JPS6091992A - 細菌中でのｌ−アミノ酸類の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、回収１り能イ’、ｉ　、ｍの一ノアミノ醇の
’ｌ　＋＋’（に関りる。さらに訂しくけ、本発明は、
相′、１′１４るα−’／　１−ｎｖＡ３　Ｊ、Ｕ　−
ｊ’　ンＬ−Ｌ−７’を出発原料どじ（使用し、ｇ（適
な微生物の代謝を利用してｌ　ｔｔミノ（ｊ、ｊ２をＦ
Ｉｌｌ−（ｊ　る　ノ“ノ　イ人　（ご　閂　覆　る　
１゜アミノ酸り、を直接的４ｆ釆養補給剤、ｐｔ品）ぺ
加物ｄ５にび静叫内投り物１１どを含む各（Φの分ｑ１
７．　（＝　Ｉ山川される有用な物質である。極く最近
の、特定のアミノ酸の応用例としては、フェニルアラニ
ン・メチルエステルＪ３よびアスパラギン酸で構成され
る旧味アスパルテームが榮げらねる、１ 従来技術 アミノ酸を製造りる最も光通σ）１ノ法は、化学合成Ｊ
３よびη１１１１菌光酵である。前者の方法にＪ５いて
は、立体化学をコントロールする必要があり、これは非
富にむつかしい課題であっＣ１通常、現在の技術ではそ
れを克服することは筒中ではない。発酵法においては、
通常アミノ酸のバックボーンのための炭素源は、微生物
の含料また（Ｊその他の遠縁の代謝物である。従って、
適当てンレ■な代謝物を含有している特別の微生物が必
要で・あり、がっ、収量が望ましくないことが多い。ル
近、所望のし一アミノ酸に椙造的に関連しているヒダン
１〜イン化合物を発酵させることからなる立体選択的な
化学的方法が報告されている（米国９・“１両画４０１
６０３７号）。

Ｌ免匪凱１旺 本発明は、りｒ適な微生物を使用し、倍径条件を最適に
づること１．ｌより増強された立１本選択的な酵素にＪ
：って触媒される反応を利用りるものてあり、アン上皿
ｊ／を使つＣ１α−り１〜酸を直接相当づる１−ｊ’ミ
ノ酸に変換するしのである。この反応にＪ５いζは、勿
論、ｊ；Ｊ　ｉ°’４Ｃあるα−り１〜酩の酸化状態を
調１１ｊりるために運九当吊を供給覆ることが必要であ
る。宿コ」敦牛物がその正ＩＪ１１な代謝経路によって
これらの３三元当（ｐを供給りるｆ１ヒＪ）を４・１４
用するの−Ｃ゛ある。

大１１ｔ　（１）微生物が本発明方法をり１ミ施１する
のに必要な配’　累５３！をいくらか含んでいることは
知られている（）れどら、ノ必ソン’ｔＫ　ｎｆ’素ガ
゛１の１７・ａｌに３通に（Ｊるｊ両切１、ｚ　ｌｒＨ
，１ｇ条１′１をｊ′が１戻りることにＪ、す、このｉ
２１伽を著しく増強さｌることができる。ｉｌｌっＣ，
適切にこの条件に応え得るＩＴ、ｃｏｌｉの任な通常使
用される１ＩｉｌｌＩ菌知を使用りることがてさる。

七ル非悲１１ 本）で明は、所望の１−＝７ミノｒｉ）を生産づるため
の簡便な、好演的な；こして直接的な方法を促（１（す
るものである。本発明方法におい−（は、微生物の培養
物に化学量論的な苗の相当Ｊるα−９１〜酸およびアン
モニアを加える。培養物かその通常の炭素源を利用しつ
づ（Ｊる間に、その代謝によ−）て遠冗当吊が生成し、
適当４しバヒｉ・１］グプー１ｊｄ３よひ１〜ランスア
ミプ−−ゼｎ）−素によ−Ｊ　（ＦＩｌｌ：処！される
α−ケト酸から１−アミノ酸（Ｗ△、の中／１換を行な
うのに必要な還元力が供給される。？；Ｃｊ、）　Ｃ，
不発明方７ノ（においτ（肖黄される物質（Ｊ（５、α
−）７ト醒、アンモニア、おＪこび所望の還元力を微Ｌ
Ｉ、物か４１ｔ供りるのに必要な、」−分な！　Ｊ′ｉ
ｌである。こび）ようｔこして生産されたアミノ酸は培
養培地か１′）Ｊ：、’：準的な手法によって分離り′
ることがてさる１、これを）ヱ或づる１ごめ、’Ｊｌ’
ｆｒ　ｊｉ７に応じてテヒド（］グブナ−および１〜ラ
ンスアミナーゼ酵素を産生Ｊる微生物を使ｍづることが
できる。これらの酵素の”ｊＬ＊　Ｉ哀（３Ｌ、都合σ
）１町Ｇ）条件下で、具体的にに１、生産しようとりる
ノアミノ酸を含んでいない培地中、一般的には最小培地
中、で増殖また（ま保持ザることにより、増強さ４″Ｌ
る。

