JPS61230058A - アルブミンの定量法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 イ０発明の目的 厳１ユＪソ１」立型 血清中の総タンパク量、アルブミン／グロブリン比は、
栄養不足、肝障害、腎疾患、炎症性疾患、自己免疫性疾
患等の判定の為に大きな臨床的意義を有している。タン
パク尿と腎障害とが密接に関係していることは周知の事
実であり、近年尿タンパクを分析することによって腎障
害の本質を探ろうとする研究が盛んになった。

血清タンパクのある種のものは腎糸球体を通過するが、
糸球体で濾過されたタンパク質の９５％以上が尿細管で
再吸収される。タンパク尿とは、尿中に排泄きれる一日
の総タンパク量が１００〜１５０ｍｇ以上とされている
（石本他、総合臨床２７巻、１２２３〜１２２９．１９
７８）、正常人では、尿タンパクの約８０％がアルブミ
ンであり、血漿タンパクの中では比較的分子量の小さい
タンパク質が占めている。

現在、タンパク尿は糸球体由来のものと尿細管由来のも
のと二種類に分類されている。糸球体腎炎を代表とする
多くの腎疾患では、尿タンパクのほとんどが分子量８７
．０００のアルブミンで構成されており、分子量１５万
以上および６万以下のタンパク質はいずれもわずかであ
る（糸球体性タンパク尿）、また、Ｆａｎｃｏｎｉ症候
群や重金属、薬物中毒による尿細管障害では、糸球体で
るかきれたタンパク質が再吸収きれずに尿中に排泄され
る。しかし、一般に一日の尿総タンパク量は比較的少な
く、主に６万以下の低分子量タンパク質から構成きれて
いる（尿細管性タンパク尿）。

従って、アルブミンの定量は疾患、特に腎障害による疾
患の原因の研究や治療診断に必須のものであり、臨床上
の重要性も大きい。

本発明は、低温プラズマ処理による親木化膜担体（特願
昭５８−１９９８５６．特願昭５９−２７７６５６）を
利月した酵素免疫測定法によるア、ルプミンの定量法に
関し、更に詳しくは、一定量のアルデヒド基を導入した
膜担体に抗アルブミン抗体またはアルブミンを接触させ
その一定量を固定化し、グルコースオキシダーゼ（ＣＯ
Ｄ）またはホースラディツシュパーオキシダーゼ（ＨＲ
Ｐ）などの酵素で標識したアルブミンまたは抗ア、　　
　　　　　　ルブミン抗体と種々の免疫反応を起こさせ
、その酵素活性を比色または電気的出力として測定し、
アルブミンの定量を行なう方法およびそのシステムに関
する。

良來五韮遣 アルブミンを定量するには、アルブミン−グロブリンを
分別して求める方法（塩析法、泳動法）と、アルブミン
だけを特異的に定量する方法（色素法）の二つに大別で
きる。前者のうち塩析法の歴史は古いが、電気泳動法の
実用化と共に殆ど用いられなくなった。

色素法は臨床的に広く採用されている方法で、例えばＢ
ＣＧ法（Ｄｏｕｍａｓ　ａｔ　ａｌ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｃ
ｈｉｓ、　Ａｃｔａ、、　３１．８７．１９７１）は、
非イオン界面活性剤Ｂｒ１ｊ−３５を加えたｐＨ４，２
のクエン酸緩衝液に溶解溶解したブロムクレゾールグリ
ーン（Ｂｒｏｍｃｒｅｓｏｌｇｒｅｅｎ、　Ｂ　ＣＧ　
）試薬とアルブミンの結合による６３０ｎｍの吸光度の
増加を測定する方法である。

また、ｌ：５ｂａｃｈ法、末吉法、色素法などの簡便法
が臨床的に用いられている。

最近開発されたダマジ−ブリリアントブルー０２００法
（トネインーＴＰ法キット、大塚アッセイ）は、１０〜
１０００ｍｇ／Ｌの濃度のタンパク質測定を可能にした
が、これは尿中の総タンパク質の定量であってアルブミ
ンの定量ではない。

