JPS61148188A - 抗生物質Ａ４０９２６複合体およびその純粋な因子ＰＡ、ＰＢ、Ａ、ＢおよびＢｏ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、任意に抗生物質Ａ４０９２６複合体（ｃｏｍ
ｐｌｅｘ）およびその因子の抗生物質Ａ４０９２６因子
Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物質Ａ４０９２
６因子Ｂｅ、抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＡおよび抗生
物質Ａ４０９２６因子ＦＢと命名する新規な抗生物質、
新規な菌株アクチノマヅラ（Ａｃｔ　ｉ　ｎｏｍａｄｕ
ｒａ）種ＡＴＣＣ３９７２７、またはその抗生物質Ａ４
０９２６生産性突然変異体もしくは変異型を培養するこ
とによるこれらの抗生物質を生産する方法、およびこれ
らの抗生物質に感受性の微生物を含む伝染病の処置にお
けるこれらの新規な抗生物質の使用に関する。

本発明の抗生物質は、アシル−Ｄ−７ラニルーＤ−アラ
ニンへの結合能力を有する抗生物質のパイコマイシンの
クラスに属するグリコペプチド物質である。

抗生物質Ａ４０９２６複合体およびその因子の抗生物質
Ａ４０９２６因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｂ０、因子ＦＡおよ
び因子ＰＢは、それ自体既知の技術に従い塩類を形成す
ることができる。

この説明および特許請求の範囲において、表現「抗生物
質Ａ４０９２６Ｊそれ自体は、抗生物質Ａ４０９２６複
合体、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ、抗生物質Ａ４０９
２６因子Ｂ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０、抗生物質
Ａ４０９２６因子ＰＡ、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢ
、それらの塩またはそえらの任意の混合物から選択され
る化合物を表わす０表現「抗生物質Ａ４０９２６複合体
Ｊ、［抗生物質Ａ４０９２Ｂ因子ＰＡＪ、「抗生物質Ａ
４０９２６囚子ＰＢＪ、「抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ
」、「抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ」、「抗生物質Ａ４
０９２６因子ＢｏＪは、生物学的性質を用いて取扱うと
き、対応する製薬学的に許容されうる塩類をまた包含す
る。

抗生物質Ａ４０９２６は、土の試料から単離されかつ国
際的に認められているコレクションであるアメリカンφ
タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ
　　Ｔｙｐｅ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　　Ｃｏ１１ｅｃｔｉ
ｏｎ（ＡＴＣＣ）−１２３０１Ｐａｒｋｌａｗｎ　　Ｄ
ｒｉｖｅ、Ｒｏｃｋｖｉ　ｌ　ｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ
、Ｕ、Ｓ、Ａ、２０８５２）にブダペスト条約の規定に
従い１９８４年６月８日に受託された、ＬＬ土Ｚヱ’／
９（Ａｃｔ　ｉ　ｎｏ　　ａｄｕｒａ）菌株を培養する
ことにより生産される。この菌株は受入れ番号ＡＴＣＣ
３９７２７を付与された。

この生産性菌株は１通常、属Ｘ）Ｉｚ７’上ヱユ］Ｘ（
Ｓｔｒｅ　　ｔｏｎ　　ｃｅｓ）の属すると考えられた
おり、そして始めストレプ　マ　セス（互ｔｒｅ　　ｔ
ｏｎ　　ｃｅｓ）種Ａ４０９２６と名付けられ、そして
それ自体ＡＴＣＣ３９７２７の受入れ番号でＡＴＣＣの
受託された。ことによく知られた組成について、さらに
研究した結果、新規な菌株は属アクチノマヅラ（Ａｃｔ
　ｉ　ｎｏｍａｄｌ工」）に属するという結論にわれわ
れは達した、したがって、本来ストレブ　マ　セス（鉦
ｒｅ　　ｔｏｍ　　ｃｅＳ）種ＡＴＣＣ３９７２７とし
て受託された菌株は７　　　／−ｖｆ５　（Ａｃ　ｔ　
ｉｎｏｍａｄｕｒａ）種ＡＴＣＣ３９７２７と改名され
た。

抗生物質抗生物質Ａ４０９２６複合体、Ａ４０９２６因
子Ａ、因子Ｂ、因子Ｂｏ，因子ＦＡまたは因子ＦＢの生
産は、それを生産することのできるＬＬ±２１’１５　
（Ａｃｔ　ｆ　ｎｏｍａｄｕｒａ）種、すなわち、ＬＬ
±ヱｗ”１５　（Ａｃｔ　ｉ　ｎｏｍａｄｕｒａ）種Ａ
ＴＣＣ３９７２７、またはその抗生物ｆｉＡ４０９２６
生産性突然変異体もしくは変異型を、好気的条件下に炭
素、窒素および無機塩類の同化源を含有する水性栄養培
地中で培養することによって達成される。ＷＭ酵技術に
おいて通常使用されている栄養培地の多くを使用するこ
とができるが、ある種の培地は好ましい、好ましい炭素
源は、グルコース、マンノース、ガラクトース、でんぷ
ん、コーンミールなどである。好ましい窒棄源は、アン
モニア、大豆粉末、ペプトン。

肉エキス、酵母エキス、トリプトン、アミノ酸類などで
ある。培養基中に混入することができる無機塩類には、
ナトリウム、カリウム、鉄、亜鉛、コバルト、マグネシ
ウム、カルシウムおよびアンモニウムのイオン、塩素イ
オン、炭酸イオン、硫酸イオン、リン酸イオン、硝酸イ
オンなどのイすンを生成することができる慣用の可溶性
塩類が存在する。

通常、抗生物質生産性菌株は、振盪フラスコ内で予備培
養され、次いでこの培養物を使用して実質的の量の抗生
物質を生産するためのびん醗酵器に接種する。予備培養
に使用される培地はより大きい規模の醗酵に使用される
ものと同一であることができるが、他の培地を使用する
こともできる。抗生物質Ａ４０９２６生産性菌株は、２
０〜４０″Ｏ・好ｔ　ｌ、　＜　ｔｋ　２４〜３５″０
の温度１おＩ＋％ｒ　　　　　　　。

生長させることができる。醗酵の間、抗生物質の生産は
肉汁または菌糸体の抽出物を抗生物質活性について、例
えば、バイオアッセイまたはＴＬＣまたはＨＰＬＣ手順
により監視することができる。

抗生物ｊｊＡ４０９２６に感受性の微生物、例えｅｕｓ
を試験有機体として使用することができる。バイオアッ
セイは寒天板上の寒天拡散法により便利に実施される。

抗生物質活性の最大の生産は、醗酵の第２日目〜第５日
目に起こる。

抗生物質Ａ４０９２Ｂは、菌株Ｚｉ土ｌヱ叉ｊ（Ａｃｔ
　ｉ　ｎｏｍａｄｕｒａ）種ＡＴＣＣ３９７２７、また
はその抗生物質Ａ４０９２６生産性突然変異体もしくは
変異型を培養することにより生産され、そして培養肉汁
中に主として存在する。

アクチノマヅラ　Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　　　ＡＴ
ＣＣ３９７２７の　　、　のｇｔが化工】■１を邊： 栄養菌糸体は、波状および分岐した菌糸（直径約０．８
１Ｌｍ）から構成され、ある培地上で、表Ｉに星印で識
別するように、数日の生長後に、棒様要素に分解する傾
向があるが、一方グルロースーアスパラギン培地上で、
それは球状要素に分解する。

この菌株の特性は、ある培地上で栄養菌糸体の赤系褐色
である。

気中菌糸体はわずかの培地に存在するだけである；とく
に、表Ｉに記載するもののうちで、それはオートミール
寒天およびソイル寒天（ｓｏｉｌａｇａｒ）中にのみ存
在する。これらの培地上で、気中菌糸体は白−グレイで
あり、そして約ｌθ〜２０の胞子のがざおよび短いらせ
んで配置された芽胞柄を形成する。

胞子は円筒形であり、そして０．８Ｘｌ−２ｐｍの平均
大きさを有する。

生五Ｗユ扱定 培養特性の検査のために、アクチノマヅラ（Ａｃｔ　ｉ
ｎｏｍａｄｕｒａ）種ＡＴＣＣ３９７２７は、シャーリ
ング（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）およびボッ）　ＩＪ−ブ（Ｇ
ｏｔｔｏｌｉｅｂ）［シャーリング　Ｅ、Ｇ、およびゴ
ツトリーブ　Ｄ、、１９６ローストレプトマ　セス種の
特性づけ法（Ｍｅｔｈｏｄ　　ｆｏｒ　　ｃｈａｒａｃ
ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　　ｏｆ　　５ｔｒｅ　　ｔｏｎ
　　ｃｅｓ　　５ｐｅｃｉｅｓ）−インターナショナル
・ジャーナル・オプ・システミック・バクテリオロジー
（Ｉｎｔ、Ｊ、５ｙｓｔ、Ｂａｃｔｅ、ｒｉｏｌ）、１
旦、３１３−３４０１により示唆される種々の標準玉で
ワクスマン（Ｗａｋｓｍａｎ）［ワクスマン、Ｓ、Ａ、
１９８１−７クチノマイセテス（Ａｃｔ　ｉ　ｎｏｍｙ
ｃｅｔｅｓ）−ウィリアムス争アンド・ウイルキンス・
カンパニー骨バルチモア（Ｗｉｌｌｉａｍｓ　　ａｎｄ
　　ＷｉｌｋｉｎｓＣｏ、Ｂｌｔｉｍｏｒｅ）；Ｖｏｌ
、２，３２８−３３４］が推奨するいくつかの培地を添
加して、培養した。

人の決定は、必要なときはいつでも、マエルズ（Ｍａｅ
ｒｚ）およびパウル（Ｐａｕｌ）［ｒｘルズ　Ａ、およ
びＭ、レア・パウル、１９５０−色の辞書（Ａ　　Ｄｉ
ｃｔｉｏｎａｒｙ　　ｏｆ　　Ｃｏ　ｌ　ｏ　ｒ）−第
２版　マクグロー−ヒル・ブック・カンパニー・インコ
ーポレーテット、ニューヨク］の方法により実施した。

有機体の種々の炭素源を利用する能力は、シャーリング
およびゴツトリーブが記載する方法により研究した。

表工における読みは、２８℃において２週のインキュベ
ーション後に実施した。

人ユ 挫社 栄養培地　　　　　　　　特性 培地Ｎｏ、２　　　！ｌ富な生長、外皮のある表面、（
酵母エキス−８７Ｌ／８．＠量の琥珀色−ピ麦芽寒天）
　　　ンク色の可溶性顔料 培地Ｎｏ、３　　　豊富な生長、平滑な表面、５５（オ
ートミール　／Ｅ／４、気中菌糸体、非常に寒天）　　
　　　不十分なグレイ、可溶性顔料。

バイオレット、５５７Ｈ／４ 培地Ｎｏ、４　　　中程度の生長、平滑な薄い表（無機
塩類−で　面、クリーム色、１０／Ｄ／２んぶん寒天） 培地Ｎｏ、５　　　中程度の生長、平滑な薄い表（無機
塩類−で　面、クリーム色、１０／Ｄ／２んぶん寒天） 培地Ｎｏ、６本　中程度の生長、わずかに外皮の（ペプ
トン−酵　ある表面、琥珀色、１２／Ｄ／母エキス鉄寒
　９ 天） 培地ＮＯ，７豊富な生長、平滑な薄い表面。

（トリプシン寒　琥珀色−褐色、１３／に／１２天） オートミール寒　豊富な生長、平滑な表面、赤茶天木　
　　　　　褐色、８／Ｌ／７、気中−糸体、中程度の淡
黄色−グレイ、 ４４／Ｂ／２ ヒラキイ（Ｈｉ　　豊富な生長、しわのある表面、ｃｋ
ｅｙ）およ　琥珀色−褐色、１３／に／１２びトレスナ
ー （Ｔｒｅｎｓｎ ｅｒ）の寒天本 ツアペック　グ　中程度の生長、平滑な表面、淡ルコー
ス寒天　　色−黄色、９／Ｉ／３グルコース　ア　不十
分な生長、クリーム状表スバラギン寒天　面、麦わら色
−黄色、９／Ｅ／本　　　　　　　　　　　ｌ 栄養寒天　　　　豊富な生長、しわのある表面、淡色−
オレンジ、１１７Ｃ／７ ジャガイモ寒天　豊富な生長、しわのある表面、本　　
　　　　　赤系褐色、８／Ｌ／９ベネツト（Ｂｅ　豊富
な生長、外皮のある表面、ｎｎｅｔ）の寒　赤系褐色、
８／Ｌ／８、可溶性天木　　　　　　顔料、深い琥珀色
　ばら色リンゴ酸カルシ　中程度の生長、平滑な表面、
アウム寒天　　　　プリコツト色、１０／Ｂ／３スキム
ミルクの　豊富な生長、わずかにしわのあ寒天　　　　
　　る表面、オレンジ色９７Ｂ／３ツアペツクのス　豊
富な生長、平滑な表面、アブクロース寒天　　リコット
色、１０７Ｂ／６卵アルポミン寒　豊富な生長、平滑な
表面、ばら天木　　　　　　色、５２／Ｂ　３、微量の
可溶性顔料、ばら色５２／Ｂ／３ □ サブロー（Ｓａ　　生長なし ｂ　ｏ　ｕ　ｒａｕ ｄ）寒天 フィル（ｓｏｉ　　不子分な生長、無色、白−ブレｌ）
寒天　　　　イの気中菌糸体 デキストロース　中程度の生長、平滑な薄い表トリプト
ン寒天　面、淡色−黄色、１０／Ｇ／２本 ジャガイモのプ　豊富な生長、オレンジ−褐色、ラグ（
ｐｌｕ　　微量の白−グレイの気中菌糸体ｇ） 翌！ヱ煎丑五 表１ 試験　　　　　　　　　　　　　　　結果でんぷんの加
水分解　　　　　　　陰性Ｈ２Ｓの生成　　　　　　　
　　培地Ｎｏ、６について陰性 酢酸鉛のスト リップで陽性 トリプシンの反応　　　　　　　　陽性カゼインの加水
分解　　　　　　　陽性リンゴ酸カルシウムんの加水分
解　陰性ゼラチンの液化　　　　　　　　　陽性凝固　
　　　　　陰性 リドマスミルク ペプトン化　　　陽性 セルロースの分解　　　　　　　　陰性硝酸塩の還元　
　　　　　　　　陽性 災遺」１ケ科」 友Ｊ 炭素源　　　　　　　　　　　　　　生長アラビノース
　　　　　　　　　　　　＋キシロース　　　　　　　
　　　　　　＋マンノース　　　　　　　　　　　　　
＋フルクトース　　　　　　　　　　　　　士ラフィノ
ース　　　　　　　　　　　　＋ラムノース　　　　　
　　　　　　　　＋グ、゛ｌ／コース　　　　　　　　
　　　　　＋ラクトース　　　　　　　　　　　　　＋
ガラクトース　　　　　　　　　　　　＋イノシトール
　　　　　　　　　　　−スクロース　　　　　　　　
　　　　　＋セル−ロース　　　　　　　　　　　　　
−グリシン　　　　　　　　　　　　　＋マンニトール
　　　　　　　　　　　＋リポース　　　　　　　　　
　　　　−＋＝生長 ｍ＝生長せず 細胞壁中に存在するアミノ酸類の分析は、ペラカー（Ｂ
ｅａｋｅｒ）ら、「全細胞加水分解物のヘー・パークロ
マトグラフィーによるノカルジアとストレプトマイセス
との間の急速分別（Ｒａｐｆｄ　　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｉａｔｉｏｎ　　ｂｅｔｗｅｅｎ　　Ｎｏｃａｒｄｉａ
　　ａｎｄ　　Ｓｔｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｂｙ　　ｐ
ａｐｅｒ　　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　　ｏｆ　
　ｗｈｏｌｅ　　ｃｅｌｌｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ）
Ｊ　、アプライド−マイクロバイオロジー（Ａｐｐｌ、
Ｍｉｃｒｂｉｏ　ｌ　、）１２．４２１−４２３　（１
９６４）の論文中に記載されている方法により実施した
。全細胞の分析は、ｌｌ−ジアミノピメリン酸の存在を
明らかにした。カワモトら［１，カワモト、Ｔ。

