JPS60162000A - 新規ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は新規なペプチドに関するものであり、詳細に
はＢ型肝炎ウィルス抗原の解析に有用であり、またＢ型
肝炎ワクチン用抗原組成物等として有用な新規ペプチド
および医薬として許容されるその塩に関するものである
。

この発明の新規ペプチドは、次のような式Ｃ１１〜［Ｘ
［〕により示される。

［Ｉ］ ［ＩＩ］ ［ＩＩＩ］ ［ＩＶ］ ［Ｖｌ ［■］ ［■］ ［Ｖｌ［］ ［ＩＸ］ ［Ｘ］ ［ＸＩ］ （上記各式においてＲ４は水素またはメルカプト保護基
を意味する） この明細書においてはアミノ酸、保護基、活性基、溶媒
等について、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ　ｃｏｍｍｉｓｓｉｏ
ｎｏｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕ
ｒｅに基づく略号および当該分野における慣用略号で表
示する場合があり、それらを例示すると次の通りである
。Ｌｅｕ：ロイシンン、　（４ｓニジステイン、　Ｈｉ
ｓ：ヒスチジン、Ｐｒｏニブロリン、Ｉｌｅ：イソロイ
シン、Ａｓｐ：アスパラキン酸、Ａｓｎ：アスパラギン
、Ｔｈｒ　：スレオニン、Ａｌａ：アラニン、Ｇｌｎ：
グルタミン、Ｇｌｙニゲリシン、Ｌｙｓ：リジン、Ｐｈ
ｅ：フェニルアラニン、Ａｒｇ：アルギニン、Ｇｌｕ：
グルタミン酸、Ｖａｌ：バリン、Ｔｒｐ：）リブトファ
ン、Ｓｅｔ：セリン、Ｂｏｃ：　ｔ−ブトキシカルボニ
ル、ｃｌ−ｚ：　２−クロロベンジルオキシカルボニル
、　Ｂｚｌ：ベンジル、Ａｃｍ　：アセトアミドメチル
、Ｔｏｓ−ｐ−）ルエンスルホニル、　Ｐａｃ：フェナ
シルエルテル、ｃＨｅｘニジクロヘキシル、ＤＭＦ：Ｎ
、Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＴＦＡニトリフルオロ酢
酸、ＷＳＣＤ　：１−エチル−３−（３−ジメチルアミ
ノプロピル）カルボジイミド、）ＩＯＢＴ：　Ｎ−ヒド
ロキシベンゾリアゾール、ＯＳｕ：Ｎ−ハイドロキシサ
クシンイミドエステル。

この発明の化合物［Ｉ］〜［Ｘ［］ならびに医薬として
許容されるそれらの塩は種々の方法により製造すること
ができ、以下にそれらの方法を説明する。

（１）方法−１（固相法によるペプチド合成）：１）方
法１−１ Ｒ１−９ｅｒ（Ｒ８）−樹脂［１１ａ］−＋２）方法１
−２ Ｒ”−Ｃｒｙｓ（Ｒａ　）−樹脂［Ｉ［１ａ］　→［ｌ
ｌＩｂ］ ３）方法１−３ Ｒ’−３ｅｔ（Ｒ”）−樹脂［ＩＶａ］−＋（２）方法
２（液相法によるペプチド合成）（Ｉ　−ｂ） （３）方法３（保護基の脱離法） ｌ）方法３−１ ［より］ ↓ ［Ｉ　ｃｌ ２）方法３−２ ［１１ｂ］ ↓ ［１１］ ３）方法３−３ ［１１１ｂコ ↓ ［ｍｃ］ ４）方法３−４ ［ＩＶｃ］ （４）方法４（メルカプト保護基の脱離および環化反応
）： １）方法４−１ ［■］　［■］ ［■］ ２）方法４−２ 」 ［■］ ３）方法４−３ ［ＩＶｃ］ ↓ ［ＩＶｃｌｌ ４）方法４−４ ［ＩＶｄ］ ［Ｘ［］ ［ＩＶｄ］ 上記式中、Ｒ１はアミン保護基、Ｒ２はカルボキシ保護
基、Ｒ８はヒドロキシ保護基、Ｒａ’はメルカプト保護
基、Ｒはグアニジノ保護基を、およびＲ６はイミダゾー
ル保護基をそれぞれ意味する。これらの定義について説
明すれば下記の通りである。