特開昭５３−４７５１７にはセルロース膜を持ちいる抗
原タンパク質の定量法が開示されていが、セルロース膜
はありかいすらく再現性に乏しい。

また、抗ヒトアルブミン抗体感作赤血球またはラテック
ス粒子を用いる定量法（特開昭５４−８０４１０、特開
昭５５−３０６５４）では、検体の希釈率が大きくなり
誤差が大きい。

明が　　しようとするー　。

電気泳動法による分画は高い分離能があるが、分画帯の
検出に用いる色素はタンパク質の種類によって吸着能に
差があり、定量性の点で問題がある。その上、例え簡便
なセルローズアセテート膜を使用しても、操作が繁雑で
熟練を、要し、測定には長時間を要する。

ＢＣＧ法では、アルブミン標準液と血清等生体内試料中
に含まれるアルブミンとは呈色の時間経過が異なり、後
者では呈色が徐々に増強し、また高温になるほど強くな
るので、測定時間と温度のずれが大きな誤差につながる
。また、ガンマグロブリンも２〜３％の交差反応性を示
し、アルブミンのみの定性定量とは言いがたい（Ｄｏｕ
ｍａｓ　ｅｔａｌ、　Ｃ１１ｎ、　Ｃｈｉｒｎ、　Ａｃ
ｔａ、、　３１．８７．１９７１）。加えて検出下限は
２０　ｇ／Ｌで尿中アルブミンの検出には利用できない
。

一方、Ｅｓｂａｃｈ法、末吉法、色素法などの簡便法の
検出感度の下限は３００〜５００ｍｇ／Ｌにすぎず、か
つアルブミン特有の反応とは言いがたい。

従って、検体を希釈および濃縮することなく測定できる
感度を有し簡便で正確かつ経済的に測定できる測定方法
が望まれていた。

口０発明の構成 −、を　決するための　段 以上の状況を鑑みて、本発明者等は、培養液、血清、ま
たは尿中の、特に尿に含まれるアルブミンを正確、簡単
、かつ経済的に定量する測定法について鋭意研究を重ね
た結果、本発明を完成するに至ったものである。

１）膜担体の処理 特願昭５８−１９９８５６および特願昭５９−２７７６
５６に記載の方法と同様に、多孔性ポリオレフィン膜等
を必要に応じアセトンで処理し、低温プラズマ処理して
親水化する。低温プラズマ処理は膜の全面または一部分
、両面または片面の何れでも良い０次いで該膜を０．０
２〜１０％オクタメチレンジアミン水溶液で処理する。

この際のオクタメチレンジアミン水溶液の濃度によって
、所望量のタンパク質を膜に結合させることができる。

前記の濃度以下では膜にほとんどタンパク質は結合せず
、前記の濃度以上では膜に結合するタンパク質量が飽和
する０次いでリン酸緩衝液（以下ＦＢと略記）、リン酸
緩衝食塩水（以下ＰＢＳと略記）などで洗浄した後、グ
ルタルアルデヒドなどでアルデヒド基を導入する。ＦＢ
、ＰＢＳなどで洗浄した後、全面低温プラズマ処理した
膜は直径０，５〜１５ｍｍに切断する。

２）抗アルブミン抗体またはアルブミンの固相化以上の
処理をした膜担体に抗アルブミン抗体またはアルブミン
を同相化する。抗アルブミン抗体は以下の方法で得られ
る。グロブリンを含まない高純度のアルブミンをアジュ
バントと共に、ウサギ、ヤギ、モルモットなどの動物に
数回免疫注射１、た後、採血し、抗血清を採取し防腐剤
を加え保存し、抗アルブミン抗体とする。また、市販の
抗アルブミン抗体も使用できる。抗アルブミン抗体はＰ
ＢＳなどで、比色定量する場合には１５００〜３０００
倍に、電極で測定する場合には１００〜４００倍に希釈
する。アルブミンは０．００１〜４μｇ／μｌ好ましく
は０８０５〜０．２μｇ／μｌとなるように希釈する。

