩酸塩は水およびメタノールに易溶である
が、エタノール、酢酸エチル、クロロホルム、ベ
ンゼン等には難溶あるいは不溶である。ニンヒド
リン反応、坂口反応およびライドン−スミス反応
陽性である。BMG162−aF2の塩酸塩はアビセル
の薄層クロマトグラフイーでブタノール・ピリジ
ン・酢酸・水（６：４：１：３）の混液で展開し
てR_f＝0.14、ブタノール・エタノール・水（４：
１：２）の混液で展開してR_f＝0.20にそれぞれ単
一スポツトを示した。蟻酸・酢酸・水の混液
（１：３：36）を用いた高圧紙電気泳動
（3500V、15分）でアラニンの移動度を1.0とした
時、BMG162−aF2の塩酸塩の移動度は1.70〜
1.74を示した。次に、このBMG162−aF2の生物学的性質につ
いて述べる。 BMG162−aF2の塩酸塩は以下に示すようにグ
ラム陽性、陰性細菌に弱い発育阻止作用を示すと
ともに、マウス白血病Ｌ−1210、マウス白血病
EL−４、エールリツヒ癌および肉腫180（Ｓ−
180）に対する治療実験で著明な治療効力及び延
命効果を示し、制癌剤として有用なものであるこ
とが明らかである。 (1) BMG162−aF2の抗菌活性 BMG162−aF2は弱い抗菌活性を有し、栄養
寒天培地上での各種細菌に対する発育阻止濃度
は第２表に示すとおりである。試料は
BMG162−aF2の塩酸塩を用い、栄養寒天培地
を使用し、寒天平板稀釈法により行つた。第２
表より明らかなようにBMG162−aF2はグラム
陽性菌およびグラム陰性菌の発育を弱く、阻止
する。

【表】

【表】 (注) 使用培地：普通寒天培地
温度37℃

【表】 (注) 使用培地：普通寒天培地
温度27℃

【表】

【表】 (注) 使用培地：普通寒天培地
温度27℃
(2) BMG162−aF2の制癌活性 (イ) マウス白血病Ｌ−1210に対する効果（ip−
ip系）１群８匹の雌性CDFI系マウス（６〜７週
令）に10⁵細胞／0.25ml／マウスのＬ−1210
白血病細胞を腹腔内に接種し、24時間後より
生理的食塩水に溶解したBMG162−aF2塩酸
塩を１日１回９日間連続で腹腔内に投与し、
致死率および延命率を求めた。その結果は第
３表に示す。第３表より明らかなように
BMG162−aF2はマウス白血病Ｌ−1210に対
して治療効果並びに延命効果を示した。

【表】＊毒性がでたもの
対照群の平均生存日数：8.2日
(ロ) マウス白血病Ｌ−1210に対する効果（scip
系）１群５匹の雌性CDFI系マウス（６〜７週
令）に10⁵細胞／0.125ml／マウスのＬ−1210
白血病細胞を腹側皮下に接種し、24時間後よ
り生理的食塩水に溶解したBMG162−aF2塩
酸塩を１日１回、９日間連続で腹腔内に投与
し、致死率および延命率を求めた。その結果
は第４表に示した。第４表より明らかなようにBMG162−aF2
は(イ)の実験同様に強い治療効果及び延命効果
を示した。

【表】 (ハ) マウス白血病EL−４に対する効果１群５匹の雌性C₅₇BL／６マウス（10週
令）に10⁵細胞／0.25ml／マウスのEL−４白
血病細胞を腹腔内に接種し、24時間後より生
理的食塩水に溶解したBMG162−aF2塩酸塩
を１日１回９日間連続で腹腔内に投与し延命
率を求めた。その結果を第５表に示す。第５
表より明らかなように、BMG162−aF2は
EL−４に対しても延命効果を示した。

【表】 (ニ) エールリツヒ腹水癌に対する効果１群４匹の雌性ICRマウス（６週令）に２
×10⁶細胞／0.25ml／マウスのエールリツヒ
癌細胞を腹腔内に接種し、24時間後より生理
的食塩水に溶解したBMG162−aF2塩酸塩を
１日１回、９日間連続で腹腔内に投与し、延
命率を調べた。その結果は第６表に示す。
BMG162−aF2はエールリツヒ腹水癌に対し
ても制癌効果を示した。

【表】 (ホ) 肉腫180に対する効果１群４匹の雌性ICRマウス（６週令）に２
×10⁶細胞／0.25ml／マウスの肉腫180細胞を
腹腔内に接種し、24時間後より生理的食塩水
に溶解したBMG162−aF2塩酸塩を１日１
回、９日連続で腹腔内に投与し延命率を求め
た。その結果は第７表に示す。第７表より明らかなようにBMG162−aF2
は肉腫180に対しても制癌効果を示した。