定常１１Ｊ」に維持されているこの積ＩＩ　１１包は、
都合Ｊ−＜　ｆｆｉ！奴としく使用される。

＃ｌｌ＋胞培養に適当な吊のこの出光物ｔ″（を１１給
りることにより、西尾ベースに、θあった−）′ミノ０
！９、［’ｔ１）５　、２　０　！、１．．．’　）２
　（ｔｌｌｌｌｌｌＪａ　養Ｑ９ｊＪ　）　ヲｄ　エル
；’ｉｌ　ノア”Ｅ。

ノ酸を、’ｌ　（１ｍすｙ’　ｅ　／’、　Ｏｊ）、、
、、、ｌ　ｌｔｉ間１ｉ　１７．１を越える割合Ｃ（こ
こ（（月）１１１侍Ｉｌｌηｌｉ＋胞て・Ｒ度の尺１１
１としく使用される）Ｌ１産づることが（、！る。８ら
に、収Ｗは化学量論的な吊の５０％を越える。これは、
増殖が実質的にｌｊ？止した、定゛畠明にＡ＞い（（Ｉ
らｊヱ成りることかＣさる１、１分なＸ？！の）アミノ
酸が７１産されることが多いのて、比１１（的不溶１り
の１　）′ミノ酸の間合には、所望の１１成物の１＋’
＋品が」１”ｉ地中にＩｌｔ＋寮される。。

図」ｆ山）は− 第１図１．１．５ｐ　１１９　’ｉ７　器中（１）’ｒ
ヒ畠ｆｉｌｌ　＆’ｌ　ｌ−、ＣＦｌｌｉＲＶ：３　（
）Ｂ枕に３」、る−ノ１ニルーｊ′ラーンの／１産を示
すグラノで（１りる。

Δ　皿１列［正 木明絹ｆｌにｄ３いで１−α−ケｌ−ｒｌ！ｉ　Ｉ、１
ツノ−ミノ酸１およＯ・［−ｊ′ンを二ｊ’　、１　Ｉ
Ｊる用飴（３１、これら自（Ａ（１３よびその相当り−
る塩を意味するしのとりる。ここで行なわれる反応は、
当該微生物の代謝過程で行なわれるの−（、このような
物質がどのようなイオン化状態で供給されにうと、それ
らは培地５したは微生物によ−）で作り出される環境に
よって正しい形に変操される。従つＣＬ記の前！ｊｉ１
４；Ｌ　Ｊ輸離１１（２またＣＡＬぞの相当！Ｊる」店
（１、例えばｊ−トリウム」Ｋ１１、カリウム塩ｉ１５
るいはその伯の通常の塩の形で供給下することができる
。　Ｊｉｌ杵に、アンモニノ’　１．Ｌその塩の形、例
えば）ＩＡ１酸ノ７ンヒニウｌ＼、塩化アンＥニウム（
（するいはその他の好適な塩の杉で１１、給りるのが最
もり１′ｔｉｔｓ合Ｃ８６る。最後に、上記の川６１１
に加えで、特定のθ′−〕ｒト酌Ｊノこ（′Ａ、）ｌミ
ノ酸を、例えば［フエニルピルビンｒｔＱ−１または「
）Ｌニルピルベ−１へ」のように呼ふことしある。これ
らの名称し１いｉＪ’れし、該当りる化合物の逅■酸ま
た）ｊ塩のいり゛れかを意図しＣいるものではない。こ
れらの化合物は、）ｄ液状態にｄ５いではその周囲の溶
液の叶１に完全に依存しでいる形をとっており、結晶化
した形に、１３いては、そのヅＪ造形式に依存した形を
とっていることＬＪ、容易に理１６γされる（ル）ろう
。？、Ｙ、　−＋　（ぞのような弯化しｌ、二名称を使
用しようと６、それ（４イ４ン化１人態ｉ、１Ｉｌｌ　
ｆ系の１１い分」′のイ」（ｊ隻部ンンを意１休りるｂ
のである。。