才力およびＴ、ナラ＊　「マ　　ロモノスボラーｆリポ
アステロスボラ、マイクロモノスポラｌ、ｆミエンシス
および関連する有機体の細胞壁の組成（Ｃｅｌｌ−ｗａ
ｌｌ　　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏ　　ｒｅｌａｔｅｄ
　　ｏｒｇａｎｉｓｍ）」　。

ジャーナル・オブ・バクテリオロジー（Ｊ　、　ｏ　ｆ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）１４６．５２７−５３４．
１９８１）］の方法により得られた、純粋な細胞壁の分
析は、グリシンの不存在を示した。

糖１じ１折： 糖分の分析は、Ｍ、Ｐ、レヘバリアー（Ｌｅｃｈｅｖａ
ｌｉｅｒ）、ｒ臨床的に重要な好気的アクチノミセテス
の同定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　　　ｏｆ　　
　ａｅｒｏｂｉｃ　　　ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　
　　ｏｆ　　　ｃｌｉｎｉｃａｌ　　　ｉｍｐｏ　ｒｔ
　ａｎｃｅ）Ｊ　＊ジャーナルｅオブ・ラボラトリ−・
アンドやクリニカル・メディシン（Ｊ。

Ｌａｂ、Ｃ１１ｎ、Ｍｅｄ、）ヱユ、９３４−９４４（
１９６８）の方法により、Ｊ、Ｌ、スタネク（５ｔａｎ
ｅｃｋ）およびＧ、Ｄ、ｔｆｆパーツ（Ｒｏｂｅｒｔｓ
）、ｒ薄層クロマトグラフィーによる好気的アクチノミ
セテスの同定に対する簡素化されたアプローチ（Ｓｉｍ
ｐｌｉｆｉｅｄａｐｐｒｏａｃｈ　　ｔｏ　　１ｄｅｎ
ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　　ｏｆ　　ａｅｒｏｂｉｃ　　
ａｃｔｆｎ。

ｍ１ｃｅｔｅｓ　　ｂｙ　　ｔｈｉｎ−１ａｙｅｒｃｈ
ｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）」　、２旦、２２６−２３
１　（１９７４）に記載される薄層クロマトグラフィー
のセルロースシートを使用して１次の溶媒系を用いて実
施した：酢酸エチルーピリジンー水（１００：　３５　
：　２５、容量による）、得られた結果は主にグルコー
スの存在を示したが、より少量のガラクトース、マンノ
ースおよびマズロース（３−０−メチル−〇−ガラクト
ース）も検出された。

ミコリン　　ｍ　　ｃｏｌｉｃ　　ａｃ　　ｉ　　ｄ朋
： ミコリン酸類の存在を検出するアッセイは、ミンニキン
（Ｍｉｎｎｉｋｉｎ）ら［Ｄ　、　Ｅ　、ミンニキン、
Ｌ、アルシャマオニイ（Ａｌｓｈａｍａａｎｙ）および
Ｍ、グツドフェロ−（Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ）、ｒ全有
機体のメタノール分解物の薄層クロマトグラフィーによ
るヱエユごＬヱ１汐ｋ、ノカルジアおよび関連するタク
ソンの分別（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　　ｏｆ
　　！！！Ｊｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｃａｒｄｉ
ａ　　ａｎｄ　　ｒｅｌａｔｅｄ　　ｔａｘａ　　ｂｙ
　　ｔｈｉｎ　　１ａｙｅｒ　　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ
ａｐｈｙａｎａｌｙｓｉｓ　　ｏｆ　　ｗｈｏｌｅ　　
ｏｒｇａｎｉｓｍ　　ｍｅｔｈａｎｏｌｙｓｉｓ　　ｍ
ｅｔｈａｎｏｌｙｓａｔｅｓ）Ｊ　　、ジャーナル・オ
ブ・ジェネラル・マイクロバイオロジー（Ｊ　ｏ　ｒ　
ｎａｌ　　ｏｆ　　Ｇｅｎｅｒａｌ　　Ｍｉｃｒｏｂｉ
。

１ｏｇｙ）、旦８，２００−２０４．１９７５］の方法
に従い実施した。

このアッセイの結果は陰性であった：ミコリン酸類は発
見されなかった。

区迭辺［： この菌株は、メソ−ジアミノピメリン酸およびマズロー
スの存在、ペグトドグリカン中のグリシンの欠乏、ミコ
リン酸類の欠乏および適度に長い胞子鎖をもつ気中菌糸
体の形成のために、アクチノミセテス（Ａｃｔ　ｉ　ｎ
ｏｍｙｃｅｔ　ｅｓ）の２久＋／＋ｉ５　（Ａｃｔ　ｉ
　ｎｏｍａｄｕｒａ）属に帰属される。

他の微生物を使用するときのように、抗生物質Ａ４０９
２６生産性菌株の特性は変更される０例えば、菌株の人
工的変異型および突然変異体は種々の既知突然変異原１
例えば、紫外線、Ｘ線、高周波、放射線、および化学物
質、例えば、亜硝酸、Ｎ−メチル−Ｎｏ−ニトロ−Ｎ−
ニトロソグアニジン、および多くの他のもので処理する
ことにより得ることができる。ＬＬ±Ｚ二９９二人９ｔ
　ｉ　ｎｏｍａｄｕｒａ）属の種に属しかつ抗生物１Ａ
４０９２６を生産するすべての自然および人工の突然変
異原は、菌株乙久土Ｚ二叉９（Ａ且」ｉｎｏｍａｄｕｒ
ａ）種ＡＴＣＣ３９７２７と同等であると見なされ、そ
して本発明の範囲内に入ると考えられる。

抗生物質生産性有機体の醗酵肉汁からの本発明の抗生物
質の回収は、それ自体既知の技術に従って実施され、そ
してこれらの技術は、溶媒による抽出、非溶媒の添加ま
たは溶液のｐＨの変化による沈殿、分配クロマトグラフ
ィー、逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグ
ラフィー、親和性クロマトグラフィーなどを包含する。

好ましい手順は、固定化Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンを
使用するクロマトグラフィー、引き続く逆相カラムクロ
マトグラフィーを包含する。

本発明の回収法に適する固定化されたＤ−アラニル−Ｄ
−アラニンマトリックスは、欧州特許出願が第８３１１
２５５５号に開示されている。この方法に好ましいマト
リックスは、調節された孔をもつ架橋されたポリイブキ
ストランを結合されたＤ−アラニル−Ｄ−アラニンであ
る。

醗酵肉汁は、濾過後または予備的精製手順後、親和性ク
ロマトグラフィーに直接かけられる。予備的精製手順は
、醗酵塊全体を塩基性とし、好ましくはｐＨ８，５〜１
Ｏ０５にして菌糸体へ吸着された抗生物質を可溶化し、
次いで濾過することを包含する。この透明濾液をｐＨ２
，５〜４．５にし、再び濾過助剤の存在下に濾過する。

濾液を廃棄し、一方回収された濾過ケーキを水に懸濁さ
せ、３ｕ　Ｊ＆性とし、好ましくはｐＨ８〜９とし、そ
して濾過する。濾過ケーキを再び同一手順に付し、一方
抗生物質Ａ４０９２６を含有する濾液をプールする。

次いで、これらの濾液または濾過した醗酵肉汁を、カラ
ムまたはバッチ式で、固定化されたＤ−アラニル−Ｄ−
アラニンを使用する親和性クロマトグラフィーにかける
。

親和性マトリックスへの抗生物質の結合は、好ましくは
、ｐＨ約７．０〜８．０において行ない、そしてその溶
離はより塩基性のｐＨ値（好ましくは９．０〜ｌ　Ｏ、
５）において水性塩基により実施する。この水性塩基は
、必要に応じて、下に定義するような極性有機溶媒１例
えば、極性水混和性溶媒の存在下に、アンモニア、アル
カリもしくはアルカリ金属水酸化物または塩基性緩衝液
であることができる。

カラムを、必要に応じて、塩類、尿素および／または水
混和性溶媒を含有する水性緩衝液ｐＨ４〜８で洗浄する
ことにより不純物を除去した後、抗生物質Ａ４０９２６
を上の溶離混合物で溶離する０次いで、抗生物質は、好
ましくは、水と最小共沸混合物を形成することのできる
有機溶媒との共沸蒸留により、プールした抗生物質含有
分画から水を除去し、次いで非溶媒を添加して所望生産
物を沈殿させることによって回収する。

水と最小共沸混合物を形成することのできる有機溶媒の
代表的例は、ｎ−ブタノール、ベンゼン、トルエン、ブ
チルエーテル、四塩化炭素、クロロホルム、シクロヘキ
サン、２．５−ジェノチルフラン。ヘキサンおよびｍ−
キシレンである。

好ましく溶媒はｎ−ブタノールである。

非溶媒の例は、石油エーテル、低級アルキルエーテル、
例えば、エチルエーテル、プロピルエーテルおよびブチ
ルニーエル、および低級アルキルケトン、例えば、７セ
トンである。

あるいは、プールした抗生物質含有分画を、好ましくは
上に定義した有機溶媒との共沸蒸留により、小さい体積
に濃縮し、そして得られる水溶液イ凍結乾燥する。

溶離において使用する水性塩基が非揮発性であるとき、
それを中和し、濃縮物を脱塩した後、沈殿または凍結乾
燥を実施することが必要であろう。

便利な脱塩法は、抗生物質含有水溶液をシラン化シリカ
ゲルのカラムに適用し、蒸留水で洗浄し、そして極性水
混和性溶媒と水との混合物で溶はすることを含む。

極性水混和性溶媒の代表例は、水溶性アルコール（例え
ば、メタノール、エタノール、インプロパツール、ｎ−
ブタノール）、アセトン、アセトニトリル、低級アルキ
ルアルカノエート（例えば、酢酸エチル）、テトラヒド
ロフラン、ジオキサンおよびジメチルホルムアミドおよ
びそのらの混合物である。好ましい極性水混和性溶媒は
アセトニトリルである。

あるいは、脱塩は抗生物質含有溶液を上に定義した親和
性カラムに適用し、蒸留水で洗浄し、そして親和性クロ
マトグラフィーの溶離について前述した揮発性水性塩基
で溶離することにより実施することができる。そのよう
にして得られる生産物は、抗生物質Ａ４０９２Ｂ複合体
である。必要に応じて、それをさらに精製するか、ある
いはその因子Ａ、Ｂ、Ｂ６．ＦＡおよびＦＢの分離にか
けることができる。

純粋な抗生物質Ａ４０９２６複合体を得るための便利な
手順は、上のようにして得られる複合体を親和性クロマ
トグラフィーのカラムによりさらに精製することにより
代表される。上と同一の静止相（固定化されたＤ−アラ
ニル−Ｄ−アラニン）が一般に使用され、そして所望の
抗生物質は前述の固定化されたＤ−アラニル−Ｄ−アラ
ニンを使用する親和性クロマトグラフィー手順に従うこ
とにより溶離される。好ましい固定化されたＤ−アラニ
ル−Ｄ−アラニンはセファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ
）−ｅ−アミノカプロイル−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニ
ンであり、好ましい平衡化混合物はＰＨ７〜８にＷＲ節
した２モルのＮａＣ１を含有する０、１６％（Ｗ／Ｖ）
のアンモニアでノ、−り、好ましい洗浄溶液はｐＨ８〜
９．５に調節した２モルのＮａＣ１を含有する０、１６
％（Ｗ／Ｖ）のアンモニアであり、好ましい溶離混合物
はＰＨ１Ｏ，５〜１２に調節した２モルのＮａｃｌを含
有する０、１６％（Ｗ／Ｖ）のアンモニアであり、およ
び最も好ましい混合物はＰＨＩＩ。

５に調節した混合物である。

抗生物質Ａ４０９２６因子、すなわち、抗生物ｊ（Ａ４
０９２６因子Ａ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物
質Ａ４０９２６因子Ｂｏ、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｆ
Ａおよび抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢは、抗生物質Ａ
４０９２６複合体の溶液からカラムクロマトグラフィー
により、好ましくは逆相クロマトグラフィーにより単離
される。

逆相カラムクロマトグラフィーの場合において好ましい
静止相はシラン化シリカゲルである。しかしながら、す
ぐれた結果は、また、費官能化ポリスチレンおよびアク
リル樹脂、例えば、商品名。

アンバーライト（Ａｍｂｅｒ　ｌ　ｉ　ｔ　ｅ）ＸＡＤ
−２、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−７およびＸＡＤ−８（ロー
ム・アンド拳ハースＹ）またはシアイオン（Ｄｉ　ａｉ
　ｏｎ）ＨＰ２０　（ミツビシ）のカラムクロマトグラ
フィーを使用して得ることができる。逆相精製工程を静
止相としてシラン化シリカゲルにより達成する場合にお
いて、カラムは好ましくは緩衝化水溶液でｐＨ４〜９、
好ましくは５．５〜６．５において予備平衡化し１次い
で同一・緩衝化溶液中において極性水混和性溶媒の直線
勾配で溶離する。極性水混和性溶媒の代表例は、水溶性
アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプ
ロパツール、ｎ−ブタノール）、アセトン、アセトニト
リル、テトラヒドロフラン、ジオキサンおよびジメチル
ホルムアミドおよびそれらの混合物である。好ましい水
混和性溶媒　　　　　　　□はアセトニトリルである。

溶離された分画をその抗生物質含量について、感受性微
生物についての通常のバイオアッセイ、例えば、紙ディ
スクまたは寒天−拡散アッセイによりアッセイする。感
受性有機体の例は、ハ之基（Ｓ、　　　ａｕｒｅｕｓ）
である。

クロマトグラフィーは、また、ＴＬＣまたはＨＰＬＣ技
術により便利に監視される。

好ましいＨＰＬＣ技術は、好ましくは５ＩＬｍの直径を
有するＣ−１８アルキル基で、官能化されたシラン化シ
リカゲルの多孔質および球形のカラム［例えば、５４ｍ
のウルトラスフェア−（Ｕｌｔｒａｓ　ｐｈｅｒｅ＠）
００５　　アルテックス（Ａｌｔｅｘ）；ベックマン争
カンパニー］、Ｃ−１８アルキル基で官能化されたシリ
カゲルである予備カラム［例えば、ＲＰ１８　　ブラウ
ンリー・ラプス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ　　Ｌａｂｓ）］お
よび水性緩衝化溶液中の極性水混和性溶媒１例えば、前
述のうちの一種の直線勾配混合物である溶離剤を使用す
る逆相ＨＰＬＣにより代表される。

好ましくは、この溶液はｐＨ５〜７に調節される。最も
好ましい溶離剤は、溶離剤Ａ中の溶離剤Ｂの５〜６０％
の直線勾配により代表され、ここで溶媒Ａはアセトニト
リル／水性緩衝液の、ＰＨ５〜７．１０：９０、の混合
物であり、そして溶媒Ｂはアセトニトリル／水性緩衝液
の、ｐＨ５〜７．７０：３０．の混合物である。この分
野において知られているように、多くの物質を内部標準
として使用することができる。非常に便利なものは、こ
の場合において、このＨＰＬＣ系において本発明の化合
物に近接した保持時間を有するティコプラニンＡ２成分
２［グルツボ・レペチット（Ｇｒｕｐｐｏ　　Ｌｅｐｅ
ｔ　ｆ　ｔ）Ｓ、ｐ。

Ａ、）］である、この標準物質は、既知であり。

そして英国出願（ＧＢ−Ａ）２１２１４０１号に記載さ
れている。

同様な抗生物質含量を有する分画を、プールし、および
前述のような脱塩して、本質的に純粋な抗生物質Ａ４０
９２６因子Ａ、因子Ｂ、因子Ｂｏ，因子ＦＡ、および因
子ＰＢを得る。

本質的に純粋な抗生物質Ａ４０９２６因子Ａおよび抗生
物質Ａ４０９２６因子Ｂ、抗生物質Ａ４０９２６因子ｎ
ｏ、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生物質Ａ４
０９２６因子ＦＢは、それらを含有する分画から、既知
の技術により、例えば、凍結乾燥、非溶媒による沈殿ま
たは水溶液のｐＨの変化による沈殿により得られる。

便利な手順は、水を共沸混合物を形成することのできる
溶媒を添加し、水を共沸蒸留により除去し、次いで前述
したような非溶媒の添加後得られた沈殿を濾過すること
を含む。

抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＡおよびＰＢは、少なくと
もある醗酵条件下に、抗生物質Ａ４０９２６生産性微生
物の主要な抗生物質の生産物である。抗生物質Ａ４０９
２６因子ＡおよびＢは、それぞれ抗生物＠Ａ４０９２６
因子ＦＡおよび因子ＦＢの主な転化生産物（ｔ　ｒａｓ
ｆ　ｏ　ｒｍａｔ　ｉＯｎ　ｐｒｏｄｕｃｔ）であり、
そしてしばしば醗酵肉汁中にすでに存在する。

塩基性条件下に、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡは抗生
物質Ａ４０９２８因子Ａに転化することができ、そして
抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＢは抗生物質Ａ４０９２６
因子Ｂに転化することができるという事実が発見された
０例えば、抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＡおよび抗生物
質Ａ４０９２６因子ＦＢは、０゜５〜ｌＯ％の水性アン
モニアまたは他の親核性塩基、例えば、有機アミンで室
温において８〜２４時間処理することにより、それぞれ
抗生物質Ａ４０９２Ｂ因子Ａおよび抗生物質Ａ４０９２
６因子Ｂに転化される。結局、醗酵肉汁、または抗生物
質Ａ４０９２６含有抽出物またはその濃縮物をある時間
塩基性条件下に（例えば、親核塩基の水溶液、＞ｐＨ９
、−夜）放置すると、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａおよ
び抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂに富んだ抗生物質Ａ４０
９２６複合体が得られるであろう、醗酵肉汁、抽出物ま
たはその濃縮物を塩基性環境に暴露する時間が短いと、
抗生物質Ａ４０９２Ｂ因子ＦＡおよび抗生物質Ａ４０９
２６因子ＰＢに富んだ抗生物質Ａ４０９２６複合体が得
られる。

因子Ａおよび因子Ｂに富んだ抗生物質Ａ４０９２６複合
体を得るために好ましい手順は、それゆえ、抗生物質Ａ
４Ｑ９２６複合体（主として抗生物質Ａ４０９２６因子
ＦＡおよびＦＢを含有する）を室温において８〜１２時
間水性親核塩基、例えば、水性アンモニア、中に放置し
、次いで所望の抗生物質の複合体を前述のようにして単
離することを含む。

抗生物質Ａ４０９２６含有溶液の例は、醗酵肉汁、抽出
および親和性クロマトグラフィー溶離分画である。

純粋な抗生物質Ａ４０９２６は、粗製複合体を親和性ク
ロマトグラフィーにより前述のようにしてさらに精製す
ることによって得ることができる。

そのようにして得られる生産物は、その純粋な因子から
誘導されうる生物学的および物理化学的性質を有し、実
施例において抗生物質Ａ４０９２６複合体ＡＢと呼ぶこ
とにする。

因子ＦＡおよびＦＢ中に抗生物質Ａ４０９２６複合体調
製物を濃縮するために好ましい手順は、親和性クロマト
グラフィー溶離分画を酸、好ましくは鉱酸１例えば、硫
酸または塩酸で急速に中和することを含む。

この複合体から純粋な抗生物質Ａ４０９２Ｂ因子ＦＡお
よびＦＢを単離することは、上に報告した手順のうちの
１つに従い達成することができる。

好ましい手順は、中圧（５〜５０バール）または高圧（
１００〜２００バール）下の、好ましシはテンレスのカ
ラム中の、逆相液体クロマトグラフィーを含む、固体相
は２〜１８個、最も好ましくはＣｌ８）の炭化水素相ま
たはフェニル基でシラン化されたシリカゲルであること
ができ、そして溶離剤は上に定義した極性水混和性溶媒
と樹脂と適合性のｐＨ（好ましくはｐＨ４〜８）の水性
緩衝液との混合物である。

溶離は通常のように監視し、均質な抗生物質含量を有す
る分画をプールし、次いで前述のように処理して、下に
報告する特性を有する純粋な成分を単離する。

高性能のＨＰＬＣにより、抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ
は実際には因子Ｂ０および因子Ｂ□と命名される２種類
の因子の混合物であることが示された。抗生物質Ａ４０
９２６因子Ｂのほぼ９０％を占める抗生物質Ａ４０９２
６因子Ｂｅは、因子Ｂの物理化学的特性の点りにおいて
後述する系においてティコプラニンＡ２成分２に関して
１．２２のＲｔを有する因子であり、一方抗生物質Ａ４
０９２６因子Ｂのほぼ１０％を占める因子Ｂ□は同一系
において１．２７のＲｔを有する因子である。

純粋な抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０は、抗生物質Ａ４
０９２６因子Ｂを、例えば、その単離に使用して逆相ク
ロマトグラフィー手順を反復することによりさらに精製
して得られる。抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０の物理化
学的および生物学的性質は抗生物質Ａ４０９２Ｂ因子Ｂ
のそれらと実質的に同一であるが、ただし上の引用した
ものに類似する系におけるＨＰＬＣ分析において、それ
は１つのみのピーク（記載するＨＰＬＣ系においてティ
コプラニンＡ２成分２に関してＲｔｌ。

２２）をもつ。

この説明および特許請求の範囲における抗生物質Ａ４０
９２Ｂ因子Ｂと抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ６との間の
上に概説した類似性のため、抗生物質Ａ４０９２６因子
Ｂの生物学的性質についての言及は、抗生物質Ａ４０９
２Ｂ因子Ｂの主要成分（約９０％）でありかつ主として
その生物学的　　　　　　　：性質に寄与する抗生物質
Ａ４０９２Ｂ因子Ｂｏをも言及するものとして理解され
たい。

したがって１本発明の抗生物質は醗酵肉汁から単離する
ことができ、あるいは官能化されたポリスチレン、アク
リルまたはポリデキストランのマトリックスを包含する
強いまたは弱いアニオン樹脂によりさらに精製すること
ができる０弱アニオン交換樹脂の例は１次の商品名で販
売されているものである：ドウウェクス（Ｄｏｗｅｘ）
またはＷＧＲ（ダウ・ケミカル）、アンバーライトＩＲ
Ａ−７３（ローム・アンド・ハース）、ＤＥＡＥ−セフ
ァデクス（Ｓｅｐａｈｄｅｘ）（ファーマシア）０本発
明に従い使用することのできる強アニオン交換樹脂の例
は、次の商品名で販売されているものを包含する：ドウ
ウェクスＭＳＡ−１、ＳＢＲ，５ＢＲ−Ｐ　（ダウ・ケ
ミカル）、アンバーライトＩＲ−９０４（ローム・アン
ド・ハース）およびＱＡＥ−セファデクス（ファーマシ
ア）。

これらの樹脂からの本発明の抗生物質の溶離は、水また
は水と有機水混和性溶媒、例えば、低級−アルコール（
例えば、（Ｃ１−Ｃ４）アルカノール）または低級アル
キルケトン（例えば、アセトン）との混合物中の、電解
質１例えば、ナトリウムまたはカリウムのハドロクロラ
イドの水溶液の直線勾配により実施される。

前述のように１本発明の抗生物質は、酸性および塩基性
の官能性を有し、そして従来法に従い塩類を形成するこ
とができる０式１の化合物の代表的なかつ適当な付加塩
類は、有機酸および無機酸との標準の反応によって形成
される塩類を包含する。有機酸および無機酸の例は１次
の通りである：塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸
、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、コハク酸、クエ
ン酸、アスコルビン酸、乳酸、マレイ酸、フマル酸、パ
ルミチン酸、コール酸、パモン酸、ムチン酸、グルタミ
ン酸、ショウノウ酸、グルタル酸、グリコール酸、フタ
ル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸
、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸
、ピクリン酸、安息香酸、桂皮酸などの酸。

これらの塩基の代表例は、次の通りである：アルカリ金
属またはアルカリ土類金属の水酸化物、例えば、ナトリ
ウム、カリウム、およびカルシウムの水酸化物；アンモ
ニアおよび有機アミン、脂肪族、脂環族または芳香族の
アミン、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリ
メチルアミン、およびピコリン。

本発明の遊離アミノ化合物または塩でない化合物の対応
する付加塩への転化、およびその逆、すなわち、本発明
の化合物の付加塩の塩ではないまたは遊離アミノの形態
への転化は１通常の技術の範囲内であり、そして本発明
の範囲に包含される。

例えば１本発明の化合物は、塩ではい形態において水性
溶媒中に溶解し、そしてわずかにモル過剰量の選択され
た酸または塩基を添加することにより、対応する酸また
は塩基の付加塩に転化することができる０次いで、得ら
れる溶液または懸濁液を凍結乾燥して所望の塩を回収す
る。

最終の塩が塩でない形態で可溶性の溶媒中に不溶性であ
る場合、化学的量論量またはわずかにモル過剰量の選択
された酸または塩基の添加後、塩でない形態の有機溶液
から濾過により回収される。塩でない形態は水性溶媒中
に溶解した対応する酸または塩基の塩から調製すること
ができ、次いでこれを中和して塩でない形態を遊離させ
る。

中和に引き続いて、脱塩が必要であるとき、普通の脱塩
手順を用いることができる０例えば、シラン化シリカゲ
ル、官能化されていないポリスチレン、アクリルおよび
調節された孔のポリデキストランの樹脂（例えば、セフ
ァデクス２０）または活性炭を用いるカラムグロマトグ
ラフイーを便利に使用することができる。所望塩を水溶
液で溶離した後、所望の生産物を水と極性または非極性
の有機溶媒との混合物の直線勾配または段階的勾配１例
えば、アセトニトリル／水の５０：５０から１００％の
アセトニトリルにより溶離する。

この分野において知られているように、製薬学的に許容
されうる酸（塩基）または製薬学的に許容されない＃（
塩基）との塩形成を便利な精製技術として使用すること
ができる。形成および単離後、抗生物質Ａ４０９２６を
対応する塩でない形態または製薬学的に許容されうる塩
に転化することができる。

ある場合において、本発明の化合物の塩基付加塩は水お
よび親木性溶媒中に一層可溶性である。

Ａ４０９２６　　　　Ａ　　　　　　ヒ８性 Ａ）　添付図面の第１図に示され、かつ次の吸収最大を
示す紫外線吸収スペクトル： λｍａｘ （ｎｍ） ａ）　　０．１Ｎ　　ＨＣｌ　　　　　２８１ｂ）　リ
ン酸塩緩衝液　ｐ　　Ｈ２８１７，３８３００ （肩） ｃ）　　０．１Ｎ　　ナトリウムま たはカリウムの水酸化物　３００ ｄ）　メタノール　　　　　　　２８２ｅ）　リン酸塩
緩衝液　ｐ　　Ｈ２８２９゜０　　　　　　　　３００ （肩） Ｂ）　添付図面の第２図に示され、かつ次の吸収最大を
示す赤外線吸収スペクトル（Ｃｍ−”）： ３７００−３１００．３１００−２８００（ｎｕｊｏ　
ｌ）：　１６５５；　１６２０−１５６０；　１５１０
：１４８０−１４１０（ｎｕ　Ｊ　ｏ　ｌ）　；　１３
７５　（ｎｕ　ｊ　ｏ　１）、１３２０−１２５０．１
２５０−１１９ｏ；　１１００−９５０；８１０ニア２
０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）　添付図面の第３図に示されかつＤＭＳＯｄ６　（
ヘキサデユーテロジメチルスルホキシド）中で記録した
２７０ＭＨｚにおける信号（ｐｐｍ）の次の群を示すＩ
　Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準、ＴＭＳ（０，００
ｐｐｍ）、　（δ＝ｐｐｍ）： δｏ、５ｓ（ｔ、６Ｈ）：１．２１（約１ＩＨ）；　１
．４３　（２Ｈ）；　２−０１　（２Ｈ）　　；２．３
１−２．３４）（３Ｈ）；　４−８．２　（約１６Ｈ）
　；６．２−８　（約２３Ｈ）：８．４４．９．２２．
９．６６（広い帯；移動性プロトン） ２　、４　４　：　Ｈ２０のピークからの干渉、 Ｄ）　次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、ティ
コプラニンＡ２成分（Ｒｔ　＝　２０．３分）に関する
１、２２の保持時間（Ｒｔ）： カラム：　ウルトラスフェア−（Ｕｌｔｒｌ。

ａｓｐｈｅｒｅ）００５　（５ｐ ｍ）アルテックス（Ａ　ｌ　ｔ　ｅ Ｘ）［ベックマン（Ｂｅｃｋｍ ａｎ）１４．６ｍｍ（内径）× ５０ｍｍ 予備カラム：　ブラウンリー・ラプス（Ｂｒｏｗｎｌｅ
ｅ　　Ｌ　　ａ　　ｂ ｓ）ＲＰ　　１　８　　（５ｋ ｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ３ＣＮ　　　　　　　　１０％ ＮａＨ２ＰＯ，＠Ｈ２０ （２，５ｇ／ｌ）　　　　　９０％　　　・ＰＨ６，０
に調節。

溶離剤Ｂ： ＣＨ，ＣＮ　　　　　　　　７０％ ＮａＨ２ＰＯ４ＣＨ２０ （２，５ｇ／ｌ）　　　　　３０％ ｐＨ６，０に調節。

溶離：　溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直
線勾配、４０分、 流速：　　１．８ｍｌ／分、 ＵＶ検出器＝　　２５４ｏｍ。

内部標準：　ティコプラニンＡ２成分２［グルツボ・レ
ペチット（Ｇ ｒｕｐｐｏ　　Ｌｅｐｅｔｌ ｔ）ｉＰ、Ａ、］　。

同一の条件下に、テステステロン［ロウセル・ラフラフ
（Ｒｏｕｓｓｅｌ　　Ｕｃｌａｆ）に関する保持時間は
０．６０である。

Ｅ）　試料を不活性雰囲気（ΔＷ　４．６％）のもとで
約１４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次
の近似百分率組成（平均）を示す： 炭素５］、８２％；水素５．１７％：窒素６．３１％；
塩素（合計）４゜２４％；塩素（イオン性）０゜３７％
、 空気中で９００℃における無機残留物：１．２％、 Ｆ）　過剰のＨＣＩの添加後にＫＯＨで滴定すると、２
−メトキシエタノール（ＭＣ３）：水、４：１、中の酸
−塩基の滴定のプロフィルは、次のｐｋ　　　　を有す
るイノンＣ３ 化作用を示す：４．６．５．６．７．２．９．２、 Ｇ）　次のクロマトグラフィー系における０、２４のＲ
ｆおよび０．７０のティコプラニンＡ２成分２に関する
Ｒｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ２　ＳＯ２７０ アセトニトリル　　　　　　　　　３０シラン化シリカ
ゲル６０Ｆ２＠４マーク（Ｍｅｒｃｋ）板（層の厚さ０
．２５ｍｍ） 可視化ニ ー　　ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ　　Ｒｅａｇｅｎｔ）、すな
わち、ジアゾ化スルファ ニル酸［ジャーナル・オブ・クロマト グラフィー（Ｊ、Ｃｈｒｏｍａｔ。

ｇ、）且、　１７１　（１９６５）　、ツアイトシュリ
フト・フユール・フィジ カリッシェ・ヘミ−（Ｚ、Ｐｈｙｓｉ ｏｆ　、Ｃｈｅｍ、）２旦ヱ、９９　（１９５３）］を
使用する黄色 ６３３を使用する最小ディビス（Ｄａ ｖｉｓ）培地上のバイオオートグラ フィー、 Ｈ）　　　１７１７にＭ＋Ｈ・ピークを示すＦＡＢ−Ｍ
Ｓスペクトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）’Ｌ、た
約１７１６の分子量、 ”　　　Ａ４０９２６　　　Ｂ　　　　　性 Ａ）　添付図面の第４図に示されかつ次の吸収最大を示
す紫外線吸収スペクトル： λｍａｘ （ｎｍ） ａ）　　０．１Ｎ　　ＨＣｌ　　　　　２８２ｂ）　リ
ン酸塩緩衝液　Ｐ　　Ｈ２８１７，３８３（０ （肩） ｃ）　　０．１Ｎ　　ナトリウムま たはカリウムの水酸化物　３００ ｄ）　リン酸塩緩衝液　ｐ　　Ｈ２８３９，０３００ （肩） ｅ）　メタノール　　　　　　　２８２Ｂ）　添付図面
の第５図に示され、かつ次の吸収最大を示す赤外線吸収
スペクトル（Ｃｍ−’）： ３７００−３０８０．３０８０−２７００（ｎｕｊｏｌ
）；１７２０−１６２５；　１６２５−１５８０；１５
０５：１４６０（ｎｕｊ　ｏ　１）；　１３７５　（ｎ
ｕｊ　ｏ　１）；１２９５；１２３０；１２１０；１１
５０；１１００−１０４０．１０３０；９７０；８９０
；８４０；８１０；７２０　　（ｎｕ　ｊ　ｏ　ｌ）、 Ｃ）　添付図面の第６図に示されかっＤＭＳＯｄｓ　　
（ヘキサデユーテロジメチルスルホキシド）中で記録し
た２７０ＭＨｚ’Ｈ−ＮＭＲにおける信号（ｐｐｍ）の
次の群を示す　’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準、
ＴＭＳ　（０，００ｐｐｍ）、（δ＝ｐｐｍ）： ６０．８５（ｄ、イソプロピルのＣＨｓ　）、１．１５
（約１３Ｈ）；ｌ。４４（約２Ｈ）：２゜０２　（２Ｈ
）；　２．３２−２　。

