JPS63148992A - 含フツ素ケイ皮酸から含フツ素フエニルアラニン誘導体の製造方法 - Google Patents
含フツ素ケイ皮酸から含フツ素フエニルアラニン誘導体の製造方法Info
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- JPS63148992A JPS63148992A JP29669786A JP29669786A JPS63148992A JP S63148992 A JPS63148992 A JP S63148992A JP 29669786 A JP29669786 A JP 29669786A JP 29669786 A JP29669786 A JP 29669786A JP S63148992 A JPS63148992 A JP S63148992A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明含フッ素ケイ皮酸から含フッ素フェニルアラニン
誘導体を酵素を用い！！通ずる方法に関するものである
。
誘導体を酵素を用い！！通ずる方法に関するものである
。
フルオロフェニルアラニンは公知であり、化学的合成法
で製造しうる化合物である。フルオロフェニルアラニン
は医薬、農薬、抗菌剤、試薬、それらの中間体として有
用であり、たとえばフェニルアラニンのアミノ酸アナロ
グ（類似体）として生化学分野の試薬として有用である
ことや微生物変異株選択用の薬剤として使用しうろこと
の他、上皮子宮ガン細胞である１ｌｅｌａ細胞において
細胞分裂の有名、形成を抑制しガン細胞の増殖を抑える
作用（Ｄ、Ｗ、ｗｈｅｃＬｌｅｙ、 Ｍ。
で製造しうる化合物である。フルオロフェニルアラニン
は医薬、農薬、抗菌剤、試薬、それらの中間体として有
用であり、たとえばフェニルアラニンのアミノ酸アナロ
グ（類似体）として生化学分野の試薬として有用である
ことや微生物変異株選択用の薬剤として使用しうろこと
の他、上皮子宮ガン細胞である１ｌｅｌａ細胞において
細胞分裂の有名、形成を抑制しガン細胞の増殖を抑える
作用（Ｄ、Ｗ、ｗｈｅｃＬｌｅｙ、 Ｍ。
Ｓ、Ｉｎｇｌｌｓ ： Ｅｘｐ、 Ｃｅ１ｌ Ｒｅ５ａ
ｒｃｌ＋ １０７．１９１−１９９（＋９７７）などが
報告されている。またフルオロメチルアラニンも抗生物
質、ベチブド、農薬等の中間体として有用である。
ｒｃｌ＋ １０７．１９１−１９９（＋９７７）などが
報告されている。またフルオロメチルアラニンも抗生物
質、ベチブド、農薬等の中間体として有用である。
化学合成法によるフルオロフェニルアラニンの合成法と
して例＾ば、下記のようにフルオロベンズアルデヒドか
らベンゾイルアミノフルオロケイ皮酸を経て合成する方
法が知られている（Ｂｅｌｌｓｔｅｉｎｓ、 １４．１
２６８ （１９７３）参照）。
して例＾ば、下記のようにフルオロベンズアルデヒドか
らベンゾイルアミノフルオロケイ皮酸を経て合成する方
法が知られている（Ｂｅｌｌｓｔｅｉｎｓ、 １４．１
２６８ （１９７３）参照）。
しかし、化学合成で得られるフルオロフェニルアラニン
はラセミ体であって、より有用なＬ体のみを得るにはラ
セミ分割を必要とし、しかもこのラセミ分別は通常容易
ではない。
はラセミ体であって、より有用なＬ体のみを得るにはラ
セミ分割を必要とし、しかもこのラセミ分別は通常容易
ではない。
酵素合成法によるフルオロフェニルアラニンの合成法と
して、特許公開昭５９・１５４９９６ （旭硝子）があ
る、これは、含フッ素フェニルピルビン酸を基質として
酵素（トランスアミナーゼ）を用いて、光学活性なＬ体
の含フッ素フェニルアラニンを製造するものである。
して、特許公開昭５９・１５４９９６ （旭硝子）があ
る、これは、含フッ素フェニルピルビン酸を基質として
酵素（トランスアミナーゼ）を用いて、光学活性なＬ体
の含フッ素フェニルアラニンを製造するものである。
フェニルアラニンの製造方法に関しては、醗酵法をはじ
めとして酵素法としてトランスアミナーゼを用いてフェ
ニルピルビン酸からｌ’Ｆる方法とケイ皮酸からフェニ
ルアラニンアンモニアリアーゼ（以下ＰＡＬと略記）を
