JPS63130599A - 修飾ヌクレオチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、修飾ヌクレオチドに関する。さらに詳しくは
１本発明は、核酸物質に結合および／もしくは取り込ま
れた時に容易に検出できるように。

ヌクレオチドおよびＤＮＡを含むポリヌクレオチドおよ
び／もしくはオリゴヌクレオチドを化学的に修飾あるい
は標識することに関する。

（従来の技術） 従来、ｉｆｉ伝子の検出、配列分析等のため１例えば：
ｌＨ２＋４（、３２ｐ、　　３ＳＳあるいは＋　２５１
などの放射性同位元素で遺伝子を標識することが多く行
われてきた。しかし、これら放射性同位元素による標識
化は感度の点で優れている反面、使用に際し次のような
欠点を有している。

ｌ）取扱上、熟練が必要である。

２）法規上の規制が厳しく、特別の設備および測定機器
が必要であり、またその限定された場所でしか取り扱え
ない。

３）健康上の問題がある。

４）使用後の廃棄に問題がある。

５）半減期に併せて予約購入するので、実験の期日がそ
れにより制約される。

従って、上記欠点を有する放射性同位元素を用いた遺伝
子の検出、配列分析手法に代わり、特別の設備および装
置を必要としない、安定でしかも生物学的に安全な高精
度の検出、配列分析手法の出現が待たれている。そして
、このような手法の要求を満たすための遺伝子標識用試
薬の開発が進んでいる。

例えば、特開昭５９−６２６００には５標識（特にビオ
チン標識）された修飾ヌクレオチドが開示されている。

しかし、この修飾ヌクレオチドはダイデオキシ体ではな
く、すなわちその３゛末端がデオキシ体ではなく、よっ
て問題とする遺伝子の３゛側にのみ１つだけ選択的に標
識することは困難であると考えられる。従って、この修
飾ヌクレオチドで標識されたポリヌクレオチドおよび／
もしくはオリゴヌクレオチドは、マキサム−ギルバート
法の様な手段を用いた遺伝子の配列分析に供することは
できない。このように従来の修飾ヌクレオチドでは９問
題とする遺伝子を簡便かつ高精度に標識して、遺伝子に
関する種々の研究の広範な目的を達成するには十分でな
い。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明の目的は、遺伝子標識に使用される新規な標識化
ダイデオキシリボヌクレオチド誘導体を提供することに
ある。

本発明の他の目的は、上記の標識化ダイデオキシ＋Ｊ　
；ｉＦスクレオチド誘導体で）を識された。１ミリヌク
レオチドおよび／もしくはオリゴヌクレオチドを提供す
ることにある。

（問題点を解決するための手段） 上記目的を達成するため１本発明の標識された修飾ヌク
レオチドは次の一般式を有する：Ｐ　−５−Ｂ−Ｒ−Ｓ
ｉｇ ここで、　Ｐはリン酸部分、　Ｓは糖部分、　Ｂは核酸
塩基部分、　　Ｓｉｇは該核酸塩基部分Ｂに共有結合す
る化学的部分、そしてＲは該核酸塩基部分Ｂと該化学的
部分Ｓｉｇとを結合するスペーサー部分であり；該リン
酸部分Ｐは該糖部分Ｓの５゛−位に結合し；該糖部分Ｓ
はその２°−位および３°−位が水素であるダイデオキ
シ型であり；該核酸塩基部分Ｂはピリミジン誘導体また
は７−デアザプリン銹）５体であって、該核酸塩基部分
Ｂがピリミジン誘導体である場合はそのＮ−１位により
３また該Ｂが７−デアザプリンＬｉ　８体である場合は
そのＮ−９位により、該糖部分Ｓの１″−位に結合し；
該スペーサー部分Ｒは、該核酸塩基部分Ｂがピリミジン
誘４体の場合はその５位に、また該Ｂが７−デアザプリ
ン誘導体の場合はその７位に結合し；そして該化学的部
分Ｓｉｇは該核酸塩基部分Ｂと結合するとそれ自身を信
号表示することができ、これによりそれ自身を自己検出
するかまたはその存在を知らしめる。

また１本発明のポリヌクレオチドおよび／もしくはオリ
ゴヌクレオチドは、上記一般式において化学的部分Ｓｉ
ｇが少なくとも１個の炭素原子を含む化学基である。少
なくとも１種の標識化がなされた修飾試薬を用いて標識
されている。

以下に本発明の詳細な説明する。

次の構造で示される化合物が生化学研究用および遺伝子
組換え技術においてプローブとして広く官用であること
が判明した。

ここで、　Ｂは糖部分のＣ−１″位に共有結合している
核酸塩基であるピリミジン誘導体あるいは７−デアザプ
リン誘導体を示す。Ｂが前者の場合には糖は核酸塩基の
Ｎ−１位に結合し、一方後者の場合には糖は核酸塩基の
Ｎ−９位に結合している。Ｓｉｇは検出のためのリポー
タ−グループで、少なくとも１個の炭素原子を含む化学
基である。Ｒはリポータ−グループＳｉｇと核酸塩基Ｂ
とを結合するスペーサーグループである。Ｂがピリミジ
ン誘導体の場合にはＲはピリミジン誘導体の５位に結合
し、一方Ｂが７−デアザプリン誘導体の場合にはＲは７
−デアザプリン誘導体の７位に結合している。Ｘはモノ
、ジ、またはトリリン酸を示す。ＹおよびＺは水素であ
る。

上記構造で示される本発明の標識されたダイデオキシヌ
クレオチド誘導体は１次の特性を持たねばならない。

１）ポリメラーゼ、ターミナルデオキシヌクレオチジル
トランスフェラーゼ等の酵素の基質となりうろこと。

２）５゛水酸基はリン酸エステルであること。

３）３′末端は反応停止の為、デオキシ体であること。

４）ポリメラーゼによる反応がアデニン、グアニン、シ
トシンまたはチミン（あるいはウラシル）で誤りなく停
止できること。

５）標識物質（リポータ−グループＳｉｇ）およびスペ
ーサーグループＲは、ハイブリッド形成を妨げたり、あ
るいはポリメラーゼ、ターミナルデオキシヌクレオチジ
ルトランスフエラーゼ等の酵素による反応を妨げてはな
らない。

従って、検出のためのリポータ−グループＳｉｇは、そ
れにより修飾されるヌクレオチド単位の立体的に許容性
のある部位に結合している。ここで。

ヌクレオチド単位の立体的に許容性のある部位とは、そ
のヌクレオチド単位の核酸塩基上の位置であって、その
位置に置換基が結合することにより該ヌクレオチド単位
が修飾されるものであり、その際、生成物であるオリゴ
ヌクレオチドと相補的核酸成分とのハイブリダイゼーシ
ョンが重大な妨害を受けず、そして、該置換基の存在が
該ヌクレオチドのポリメラーゼやターミナルデオキシヌ
クレオチジルトランスフェラーゼのような酵素に対する
基質としての機能を阻害しない様な位置であり、構造で
あることを意味する。このような立体的に許容性のある
部位は、７−デアザプリン誘導体のＣ−７位、ピリミジ
ン誘導体のＣ−５位である。

一方、修飾されてはいけない部位としては、アデニン塩
基のＮ−１および６位のＮＨ，、グアニン塩基のＮ−１
，２位のＮｉ＋□および０−６位、シトシン塩基の２位
のＯ，Ｎ−３および４位のＮｌｈおよびチミン塩基のＮ
−３および４位の０などが挙げられる。

一般に、ヘテロ原子（ＮまたはＯ）への置換は避けるべ
きである。また、プリン誘導体のＣ−８位に置換基を導
入すると、塩基と糖がｓｙｎ型の配位座をとるために、
２重うセンが布巻（正常なりＮＡ）である場合ハイブリ
ッドの形成能を失い、一般的には好ましくない。さらに
、プリン誘導体のＮ−７位に導入する場合には、窒素が
４級となり、糖と塩基部のグリコシド結合が切れやすく
なっていわゆる脱プリン反応が生じやすくなる（特開昭
６ｌ−５７５９５）。

ヌクレオチド単位をリポータ−グループＳｉｇで修飾す
るためのスペーサーグループとしての置換５Ｒは、１個
またはそれ以上のリポータ−グループとして機能しうる
か、或いは１個またはそれ以上のリポータ−グループに
結合しうるという特徴を持っている。本発明においてリ
ポータ−グループＳｉｇと結合しうる置換基Ｒは、一般
的に求核性の性質を示すものであるということができる
。この様な置換基の例としては、第１級アミノ基、芳香
族アミノ基、チオール基、カルボキシル基、水酸基等が
挙げられる。置換されたピリミジン塩基あるいは７−デ
アザプリン塩基では、置換基Ｒは１個またはそれ以上の
炭素原子を含んでいる。以上から、置換基（スペーサー
グループ）Ｒは以下の化学式で示される炭素鎖の１つの
形をとるのが好ましい。

ここで、Ｒ１は水素またはＣｌ−６の低級アルキル基。

Ｒ２はＣ，Ｒ２，Ｙであり、そしてＺは多価へテロ原子
である。ここで、ｎは０〜２０．Ｙは水素または少なく
とも１個のアミド基、置換アミド基、ニトロフェニル基
、置換ニトロフェニル基、置換アミノ基、エステル基、
置換カルボキシフェニル基、置換アミノアルキルフェニ
ル基、または置換アミノベンゼンスルホン酸基である。