３５）（３Ｈ）；４−６．１　（約１６Ｈ）；６゜１−
８（約２３Ｈ）；８゜５２．９．３０．９．６８（広い
帯；移動性プロト　ン） Ｄ）　次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、ティ
コプラニンＡ２成分（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１、
２２および１．２７の保持時間（Ｒｔ）： カラム：　ウルトラスフェア−（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ　（５ＪＬ ｍ）アルテックス（Ａ　１　ｔ　ｅ ｘ）［ベック−ｙン（Ｂｅｃｋｍ ａｎ）１４．６ｍｍ（内径）× ５０ｍｍ 予備カラム：　ブラウンリー・ラプス（Ｂｒｏｗｎｌｅ
ｅ　　　Ｌ　　ａ　　ｂ ｓ）ＲＰ　　１　８　　（５’ｇ ｍ） □ 溶離剤Ａ： ＣＨ，ＣＮ　　　　　　　　　　１０％ＮａＨ２ＰＯ４
ＣＨ２０ （２゜５ｇ／ｌ）　　　　　　９０％ ｐＨ６，０に調節。

溶離剤Ｂ： ＣＨ，ＣＮ　　　　　　　　７０％ ＮａＨ，ＰＯ４ｅＨ，０ （２，５ｇ／ｌ）　　　　　３０％ ｐＨ６，０に調節、 溶離：　溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直
線勾配、４０分。

流速：　　１．８ｍｌ／分。

ＵＶ検出器：　　２５４ｎｍ、 内部標準：　ティコプラニンＡ２成分２［グルツボ・レ
ペチット（Ｇ ｒｕｐｐｏ　　Ｌｅｐｅｔｉ ｔ）Ｓ、Ｐ、Ａ、］、 Ｅ）　試料を不活性雰囲気（ΔＷ　９．６％）のもとで
約１４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次
の近似百分率組成（平均）を示す： 炭素５４．０９％：水素５．１３％；窒素６．３４％：
塩素（合計）４．１２％：塩素（イオン性）０．３９％
、 空気中で９００℃におけるＳ機残留物：５％。

Ｆ）　過剰のＨＣｌ　（ｐＨ２，７）の添加後にＫＯＨ
で滴定すると、２−メトキシエタノール（ＭＣ５）：水
、４：１．中の酸−塩基の滴定のプロフィルは、次のｐ
ｋ　　　　をＣ５ 有するイノン化作用を示す：４．５，５゜６．７．２．
９．２、 Ｇ）　次のクロマトグラフィー系における０、２１のＲ
ｆおよび０．５３のティコプラニンＡ２成分２に関する
Ｒｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ２ＳＯ４７０ アセトニトリル　　　　　　　　　３０シラン化シリカ
ゲル６０Ｆ２５４マーク（Ｍｅｒｃｋ）板（暦の厚さ０
．２５ｍｍ） 可視化ニ ー　Ｕｖ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ　　Ｒｅａｇｅｎｔ）、すな
わち、ジアゾ化スルファ ニル酸［ジャーナル・オブ・クロマト グラフ４−（Ｊ、Ｃｈｒｏｍａｔ。

ｇ、）幻、　１７１　（１９６５）　、ツアイトシュリ
フト・フユールーフィジ カリッシェ・ヘミ−（Ｚ、Ｐｈｙｓｉ ｏ　ｌ　、Ｃｈｅｍ、）２旦２．９９（１９５３）］を
使用する黄色 −Ｂ、５ｕｂｔｉｌｆＳ　ＡＴＣＣ６ ６３３を使用する最小ディビス（Ｄａ ｖｉｓ）培地上のバイオオートグラ フィー、 Ｈ）　　　１７３１にＭ＋Ｈｅピークを示ｔＦＡＢ−Ｍ
Ｓスペクトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）ｌ、、た
約１７３０の分子量、 ／　　　Ａ４０９２６　　　Ｂ 負 Ａ）　添付図面の第４図に示されかつ次の吸収最大を示
す紫外線吸収スペクトル： λｍａｘ （ｎｍ） ａ）　　　０．１Ｎ　　ＨＣＩ　　　　　　　２８２ｂ
）　リン酸塩緩衝液　Ｐ　　Ｈ２８１７，３８３００ （肩） ｃ）　　０．１Ｎ　　ナトリウムま たはカリウムの水酸化物　３００ ｄ）　リン酸塩緩衝液　Ｐ　　Ｈ２８３９，０３００ （肩） ｅ）　メタノール　　　　　　　２８２Ｂ）　添付図面
の第５図に示され、かつ次の吸収最大を示す赤外線吸収
スペクトル（Ｃｍ−五　）　　： ３７００−３０８０．３０８０−２７００（ｎｕ　ｊ　
ｏ　１）　：１７２０−１６２５　；　１６２５−１５
６０；　１５０５；　１４６０（ｎｕ　ｊ　ｏ　ｌ）　
；　１３７５　（ｎｕ　ｊ　ｏ　１）：１２９５；１２
３０；１２１０；１１５０；１１００−１０４０；　１
０３０；９７０；８９０；８４０；８１０；７２０　（
ｎｕ　ｊ　ｏ　ｌ）、 Ｃ）　添付図面の第６図に示されかつＤＭＳＯｄａ　　
（ヘキサデユーテロジメチルスルホキシド）中で記録し
た２７０ＭＨｚ’Ｈ−ＮＭＲにおける信号（ｐｐｍ）の
次の群を示す　Ｉ　Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準、
ＴＭＳ　（０，００ｐｐｍ）、（δ＝ｐｐｍ）： ６０．８５（ｄ、イソプロピルのＣＨａ）、１．１５（
約１３Ｈ）；ｌ−４４（約２Ｈ）；２．０２　　（２Ｈ
）、２．３２−２　　。

３５）（３Ｈ）；４−６．１　（約１６Ｈ）、６．１−
８（約２３Ｈ）；８．５２．９．３０．９．６８（広い
帯；移動性プロト　ン） ２．５−４：Ｈ２Ｏのピークからの干 渉、 Ｄ）　次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、ティ
コプラニンＡ２成分（Ｒｔ　＝　２０゜３分）に関する
１、２２の保持時間（Ｒｔ）： カラム：　ウルトラスフェア−（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）ＯＤＳ　（５ＪＬ ｍ）アルテックス（Ａ　ｌ　ｔ　ｅ ｘ）［ベックマン（ＢｅＣｋｍ ａｎ）１４．８ｍｍ（内径）× ５０ｍｍ 予備カラム：　ブラウンリー・ラプス（Ｂｒｏｗｎｌｅ
ｅ　　Ｌ　　ａ　　ｂ ｓ）ＲＰ　　ｌ　　Ｂ　　（５ＩＬ ｍ） 溶離剤Ａ； ＣＩ、ＣＮ　　　　　　　　１０％ ＮａＨ，ＰＯ４ｅＨ２０ （２，５ｇ／ｌ）　　　　　９０％ ｐＨ６，０に調節。

溶離剤Ｂ： ＣＨ，ＣＮ　　　　　　　　７０％ ＮａＨ２ＰＯ４＠Ｈ２０ （２，５ｇ／ｌ）　　　　　３０％ ｐＨ６，０に調節、　　　　　　　　　　　　　　　　
１・溶＃１：　溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤
Ｂの直線勾配、４０分、 流速：　　１．８ｍｌ／分。

ＵＶ検出器：　　２５４ｎｍ、 内部標準：　ティコプラニンＡ２成分２［グルツボ嗜レ
ペチット（Ｇ ｒｕｐｐｏ　　Ｌｅｐｅｔｉ ｔ）Ｓ、Ｐ、Ａ、］、 Ｅ）　試料を不活性雰囲気（ΔＷ　９．６％）のもとて
約１４０℃において前もって乾燥した後１元素分析は次
の近似百分率組成（平均）を示す： 炭素５４．０９％；水素５．１３％；窒素６．３４％；
塩素（合計）４．１２％；塩素（イオン性）０．３９％
、 空気中で９００℃における無機残留物＝５％。

Ｆ）　過剰のＨＣＩの添加後にＫＯＨで滴定すると、２
−メトキシエタノール（ＭＣ５）：水、４：１、中の酸
−塩基の滴定のプロフィルは、次のｐｋ　　　　を有す
るイノンＣ３ 化作用を示す：４．５，５．６．７．２゜９．２、 Ｇ）　次のクロマトグラフィー系における０、２１のＲ
ｆおよび０．５３のティコプラニンＡ２成分２に関する
Ｒｆ値： ５％ＣＭ／Ｖ）の水性 Ｎａ、５０４　　　　　　　　　７０ アセトニトリル　　　　　　　　　３０シラン化シリカ
ゲル６０Ｆ２８４マーク（Ｍｅｒｃｋ）板（層の厚さ０
　、２５ｍｍ） 可視化ニ ー　　ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ　　Ｒｅａｇｅｎｔ）、すな
わち、ジアゾ化スルファ ニル酸［ジャーナル・オブ・クロマト グラｙ４−　（Ｊ　、Ｃｈｒｏｍａｔ　。

ｇ、）□、　１７１　（１９６５）　、ツアイトシュリ
フト拳フユール・フィジ 力すッシェ命ヘミ−（Ｚ、Ｐｈｙｓｉ ｏ　ｌ　、Ｃｈｅｍ、）２旦ヱ、９９（１９５３）］　
を使用する数色 −Ｂ、５ｕｂｔｉｌｉｓ　　ＡＴＣＣ６６３３を使用す
る最小ディビス（Ｄａ ｖｉｓ）培地上のバイオオートグラ フィー、 Ｈ）　　　１７３１にＭ＋Ｈ・ピークを示すＦＡＢ−Ｍ
Ｓスペクトルからデジューム（ｄ　ｅ　ｓ　ｕｍｅ）し
た約１７３０の分子量、 Ｌ　　　　Ａ４０９２８　　　　ＰＡ　　　　　　　”
”性 Ａ）　添付図面の第７図に示され、かつ次の吸収最大を
示す紫外線吸収スペクトル： λｍａｘ （ｎｍ） ａ）　　０．１Ｎ　　ＨＣＩ　　　　　２８２ｂ）　　
０．ＩＮ　　水酸化カリウ ム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３００Ｃ）
　リン酸塩緩衝液　ｐ　　Ｈ２８２７，３８３００ （肩） ｄ）　リン酸塩緩衝液　ｐ　　Ｈ２８３９，０３００ （肩） ３）　添付図面の第８図に示され、かつ次の吸収最大を
示す赤外線吸収スペクトル（Ｃｍ−１）： ３７００−３１００．３０００−２８００（ｎｕｊ　ｏ
　ｌ）；　１７６０−１６５５；　１６５５；　１６２
０−１５５０：１５０５　；１４６０　（ｎｕｊ　ｏ　
１）；　１３７５　（ｎｕｊ　ｏ　ｌ）；　１２６０．
１２５０−９５０゜８４５；８０５ニア２０　（ｎｕｊ
ｏｌ）、＝）　添付図面の第８図に示されかつＤＭＳＯ
ｄｓ　　（ヘキサデユーテロジメチルスルホキシド）中
で記録した２７０ＭＨｚ’Ｈ−ＮＭＲにおける信号（ｐ
ｐｍ）の次の群を示す　Ｉ　Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内
部標準、　ＴＭＳ　（０、００ｐ　ｐｍ）、（δ＝ｐｐ
ｍ）： ０．８６、ｄ’ｓ　　（ＣＨ３）；１．１５−１．２２
（ＣＨ２）ｎ；１−４１．ｍ（ＣＨ２）；２．０１．Ｓ
　　（ＣＨａ）：２−０１、ｍ　（ＣＨ２）：　２．２
ｇ、！（Ｎ−ＣＨ，）；４．２６−５．９６．ｂｒ　（
ペプチドおよび芳香族のＣＨ）；６．３３−７゜７３ｂ
ｒ（芳香族のＣＨおよびペプチドのＮＨ）、 ｂｒ　　＝　　広い ｄ　　＝　二重線 ｄｄ　　＝　　二重線の二重線 ｍ　　＝　多重線 Ｓ　　＝　−重線 ｔ　　＝　三重線 Ｄ）　次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、ティ
コプラニンＡ２成分（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１、
１５の保持時間（Ｒｔ）： カラム：　ウルトラスフェア−（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）００５　（５ＪＬ ｍ）アルテックス（Ａｌｔｅ り［ベックマン（Ｂｅｃｋｍ ａｎ）１４．６ｍｍ（内径）× ５０ｍｍ 予備カラム：　ブラウンリー・ラプス（Ｂｒｏｗｎｌｅ
ｅ　　Ｌ　　ａ　　ｂ ｓ）ＲＰ　　１　８　　（５終 ｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ，ＣＮ　　　　　　　　１０％ ＮａＨ２ＰＯ４＊１（２０ （２゜５ｇ／ｌ）　　　　　９０％ ｐＨ６・０に調節・　　　　　　　　　　　　　　　　
　１゜溶離剤Ｂ： ＣＨ，ＣＮ　　　　　　　　７０％ ＮａＨ２ＰＯ４＊Ｈ２０ （２，５ｇ／ｌ）　　　　　３０％ ｐＨ６，０に調節、 溶１ｌｌＩ：　　溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離
剤Ｂの直線勾配、４０分、 流速：　　１．８ｍｌ／分・ ＵＶ検出器：　　２５４ｎｍ。

内部標準：　ティコプラニンＡ２成分２［グルツボｅレ
ベチット（Ｇ ｒｕｐｐｏ　　Ｌｅｐｅｔｉ ｔ）Ｓ、Ｐ、Ａ、］　。

Ｅ）　次のクロマトグラフィー系における０、６２のテ
ィコプラニンＡ２成分２に関するＲｔ値： ５％（Ｗ／Ｖ）の水性 Ｎａ２５Ｏａ　　　　　　　　　　　７０アセトニトリ
ル　　　　　　　　　３０シラン化シリカゲル６０Ｆ２
１１４マーク（Ｍｅｒｃｋ）板（暦の厚さ０　、２５ｍ
ｍ） 可視化ニ ー　　ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ　　Ｒｅａｇｅｎｔ）、すな
わち、ジアゾ化スルファ ニル酸［ジャーナル・オブ・クロマト グラフ４−　（Ｊ　、Ｃｈｒｏｍａｔ　。

ｇ、）　２０，１７１　（１９６５）、　ツアイトシュ
リフト・フユール・２イジ 力リツシエ・ヘミ−（Ｚ、Ｐｈｙｓｉ ｏ　１　、Ｃｈｅｍ、）２旦２，９９（１９５３）］　
を使用する数色 −Ｂ、５ｕｂｔｉｌｉｓ　　ＡＴＣＣ６６３３を使用す
る最小ディビス（Ｄａ ｖｉｓ）培地上のバイオオートグラ フィー、 Ｆ）　　　１７６１に最も強いピークの群を示すＦＡＢ
−ＭＳスペクトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）ｌ、
た約１７５８の分子量、ＦＡＢ−ＭＳ分析の操作条件は
１次の通りであった： 計器：　　ＦＡＢガンのイオン・チク（Ｉ。

ｎ　　Ｔｅｃｈ）を装備するＶＧ Ｍａｄ　　ＺＡＢ　　ＳＥ 条件：　ポジティブ（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ＦＡＢ、Ｘｅ 加速電圧、８ＫＶ マトリックス：チオグリセロール 一グリセロール　１／１（ｖ／ ｖ）。