膜上に希釈液を滴下する場合には５〜１００ａ！好まし
くは１０〜２０μ！の希釈液を滴下し、膜を希釈液に浸
漬する場合には１００〜１０００μｌ好ましくは３００
〜４００μｍの希釈液に浸漬する。４℃〜３０℃で１０
分〜４８時間好ましくは５時間〜２４時間放置し固相化
する０次いでＦＢ、ＰＢＳなどで洗浄し、ヤギ、ウサギ
、モルモットなどの正常血清、牛血清アルブミンなどで
膜上の未反応基をブロックし、ＦＢ、ＰＢＳなどで洗浄
する。

３）免疫反応 以上の様に処理した膜上で、以下の様に免疫反応を起こ
させる。

ａ、サンドイツチ法 被検アルブミン溶液５０〜５００μｌを、抗アルブミン
抗体を固相化した膜担体に接触させ、１０分〜４８時間
好ましくは３０分〜３時間、４〜３０℃好ましくは２５
℃で免疫反応を起こさせる１次いでまたは同時に、ツイ
ーン（商品名、Ｔｗｅｅｎ）などの界面活性剤を含むＰ
ＢＳなどで１０〜３０００倍に希釈した酵素標識抗アル
ブミン抗体を加え、４〜３７℃好ましくは３０〜３５℃
で、１０分〜２時間好ましくは３０〜６０分間免疫反応
を起こきせる。この際用いられる酵素としては、ホース
ラディツシュペルオキシダーゼ、グルコースオキシダー
ゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グルコース−６−リン
酸脱水素酵素などが挙げられる。酵素標識抗アルブミン
抗体は、グルタルアルデヒドを架橋剤とし酵素と抗体を
結合するグルタルアルデヒド法、マレイミドを架橋剤と
するマレイミド法等、従来法によって製造できる。

ｂ、競合法 トウィーンなどの界面活性剤を含むＰＢＳに溶かした被
検アルブミンおよび酵素標識アルブミンのそれぞれの溶
液を一定の比率で混合し、その混合液を、抗アルブミン
抗体を同相化した膜担体に、４〜３５℃で１０分〜４８
時間、好ましくは２０〜３０℃で３０〜６０分間反応さ
せる。用いる酵素および酵素標識アルブミンの製法は、
前記サンドイツチ法と同様である。

Ｃ１競合阻害法 アルブミンを同相化した膜担体に、被検アルブミンを接
触きせる０次いで酵素標識抗アルブミン抗体を加え免疫
反応を起こさせる０反応条件、酵素、および酵素標識抗
アルブミン抗体の製法は、前記サンドイツチ法と同様で
ある。

以上の免疫反応以外にも、様々な免疫反応を用いること
が可能である。

４）検出 以上の様に免疫反応を起こさせた膜担体をＰＢＳ、ＦＢ
などで洗浄し、結合した酵素を検出する。

ａ、比色法 ＡＢＴＳ、ジフェニルアミンなどの発色剤を含む発色液
を膜担体に接触させる。ＡＢＴＳ　　Ｈ！○１発色液を
用いる場合には、１００〜５００μｍを３０〜３５℃で
２０〜４０分間反応させればよい。シュウ酸、アジ化ナ
トリウム等の酵素反応阻害剤を加えて反応を停止させ、
吸光度を測定する。