本発明において修飾されたピリミジン塩基は。

そのＣ−５位が置換されたものであり１代表例は以下の
構造式で示される。ウラシルおよびシトシン塩基誘導体
である。

本発明において修飾された７−デアザプリン塩基は。

そのＣ−７位が置換されており２代表例は以下の構造式
で示される７−ジアザアデニンおよび７−ジアザグアニ
ン塩基誘導体である。

（以下余白） リポータ−グループＳｉｇについては、少なくとも１個
のリポータ−グループが機能的な着色性。

蛍光性２発光性、放射活性またはりガント認識性のリポ
ータ−グループである。例えば、フルオレセイン、ロー
ダミン、アクリジニウム塩、ニトロフェニル、ジニトロ
フェニル、ベンゼンスルホニル、ビタミン、ルミノール
、イソルミノール、ルシフェリン、ジオキセクン、ジオ
キサミドまたはビオチン等、およびそれらの置換体ある
いは付加物が含まれる。

蛍光標識物質の代表例としては、イソチオシアン酸フル
オレセイン（ＦＩＴＣ）　、　　イソチオシアン酸エオ
シン（ＥＩＴＣ）　、　　イソチオシアン酸テトラメチ
ルローダミン（ＴＭＲＩＴＣ）　、置換イソチオシアン
酸ローダミン（ＸＲＩＴＣ）、　７−フルオロ−４−ニ
トロヘンシー２−オキサ−１，３−ジアゾール（ＮＢＤ
Ｆ）などが挙げられる。

上記リポータ−グループＳｉｇはダイデオキシ体にスペ
ーサーグループＲを介して結合している。

また、ダイデオキシ体に、スペーサーグループＨの反応
性のアミノ基を利用してエチレンジアミン四酢酸基のよ
うなキレート性基を結合し、それにユーロピウムの様な
長寿命の蛍光を有するものを結合せしめたものを用い、
遅延蛍光あるいは長寿命の蛍光を測定することにより、
バンクグラウンドを大幅に減少させ、信号対ノイズ比（
Ｓハ比）の良好な測定を行うこともできる。必要に応じ
て。

リポータ一部分は、磁気酸化物や磁気酸化鉄のような磁
気成分を結合または付着して含むことができ、従って、
この様なポリヌクレオチドを磁気的方法により検出する
事ができる。さらにまた、ビオチンの様な物質を結合せ
しめ、後にビオチン−アビジン系の様な検出感度の高い
検出系を用いても良い。

上述したような本発明の標識化ダイデオキシヌクレオチ
ド誘導体は次の様な方法で製造される。

１）下記の構造を有する化合物で、　Ｙ＝ＯｎがっＺ＝
ＯＨ。

またはＹ＝ＯｔｌかつＺ＝Ｈ，またはＹ＝ＨかつＺ＝Ｏ
Ｈである化合物を、まずｙ＝ｚ・ＩＩのダイデオキシ体
とする。

２）該ダイデオキシ体を適当な溶媒中、水銀塩と反応さ
せ、下記構造を有する水銀化合物を生成させる。

（以下余白） ３）該水銀化合物とＲで示される化学基とをパラジウム
触媒存在下で反応せしめ、下記構造を有する化合物を生
成させる。ここでＮは反応性の末端官能基あるいはＳｉ
ｇである。

４）ＮがＳｉｇでない場合には、該化合物をＳｉｇと反
応せしめて下記構造を有する化合物を合成する。

上記の方法で合成される本発明の修飾ヌクレオチドの用
途としては、これにより標識されたポリヌクレオチドお
よび／もしくはオリゴヌクレオチドをプローブとして用
い、ハイブリッド形成反応を利用することにより、特異
ＤＮＡまたはＲＮＡ分子。

特に例えば５ウイルス、細菌、カビ、酵母または哺乳類
などの生物由来の特異ＤＮ＾またはＲＮＡ分子の存在を
決定することが可能である。また遺伝病の診断等にも用
いることができる。ハイブリッドを形成したプローブの
可視化のための蛍光法の代用として、ペルオキシダーゼ
、アルカリまたは酸性フォスファターゼ、あるいはβ−
ガラクトシダーゼの様な酵素をハイブリッド形成の部位
に導き。

そこで可溶性基質を不溶性の着色沈澱に酵素的に変換し
て検出することも可能である。

さらに２本発明の修飾ヌクレオチドはポリヌクレオチド
および／もしくはオリゴヌクレオチドの３“−側にのみ
１つだけ選択的に標識することができるので、標識され
たポリヌクレオチドおよび／もしくはオリゴヌクレオチ
ドをマキサム−ギルバート法の様な手段を用いた遺伝子
の配列分析に供することも可能である。

本発明の修飾ヌクレオチドを遺伝子配列分析のための標
識として用いる場合、ポリアクリルアミドゲル電気泳動
で分子量（長さ）により分離された標識分子を検出する
ための検出法としては、多くの異なった方法が存在する
が、基本的には特開昭６０−２２０８６０に記載の装置
を用いることができる。

また、　ＨＰＬＣを用い９分離された標識分子を検出す
るために既存の装置あるいはその改良品を用いることが
できる。以下に検出のための代表的な方法を示す。

１）種々異なる染料につき異なる波長の光により励起さ
れた蛍光の検出。

２）種々異なる染料につき同じ波長を有する光により励
起された蛍光の検出。

３）ゲルからの分子の溶出および化学発光による検出。

４）分子による光の吸収による検出。

５）磁気による磁気的検出。

６）アフィニティー物質による検出。

検出のための方法はここに例示した方法のみではなく１
種々の方法が含まれることは自明である。

蛍光物質の例についてはすでに記載したが、ジオキシエ
タンジオンのような化学発光を励起させる薬剤と結合さ
せ、放射光を測定しうる検出器に直接流入させることも
ありうる。この場合には。

励起光源を必要としないし、バックグラウンドの信号は
蛍光に於けるよりもずっと低く、信号対ノイズの比率（
Ｓ／Ｎ比）が高くなり、かつ感度が向上する。また、吸
光度による方法は装置的に簡便であるが１本質的に感度
が低いという欠点を有している。アフィニティー物質に
よる方法は、検出方法としては比較的簡便である。

本発明の修飾ヌクレオチドの上記以外の用途として、治
療効果や細胞毒性効果を含む特定の生物学的効果を有す
る総勢の化学的作用剤を開発または提供する。一般に、
ヌクレオチドのダイデオキシ誘導体は細胞の生育阻害活
性を有し、一部、抗癌剤としても用いられている。本発
明のリポータ一部分として、既に述べた様な物質の所在
を検出するための物質ではなく、さらに積極的に、毒素
を結合することもできる。その様なヌクレオチド誘導体
類は２体や細胞のＤＮＡおよび／もしくはＲＮ　ｔｌの
合成を阻害するか、癌を攻撃して実際殺すか。

さもなくば、不必要な細胞の生育を阻害するために２体
や細胞のＤＮＡおよび／もしくはＲＮＡ成分に取り込ま
せるように１人体または動物に導入または投与すること
ができる。

（以下余白） （実施例） 以下に記載する実施例は本発明のいろいろな局面の実例
を示すものであるが、特許請求の範囲に特に述べた範囲
を決して制限するものではない。

第１図に従い、蛍光標識あるいはビオチン標識した２’
、３’−ダイデオキシ−５−（３−アミノ）−アリルウ
リジン−５”−トリフオスフェートの合成法を説明する
。

１０ｍｍｏ＋の２°−デオキシウリジンを１００Ｔｎ１
の無水ピリジンに溶解し、　１５ｍｍｏｌのジメトキシ
トリチルクロライド（ＤＭＴｒ−ＣＩ　）を加え、混合
物を室温下。

１８時間攪拌した。溶液を５００−のクロロフォルムで
希釈後、　０．ＩＮ重炭酸ナトリウムで抽出した。クロ
ロフォルム相を脱水し、減圧下、蒸発乾固した。

シリカゲルカラムクロマトグラフィーによりクロロフォ
ルム−メタノールのステノプグラディエントで２”−デ
オキシ−５゛−０−ジメトキシトリチルウリジンを得た
。収率は８３％であった。

以下（１−２）項から（１−５）項までに示すダイデオ
キシ体の合成は、　　ｌｌｏｒｗｉｔｚらの方法（Ｊ。

Ｐ、　ｌｌｏｒｗｉｔｚ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎｕｃｌ
ｅｏｓｉｄｅｓ、　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ＋釘、　３
０４５　（１９６２）　）に従った。

本実施例（１−１）項で得られた２゛−デオキシ−５“
−〇−ジメトキシトリチルウリジン７　ｍｍｏｌのピリ
ジン溶液２０−に、氷冷下、メタンスルホニルクロライ
ド（ＭｓＣｌ）　　９．５ｍｍｏｌをゆっくりと滴下し
た。

水冷下、２４時間反応後、水１　ｍｌを加え１反応を停
止させた。これを８００ｍ１の氷水中にゆっくりと滴下
し、得られた沈澱を濾別し、水洗後、風乾した。

淡黄色の生成物を少量のアセトンに溶解し、再び。

ｉｆの氷水中にゆっくりと滴下し、無色の沈澱を濾別２
回収した。収率は８５％であった。

（１−２）項で得られた２゛−デオキシ−３゛−０−メ
シル−５°−０−ジメトキシトリチルウリジン１　、２
ｍｍｏ　１に、　０．２４Ｍのカリウム−ｔｅｒ　ｔ−
ブトキサイド（ＫＯｔＢｕ）のジメチルスルフオキシド
溶液１０１ｎ１を加え、室温にて１時間反応せしめた後
、氷水２５〇−中に滴下した。希酢酸にて中和後、沈澱
を遠心分離し、水洗後、風乾した。これを１５−のエタ
ノールに溶解したものに、ベンゼン８０−を加え、減圧
濃縮し。

