JPS61229818A - 免疫調節剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はγ−アミノ酪酸（以下ＧＡ８＾と略称する）ま
たはその塩を有効成分として含有する免疫調節剤に関す
る。

従来の技術 免疫機能の変調にもとづく諸種の疾患の治療のため、免
疫調節剤と総称される各棟の薬剤が開発されつつあるか
、本明細書で言う免疫調節剤とは免疫反応の異常低下を
回復し、過度の昂進を抑制して正常機能維持に作用する
薬剤を言う。この範ちゅうＫＩＩ４する薬剤としてレパ
ミゾール（アルドリッチ社）を代表とする種々の薬剤が
開発されてきたｏしかしながらこれらの従来の免疫調節
剤は生体物質ではない化学物質であるため、副作用に対
する懸念を完全に払拭することはできず、事実、ある免
疫調節剤については注目すべき副作用が報告されている
０ 発明が解決しようとする間超点 免疫調節作用は本来、恒常性維持の生理機能であるから
、その生理機部は生体中に含まれる生理活性物質によっ
て調節されていることが推測される。したがって、本発
明は従来の化学物質に代わり、副作用の少ない生理活性
物質による免疫調節剤を創製することを目的とする。

問題を解決するための手段 本発明者らは多年にわたる、生体中に含まれるの一アミ
ノ酸の生理活性作用の研究中にＧＡＢＡに免疫調節作用
があることを免疫学的に［ｋして本発明を完成させた。

これまでは上に定義されたような免疫機能を調節する生
理活性物質は発見できなかったことは言うまでもないが
、ＧＡＢＡが免疫調節作用を有することは全く知られて
いなかった。またレパミゾールのような従来から市販さ
れてきた免疫調節剤とその作用が異なる点はレパミゾー
ルのような免疫調節剤には免疫調節作用はあってもその
作用は病巣組織、の修復にまでは及ばないのに対しＧＡ
ＢＡの場合は病巣組織修復にまでその免疫調節作用が及
ぶことである。このＧＡ日への修復促進作用については
本発明者らによって既に発表されておりＧＡＢＡの作用
は免疫のみでなく病巣組織、の修復にまで及ぶことがわ
かっている。

ＧＡＢＡはつぎの化学構造式であられされる。

）４２ＮＣ）１２ＣＨ２Ｃ１−１２ｃＯＯＨ融点、２０
２℃（分解）で水に溶けやすい白色結晶性粉末であシ、
僅かに苦味がある。

ＧＡＢＡは脳や植物に見いだされるω−アミノ酸で抑制
伝達物質の一つである。グルタミン酸の脱炭酸反応によ
って形成され、脳の活動に抑制的に働くといわれている
。脳ではアミノ基転移酵累によシコハク酸セミアルデヒ
ドと々り代謝される。

脳でのグルタミン酸代謝に関連してＧＡ８八回へという
代謝経路が考えられている。脳代謝促進剤として製薬化
され〔第一製薬株式会社、ガンマロン（商標）〕安全性
の確認された物質である。

毒性 急性毒性　マウスに対する静注時のＬＤ　５　ｏは３　
ＶＫｇである。

亜急性毒性　ウサギに７．２〜１５日間連続静注し、諸
臓器を調べると３０及び、２５０１１１Ｖ’Ｋｆの用量
で脳室壁グリャ細胞の県展と腎 臓に軽度の変化がみられたが、それ以 外に異常は認められなかった。

ＧＡＢＡの合成法は公知であシ〔ペリヒテ（Ｂｅｒｉｃ
ｈｔｅ）：ｊｊ、　　、２　ＪＪ！、　　　／９００　
　〕　、　　コ　ノ１り酸イミドを電解蹟元してピロリ
ドンにし、史に水酸化バリウムを用いて加水分解するこ
とによってＧＡＢＡを得ることができる。本発明はＧＡ
ＢＡの塩からなる治療剤をも包含するが、ＧＡＢＡの塩
としてはカルがン酸基に基づく塩と、アミノ基にもとづ
く、薬理学上許容される酸との酸付加塩があり、またカ
ルざン酸基とアミノ基の双方にもとづく塩がある。カル
？ン酸基にもとづく塩にはナトリウム、カリウム、カル
シウム、マグネシウム、亜鉛およびアルミニウムのよう
な金属との塩、アンモニウム塩およびｆＩｔ換アンモニ
ウム塩たとえばトリエチルアミンのようなトリアルキル
アミンその他のアミンとの塩があり、アミノ基にもとづ
く地には塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、グロピオン酸、乳
酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、マレイン酸、ベンゼ
ンスルホン酸、トルエンスルホン・醪［などの無機酸、
有機酸との地があるが、これらはそれ自体公知の方法に
よシ、遊離のＧＡＢＡを化学債論的に計算された飯の、
選択されたＰ＆または塩基と反応させることによって製
造することができる０ つぎに実験例をあげてＧ　Ａ　Ｂ　Ａ□）優れた免疫調
節作用を説明する。