用いて作る方法が周知のことであり、本発明に関連する
ケイ皮酸からフェニルアラニンを酵素的に作る特許とし
ては英国特許１．４６８９，４６８ （＋９７７）があ
る。
めとして酵素法としてトランスアミナーゼを用いてフェ
ニルピルビン酸からｌ’Ｆる方法とケイ皮酸からフェニ
ルアラニンアンモニアリアーゼ（以下ＰＡＬと略記）を
用いて作る方法が周知のことであり、本発明に関連する
ケイ皮酸からフェニルアラニンを酵素的に作る特許とし
ては英国特許１．４６８９，４６８ （＋９７７）があ
る。
これはアンモニウムイオンの存在下Ｐ Ａ Ｌ Ｅｌ？
素反応による トランスケイ皮酸からし一フェニルアラ
ニンを得る方法である。ＰＡＬはＰＡＬを持つ微生物を
栄養培地で培養することにより得られるもので、ＰＡＬ
活性を有する微生物菌株は周知のことであり、これらに
関する文献として、にｏｉｃｈｌ Ｏｇａｔａ、にａｚ
ｕｋｏ Ｕｃｈｉｙａｍａ、 ｌ１ｉｄｅａｋｉ Ｙａ
ｍａｄａ ； Ａｉｒ、 Ｄｉｏｌ、 ＣＩ＋ｅ＋ｗ
、 Ｖｏｌ ３１ （２）２００−２０６ （＋９６７
）がある。
素反応による トランスケイ皮酸からし一フェニルアラ
ニンを得る方法である。ＰＡＬはＰＡＬを持つ微生物を
栄養培地で培養することにより得られるもので、ＰＡＬ
活性を有する微生物菌株は周知のことであり、これらに
関する文献として、にｏｉｃｈｌ Ｏｇａｔａ、にａｚ
ｕｋｏ Ｕｃｈｉｙａｍａ、 ｌ１ｉｄｅａｋｉ Ｙａ
ｍａｄａ ； Ａｉｒ、 Ｄｉｏｌ、 ＣＩ＋ｅ＋ｗ
、 Ｖｏｌ ３１ （２）２００−２０６ （＋９６７
）がある。
この中では、ケイ皮酸からフェニルアラニンを生成する
ＰＡＬ活性を有する酵母とじてＲｂｏｔｌｏＬｏｒｕｌ
ａ ｒｕｂｕｒａ、 Ｒ１＋ｏｃｌｏｔｏｒｕｌａ ｇ
ｌｕｌ １ｎｉｓ。
ＰＡＬ活性を有する酵母とじてＲｂｏｔｌｏＬｏｒｕｌ
ａ ｒｕｂｕｒａ、 Ｒ１＋ｏｃｌｏｔｏｒｕｌａ ｇ
ｌｕｌ １ｎｉｓ。
Ｒ１＋ｏｔｌｏｔｏｌｕｌａ ｆｌａｖａ、 Ｒｂｏｄ
ｏＬｏｒｕｌａ Ｌｅｘｅ旧ｓ。
ｏＬｏｒｕｌａ Ｌｅｘｅ旧ｓ。
ＲＩ＋ｏｃｌｏＬｏｒｎｌａ ｗａｒｉｎａ、Ｒ１＋
ｏｃｌｏｔｏｒｕｌａ ｐａｌｌｉｄａ。
ｏｃｌｏｔｏｒｕｌａ ｐａｌｌｉｄａ。
ＲｂｏｃｌｏＬｏｒｕｌａ １ａｃＬｏｓａが記載され
ている。
ている。
また、に、に、にａｌｇｈａＬｇｉ、 Ｐ、 Ｖ 、
５ａｂｂａ Ｒａ。
５ａｂｂａ Ｒａ。
： １ｌｉｏｃｌ＋ｅｍ、Ｊ、Ｉ４９．６５−７２ （
１９７５）で、はカビである Ｒｂ１ｚｏｃＬｏｎｉａ
５ｏｌａｎｉ からＰＡＬを精製して分子量７万と９
万の分子の２つのペアーで出きている分子量３３万の酵
素であることを記載している。
１９７５）で、はカビである Ｒｂ１ｚｏｃＬｏｎｉａ
５ｏｌａｎｉ からＰＡＬを精製して分子量７万と９
万の分子の２つのペアーで出きている分子量３３万の酵
素であることを記載している。
Ｓ、Ｙａｍａｄａ、に、Ｎａｄｅ、 Ｎ、 １ｚｕｏ、
Ｋ、Ｎａｋａｍｉｃｈｉ 、 ｌ 。
Ｋ、Ｎａｋａｍｉｃｈｉ 、 ｌ 。
Ｃ旧ｂａｔａ ： Ａ１＋ｐｌｉｅｄ ａ＋＋ｄ Ｅｎ
ｖｉｒｏｍｃｎｔａ１旧ｃｒｏｌ＋１ｏ１３ｙ、 ４２
（５） ？７３−７７８ （１９［Ｉ１）ではし−イ
ソロイシンを１ａ地中に添加するとＰＡＬ活性が安定に
促たれることが記載されている。特許に関しては、特開
昭５３−９６３８８ 、特開昭５８−２６１７９（田辺
製薬）が、スポロポロマイセス属に属する微生物で出願
している。
ｖｉｒｏｍｃｎｔａ１旧ｃｒｏｌ＋１ｏ１３ｙ、 ４２
（５） ？７３−７７８ （１９［Ｉ１）ではし−イ
ソロイシンを１ａ地中に添加するとＰＡＬ活性が安定に
促たれることが記載されている。特許に関しては、特開
昭５３−９６３８８ 、特開昭５８−２６１７９（田辺
製薬）が、スポロポロマイセス属に属する微生物で出願
している。
特開昭６０−１３３８９３、特開昭６０−１３３８９２
（ジエネックス コーポレーション）では嫌気条件
下で反応をかけてＰＡＬ活性の失活を防ぐ方法や生成物
であるフェニルアラニンの回収方法の改良法が示されて
いる。
（ジエネックス コーポレーション）では嫌気条件
下で反応をかけてＰＡＬ活性の失活を防ぐ方法や生成物