水を共沸により完全に除去した。ベンゼンをさらに加え
、再び減圧濃縮し、得られた沈澱をエタノールより再結
晶化した。収率は８０％であった。

（１−４）２°、３”−ダイデオキシ−２°−ウリジネ
ンの金底工　　　− （１−３）項で得られた５゛−Ｏ−ジメトキシトリチル
−２’、３’−ダイデオキシ−２゛−ウリジネン１　ｍ
ｍｏｌのクロロホルム溶液２０ｄに、水冷下、　　１．
１当１の乾燥塩化水素ガスを撹拌下、ゆっくりと加え、
約３０分間、水冷下、脱トリチル化させた。生成した沈
澱を濾別後、クロロホルムで洗浄した後、ベンゼン−エ
タノール（９０：　１０ν／ｖ）より再結晶化した。収
率は６０％であった。

（１−５）２′、３゛−゛イブオキシウリジンの人　：
（１−４）項で得られた２゛、３”−ダイデオキシ−２
゛−ウリジネン０．５ｍｍｏｌのジオキサン？容液２５
−に、　１０％パラジウム−カーボン触媒を１１５■を
加え、１気圧の水素圧下にて２５℃で１時間還元せしめ
た。

反応後、触媒を濾別後８濾液を減圧下、乾固した。

残渣をベンゼン−石油エーテルから再結晶化した。

収率は８０％であった。

以下（１−６）項および（１−７）項に示す三リン酸化
はＲｕ５ｓｅｌｌらの方法（Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ
、、　８（１２）、　４８８９　（１９６９））に従い
、化学的方法により行った。

（１−５）項で得られた２’、３’−ダイデオキシウリ
ジン１　ｍｍｏｌの無水テトラヒドロフラン（Ｔ旺）溶
液２０ｄに、　　４ｍｍｏｌのトリイミダゾールフォス
フィニソクオキシドおよび１００■の１，１゛−カルボ
ニルジイミダゾールを加え、室温下、１晩攪拌して反応
せしめた。次いで、トリエチルアミン２蔵および水５−
を加え、さらに３０分間攪拌したのち。

３５０−のＤＥＡＥ−５ｅｐｈａｄｅｘ　Ａ−２５（Ｈ
ＣＯ３−型）にチャージし、トリエチルアミン炭酸バッ
ファー（ｐＨ７，５）のリニアグラディエンド（０−０
，２Ｍ　）　　４１で？容出せしめた。メインピーク溶
出分を減圧下、蒸発乾固し、ついでメタノールで共沸し
、脱塩した。

収率は５５％であった。

リン酸化はまた１次の様に行うこともできる。

５−の無水ジオキサン中で１．２ｍｍｏｌの亜リン酸フ
ォスフオクロライド、　　２．４ｍｍｏ１の（１−１１
）−１，２，４−トリアシライドおよび２．０ｍｍｏｌ
のトリエチルアミンを混合し、　１０〜１５℃で３０分
、そして室温で１時間攪拌した。これに（１−５）項で
得られた２’、３’−ダイデオキシウリジンｌ　ｍｍｏ
ｌを添加し、室温で１時間攪拌した。これに水冷下、水
５　ｍｌを加え９反応液を室温で１８時間攪拌した。反
応溶液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによりク
ロロフォルム−メタノールのステップグラディエンドで
溶出せしめ、精製した。Ｄｏｗｅｘ　５０　（Ｎａ”型
）と１０　ｄの水中で、室温下、４時間攪拌してナトリ
ウム塩に変換した。収率は５５％であった。

２゛、３”−ダイデオキシウリジン−シーモノフォスフ
ェートの三リン酸化は、　Ｄ、　Ｅ、　Ｈｏａｒｄ　ら
の方法（Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、　ａ７
　（８）、　１７８５　（１９６５）　）により行った
。

（１−６）項で得られた２’、３’−ダイデオキシウリ
ジン−５゛−モノフォスフェートの無水トリブチルアン
モニウム塩０．１ｍｍｏｌのシミチルフォルムアミド（
ＤＭＦ）溶液１−に、１．１”−カルボジイミダゾール
０．５ｍｍｏｌのＤＭＦ溶液１−を加え、室温にて５時
間反応せしめた。メタノールを０．８ｍｍｏｌ加え、３
０分間室温にて攪拌した後、トリブチルアンモニウムピ
ロフォスフェート０．５ｍｍｏｌのｏｎｐ溶液５　Ｐｎ
ｌヲ加え、室温にて１晩攪拌した。生成した沈澱をＤＭ
Ｆにて洗浄後、上澄液と共に等量のメタノールで処理し
、ｔＪｊｉ圧下、濃縮した。残渣を６０−のＤＥＡＥ−
ＳｅｐｈａｄｅｘＡ−２５（ＨＣＯ＋−型）にチャージ
し、トリエチルアミン炭酸バッファー（ｐＨ７，５）の
リニアグラディエンド（０−０，４Ｍ　）　　１１で溶
出せしめた。メインピーク溶出分を減圧下、乾固し、つ
いでメタノールで共沸し、脱塩した。収率は７５％であ
った。

５−水銀化−２’、３’−ダイデオキシウリジン−５゛
−トリフオスフェートは、　Ｄａｌｅらの方法（Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。

貝、　２４４７−２４５７　（１９７５））にて合成し
た。

（１−７）項で得られた２”、３゛−ダイデオキシウリ
ジン−５゛−トリフオスフェート１１！１Ｉｌｌｏｌを
０．１Ｍ酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６，０）　　
１００−に溶解し、これに５　ｍｍｏｌの酢酸水銀を加
え、５０℃にて４時間反応せしめた。その後、溶液に水
冷下、　　９ｍｎ＋ｏｌの塩化リチウムを加え、酢酸エ
チルにて数回抽出し、塩化第２水銀を除去した。酢酸エ
チル抽出液中の水銀量を４，４”−ビス（ジメチルアミ
ノ）チオベンゾフェノンを用いて測定したところ、ヌク
レオチドの水銀化率は９０〜９５％であった。次いで水
相に３倍量の水冷エタノールを加え、沈澱を生じせしめ
、これを遠心分離して沈澱を回収した。この沈澱を水冷
エタノールで９次いでジエチルエーテルにて洗浄した後
、風乾せしめた。収率は９３％であった。

５−水銀化−２”、３゛−ダイデオキシウリジン−５゛
−トリフオスフェートのアリルアミン化は、　Ｂｅｒｇ
ｓｔｒｏｍらの方法（Ｊ、八ｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ
、、９８．１５８７（１９７６））により行った。

（１−８）項で得られた　５−水銀化−２°、３゛−ダ
イデオキシウリジン−５゛−トリフオスフェート０．５
ｍｍｏ　ｌを０．１Ｍの酢酸ナトリウムバッフｙ　−（
ｐｌ（５，０）２５−に溶解した。これに２Ｍのアリル
アミン酢酸塩水溶液３−を加え１次いで４−の水に溶か
した塩化パラジウムカリウム（ＫｚＰｄＣ１４）　　０
．５ｍｍｏｌを加えた。溶液は徐々に黒色となり、器壁
に金属水銀が析出した。室温にて２４時間反応後１反応
溶液を０．４５μのメンブランフィルタ−にて濾過し、
金属水銀を除去した。濾液を１００−のＤＥＡＲ−Ｓｅ
ｐｈａｄｅｘＡ−２５にチャージし、これを０．１Ｍの
酢酸ナトリウムバッファー（ｐｉｆ　５．０）　　１０
０−で洗浄後、トリエチルアミン炭酸バッファー（ｐＨ
７，５）のリニアグラディエンド（０，１Ｍ→０．６Ｍ
　）　　１　ｆで溶出せしめた。メインビーク溶出分を
減圧下、乾固し、ついでメタノールで共沸し、脱塩した
。次いで、この溶出物を００５　（Ｃ−１８）逆相高速
液体クロマトグラフィーにて、　　０．５Ｍ　　トリエ
チルアミン炭酸バッファー（ｐＨ７，５）を用いて分取
、情調した。収率は６５％であった。

（１−９）項で得られた２’、３’−ダイデオキシ−５
−（３−アミン）−了りルウリジン−５゛−トリフオス
フェート０．１ｍｍｏｌを０．１Ｍ炭酸バッファー　（
ｐＨ９，０）　２０ｍ１に溶解し、これに２０ｍｇ／−
のＸＲＩＴＣのＤＭＦ溶液２ｎ１１を加え、室温にて４
時間撹拌し。

反応せしめた。反応溶液を３ＱｍｌのＤＥＡＥ　−５ｅ
ｐｈａｄｅｘ＾−２５（ＩＩｃｏ３−型）にチャージし
、トリエチルアミン炭酸バッファー（ｐＨ７，５）のリ
ニアグラディエンド（０，１Ｍ→Ｉ　Ｍ）　５００ｍＮ
で溶出せしめた。メインピーク溶出分（０，６〜０．７
Ｍの塩濃度にて溶出）を減圧下、乾固し、ついでメタノ
ールで共沸し、脱塩した。収率は５５％であった。