（＋）　Ｒニおけるアミノ保護基について：アミン保護
基には、アミノ酸やペプチド化学の分野において汎用さ
れる通常のアミノ保護基が含まれ、そのようなアミン保
護基の好ましい例としては、アルコキシカルボニルまた
はシクロアルコキシカルボニル（例えばｔ−ブトキシカ
ルボニル、ｔ−ペントキシカルボニル、シクロヘキシル
カルボニル等）、置換または非置換のフェニル低級アル
コキシカルボニル（例えばベンジルオキシカルボニル、
２−クロロベンジルオキシカルボニル等）のようなアラ
ルコキシカルボニル、置換または非置換のアレンスルホ
ニル（例えばベンゼンスルホニル、Ｐ−）ルエンスルホ
ニル等）等が挙げられる。

（２）　Ｒ２におけるカルボキシ保護基について：カル
ボキシ保護基にはアミノ酸やペプチド化学の分野におい
て汎用される通常のカルボキシ保護基が含まれ、そのよ
うな保護基の好ましい例としては、例えば低級アルキル
（例えばメチル、エチル等）等のアルキル、シクロアル
キル（例えばシクロペンチル、シクロヘキシル等）、七
ノー又ハシーフェニル低級アルキル（例えばベンジル、
ジフェニルメチル等）等の７ラルキル、アロイルアルキ
ル（例えばフェナシル、トルオイルエチル等）等が挙げ
られる。

（３）　Ｒａにおけるヒドロキシ保護基について：ヒド
ロキシ保護基にはアミノ酸やペプチド化学の分野におい
て汎用される通常のヒドロキシ保護基が含まれ、そのよ
うなヒドロキシ保護基の好適な例としては、例えばアル
カノイル（例えばアセチル等）等のアシル、置換または
非置換のアラルキル（例えばベンジル、２，６−ジクロ
ロベンジル等）等が挙げられる。

（４）　Ｒ４およびＲａ’におけるメルカプト保護基に
ついて： メルカプト保護基にはアミノ保護基およびヒドロキシ保
護基の脱離条件下では脱離しない保護基が挙げられ、そ
のような保護基の好ましい例としては、アシルアミノア
ルキル（例えばアセトアミドメチル、ベンズアミドメチ
ル等）、アリールメルカプタン（例えば３−ニトロピリ
ジン−２−チオール等が挙げられる。また、置換または
非置換の低級アルキル（例えばｔ−ブチル等）、置換ま
たは非置換アラルキル（例えばベンジル、ｐ−メトキシ
ベンジル、ｐ−メチルベンジル、３，４−ジメチルベン
ジル、ジフェニルベンジル、トリチル等）、置換または
非置換の低級アルキルメルカプト（例えばエチルメルカ
プト、ｔ−ブチルメルカプＩ・等）等も各保護基の脱離
条件を適当に選択することにより使用することができる
。

（５）　、Ｒ５におけるグアニジノ保護基およびＲ６ニ
オけるイミダゾール保護基について： グアニジノ保護基およびイミダゾール保護基にはアミノ
酸やペプチド化学の分野において汎用される通常のグア
ニジノ保護基およびイミダゾール保護基が含まれ、その
ような保護基の好ましい例としては、例えばニトロ、置
換または非置換のアレーンスルホニル（飼犬ば、Ｐ−）
ルエンスルホニル等）、置換または非置換のフェニル低
級アルコキシカルボニル（例えばベンジルオキシカルボ
ニル等）、アルコキシカルボニル（例えばｔ−ブトキシ
カルボニル等）等が挙げられる。

（８）医薬として許容される塩について：化合物［Ｉ］
〜［Ｘ［］における医薬として許容される塩には例えば
アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩等）
、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウム塩等）、アン
モニウム塩、有機アミン塩（例えばエタノールアミン塩
、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩等）
等の無機塩基若しくは有機塩基との塩及びトリフルオロ
酢酸、メタンスルホン酸、塩酸、硫酸、硝酸、燐酸等の
有機酸又は無機酸の付加塩が含まれる。上記各種方法に
ついて以下に説明する。