であるフェニルアラニンの回収方法の改良法が示されて
いる。
しかし、上記の特許はＬ−フェニルアラニンの製造に関
するものであり含フッ素はフェニルアラニンの合成に関
するものではない。
するものであり含フッ素はフェニルアラニンの合成に関
するものではない。
本発明は従来知られていなっかた種々の含フッ素トラン
スケイ皮酸から光学活性な含フッ素フェニルアラニンを
ＰＡＬ活性を有する微生物を用いて、！！造する方法を
新規に提供するものである。
スケイ皮酸から光学活性な含フッ素フェニルアラニンを
ＰＡＬ活性を有する微生物を用いて、！！造する方法を
新規に提供するものである。
本発明は下！！ａ ［Ｉ ］式で表わされる種々の含フ
ッ素トランス−ケイ皮１ＩＪｔ導体とアンモニウムイオ
ンど含フッ素フェニルアラニン生成条件下で、フェニル
アラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）を含む微生物と
共に反応させ、次いで生成された反応ｔαから含フッ素
フェニルアラニン誘導体下記［８１式を回収することを
特徴とする光学活性な含フッ素フェニルアラニン誘導体
の製造方法を提供するものである。
ッ素トランス−ケイ皮１ＩＪｔ導体とアンモニウムイオ
ンど含フッ素フェニルアラニン生成条件下で、フェニル
アラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）を含む微生物と
共に反応させ、次いで生成された反応ｔαから含フッ素
フェニルアラニン誘導体下記［８１式を回収することを
特徴とする光学活性な含フッ素フェニルアラニン誘導体
の製造方法を提供するものである。
Ｒｆ：Ｆ、Ｃ１１ｚＦ、ＣＩＩＦｚ、ＣＦｓｆ
フルオロトランスケイ皮酸などの上記式［Ｉ］で表わさ
れる含フッ素化合物が、対応するフッ素原子を含まない
化合物と同等の生化学的作用を受けるか否かは従来検討
されたことはなかった。
れる含フッ素化合物が、対応するフッ素原子を含まない
化合物と同等の生化学的作用を受けるか否かは従来検討
されたことはなかった。
本発明者はフッ素原子の共有結合半径の大き着目し、含
フッ素化合物を基質とするＰＡＬによる、酵素反応を鋭
意検討の結果、上記式［Ｉ］で表わされる含フッ素化合
物が対応するフッ素原子を含まない化合物とほぼ同等の
生化学的作用を受けることを見出し、これを利用して上
記式［ＩＩ］で表わされる光学活性を有する含フッ素フ
ェニルアラニン誘導体を製造しうろことを確認した。
フッ素化合物を基質とするＰＡＬによる、酵素反応を鋭
意検討の結果、上記式［Ｉ］で表わされる含フッ素化合
物が対応するフッ素原子を含まない化合物とほぼ同等の
生化学的作用を受けることを見出し、これを利用して上
記式［ＩＩ］で表わされる光学活性を有する含フッ素フ
ェニルアラニン誘導体を製造しうろことを確認した。
式［Ｉ１］で表わされる化合物は式［Ｉ］の対応化合物
であり、従述する実施＋ｆｆｌ １に示すように、フッ
素原子がバラ位に入った化合物やＣＦ３基がベンゼン核
に入った化合物は反応収率が低く、特にオル゛トおよび
メタ位にフッ素原子の入ったフルオロフェニルアラニン
の製造に好ましい。
であり、従述する実施＋ｆｆｌ １に示すように、フッ
素原子がバラ位に入った化合物やＣＦ３基がベンゼン核
に入った化合物は反応収率が低く、特にオル゛トおよび
メタ位にフッ素原子の入ったフルオロフェニルアラニン
の製造に好ましい。
この式［■］で表わされる化合物は通常り体である。
式［Ｉ］で表わされる含フッ素化合物は化学合成法で製
造しうる。
造しうる。
本発明において沈用しうる微生物としてはフェニルアラ
ニンアンモニアリアーゼ（Ｐ Ａ Ｌ ）活性を有する
ものであればよく、中でもＰＡＬ活性の高いものとして
、Ｒｈｏｄｏｔｏｌｕｌａ ｆｌａｖａ、 ＲＩ＋ｏｄ
ｏｔｏｒｕｌａ ｒｕｂｒａ、 ＲｈｏｄｏＬｏｒｕｌ
ａ ｇｌｕＬｉｎｉｓ、 ＲｂｏｔｌｏＬｏｒｕｌａ
Ｌｅｘｅｎｉｓ、 Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｉａ ｍａｒｉ
ｎｃ、 ＲＩ＋。
ニンアンモニアリアーゼ（Ｐ Ａ Ｌ ）活性を有する