（１−９）項で得られた２”、３゛−ダイオデオキシ−
５−（３−アミノ）−アリルウリジン−５′−トリフオ
スフェート０．１ｍｍｏｌの０．１Ｍ炭酸ナトリウムバ
ッファー（ｐＨ８，５）　ｉ容ン夜１０艷に、Ｎ−ヒド
ロキシルサクシンイミドビオチンエステル０．２ｍｍｏ
ｌのＤＭＦ溶液２−を添加し、室温下、４時間反応せし
め２次いで１反応液を３０−のＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｄ
ｅｘ　Ａ−２５（ＨＣＯ３−型）にチャージし、トリエ
チルアミン炭酸バッファー（ｐＨ７，５）のリニアグラ
ディエンド（０，１Ｍ−０，９Ｍ）５００１ｎ１で溶出
せしめた。塩濃度０．６Ｍ付近のメインピーク溶出分を
減圧下、乾固し、ついでメタノールで共沸し、脱塩した
。収率は６０％であった。

第２図に従い、蛍光標識あるいはビオチン標識した２’
、３’−ダイデオキシ−５−（３−アミノ）−アリルシ
チジン−５゛−トリフオスフェートの合成法を説明する
。

１０ｍｍｏｌの２°−デオキシシチジンを１００−の無
水ピリジンに溶解し＋　１５ｍｍｏｌのジメトキシトリ
チルクロライドを加え、混合物を室温下、１８時間攪拌
した。溶液を５００−のクロロフォルムで希釈後。

０、　ＩＮ重炭酸ナトリウムで抽出した。クロロフォル
ム相を脱水し、減圧下、蒸発乾固した。シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーによりクロロフォルム−メタノー
ルのステソプグラディエントで２“−デオキシ−５”−
〇−ジメトキシトリチルシチジンを得た。収率は８７％
であった。

以下（２−２）項から（２−５）項までに示すダイデオ
キシ体の合成は、　Ｈｏｒｗｉｔｚ　らの方法（Ｊ。

Ｐ、　Ｈｏｒｔｍｉｔｚ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎｕｃｌ
ｅｏｓｉｄｅｓ、　ｎｖｃｌｅｏｔｉｄｅｓ。

訂、３０４５（１９６２）　）に準じて行った。

虹 本実施例（２−１）項で得られた２゛−デオキシ−５’
−０−ジメトキシトリチルシチジン７ｍｍｏｌのピリジ
ン溶液２０−に、氷冷下、メタンスルホニルクロライド
９．５ｍｍｏｌをゆっくりと滴下した。水冷下、２４時
間反応後、水ｌ　ｍｌを加え１反応を停止させた。これ
をｓｏｏｍｌの氷水中にゆっくりと滴下し。

得られた沈澱を濾別し、水洗後、風乾した。淡黄色の生
成物を、小量のアセトンに溶解し、再び。

１１の氷水中にゆっくりと滴下し、無色の沈澱を濾別９
回収した。収率は８０％であった。

紅 （２−２）項で得られた２゛−デオキシ−３゛−０−メ
シル−５”−〇−ジメトキシトリチルシチジン１．２１
１１１１１０１に、　０．２４Ｍのカリウム−ｔｅｒ　
ｔ−ブトキサイドのジメチルスルフオキシド溶液Ｉ　Ｑ
　ｍｌを加え。

室温にて１時間反応せしめた後、氷水２５〇−中に滴下
した。希酢酸にて中和後、沈澱を遠心分離し。

水洗後、風乾した。これを１５−のエタノールに溶解し
たものに、ベンゼン８０−を加え、減圧濃縮し。

水を共沸により完全に除去した。ベンゼンをさらに加え
、再び減圧濃縮し、得られた沈澱をエタノールより再結
晶化した。収率は７５％であった。

（２−３）項で得られた５゛−０−ジメトキシトリチル
−２゛、３”−ダイデオキシ−２゛−シチジネン１　ｍ
ｍｏｌのクロロホルムン容ン夜２０ｄに、水冷下、１．
１当量の乾燥塩化水素ガスを攪拌下、ゆっくりと加え、
約３０分間、水冷下、脱トリチル化させた。生成した沈
澱を濾別後、クロロホルムで洗浄した後。

ベンゼン−エタノール（９０：　１０ν／ｖ）より再結
晶化した。収率は６３％であった。

（２−５）　２’、　３’−ダイデオキシシチジンの人
　：（２−４）項で得られた２”、３゛−ダイデオキシ
−２°−シチジネン０．５ｍｍｏｌのジオキサン溶液２
５−に、　１０％パラジウム−カーボン触媒を１１５■
加え。

１気圧の水素圧下にて２５℃で１時間還元せしめた。

反応後、触媒を濾別後、濾液を減圧下、乾固した。

残渣をベンゼン−石油エーテルから再結晶化した。

収率は８０％であった。

以下（２−６）項および（２−７）項に示す三リン酸化
は、　Ｒｕ５ｓｅｌｌ　らの方法（Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃ
ｈｅｍ、。

８　（１２）、４８８９　（１９６９））に従い、化学
的方法により行った。

（２−６）２′、３′−゛イブオキシシチジン−５゛−
モノフオスフエートの入　： （２−５）項で得られた２゛、３”−ダイデオキシシチ
ジン１　ｍｍｏｌの無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）
溶液２０−に、４１１ｏ１のトリイミダゾールフォスフ
ィニックオキシドおよび１００ｘの１，１゛−カルボニ
ルジイミダゾールを加え、室温下、１晩攪拌して反応せ
しめた。次いで、トリエチルアミン２−および５−を加
え、さらに３０分間攪拌したのち。

３５０−のＤＥＡＲ−５ｅｐｈａｄｅｘ　Ａ−２５（ｌ
ＩｃＯ３−型）にチャージし、トリエチルアミン炭酸バ
ッファー（ｐＨ７，５）のリニアグラディエンド（０−
０，２Ｍ）　　４　Ｉ！で溶出せしめた。メインピーク
溶出分を減圧下、蒸発乾固し、ついでメタノールで共沸
し、脱塩した。収率は６１％であった。

リン酸化はまた１次のように行うこともできる。

５ｒｎ１の無水ジオキサン中で１　、２ｍｍｏ　１の亜
リン酸フォスフオクロライド、　２．４ｍｍｏｌの（１
−Ｈ）−１，２，４−トリアシライドおよび２．０ｍｍ
ｏｌのトリエチルアミンを混合し、　１０〜１５℃で３
０分、そして室温で１時間攪拌した。これに（２−５）
項で得られた２”、３”−ダイデオキシシチジン１ｍｍ
ｏｌを添加し、室温で１時間攪拌した。これに水冷下、
水５−を加え２反応液を室温で１８時間攪拌した。反応
溶液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによりクロ
ロフォルム−メタノールのステソプグラディエントで溶
出せしめ、精製した。Ｄｏｗｅｘ５０　（Ｎａ　”型）
と１０−の水中で、室温下、４時間攪拌してナトリウム
塩に変換した。収率は５５％であった。

２”、３゛−ダイデオキシシチジン−５“−モノフォス
フェートの三リン酸化は、　Ｄ、　Ｅ、　１ｌｏａｒｄ
　らの方法（前出）により行った。

（２−６）項で得られた２’、　３’−ダイデオキシシ
チジン−５゛−モノフォスフェートの無水トリブチルア
ンモニウム塩０．１ｍｍｏｌのＤＭＦ溶液１ｄに。

１．１゛　　−カルボジイミダソ゛−ル０　、５ｍｍｏ
　ｌのｏ？ＩＦ’を８液ｌ−を加え、室温にて５時間反
応せしめた。メタノールを０．８１１１ｍｏＩ加え、３
０分間室温にて撹拌した後、トリブチルアンモニウムピ
口フォスフエート０．５ｍｍｏｌのＤＭＦ溶液５　ｍｌ
を加え、室温にて１晩攪拌した。生成した沈澱をＤＭＦ
にて洗浄後、上澄液と共に等量のメタノールで処理し、
減圧下、濃縮した。残渣を５ＱｍｌのＤＥＡＥ−３ｅｐ
ｈａｄｅｘ＾−２５（ＩＩＣＯ３−型）にチャージし、
トリエチルアミン炭酸バッファー（ｐｔｌ７．５）のリ
ニアグラディエンド（０−０，４Ｍ）■ｌで溶出せしめ
た。メインピーク熔出針を減圧下、乾固し、ついでメタ
ノールで共沸し、脱塩した。収率は８５％であった。

虹 ５−水銀化−２′、３゛−ダイデオキシシチジン−５゛
−トリフオスフェートは、　Ｄａｌｅらの方法（Ｂｉｏ
−ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　　４４．２４４７−２４５７
（１９７５）　）に準じて合成した。

（２−７）項で得られた２’、　３’〜ダイデオキシシ
チジン−５゛−トリフオスフェートｌ　ｍｍｏｌを０．
１Ｍ酢酸ナトリウムバッファー（ｐｔｌ　６．０）１０
０ｍｊ！に熔解し、これに５ｍｍｏｌの酢酸水銀を加え
、５０℃にて４時間反応せしめた。その後、溶液に、水
冷下、９ｍｍｏ　ｌの塩化リチウムを加え、酢酸エチル
にて数回抽出し、塩化第２水銀を除去した。酢酸エチル
抽出液中の水銀量を４．４゛−ビス（ジメチルアミノ）
チオベンゾフェノンを用いて測定したところ、ヌクレオ
チドの水銀化率は９０〜９５％であった。次いで水相に
３倍量の水冷エタノールを加え、沈澱を生じせしめ、こ
れを遠心分離して沈澱を回収した。