実験方法 マウスを用い溶血ブラック（ＰＦＣ）法、血球凝集反応
（Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｌｎａｔｌｏｎ　ｔｅｓｔ）およ
び遅処型過敏症反応（Ｄｅｌａｙｅｄ　Ｈｙｐｅｒｓｅ
ｎｓｌｔｌｖｌｔｙ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ）によシ免疫調
節作用を調べた。

／）溶血ブラック（ＰＦＣ法） カニンガム（Ｃｕｎｎｌｎｇｈａｍ）　　法を改良した
液体室−スライド法（橋本他：免疫実験操作法Ａ１第１
Ｉ９／〜４９１Ｉ頁、／９り２年、日本免疫学金輪）に
よシ、プラク生成細胞（ｐ　Ｆ　Ｃ、Ｐｌａｑｕｅｆｏ
ｒｍｉｎｇ　ｃｅｌｌ）数を計測し、抗体産生能を調べ
た。

感作には羊の赤血球細胞（Ｓ　ＲＢ　Ｃ、５ｈｅｅｐ　
ｒｅｄｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｌ、静岡系実験動物共同組合
よシ入手）を用い、原則としてこれをリン酸塩生理食塩
水緩衝液（Ｐ　Ｂ　Ｓ　、　Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕ
ｆｆｅｒｅｄ　５ａｌｉｎｅ）　で／−中／、２　ｊ　
Ｘ　／　０　　個の５ＲＢＣを含む溶液を調製し、その
０．２ｍｔ　（２，！；ｘ　／　０８　個）をｄｄｙ　
？ウス（静岡系実験動物共同組合よシ入手、Ｓ連合、雄
性）の尾静脈から注入した。反応培地は７０％の牛胎児
血清（Ｆｅ２）を含むイーグルＭＥＭ培ｊｌｐ＜日本製
薬株式会社）を用い、これに９日後に取シ出した牌臓細
胞グ×１０７〜を０．／ｌｄ％／ｄ中ｕＪ　Ｘ　／　０
　　個の５ＲＢＣ″４ｃ含む溶液の０．５ｙｄ（／、２
！ｒＸ１０９　個）および％希釈袖体用モルモット血清
をθａ４’　ｍｔ混合した溶液をチェンバー内に封入し
、３７℃で７時間保温した。この方法で約０．０．２−
のチェンバー内で３θ〜／Ｓ０個のＰＦＣが検出できる
。

２）血清抗体値の測定 ＰＦＣ反応の測定にはツウ２フ群Ｓ匹の血液を頚動脈採
血によシ象め、常法に従って血清を分離した。血球＃集
反応値（ＨＡ　ｔｕｔｏｒ）　　は常法に従い、正常な
うさぎの血清を０．５〜／％添加したリン酸塩生理食塩
水＃衝液（ＰＢＳ）で被検血清を希釈し、！３ＲＢＣを
用いて測定した。陽性反応を示す最大希釈倍数を２Ｎで
表示し、Ｎを抗体値とした。

３）遅延型過敏症反応（μ梅他：免疫実験操作法＾、第
６１１−１．２０頁、７９７２年、８不免疫学金輪） ｄｄ／マウスの雄性、体重−０２前後、夕連合のものｔ
［イｔ　２．’Ａ　Ａ　−トリニトロクロロベンゼン（
塩化ピクリル、東京化成工業株式会社）による接触型皮
膚炎にて検出した。／％塩化ピクリルのエタノール溶液
に湿した９枚重ねのガーゼ片（／Ｘ／儂）を刺毛したマ
ウスの腹部に７０秒間接触させ一次感作を行った。テス
ト用二次感作は７日後に／％塩化ピクリルのオリーブ油
溶液を耳の表層に絵廠を用いて塗布することによシ行っ
た。反応側の耳にはオリーブ油を塗シ対照値とした。