ｂ、ｖ負出力測定法 過酸化水素電極に該膜担体を取り付け、ＰＢＳなどに溶
解した基質溶液中に浸漬し、約３０秒〜１分後に平衡に
達したところで電気出力を測定する。

正月 本発明は、上記従来技術における不確実性を排障し、抗
原抗体反応の特異性を利用してアルブミンを簡易、かつ
短時間に定量するとともに、試料に含まれる微量から大
量までのアルブミンを正確に定量することを可能にする
。すなわち、試料中のアルブミンのみを、電極法の場合
は０．５〜１６０ｍｇ／Ｌの感度で、比色法の場合は０
．０３〜４ｍｇ／Ｌの感度で測定でき、反応時間は１０
分〜３時間のいずれでも可能である。従って、各種疾患
、特に腎疾患の診断はもとより、予防ならびに早期発見
から予後判定に至るまでの重要な情報が、この測定法に
より提供される。

Ｘ厘」 以下に実施例により本発明の実施態様を示すが、これら
の実施例は何ら本発明を限定するものではない。

実施例１ マイクロポーラスポリプロピレンフィルム（ジュラガー
ド＃３４００．２５μｍ厚、最大孔径０．０２ｘ０．２
μｍ、親水性、ポリブラスチンク株式会社）をアセトン
処理し、膜の片面のみ３０分間または両面を各２０分間
、低温プラズマで処理する。処理した膜を１０％オクタ
メチレンジアミン水に浸漬し、水洗後２５％グルタルア
ルデヒド液に浸漬し水洗した後、１３φに切断する。得
られた膜をタンク２４ウエルマルチデイツシユ（ウェル
径約１６ｍｍ、ヌンク社）に各々１牧人れ、ヤギ抗ヒト
血清アルブミン抗血清（力ペル社）３０００倍希釈を３
００μｌ加え、４℃で３〜６時間放置する。加えた抗血
清を除去し、ｐＨ７゜３の０．１Ｍ’Ｊン酸緩衝液（以
下ＰＢと略記）で洗浄した後、ヤギ正常血清（３０００
倍希釈）を加え、４°Ｃで一夜放置する。血清を除去し
た後、ヒト血清アルブミン（以下ＨＳＡと略記）を標準
液として５００μ１（３１〜２０００μｇ／し、７段階
倍数希釈）加え、両面プラズマ処理した膜は３０分およ
び６０分間、片面のみ処理した膜は６０分間３０℃で反
応させる。加えた標準Ｈ５Ａを除去し、ＰＢ（ｐＨ７，
３）で洗浄した後、３００μｌのホースラディツシュペ
ルオキシダーゼ（西洋わ奄びペルオキシダーゼ、以下Ｈ
ＲＰと略記）で標識したヤギ抗Ｈ３Ａ抗体（ＩｇＧ分画
、カペル社）３０００倍希釈液を加え、３０℃で両面プ
ラズマ処理膜は３０分間、片面プラズマ処理膜は６０分
間反応させる。ヤギ抗Ｈ８Ａ抗体液を除去し、ＦＢで洗
浄した後、４００μｌのＡＢＴＳ（２，２′−アジノジ
（３−エチルベンズチアゾリン）−６°−スルホン酸）
−Ｈ，Ｏ，による発色液を加え、３０℃で３０分間反応
させる。２ｍｌの０．１Ｍシュウ酸を加えて反応を停止
し、４２０ｎｍで吸光度を測定した。結果を第１図に示
す。

サンドイッチ−比色法によれば、０．０３〜４ｍ　ｇ　
／　Ｌのアルブミンが測定可能である。

実施例２ 実施例１と同様にして、標準Ｈ８Ａ（３１〜２０００μ
ｓ／Ｌ、７段階倍数希釈）を用い標準曲線を作成し、ヒ
ト又検体中のアルブミン濃度を測定した。この際、実施
例１の方法（二段階サンドインチ法）のほかに、標準Ｈ
８Ａまたは尿検体とＨＲＰｉ識抗Ｈ５Ａ抗体とを同時に
反応させる方法（一段階サンドイツチ法）も実施した。