［微イ「：物」という用晶ｉ、；Ｉ、ａ１菌のＪ、うイ
ヱ原核細胞微ｌ（−物４包含づるものである。本発明に
おいＣは、Ｉ’　、　１１　ｉ株が宿主細胞としく１冒
、：θ■′通（ある１、［誘導に応じ（酵素シ１１を産
生りる一］微生物どは、そのＪ！（節糸にＪ、□）’（
、ｊＩシ当る１条１１に）１ｉ＞え（多ｆｉ５ｑ）酵素
を含、すにしたり、別の条１’＋　１−では合ｆノｋを
Ｉｉ’　ｌｌ−したりし、（、（の環境に応答・ｊる微
生物のｔｉｔ２　ＩＪをが味づる。本発明に於いＣ（，
１、誘合に応じ＜　、ｔｘ′−］ｆ１−０ノ８を４１ビ
１−′Ｉづるノ′ミノ酸（Ｊ変ｊｉｊ口するＩこめの酵
永を産生りる微／Ｆ物中のこれらの酵素プず１（、■、
培た培地中に１−ン′ミノ酸を倉よけ４ｒいど、′４吊
に合成されることに／→／）う、、　Ｒ１１ち、補光的
／ｊ　ｌ　−ｊ′′ミノ酸ｋｌ＋　（、−イ１１・ＣＪ
ｂｉ　Ｗ＋さμるど、（ｃ〕）ｔに　％微１１−物中の
、所望のＡｔ！　丼Ｈのｒｉ＞Ｊ　１４芝か１６１づ！
ｌ）されることに４ｒる、１阪応捧の［化４；ｉ、串論
的ｌ「串１とは１問題にしでいる陵１．れ、（消費され
る串を供給りるのに１−分４ｒ串を居味りる１、この川
１．ｊ；は、１触媒吊１と１ヌ別Ｚ１ろことを意図し１
．、：らの（あり、　種１．ｌこ（，１−匠、１′し以
１の反応１木が過剰に１ｊξ給される１易含４１イんＣ
いる。

［最小１１′４地１どｔｉｔ、増りｖ＋（コ必９．’：
　／、ｔ　ｔ　ｒ／、：　ＩＩ　ｌｌ＜　Ｉ！ｊ給され
（いる１ｊ“冑（噌舶のための培地をいう１．ｉ敢１１
物かイれ１１本の代謝経路を使つ（合成りることかＣき
る化合物（ま含、１．れでいない。従−）”Ｃ，１’ｒ
定の最小］ｊ１地は各１￥１株と１９１連して・１タリ
、イのＩｉ；１株にりいて記載され（いる標ｉＶｊ的４
丁文献を参照りることが−Ｃいる１１通ｉ：’：　ａ＋
　＄１１１　ｉ￥１類の多くは、イのバ９すｊイｆ１１
°１（（！ＩのηΦ頬が１」、くり、（１られでおし）
、支！１ｉｌｉ　４系、　１ｊｊ７弓ろ、ｌ（も４【い
、　ｌ　、　ｅｏｌｉに適切χＣｂの、例えＩＪ　Ｍ　
Ｑ　ｆ、１゛容易に入手（゛さイｌ、（′ｙ）ろ１易臼
ｔこ（Ｌ、椙１害ｔ、１、グル１−スの４毛乙ｆυ；、
索ｊｊｌｊ　（（これ（、ｌ　）ｋｌ　ｌｌ二、）更ル
１１４　ｒｌｊ　を’　ｉｌｌ：　ｌ！’。

りる）お、上ひ１内当イ１−ミノ７ルの、ｌＬか？ン）
／「Ｉ（い／：）　ｇこの４コシ４ＣＩ！’：地中（は
、増（・１１°Ｉ（、−必すタ／、Ｉ客２・１．１ｌｌ
ｆｊ　ｌＡ　＋ＩＩＪ、ひ燐を含イ１づる仝（の複＋Ｉ
＋　／、　（いＱｉ　ｔｌ　７’ｉ　＠　、　）ｓＨ，
・（１ｆｌ’ｌ　’、ｉ　ｉ尖素）１ｊイを【の様４ｊ
代謝１りｊ７゛１の１°・入Ａハ・ノ′！・１・−シに
変１疹・Ｃ１ろ代ｉＱｌ杆路を使−）（１合成し４Ｉｆ
」れは’ｃｒ　Ｆ＞　７．１’ｖ１．４．　Ｉｉ　明Ｉ
Ｌ、　ｈ”　Ｌ”（’　Ｌ；Ｕ、イ／］’　へＺｒ　ｒ
ｌ、ｔ　小１．・ｕｅに幻しくも、Ｑ　＋’ｉｌ、Ｊ、
うと１する１　ノ′ミノ酸の為の出発物質であるα−１
７−ｌ〜酸を添加（する必２￥がＣめることは呂’、）
　Ａ、’（もない、。