ものであればよく、中でもＰＡＬ活性の高いものとして
、Ｒｈｏｄｏｔｏｌｕｌａ ｆｌａｖａ、 ＲＩ＋ｏｄ
ｏｔｏｒｕｌａ ｒｕｂｒａ、 ＲｈｏｄｏＬｏｒｕｌ
ａ ｇｌｕＬｉｎｉｓ、 ＲｂｏｔｌｏＬｏｒｕｌａ
Ｌｅｘｅｎｉｓ、 Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｉａ ｍａｒｉ
ｎｃ、 ＲＩ＋。
ｄｏＬｏｒｕｌａ ｐａｌｌｉｄａ、 Ｒｈｏｄｏ
Ｌｏｒｕｌａ Ｉａｃｔｏｓａ、 Ｒｂ１ｚｏｃＬ
ｏｎｉｃ ５ｏｌａｎｉ等があり、特に実Ａｉ！１６ｄ
ｒに使用したＲＩ＋ｏｄｏｔｏｌすｌａ属の酵母が好ま
しい。
Ｌｏｒｕｌａ Ｉａｃｔｏｓａ、 Ｒｂ１ｚｏｃＬ
ｏｎｉｃ ５ｏｌａｎｉ等があり、特に実Ａｉ！１６ｄ
ｒに使用したＲＩ＋ｏｄｏｔｏｌすｌａ属の酵母が好ま
しい。
これらの微生物に含まれるＰＡＬは誘導酵素であり、そ
の誘導条件はＰＡＬの基質であるフェニルアラニンを酵
母エキス、ペプチド、塩類からなる培地に添加すること
が必要である。培養温度は２０−３７℃、培地のｐＨは
５−９が適当であり特に５．５−６．５が望ましく、培
養時開は実Ａｉ！例１で示す様に対数増殖中期から後間
にかけての １５−２４時間が望ましい。
の誘導条件はＰＡＬの基質であるフェニルアラニンを酵
母エキス、ペプチド、塩類からなる培地に添加すること
が必要である。培養温度は２０−３７℃、培地のｐＨは
５−９が適当であり特に５．５−６．５が望ましく、培
養時開は実Ａｉ！例１で示す様に対数増殖中期から後間
にかけての １５−２４時間が望ましい。
本発明の実施において、式［■］で表わされる含フ・ン
素フェニルアラニン誘導体の製造に用いる酵素ＰＡＬは
通常の生体条件では、反応がフェニルアラニンの分解側
にＭいている。しかし、基質とともに７ミノ基供与体で
あるアンモニア濃度を基質に対して多量に好ましくは６
Ｍ−９１１用い弱アルカリ性（ｐＨ＝８−１０）にする
とフェニルアラニンの生成条件と同様に式［Ｉ１］て表
わされる含フッ緊フェニルアラニン誘導体の製造が可能
となる。
素フェニルアラニン誘導体の製造に用いる酵素ＰＡＬは
通常の生体条件では、反応がフェニルアラニンの分解側
にＭいている。しかし、基質とともに７ミノ基供与体で
あるアンモニア濃度を基質に対して多量に好ましくは６
Ｍ−９１１用い弱アルカリ性（ｐＨ＝８−１０）にする
とフェニルアラニンの生成条件と同様に式［Ｉ１］て表
わされる含フッ緊フェニルアラニン誘導体の製造が可能
となる。
なお、出発物質である式［！コで表わされる化合物は種
々の化学的合成法で製造しうるものである０例えば置換
トランスケイ皮酸は置換ベンズアルデヒドより合成しう
る。具１４：的には、トリプルオロメチルトランスケイ
皮酸は下記反応式のようにアルゴン零１ＩｉＩ気下で、
ベンゼンを溶媒としてトリエチルホスホノアセテート（
１）に５５％水素ナトリウム（Ｎａｌｌ）を加え、（２
）の型に活性化し、次いで置換ベンズアルデヒドを添加
し、冷却条件下反応させることにより製造することがで
きる。
々の化学的合成法で製造しうるものである０例えば置換
トランスケイ皮酸は置換ベンズアルデヒドより合成しう
る。具１４：的には、トリプルオロメチルトランスケイ
皮酸は下記反応式のようにアルゴン零１ＩｉＩ気下で、
ベンゼンを溶媒としてトリエチルホスホノアセテート（
１）に５５％水素ナトリウム（Ｎａｌｌ）を加え、（２
）の型に活性化し、次いで置換ベンズアルデヒドを添加
し、冷却条件下反応させることにより製造することがで
きる。
Ｒｆ＝Ｆ、ＣＦ３Ｅｔ＝Ｃｚｌｌｓ
参考例
ＰＡＬ活性を有する酵ｒＵ （Ｒ１＋ｏｄｏｓｐｏｒｉ
ｄｉｕｍｔｏｒｕｌｏｉｔｌｅｓ ＩＦＯ０５５９）を
用いてＰＡＬの誘導に関し実験を１テった。
ｄｉｕｍｔｏｒｕｌｏｉｔｌｅｓ ＩＦＯ０５５９）を
用いてＰＡＬの誘導に関し実験を１テった。
使用菌株の培養はＰＡＬ活性誘導培地（酵母エキス １
．０％、ペプトン１．０％、ＮａＣｌ ０．５％。
．０％、ペプトン１．０％、ＮａＣｌ ０．５％。
し−フェニルアラニン０，０５％、 ｐＨ＝６．０）を
用いた。
用いた。
まず、５００１のエルレンマイヤーフラスコに １００