（１）方法１について： この方法は、化合物［ＩＩａ］　、［ｍａｌおよび［Ｉ
Ｖａ］に、固相法によるペプチド合成の常法に従って、
各保護された構成アミノ酸を順次カップリングさせて、
化合物［１１ｂｌ、［ｍｂ］および［ＩＶｂ］　を得る
方法である。

ここで出発物質として使用する化合物 ［ｎ　ａ］、［ｍａｌおよび［ＩＶ　ａ］にはそれぞれ
公知物質（例えば、バイオポリマー第１２巻、第２５１
３頁、　１９７３年）および新規物質が含まれ、該新規
物質は該文献記載の方法と同様に製造することができる
。また使用する樹脂としては固相法によるペプチド合成
において使用する樹脂であれば、いずれでも使用するこ
とができ、そのような樹脂の例としては、例えばクロロ
メチル化されたスチレン−ジビニルベンゼン共重合体、
ヒドロキシメチル化されたスチレン−ジビニルベンゼン
共重合体、アミンメチル化されたスチレン−ジビニルベ
ンゼン共重合体のようなポリスチレン型樹脂、ポリジメ
チルアクリルアミド樹脂のようなポリアミド型樹脂等が
挙げられる。この方法は一般には各保護された構成アミ
ノ酸の各々につき、次のようなｌ〜１１の工程を１サイ
クルとして行われる。

ｌ）工程ｌ： この工程は出発物質である保護されたアミノ酸−樹脂を
、洗浄し、また樹脂を膨潤させるために行う工程であり
、そのために使用する溶媒の好適な例としては、塩化メ
チレン、クロロホルム、ジメチルホルムアミドまたはそ
れらの混合溶媒が挙げられる。

２）工程２： この工程は保護されたアミノ酸−樹脂におけるアミン保
護基を脱離する工程であり、この工程の反応は、酸を用
いる法、塩基を用いる法等の様な常法のより行われる。

上記脱離方法の中では、酸を用いる方法が最も繁用され
るので以下加法について説明する。

この反応は塩化メチレン、クロロホルム、酢酸、水等の
溶媒中において、トリフルオロ酢酸、蟻酸、Ｐ−トルエ
ンスルホン酸、塩酸、臭酸等の無機酸又は有機酸の存在
下に、好ましくはエタンジチオールやアニソールを添加
して行われる。

上記例示の酸のうち、トリフルオロ酢酸及び蟻酸は溶媒
としても使用される。

この反応は通常、冷却（例えば−７８℃）乃至室温下に
行なわれる。

３）■程３： この工程は不純物の除去および樹脂の膨潤のために行う
工程であり、前記工程ｌと実質的に同様な方法により行
われる。

４）工程４： この工程は樹脂を収縮させて洗浄効果をあげるために行
われる工程であり、アミノ酸−樹脂をアルコール（メタ
ノール、エタノール、プロパツール、２−プロパツール
、ブタノール等）、ジオキサン等で処理するのが好まし
い。

５）工程５： この工程は不純物の除去および樹脂の膨潤のために行う
工程であり、前記工程ｌと実質的に同様な方法により行
う。

８）工程６： この工程は前記の工程１〜５の処理により得られるアミ
ノ酸−樹脂におけるアミノがα−７ミノ基における酸付
加塩として存在する場合に、脱塩のために行われる工程
であり、例えばトリエチルアミンのような塩基で処理す
ることにより行われる。

７）工程７： この工程は不純物の除去および樹脂の膨潤のために行う
工程であり、前記工程ｌと実質的に同様な方法により行
う。

８）工程８： この工程は各保護された構成アミノ酸をカップリングさ
せる工程であり、ジシクロへキシルカルボジイミドのよ
うな常用の縮合剤の存在下塩化メチレン、クロロホルム
、ジメチルホルムアミドのような溶媒中で行うこともで
き、また各保護された構成アミノ酸のカルボキシ基を、
常法により酸無水物、活性エステル等に活性化して、上
記溶媒中で反応を行うこともできる。