この沈澱を水冷エタノールで１次いでジエチルエーテル
にて洗浄した後、風乾せしめた。収率は９０％であった
。

５−水銀化−２°、３°−ダイデオキシシチジン−５′
−トリフオスフェートのアリルアミン化は、　Ｂｅｒｇ
ｓｔｒｏｍらの方法（Ｊ、八ｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ
、、　　９８．１５８７　（１９７６）　）に準じて行
った。

（２−８）項で得られた５−水銀化−２゛、３°−ダイ
デオキシシチジン−５゛−トリフオスフェート０．５ｍ
ｍｏｌを０．１Ｍの酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ５
，０）　２５−に溶解した。これに２Ｍのアリルアミン
酢酸塩水溶液３　ｍｌｌを加え１次いで４−の水に溶か
した塩化パラジウムカリウム（Ｋ、ＰｄＣ１ｎ）０．５
ｍｍｏｌを加えた。溶液は徐々に黒色となり、器壁に金
属水銀が析出した。室温にて２４時間反応後１反応溶液
を０．４５μのメンブランフィルタ−にて濾過し。

金属水銀を除去した。濾液を１００−のＤＥＡＥ−３ｅ
ｐｈａｄｅｘＡ−２５にチャージし、これを０．１？Ｉ
の酢酸ナトリウムバッフｙ　−（ｐＨ５，０）１００ｍ
ｆで洗浄後、トリエチルアミン炭酸パンファー（ｐＨ７
，５）のリニアグラディエンド（０，１Ｍ−０，６Ｍ）
　　１１で溶出せしめた。

メインピーク溶出骨を減圧下、乾固し、ついでメタノー
ルで共沸し、脱塩した。次いで、この溶出物をＯＤＳ　
（Ｃ−１８）逆相高速液体クロマトグラフィーにて、０
．５Ｍトリエチルアミン炭酸バッファー（ρ１１７．５
）を用いて分取、精製した。収率は６０％であった。

（２−ｘｏＢ　　　−ヒー２゛３′−゛イデオキシ−５
−（３−アミノ）−ア１ルシチジン ー５゛−ト１フォスフェートの入　： （２−９）項で得られた２′、３“−ダイデオキシ−５
−（３−アミノ）−了りルシチジンー５゛−トリフオス
フェート０．１ｍｍｏｌを０．１Ｍ炭酸バッファー　（
ｐＨ９，０）　２０ｔｄニ溶解し、これに２０ｍｇ／ｍ
！（７）ＢＩＴＣＯＤＭＦ溶液２ｍｌを加溶液２温ｌて
４時間攪拌し。

反応せしめた。反応溶液を３０−のＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘＡ−２５（ＨＣＯ，−型）にチャージし、トリ
エチルアミン炭酸バッファー（ｐＨ７，５）のリニアグ
ラディエンド（０，１Ｍ−Ｉ　Ｍ）　５００−で溶出せ
しめた。メインピーク溶出骨（０，６〜０．７Ｍの塩濃
度にて溶出）を減圧下、乾固し、ついでメタノールで共
沸し、脱塩した。収率は５３％であった。

（２−９）項で得られた２゛、３”−ダイデオキシ−５
−（３−アミン）−了りルシチジンー５゛−トリフオス
フェート０．１ｍｍｏｌのＯ，１Ｍ炭酸ナトリウムバッ
ファー（ｐＦｆ　８．５）溶液１０ｍｔ’に、Ｎ−ヒド
ロキシルサクシンイミドビオチンエステル０．２ｍｍｏ
ｌのＤＭＦ溶液２−を添加し、室温下、４時間反応せし
め２次いで９反応液を３０ｍ１のＤＥＡＥ−３ｅｐｈａ
ｄｅｘＡ−２５（ｌＩｃＯ３−型）にチャージし、トリ
エチルアミン炭酸バッファー（９８７，５）のリニアグ
ラディエンド（０，１Ｍ−０，９Ｍ）５００＃！１！で
？６出せしめた。塩濃度０．６ｊ付近のメインピーク溶
出分を減圧下、乾固し。

ついでメタノールで共沸し、脱塩した。収率は６２％で
あった。

第３図に従い、蛍光標識あるいはビオチン標識した２”
、３゛−ダイデオキシ−７−（３−アミノ）−アリル−
７−ジアザグアノシン−５”−トリフオスフェートの合
成法を説明する。

以下（３−１）項および（３−２）項に示す２′。

ダイデオキシ−７−ゾアザグ７ノシンの合成は。

Ｗｉｎｋｅｌｅｒらの方法（Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、、
　　２６．３１１９（１９８３））に準じてフェーズト
ランスファー　グリコシレージョンにより行った。

３ｍｍｏｌの２−アミノ−４−メトキシ−７Ｈ−ピロロ
（２，３−ｄ）ピリミジンを、メチルトリオクチルアン
モニウムクロライド０．３ｍｍｏｌを含有するベンゼン
−ジメトキシエタン（４：１）２０ｍｌおよび５０％水
酸化ナトリウム水溶液２０ｒｎ１中で、３０分間攪拌し
て乳化させた。これに１−クロロ−２，３−ダイデオキ
シ−５−０−１−ルオイルー〇−エリスローベントフラ
ノース４．３ｍｍｏ　１のベンゼン溶液３０−を攪拌下
１滴下し反応せしめた。この懸濁液を水１００−および
ジクロロメタンｔｏｏｍｉで希釈し。

有機相を減圧下、濃縮した。これをメタノール２０３゛
艷に溶解し、濃アンモニア水で室温下、２４時間処理し
た。減圧濃縮し、水相を塩酸でｐＨ４に調整した。沈澱
したｐ−トルオイル酸を濾過により除去した。濾液を減
圧下、濃縮乾固した。これをメタノール１００−に懸濁
し、１０分間還流した。無機塩を濾別し、濾液を減圧下
、濃縮した。残渣を３０−のメタノールに？８解し、シ
リカゲルカラム１００艷にチャージし、ジクロルメタン
−メタノール（９５：５）で溶出した。収率は４５％で
あった。

本実施例（３−１）項で得られた２−アミノ−７−（２
’、３”−ダイデオキシ−β−Ｄ−エリスローペントフ
ラノシル）−４−メトキシ−７Ｈ−ピロロ（２，３−ｄ
）ピリミジン１．５龍Ｏ１を無水トルエン１５艷に懸濁
し、これにｐ−ナトリウムーチオクレゾレート２．６ｍ
ｍｏｌおよびヘキサミチルフオスフォリッタートリアミ
ド２．６ｍｍｏｌを加えた。これを窒素下、３時間還流
した。これに水５Ｑｍｌを加え。

クロロフォルム各５０−で２度洗浄した。水相を２Ｎ塩
酸でｐ）１２に調整し、さらに各３０−のクロロフォル
ムで２度抽出した。水相を中和後、減圧下。

蒸発濃縮した。これを１０−の水より再結晶化した。

収率は８８％であった。

以下（３−３）項および（３−４）項に示す三リン酸化
はＲｕ５ｓｅｌｌらの方法（前出）に従い、化学的方法
により行った。

（３−２）項で得られた２°、３”−ダイデオキシ−７
−ジアザグアノシンｌ　ｍｍｏｌの無水テトラヒドロフ
ラン（ＴＨＦ）溶液２０−に、　　４ｎ＋ｍｏｌのトリ
イミダゾールフォスフィニックオキシドおよび１００■
の１．１′−カルボニルジイミダゾールを加え、室温下
。

１晩攪拌して反応せしめた。次いで、トリエチルアミン
’ｌ　ｍｌおよび水５　ｍｌを加え、さらに３０分間攪
拌したのち、　　３５０．ｄのＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｄ
ｅｘ　Ａ−２５（ｌＩＣＯ３−型）にチャージし、トリ
エチルアミン炭酸バッファー（ｐＨ７，５）のリニアグ
ラディエンド（０→０．２Ｍ）４１で溶出せしめた。メ
インピーク？容出分を減圧下、蒸発乾固し、ついでメタ
ノールで共沸し、脱塩した。収率は４８％であった。

リン酸化はまた５次のように行うとともできる。

５　ｍｌの無水ジオキサン中で１．２ｍｍｏｌの亜リン
酸フォスフオクロライド、　２．４ｍｍｏｌの（１−Ｈ
）−１，２，４−）リアシライドおよび２．抛ｍｏｌの
トリエチルアミンを混合し、　１０〜１５℃で３０分、
そして室温で１時間撹拌した。これに（３−２）項で得
られた２”、３゛−ダイデオキシ−７−デアザグアノシ
ン１ｍｍｏｌを添加し、室温で１時間攪拌した。これに
水冷下、水５　ｍｌを加え１反応液を室温で１８時間攪
拌した。反応溶液をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーによりクロロフォルム−メタノールのステソプグラデ
ィエントで溶出せしめ、精製した。

Ｄｏｗｅｘ　５０　（Ｎａ”型）とＬｏｎｇの水中で、
室温下、４時間撹拌してナトリウム塩に変換した。収率
は５８％であった。

（３−４）２゛、３′−゛イブオキシーツー始ヱ犬久２
’、　３’−ダイデオキシ−７−ジアザグア、ノソンー
５゛−モノフォスフェートの三リン酸化は、　Ｄ、　Ｅ
。

ｔｌｏａｒｄ　らの方法（前出）により行った。

（３−３）項で得られた２”、３”−ダイデオキシ−７
−デアザグアノシン−５゛−モノフオスフエートの無水
トリブチルアンモニウム塩Ｑ、１ｍｍｏｌのＤＭＦン容
液１　ｍｌｌに、１．１°　−カルボジイミタ゛ソ゛−
ル０．５ｍｍｏ　ＩのＤＭＦ溶液１　ｍｌｌを加え、室
温にて５時間反応せしめた。メタノールを０．８ｍｍｏ
ｌ加え、３０分間室温にて攪拌した後、トリプチルアン
モニウムピロフォスフェｈｏ、５ｍｍｏｌのＤＭＦ？容
？夜５　ｍｌをカロえ。