ｇ１ずつ上記培地を分注し、１２＋”ｃ、１ｋｇ／ｃ＋
＊２．１５分間蒸気殺菌したのち、Ｒｂｏｄｏｓｐｏｒ
ｉｄｉｕｍ Ｌｏｌｕｒｏｉｄｅｓ ＩＦＯ０５５９を
一白金耳植菌し、３０℃５０時ｍｉ盪培羨を行倍速後Ｐ
ＡＬ活性を測定した。
ｇ１ずつ上記培地を分注し、１２＋”ｃ、１ｋｇ／ｃ＋
＊２．１５分間蒸気殺菌したのち、Ｒｂｏｄｏｓｐｏｒ
ｉｄｉｕｍ Ｌｏｌｕｒｏｉｄｅｓ ＩＦＯ０５５９を
一白金耳植菌し、３０℃５０時ｍｉ盪培羨を行倍速後Ｐ
ＡＬ活性を測定した。
ＰＡＬ活性の測定法はＳ、Ｙａｏｒａｄａらの方法（Ａ
ｐｐｌ、 Ｅｎｖｉｒｏ、 ＨｉｃｒｏＬ＋Ｉｏｌｏｇ
ｙ、 １２．７７３−７７８゜１９８１）に従フた。菌
体培養ｉα１０−１を取り、生理食塩水で遠心洗浄後２
１の脱塩水に懸濁し、下記に示ずＰＡＬ活性測定用反応
液（Ｌ−フェニルアラニン ２５ｍＮ、 ）リスバッ
ファー ２５ ｍ Ｍ（ｐＨ８，８）塩化セチルピリジ
ニウム０．００５％。
ｐｐｌ、 Ｅｎｖｉｒｏ、 ＨｉｃｒｏＬ＋Ｉｏｌｏｇ
ｙ、 １２．７７３−７７８゜１９８１）に従フた。菌
体培養ｉα１０−１を取り、生理食塩水で遠心洗浄後２
１の脱塩水に懸濁し、下記に示ずＰＡＬ活性測定用反応
液（Ｌ−フェニルアラニン ２５ｍＮ、 ）リスバッ
ファー ２５ ｍ Ｍ（ｐＨ８，８）塩化セチルピリジ
ニウム０．００５％。
薗ｉα０．２５ｍ１．全量５ｍ１） ４．７５ｍ１に菌
液０．２５ｍ１を添加し、３０℃１０分開インキュベー
ションを行い、生成したトランス−ケイ皮酸の爪を吸光
度２７８ ｎ ｍで測定することによりＰＡＬ活性を求
めた。１旧＋１１のＰＡＬ活性は１分間にＩμｍｏｌｅ
のフェニルアラニンをトランス−ケイ皮酸に変換する活
性と定義した。
液０．２５ｍ１を添加し、３０℃１０分開インキュベー
ションを行い、生成したトランス−ケイ皮酸の爪を吸光
度２７８ ｎ ｍで測定することによりＰＡＬ活性を求
めた。１旧＋１１のＰＡＬ活性は１分間にＩμｍｏｌｅ
のフェニルアラニンをトランス−ケイ皮酸に変換する活
性と定義した。
その場合の菌体の増殖とＰＡＬ活性の経時的変化を図１
に示す、ＰＡＬ活性は対数増殖期間中から後期にかけて
活性が高く、増殖静止期になるにつれて低下する。従っ
て以下の実験において用いた菌体は培８２５−３０時間
目の増殖中間の細胞を用いた。
に示す、ＰＡＬ活性は対数増殖期間中から後期にかけて
活性が高く、増殖静止期になるにつれて低下する。従っ
て以下の実験において用いた菌体は培８２５−３０時間
目の増殖中間の細胞を用いた。
実施１りＩｌｌ
参考（クリに記載した培地と使用菌株を用い、１０しの
ジャーファーメンタ−に培Ｉｔ！！７１．を張込み１５
時間、３０℃で培携を行いＰＡＬ活性を有する菌体４５
ｇ（乾燥工員換算）を得た。
ジャーファーメンタ−に培Ｉｔ！！７１．を張込み１５
時間、３０℃で培携を行いＰＡＬ活性を有する菌体４５
ｇ（乾燥工員換算）を得た。
各（１含フッ素トランスーケイ皮酸にス・ｊするＰＡＬ
の反応性を調べるために、基質濃度を５０４ト１とし、
アンモニア水８Ｍ、 ｐＨ＝８．８ （ＩＩｃＩ）菌体
１０ｇ／＋ （乾燥ＩｕｆｆｔｌＪｋ１１Ｆ、） 、反
応容量 ３００ｍ１７３０℃、２０時間反応を行い、反
応終了後、対応する含フッ素フェニルアラニンの生成量
を高速ｉα体クロマトグラフィー（ＨＰ Ｌ Ｃ）で定
量した。
の反応性を調べるために、基質濃度を５０４ト１とし、
アンモニア水８Ｍ、 ｐＨ＝８．８ （ＩＩｃＩ）菌体
１０ｇ／＋ （乾燥ＩｕｆｆｔｌＪｋ１１Ｆ、） 、反
応容量 ３００ｍ１７３０℃、２０時間反応を行い、反
応終了後、対応する含フッ素フェニルアラニンの生成量
を高速ｉα体クロマトグラフィー（ＨＰ Ｌ Ｃ）で定
量した。
ＨＰ ＣＬの測定条件その以下に示す。
カラム： ＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ａ−３１２００５ｆ多劫
Ｎ：メタノール： ［０，１％リン酸 ＋２ｍＭペン
タンスルホン酸ナトリウ ム］ ＝Ｉ：３ カラム温度：６０℃ 流速： ２ ｍｌ／＋ｉｎ 含フッ素フェニルアラニン類の検出はＵＶ２５４ｎｍ。