Ａ４０９２６　　　ＰＲ”” 性 Ａ）　添付図面の第１Ｏ図に示され、かつ次の吸収最大
を示す紫外線吸収スペクトル： λｍａｘ （ｎｍ） ａ）　　０．１Ｎ　　ＨＣＩ　　　　　２８２ｂ）　　
０．１Ｎ　　水酸化カリウ ム　　　　　　　　　　　　　　　　　　３００Ｃ）　
リン酸塩緩衝液　ｐ　　Ｈ２８２７，３８３００ （肩） ｄ）　リン酸塩緩衝液　ｐ　　Ｈ２８２９、０３００ （肩） Ｂ）　添付図面の第１１図に示され、かつ次の吸収最大
を示す赤外線吸収スペクトル（Ｃｍ−’）： ３７００−３１００．３０００−２８００（ｎｕｊ　ｏ
　ｌ）；　１７６０−１７１０；　１６５５．１６２０
−１５６０；　１６０５　。

１４８０−１４２０　（ｎｕｊｏｌ）；　１３７５　（
ｎｕｊ　ｏ　ｌ）；　１３２０−１２７０．１２３０−
１１９０；１１５０；１１２０−９２０；８４５；８１
０ニア２０　（ｎｕ　ｊ　ｏ　１）、 Ｃ９添付図面の第１２図に示されかつＤＭＳ　Ｏｌ）　
　　　ｄｓ　　（ヘキサデユーテロジメチルスルホキシ
ド）中で記録した２７０ＭＨｚにおける信号（ｐｐｍ）
の次の群を示すＡＨ−ＮＭＲスペクトル、内部標準、Ｔ
ＭＳ　（０。

００ｐｐｍ）、（δ＝ｐｐｍ） 多重度：　（属性）： ０．８４、ｄ（イソプロピルのＣＨｓ）；１．１７、ｍ
（ＣＨ２）Ｈ；１．４３．ｍ（ＣＨ２）　、ｌ　、９９
、ｓ　（ＣＨａ　）　。

２．０１．ｍ（ＣＨ，）；２．３１、Ｓ（Ｎ　　ＣＨｓ
）；２．７９、ｄｄ（Ｃ−Ｈ）；３．７０．ｍ（Ｃ−Ｈ
）；３．７０、ｍ　（Ｃ−Ｈ）：　４．０６−６．０２
、ｂｒ（ペプチドおよび芳香族のＣＨ）；８．４５−７
．７４、ｂｒ（芳香族のＣＨおよびペプチドのＮＨ）；
８．１９−９゜９９、ｂｒ（ペプチドのＮＨおよびフェ
ノールのＯＨ）、 Ｃ１添付図面の第１３図に示され、かつＤＭＳ２）　　
ＯｄｓプラスＣＦ、Ｃ００Ｄ中で記録した２７０ＭＨｚ
における信号（ｐｐｍ）ｃ７）次の群を示す’　Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトル、内部標準、ＴＭＳ　（０，００ｐｐｍ
）、（δ＝ｐｐｍ）多重度；　（属性）： ０．８４、ｄ（イソプロピルのＣＨ，）；１．１３、ｍ
（ＣＨ２）Ｈ；　１．４０．ｍ（ＣＨ２）；　ｌ　、９
８．ｓ　（ＣＨａ　）；２．００．ｍ　（ＣＩ（２）；
　２．９２、ｄｄ（Ｃ−Ｈ）；３．２９−３．７１．ｍ
　（１！のＣ−Ｈ）、４．０７−６．０９、Ｓおよびｍ
（ペプチドおよび芳香族のＣＨ）；６．４５−７．８３
、Ｓおよびｍ（芳香族のＣＭおよびペプチドのＮＨ）；
８．１７−１０．３８（ペプチドのＮＨ、フェノールの
ＯＨ）、 Ｄ）　次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、ティ
コプラニンＡ２成分（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１、
２７および１．３２の保持時間（Ｒｔ）： カラム：　ウルトラスフェア−（Ｕｌ、ｔｒａｓｐｈｅ
ｒｅ）ＯＤＳ　（５ＪＬ ｍ）アルテックス（Ａ　１　ｔ　ｅ Ｘ）［ベツクマｙ（Ｂｅｃｋｍ ａｎ）１４．６ｍｍ　（内径）Ｘ ５０ｍｍ 予備カラム：　ブラウンリー・ラプス（Ｂｒｏｗｎｌｅ
ｅ　　　Ｌ　　ａ　　ｂ ｓ）ＲＰ　　１　８　　（５ＩＬ ｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ，ＣＮ　　　　　　　１０％　　　　　　　　　１
ＮａＨ２Ｐｏ４”Ｈ２０ （２，５ｇ／ｌ）　　　　　９０％ ｐＨ６，０にｍｍ、 溶離剤Ｂ： ＣＨ，ＣＮ　　　　　　　　７０％ ＮａＨ２ＰＯ４＠８２０ （２，５ｇ／ｌ）　　　　　３０％ ｐＨ６，０に調節、 溶ｆａ：　　溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂ
の直線勾配、４０分。

流速：　　１．８ｍｌ／分、 ＵＶ検出器＝　　２５４ｎｍ、 内部標準：　ティコプラニンＡ２成分２［グルツボ・レ
ペチット（Ｇ ｒｕｐｐｏ　　Ｌｅｐｅｔｉ ｔ）Ｓ、Ｐ、Ａ、］、 Ｅ）　次のクロマトグラフィー系における０、５３のテ
ィコプラニンＡ２成分２に関するＲｔ値： ５％（Ｗ／Ｖ）の水性 Ｎａ２ＳＯ４７０ アセトニトリル　　　　　　　　　３０シラン化シリカ
ゲル６０Ｆ、、４マーク（Ｍｅｒｃｋ）板（層の厚さ０
　、２５ｍｍ） 可視化ニ ー　　ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ　　Ｒａａｇｅｎｔ）、すな
わち、ジアゾ化スルファ ニル酸［ジャーナル・オブ・クロマト グラフ４−（Ｊ　、Ｃｈｒｏｍａｔ　。

ｇ、）且、　１７１　（１９６５）　、ツアイトシュリ
フト・フユール・フィジ カリッシェ・ヘミ−（Ｚ、Ｐｈｙｓｉ ｏｌ、ｃｈｅｍ、）２旦２，９９（１ ９５３）］を使用する黄色 −Ｂ、５ｕｂｔｉｌｉｓ　　ＡＴＣＣ６６３３を使用す
る最小ディビス（Ｄａ ｖｉｓ）培地上のバイオオートグラ フィー、 Ｆ）　　　１７７６に最も強いピークの群を示すＦＡＢ
−ＭＳスペクトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）した
約１７７２＋７）分子量、ＦＡＢ−ＭＳ分析の操作条件
は、次の通りであった： 計器：　　ＦＡＢガンのイオン・チク（Ｉ。

ｎ　　Ｔｅｃｈ）を装備するＶＧ Ｍａｄ　　ＺＡＢ　　ＳＥ 条件：　ポジティブ（Ｐｏｓｉ　ｔ　ｉ　ｗｅ）ＦＡＢ
、Ｘｅ 加速電圧、８ＫＶ マトリックス：チオグリセロール 一グリセロール　１／１（ｖ／ ｖ）。

本発明の化合物の抗バクテリア活性は、生体外において
異る微生物培養物への標準希釈により立証することがで
きる。

ＭＩＣ（最小阻止濃度）の決定についての培養基および
生長条件は、次の通りであったニアイソセンチテスト（
Ｉｓｏｓｅｎｔｉｔｅｓｔ）肉汁［オキソイド（Ｏｘｏ
　ｉ　ｄ）］　、２２４時間スタフイロコッキ（Ｓｔａ
ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｆ）、ストーブ　マイセス・スエ玉
孟ユＸ（ＳｔｒｅＬエ　ｆａｅｃａｌｉｓ）およびダラ
ム陰性バクテリア［ｘｖ　　＋Ｊｌニアｍ−５９（Ｅｓ
ｃｈｅｒｉ　ｃ基土ａ　　Ｃ０ＩＩ）、ｚエニ上％＋Ｘ
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、プロレウス（Ｐｒｏｔｅ
ｕｓ）］：）ｙドーヘウ４−／ト　（Ｔｏｄｄ−Ｈｅｗ
ｉｔｔ）肉汁［デ４７コ（Ｄｉ　ｆｃｏ）］　、２２４
時間他のストレプトコッキ種；ＧＣ基本肉汁（ディフコ
）＋１％のアイツバイタレックス（Ｉｓｏｖｉｔａｌｅ
ｘ）（ＢＢＬ）、４８時間、ＣＯ□に富んだ雰囲気、主
工土１トゴノルホエアｚ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　　　ｏ
ｎｏｒｒｈｏｅａｅ）；ＧＢ基本肉汁（ディフコ）＋１
％のアイツバイタレックス＋０．００１％のヘミン（ｈ
ｅｍｉ　ｎ）　、　２４時間、二±２エユ２拳インフル
エンｆ−ｒ−（Ｈａｅｍｏ　　ｈｉ　ｌｕｓ　　１ｎｆ
ｌｕｅｎ互ａｅ）；ＡＣ肉汁（ディフコ）、２４時間、
嫌気的雰囲気、久三区上１にあ拳ペルフリゲンス（Ｃｌ
ｏｓｔｒｉｕｍ　　　ｅｒｆｒｉｎ　　ｅｎ至）；ウイ
ルキンスーチャルグレン（Ｗｉｌｋｉｎｓ−Ｃｈａｌｇ
ｒｅｎ）寒天［Ｔ、Ｄ、ウイルキンスおよびＳ、チャル
グレン、１９７６、アンチミクロビアル・エイジェント
・アンド書ケモセラビー（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、　　
Ａｇ、　　Ｃｈｍｏｔｈｅｒ、）１０，９２６参照］、
４８時間、嫌気的雰囲気、他の嫌気的有機体［Ｓ、−Ｌ
ｉ上ｓ）；　ＰＰＬＯ肉汁（ディフコ）＋１０％のウマ
血清＋１％のグルコース、４８時間、マイコブ５ｉ−ｖ
＠ｉ’）’ｅｉ　　７Ａ（Ｍ　　ｃｏ　　ｌａｓｍａａ
ｌｌｉｓｅ　　ｔｉｃｕｍ）；酵母窒素基本肉汁（ディ
フコ）、２４時間、立ヱ２ｊ−ヱ土２インキュベーショ
ンは３７℃において実施した。

接種物は次の通りであった：１％（Ｖ／Ｖ）の４８時間
の肉汁、Ｍ、　　ａｌｌｉＳｅ　　ｔｉｃｕｍ）；約１
０’−１０’コロニ一形成性単位／ｍ１、他の肉汁希釈
のＭＩＣｉ約１０４−１０５バクテリア／スポツト（多
点接種器を使用て接種した）、寒天希釈のＭＩＣ（Ｈ，
ｉ　ｎｆ　ｌｕｅｎｚｌ」、Ｃ，ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、
　　ア、ａｃｎｅ王、旦、ｆｌａ　１ｌｉｓ）。

本発明の化合物の抗微生物活性は、また、Ｒ。

パランザ（Ｐａ　ｌ　ｌ　ｎｚ　ａ）ら、ジャーナル・
オブΦアンチミクロバイアル・ケモセラピー（Ｊ。

Ａｎｔ　１ｍ１ｃｒｏｂ、ｃｈｅｍｏｔｈ、）、１ユ、
４１９（１９８３）に本質的に記載されているように実
施する生体内実験により確証される。

実験的感染は、マウスにおいて互、パイオゲネス（ｏ　
　ｅｎｅｓ）Ｃ２０３の懸濁液を腹腔内に投与すること
により誘導させた。未処置動物が４８時間胃内に敗血症
により死ぬように、接種物を調節した。動物を、注射後
、約３０分以内に試験化合物で皮下的に処置した。スピ
アマン（Ｓｐｅａｒｍａｎ）およびカーバー（Ｋａｒｅ
ｂｅｒ）の方法［Ｄ、Ｊ、フイネイ（Ｆｉｎｎｅｙ）［
生物学的アッセイにおける統計学的方法（Ｓｔａｔｉｓ
ｔｉｃａｌ　　Ｍｅｔｈｏｄｓ　　ｉｎ　　Ｂｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌ　　Ａｓ５ａｙ）Ｊ　　、グリフイン（Ｇｒ
ｉｆｆｉｎ）、５２４ページ、１９５２］により、ＥＤ
、、値を各投与における生存百分率に基づいて１０日日
日計算した。上の条件において、ＥＤｓｏ値は抗生物質
Ａ４０９２６因子Ａについて０．４７ｍｇ／ｋｇ、抗生
物質Ａ４０９２６因子Ｂについて０．３３ｍｇ／ｋｇ、
抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＡについて０．５４ｍｇ／
ｋｇおよび抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＢについて０．
３１ｍｇ／ｋｇであった。

マウスにおける概算急性毒性（腹腔内）を、この分野に
おいて知られている方法に従い評価した。抗生物質Ａ４
０９２６の概算ＬＤ、。は、マウスにおいて皮下に投与
したとき、１００ｍｇ／ｋｇより高いことがわかった。

抗生物質Ａ４０９２６複合体およびその因子Ａ、Ｂ、Ｂ
ｏ、ＰＡおよびＦＢは、多くの広く拡散した感染の原因
であるグラム陽性バクテリアに対して活性である０通常
の治療学的処置に対してこれらの病原体の抵抗は増加す
るので、新しい抗　　　　　　　１生物質の必要性はな
お大きい。

すでに述べたように、本発明の抗生物質は爽イーｈｌＪ
７　（Ｎｅ　ｉ　ｓ　ｓｅ　ｒ　ｉ　ａ）菌株、例えば
、ネイセリアｅゴノルホエアエ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｏ
ｎｏｒｒｈｏｅａｅ）に対してすぐれた活性を有し、一
方それらは他のダラム陰性バクテリアに対して実際的に
不活性である。

淋病は過去１５〜２０年間絶えず生じていることが知ら
れている。感染の抑制は現在非常に面倒である。なぜな
ら、感染の全期間にわたってこの病気の伝達の回避につ
いて必要な注意を払わない感染個体の挙動に、また、関
係して多数の再感染が起こっているからである。他方に
おいて、普通に使用されている病原性有機体の抵抗は増
大しつつあるので、抗生物質とより長い処置との新しい
関連が必要となってくる。したがって、限定した投与で
、さらには１回の投与でさえ、淋病の感染、とくにネイ
セリア・ゴノルホエアエ（比！」５ｓｅｒｉａ　　　ｏ
ｎｏｒｒｈｏｅａｅ）の感染に有効である新しい抗生物
質の必要が増大しつつある。

−・般に、抗生物質の処置について、抗生物質Ａ４０９
２６複合体、その因子Ａ、Ｂ、Ｂ０．ＦＡおよびＦＢの
１種ならびに無毒のそれらの製薬学的に許容されうる塩
類またはそれらの混合物は、局所的にまたはひ非経口的
のような異る投与の道筋により投与することができる。

非経口的投与は、一般に、好ましい投与に道筋である。

注射用組成物は、油または水性ビヒクル中の懸濁液、溶
液、または乳濁液のような形態であることができ、そし
て懸濁剤、可溶化剤および／または分散剤のような補助
剤を含有することができる。あるいは、活性成分は、供
給の時間に、適当ななビヒクル、例えば、無菌の水を添
加したとき、再構成のための粉末の形態であることがで
きる。

投与の道筋に依存して、これらの化合物は種々の投与形
態に配合することができる。

ある場合において、経口的投与のための腸溶性被覆され
た投与形態に配合することが可能であリ、これは既知の
技術において知られているようにして調製することがで
きる［例えば、「レミントンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ’ｓ　　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｊｃａｌ　　Ｓ　
ｃ　　ｉ　　ｅ　ｎ　ｃ　ｅＳ）」　、第１５版、マッ
ク令パブリジング・カンパニー、米国ペンシルバニア州
イーストン、１６１４ページ参照〕、これは腸管内で抗
バクテリア剤の吸収がとくに望ましく、かつ胃を未変化
で通過させるとき、ことに有効であろう。

活性成分の投与量は、種々の因子、例えば、処置すべき
患者の大きさおよび状態、投与の道筋および頻度、およ
び含まれる薬剤に依存する。

本発明の抗生物質、すなわち、抗生物質Ａ４０９２６複
合体、その因子Ａ、ＦＡ、Ｂ、ＢｅおよびＦＢ、および
それらの製薬学的に許容されうる塩類は、約０．５〜５
０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ患者体重の活性成分の毎日の量
で、必要に応じての１〜４回／日に分割して投与したと
き一般に有効である。とくに望ましい組成物は、約１０
０〜約５，０００ｍｇ／単位を含有する投与単位で調製
されたものである。