室温にて１晩撹拌した。生成した沈澱をＤＭＦにて洗浄
後、上澄液と共に等量のメタノールで処理し。

減圧下、濃縮した。残渣を６ＱｍｌのＤＥＡＥ−５ｅｐ
ｈａｄｅｘＡ−２５（ｌｌｃＯ３−型）にチャージし、
トリエチルアミン炭酸バッファー（ｐＨ７，５）のリニ
アグラディエンド（Ｏ→０．４Ｍ）　　１１で？８出せ
しめた。メインピーり溶出分を減圧下、乾固し、ついで
メタノールで共沸し、脱塩した。収率は８１％であった
。

２°、３゛−ダイデオキシ−７−水銀化−７−デアザグ
アノシン−５゛−トリフオスフェートは、　Ｄａｌｅら
の方法（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１４．２４４７
−２４５７（１９７５）　）に準じて合成した。

（３−４）項で得られた２”、３゛−ダイデオキシ−７
−デアザグアノシン−５”−トリフオスフェート１ｍｍ
ｏｌをＯ，１Ｍ酢酸ナトリウムバッフｙ　−（ｐＨ６，
０１００艷に溶解し、これに５ｍｍｏｌの酢酸水銀を加
え。

５０℃にて４時間反応せしめた。その後、溶液に水冷下
、　　９ｍｍｏｌの塩化リチウムを加え、酢酸エチルに
て数回抽出し、塩化第２水銀を除去した。酢酸エチル抽
出液中の水銀量を４．４”−ビス（ジメチルアミノ）チ
オベンゾフェノンを用いて測定したところ、ヌクレオチ
ドの水銀化率は９０〜９５％であった。次いで水相に３
倍量の水冷エタノールを加え、沈澱を生じせしめ、これ
を遠心分離して沈澱を回収した。この沈澱は水冷エタノ
ールで１次いでジエチルエーテルにて洗浄した後、風乾
せしめた。収率は９６％であった。

２゛、３”−ダイデオキシ−７−水銀化−７−デアザグ
アノシン−５゛−トリフオスフェートのアリルアミン化
は、　Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍらの方法（Ｊ、　Ａｍ、　Ｃ
ｈｅｍ。

Ｓｏｃ、、　９８．１５８７（１９７６））に準じて行
った。

（３−５）項で得られた２’、３’−ダイデオキシ＝７
−水銀化−７−デアザグアノシン−５゛−トリフオスフ
ェート０．５ｍｍｏｌを０．１Ｍの酢酸ナトリウムバッ
ファー（ｐＨ５，０）　２５−に溶解した。これに２Ｍ
のアリルアミン酢酸塩水溶液３１ｎ１を加え９次いで４
　ｍｌの水に溶かした塩化パラジウムカリウム（ＫｚＰ
ｄＣＩ４）　０．５ｍｍｏｌを加えた。溶液は徐々に黒
色となり、器壁に金属水銀が析出した。室温にて２４時
間反応後９反応溶液を０．４５μのメンプランフィルタ
ーにて濾過し、金属水銀を除去した。濾液を１００ｍ１
’のＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ａ−２５にチャージ
し、これを０．１９の酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ
５，０）　１００ｍ１で洗浄後、トリエチルアミン炭酸
バッファー（ｐＨ７，５）のリニアグラディエンド（０
，１Ｍ→０．６Ｍ）１ｐで溶出せしめた。メインピーク
溶出骨を減圧下、乾固し、ついでメタノールで共沸し、
脱塩した。次いで、この溶出物を０ＤＳ（Ｃ−１８）逆
相高速液体クロマトグラフィーにて、０．５Ｍ）リエチ
ルアミン炭酸バッファー（ｐＨ７，５）を用いて分取、
精製した。収率は６０％であった。

（３−６）項で得られた２”、３゛−ダイデオキシ−７
−（３−アミノ）−アリル−７−ジアザグア／シフ　−
５’−１−リフオスフェート０．１ｍｍｏｌを０．１Ｍ
炭酸バッファー（ｐＨ９，０）　２０ｍ１に熔解し、こ
れに２０ｍｇ／−のＴＭＲＩＴＣのＤＭＦ溶液２−を加
え、室温にて４時間攪拌し１反応せしめた。反応溶液を
３ＱｍｌのＤ１シＡＥ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ａ−２５（
ＩＩｃｏ：ｌ−型）にチャージし。

トリエチルアミン炭酸バッファ−（ｐＨ７，５）のリニ
アグラディエンド（０，１Ｍ→ＩＭ）　５００ｍ１で？
容出せしめた。メインビーク熔出骨（０，６〜０．７Ｍ
の塩濃度にて溶出）を減圧下、乾固し、ついでメタノー
ルで共沸し、脱塩した。収率は５２％であった。

（３−６）項で得られた２’、　３’−ダイデオキシ−
７−（３−アミノ）−アリル−７−ジアザグアノシン−
５゛−トリフオスフエート０．１ｍｍｏｌの０．１Ｍ炭
酸ナトリウムバッファー（ｐＨ８，５）溶液１０ｍ２に
。

Ｎ−ヒドロキシルサクシンイミドビオチンエステル０．
２ｍｍｏｌのＤＭＦ溶液２　ｍｌを添加し、室温下、４
時間反応せしめ２次いで１反応液を３０ｍ１のＤＥＡＥ
−５ｅｐｈａｄｅｘ　Ａ−２５（ＨＣＯ＋−型）にチャ
ージし、トリエチルアミン炭酸バッファー（ｐＨ７，５
）のリニアグラディエンド　（０，１Ｍ−０，９Ｍ）５
００ｍｌで溶出せしめた。塩濃度０．６Ｍ付近のメイン
ピーク溶出骨を減圧下、乾固し、ついでメタノールで共
沸し、脱塩した。収率は７１％であった。

また、７−ジアザグアノシンＢａＲ体は、プレＱ１ヌク
レオシドを原料として合成してもよい。プレＱ１ヌクレ
オシドは、７−位の炭素にメヂレンをスペーサーとして
介して１級のアミノ基が結合されており、単に２′、３
″−位をダイデオキシ体とし、５″−位に三リン酸を結
合させるだけでよく。

反応が容易であり１合成に有利である。

第４図に従い、蛍光標識あるいはビオチン標識した２’
、　３’−ダイデオキシ−７−（３−アミノ）−アリル
−７−ジアザアデノシン−５゛−トリフオスフエートの
合成法を説明する。

以下（ｔ−１）項から（４−５）項までに示す２゛、３
°−ダイデオキシ−７−ジアザアデノシン（２°、３″
−ダイデオキシッペルシジン）の合成は。

Ｋ、　Ａｎｚａｉらの方法（Ａｇｒ、ｌ３ｉｏ１．Ｃｈ
ｅｍ、、　３７．３４５−３４８（１９７３）　）に従
って行なった。

１０ｍｍｏ　ｌのツベルクリンを２００ｍｊ！の無水ピ
リジンに懸濁させ、これにまず２０ｍｍｏ　＋のジメト
キシトリチルクロライドを撹拌下、室温で添加し、　１
８時間後、さらに１０ｍｍｏｌのジメトキシトリチルク
ロライドを添加し、さらに３日間攪拌し９反応せしめた
。

反応溶液を氷冷した炭酸ナトリウム溶液に添加し。

生成物をクロロフォルムで抽出し、ついで溶液を減圧下
、乾固した。これを酢酸エチルより再結晶化した。収率
は３３％であった。

ビシナルジオールの脱離は、Ｅ、ｖｅｄｅｊｓ　らの方
法Ｕ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、、　３９　（２５）、　
３６４１　（１９７４））により行った。

本実施例（４−１）項で得られた５゛−０−ジメトキシ
トリチルッペルシジンｌ　ｍｍｏｌのピリジン−トルエ
ン（１：　２）懸濁液に、Ｎ、Ｎ’　　−チオカルボニ
ルビスイミダゾール１．１ｍｍｏｌを加え、窒素下、２
時間、室温で攪拌した。溶媒を減圧下、除去し、エーテ
ルで残渣を洗浄した。５’　−０−ジメトキシトリチル
ッペルシジンのチオカルボネートをメタノールより再結
晶化した。収率は７８％であった。

（４−２）項で得られた５“−〇−ジメトキシトリチル
ッベルシジンのチオカルボネート０．７ｍｍｏｌをヨウ
化イソプロピル３ｏ−中で、窒素下、５時間還流した。

溶媒を減圧下、情夫し、残渣を９０％エタノールに溶解
後、これに亜鉛末１ｇを加え、室温下、　１８時間攪拌
した。沈澱を除去し、濾液を減圧下、蒸発乾固し、これ
をメタノールより再結晶化した。収率は３３％であった
。