「増Ｗ！　Ｉ！ＩＪ　Ｊ　ｉｌ＞　Ｊ、び「定富期」は
、従来から用いられている意１す、を有力る１、増殖期
は、ＩＩＩ胞培養が急速に増加りるＩ＋、ｌｉ間帯をさ
１Ｊｏ定富期は、細胞が牛存しわ“ｃｌＪ’（はいるが
増加が実°Ｉ：イ的にｌｉ”　−ＩＬ　シた１１１間帯
をいう、１ 酵素に関係１４（使用される１θγ適／、ｒ１！ｆ異１
］ｌ　１どい）用６ｔ！　ｌよ、ぞの用語が使用され（
いる１）１ｊ後の文脈に合致１ノた特定の基Ｗ（にイ′
［用りるでの酵素の能力をが味づる１、例えば、ＩＩ＋
″適な特１．１２１１１のある）［二ルン′う一ンの製
ｊ４のｌζ（Ｖ）の１−ランスツノ３ノー１２どは、基
負としくフ」ニルビルｌ＼−１を取り入れ１、（れど、
’Ｃの宿：ｌ　１８２　’、：ｌ物の代謝にｉｌ　イ、
’（利用ｃきるアミノ酸、例えばＬ−クルタメ−１−ど
の１〜ランスアミネーシ・１ン（アミノ阜転移反１．ｉ
　）を触媒（Ｊるトランス７７ミナーＵを言う。

「誘導に都合のＪ：い条イ′１」とは、誘カリベき酵素
（類）の生産を刺激づる環境囚ｒ群を意味する。

本発明に於いては、この様な条イ′１のほとんどは、生
産しようと覆る所望のアミノ酸を培地から取り除くこと
からなる。「誘導に応じて好適な特異性のあるデヒドロ
ゲノ−−ｆ　ｄ３よびＩ−ランスアミナーゼ酵素を産生
りる」微生物に於いては、この様な除去にＪ：す、所望
の酵素の生産が増強される。

Ｂ、股免吐匹糺１ 本発明の化学量論的なブＤレスはＪス下の反応式１式％
： （記述したように、試桑ま／ζはイト酸物のいずれにＪ
３いても、適当なイオン化状態を示刀試みはなされてい
ない）。

本発明は、特定の過程を触媒りる微生物の使用に限定さ
れるものではない。しかし、本発明方法の特徴を説明り
るために、好ましい実施態様にａ３いて使用される微生
物おＪ、び本発明に適した多くの微生物中に存在Ｊるこ
とか知られている酵素について述べる。全体の化学伍論
に適した過程は、ＮＡ３）１〕仏ａ性のグルタメ−１・
・フ゛ヒト［１ゲナーげおにび１−ノンスアミプーげの
活性ど、ＮＡ３）１〕ＩＩの２７元当量を供給りる細胞
１８養物の能７Ｊを絹合わＵることによ−）て（ソｉｉ
れるという１１１論（３１、これらの酵素の竹′ｄに合
致している。リ−＜Ｌ４・）ら、この１、’ｌ　１本面
イＴ棲モ（〕：Ｃは、グルタメ−Ｉ〜・ｆ【てド［１ゲ
Ｊ−巳、ｊメＪ：びＮ△Ｄ　Ｐ　Ｈの存在下−Ｃアンを
−）′またはアン１：−ラム１ｎがα　ケトグルタル酸
ど反ｊ＋ｌｊ、シＣグルクミン酸が牛成し、このグルタ
ミン酸がトランスノ′ミドージョンによっで基質の（ｙ
−Ｉノド酸、この場合＆Ｊ）１−ニルビルベ−１・、と
反応しく所望の１−−−アミノＭを牛成し、α−／７１
−　ゲルタレ−１・を山′１りる。この反応式を１メ下
に示ゴ、１この揚台、試ｊ、Ｉ、ｉｌｌ略中１’１．．
＋＋目におｔ−１ろぞの適当４「（Ａン化払態（゛示し
く４りるーしかしぞの１１１！の１１１−１　征ｉ域を
使用・することしｎ１能−（’　ｉＺる。土ｌζ、微生
物に供給りる物７１の形１．；Ｌ　＝１）い（は１１Ｉ
に指定ｌ）℃いない。