しかしながら、淋病の単一の投与の処置に使用するとき
、抗生物質Ａ４０９２６複合体、その因子Ａ、ＰＡ、Ｂ
、ＢｏおよびＦＢのより少ない投与量、一般に０．５〜
５０ｍｇ／ｋｇを使用して、延長された時間にわたって
薬物の有効血液レベルを維持すべきである。

さらに、淋病の処置において、持続作用の非経口的投与
の形態は好ましく用いられる。持続作用の配合物は、こ
の分野において知られているように、異る機構および方
法に基づいて調製することができる。

抗生物質Ａ４０９２６複合体、その因子Ａ、Ｂ、Ｂｏ、
ＦＡおよびＦＢを含有する持続作用の配合物を調製する
好ましい方法は、水性または油性の媒質中に懸濁された
この抗生物質の水不溶性形態の使用を含む、これらの形
態は、すなわち、不溶性塩としであるいは遊離酸として
、事実、水溶性が低いため、筋肉注射のとき、非常にゆ
っくり放出され、これして抗生物質の持続された血液レ
ベルを与える。

製薬学的組成物の調製 た　の　　　　／　は、８％のプロ ピレングリコールを含有する無菌懸濁液ＵＳＰの５ｍｌ
および抗生物質Ａ４０９２６因子Ａの１゜０００ｍｇを
使用して調製される。

ため　　　　　ノ　は、８％のプロ ピレングリコールを含有する無菌懸濁液ＵＳＰの５　ｍ
　ｌおよび抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂの５０００　ｍ
　ｇを使用して調製される。

ため　　　　　／　は、５ｍｌの注 射用無菌水中に懸濁された抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ
ナトリウム塩の２．０００ｍｇを用いて調製される。

さらに、本発明の抗生物質は、偽膜大腸炎（ｐｅｕｄｏ
ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ　　　ｃ　　ｏ　　１　　ｉ　　
ｔ　　ｉＳ）の原因であるクロストリジウム・ｚＺ工乞
基（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　　　ｄｉｆｆｉｃｉｌ旦
）の生長を抑制するために有用〒ある。この抗生物質は
、偽膜大腸炎の処置において、製薬学的に許容されうる
形態にまたはされた、抗生物質または製薬学的に許容さ
れうる塩の有効量を経口的に投与することにより使用す
ることができるであろう、このような使用のため、抗生
物質はゼラチンカプセル剤または液状懸濁液の形態で投
与することができる。

薬物としての活性のほかに、本発明の化合物は動物の成
長促進剤として使用することができる。

この目的に、本発明の１種または２種以上の化合物を適
当な飼料中に混入して経口的に投与する。

用いる正確な濃度は、正常な飼料が消費されるとき、生
長促進に有効な量で活性剤を供給するために必要な量で
ある。

動物飼料への本発明の活性化合物の添加は、好ましくは
、活性化合物を有効量で含有する適当な飼料予備混合物
を調製し、そしてこの予＠混合物を完全な割合で混入す
ることによって達成される。あるいは、活性成分を含有
する中間濃厚物または供給補錠剤を飼料中に配合するこ
とができる。

このような飼料予備混合物および完全定量を調製しかつ
投与できる方法は、参考書に記載されており［例えば、
「アプライド・アニマル・ニュートリジョン（Ａｐｐｌ
ｉｅｄ　　Ａｎｉｍａｌ　　Ｎｕｔ　ｒ　ｉ　ｔ　ｉ　
ｏｎ）　Ｊ　　、Ｗ、Ｈ，７リードマンｅアンド・カン
パニー（Ｆｒｅｅｄｍａｎ　　ａｎｄＣｏ、）、５．７
ランシスコ（ＦｒａｎｃｉｓＣＯ）、米国、１９６９ま
たは「ライブストック・フィース会アンド・フィーディ
ング（Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ　　Ｆｅｅｄｓ　　ａｎｄ　
　Ｆｅｅｄｉｎｇ）、０・アンド・Ｂ・ブックス、米国
オレゴン州コバリス、１９７７参照］そしてここに引用
によって加える。

次の実施例により、本発明をさらに説明する。

実１１殊ユ 抗生物質Ａ４０９２６生産性菌株（Ａｃｔｉｎｏｍａｄ
ｕｒａ　ｇ）　ＡＴＣＣ３９７２７）の培養物を、オー
トミール寒天傾斜培地上で２８℃において２〜３週間生
長させ、そして０．５％の肉エキス、０．５％の自動溶
解酵母、０゜５％のペプトン、０．３％のカゼイン加水
分解物、２％のグルコース、０．１５％のＮａＣ１から
構成された１００ｍ１の培地（滅菌前ｐＨ７，５）を含
有する５　００　ｍ　ｌ容のエルレンマイヤーフラスコ
に接種するために使用する。このフラスコを２８℃にお
いて回転振ｉｉａ使用で２０Ｏｒｐｍで約７２時間イン
キュベーションし、次いでこの培養物を４１の上の培地
を含有する醗酵器に移す、この培養物を、２８℃におい
て約７２時間約２５Ｌ／分　　　　　　　１　′の空気
を流しかつ約９０Ｏｒｐｍで攪拌しながら生長させる０
次いで、それを使用して同一培地の２００ｆＬの醗酵器
を接種する。この醗酵器を約２８℃において１００９．
７分の空気で通気かつ２５０ｒｐｍで攪拌する。抗生物
質の生産を紙デイスク寒天の拡散法によりＢ、５ｕｂｔ
　ｔ　ｔ　ｉ　ｓを最小培地上の試験有機体として使用
して監視する。

最高活性は７２〜９６時間後に得られる。

Ａ）　醗酵肉汁を４℃に冷却し、ｐＨ９，５にしかつ攪
拌する。約１時間後、それを濾過し、濾液をｐＨ約３．
５に水性鉱酸で調節する。この混合物を３０分間４℃で
攪拌し、次いで濾過助剤（Ｈｙｆ　ｌ　ｏ−Ｆ　ｌ　。

ＭＡ＠）を使用して濾過する。透明濾液を排出し、濾過
ケーキを脱イオン水中に懸濁させ、ｐＨ約８．５に調節
し、次いで濾過する０回収されたケーキを同一手順にか
ける。プールした濾液は抗生物質Ａ４０９２６を含有す
る。

Ｂ）　膨潤したＤ−アラ（Ａｌａ）−Ｄ−アラ−（−ア
ミノカプロイル−セファロース変性マトリックス（２Ｍ
）を、実施例１に従って得られた醗酵肉汁（それを濾過
し、そして透明溶液を約８．５のｐＨにした後）に、あ
るいは上の実施例２Ａに従って得られたプールした濾液
に添加する。室温において一夜攪拌した後、この樹脂を
濾過により回収し、そして５％（ｗ／　ｖ）　のＮ　ａ
　Ｃ１を含有する約２Ｘ１０Ｊ２．の０．４５ミリモル
のＨＣｌ−ＴＲｌ５緩衝液ｐＨ７，５（ＴＲＩＳ＝２−
アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオ
ール）で洗浄し、次いで蒸留水（４Ｘ２０文）で洗浄す
る・ 抗生物質Ａ４０９２６を樹脂から１％（Ｗ／Ｖ）のアン
モニア水和物（２Ｘ２０１で溶離する。溶離液を室温に
おいて一夜放置し、次いで小さい体積（約２．５１）に
濃縮する。水をｎ−ブタノールとの共沸蒸留により排除
する０石油エーテルを次いで添加し、３．４ｇの粗製抗
生物質Ａ４０９２６複合体を沈殿させる。

上の実施例２の手順に木質的に従って得られた粗製抗生
物質Ａ４０９２６複合体（７５０ｍｇＨＨＰＬＣ力価７
０％）を４００ｍ１の水中に溶解し、ＰＨ７，５に調節
し、濾過する０次いで、濾液をＤ−アラ−ローアラ−ε
−アミノカプロイル−セファロース（５０ｍｌの膨潤樹
脂；床の高さ＝５ｃｍ）の親和性クロマトグラフィーに
かける。この方ラムを、ｐＨ７，５にＭＣＩで調節した
２モルのＮａＣ１を含有する０゜１６％（Ｗ／Ｖ）のア
ンモニアと平衡化し、次の３種類の緩衝液で順次に展開
する： 緩衝液Ａ：　　ＰＨ７，５にＨＣＩで調節した２モルの
ＮａＣＩを含有する。、ｉａ％ （Ｗ／Ｖ）のアンモニア、（２，６ カラムの床体績）； 緩衝液Ｂ：　　ｐＨ９，５にＨＣＩで調節した２モルの
ＮａＣｌを含有する０、１６％ （Ｗ／Ｖ）のアンモニア、（１６カ ラムの床体績）； 緩衝液Ｃ：　　ｐＨ１１，４に調節した１％（Ｗ／Ｖ）
の水性アンモニア、（２，６カ ラムの床体績）。

緩衝液Ｃは単一の分画で抗生物質Ａ４０９２６複合体Ａ
Ｂを溶離する。この溶離された分画をｐＨ７，０に調節
し、そして１０ミリモルのＴＲｌ５−ＭＣｌ　　ｐＨ７
，０で緩衝化した同一の親和性カラムに再適用する。こ
の方ラムを脱塩が完了するまで蒸留水で洗浄する。

次いで、抗生物質を２力ラム体積の０．３９％（ｗ／ｖ
）の水性アンモニアｐＨ１１，０で溶離する。溶離され
た分画を小さい水性混合物に濃縮し、次いで凍結乾燥す
る。純粋な抗生物質Ａ４０９２６複合体ＡＢ　（３７４
ｍｇ）が得られる。

Ａ）　実施例２に従って得られた抗生物質Ａ４０９２６
複合体（３゜３ｇ）または実施例３に従って得られた抗
生物質Ａ４０９２６複合体ＡＢ（２，３ｇ）を０．５文
の水中に懸濁させ、攪拌し、次いで濾過する。透明な濾
液をシラン化シリカゲルのカラム［２００ｇ：床の高さ
１８ｃｍ；シラン化シリカゲル（Ｓｉ　ｌｃａｇｅＸｌ
）６０；マーク・インコーホレーテッド（Ｍｅｒｃｋ　
　ＩｎＣ，）］　　［これは溶液Ａ（０，２５％（Ｗ／
Ｖ）のＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２０および０．００１モルの
２．５％（Ｗ／Ｖ）のＮａＣ１を含有し、ＮａＯＨでｐ
Ｈ６，０の調節されている）で予備平衡化されている］
に適用する。この方ラムを溶液Ａ中の０％〜４０％（Ｖ
／Ｖ）のアセトニトリルの直線勾配で溶離し、合計の体
積は約７１で約４８時間である。約１５．５ｍｌの分画
を集め、そしてバシルスｅスブチリス（Ｂｃｉｌｌｕｓ
　　５ｕｂｔｉｌｉｓ）についてのバイオアッセイによ
りアッセイし、そしてＨＰＬＣにより分析する。同様な
抗生物質含量を有する分画をプールする０分画Ｎｏ、３
１０−３３０およびＮｏ、３４８−３８５は、それぞれ
Ａ４０９２６因子ＡおよびＡ４０９２６因子Ｂと明らか
にされた抗生物質を含有した。

Ｂ）　単一のＡ４０９２６因子ＡおよびＢを含有するプ
ールした分画を、減圧濃縮してアセトニトリルを除去し
、水（初期の溶液の約２倍の体ａ）で希釈し、そして前
述の型のシラン化シリカゲルのカラム（膨潤したマトリ
ックスの体積：５０ｍ１；床の高さ：１５ｃｍ）に適用
する。このカラムを脱イオン水で脱塩が完了するまで脱
イオン水で洗浄し、最後にセトニトリル／水６０：４０
（ｖ／ｖ）で展開する。

溶離された分画を減圧濃縮し、そして残留物を凍結乾燥
すると、溶離された分画の最初の群（上の分画３１０−
３３０）から１３４　ｍ　ｇの抗生物質Ａ４０９２６が
得られ、そして溶離された分画の第２群（上の分画３４
８−３６５）から２０６ｍｇｃ７）Ａ４０９２６因子Ｂ
が得られる。

実】１殊ｊ 隊 実施例２Ａの手順および実施例２Ｂの手順の第１工程に
木質的に従うことにより、樹脂に結合した抗生物質を１
％（Ｗ／Ｖ）のアンモニア永和物（２Ｘ２０ＪＬ）で溶
離する。溶離液をｐＨ７，８に硫酸で調節し、そしてｎ
−ブタノールと共沸蒸留することにより小さい体積に減
圧濃縮して水性濃縮物を形成し、次いでこれを紙で濾過
する０回収された濾液は抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＡ
、抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＢおよび少量の抗生物質
Ａ４０９２６因子ＡＢおよび因子Ｂを含有する（ＨＰＬ
Ｃ）、約５０ｍｇ／ｍ１の純粋な抗生物質Ａ４０９２６
複合体（ＨＰＬＣの分析）を含有するこの水性濃縮物の
試料（ｌ・Ｏｍ　ｌ　）を５ルｍの孔大きさのフィルタ
ー［アクトディスク（Ａ１ｃｒｏｄｉｓｃ＠）；ゲルマ
ン・サイエンス・インコーホレーテッド】で濾過し、次
いで２０ｇのオクタデシルシリル逆相シリカゲルを含有
するステンレスのカラム（直径＝２ｃｍ）［リチリソー
ブ（Ｌｉｃｈｒｉｓｏｒｂ）ＲＰ　　１８、マークｅイ
ンコーボレーテッド：粒子サイズ１０ＩＬｍｌに適用す
る０次いで、シリカゲルをクロマトスバクのポヅルプレ
プ（Ｃｈｒｏｍａｔ　ｏｓｐａｃＭｏｄｕｌｐｒｅｐ）
装置［ヨウベン・イポン（Ｙｏｂｅｎ　　Ｙｖｏｎ）、
フランス］のステンレス鋼中に適度の圧力（公称約１４
バール）のちとに詰め、アセトニトリルと１８ミリモル
のリン酸塩緩衝液ＰＨ６，０との２７　：　７５　（ｖ
／ｖ）混合物で平衡化する。この平衡化に使用したのと
同一の溶媒混合物を使用して約１０．５ｍｌ／分の流速
で溶離を実施する。溶離液をＢｃｉｌｌｕｓ　　５ｕｂ
ｔｉｌｉｓについてのバイオアッセイおよびＨＰＬＣに
より監視する。同様な抗生物質を有する分画をプールし
、そして５クロマトグラフイー展開の均質分画を濃縮し
て有機溶媒を蒸発させる。

得られた溶液を水性１モルの塩化ナトリウムでもとの体
積の２倍に希釈し、そして水で平衡化したシラン化シリ
カゲルのカラム（５０ｇ；床の高さ５　ｃ　ｍ　；シラ
ン化シリカゲル６０．マーク寺インコーポレーテッド）
に適用する。

この方ラムを脱塩が完結するまで脱イオン水で洗浄しく
水性ＡｇＮＯ３の添加後、溶離液中にＡｇｃｌの沈殿が
形成しない）、次いでアセトニトリル：水１　：　ｌ　
（ｖ／ｖ）で溶離する。同様な抗生物質含量（ＨＰＬＣ
の分析）を有する溶離液をプールし、ｎ−ブタオノール
との共沸蒸留により小さい体積に濃縮して水相が得られ
、次いでこれを凍結乾燥する。収量： 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ：　　５５ｍｇ抗生物質
Ａ４０９２６因子ＰＢ：　　５１ｍｇ抗生物質Ａ４０９
２６因子Ａ　　：　　３８ｍｇ抗生物質Ａ４０９２６因
子Ｂ６　：　　３３ｍｇ爽施１１ Ｌノ　　　　　Ａ４０９２６　　　　　Ｂ　　　　　　
　　　る　１法 実施例２（最後の工程）に従いつくられた２つの調製物
のプールした濤縮物を濾過し、そして濾液を水で予備平
衡化したシラン化シリカゲルのクロマトグラフィーのカ
ラム（４００ｇ；床高さ３０ｃｍ；シリカゲル６０．７
０−２３０メツシユ、マークのインコーホレーテッド）
に適用する。