、２４を時間後マウスをエーテル麻酔し、／／１０００
市まで測定可能なマイクロダージによシ耳の厚さを／／
１００　闘まで測定した。遅延型過敏症反応の値は次式
のようにして求めた。

（２１７時間後の塩化ピクリル塗布耳の厚さ一塗布前の
耳の厚さ）−（２４時間俊のオリーブ油塗布耳の厚さ一
塗布前の耳の厚さ） ダ）ＧＡＢＡの免疫調節作用の実験は抗原量コ、左×７
０８　　個の５ＲＢＣ％Ｓ週令のマウスを基準として抗
原量、ＧＡＢＡの投与創゛、動物の退会の条件を変えて
つぎのように行った。

ａ）抗原蓋を変えた場合 感作抗原量を！；ｘ１０７〜２．！ｒｘ７０９個の５Ｒ
ＢＣとし、ＧＡＢＡ、？、ｊ”ｗＶ４投与による影響を
みた。

ｂ）マウスの退会を変えた場合 一連合の未成熟マウスから３０週連合上の老齢マウスま
でを使用し、ＧＡＢＡ３．！ｒｗ１Ｃｑ投与による影響
をみた。

Ｃ）ＧＡＥＩＡの食を変えてＰＦＣ反応、血球凝集反応
値、遅延型過敏症反応がどのような影響を受けるかを検
討した。

実験結果 実験結果を整理するとつぎのように表示される。

Ｇ　Ａ　Ｂ　Ａ　（３，！ｒ　ｍｆＡｌ１日Ｓ、Ｃ，）
を３日間投与した群と正常群マウスに５ＲＢＣをマウス
の尾静脈から注入して免疫してグ日後にＰＦＣ反応を行
った。数値は３匹のマウスの平均±Ｓ、Ｏ，奄Ｐくθ０
３奄奄Ｐ　＜　０．００　／対対照群。来電４ＩＰＦＣ
反応時に採血し、翌日血清を集めて凝集反応試験を行っ
た。抗体値（Ｎ）は陽性反応を示す最大希釈倍数を２Ｎ
　で表示し、Ｎを抗体値とした。

ＧＡ日Ａ（、？、ｊ＃ｚ勺／日Ｓ、Ｃ，）を５日１濁投
与したマウス群と正常群マウスＩｃユ５ｘｉｏｓ　個の
５ＲａＣをマウスの尾静脈から注入して免疫して３日後
にＰＦＣ反応を行った。数値は３匹のマウスの平均±Ｓ
、Ｏ，奄Ｐ　＜　０．θ０ハ１’１ｌＩＰ＜θＯ／対対
照詳。

来電奄ＰＦＣ反応時に採血し、翌日血清を集めて、選集
反応試験を行った。抗体値（Ｎ）はｌ性反応を示す最大
希釈倍数を＝Ｎ　で表示しＮを抗体値とした。

ＧＡＢＡを９日投与したマウス群と正常群マウスに２．
３×１０８個の！３ＲＢＣをマウスの尾静脈から注入し
て免疫して７日後にＰＦＣ反応を行った。

数値は３匹のマウスの平均ｓ、ｏ、　　奄Ｐ　＜　０．
００　／対対照群。４を奄ＰＦＣ反応時に採血し、翌日
血清を集めて凝集反応試験を行った。抗体値（団は陽性
反応を示す最大希釈倍数を」で表示しＮを抗体値とした
。

第を表　マウスの遅延型過敏症反応（Ｄ）ＩＲ）に対す
るＧＡＢＡの投与量の影響 Ｏ／ユコ±Ｌ？　　　Ｃ１００） ３　　　　　９．３士３り　　　　７ムコ１０　　　　
　　／ユ３＊１９　　１００．ｇコ！ｒ　　　　／、３
．ｇ±、２ざ　　／／ユｌりθ　　　　１弱ダ±、２コ
　　１１ｇ、０１００　　　　　　／’Ａダ士よ６　　
／／ざＯ／２！；　　　　　／ム７士左５　゛１３ム９
ＧＡＢＡは／ダ日間それぞれの量を皮下投与した。７日
目に７％塩化ピクリルで感作し更に７日後に検査した。