Ｎ：メタノール： ［０，１％リン酸 ＋２ｍＭペン
タンスルホン酸ナトリウ ム］ ＝Ｉ：３ カラム温度：６０℃ 流速： ２ ｍｌ／＋ｉｎ 含フッ素フェニルアラニン類の検出はＵＶ２５４ｎｍ。
およびオルトフタールアルデヒドと反応後、ケイ光［ε
ｍ＝４５５ｎｍ Ｅｘ＝３６５ｎｍ］で検出した０反応
終了後の結果は図２に示す様に、オルトフルオロフェニ
ルアラニン（ｏ−Ｆ−ＰＩ＋ｅ）メタフルオロフェニル
アラニン（閘−Ｆ−Ｐｈｅ）は収率８０−９０％で生成
した。 パラフルオロフェニルアラニン（ｐ−Ｆ−ＰＩ
＋ｅ）およびトリフルオロメチルフェニルアラニン（ｏ
−ＣＦ３−Ｐｈｅ、 ｐ−ＣＦ３−Ｐｈｅ）の収率はそ
れぞれ １５％、７％であった。
ｍ＝４５５ｎｍ Ｅｘ＝３６５ｎｍ］で検出した０反応
終了後の結果は図２に示す様に、オルトフルオロフェニ
ルアラニン（ｏ−Ｆ−ＰＩ＋ｅ）メタフルオロフェニル
アラニン（閘−Ｆ−Ｐｈｅ）は収率８０−９０％で生成
した。 パラフルオロフェニルアラニン（ｐ−Ｆ−ＰＩ
＋ｅ）およびトリフルオロメチルフェニルアラニン（ｏ
−ＣＦ３−Ｐｈｅ、 ｐ−ＣＦ３−Ｐｈｅ）の収率はそ
れぞれ １５％、７％であった。
実施例２
゛参考例に記載した培地と菌株を用い、１０１．のジャ
ーファーメンタ−２基に各々培地７Ｌを張込み １５時
間３０℃で培養を行いＰＡＬ活性を有する菌体を ｌｌ
０ｇ ’（乾燥ｍ員換算）を得た。オルトフルオロケイ
皮ｒ！１２０ｇにアンモニア水 ５゜ヘト１を加えｐｌ
＋ ９．８に５ＩＩＩ製し、菌体 １１０ｇ （乾燥ｆ
ｆＩｊｌｌｊＨＩ）ヲ添加し全１！ｔ ２．６Ｌとし３
０℃、１６時間反応を行フた。 １６時間目の反応）
α中には２３゜６ｇのｏ−Ｆ−Ｐｈｅが含まれており、
反応収率は８５％であった０反応経過を図３に示す。
ーファーメンタ−２基に各々培地７Ｌを張込み １５時
間３０℃で培養を行いＰＡＬ活性を有する菌体を ｌｌ
０ｇ ’（乾燥ｍ員換算）を得た。オルトフルオロケイ
皮ｒ！１２０ｇにアンモニア水 ５゜ヘト１を加えｐｌ
＋ ９．８に５ＩＩＩ製し、菌体 １１０ｇ （乾燥ｆ
ｆＩｊｌｌｊＨＩ）ヲ添加し全１！ｔ ２．６Ｌとし３
０℃、１６時間反応を行フた。 １６時間目の反応）
α中には２３゜６ｇのｏ−Ｆ−Ｐｈｅが含まれており、
反応収率は８５％であった０反応経過を図３に示す。
上記反応終了後の反応ｉαから遠心分離によりＷ Ｋを
除去し、その上澄み）αからロータリーエバポレーター
でアンモニアを除去し、次いで強酸性カチオン交換樹脂
（アンモニア水平衡）に通じ、水洗を行い、さらに５％
アンモニア水てｏ−Ｆ−Ｐｌ＋ｅを１８出させた。溶出
ｉαからエバポレーターでアンモニアを除去しｔａ１１
８することにより ２１．３３のｏ−Ｆ−Ｐｈｅの結晶
を得た。
除去し、その上澄み）αからロータリーエバポレーター
でアンモニアを除去し、次いで強酸性カチオン交換樹脂
（アンモニア水平衡）に通じ、水洗を行い、さらに５％
アンモニア水てｏ−Ｆ−Ｐｌ＋ｅを１８出させた。溶出
ｉαからエバポレーターでアンモニアを除去しｔａ１１
８することにより ２１．３３のｏ−Ｆ−Ｐｈｅの結晶
を得た。
ｏ−Ｆ−Ｐｌ＋ｅ比施光度は［（！ ］ ２５＝ −１
（ｉ、６’ （ｃ＝０．５゜Ｉ＋ ２０ ）であった。
（ｉ、６’ （ｃ＝０．５゜Ｉ＋ ２０ ）であった。
また、光学純度を調べるため光学分割カー） ム： Ｃ
ＩＩＩＲＡＬＰＡＫ ＷＭ−Ｌ （ダイセル）移動Ｎ
： ０．２５＋ｓ？Ｉ ＣｕＳＯ４，カラム４度：５０
’Ｃ流速： １ｍｌ／ｗｉｎで測定したところＬ体１０
０％であった・ 実施例３ 実施例２と同様に筒体をＩＡ製し、メタフルオロトラン
スケイ皮＊ ４０ｇ＋アンモニア儂度７ト１゜菌体１０
０ｇ （乾燥ＩＩ！ｎ換算）ヲ全ｍ ４０００ｍ１ ト
し３０℃２０時間反応を行った。 その結果ｍ−「−Ｐ
ｌ＋ｅが４０ｇ生成した。その反応１夜を実施６す２と
同様に強酸性カチオン交換樹脂による分ＡＩと再結晶を
行い、３３．２８のｍ−Ｆ−１”ｈｅを得た。
ＩＩＩＲＡＬＰＡＫ ＷＭ−Ｌ （ダイセル）移動Ｎ
： ０．２５＋ｓ？Ｉ ＣｕＳＯ４，カラム４度：５０
’Ｃ流速： １ｍｌ／ｗｉｎで測定したところＬ体１０