この方ラムを水（６見）で洗浄し、そして吸着された抗
生物質を次の順序に従いアセトニトリル／水で溶離する
： ２．７　文の　　５％（Ｖ／Ｖ）の水中アセトニトリル １６　　文の　１０％（ｖ／ｖ）の水中アセトニトリル ２．９７愛の　１５％（Ｖ／Ｖ）の水中アセトニトリル ３．１５Ｍの　２０％（ｖ／ｖ）の水中７セトニトリル 約１８ｍ１の分画を集める。溶離された分画の活性を、
感受性の微生物１例えば、Ｂｃｉｌｌｕｓ　　５ｕｂｔ
ｉｌｉｓについての紙ディスクのバイオアッセイおよび
ＨＰＬＣによる分析により試験する。同様な抗生物質含
量を有する分画をプールしＣ分画４７２−５２６）、減
圧濃縮する。ｎ−ブタノールをこの濃縮物に添加して、
水を共沸蒸留的に除去する。残留するブタノール溶液を
順次に小さい体積に濃縮して抗生物質Ａ４０９２６因子
Ｂ（１，４ｇ）を沈殿させる。この生産物を石油エーテ
ルで攪拌下に洗浄し、そして濾過により（３回）により
集める。減圧１縮すると、７６０ｍｇの抗生物質Ａ４０
９２６因子Ｂが得られる。

上のカラムクロマトグラフィーに抗生物質Ａ４０９２６
因子Ｂを再びかけることにより、生産物（５４０ｍｇ）
の抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ０が得られ、これは上の
抗生物ｊｊＡ４０９２８因子Ｂについて報告した同一の
物理化学的特性を有し、ただしそれはただ１つのピーク
をＨＰＬＣ分析で示し、すなわち、ティコプラニンＡ２
成分２に関して１．２２の保持時間をもつピークを示す
。

抗生物質Ａ４０９２Ｂ因子ＦＡおよび抗生物質Ａ４０９
２６因子ＰＢ　（５０ｍｇ）を別々に２゜５ｍ１ｃ７）
水性１％（Ｗ／　Ｖ）のＮＨ４０Ｈ中に溶解し、そして
得られた溶液を約２４時間室温に攪拌しながら保持する
。抗生物質Ａ４０９２６因子Ａははじめ抗生物質Ａ４０
９２６因子ＰＡを含有する溶液から、そして抗生物質Ａ
４０９２６因子Ｂははじめ抗生物質Ａ４０９２Ｂ因子Ｆ
Ｂを含有する溶液から、ｎ−ブタノールとの共沸蒸留に
より水を除去し、エチレルエーテルで沈殿させ、そして
沈殿を濾過により集めることにより、それぞれ得られる
（収率的７５％）。

Ｄ−アラ−ローアラ−セフ　ロース　・活性化ＣＭ−セ
フ７０−ス（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）（ファーマシア・フ
ァイン・ケミカルス）（１ｇ）を１ミリモルの冷水塩酸
中に１５分間膨潤させ、そして同一溶液で洗浄する。得
られるゲル（約３　ｍ　ｌ　）を０．５モルの増化ナト
リウムおよび０．１モルの重炭酸ナトリウム緩衝液ｐＨ
８中のＤ−７ラニルーＤ−アラニン（３ｏｍｇ）の溶液
と混合する。この混合物を室温で反転しながら１時間回
転させる。

カップリング反応が完了した後、過剰の配位子を緩衝液
で洗浄除去する。デキストラン担体の結合しない活性化
基を１モルのエタノールアミン塩酸塩でｐＨ９で１時間
処理することによおリブロッキング（ｂ　１　ｏｃｋｉ
　ｎｇ）する０次イー１？、セフ７０−ス（Ｓｅｐｈａ
ｒｏｓｅ）−ｅ−７ミノカプロイルーＤ−アラニル−Ｄ
−アラニン変性マトリックスを濾過により分離し、交互
に０．５モルの塩化ナトリウムおよび０．１モルの酢酸
ナトリウムｐＨ４で、そして０．５モルの塩化ナトリウ
ムおよび０．１モルのトリス（ヒドロキシメチル）アミ
ノメタン緩衝液ｐＨ８で完全に洗浄する（４回）。