数値はｔ匹のマウスの平均±Ｓ・０・実験効果の考察 ｌ　成熟マウスで抗原量を変えた場合のＰＦＣ反応およ
び血球凝集反応値（ＨＡ　ｔｌｔｅｒ）　　に及はす影
響 これらの試験法は免疫調節作用物質をスクリーニングす
るとき゛の標準的方法である０正常な動物の牌臓では抗
原量を少なくし抗体応答を低く保つような条件でこの反
応を増強し、逆に十分な抗原を与え応答を高くした場合
にはこれを抑制することが知られている。ａＡｓＡ３．
、を号勺を３日間投与後それぞれ３×／θ７．２．３×
／θ８、λｊ　ｘｌＯ９個の５ＲＢＣで感作し、を口径
のＰＦＣ反応、血球凝集反応値をみたのが第１表である
。正常群では抗原量に比例してＰＦＣが増加しておシ、
これに対してＧＡＢＡ投与群では抗原量の少ない場合（
３ｘ　／　０’、コ、、ｔ　Ｘ　／　０８Ｓ　ＲＢ　Ｃ
）には増加させ、抗ｙＡｉの多い場合（コ、３×／θ　
５ＲＢＣ）にはダ０％も減少させることがわかった。こ
の結果は５ＲＢＣに対する血球凝集反応値でも裏づけら
れ１．１．３ｘ１０８　個のＳＲ日Ｃでは全シ変わらな
いが！×／θ　個の’３ＲＢＣでは乙からｇへ上昇し、
２Ｊ　Ｘ　／　０　　個の５ＲＢＣでは９から７へと下
降した。

ユ　マウスの退会をかえた場合のＰＦＣ反応および血球
凝集反応値に及ぼす影響 一般に未成熟マウスは成熟マウスに比べて強い免疫応答
を示し加令とともに低下することが知られている。第２
表はそれぞれ、２．ｊｌ、３００週令マウスに３．Ｓ■
／に９のＧＡＢＡを３日間投与して正常マウス群と比較
したものであるが、成熟マウス（３週令）のＰＦＯ応答
には余シ影響を及ぼさないが未成熟マウス（２週令）の
免疫応答は５０％抑制し逆に考齢マウス（３θ週令以上
）のＰＦＣ応答は増強させた。崩球凝集反応値本これを
磯づけた０ ３　免疫応答に及はすＧＡＢＡの投与量の影響前述のよ
うにＧＡＢＡには免疫調節作用があるが、免疫調節剤の
もう一つの１＃９としてその作用発現にはおる至適用量
があることが知られている〇その機序についてはまだ不
明であるが、ＧＡＢＡにおいてその点を調べてみた０Ｐ
ＥＣ反応では２、ｊｔ　Ｘ　／　０８　個の５ＲＢＣに
対して５週令のマウスで行った結果！、Ｏ，コ３．／２
左ｖＫｆ９日間投与で増強作用を示した。血球凝集反応
値でも同じく増強作用を示した（第３表）ｏ／％塩化ピ
クリルに対する遅延型過敏症反応（［）ＨＲ）でも２３
゜！；０．１００．／Ｊ！；ｗＫ９と投与量に従ッテ反
応が増強された（第ダ表）。このようにＤＨＲを増強さ
せることからもＧＡＬＡが免疫調節作用を有することが
証明された。

推定できる臨床投与量 ＰＦＣお゛よびＤＨＲの動物実験の結果からＧＡＢＡの
３．５ｗＫＩｙ″Ｆ３（皮下投与）が免疫調節作用の至
違用電であシ、これから５ｏＫｆの成人で／７３ｒｗＴ
Ｆｉという値が得られる。経口投与では７０倍して／Ｊ
ｔであり、現在脳代謝促進剤ガンマロンとして市販され
ているＧＡＢＡの薬用量は経口投与で３ｆであるからこ
の値以下であシ、従ってＧＡＢＡは免疫調節剤として安
全性も高く副作用等の心配なしに使用することができる
。

臨床適用が予想される免疫疾患 ＧＡＢＡは免疫と修復の異常に関与する疾患に非特異的
に用いられるものでその疾病の一部を代表として挙げれ
ばつぎのとおりである。

面清晒、エリテマトーデス、諸穆のリウマチ、混合型の
クリオグロプリン血症、混合型結合組織病、ＨＢＶ（Ｂ
型肝炎ウィルス）抗原抗体複合体癖、免疫芽球性リンパ
節症、諸準の膠原病、硬皮症、間葉失調症候群、重症筋
無力症、橋本病、パセドー病、アミロイド症、ベーチェ
ット病、免疫不全症候群、ホジキン病、多発性硬化症、
臓器特異性自己免疫疾磨、角膜潰瘍、褥塗性潰瘍、外科
側、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、喘息、上
気道炎、ヘルペス潰瘍。