９）工程９： この工程は不純物の除去および樹脂の膨潤のために行う
工程であり、前記工程ｌと実質的に同様な方法により行
う。

１０）工程１０： この工程は樹脂を収縮させて洗浄効果をあげるために行
われる工程であり、前記工程４）と実質的に同様な方法
により行う。

１１）工程１１： この工程は樹脂の洗浄および膨潤のために行う工程であ
り、前記工程ｌと実質的に同様な方法により行う。

上記各工程は一般的には室温程度で行われ、各工程（た
だし工程８を除く）は２〜３回程度くり返し行うのが好
ましい。

（２）方法２（液相法によるペプチド合成）この方法は
、液相法によるペプチド合成の常法に従って、化合物（
Ｉ　−１）またはその塩に化合物（Ｉ−２）またはその
塩を作用させて化合物（Ｉｂ）またはその塩を得る方法
である。

この方法において出発物質として使用する化合物（Ｉ−
１）および（Ｉ−２）はそれぞれ新規化合物であり、こ
れらの化合物は後記実施例およびそれらと同様な方法に
より製造することができる。

この方法の反応は次の様にして行なう、１つの方法によ
ればまず始めに化合物（Ｉ　−１）またはそれらの塩の
カルボキシル基を通常の方法によって、酸ハロゲン化物
、酸アジド、酸無水物、混合酸無水物、活性エステル等
の活性体にし、これらをそれぞれ化合物（Ｉ−２）に反
応させて、化合物（Ｉｂ）を得る。又他の方法によれば
、化合物（ｒ−ｉ）若しくはその塩と化合物（Ｉ　−２
）若しくはその塩を、Ｎ、Ｎ−ジシクロへキシルカルボ
ジイミド等の常用の縮合剤の存在下に直接反応させる。

この様な活性化方法のうち、好ましい方法および縮合剤
は化合物（Ｉ　−１）のカルボキシ保護基の種類並びに
反応条件（例えば反応溶媒、反応温度等）に応じて選択
される。

この反応は、塩化メチレン、クロロホルム、テトラヒド
ロフラン、ジオキサン、酢酸エチル、メタノール、エタ
ノール、水等の溶媒中において、冷却（例えば−２０℃
）乃至室温下で円滑に進行する。又縮合剤存在下で行う
反応は普通無水条件下緩和な条件下で行われる。

（３）方法３について： この方法は化合物［Ｉｂｌ　、［Ｉｂｌ　。

［Ｉｂｌおよび［ＩＶｂ］を、それぞれアミン保護基、
カルボキシ保護基およびヒドロキシ保護基、グアニジノ
保護基およびイミダゾール保護基の脱離反応に付して、
それぞれ化合物［Ｉｃ］。

［ｌＩｃ１　、［ｍｃ］および［ＩＶｃ］を得る方法で
ある。

アミン保護基、グアニジノ保護基およびイミダゾール保
護基を脱離する方法は、前記方法（Ｉ）の工程２と実質
的に同様の方法および接触還元法、液体アンモニア−ア
ルカリ金属法、酸亜鉛法、ヒドラジン法等により行なわ
れ、またカルボキシ保護基およびヒドロキシ保護基の脱
離は加水分解、還元等の常法によって行なわれる。

■）加水分解： 加水分解は酸又は塩基の存在下に行なうのが好ましい。

好適な酸としては、無機酸（例えば塩酸、臭化水素酸、
硫酸等）有機酸（例えば蟻酸、酢酸、トリフルオロ酢酸
、プロピオン酸、ベンゼンスルホン酸、Ｐ−）ルエンス
ルホン酸等）、酸性イオン交換樹脂等が挙げられる。

又好適な塩基としては、アルカリ若しくはアルカリ土類
金属の水酸化物、炭酸塩若しくは重炭酸塩（例えば水酸
化す）　ＩＪウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、
炭酸カリウム、炭酸リチウム、炭酸水素ナトリウム、水
酸化カルシウム、水酸化マグネシウム等）、水酸化アン
モニウム等の無機塩基等が挙げられる。

加水分解は冷却若しくは加温の様な比較的穏やかな条件
で且つ反応に悪影響を及ぼさない溶媒［例えば水、アル
コール（例えばメタノール、エタノール、プロパツール
等）の様な親木性溶媒、アセトン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメチ
ルスルホキシド等またはこれらの混合溶媒コ中において
行われる。