クルタメ−１・はこ１′１らの反１芯におい（甲（、ニ
シトトル１；シ能を’Ｊ！　！１１．ｆ　ＣＩ　Ｃある
の（、化・′γ：　Ｆｊ”ｒ論的イ１ンル９１豆４必井
としイ［いこと（３１容易に理解されＪ、う、　Ｎ△Ｄ
　ｌ：）　ｌ−１＜　Ｊ：　１．：　ｉ、１．　Ｎ△ｌ
−）　ｌ−１’ｌ　１．Ｌ化学早論的４Ｔ平を必要とり
るＪ、′）に思われるか、これは悄１）１すの（Ｖ、　
；、’ｌｉ１幾（１／１４刊川しくｊ１９成されるＮ　
Ａ　ｌ）　１．１１　（：Ｉた（、ＩＮＡＩ）’）から
ｌｉ　’ｌされる。す１１型的には、この、Ｊ、）ｔ１
細胞によってタル」−スがｆいＩｌｌされ、ＮＡ３月）
トｌ　（ｔ　タＬｔ　Ｎ　Ａ　Ｄ　Ｉ　Ｉ　）　０）　
形でｉＰｉ　元；ｊｉ　ｆｊｊ　全供給？する。

その他の酸化しｉｌする塁Ｖりも、−されらが、電ｊ′
がＮΔ（つ１（、−１、たはＮΔｌ’）　Ｐ　））　Ｌ
こ移行され１（するルー１−にＪ、）（代謝される限り
、１５む用りることがＣ８る。即ら１，１）ｉｊクター
の必要性という魚から（、Ｌ、Ｊｔｉ化１３１．細１血
の電子ソースだ（１を演費しｌ　Ｃｉなわれる。さらに
、細胞によっで通７；３使用される電ｒソースに加え延
、絹換えＩ）Ｎ△技術を使っＣ適当イｒ紅路を供給りる
ことにより、ぞの他の党首物ら利用りることがでさる１
゜ Ｌ　−ノ’ミノ酸を、ぞの相当りるα−ｌノド化合物ｌ
）＼らＩ四′）も（ｌるこの）°ノ法（、Ｌ、通７Ｒ＋
容易に人手しく”？る微生物、例えば各種の腸内ｉｌｌ
　ｌ：ｌ！ｌ　（１’−１１１ｆ！ｒ０１＋ａｃ１．ｅ
ｒ）おＪ、び・トノ関連種、１！１１じマばに　ｉ　１
ｒｏｂａｅｌｃｒ、ｐ　５ｅ１１（Ｉｔ）ｌｌｌｏｌｌ
ａｓ、　３　Ｆｌｌｌ１１０１１１４１１ａ　、並０・
に、しばしＬＪ使使用れ、なし力の深いｌ　、　ｃｏｌ
ｉ　（大腸菌）を使つ（実施りることがで２＼ろ１．こ
の任な微り一物（２表、デヒト１〜１〕！−ナービおよ
びトランスノ７ミ）　−１ｉ酵Ｐａ。

あるいはその他のα−’ｒ　ｌ〜醗を１．．７／ミノＡ
Ｑ形に変換りろためのＩｔ適な酵素類、の生産を誘導し
ｉ（する条ｆ′１十（増η１゛１さｌＪ、ると、これら
の酵素類σ）にｊＹｌｊ　Ｉｌ’ｊが増入りることに／
Ｃイ）１．この条（１の内（脹し一〇すなことは、これ
らの酵素にＪ、−、）ＣＭ媒されろに１，６の生成物て
（ｂる）′ミノ酸が、周囲のｌ’Ｈ地に含１４シくい４
１いどい−）Ｃ二と（ある。（ＪＩとん１との佇１１ユ
に゛）い’Ｃｌ；ｌ、この条ｆ’ｌ　１．１、ノ１ミノ
酸、児１本（白（、二（，１合ＩＩｋしＪ、うどりるｔ
Ｊミノ酸、を含／υＣ−い４Ｉ−いＩ　Ｉｉφ小１１′
１地」てあＩで、ての合成のＩこめの出光物’ＩＩ’ｒ
　ｊ：、　ｌ−＋　（の無）ｊｖ″＋Ｆ　Ｗ’ｉを含／
ｖ　（いる最小！’！　Ｉｌｕ　ｌ：　１．二ｌ　（ｎ
　（Ｈ’ｉ］１１々１を保持（ｊることレー、１、・）
（’ｆダ蓼Ａ【こ行成（さる１、１〕２（に、イｊ　９
）Ｊ　／Ｔ　ｐｒｙ！媒ｆ／）　ｆｉｔ　Ｌｌ、ｉｉ！
ｌ　ｆｆ明か実７’４的（−柊（ｌｙ　Ｉ：　＋’ｒか
最し多い。ＩＩＩら、θＩ′：」シい実ＩＩｉ！！ｆん
Ｊｒ）’、　（ｌ、、１　誇）パ、・に都合のＪ、い条
ｆｌ　ｌ・Ｃ，ｑシ、　ｉＩ：小ＩＨ’、　ｌ１１１　
（，１強・Ｘれ　ｌこ　ン豊　度　の　）　ヒ　１：’
　ｎ　’ｊ　Ｉ　−１：弓１ｉ　、Ｌ　’０’　ｌ・　
ノ　ン　ス　ノ′　−二ｒ＝ｖ　イ（含　ｉＩ又　（）
　イ）１１シ　ノフ　イ！−１，’■　、、Ｊ、　ｌ　
、ｅｏｌｉ　σ〕（）ｔ　イ、（！１ジノ１１りｙ　ｉ
、、、　ｒ′ｌ　望　の　酵　小　を　ｉｌ４　給　・
ｊ　る　σ）（、ニ　１　づン　イｄ用　１１＜ｌ　ｉ
竹１α【ＪりるＩこ（Ｊの還几当［昌−供イ【１（ｊる
ためσ）炭Ａ・、１ｉｉＨを含ノυＣいるＭ９の様な１
じ小’？ＸＩｌ！！’（贈り“１さけり１、増り］す］
に於いＵ　、　’ｉ’　７ｉ１のα　ノット酸を、所’
、／！　４１　’）ばｔｉｎ充的４デフ７ンヒー・ソｌ
＼ｊ２ｉｉと」い４−１ｌｌＩ１１山にンイｓ　Ｊｌｌ
ｌ　ｉＪる。ｒｉｌｌ　！５．１１ユξ）θｆ−ましい
態４１−Ｃ［，１１、木発明の１シ１，６を触媒・ｊる
微１１物培ｔｉは事実１１１）、１１状ｊＪ’Ｈ，’に
（（りり、１１）小１７１１地どして１１１．絵さ札Ｉ
、二栄１６メ：Ｅ　１ｊ−Ｃ自活しくいる。