【表】＊毒性がでたもの
対照群の平均生存日数：13.8日
(3) BMG162−aF2の急性毒性 BMG162−aF2の塩酸塩を雌性ICRマウス
（４週令）に静脈投与した時、LD₅₀は80mg／Kg
以上である。以上のとおり、BMG162−aF2の理化学的性状
ならびに生物学的性質について詳述したが、
BMG162−aF2は構成成分としてスペルミジンを
含有する点で、ストレプトミセス・バーチシラス
の生産するブレオマイシン、ノカルデイアの生産
するLL−BM123β、γ₁及びγ₂、バチルス・ブレ
ビスの生産するエデインおよびバチルス属の生産
するラテロスポラミンに類似である、が
BMG162−aF2の構造は既に示したとおりで、構
造の決定されているブレオマイシン、LL−
BM123β、γ₁及びγ₂ならびにエデインとは明らか
に異なる。さらに、ラテロスポラミン（The
Journal of Antibiotics29、390〜393（1976））と
は赤外吸収スペクトル曲線、アルコールに対する
溶解性および抗菌スペクトルにおいて区別され、
さらにBMG162−aF2の分解物には、ラテロスポ
ラミンの構成成分であるC₆H₁₃N₃Oより成る坂口
反応陽性物質が含まれない点で区別され、
BMG162−aF2は新規抗生物質であることが確認
された。以上から明らかなようにBMG162−aF2は人を
含む温血動物の白血病をはじめとし、肉腫その他
の癌に対して特異な抗癌作用を示し、かつ毒性が
比較的弱いことから、優れた制癌剤として使用さ
れうるものである。 BMG162−aF2を制癌剤として用いる場合の製
剤化および投与方法は従来公知の種々の方法が適
用できる。すなわち、投与方法としては注射、経
口、直腸投与などが可能である。製剤形態として
は注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、座薬などの形
態がとり得る。製剤化の際にはBMG162−aF2に悪影響を与え
ない限り、医薬用に用いられる種々の補助剤、す
なわち、担体やその他の助剤、例えば安定剤、防
腐剤、無痛化剤、乳化剤等が必要に応じて使用さ
れうる。注射剤の製剤化を具体的に説明すると、
BMG162−aF2塩酸塩とマンニトールを蒸留水に
溶解し、注射用小びんに分注するか、またはその
まま凍結乾燥し、投与に際して生理的食塩水また
は蒸留水で溶解して注射液とすることができる。製剤において、BMG162−aF2の含量は製剤形
態等により広範囲に変えることが可能であり、一
般にはBMG162−aF2を0.01〜100％（重量）、好
ましくは0.1〜70％（重量）含有し、残りは通常
医薬用に使用される担体その他の補助剤からな
る。 BMG162−aF2の投与量は症状等により異なる
が、成人１人１日当り0.01〜800mg、好ましくは
0.1〜600mgである。連投を必要とする場合には１
日当りの使用量をおさえることが好ましい。 BMG162−aF2の製剤化には、通常、塩酸塩な
どの医薬用に許容される塩の形で用いられる。次に本発明を実施例により説明するが本発明は
これらに限定されるものではない。 BMG162−aF2の製造例。実施例１グリセリン2.0％、デキストリン2.0％、ソイペ
プトン（デイフコ社製バクトソイトン）1.0％、
酵母エキス（大五栄養化学(株)製粉末酵母エキス）
0.3％、硫酸アンモニウム0.2％、炭酸カルシウム
0.2％からなる液体培地（PH7.4）５を125mlず
つ分注した坂口フラスコに、あらかじめ作つてお
いた種培養液（寒天斜面培地で培養したバチルス
BMG162−aF2株（微工研菌寄第5230号）より同
培地で２日間振盪培養）を1.0％接種し、28℃で
５日間培養した。過により得た培養液4900mlを
アンバーライトIRC−50（ローム・アンド・ハ
ース社製）のNa型とＨ型を７：３の比で混合し
た塔（500ml、径5.2cm）にかけ有効成分を吸着さ
せる。塔を水洗後、0.1規定塩酸2000mlで有効成
分を溶出させ、活性区分を10規定水酸化ナトリウ
ムでPH６まで中和する。中和液を水にて４倍希釈
し、あらかじめ水で膨潤させたCM−セフアデツ
クスＣ−25（フアルマシア社製）の塔（400ml、
径4.3cm）にかけ有効成分を吸着させる。0.3モル
の食塩水で有効成分を溶出させる。活性区分を減
圧下で濃縮乾固し、５mlのメタノールで抽出し、
過により食塩の結晶を除き、あらかじめメタノ
ールで膨潤させたセフアデツクスLH−20（フ
アルマシア社製）の塔（445ml、径2.6cm）にか