２）還元： 化学還元及び接触還元法を含む還元方法は常法により行
なわれる。

化学還元に使用される好ましい還元剤としては、例えば
金属（例えば錫、亜鉛、鉄等）又は金属化合物（例えば
塩化クロム、酢酸クロム等）と有機若しくは無機酸（例
えば蟻酸、酢酸、プロピオン酸、トリフルオロ酢酸、Ｐ
−）ルエンスルホン酸、塩酸、臭化水素酸等）との組合
わせ等が挙げられる。

又接触還元に使用される好ましい触媒としては、白金触
媒（例えば白金板、白金スポンジ、白金黒、白金コロイ
ド、酸化白金、白金線等）、パラジウム触媒（パラジウ
ムスポンジ、パラジウム黒、酸化パラジウム、パラジウ
ム炭素、パラジウムコロイド、パラジウム−硫酸バリウ
ム、パラジウム−炭酸バリウム等）、ニッケル触媒（還
元ニッケル、酸化ニッケル、ラネーニッケル等）、コバ
ルト胛媒（例えば還元コバルト、ラネーコバルト等）、
鉄触媒（例えば還元鉄、ラネー鉄等）、銅触媒（例えば
還元銅、ラネー銅、ウルマン銅等）等が例示される。還
元は通常溶媒中で行なわれる。好ましい溶媒としては、
例えば水、アルコール（例えばメタノール、エタノル、
プロパツール等）、酢酸及び他の一般的有機溶媒若しく
はその混合物が用いられる。又、化学的還元において使
われた前述の液状酸も又溶媒として兼用できる。更に接
触還元に用いられる好ましい溶媒としては、上述のもの
以外に、ジエチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロ
フラン等若しくはその混合物も使用される。

反応は冷却若しくは加温等の比較的穏やかな条件下に速
やかに行われる。

アミノ保護基、グアニジノ保護基、イミタゾール保護基
、カルボキシ保護基およびヒドロキシ保護基の種類によ
っては、上記脱離反応によって同時に脱離する場合もあ
るが、これらを積極的に同時に脱離させる方法としては
、例えばぶつ化水素、メタンスルホン酩、トリフルオロ
メタンスルホン酸等の酸で処理する方法が挙げられ、こ
の反応はこれらの酸に影響をおよぼさない通常の溶媒の
存在下または非存在下に行うことができる。

この方法はエタンシール、チオフェノル等のチオール類
、メチオニン、ジメチルスルフィド、チオアニソール等
のチオエーテル類、アニソールまたはクレゾール等の存
在下反応を行うと好結果が得られる場合が多い。

また上記酸は溶媒としても兼用される。この反応は通常
冷却〜０℃付近で行うのが好まい。

（４）方法４について： この方法は、化合物［Ｉｃ］　、［ｌｌＩｃ］および［
ＩＶｃ］をメルカプト保護基の脱離反応に付して対応す
るメルカプト保護基の脱離した化合物ならびに分子内の
Ｓ−５結合および（または）分子間のＳ−５結合を形成
した化合物（すなわち、化合物［Ｉｄ］　、［ＩＩＩｄ
ｌ　。

［ｒＶｄｌ　、　［ＶＩ　、　［ＶＩＩ　、　［ＶＩ［
］　、　［ＶＩ］　。

［ＩＸ］　、［Ｘ］および［Ｘ［］　）を得る方法であ
る。

これら分子内および（または）分子間Ｓ−８結合を形成
した化合物を得る方法としては遊離メルカプト基を有す
る化合物（すなわち、化合物［Ｉｄ］および［ＩＩＩｄ
ｌおよび［ｒＶｄｌ）を経由する方法とそれを経由しな
い方法とがある。以下これらについて説明する。

１）遊離メルカプト基を有する化合物を経由する方法： １）−１（化合物［Ｉｃ］−化合物［Ｉｄ］、化合物［
ｌＩｃ１＋化合物［ＩＩｄ］、化合物［ｍｃ］−＋化合
物［Ｉ［１ｄｌ化合物［ＩＶｃ］→化合物［ｒＶｄｌ）
： この方法は、化合物［Ｉｃ］　、［ｍｃ］または［ＩＶ
ｃ］を酢酸水銀、トリフルオロ酢酸水銀、酢酸銀等の金
属塩、トリフェニルホスフィン、トリブチルホスフィン
等の有機りん化合物、メルカプトエタノール、メルカプ
ト酢酸、エタンジチオール、チオフェノール。