０％であった・ 実施例３ 実施例２と同様に筒体をＩＡ製し、メタフルオロトラン
スケイ皮＊ ４０ｇ＋アンモニア儂度７ト１゜菌体１０
０ｇ （乾燥ＩＩ！ｎ換算）ヲ全ｍ ４０００ｍ１ ト
し３０℃２０時間反応を行った。 その結果ｍ−「−Ｐ
ｌ＋ｅが４０ｇ生成した。その反応１夜を実施６す２と
同様に強酸性カチオン交換樹脂による分ＡＩと再結晶を
行い、３３．２８のｍ−Ｆ−１”ｈｅを得た。
その比施光度は［α］ ２５＝ −２５，７’ （Ｃ＝
０．６３，１Ｉ２０）光学純度はＬ体１００％であった
。
０．６３，１Ｉ２０）光学純度はＬ体１００％であった
。
実Ａｉ！ｉ倒４
実施例２ど同様の反応条件で基質としてパラフルオロト
ランスケイ皮酸４０ｇを用いて反応容ｆｆ１４．５Ｌ、
３０℃で２０時開反応を行った。その結果 １１．４ｇ
のｐ−Ｆ−Ｐｌ＋ｅが生成した。（収＄２５゜９％） 上記反応ｉαから実施例２と同様に分離・精製を行い
ｐ−Ｆ−Ｐｂｅを９．１ ｇ得た。その、比施光度は［
α］ ２５＝ −２２，７°（Ｃ＝０．８．１１２０）
光学純度はし１本１００％であフた。
ランスケイ皮酸４０ｇを用いて反応容ｆｆ１４．５Ｌ、
３０℃で２０時開反応を行った。その結果 １１．４ｇ
のｐ−Ｆ−Ｐｌ＋ｅが生成した。（収＄２５゜９％） 上記反応ｉαから実施例２と同様に分離・精製を行い
ｐ−Ｆ−Ｐｂｅを９．１ ｇ得た。その、比施光度は［
α］ ２５＝ −２２，７°（Ｃ＝０．８．１１２０）
光学純度はし１本１００％であフた。
第１図は参考例における Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｃｌｉ
ｕｍ ｔ。 白＋１ｏｉｄｅｓ ＩＦＯ０５５９の増殖曲線とフェニ
ルアラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）活性の変化を
示すグラフである。 ・ 第２図は実施例１における（Ｉ々の含フッ素ケイ皮酸を
用いて、対応する含フッ素アミノ酸の生成収率を示ずグ
ラフである。 第３図は実ＩＩ′ｉ！ｉ例２におけるオルト−フルオロ
ケイ皮酸からオルトーフロオロフェニルアラニン（０−
「−μ１ｅｅ）を合成した時の経時的変化を示すグラフ
である。 第１図 第２図
ｕｍ ｔ。 白＋１ｏｉｄｅｓ ＩＦＯ０５５９の増殖曲線とフェニ
ルアラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）活性の変化を
示すグラフである。 ・ 第２図は実施例１における（Ｉ々の含フッ素ケイ皮酸を
用いて、対応する含フッ素アミノ酸の生成収率を示ずグ
ラフである。 第３図は実ＩＩ′ｉ！ｉ例２におけるオルト−フルオロ
ケイ皮酸からオルトーフロオロフェニルアラニン（０−
「−μ１ｅｅ）を合成した時の経時的変化を示すグラフ
である。 第１図 第２図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、下記［ I ］で表わされる含フッ素トラ ンスケイ皮酸誘導体とアンモニウムイオン とを含フッ素フェニルアラニン生成条件下、フェニルア
ラニンアンモニアリアーゼを含 む微生物の存在下反応させ、次いで反応液 から下記［II］で表わされる含フッ素フェ ニルアラニンを回収することを特徴とする 光学活性を含フッ素フェニルアラニン誘導 体の製造法法。 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・・・・［ I
］ Ｒｆ：Ｆ＿１ＣＨ＿２Ｆ、ＣＨＦ＿２、ＣＦ＿３▲数式
、化学式、表等があります▼・・・・・・［II］ 〔式［II］におけるＲｆは上記式［ I ］に 同じ〕 ２、微生物が含フッ素ケイ皮酸とアンモニアからＬ−含
フッ素フェニルアンモニア誘導 体を生成せしめる能力を有するロドスボリ ディウム属、ロドトルラ属である特許請求 の範囲第１項記載の製造方法。 ３、変換を、微生物、アンモニウムイオン、および式［
I ］で表わされる含フッ素化合 物を含む系で行うことを特徴とする特許請 求の範囲第１項の方法。 ４、式［ I ］で表わされる含フッ素化合物がフルオロ