結果を表１に示す。

（以下余白） 表１から明らかな様に、１段階サンドイツチ法、２段階
サンドインチ法のいずれの方法で測定しても近似の測定
値が得られる。また、灰化処理は両面、片面のいずれで
もよい。

実施例３ 実施例１と同様にマイクロポーラスポリプロピレンフィ
ルム（ジュラガード＃３４００、ポリプラスチック株式
会社）を低温プラズマで両面を処理し、１３φに切断す
る。酵素標識抗体はグルコースオキシダーゼ（以下ＣＯ
Ｄと略記）−ウサギ抗Ｈ８Ａ−Ｆａｂ’、固相化抗血清
はウサギ抗Ｈ８Ａ抗血清の１０００倍希釈液、ブロッキ
ングにはウサギ正常血清（３００倍希釈）を用い、酵素
免疫反応はすべて実施例１と同様に行なった。標準Ｈ３
Ａ（３１〜４０００μｇ／Ｌ）８段階倍数希釈液の各々
の希釈液につき６枚の膜担体を用いる。うち３枚はＡＢ
ＴＳ−ＨＲＰ発色液により比色定量を行なった。残る３
枚は過酸化水素電極（２φ、白金）に取り着け、基質と
してグルコース５０ｍｇを含むリン酸緩衝食塩水（以下
ＰＢＳと略記）ｔｓｍ＋中に浸し、出力電流を測定した
。比色法と電極法についての結果を第２＠に示す。

実施例４ マイクロポーラスポリプロピレンフィルム″（ジュラガ
ード＃２５００．２５μｍ厚、最大孔径０．０４ｘ０．
４μｍ％疎水性、ポリプラスチック株式会社）を１５０
ｍｍｘ１５０ｍｍの大きさに裁断し、透孔（直径６ｍｍ
、３６個搾設）を設けたほぼ同形大のアルミニウム製遮
へい盤２枚ではさみ、両面を３分ずつ水蒸気プラズマ処
理（１００ｍＡ、５００Ｖ）Ｌ、親水性スポット膜を作
る。０．３％オクタメチレンジアミン５〜１０μ！を各
スポット上に滴下し、スポット部全体が濡れて半透明に
なった時点で余分の水分を濾紙で拭き取る０次いで、５
％グルタルアルデヒド液に浸漬し、蒸留水またはＰＢＳ
で洗浄する。

Ａ法（競合法） ウサギ抗Ｈ３Ａ抗血清２００倍希釈液２０μｌを各スポ
ットに滴下し４℃で一夜放置する。抗血清を除去しＰＢ
Ｓで洗浄した後、２０μｌの正常ウサギ血清を滴下する
か、またはきらに牛血清アルブミン（以下ＢＳＡと略記
）を含むＰＢ３２０μｌを滴下し４℃で６時間放置する
。加えたＰＢＳを除去し、ＰＢＳで洗浄する。ＧＯＤ−
Ｈ３Ａ１５０μｌと標準Ｈ８Ａ１５０μｌの混和液２０
μｌを滴下し２５℃で１時間放置する０滴下した混和液
を除去しＰＢＳで洗浄した後、過酸化水素電極（４φ白
金）に取り付け、５０ｍｇのグルコースを含む１５ｍ１
ＰＢＳに浸し、出力電流を測定する。

Ｂ法（競合阻害法） 各スポットに２μｓのＨ８Ａを含む２０μｍのＰＢＳを
滴下し４°Ｃで一夜放置する。加えたＰＢＳを除去しＰ
ＢＳで洗浄後、２０μｌの正常ウサギ血清を滴下するか
、またはＢＳＡ−ＰＢＳ２０μｌを滴下し４℃で６時間
放置する。加えたＰＢＳを除去しＰＢＳで洗浄した後、
８μｍのＨ３Ａを加える。２分後１０μｌのＣ０Ｄ−Ｆ
ａｂ　’（ウサギ抗Ｈ５Ａ−１ｇＧより）３０倍希釈液
を加え２５℃で１時間放置し、ＰＢＳで洗浄し、Ａ法と
同様に電極を用いて出力電流を測定する。

