JPS60234597A - β−ガラクトシダ−ゼ試験用培地 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １０発明の背景 交亙公１ 本発明は、微生物の生化学的性状検査用培地に関する。

さらに詳しくは、本発明は胎内細菌等微生物の生化学的
性状同定、法でβ−ガラクトシダーゼ試験に用いられる
改良された培地に関するものである。感染症に対して適
切な治療を施すためには病原菌を同定し、感受性試験を
行ない、その病原菌に有効な薬剤を決定することが重要
である。

このような病原菌の同定に際しては多項目にわたる生化
学的性状検査が行なわれ、その項目の１つとしてβ−ガ
ラクトシダーゼ試験が行なわれる。

本発明の培地はこのようなβ−ガラクトシダーゼ試験に
好適に使用される。

′−−よび。　へ β−ガラクトシダーゼ試験は、β−グリコシド結合を加
水分解する酵素をもつ菌を検出する試験であって現在で
はもっとも重要な菌の生化学的性状検査の一つである。

この試験は菌をラクトースまたはβ−グリコシド結合を
有する化合物をを含有する培地で培養することによって
実施される。

この試験で使用する培地として最近、トリプトンＴ、グ
ルコース、リン酸−水素二ナトリウム、オルトニトロフ
ェニル−β−Ｄ−ガラクトピノシド、亜硫酸水素ナトリ
ウムおよび精製水の組成からなるものが提案されている
（特公昭５８−２０２６３）。この培地は、培養時間が
従来のものにくらべて大巾に短縮されている。即ち、従
来の培地においては培養期間が１〜２日間であったのに
対してこの培地では培養期間が４〜５時間に短縮されて
おり、即日判定が可能である。しかしながらこの培地に
おいても菌の種類によっては４〜５時間の培養では反応
が不十分であり判定が困難なものもあり、そのような場
合には培養時間を長くし、翌日に判定せざるをえない場
合もあった。

従って全ての菌について４〜５時間の培養で反応の陽性
、陰性を明瞭に判定できる培地が要望されている。

また早期治療のためには菌の同定はできるだけ速やかに
行なわれるのが望ましいが他方、検査作業の都合上、判
定を翌日に行なわざるを得ない場合も生ずる。このよう
な場合には培養期間が厳格に規定されておらず、作業上
の都合で培養期間を延長または短縮しても正確な判定が
可能な培地が望ましい。

さらに生化学的性状検査は作業の効率上多数の試験を同
一の培養プレートを用いて一度に行なうことが多いので
各試験の培養期間をそろえることが必要となる。このよ
うな場合にも培養期間に厳格な制限のない培地が望まし
い。

ＩＩ　、発明の目的 本発明は培養期間が特に制限されず、即日同定および翌
日同定が可能なβ−ガラクトシダーゼ試験用培地を提供
することを目的とする。

本発明はさらに呈色反応が明瞭であり判定が容易なβ−
ガラクトシダーゼ試験用培地を提供することを目的とす
る。

本発明によれば、酵母エキス０．３〜３ｇ；カゼイン−
トリプシン加水分解ペプトン１〜１０ｇ；ラクトース０
．０５〜０．５ｇ；リン酸−水素二アルカリ金属塩０．
５〜５ｇ；リン酸二水素−アルカリ金属塩０．０５〜０
．５　ｇ　；およびオルトニトロフェニルβ−ローガラ
クトピラノシド０．５〜５ｇの割合の組成よりなり、水
ＩＪＩに溶解したときのｐＨが７．２〜７．７であるβ
−ガラクトシダーゼ試験用培地が提供される。

■１発明の詳細な説明 本発明の培地は、酵母エキス、トリプトン、ラクトース
、リン酸−水素二アルカリ金属塩、リン酸二水素−アル
カリ金属塩およびオルトニトロフェニルβ−ローガラク
トピラノシドからなる。

本発明の培地はｐＨ調節成分として、リン酸−水素二ア
ルカリ金属塩およびリン酸二水素−アルカリ金属塩を用
いて培地の緩衝能を調節す、ることに特長を有する。短
時間の培養で反応を出現しやすくするため、緩衝能を抑
制すると、翌日判定の場合に偽陽性となり易い。これを
避けるために緩衝能を強めると短時間で反応が出現しに
くくなる。即日判定と翌日判定の両方を可能とするため
にはリン酸−水素二アルカリ金属塩とリン酸二水素−ア
ルカリ金属塩とを所定の量使用することが必要である。