ジチオスライトール、ジチオエリスリトール等のアルキ
ルまたはアリールチオール等の試薬で処理することによ
って、それぞれ対応する化合物［Ｉｄ］、化合物［Ｉ［
Ｉｄ］および化合物［ｒＶｄｌを得る方法である。

この反応は通常溶媒中で行われ、好ましい溶媒としては
例えば水、アルコール（例えばメタノール、エタノール
、プロパツール等）、ジオキサン、ジメチルホルムアミ
ド並びにこれらの混合溶媒等が挙げられる。

この反応は冷却〜加温程度の比較的穏やかな条件下で速
やかに行われる。

り−２（化合物［Ｉ　ｄｌ→化合物［ＶＩＩおよび（ま
たは）［■］、化合物［ｍｄ］→化合物化合物Ｉ［］　
、化合物［ＩＶｄ］→化合物［ＩＸ］　、［Ｘ］または
［Ｘ［］）：この方法は化合物［１ｄ］、化合物 ［ｍｄ］または化合物［ｌＶｄ１を比較的穏やかな酸化
的条件下で処理することによって、化合物［Ｉ　ｄｌに
対応して化合物［ＶＩ　。

［ＶＩＩおよび（または）化合物［■］を化合物［ｍｄ
］に対応して化合物［ＶＩＩ［］化合物［ＩＶ　ｄｌに
対応して化合物［ＩＸ］　、［Ｘ］または［ＸＩ］をそ
れぞれ得る方法である。

ここで使用される酸化剤の好ましい例としては例えば空
気中の酸素、フェリシアン化カリウム等が挙げられる。

２）遊離メルカプト基を有する化合物を経由しない方法
： （化合物［Ｉｃ］→化合物化合物　、［ＶＩＩおよび（
または）［■］　、化合物［ｌｌＩｃ］→化合物［■］
）： この方法は化合物［Ｉ　ｃ］または化合物化合物［ｍｃ
］をよう素、ジチオサイアノーゲン等の電子試薬で処理
することによって化合物［Ｉ　ｃ］に対応して化合物［
ＶＩＩおよび（または）化合物［■］、また化合物［ｍ
ｃ］に対応して化合物［■］をそれぞれ直接得る方法で
ある。

この反応は通常溶媒中で行われ、好ましい溶媒の例とし
ては、水、アルコール（例えば、メタノール、エタノー
ル、プロパツール等）、ジオキサン、ジメチルホルムア
ミド等が挙げられる。

またこの反応は冷却〜加温程度の比較的穏やかな条件下
で行われる。

この発明の化合物［Ｉ］〜［ＸＩ］ならびにこれらの化
合物を製造するための出発物質および中間体には分子内
不斉炭素原子による１または２以上の異性体が含まれ、
そのような異性体は全てこの発明の範囲に含まれる。

この発明のペプチド、すなわち化合物［Ｉ］〜［Ｘ［］
および医薬として許容されるそれらの塩は前記のように
Ｂ型肝炎ウィルス抗原の解析に有用であり、またＢ型肝
炎ワクチン用抗原組成物等として有用である。

次にこの発明の実施例を示すが、各実施例における各ア
ミノ酸はＬ体をさすものとする。

実施例１−１ ＴｏｓＯＨ中Ｇｌｙ　＊　０Ｂｚｌ（８，４３ｇ）とト
リエチルアミン（２，５ｇ）を水−アセトニリル（容量
比１：４．２５０１１１１）に加えてなる混合物に、Ｈ
ｏｅ　＠Ｐｒｏ　番ＯＳｕ　（７，８ｇ）を氷冷しなが
ら加えた。反応溶液を０〜５℃で２時間攪拌し、室温に
戻して更に６時間撹拌した。この間反応溶液のｐＨは、
トリエチルアミンを加えることによって７．５前後に維
持した。反応後アセトニトリルを除き、析出した油状沈
澱物を酢酸エチル（２００ａｌ）で抽出した。抽出液を
２．５％塩酸（１００＋ｓｌ、２回）、水（１００ａｌ
、３回）　、　２．５％炭酸水素ナトリウム（１００＋
＋＋１．２回）で夫々洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥
した。溶媒を留去して乾燥し、残渣をｎ−へキサンで結
晶化すると、Ｂｏｃ　ｅ　Ｐｒｏ−Ｇｌｙ　ｍ　０Ｂｚ
ｌの結晶（８，９０ｇ）が得られた。水晶は実施例１−
２の原料とする。