結果を第３図に示す、Ａ法、Ｂ法ともに０．５〜１６０
ｍｇ／Ｌの間でＨ３Ａを正確に測定することが可能であ
る。

実施例５ 実施例１の二段階サントイ・／チ法による比色定量法お
よび実施例４のＡ、Ｂ法により、尿中アルブミンを測定
し、同時に添加回収率試験を行なった。添加回収試験は
、深床に一定量のアルブミンを添加し測定するものであ
り、添加回収率は実測値／理論値（％） で表わされる。

標準Ｈ８Ａ：　１〜８０ｍｇ／Ｌ（８段階倍数希釈） 検体二深床（Ａ、Ｂ法）および深床希釈液（サンドイツ
チ法） 深床に１０ｍｇ、４０ｍｇのＨ８Ａを添加したもの（添
加回収試験用） サンドイッチ比色法では４段階倍数希釈各２回測定、Ａ
、Ｂ法では６回測定、回収試験では２段階倍数希釈各３
回測定した。結果を表２に示す。

（以下余白） 実施例６ 実施例４と同様のＡ法により血中アルブミンの定量を行
なった。また従来のＢＣＧ法による定量も合わせて行な
い比較検討した。

標準Ｈ３Ａ：１〜８０ｍｇ／Ｌ　　８段階倍数希釈 検体：Ａ法　１０００．３０００．１００００倍希釈血
清（ＰＢＳ−ツイーン（商品名Ｔｗｅｅｎ）） ＢＣＧ法　原血清 結果を表３に示す。

