JPS6040837B2 - 抗生物質チオストレプトンの製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗生物質チオストレプトンの製造法、更に詳し
くは新規発酵法による抗生物質チオストレプトンの製造
法に関する。

本発明はストレプトミセス・ラウレンティを培地に培養
し、その培養液から抗生物質チオストレプトンを採取す
ることを特徴とする抗生物質チオストレプトンの製造法
を提供するものである。

本発明によれば、ストレプトミセス属に属する抗生物質
チオストレプトン生産菌であるストレプトミセス・ラ
ウレンテイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌａｍｅｎｔｉ
ｉ）ＡＴＣＣ３１２５５も培地に培養しその培養液から
抗生物質チオストレプトン（ｔｈｉｏｓｔｒｅｐｔｏｎ
）を採取することにより、所望の抗生物質チオストレプ
トンを得ることができる。

従来、微生物としてストレプトミセス・アズレウス（Ｓ
ｔｒｅｐ■ｍｙｃｅｓａｚｍｅ岬）Ｗ．Ｃ．３７０５を
用いて抗生物質チオストレプトンを製造する方法が米国
特許第２９８２６８ｙ号（特許日：１９６１年５月２日
）に開示されている。チオストレプトンは一般的にペニ
シリンと同様の抗菌活性スペクトルを有する抗感染性医
薬であって、球菌および連鎖状球菌に起因する感染症に
対して著しい効果を有することが上記米国特許に記載さ
れている。上記以外にチオストレプトン製造法として従
来、下記のような製造法が知られている。

ブリアマィシン（ｂｒ渡ｍｙｃｉｎ）生産菌としてスト
レプトミセス・ハワイエンシス（Ｓ．ｈａ欄ｉｉｅ船ｉ
ｓ）ＡＴＣＣＮｏ．１２２３６を使用する方法が最初、
クロン（Ｃｒｏｎ）らにより報告された（クロンら：ア
ンチバイオテイクス・アンド・ケモセラピイ（畑ｔｉｂ
ｉｏｔｉｃｓａｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）第６巻
６３〜６７頁（１９５６年）参照）。

次いでボタンズキイ（則ｄａｎｓｚｋｙ）らはブリアマ
イシンとチオストレプトンが同一の抗生物質であること
を認めた（ボダンズキイら：ジヤーナル・オブ・アンチ
バイオティクス（ＪｏｕｍａｌｏｆＡｎｔｉｂｉｏｔｉ
ｃｓ）第１虎萱７６〜７９頁（１９６３王）参照）。ま
たアームド（Ａｈｍｅｄ）らはチオストレプトン生産菌
としてストレプトミセスｓｐ．Ｘ−１４ｂを用いる方法
について発表していりる（アームドら：ヒンダスタン・
アンチバイオテイクス・ブリテイン（Ｈｉｎｄ雌ｔａｎ
ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓＢｕｌｌｅｔｉｎ）第７巻７９
〜８０頁（１９６必王）参照）。本発明方法において使
用する微生物はストレプトミセス属に属する抗生物質チ
オストレプトン生産菌、たとえばストレプトミセス・ラ
ウレンテイ（（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌａｍｅｎｔ
ｉｉ）であって、この微生物を炭素および窒素源含有培
地中、実質的量のチオストレプトンが蓄積されるまで好
気的に培養し、培地から該抗生物質を採取することによ
り、抗生物質チオストレプトンを得ることができる。本
発明において使用することができる微生物は土壌から分
離したストレプトミセス属に属する菌株である。この菌
株はストレプトミセス・ラウレンテイ（（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓｌａｍｅｎｔｊｉ）と命名されるものであ
って、米国メリーンド州ロックビル在、アメリカン・タ
イプ・カルチュア・コレクション（ＡｍｅｒｉｃａｎＴ
ｙｐｅＧｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）の永久コ
レクション中に寄託番号第３１２５５号として寄託され
ている。この菌株は上記機関から分譲を受けることがで
きる。本発明の新規ストレプトミセス・ラウレンテイが
ＡＴＣＣ３１２５５して寄託されていることはザ・ジャ
ーナル・オブ・アンチバイオ テ イ ク ス （ Ｔ
ＨＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦＡＮＴＩＢＩＯＴＩＣＳ）
第３項蓋第８号６３９〜６４３頁（１９７７年）の記載
からこれを明らかにすることができる。また、本発明の
ストレブトミセス・ラウレンティＡＴＣＣ３１２５５菌
株は千葉市稲毛東５丁目８番１号に住所を有する工業技
術院微生物工業技術研究所に徴工研菌寄第４３２８号と
して寄託されている。本発明において使用することがで
きるストレプトミセス・ラウレンテイｎ．Ｓｐ．トレジ
ヨン（ＳｕｅｐｔｏｍｙＣｅＳ １ａｕｒｅｎｔｉｉ
ｎ． Ｓｐ． Ｔｒｅｊｏ（ＡＴＣＣ３１２５５）
）と命名される新菌株の特性について以下に記載する。