この反１．ｉ−は、振需フラス」、発酵容器あるい（３
）ぞの他の適当な容器中、０［）か約２０・−＝１００
．７４（ましくは約３０１１＜１−る７Ｌ（、適当イー
、・微生物を、好」、しくは「二、ｃｏｌｉ、眉１〕θ
１′ま１．・り１．１．１−９ｃｏ　ｌ　ｉｌく　１　
２　松、　１く　＼／３（、）８（△　−Ｉ　ＣＤＮｏ
、３　１　６（）　８　＞を、定義した％４１１！ｊ、
即ｌ・）最小拾地、Ｑｌ’　＜１．　Ｌ／　＜　ｌ、ｊ
Ｍ　！］　、、ｌＣＪ曽殖さＵることによ−）Ｃイｊ／
ｆう、１Ｊ曽η１１ジノ、：後、（λ′、、　）ｙ’　
ｌ−酸、例えばフＩニルビルへ−１・を庁勺り・〜Ｉ　
Ｏ（ｉ、／β、如′ましくは約１０　（＋、・乏の）１
）ζ１哀範囲（’　Ｊｌｌｌンる　次いで−Ｉ７ンモニ
ウム塙、例えば１φ１酸）′ンし−・°ノｌ＼を、（Ｘ
−９１〜酸にり・１しく化学ｔＢ論的に過剰なＧｊ　ｊ
σ−（培地中に（’ｊ　（Ｊ、　ｌるＪ、うに追加的に
添加りる９、適当な１１″１間、′１〇−／ｌ　Ｏ１１
，’＋間、ガ′ましく（，１、約１　！５１１．’１間
、あるい【、１基質が消費されｉ′する時間、この詣Ｉ
ｌｌ　’（！−紺持りる。α−ノット酩基貿から生１！
ｋ　＋、／たｉｌミノ酸をぞのアミノ酸に適したゼ沖ｖ
−的イ１「７人−ｔ−ｌ；’４　ＩＩＨカ”）　ｌｉ’
ｌ　ｌｌ’ｌ！　ｄ　ロ３．４、発明１３　；Ｉ、＋１
．　’＋　０１１１４１／ｌ　酸物’　、ｅ　ｌｌｒ　
（１１，’１間）’　（’ｌ　Ｉ）Ｃ＋　００ろ越λる
割合Ｃ（二の変１ｔ、′・ｋｉ’ｌ　／１．−）　Ｌど
かＣさ、９１′適イ；・、りｉ′２１ニジい条１′１１
・（（１、ｌ　（’ｌ　＋＋１１１９　′、ｅ　（）Ｉ
）′ｌ＋ｒを１代える　、０゛　ツノ　ｉｌｌ与ｑ）Ｉ
ＩＩ　”ｆ＋　ｒｌる１　−アミノ酸Ｉ＼（ｊ）全変換
数・キ′（ま１）０％以１−（＋Ｓ□）す、生産さ札る
１　ツノミノ１１１５のイ１は細胞１ｆＩ　ｆｆｉ物１
名当り２０ｃ＋ＩスＩ（ｌ（りる。