表３ 表３から明らかな様に、本発明の定量法はＢＣＧ法とよ
く一致し、血清アルブミンの定量にも充分応用できる。

実施例７ マイクロボーラスポリプロピレンフィルム（ジュラガー
ド＃２５００．ポリプラスチック株式会社）に実施例４
と同様の低温プラズマ処理を施す、オクタメチレンジア
ミンの各濃度液（５，１，０，２５，０，１，０，０５
，０，０２５，０，０１２５％）各５〜１０μｍを各ス
ポット上に滴下する。自然乾燥するかまたはスポット部
全体が濡れて半透明になった時点で余分の水分を濾紙で
拭き取る。５％グルタルアルデヒド液に浸漬した後、蒸
留水またはＰＢＳで洗浄する。各濃度のＣＯＤ水溶液（
１，２，５μｇ１５０μｌ／スポット）を各スポットに
滴下し、水で濡らした濾紙を敷いたプラスチックの箱の
中に４℃で１８時間保存する。各スポット上の水滴（残
液）から２０μｌを除去し、１０ｍｌのＰＢＳ（５０ｍ
ｇのグルコースを含む）にいれ過酸化水素電極（４φ白
金）で出力電流を測定した。結果を第４図に示す、オク
タメチレンジアミン濃度が０．２５％以下の場合は、固
定化袋れるＣＯＤ量はオクタメチレンジアミン濃度に比
例するが、０．２５％以上では飽和される。また、アル
ブミン、抗アルブミン抗血清などを固相化する場合、Ｃ
ＯＤのタンパク質量とほぼ等量が同相化されることが判
明した。すなわち、オクタメチレンジアミンの濃度によ
って所望量のタンパク質が同相化できる。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１の結果を示し、縦軸は４２０ｎｍでの
吸光度、横軸はＨ５Ａの濃度を表わす。 ・・・・・・・は両面処理膜、アルブミン反応時間６０
分、−マーは両面処理膜、アルブミン反応時間３０分、
−〇−は片面処理膜、アルブミン反応時間６０分の結果
を示す。第２図は実施例３の結果を示し、縦軸は４２０
ｎｍでの吸光度と出力電流、横軸はＨ８Ａの濃度を表わ
す、第３図は実施例４の結果を示し、縦軸は出力電流、
横軸はＨ８Ａ濃度を表わす、第４図は実施例７の結果を
示し、縦軸は出力電流、横軸はオクタメチレンジアミン
濃度を表わす。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、低温プラズマ処理した膜担体に一定量の抗アルブミ
   ン抗体を固定化し、該膜担体にアルブミンを結合させ、
   次いでまたは同時に酵素で標識した抗アルブミン抗体を
   結合させ、結合した酵素を基質と反応させて計測するこ
   とを特徴とするアルブミンの定量法。 ２、該膜担体が多孔性ポリオレフィン膜担体であること
   を特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の定量法。 ３、該ポリオレフィンがポリプロピレンであることを特
   徴とする特許請求の範囲第２項に記載の定量法。 ４、該酵素がグルコースオキシダーゼまたはホースラデ
   ィッシュペルオキシダーゼであることを特徴とする特許
   請求の範囲第１項に記載の定量法。 ５、該計測が比色定量法により計測することを特徴とす
   る特許請求の範囲第１項に記載の定量法。 ６、該計測が膜担体を酵素活性検出用電極に取り付け電
   気化学的に計測することを特徴とする特許請求の範囲第
   １項に記載の定量法。 ７、低温プラズマ処理した膜担体に一定量の抗アルブミ
   ン抗体を固定化し、アルブミンおよび酵素で標識したア
   ルブミンとを競合的に反応させ、結合した酵素を基質と
   反応させて計測することを特徴とするアルブミンの定量
   法。 ８、該膜担体が多孔性ポリオレフィン膜担体であること
   を特徴とする特許請求の範囲第７項に記載の定量法。 ９、該ポリオレフィンがポリプロピレンであることを特
   徴とする特許請求の範囲第８項に記載の定量法。 １０、該酵素がグルコースオキシダーゼまたはホースラ
   ディッシュペルオキシダーゼであることを特徴とする特
   許請求の範囲第７項に記載の定量法。 １１、該計測が比色定量法により計測することを特徴と
   する特許請求の範囲第７項に記載の定量法。 １２、該計測が膜担体を酵素活性検出用電極に取り付け
   電気化学的に計測することを特徴とする特許請求の範囲
   第７項に記載の定量法。 １３、低温プラズマ処理した膜担体に一定量のアルブミ
   ンを固定化し、アルブミンおよび酵素で標識した抗アル
   ブミン抗体とを拮抗的に反応させ、結合した酵素と基質
   を反応させて計測することを特徴とするアルブミンの定
   量法。 １４、該膜担体が多孔性ポリオレフィン膜担体であるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１３項に記載の定量法
   。 １５、該ポリオレフィンがポリプロピレンであることを
   特徴とする特許請求の範囲第１４項に記載の定量法。 １６、該酵素がグルコースオキシダーゼまたはホースラ
   ディッシュペルオキシダーゼであることを特徴とする特
   許請求の範囲第１３項に記載の定量法。 １７、該計測が比色定量法により計測することを特徴と
   する特許請求の範囲第１３項に記載の定量法。 １８、該計測が膜担体を酵素活性検出用電極に取り付け
   電気化学的に計測することを特徴とする特許請求の範囲
   第１３項に記載の定量法。 １９、低温プラズマ処理した多孔性ポリオレフィン膜に
   アルブミンまたは抗アルブミン抗体を固定化したアルブ
   ミン定量用膜担体。 ２０、該ポリオレフィンがポリプロピレンであることを
   特徴とする特許請求の範囲第１９項に記載の膜担体。 ２１、低温プラズマ処理した多孔性ポリオレフィン膜を
   オクタメチレンジアミン水溶液で処理し該オクタメチレ
   ンジアミン水溶液濃度に応じた一定量のタンパク質を該
   膜に固定化する固定化方法。 ２２、該ポリオレフィンがポリプロピレンであることを
   特徴とする特許請求の範囲第２１項に記載の膜担体。