その他臓器移植時の免疫調節作用物質として最適である
と考えられる。

本発明の免疫調節剤は上記のような免疫異常の関与する
種々の疾患に対するＧＡＢＡの経口投与または非経口投
与が都合よく行われるものであればどんな剤形のもので
あってもよく、例えば注射液、粉末剤、顆粒剤、錠剤、
カプセル剤、腸溶剤、注腸剤、吸入剤、トローチ、軟膏
剤などの種々の剖形をあげることができるが、これらを
症状に応じてそれぞれ単独で、または組合わせて使用す
る。

抄与資は投与経路、剤形、症状などにより大きく変える
ことができることは当然であるが、本発明の治療剤の典
型的々剤形、投与貴および投与方法を例示するとつぎの
とおりである。

なお、ことＫｆ述した用法、用量は単なる目安であシ、
ＧＡＢＡは前述のように極めて安全な物質であるから患
者の症状によりｅを適宜増減することは何ら差し支えガ
い。

ＧＡＢＡは水に易溶であるため、無菌的操作のもとに容
易にＧＡＢＡの例えば０．３％、０．３％または７．０
％の等張溶液をつくることができる。これを不活性ガス
気流下にアングルに封入したものを普通の注射器によっ
て注射する。また予め無菌的操作によりアングルあるい
はバイアル瓶に凍結乾燥して封入したＧＡＳ＾粉末を注
射直前に０．３％、０．３％または／、０％の等張溶液
として直ちに注射に使用してもよい。

経口投与の粉末剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤は結
合剤例えばシロップ、アラビヤゴム、ゼラチン、ソルビ
ット、トラガントまたはポリビニルピロリドン、賦形剤
例えば乳糖、とうもろこしデンプン、リン酸カルシウム
、ソルビットまたはグリシン、潤滑剤例えばステアリ、
ン酸マグネシウムｔタルク、ポリエチレングリコール、
ヒドロキシグロビルメチルセルロースまたはシリカ、崩
壊剤例えば馬鈴薯デンプン、或は湿潤剤例えばラウリル
硫酸ナトリウムなどを使用し、尚業界で慣用の方法で製
剤する。錠剤は当業界において周知の方法でコーティン
グしてもよい。

軟膏剤を製造するには、製剤界に公知の技術にしたがい
、所望濃度の軟膏となる量のＧＡＢＡの微粉末を軟膏基
剤例えばサラシ密ロウ、鯨ロウ、脱水ラノリン、白色ワ
セリン、高級アルコール、マクロゴール類あるいはプラ
スチペース（大正製薬に、に、！Ｊハイドロカー？ンダ
ル軟膏基剤）、日本薬局法収載の親水製軟責、吸水軟膏
またはこれらの混合物と混和し、これに必要に応じゴマ
油、落花生油、オリーブ油等の油類、樹脂類、グリセリ
ン、プロピレングリコール、界面活性剤、殺菌剤、防黴
剤、酸化防止剤等を添加し、均質となるまで十分にかき
まぜて＃シ合わせる。

つぎに本発明の免疫調節剤の製剤例をあげる。

製剤例／（注射剤） 無菌的操作のもとに、合成したＧＡＢＡを０．３％、０
．５％または／、０％（いずれもＧＡＢＡとして）の等
張溶液としてアンプルに充填した。

製剤例２（顆粒剤） 合成したＧＡＢＡを用い下記処方 ＧＡＢＡ　　　　　　　　　　　　Ｏ，，２ｆ乳　　糖
　　　　　　　　　　　　　　　　０．３１Ｉｆとうも
ろこしデンプン　　　　　　θｌＩ、ｔｒヒドロキシグ
ロビルメチル セルロース　　　　　　　　　　　θ０／ｆ顆粒剤　　
　　　　　　　　１００９ で顆粒剤を製造した。

製剤例３（軟膏剤） 合成したＧＡＢＡを用い、ハイドロカーゲングル軟膏剤
を基剤として下記処方 ＧＡＢＡ　　　　　　　　　　　　７０？１００？ で７％軟膏剤を製造した０

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. γ−アミノ酪酸またはその塩を有効成分として含有する
   免疫調節剤。