（４−３）項で得られた５’　−０−ジメトキシトリチ
ル−２゛、３”−ダイデオキシ−２゛−７−ゾアザアデ
ノシネン０．５ｍｍｏ＋のジオキサン溶；夜２５ｍ１に
。

１０％パラジウム−カーボン触媒を１１５■加え、１気
圧の水素圧下にて２５℃で１時間還元せ−しめた。

反応後、触媒を濾別後、濾液を減圧下、乾固した。

残渣をベンゼン−石油エーテルから再結晶化した。

収率は８０％であった。

（４−４）項で得られた５”−０−ジメトキシトリチル
−２’、　３’−ダイデオキシ−２′−７−ジアザアデ
ノシン１ｍｍｏｌのクロロホルム溶’ｆＩ　２０　ｍｌ
に、水冷下、１．１当量の乾燥塩化水素ガスを撹拌下、
ゆっくりと加え、約３０分間、水冷下、脱トリチル化さ
せた。生成した沈澱を濾別後、クロロホルムで洗浄した
後、ベンゼン−エタノール（９０：　１０ｖ／ｖ）より
再結晶化した。収率は６７％であった。

以下（４−６）項および（４−７）項に示す三リン酸化
は、　Ｒｕ５ｓｅｌｌ　らの方法（前出）に従い。

化学的方法により行なった。

（４−５）項で得られた２゛、３”−ダイデオキシ−７
−ジアザアデノシン１　ｍｍｏｌの無水テトラヒドロフ
ラン（ＴＩＩＦ）　？８液２０−に、　　４ｍｍｏｌの
トリイミダゾールフォスフィニソクオキシドおよび１０
０■の１．１゛−カルポニルジイミダールを加え、室温
下。

１晩攪拌して反応せしめた。次いで、トリエチルアミン
２ｄおよび水５−を加え、さらに３０分間攪拌したのち
、３５０−のＤＥＡＲ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ａ−２５（
ｌｌＣＯ＊−型）にチャージし、トリエチルアミン炭酸
バッファー（ｐＨ７，５）のリニアグラディエンド（０
−０，２Ｍ）４βで溶出せしめた。メインピーク溶出分
を減圧下、蒸発乾固し、ついでメタノールで共沸し、脱
塩した。収率は５８％であった。

リン酸化はまた５次の様に行うこともできる。

５ｎｄｌの無水ジオキサン中で１　、２ｍｍｏ　ｌの亜
リン酸フォスフオクロライド、　　２．４ｍｍｏｌの（
１−Ｈ）−Ｌ２，４−トリアシライドおよび２．０ｍｍ
ｏｌのトリエチルアミンを混合し、１０〜１５°Ｃで３
０分、そして室温で１時間攪拌した。これに（４−５）
項で得られた２’、　３’−ダイデオキシ−７−ジアザ
アデノシン１ｍｍｏｌを添加し、室温で１時間攪拌した
。これに氷冷下、水５−を加え２反応液を室温で１８時
間攪拌した。反応溶液をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーによりクロロホルム−メタノールのステップグラ
ディエンドで？守山せしめ、精製した。

Ｄｏｗｅｘ　５０　（Ｎａ”型）とｉｏ−の水中で、室
温下、４時間攪拌してナトリウム塩に変換した。収率は
５３％であった。

２”、３′−ダイデオキシ−７−デアザアデノシン−５
゛−モノフォスフェートの三リンＭ化は、　Ｄ、　Ｅ。

１１ｏａｒｄらの方法（前出）により行った。

（４−６）項で得られた２’、　３’−ダイデオキシ−
７−ジアザアデノシン−５゛−モノフオスフエートの無
水トリブチルアンモニウム塩０．１ｍｍｏｌの［）ＭＦ
）容？夜１艷に、　１．１’−カルボジイミダソ゛−ル
０．５ｍｍｏｌのＤＭＦ溶液１　ｍｌを加え、室温にて
５時間反応せしめた。メタノールを０．８ｍｍｏｌ加え
、３０分間室温にて撹拌した後、トリブチルアンモニウ
ムピロフォスフェート０．５ｍｍｏｌの［１ＭＦ溶液５
−を加え、室温にて１晩攪拌した。生成した沈澱をＤＭ
Ｆにて洗浄後、上澄液と共に等量のメタノールで処理し
、減圧下、濃縮した。残渣を６ＱｍｌのＤＥＡＥ−Ｓｅ
ｐｈａｄｅｘ　Ａ−２５（ＩＩＣＯ，−型）にチャージ
し、トリエチルアミン炭酸バッファー（ｐｉ（７，５）
のリニアグラディエンド（０−０，４Ｍ）　　３１で溶
出せしめた。メインビーク溶出分を減圧下、乾固し、つ
いでメタノールで共沸し、脱塩した。収率は８１％であ
った。

（４−８）２′、Ｕ゛−°イブオキシ−ツー２≦　ヒー
に云ヱエヱヱ左乞Ｚ二壮二工丈ヱエ スフエートの人Ｊ　： ２”、３′−ダイデオキシ−７−水銀化−７−デアザア
デノシン−５゛−トリフオスフェートは、　Ｄａｔｅら
の方法（前出）に準じて合成した。

（４−７）項で得られた２°、３゛−ダイデオキシ−７
−ジアザアデノシン−５”−トリフオスフェートｌ　ｍ
ｍｏｌを０．１Ｍ酢酸ナトリウムバッフ７−　（ｐＨ６
，０）１００ｍ１！に溶解し、これに５ｍｍｏｌの酢酸
水銀を加え。

５０℃にて４時間反応せしめた。その後、溶液に水冷下
、　　９ｍｍｏｌの塩化リチウムを加え、酢酸エチルに
て数回抽出し、塩化第２水銀を除去した。酢酸エチル抽
出液中の水銀量を４，４゛−ビス（ジメチルアミノ）チ
オベンゾフェノンを用いて測定したところ、ヌクレオチ
ドの水銀化率は９０〜９５％であった。次いで水相に３
倍量の水冷エタノールを加え。

沈澱を生じせしめ、これを遠心分離して沈澱を回収した
。この沈澱は水冷エタノールで９次いでジエチルエーテ
ルにて洗浄した後、風乾せしめた。

収率は８９％であった。

（４−９）２°、３°−゛イブオキシーツ−（３−アミ
ノ）−アリル−７−−゛アザアー゛ノシ２”、３゛−ダ
イデオキシ−７−水銀化−７−デアザアデノシン−５′
＝トリフオスフエートのアリルアミン化は、　Ｂｅｒｇ
ｓｔｒｏｍらの方法（前出）に準じて行った。

（４−８）項で１１られた２°、３゛−ダイデオキシ−
７−水銀化−７−デアザアデノシン−５゛−トリフォス
フエ）　０．５ｍｍｏｌをＯ，ＬＭの酢酸ナトリウムバ
ッファー（ｐＨ５，０）２５艷にｔ８解した。これに２
Ｍのアリルアミン酢酸塩水溶液３−を加え１次いで４ｍ
ｌの水に溶かした塩化パラジウムカリウム（ＫｚＰｄＣ
ｌａ）０．５…ｍｏｌを加えた。溶液は徐々に黒色とな
り、器壁に金属水銀が析出した。室温にて２４時間反応
後。

反応溶液を０．４５μのメンブランフィルタ−にて濾過
し、金属水銀を除去した。濾液を１００ｍ１のＤＥＡＥ
−Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ａ−２５にチャージし、これをＯ
，ＬＭの酢酸ナトリウムバッファー（１）Ｈ５，Ｏ）　
１００１１１１で洗浄後。

トリエチルアミン炭酸バッファー（ｐＨ７，５）のリニ
アグラディエンド（０，１Ｍ−０，６Ｍ）　　１１で？
容出せしめた。メインピーク溶出分を減圧下、乾固し、
ついでメタノールで共沸し、脱塩した。次いで、この溶
出物を０ＤＳ（Ｃ−１８）逆相高速液体クロマトグラフ
ィーにて、０．５Ｍ１−リエチルアミン炭酸バッファー
　（ｐｌ＋７．５）を用いて分取、精製した。収率は６
１％であった。

（４−９）項で得られた２’、　３’−ダイデオキシ−
７−（３−アミノ）−アリル−７−ジアザアデノシン−
５°−トリフオスフエート０．１ｍｍｏｌをＯ，１Ｍ炭
酸バッファー（ｐＨ９，０）２０−に溶解し、これに２
０ｍｇ／−のＦＩＴＣのＤＭＦ溶液２ｒｎ１を加え、室
温にて４時間攪拌し１反応せしめた。反応溶液を３０ｍ
１のＤＥＡＥ−３ｅｐｈａｄｅｘＡ−２５（ｔｌｃＯ３
−型）にチャージし、トリエチルアミン炭酸バッファー
（ｐＨ７，５）のリニアグラディエンド（０，ＩＭ→Ｉ
Ｍ）　　５００−で溶出せしめた。

メインビーク溶出分く０．６〜０．７Ｍの塩）濃度にて
溶出〉を減圧下、乾固し、ついでメタノールで共沸し。

脱塩した。収率は５８％であった。

（４−９）項で得られた２’、　３’−ダイデオキシ−
７−（３−アミノ）−アリル−７−ジアザアデノシン−
５”−トリフォスフニー）　０．１ｍｍｏｌのＯ，１Ｍ
炭酸ナトリウムバッファー（ｐＨ８，５）溶液１０−に
。

Ｎ−ヒドロキシルサクシンイミドビオチンエステル０　
、２ｍｍｏ　ＩのＤＭＦ溶液２−を添加し、室温下、４
時間反応せしめ１次いで１反応液を３０−のＤＥＡＥ−
Ｓｅｐｈａｄｅｘ＾−２５（ＨＣＯ，−型）にチャージ
し、トリエチルアミン炭酸バッファー（ｐＨ７，５）の
リニアグラディエンド（０，１Ｍ→０．９Ｍ）　　５０
０−で溶出せしめた。塩濃度０．６Ｍ付近のメインピー
ク溶出骨を減圧下、乾固し。