け、メタノールで展開し活性区分を減圧乾固して
460mgの純粋なBMG162−aF2塩酸塩を白色粉末
として得た。実施例２グリセリン2.0％、デキストリン2.0％、ソイペ
プトン（デイフコ社製バクトソイトン）1.0％、
酵母エキス（大五栄養化学(株)製粉末酵母エキス）
0.3％、硫酸アンモニウム0.2％、炭酸カルシウム
0.2％、消泡用シリコンオイル0.03％を含む培養
液10を30容ステンレススチール製培養槽にし
こみ、120℃20分殺菌し、冷却後、あらかじめ坂
口コルベンで48時間前培養したBMG162−aF2株
の種125mlを無菌的に培養槽に植菌した。28℃に
て通気撹拌培養し（通気量15／分、撹拌数
350rpmで培養開始し、16時間後より通気量10
／分、撹拌数350rpmとする）40時間後に、
過により固形分を除去し、液9500mlを実施例１
と同様にアンバーライトIRC−50、CM−セフ
アデツクスＣ−25の塔クロマトグラフイー
（400ml、径4.3cm）を行なつた。0.3モル食塩水４
で展開し、290滴を１分画として分画し活性区
分（分画14〜63）および（分画64〜154）を
得た。280nｍの吸収物質を含まない1660mlの活
性区分に白鷺活性炭33ｇを加えて吸着させ500
mlの水で洗滌後、500mlの0.05規定塩酸入り80％
メタノール水でBMG162−aF2を溶出させ、アン
バーライトIR−45（ローム・アンド・ハース
社製）のOH型で中和し、減圧下で濃縮乾固し、
305mgのBMG162−aF2塩酸塩を得た。280nｍの
吸収物質と重なつた活性区分は濃縮乾固しメタ
ノール抽出を行ない、脱イオン水１に溶解し、
CM−セフアデツクスＣ−25（400ml、径4.3cm）
の再クロマトグラフイーを０〜１モルの食塩の濃
度勾配溶出（４）を行ない活性区分を得、濃縮
乾固、メタノール抽出を行ない、セフアデツクス
LH−20の塔（780ml、径2.8cm）にかけメタノ
ールで展開することにより脱塩精製し、純粋な
BMG162−aF2塩酸塩670mgを得た。合計975mgの
BMG162−aF2塩酸塩が得られた。実施例３実施例２で得られたBMG162−aF2塩酸塩150
mgをメタノール１mlに溶解し、ピクリン酸の飽和
メタノール溶液１mlと混和し加熱沸とうした。濃
縮後、ベンゼン、エタノールで洗い、ピクリン酸
を除き、水−エタノール混液よりBMG162−aF2
のピクレートの結晶62mgを得た。 BMG162−aF2の製剤例。実施例４注射剤実施例１で得られたBMG162−aF2塩酸塩30重
量部に対し精製水970部を加え溶解後ミリポアフ
イルターGSタイプを用いて除菌過する。この
液１ｇを10mlのバイアル瓶にとり凍結乾燥し、
１バイアルにBMG162−aF2塩酸塩30mgを含む凍
結乾燥注射剤を得た。実施例５顆粒剤実施例１で得られたBMG162−aF2塩酸塩50重
量部、乳糖600部、結晶セルロース330部及びヒド
ロキシプロピルセルロース20部をよく混和し、ロ
ール型圧縮機（ローラーコンパクター）を用い
て圧縮し、破砕して16メツシユと60メツシユの間
に入るよう篩過し、顆粒とした。実施例６錠剤実施例１で得られたBMG162−aF2塩酸塩30重
量部、結晶乳糖120部、結晶セルロース147部及び
ステアリン酸マグネシウム３部をＶ型混合機で打
錠し、１錠300mgの錠剤を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図はBMG162−aF2塩酸塩の重ジメチルス
ルホキシド溶液中でトリメチルシランを内部基準
として測定したプロトン核磁気共鳴スペクトル図
である。第２図はBMG162−aF2塩酸塩の重水溶
液中でトリメチルシランを外部基準として測定し
た ¹³C核磁気共鳴スペクトル図である。第３図は
BMG162−aF2塩酸塩の重水溶液中でNH¹⁵ ₄NO₃
を外部基準として測定した ¹⁵N核磁気共鳴スペ
クトル図である。第４図はBMG162−aF2塩酸塩
の赤外部吸収曲線図であり、臭化カリウム錠とし
て測定したものである。

Claims

【特許請求の範囲】１式で表わされる新規抗生物質BMG162−aF2または
その医薬的に許容される塩。２バチルス属に属するBMG162−aF2生産菌を
培養しBMG162−aF2を蓄積せしめ、この培養物
から式で示される新規抗生物質BMG162−aF2を採取す
ることを特徴とする新規抗生物質BMG162−aF2
の製造法。３式で表わされる新規抗生物質またはその医薬的に許
容される塩を有効成分として含有することを特徴
とする制癌剤。