アルカリ金属塩としてはカリウム、ナトリウム等が好ま
しい。

β−ガラクトシダーゼ反応の陽性は黄色であり、陰性は
無色であるが、通常ペプトンや酵母エキスは水に溶解し
たとき、薄い黄色味を帯び、陽性とまぎられしい。そこ
で反応に影響を及ぼさない範囲で陰性が殆んど無色とな
るように着色の少ないペプトンおよび酵母エキスを選択
し、その含量を設定するのが好ましい。

また本発明の培地にイソプロピル−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシドを添加すると反応を促進することができる。

上述した本発明の培地における各組成割合は臨界的であ
り、β−ガラクトシダーゼ反応は酸性では抑制されアル
ヅｆり性で偽陽性化がおこるのでリン酸−水素二アルカ
リ金属塩およびリン酸二水素−アルカリ金属塩は、ｐＨ
が７．２〜７．７好ましくは７．４〜７．８となるよう
に設定されている。

本発明の培地においては、発色基質としてはオルトニト
ロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドが最も適して
おり試験試料が少量でも反応の陽性、陰性が明瞭に判定
できるような量に設定されている。

本発明の培地は常法に従って所定量の各成分を水に溶解
することによって使用される。近年生化学的性状検査は
多数の試験を多穴プレートを用ン）て同時に行うのが普
通であり、このような場合には本発明培地を試験用プレ
ートのウェルに注入し、乾燥させて乾燥培地とする。試
験に際しては該ウェルに試験菌の懸濁水な所定量分注し
、所定時間培養する。培養液の色の変化により、β−ガ
ラクトシダーゼ反応の陽性、陰性を判定する。

■０発明の具体的作用および効果 本発明の培地は、従来のβ−ガラクトシダーゼ試験用培
地と全く同様にして使用される。培養時間は３〜５時間
に短縮可能であるが特に制限はされず、長時間培養も可
能であり、即日同定、翌日同定のいずれにも適している
。また呈色が明瞭であり、反応の陽性、陰性の判定が容
易である。

次に本発明の培地を使用してβ−ガラクトシダーゼ試験
を行なった実施例を示す。

実施例 １生皿減 本発明　対リ　対見、　対照 培地　培地Ｉ　培地Ｉ＋　培地■ 酵母エキス（ｇ）　ｔ　Ｏ，５−ｏ、ｓ　０．５グルコ
ース（ｇ）　−ｏ、　＋　− 亜硫酸水素 ナトリウＬ、（ｇ）　−０，２− カゼイン−トリプシン 加水分解 ペプトン（ｇ）”　７．１１　１０．０　７．Ｏｖ、。

ラクトース（ｇ）　０．１　−　０．１　０．１リン酸
−水素 二ナトリウム（ｇ）　２．５　３．０　２．５　０９ノ
酸二木素 一カリウム（ｇ）　０．１　−　０　２．５イソプロピ
ル−β− Ｄ−チオガラクト ピラノシド（ｇ）　０．（１５０，０５Ｑ、０５オルト
ニトロフエニル 一β−Ｄ−ガラクト ピラノシド（ｇ）　１．５　１．５　＋、５　１．５ン
を使用。

境ＪＬ１件 上記の組成の本発明の培地および対照培地を多穴プレー
トの各穴に、５０＃Ｌ見ずつ分注し、４０°Ｃで乾燥し
た０次に寒天平板培地上で各種微生物を３５〜３７℃で
１８〜２４時間培養し、　１．０　ｍｌの滅菌蒸留水中
に約６〜９Ｘ１０　／ｍｌになるように懸濁して各穴に
５０用文ずつ接種後蓋をし、３５〜３７℃で所定時間培
養し、培養液の色の変化によりβ−ガラクトシダーゼ反
応の有無を判定した。結果を第１表に示す。

第１表の結果から明らかなように、β−ガラクトシダー
ゼ試験において本発明の培地を使用するときは培養時間
の長短を問わず正確な菌の同定が可能である。従って検
査作業の都合により即日同定、翌日同定のいずれをも選
択できる。

これに対して対照培地を使用するときは、菌によっては
４〜５時間の培養では呈色が不十分であり、即日同定が
困難な場合がある。また、本発明の培地のように培養時
間に厳格な制限を受けないことは多数の生化学的性状試
験を同時に実施する場合に極めて好都合である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）酵母エキス０．３〜３ｇ；カゼイン−トリプシン
   加水分解ペプトン１〜１０ｇ；ラクトース０．０５〜０
   ．５ｇ；リン酸−水素二アルカリ金属塩０．５〜５ｇ；
   リン酸二水素−アルカリ金属塩０．０５〜０．５ｇ；お
   よびオルトニトロフェニルβ−ローガラクトピラノシド
   ０．５〜５ｇの割合の組成よりなり、水１１に溶解した
   ときのｐＨが７．２〜７．７であるβ−ガラクトシダー
   ゼ試験用培地。