ケイ皮酸であり、式［II］で表わ される含フッ素フェニルアラニン誘導体が フルオロフェニルアラニンであることを特 徴とする特許請求範囲第１項の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29669786A JPS63148992A (ja) | 1986-12-15 | 1986-12-15 | 含フツ素ケイ皮酸から含フツ素フエニルアラニン誘導体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29669786A JPS63148992A (ja) | 1986-12-15 | 1986-12-15 | 含フツ素ケイ皮酸から含フツ素フエニルアラニン誘導体の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63148992A true JPS63148992A (ja) | 1988-06-21 |
Family
ID=17836915
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29669786A Pending JPS63148992A (ja) | 1986-12-15 | 1986-12-15 | 含フツ素ケイ皮酸から含フツ素フエニルアラニン誘導体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63148992A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5981239A (en) * | 1997-09-24 | 1999-11-09 | Great Lakes Chemical Corp. | Synthesis of optically active phenylalanine analogs using Rhodotorula graminis |
| WO2002016630A1 (en) * | 2000-08-21 | 2002-02-28 | Showa Denko K.K. | Production process of l-phenylalanine derivatives by microorganisms |
| WO2003000915A1 (en) * | 2001-06-25 | 2003-01-03 | Showa Denko K.K. | Method for producing l-amino acids |
-
1986
- 1986-12-15 JP JP29669786A patent/JPS63148992A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5981239A (en) * | 1997-09-24 | 1999-11-09 | Great Lakes Chemical Corp. | Synthesis of optically active phenylalanine analogs using Rhodotorula graminis |
| EP1085095A1 (en) * | 1997-09-24 | 2001-03-21 | NSC Technologies Company, L.L.C. | Synthesis of optically active phenylalanine analogs through microbial transformations |
| WO2002016630A1 (en) * | 2000-08-21 | 2002-02-28 | Showa Denko K.K. | Production process of l-phenylalanine derivatives by microorganisms |
| WO2003000915A1 (en) * | 2001-06-25 | 2003-01-03 | Showa Denko K.K. | Method for producing l-amino acids |
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