０、りｒ、ｊ、しいＦ　１丁。

Ｍ　！ｌ　Ｍ　小Ｊ（ｉ　Ｉｌｊ　、　２５　ｇ　′に
のクルー１−）、を含／１゜でいる１０β、の発酵容器
に１で、　ｃｏｌｉＫ１２Ｒλ１３０８を接（Φし、！
凡ｉ　０　ｒｖに於（〕る（−）Ｉｉが約２１と／ｒる
ｊＣｌｌ　２１１＝’１間り、−、、１ｌｆＪ　−）　
’（：　１１！＋、　％°＋　サＬｌ−た（　１中１１
．−ｉ　。

０（ご、沸１度４Ｊ　３　ｔ　−Ｃｋ三片Ｉｆ　Ｉ−’
ｓ　シｌこ）。ｊへ鴬物１λを１　、５　、Ｑ　ｏ）発
酵？゛す：に移じ１０ｇ／′β’（７６ｍＭ、）のＩｊ
！ｉ酩ノ！ンし−ウ１１を−ＩＩＩｌえＩ、二、１．０
９ン、（【ｐ那／′容♀）の川−リウムノ１−ルビルｌ
＼−１〜（Ｓ　：Ｑｍａ）溶ｈｋを培地中！＋−１０９
，・′乏のノｒ二ルビルベー１〜を保持ｊｌるに１−分
な様に、光醇釡器に連わ“、的に添ＩＩしするとｉｊ：
　Ｌ、二、ｌｉ：ｉ　、１也中、２ＲｍＭのグルー＋　
’　／、　％、　ｉ′４ｊ持りルＩｃ　ニ、ｊ）０％（
中ｊｉｌ　／　’（１’ｌ’　）のグル１−ス浄１液を
流力１１シた。ｊＸ＋　ｆｌｆｉアン七ニウムは、彫Ｘ
ｊ巳ｊ　ｑ′乏のｌ′ンし一二―°ノｌ＼イＡンｄＰ！
度を超える様に、周期的に、まどめく添＋１１１　シた
。１泥１図は、これらの条ｆｌ　ＦＣのフＪニルアラ一
ンノ１．　＋ｌｉ：のクイｌＸ＝＋−スを示しいる。図
から明らか／；Ｉ′仔に、ノ１ニルアシ−ンの）１皆麻
は約１　りＩＩ、“［間接（６゛−へ２　り！Ｉ／！、
のレヘルに）：とする。初期の（０〜／Ｉ　ｎ：＋間）
フＬニルアラニン４Ｌ、　Ｒ比率は／ｌ　Ｉ　ＩＩ　’
Ｌニル′（ｊ＜Ｉｆｌｌｌ胞）／′分、即Ｉ）、６　、
８　ｍ（＋、′ｇ　（細胞）／分Ｃあ−）だ。

これは１　（’ｒ　Ｏｍｇ　、ｊ２・′Ｏ１う／　ｈｒ
　（ＩＩＦｔ間）に相ＮＳｉ　、する。

Ｃ，２，土Ｊ口肱１０」淀− フＩ−ルノ′−ラニンｉｔ；　、Ｊ、０β−フ１ニルビ
ルへ−１−は、逆相１１［ン１　（：　（（’Ｅ８　）
を使用し、メタノール（２５＋ｊｉ、）０１９（、の１
１／＼・”１１ｚ　Ｑ　（７５％）（・溶出し）（定甲
的に分ａｒ　シ／こ３３この生物学的変換にに・ン（生
産さＡ１だフェニル１゛ノニンに１１又知の１〕法、例
λ【、［活ｊｌｌ−１；＞、Ｈｋ’−、ｌい首、さＩＪ
、水て゛溶出し、そ１）（水からｐ）結晶１１’、　７
）こと（、ニー：０分ＩＦＪＩ錆卑ソする（−とがＣさ
′る７、４　図面の筒中４ｒ　１ｉｌＪ明 第１図（よ定ｊ’ｆｓ　ｉｊＩＩの１−、　、　ｃｏ　
ｌ　ｉ　Ｉ＜＼／　３０８株に、」ミろ−７しニルアラ
ニンの生産を示（１９ラ−ノ’Ｃ（！ｊ　ル。