この微生物の特性記載の方法はインターナショナル・ス
トレプトミセス・プロジエクト（ｌｎｔｅｍａｔｉｎａ
ＩＳｔｒｅｐのｍｙｃｅｓＰｒｏｊｅｃｔ（ＩＳＰ）に
より勧告されている方法（シャーリング（Ｓｈｉｒｌｉ
ｎｇ）ら：インターナショナル・ジヤーナル・オブ・シ
ステマテイク・バクテリオロジイ（ ｌｎｔｅｍａｔｉ
ｏ岬Ｉ Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ ＳｙＳにｍａｔｉ
ｃ母ｃｔｅｒｉｏｌｏ戦）第１６巻３１３〜３４０頁（
１９６６年）参照）によるものである。１ 形態学的特
性 ストレプトミセス・ラウレンテイＡＴＣＣ３１２５５は
きわ立った直線状の胞子鎖から成る気菌糸を形成し、こ
の気菌糸は幾らかかぎ状となり、原始的ら旋状を呈する
頃向がある（無定形Ｒん型）。

これらの胞子の表面は平滑である。集合的胞子の色は赤
系列に分類される。０ 種々の培地上の発育特性 種々の培地上に２がｏで１０〜１４日間培養した微生物
コロニ−についてその特性を以下に説明する。

色の記載はカラー・ハーモニィ・ジャーナル（Ｃｏｌｏ
ｒＨａｎｎｏｎｙＪｏ山脇１）によつた。酵母−麦芽エ
キス寒天上胞子形成は僅かであって、識別困難な白色の
気菌糸上、淡いピンク色を帯びた胞子として形成される
。

裏面の色は黄褐色ないし焦げ茶色を帯びたオレンジ色を
呈する。僅かに淡紅色の可溶性色素あり。オートミール
寒天上 胞子形成良好。

形成胞子の色は灰黄色がかったピンク色（ＣＨＭＮｏ．
＆ｃ）。裏面の色は識別されない。可溶性色素なし。合
成塩澱粉寒天上： 胞子形成良好。

形成胞子の色はクリーム様の淡紅ベージュ色（ＣＨＭＮ
ｏ．蛤ｃ）。裏面の色は赤味がかったオレンジ色を呈す
る。可溶性色素なし。皿 生理学的特性ナトリウムカゼ
ィネート−チロシン寒天上、メラニン色素を産生しない
。Ｗ 炭素源利用性 プリダムーゴツトリーブ（ＰｒｉｄｈａｍａｎｄＧ℃ｔ
ｕｉｅｂ）塔地上、２８ｑｏで１０日間培養した結果：
基礎培地〔一〕、グルコース〔十〕、マンニトール〔一
〕、イノシトール〔一〕、ソルビトール〔一〕、キシロ
ース〔（十）〕、アラビノース〔一〕、ラムノース〔一
〕、フルクトース〔−〕、ラフイノース〔一〕、ガラク
トース〔十〕、トレハロース〔一〕、メリビオース〔（
十）〕、シユクロース〔十〕、ラクトース〔十〕、注：
括弧中の十は利用性陽性、一は利用性陰性、（十）は利
用性陽・性であるがグルコース対照試料より利用性が低
いことを表わす。

本発明の製造法で使用するストレプトミセス・ラウレン
テイＡＴＣＣ３１２５５とチオストレプトンを生産する
他の公知菌株を比較し、これを第１表に示す。

この表から明らかなように、本発明における微生物と他
の公知微生物は別種として区別することができる。第１
表は本発明において使用するストレプトミセス・ラウレ
ンテイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌａｕｒｅｎｔｉｉ
）ＡＴＣＣ３１２５５ならぴに公知のストレプトミセス
・アズレウス（Ｓ．ａｚｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣＩ４９２
１およびストレプトミセス ・ ハワイエンシス（Ｓ．
ｈａｗａｉｉｅ船ｉｓ）ＡＴＣＣＩ２２３６を実際に試
験して比較した結果を示すものである。

表中、ストレプトミセスｓｐ．Ｘ−１４ｂのデータは前
記アームドら：ヒンダスタン・アンチバイオティクス・
プリティン第７巻７９〜８０頁（１９６ぷ年）に記載の
データを引用した。十、一および（十）は前記同機の意
義を有する。表中Ａはストレプトミセス・ラウレンテイ
ＡＴＣＣ３１２５ふ Ｂはストレプトミセス・アズレウ
スＡＴＣＣＩ４９２１、Ｃはストレプトミセス・ハワイ
エンシスＡＴＣＣＩ２２３０ ０はストレプトミセスｓ
ｐ．Ｘ−１４ｂを示す。

‘ａ｝はメラニン色素産生を試験するための渚地が当該
文献中に示されていない。第 １る塔地を用いる。

ただしグルコ−スはこれを他の培地成分から分離して滅
菌する。他の堵地成分を含む滅菌培地９そに、滅菌した
５０％グルコース水溶液１〆を発酵直前に無菌的に加え
る。発酵：接種材料を含む培地１０．５〆を約２デ０で
６５時間発酵させる。