ついでメタノールで共沸し、脱塩した。収率は６３％で
あった。

ｌ力ｔイろ１５　二　　ＤＮＡ　のｌ゛　−禦ｉ′実施
例４．　　（４−１０）項で得られたＦＩＴＣにより蛍
光標識された２゛、３°−ダイデオキシ−７−（３−ア
ミノ）−アリル−７−ジアザアデノシン−５′−トリフ
オスフエートを用いて、以下の条件でＤＮＡの標識化を
行なった。

１００ｍＭカコジル酸ナトリウム（ｐＨ７，２）、８ｍ
Ｍ　Ｍｇｃｔ２゜１ｍＭ２−メルカプトエタノール、１
００μｇ　／　ｍ１ＤＮＡおよび０．５ｍＭ　ＦＩＴＣ
標識化−２’、　３’−ダイデオキシ−７−（３−アミ
ン）−アリル−７−ジアザアデノシン−５”−トリフオ
スフェートに、１ユニツトのターミナルデオキシヌクレ
オチジルトランスフェラーゼを加えて３７℃で１時間反
応せしめ。

ＤＮＡの３°−末端に蛍光標識されたダイデオキシ体を
結合せしめた。反応終了後、セファデックスＧ１００で
ゲル濾過により蛍光標識化ＤＮＡを分離した。

ＦＩＴＣの蛍光強度から、　　ＤＮＡ１分子当り１個の
割合で蛍光標識されたことが判明した。

ｇ６：ＤＮＡのビオチン標識 実施例４．　　（４−１１）項で得られたビオチンによ
り標識された２゛、３”−ダイデオキシ−７−（３−ア
ミノ）−アリル−７−ジアザアデノシン−５“−トリフ
ォスフエートを用いて、以下の条件でＤＮＡの標識化を
行なった。

１００ｍＭカコジル酸ナトリウム（ｐＨ７、２）　、８
ｍＭ　ＭｇＣ１ｚ。

ｌｆｆ１Ｍ２−メルカプトエタノール、１００μｇ　／
　ｍ１ＤＮＡおよび０．５ｍＭ　　ビオチン標識化−２
’、　３’−ダイデオキシ−７−（３−アミノ）−アリ
ル−７−ジアザアデノシン−５”−トリフオスフェート
に。

１ユニツトのターミナルデオキシヌクレオチジルトラン
スフェラーゼを加えて３７℃で１時間反応せしめ、　　
ＤＮＡの３゛−末端にビオチン標識されたダイデオキシ
体を結合せしめた。反応終了後、セファデックス　Ｇ１
００でゲル濾過によりビオチン標識化ＤＮＡを分離した
。

ビオチン標識されたＤＮＡをニトロセルロースフィルタ
ー上にｌｐｇ、　ｌｏｐｇ、　１１００ｐ、　ｌｎｇ、
　１０ｎｇ、　１０００ｇおよび１μｇずつスポットし
、固定したものについて、アマジャム製ビオチン−アビ
ジン検出キ。

トを用いて検出感度を調べた。その結果、　ｔｏｐｇ以
上をスポットしたものに関しては明瞭に判別できたが、
ｌｐｇをスポットしたものは辛うじて判別できたにすぎ
ず、従って検出感度は数ｐｇ／スボ、トと推定された。

（発明の効果） 本発明の修飾ヌクレオチドである標識化ダイデオキシリ
ボヌクレオチド誘導体によれば、遺伝子をその３”−側
にのみ選択的に標識することができ。

しかも簡便かつ高精度の標識が可能である。

従って１本発明修飾ヌクレオチドにより標識されたポリ
ヌクレオチドおよび／もしくはオリゴヌクレオチドは、
特異ＤＮＡまたはＲＮＡ分子の存在を決定したりあるい
は遺伝病を診断する際の有用なプローブとなり得、また
遺伝子の配列分析に用いることも可能である。

さらに１本発明修飾ヌクレオチドは、そのリポータ一部
分に積極的に毒素を結合することにより。

特定の生物学的効果を有する化学的作用剤２例えば抗癌
剤、の開発の展望を開く。

４、ス丁の　ζ゛−なう■ 第１図は本発明の標識化−２°、３゛−ダイデオキシ−
５−（３−アミン）−アリルウリジン−５°−トリフオ
スフェートの合成を示す略図である。

第２図は本発明の標識化−２゛、３”−ダイデオキシ−
５−（３−アミノ）−アリルシチジン−５゛−トリフオ
スフェートの合成を示す略図である。

第３図は本発明の標識化−２′、３′−ダイデオキシ−
７−（３−アミノ）−アリル−７−ジアザグアノシン−
５゛−トリフオスフエートの合成を示す略図である。

第４図は本発明の標識化−２’、　３’−ダイデオキシ
−７−（３−アミノ）−アリル−７−ジアザアデノシン
−５”−トリフオスフェートの合成を示す略図である。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の一般式を有する標識された修飾ヌクレオチド： Ｐ−Ｓ−Ｂ−Ｒ−Ｓｉｇ ここで、Ｐはリン酸部分、Ｓは糖部分、Ｂは核酸塩基部
   分、Ｓｉｇは該核酸塩基部分Ｂに共有結合する化学的部
   分、そしてＲは該核酸塩基部分Ｂと該化学的部分Ｓｉｇ
   とを結合するスペーサー部分であり；該リン酸部分Ｐは
   該糖部分Ｓの５′−位に結合し；該糖部分Ｓはその２′
   −位および３′−位が水素のダイデオキシ型であり；該
   核酸塩基部分Ｂはピリミジン誘導体または７−デアザプ
   リン誘導体であって、該核酸塩基部分Ｂがピリミジン誘
   導体である場合はそのＮ−１位により、また該Ｂが７−
   デアザプリン誘導体である場合はそのＮ−９位により、
   該糖部分Ｓの１′−位に結合し；該スペーサー部分Ｒは
   、該核酸塩基部分Ｂがピリミジン誘導体の場合はその５
   位に、また該Ｂが７−デアザプリン誘導体の場合はその
   ７位に結合し；そして該化学的部分Ｓｉｇは該核酸塩基
   部分Ｂと結合するとそれ自身を信号表示することができ
   、これによりそれ自身を自己検出するかまたはその存在
   を知らしめる。 ２、前記一般式において、前記化学的部分Ｓｉｇが前記
   核酸塩基部分Ｂと、前記核酸塩基部分Ｂがピリミジン誘
   導体である場合はそのＣ−５位で、また前記Ｂが７−デ
   アザプリン誘導体である場合はそのＣ−７位で、結合し
   ている特許請求の範囲第１項に記載の修飾ヌクレオチド
   。 ３、前記一般式において、前記化学的部分Ｓｉｇが電子
   高密度成分、磁気成分、酵素成分、ホルモン成分、ビタ
   ミン成分、放射性同位元素成分、金属含有成分、蛍光成
   分および抗原抗体成分からなるグループより選択される
   成分で構成される特許請求の範囲第１項に記載の修飾ヌ
   クレオチド。 ４、次の一般式を有する少なくとも一種の標識化がなさ
   れた修飾試薬、を用いて標識されたポリヌクレオチドお
   よび／もしくはオリゴヌクレオチド： Ｐ−Ｓ−Ｂ−Ｒ−Ｓｉｇ ここで、Ｐはリン酸部分、Ｓは糖部分、Ｂは核酸塩基部
   分、Ｓｉｇは該核酸塩基部分Ｂに共有結合する化学的部
   分、そしてＲは該核酸塩基部分Ｂと該化学的部分Ｓｉｇ
   とを結合するスペーサー部分であり；該リン酸部分Ｐは
   該糖部分Ｓの５′−位に結合し；該糖部分Ｓはその２′
   −位および３′−位が水素のダイデオキシ型であり；該
   核酸塩基部分Ｂはピリミジン誘導体または７−デアザプ
   リン誘導体であって、該核酸塩基部分Ｂがピリミジン誘
   導体である場合はそのＮ−１位により、また該Ｂが７−
   デアザプリン誘導体である場合はそのＮ−９位により、
   該糖部分Ｓの１′−位に結合し；該スペーサー部分Ｒは
   、該核酸塩基部分Ｂがピリミジン誘導体の場合はその５
   位に、また該Ｂが７−デアザプリン誘導体の場合はその
   ７位に結合し；そして該化学的部分Ｓｉｇは少なくとも
   １個の炭素原子を含む化学基であって、該核酸塩基部分
   Ｂと結合するとそれ自身を信号表示することができ、こ
   れによりそれ自身を自己検出するかまたはその存在を知
   らしめる。 ５、前記一般式において、前記化学的部分Ｓｉｇが前記
   核酸塩基部分Ｂと、前記核酸塩基部分Ｂがピリミジン誘
   導体である場合はそのＣ−５位で、また前記Ｂが７−デ
   アザプリン誘導体である場合はそのＣ−７位で、結合し
   ている特許請求の範囲第４項に記載のポリヌクレオチド
   および／もしくはオリゴヌクレオチド。 ６、前記一般式において、前記化学的部分Ｓｉｇが電子
   高密度成分、磁気成分、酵素成分、ホルモン成分、ビタ
   ミン成分、放射性同位元素成分、金属含有成分、蛍光成
   分および抗原抗体成分からなるグループより選択される
   成分で構成される特許請求の範囲第４項に記載のポリヌ
   クレオチドおよび／もしくはオリゴヌクレオチド。