１ｊｊ　ル′１　出　咄　人　ジー■　ネン５１）。

イン１−ボレイラ・ント 代　理　人　づｉ　Ｉ’ｌ’　１−　７”１１１１　葆
　（、Ｌ／Ｊ＼　１′／１第１頁の続き ■Ｉｎｔ、Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号０発　明
　者　ジエイムス・チーーユ　アメリカ合衆国カフ−Ｉ
）ラン　コ、セブンス・７ ０発　明　者　ウィリアム・バリー・　アメリカ合衆国
カラステツタ−ヌ・アイダホ・７ ０発　明　者　ブラドリー・リチャー　アメリカ合衆国
カド・スネデカー　ウレア−令ストリ リフオルニア９４１１＆サン・フランシスヴエニュー５
０幡 リフオルニア９４４０１、サン・マテオ、エトリート８
１幡 リフオルニア９４００５．プリズベーン、トート２２旙

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、Ｉ−−フッミノ頁炙類の製ｊ；５ン人−（あ−ンて
   、（散生物が誘導に応じて適切な特異性を右１１るデヒ
   ドロブ−げ酵素およびトランスアミノ−げ酵素を生産す
   る最小培地中の微生物培１１の存イ１下、かつ、適合し
   得る）ア元当ｆｌ　ｉｆｆ、ｄの（ｊ右下ζ、相当ジー
   るα−ケ１〜酸をアンモニアと反応させることからなる
   製造法、。 ２、α−ケト酸を相当りるＬ−アミノ酸に変換づ−るｂ
   法℃′必って、誘導に応じて適切な特異性を有りるデヒ
   ドロブー１ｉｄ３よび１ヘランスアミナーゼ酵素を生産
   覆る微伴物の１８含に、誘導に都合のよい条件下でα−
   ケ１〜酸、アンモニ）７おにび還元当量源を供給するこ
   とからなる方法、。 ３、α−ケト酸を相当する１−−アミノ酸に変換リ−る
   方法であって、誘導に応じて適切な特異性を有りるデヒ
   ト［」ゲナーゼ酵素および１〜ランスアミナーゼ１ｌＩ
   ｙ素を生産する微生物にα−ケｌ−酸、アンモニアおよ
   び適合し得る還元当量源を供給することからなる方杼く
   。 ４、誘導９に都合のよい条ｆｌ下で培養した微（［物の
   存在下、かつ、適合し得る）「九当Φ源の存在下で、４
   （，１当りるσ〜ツノ１〜酸ろ・アンし二ｊ７ど反ｂ’
   ｃｔさ口ることからなる１−−アミノ酸の製ｊ胃法。 ５、微生物がＥ、ｃ、ｏｌｉ株である第１１１１〜第１
   １　］、Ｆｊのいずれかに記ｉ・ｋの方法。 ６．１−、−−アミノ酸がフ［ニルアラニン（゛ある第
   １項〜第４項のいずれかに記載の）’ｊ’　Ｆｉ、。 ７．１−−−アミノ酸がフ」ニルアラニンＣある第５項
   に記小又の方ン去。 ８、還元当鞘伽がクルコース−ζ−ある第１」１〕へ・
   第４項のいずれかに古己載の方）人。 ９、　ｌ−アミノ酸が廁１ｊ）２培ｊ５物１！当たり２
   ０ｇ以上生産される第１１Ｊ′ｉ〜第１１珀のいり゛れ
   かに記載の方？人。 １０、Ｌ−アミノ酸が１０　ｍｇ　７！−′０１つ・′
   ｉ１．’ｌ　Ｒ，ｉｌ　Ｉメ上の割合で生産される第１
   項へ・第１１「ｌのいり”れかに５已＋１氏の万Ｃ人、
   。 １１．１−アミノ酸が１００’ｍ！Ｉ／　ｌ　／　Ｏ１
   ，）　／′Ｉｌ、’！間ｊ、ス上の割合Ｃｌト産されイ
   ）第１０１０に記載のｌｊ法。 １２、＋ｚ−’ｙ　ｌ−ｒｌ’ｊが１５０％を越える収
   ；仝ミ（相当りる１−−アミノ酸に変１６！される第１
   １ｆｉ・〜・第１１自のい・１れかにｎａ　Ｉｌ曳の１
   ノン人。 １３、微）１物１７３　Ａが定常１すｊにある第’ｌ　
   ｌ’Ｈ・・−第１狛のいづ”れ１）１に記１）友のブ〕
   ン去。 １ａ　、Ｈｓ　ｉ　＋ｒ＋　−、１：　／ｌ　＋、１　
   ノイｖ゛レカ＋、＝　５ｇ　ｌ！；　ノｙｊ＞人を実施
   りるのに石川な微生物または了の１１・′＋養物、１１
   ｊ）第′ｌ　Ｔｊｉ−第４項のい４゛れかに記載のノ）
   法にＪ、・ンで４Ｌ　ｒｒｒされた１　ツノミノｉ。