発酵の間、発酵液を３５０〜４０仇ｐｍで櫨拝し、１分
当り３．５〜４．０その速度で通気する。単離および精
製：− 上記のとおり６斑時間発酵後、発酵液を回収する。

上燈液を遠心分離処理して菌糸体を分離する。菌糸体魂
をクロロホルムで抽出処理してこの塊から抗生物質の漣
性成分を抽出する。クロロホルム抽出物を合し、減圧下
に約４０ｑ０で濃縮して残留物を得る。これを少量のメ
タノールで洗総して若干量の不純物を除き、少量のクロ
ロホルムに溶解する。これに少量のメタノールを加えて
生成物を結晶化する。この結晶性物質１６７の９を沸騰
クロロホルム５の‘に溶解し、溶液を１／２甑こ濃縮し
、濁りが出るまでエタノールを加える。

この結晶化処理により結晶性チオストレプトン１５３の
９を得た。得られた物質が抗生物質チオストレプトンで
あることは次に示すデータにより証明される。

１〜３．祷り！点、比旋光度および紫外吸収注）比旋光
度：〔Ｑ〕色５（クロロホルム中、濃度ｃ＝０．６）。

４ 臭化カリウム錠中赤外吸収スペクトルストレプトミ
セス・ラウレンテイＡＴＣＣ３１２５５から得られたチ
オストレプトン試料のスペクトルは文献に記載のものと
同一のスペクトルを与える。

すなわち両者はべプチドに固有のアミド１お本発明の製
造法において、同化し得る炭水化物および窒素源を含有
する水性栄養塔地中、ストレプトミセス・ラウレンティ
ＡＴＣＣ３１２５５を好気的深部培養条件下に約２５ｑ
ｏで培養することにより、抗生物質チオストレプトンを
生成せしめる。この方法において約２２〜１２礎時間、
好ましくは約６５時間発酵処理を行ない、その終時点で
抗生物質が生成する。この抗生物質は常套の方法（たと
えば米国特許第２９８２６８９号およびバンデプツト（
Ｖａｎｄｅｐ山ｔｅ）ら：アンチバイオテイクス・アニ
ユアル（ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓＡｎｎｕａｌ）１９５
５〜１９６５巻５６０〜５６１頁に記載の方法）により
これを単離および精製することができる。

次に実施例を挙げ、ストレプトミセス・ラゥレンティＡ
ＴＣＣ３１２５５から抗生物質チオストレブトンを製造
する方法について詳述する。

実施例 １ 発酵：− 下記塔地を含むガラス製１４〆発酵容器中、ストレプト
ミセス・ラウレンテイＡＴＣＣ３１２５５の１０そ発酵
バッチを下起条件で発酵させる。

第１工程（発芽処理） 接種材料の製造 トマトペーストーオートミール寒天斜面培地上にストレ
プトミセス・ラウレンテイＡＴＣＣ３１２５５を接種す
る。

これを５〜７日間培養し、次いでこれを５００泌ェルレ
ンマィャーフラスコ中、大豆ミールの水性塔地１００舷
に接種して培養する。水性発芽培地の組成は次のとおり
である：妙り栄養大豆粉１５．０夕、可溶性澱粉１５．
０９、グルコース５０．０夕、二塩化コバルト・６水和
物０．００５夕、炭酸カルシウム１０．０夕、蒸留水を
加えて全量ｌｏｏ０の【。接種して培養する前にあらか
じめ、上記水性培地を１５ポンド蒸気圧（ｐｓｉ）の下
に１２１℃で滅菌処理する。接種した培養フラスコをロ
ータリーシェーカー上、２インチスロー、３０仇ｐｍの
回転条件の下に２５こ０で７幼時間培養する。第２工程
（発酵処理） 接種材料：上記第１工程で得られた接種材料５００の‘
を使用する。

培地：第１工程の水性塔地と同様の組成を有すよび０バ
ンドが存在する。

５．アミノ酸分析 ｛ａ｝以上の結果に記載したデータはすべて下記文敵か
ら引用したものである。

前記ポダンズキィら：ジャーナル・オブ・アンチバイオ
ティクス第脇萱７６〜７９頁（１９６３王）、前記バン
ププツトら：アンチバイオティクス・アニュアル１９５
５〜１９５虎筈５６０〜５６１頁およびボダンズキイら
：ジヤーナル・オブ・ジ・アメリカン・ケミカル・ソサ
ヱテイ（Ｊ，ｏｆ ｔｈｅ 価ｅｒｉＣａｎＣｈｅｍｉ
ｃａｌＳｏｃｉｅツ）第８６巻２４７８〜２４９０頁（
１９６４年）。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ストレプトミセス・ラウレンテイを培地に培養し、
   その培養液から抗生物質チオストレプトンを採取するこ
   とを特徴とする抗生物質チオストレプトンの製造法。 ２ ストレプトミセス・ラウレンテイ ＡＴＣＣ３１２５５を炭素および窒素源含有培地中、チ
   オストレプトンが蓄積されるまで好気的に培養すること
   から成る特許請求の範囲第１項記載の製造法。 ３ 約２５℃の温度で培養を行なうことから成る特許請
   求の範囲第１項記載の製造法。