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＡのＵＶスペルト
ルである。 第２図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＡのＩＲスペクト
ルである。 第３図は、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａの１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルである。 第４図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＢのＵＶスペルト
ルである。 第５図は、抗生物ＩＩＪＡ４０９２６因子ＢのＩＲスペ
クトルである。 第６図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＢのＩＨ−ＮＭＲ
スペクトルである。 第７図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＡのＵＶスペル
トルである。 第８図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＡのＩＲスペク
トルである。 第９図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡのＩＨ−ＮＭ
Ｒスペクトルである。 第１θ図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＢのＵＶスペ
ルトルである。 第１１図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＲのＩＲスペ
クトルである。 第１２図は、抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＢのＩＨ−Ｎ
ＭＲスペクトルである。 第１３図は、抗生物質Ａ４０９２Ｂ因子ＰＢの”Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルである。 特許出願人　グルボ・レベチット・ニス・ビー舎手続補
正書（自発） 昭和６０年１１月３０日 特許庁弁ｐ　　　字　’ｆ：　　ｊ＃　　ｌ’！Ｒ殿り
事件の表示 閲和６０年特［ｉ′！ｒ齢カ）２２６６７１−号λ発明
の名称 知生物１１１１Ａ４０９２６作合体およびその紗枠な因
子ｐＡ、　ｐＢ、　Ａ、　ＢおよびＢ０３、補正をする
１ 事件との関係　　特許出願人 名称　　　　グルＨ？・レベテット・ニス・ビー・エイ
（氏　名） ４、代　理　人〒１０７ 住　　所　　　東京都港区赤坂１丁目９番１５号（１１
明細誓第８２頁第８行に「式Ｉの」とあるを「　杢発明
の　」 と訂正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の特性： 塩でない形態の￥抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ￥： Ａ）次の吸収最大を示す紫外線吸収スペクトル： 　λｍａｘ（ｎｍ） ａ）０．ＩＮ　ＨＣｌ　２８１ ｂ）リン酸塩緩衝液　ｐＨ７．３８　２８１　３００　
   （肩） ｃ）０．１Ｎ　ナトリウムまたはカリウムの水酸化物　
   ３００ ｄ）メタノール　２８２ ｅ）リン酸塩緩衝液　ｐＨ９．０　２８２　３００　（
   肩） Ｂ）次の吸収最大を示す赤外線吸収スペクトル（ｃｍ＾
   −＾１）： ３７００−３１００、３１００−２８００（ｎｕｊｏｌ
   ）；１６５５；１６２０−１５６０；１５１０；１４８
   ０−１４１０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎｕｊｏｌ）
   ；１３２０−１２５０；１２５０−１１９０；１１００
   −９５０；８１０；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）ＤＭＳＯ　ｄｅ（ヘキサデューテロジメチルスルホ
   キシド）中で記録した２７０ＭＨｚにおける信号（ｐｐ
   ｍ）の次の群を示す＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標
   準、ＴＭＳ（０．００ｐｐｍ）、（δ＝ｐｐｍ）： δ０．８６（ｔ、６Ｈ）；１．２１（約１１Ｈ）；１．
   ４３（２Ｈ）；２．０１（２Ｈ）；２．３１−２．３４
   ）（３Ｈ）；４−６．２（約１６Ｈ）；６．２−８（約
   ２３Ｈ）；８．４４、９．２２、９．６６（広い帯；移
   動性プロトン） ２．４−４；Ｈ＿２Ｏのピークからの干渉、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
   プラニンＡ＿２成分（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
   ２２の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ
   ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベッ
   クマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６ｍｍ（内径）×２５
   ０ｍｍ 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
   　Ｌａｂｓ）ＲＰ１８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ＿３ＣＮ　１０％ ＮａＨ＿２ＰＯ＿４・Ｈ＿２Ｏ（２．５ｇ／ｌ）　９０
   ％ ｐＨ６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ＿３ＣＮ　７０％ ＮａＨ＿２ＰＯ＿４・Ｈ＿２Ｏ（２．５ｇ／ｌ）　３０
   ％ ｐＨ６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
   勾配、４０分、 流速；１．８ｍｌ／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準；テイコプラニンＡ＿２成分２［グルッポ・レ
   ペチット（Ｇｒｕｐｐｏ　Ｌｅｐｅｔｉｔ）Ｓ．Ｐ．Ａ
   ．］、 同一の条件下に、テステステロン［ロウセル・ウクラフ
   （Ｒｏｕｓｓｅｌ　Ｕｃｌａｆ）に関する保持時間は０
   ．６０である、 Ｅ）試料を不活性雰囲気（Δｗ　４．６％）のもとで約
   １４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次の
   近似百分率組成（平均）を示す： 炭素５５．８２％；水素５．１７％；窒素６．３１％；
   塩素（合計）４．２４％；塩素（イオン性）０．３７％
   、 空気中で９００℃における無機残留物：１．２％、 Ｆ）過剰のＨＣｌの添加後にＫＯＨで滴定すると、２−
   メトキシエタノール（ＭＣＳ）： 水、４：１、中の酸−塩基の滴定のプロフィルは、次の
   ｐｋ＿Ｍ＿Ｃ＿Ｓを有するイノン化作用を示す：４．６
   、５・６、７・２、９．２、 Ｇ）次のクロマトグラフィー系における０．２４のＲｆ
   および０．７０のテイコプラニンＡ＿２成分２に関する
   Ｒｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ＿２ＳＯ＿４　７０ アセトニトリル　３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ＿２＿５＿４マーク（Ｍｅｒ
   ｃｋ）板（層の厚さ０．２５ｍｍ） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ　Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
   ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
   マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）￥２０￥
   、１７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール
   ・フィジカリッシェ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃ
   ｈｅｍ．）￥２９２￥、９９（１９５３）］を使用する
   黄色 −￥Ｂ￥．￥ｓｕｂｔｉｌｉｓ￥　ＡＴＣＣ　６６３３
   を使用する最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオ
   オートグラフィー、 Ｈ）１７１７にＭ＋Ｈ■ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
   クトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７１６
   の分子量、 塩でない形態の￥抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂ￥： Ａ）次の吸収最大を示す紫外線吸収スペクトル： λｍａｘ（ｎｍ） ａ）０．１Ｎ　ＨＣｌ　２８２ ｂ）リン酸塩緩衝液　ｐＨ７．３８　２８１　３００　
   （肩） ｃ）０．１Ｎ　ナトリウムまたはカリウムの水酸化物　
   ３００ ｄ）リン酸塩緩衝液　ｐＨ９．０　２８３　３００　（
   肩） ｅ）メタノール　２８２ Ｂ）次の吸収最大を示す赤外線吸収スペクトル（Ｃｍ＾
   −＾１）： ３７００−３０８０、３０８０−２７００（ｎｕｊｏｌ
   ）；１７２０−１６２５；１６２５−１５６０；１５０
   ５；１４６０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎｕｊｏｌ）
   ；１２９５；１２３０；１２１０；１１５０；１１００
   −１０４０；１０３０；９７０；８９０；８４０；８１
   ０；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）ＤＭＳＯ　ｄｅ（ヘキサデューテロジメチルスルホ
   キシド）中で記録した２７０ＭＨｚ＾１Ｈ−ＮＭＲにお
   ける信号（ｐｐｍ）の次の群を示す＾１Ｈ−ＮＭＲスペ
   クトル、内部標準、ＴＭＳ（０．００ｐｐｍ）、（δ＝
   ｐｐｍ）： δ０．８５（ｄ、イソプロピルのＣＨ＿３）；１．１５
   （約１３Ｈ）；１．４４（約２ Ｈ）；２．０２（２Ｈ）；２．３２−２．３５）（３Ｈ
   ）；４−６．１（約１６Ｈ）；６．１−８（約２３Ｈ）
   ；８．５２、９．３０、９．６８（広い帯；移動性プロ
   トン） Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
   プラニンＡ＿２成分（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
   ２２および１．２７の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ
   ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベッ
   クマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６ｍｍ（内径）×２５
   ０ｍｍ 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
   　Ｌａｂｓ）ＲＰ　１８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ＿３ＣＮ　１０％ ＮａＨ＿２ＰＯ＿４・Ｈ＿２Ｏ（２．５ｇ／ｌ）　９０
   ％ ｐＨ６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ＿３ＣＮ　７０％ ＮａＨ＿２ＰＯ＿４・Ｈ＿２Ｏ（２．５ｇ／ｌ）　３０
   ％ ｐＨ６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
   勾配、４０分、 流速：１．８ｍｌ／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ＿２成分２ ［グルッポ・レペチット（Ｇｒｕｐｐｏ　Ｌｅｐｅｔｉ
   ｔ）Ｓ．Ｐ．Ａ．］、 Ｅ）試料を不活性雰囲気（Δｗ　９．６％）のもとで約
   １４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次の
   近似百分率組成（平均）を示す： 炭素５４．０９％；水素５．１３％；窒素６．３４％：
   塩素（合計）４．１２％；塩素（イオン性）０．３９％
   、 空気中で９００℃における無機残留物：５％、 Ｆ）過剰のＨＣｌ（ｐＨ２．７）の添加後にＫＯＨで滴
   定すると、２−メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、４
   ：１、中の酸−塩基の滴定のプロフィルは、次のｐｋ＿
   Ｍ＿Ｃ＿Ｓを有するイノン化作用を示す：４．５、５．
   ６、７．２、９．２、 Ｇ）次のクロマトグラフィー系における０．２１のＲｆ
   および０．５３のテイコプラニンＡ＿２成分２に関する
   Ｒｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ＿２ＳＯ＿４　７０ アセトニトリル　３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ＿２＿５＿４マーク（Ｍｅｒ
   ｃｋ）板（層の厚さ０．２５ｍｍ） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ　Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
   ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
   マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）￥２０￥
   、１７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール
   ・フィジカリッシェ・ヘミ−（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃ
   ｈｅｍ．）￥２９２￥、９９（１９５３）］を使用する
   黄色 −￥Ｂ￥．￥ｓｕｂｔｉｌｉｓ￥　ＡＴＣＣ　６６３３
   を使用する最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオ
   オートグラフィー、 Ｈ）１７３１にＭ＋Ｈ■ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
   クトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７３０
   の分子量、 塩でない形態の￥抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂｏ￥： Ａ）次の吸収最大を示す紫外線吸収スペクトル： λｍａｘ（ｎｍ） ａ）０．１Ｎ　ＨＣｌ　２８２ ｂ）リン酸塩緩衝液　ｐＨ７．３８　２８１　３００　
   （肩） ｃ）０．１Ｎ　ナトリウムまたはカリウムの水酸化物　
   ３００ ｄ）リン酸塩緩衝液　ｐＨ９．０　２８３　３００　（
   肩） ｅ）メタノール　２８２ Ｂ）次の吸収最大を示す赤外線吸収スペクトル（Ｃｍ＾
   −＾１）： ３７００−３０８０、３０８０−２７００（ｎｕｊｏｌ
   ）；１７２０−１６２５；１６２５−１５６０；１５０
   ５；１４６０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎｕｊｏｌ）
   ；１２９５；１２３０；１２１０；１１５０；１１００
   −１０４０；１０３０；９７０；８９０；８４０；８１
   ０；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）ＤＭＳＯ　ｄｅ（ヘキサデューテロジメチルスルホ
   キシド）中で記録した２７０ＭＨｚ＾１Ｈ−ＮＭＲにお
   ける信号（ｐｐｍ）の次の群を示す＾１Ｈ−ＮＭＲスペ
   クトル、内部標準、ＴＭＳ（０．００ｐｐｍ）、（δ＝
   ｐｐｍ）： δ０．８５（ｄ、イソプロピルのＣＨ＿３）；１．１５
   （約１３Ｈ）；１．４４（約２Ｈ）；２．０２（２Ｈ）
   ；２．３２−２．３５）（３Ｈ）；４−６．１（約１６
   Ｈ）；６．１−８（約２３Ｈ）；８．５２、９．３０、
   ９．６８（広い帯；移動性プロトン） ２．５−４：Ｈ＿Ｏのピークからの干渉、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
   プラニンＡ＿２成分（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
   ２２の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ
   ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベッ
   クマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６ｍｍ（内径）×２５
   ０ｍｍ 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
   　Ｌａｂｓ）ＲＰ１８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ＿３ＣＮ　１０％ ＮａＨ＿２ＰＯ＿４・Ｈ＿２Ｏ（２．５ｇ／ｌ）　９０
   ％ ｐＨ６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ＿３ＣＮ　７０％ ＮａＨ＿２ＰＯ＿４・Ｈ＿２Ｏ（２．５ｇ／ｌ）　３０
   ％ ｐＨ６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
   勾配、４０分、 流速：１．８ｍｌ／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ＿２成分２ ［グルッポ・レペチット（Ｇｒｕｐｐｏ　Ｌｅｐｅｔｉ
   ｔ）Ｓ．Ｐ．Ａ．］、 Ｅ）試料を不活性雰囲気（Δｗ　９．６％）のもとで約
   １４０℃において前もって乾燥した後、元素分析は次の
   近似百分率組成（平均）を示す： 炭素５４．０９％；水素５．１３％；窒素６．３４％；
   塩素（合計）４．１２％；塩素（イオン性）０．３９％
   、 空気中で９００℃における無機残留物：５％、 Ｆ）過剰のＨＣｌの添加後にＫＯＨで滴定すると、２−
   メトキシエタノール（ＭＣＳ）：水、４：１、中の酸−
   塩基の滴定のプロフィルは、次のｐｋ＿Ｍ＿Ｃ＿Ｓを有
   するイノン化作用を示す：４．５、５．６、７．２、９
   ．２、 Ｇ）次のクロマトグラフィー系における０．２１のＲｆ
   および０．５３のテイコプラニンＡ＿２成分２に関する
   Ｒｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ＿２ＳＯ＿４　７０ アセトニトリル　３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ＿２＿５＿４マーク（Ｍｅｒ
   ｃｋ）板（層の厚さ０．２５ｍｍ） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ　Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
   ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
   マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）￥２０￥
   、１７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール
   ・フィジカリッシェ・ヘミ−（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃ
   ｈｅｍ．）￥２９２￥、９９（１９５３）］を使用する
   黄色 −￥Ｂ￥．￥ｓｕｂｔｉｌｉｓ￥　ＡＴＣＣ　６６３３
   を使用する最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオ
   オートグラフィー、 Ｈ）１７３１にＭ＋Ｈ■ピークを示すＦＡＢ−ＭＳスペ
   クトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７３０
   の分子量、 塩でない形態の￥抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ￥： Ａ）次の吸収最大を示す紫外線吸収スペクトル： λｍａＸ（ｎｍ） ａ）０．１Ｎ　ＨＣｌ　２８２ ｂ）０．１Ｎ　水酸化カリウム　３００ ｃ）リン酸塩緩衝液　ｐＨ７．３８　２８２　３００　
   （肩） ｄ）リン酸塩緩衝液　ｐＨ９．０　２８３　３００　（
   肩） Ｂ）次の吸収最大を示す赤外線吸収スペクトル（Ｃｍ＾
   −＾１）： ３７００−３１００、３０００−２８００（ｎｕｊｏｌ
   ）；１７６０−１６５５；１６５５；１６２０−１５５
   ０；１５０５；１４６０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎ
   ｕｊｏｌ）；１２６０、１２５０−９５０；８４５；８
   ０５；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ）ＤＭＳＯ　ｄｅ（ヘキサデューテロジメチルスルホ
   キシド）中で記録した２７０ＭＨｚ＾１Ｈ−ＮＭＲにお
   ける信号（ｐｐｍ）の次の群を示す＾１Ｈ−ＮＭＲスペ
   クトル、内部標準、ＴＭＳ（０．００ｐｐｍ）、（δ＝
   ｐｐｍ）： ０．８６、ｄ′ｓ（ＣＨ＿３）；１．１５−１．２２（
   ＣＨ＿２）＿ｎ；１．４１、ｍ（ＣＨ＿２）；２．０１
   、ｓ（ＣＨ＿３）；２．０１、ｍ（ＣＨ＿２）：２．２
   ８、ｓ（Ｎ−ＣＨ＿３）；４．２６−５．９６、ｂｒ（
   ペプチドおよび芳香族のＣＨ）；６．３３−７．７３ｂ
   ｒ（芳香族のＣＨおよびペプチドのＮＨ）、 ｂｒ＝広い ｄ＝二重線 ｄｄ＝二重線の二重線 ｍ＝多重線 ｓ＝一重線 ｔ＝三重線 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
   プラニンＡ＿２成分（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
   １５の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ
   ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベッ
   クマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６ｍｍ（内径）×２５
   ０ｍｍ 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
   　Ｌａｂｓ）ＲＰ１８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ＿３ＣＮ　１０％ ＮａＨ＿２ＰＯ＿４・Ｈ＿２Ｏ（２．５ｇ／ｌ）　９０
   ％ ｐＨ＿６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ＿３ＣＮ　７０％ ＮａＨ＿２ＰＯ＿４・Ｈ＿２Ｏ（２．５ｇ／ｌ）３０％ ｐＨ６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
   勾配、４０分、 流速：１．８ｍｌ／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ＿２成分２ ［グルッポ・レペチット（Ｇｒｕｐｐｏ　Ｌｅｐｅｔｉ
   ｔ）Ｓ．Ｐ．Ａ．］、 Ｅ）次のクロマトグラフィー系における０．６２のテイ
   コプラニンＡ＿２成分２に関するＲｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ＿２ＳＯ＿４　７０ アセトニトリル　３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ＿２＿５＿４マーク（Ｍｅｒ
   ｃｋ）板（層の厚さ０．２５ｍｍ） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ　Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
   ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
   マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）￥２０￥
   、１７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール
   ・フィジカリッシェ・ヘミ−（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃ
   ｈｅｍ．）￥２９２￥．９９（１９５３）］を使用する
   黄色 −￥Ｂ￥．￥ｓｕｂｔｉｌｉｓ￥　ＡＴＣＣ　６６３３
   を使用する最小デイビス（Ｄａ ｖｉｓ）培地上のバイオオートグラフィー、 Ｆ）１７６１に最も強いピークの群を示すＦＡＢ−ＭＳ
   スペクトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７
   ５８の分子量、ＦＡＢ−ＭＳ分析の操作条件は、次の通
   りであった： 計器：ＦＡＢガンのイオン・テク（Ｉｏｎ　Ｔｅｃｈ）
   を装備するＶＧＭｏｄ　ＺＡＢ　ＳＥ 条件：ポジティブ（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ＦＡＢ、Ｘｅ 加速電圧、８ＫＶ マトリックス：チオグリセロール−グリセロール１／１
   （ｖ／ｖ） 塩でない形態の￥抗生物質５Ａ４０９２６因子ＰＢ￥： Ａ）次の吸収最大を示す紫外線吸収スペクトル： λｍａｘ（ｎｍ） ａ）０．１Ｎ　ＨＣｌ　２８２ ｂ）０．１Ｎ　水酸化カリウム３００ ｃ）リン酸塩緩衝液　ｐＨ７．３８　２８２　３００　
   （肩） ｄ）リン酸塩緩衝液ｐＨ９．０　２８２　３００　（肩
   ） Ｂ）次の吸収最大を示す赤外線吸収スペクトル（Ｃｍ＾
   −＾１）： ３７００−３１００、３０００−２８００（ｎｕｊｏｌ
   ）；１７６０−１７１０；１６５５；１６２０−１５６
   ０；１６０５；１４８０−１４２０（ｎｕｊｏｌ）；１
   ３７５（ｎｕｊｏｌ）；１３２０−１２７０；１２３０
   −１１９０；１１５０；１１２０−９２０；８４５；８
   １０；７２０（ｎｕｊｏｌ）、 Ｃ、ＤＭＳＯ　ｄｅ（ヘキサデューテロジメチ１）ルス
   ルホキシド）中で記録した２７０ＭＨｚにおける信号（
   ｐｐｍ）の次の群を示す＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内
   部標準、ＴＭＳ（０．００ｐｐｍ）、（δ＝ｐｐｍ） 多重度；（属性）： ０．８４、ｄ（イソプロピルのＣＨ＿３）；１．１７、
   ｍ（ＣＨ＿２）ｎ；１．４３、ｍ（ＣＨ＿２）、１．９
   ９、ｓ（ＣＨ＿３）、２．０１、ｍ（ＣＨ＿２）；２．
   ３１、ｓ（Ｎ−ＣＨ＿３）；２．７９、ｄｄ（Ｃ−Ｈ）
   ；３．７０、ｍ（Ｃ−Ｈ）；３．７０、ｍ（Ｃ−Ｈ）：
   ４．０６−６．０２、ｂｒ（ペプチドおよび芳香族のＣ
   Ｈ）；６．４５−７．７４、ｂｒ（芳香族のＣＨおよび
   ペプチドのＮＨ）；８．１９−９．９９、ｂｒ（ペプチ
   ドのＮＨおよびフェノールのＯＨ）、 Ｃ、ＤＭＳＯ　ｄｅプラスＣＦ＿３ＣＯＯＤ中で２）記
   録した２７０ＭＨｚにおける信号（ｐｐｍ）の次の群を
   示す＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、内部標準、ＴＭＳ（０
   ．００ｐｐｍ）、（δ＝ｐｐｍ）多重度；（属性）： ０．８４、ｄ（イソプロピルのＣＨ＿３）；１．１３、
   ｍ（ＣＨ＿２）ｎ；１．４０、ｍ（ＣＨ＿２）；１．９
   ８、ｓ（ＣＨ＿３）；２．００、ｍ（ＣＨ＿２）；２．
   ９２、ｄｄ（Ｃ−Ｈ）；３．２９−３．７１、ｍ（糖の
   Ｃ−Ｈ）；４．０７−６．０９、ｓおよびｍ（ペプチド
   および芳香族のＣＨ）；６．４５−７．８３、ｓおよび
   ｍ（芳香族のＣＨおよびペプチドのＮＨ）；８．１７−
   １０．３８（ペプチドのＮＨ、フェノールのＯＨ）、 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、テイコ
   プラニンＡ＿２成分（Ｒｔ＝２０．３分）に関する１．
   ２７および１．３２の保持時間（Ｒｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ
   ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテックス（Ａｌｔｅｘ）［ベッ
   クマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６ｍｍ（内径）×２５
   ０ｍｍ 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
   　Ｌａｂｓ）ＲＰ１８（５μｍ） 溶離剤Ａ： ＣＨ＿３ＣＮ　１０％ ＮａＨ＿２ＰＯ＿４・Ｈ＿２Ｏ（２．５ｇ／ｌ）　９０
   ％ ｐＨ６．０に調節、 溶離剤Ｂ： ＣＨ＿３ＣＮ　７０％ ＮａＨ＿２ＰＯ＿４・Ｈ＿２Ｏ（２．５ｇ／ｌ）　３０
   ％ ｐＨ６．０に調節、 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％への溶離剤Ｂの直線
   勾配、４０分、 流速：１．８ｍｌ／分、 ＵＶ検出器：２５４ｎｍ、 内部標準：テイコプラニンＡ＿２成分２ ［グルッポ・レペチット（Ｇｒｕｐｐｏ　Ｌｅｐｅｔｉ
   ｔ）Ｓ．Ｐ．Ａ．］、 Ｅ）次のクロマトグラフィー系における０．５３のテイ
   コプラニンＡ＿２成分２に関するＲｆ値： ５％（ｗ／ｖ）の水性 Ｎａ＿２ＳＯ＿４　７０ アセトニトリル　３０ シラン化シリカゲル６０Ｆ＿２＿５＿４マーク（Ｍｅｒ
   ｃｋ）板（層の厚さ０．２５ｍｍ） 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ　Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
   ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
   マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）￥２０￥
   、１７１（１９６５）、ツアイトシュリフト・フュール
   ・フィジカリッシェ・ヘミー（Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃ
   ｈｅｍ．）￥２９２￥、９９（１９５３）］を使用する
   黄色 −￥Ｂ￥．￥ｓｕｂｔｉｌｉｓ￥　ＡＴＣＣ　６６３３
   を使用する最小デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオ
   オートグラフィー、 Ｆ）１７７６に最も強いピークの群を示すＦＡＢ−ＭＳ
   スペクトルからデジューム（ｄｅｓｕｍｅ）した約１７
   ７２の分子量。ＦＡＢ−ＭＳ分析の操作条件は、次の通
   りであった： 計器：ＦＡＢガンのイオン・テク（Ｉｏｎ　Ｔｅｃｈ）
   を装備するＶＧＭｏｄ　ＺＡＢ　ＳＥ 条件：ポジティブ（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ＦＡＢ、Ｘｅ 加速電圧、８ＫＶ マトリックス：チオグリセロール−グリセロール１／１
   （ｖ／ｖ）、 ２、菌株￥アクチノマヅラ￥（￥Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕ
   ｒａ￥）種ＡＴＣＣ３９７２７、またはその抗生物質Ａ
   ４０９２６生産性突然変異体もしくは変異型を、液中好
   気的条件下に炭素、窒素および無機塩類の同化源の存在
   下に培養し、抗生物質を醗酵肉汁から回収および単離し
   、そして、必要に応じて、それを所望の塩に転化するこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の化合物を製
   造する方法。 ３、菌株を２０℃〜４０℃の温度において培養する特許
   請求の範囲第２項記載の方法。 ４、温度は２４℃〜３５℃である特許請求の範囲第２項
   記載の方法。 ５、濾過した醗酵肉汁を、固定化されたＤ−アラニル−
   アラニンを使用する親和性クロマトグラフィーにかけ、
   次いで分配クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィ
   ーまたはイオン交換クロマトグラフィーにかけることに
   より、抗生物質の回収および単離を実施する特許請求の
   範囲第２項記載の方法。 ６、抗生物質の回収は、工程： ａ）醗酵肉汁を固定化Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンを使
   用する親和性クロマトグラフィーにかけ、 ｂ）プールされた抗生物質含有溶離分画を急速に中和し
   、そして ｃ）必要に応じて、シラン化シリカゲルを用いる逆相液
   体クロマトグラフィーにより、抗生物質Ａ４０９２６因
   子ＰＡ、ＰＢ、Ａ、ＢおよびＢｏを単離する、 を含む特許請求の範囲第２項記載の方法。 ７、工程： ａ）醗酵塊をｐＨ８．５〜１０．５の塩基性にし、 ｂ）濾過し、 ｃ）透明な濾液をｐＨ２．５〜４．５の酸性にし、 ｄ）濾過し、そして濾液を廃棄し、 ｅ）濾過ケーキを水中に懸濁し、そしてそれをｐＨ８〜
   ９の塩基性にし、 ｆ）粗製抗生物質Ａ４０９２６複合体を濾過により回収
   した後、それを固定化Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンを使
   用する親和性クロマトグラフィーにかけ、 ｇ）必要に応じて、分配クロマトグラフィー、逆相クロ
   マトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーに
   より、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａおよび因子Ｂを単離
   し、そして ｈ）抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂｏを必要とするとき、
   抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂをさらに親和性クロマトグ
   ラフィー手順にかける、 からなる抗生物質Ａ４０９２６複合体、抗生物質Ａ４０
   ９２６因子Ａ、因子Ｂおよび因子Ｂｏから選択される化
   合物を製造する特許請求の範囲第２項記載の方法。 ８、クロマトグラフィーは逆相クロマトグラフィーであ
   り、そして静止相はシラン化シリカゲルおよび非官能化
   ポリスチレン樹脂から選択される特許請求の範囲第７項
   記載の方法。 ９、静止相はｐＨ４〜９の緩衝溶液で予備平衡化された
   シラン化シリカゲルであり、そして溶離剤は同一緩衝溶
   液中の極性水混和性溶媒の直線勾配の混合物である特許
   請求の範囲第７項記載の方法。 １０、薬物として使用する特許請求の範囲第１項記載の
   化合物。 １１、特許請求の範囲第１項記載の化合物と製薬学的に
   許容されうるビヒクルとからなることを特徴とする製薬
   学的組成物。 １２、菌株￥アクチノマヅラ￥（￥Ａｃｔｉｎｏｍａｄ
   ｕｒａ￥）種ＡＴＣＣ３９７２７。 １３、液中好気的条件下で炭素、窒素および無機塩類の
   同化源の存在下に培養したとき、特許請求の範囲第１項
   記載の化合物を生産することのできる、菌株菌株￥アク
   チノマヅラ￥（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）種ＡＴＣＣ
   ３９７２７、またはその抗生物質Ａ４０９２６生産性突
   然変異体もしくは変異型の生物学的に純粋な培養物。