ｍｐ　６８〜８９℃ ［α１１．）　＝−６１，２”　（Ｃ＝０．８４５、メ
タノール）薄層クロマトグラフィ　（シリカゲル：メル
ク社製） Ｒｆ＝０．２５　［ベンゼン：酢酸エチル（３：１）　
］Ｒｆ＝０．４７　［クロロホルム：酢酸エチル（２：
１）　］実施例１−２ 実施例１−１で得られたＢｏｃ　＊　Ｐｒｏ　−Ｇｌｙ
　＊　０ＢｚｌをＴ　Ｆ、Ａ　（４０＋ａｌ）に加え、
室温下３０分間処理した。過剰のＴＦＡを留去した後、
残渣を、５０％アセトニトリルの水溶液（？Ｏｍ＋）に
溶解した。この溶液を０℃に冷却し、トリエチルアミン
を加えテｐｌ（７，５迄中和してから、Ｂｏｃ　争Ｌｅ
ｕ　＊　０９ｕ（３，２８ｇ）を加えた。混合物を室温
で７時間攪拌し、この間反応液のｐＨは、トリエチルア
ミンを加えることによって７．５前後に維持した。アセ
トニトリルを留去した後、濃縮液を、酢酸エチル（７０
ｍ＋）と２．５％塩酸（４ｈ＋１）の混液中に加えた。

有機溶媒層を分取して水（３０＋ａｌ　、　２回）　、
　２．５％炭酸水素ナトリウム（３０＋ａｌ　、　２回
）、水（３０＋ａｌ　、３回）で夫々洗浄した後、硫酸
マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去させると、油状の
Ｂｏｃ　ａ　Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−Ｇｌｙ　＊　０Ｂｚ
ｌが得られた（４．３０ｇ）　、水晶は実施例１−３の
原料とする。

薄層クロマトグラフィ（シリカゲル：メルク社製） Ｒｆ＝０．２８　［クロロホルム：酢酸エチル（２：１
）　］実施例１−３ メタノール（１７＋ｏｌ）に、実施例１−２で得られた
Ｂｏｃ　ｅ　Ｌｅｕ　−Ｐｒｏ　−Ｇ１７　＊０Ｂｚｌ
（１，７１ｇ）を加え、１規定水酸化ナトリウム水溶液
（３，ｆｌｌｍｌ）で室温下７時間に亘って翅理した。

メタノールを留去し、濃縮物を水（１５＋ａｌ）で希釈
した。この溶液を酢酸エチル（２０＋ａｌ）で洗浄した
後、５％塩酸でｐＨ２とし、酢酸エチルで抽出した（２
０＋ａｌＸ　２）　、抽出液を合わせて水で洗浄しく２
０＋ｓｌＸ　２）　、硫酸マグネシウムで乾燥した。４
．媒を留去して乾燥すると、粉状のＢｏｃ　＊Ｌｅｕ　
−Ｐｒｏ　−Ｇｌｙ　ｅＯＨ（１，２８ｇ）が得られた
。水晶は実施例１−１１の原料として使用する。

［α］Ｄ＝−１０，２１”　（Ｃ＝０．５９４、メタノ
ール）本化合物の一部（４０ｍｌ）をとってジイソプロ
ピルエーテルに溶解し、ジシクロヘキシルアミン（２０
ｍｇ）を加えた。析出した結晶を濾取するとジシクロヘ
キシルアンモニウム塩が得られた。

ｍｐ　１４？〜１４９℃ ［α］　＝−８７，Ｅｌ”（Ｃ：＝１．０、メタノール
）実施例１−４ Ｂｏｃ　争Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）ＯＨ（３０，９４ｇ）とト
リエチルアミン（１０，１ｇ）を酢酸エチル（３００１
Ｂ＋）に加え、この混合物に更に臭化ツェナチル（１９
，９ｇ）を加えた。反応混合物を室温で１５時間攪拌し
た。濾過によりトリエチルアミン臭酸塩を除いた後、濾
液を、１０％くえん酸（１５０ａｌＸ　２）　、水（１
５０＋ａｌＸ　３　）　、　２．５％炭酸水素ナトリウ
ム水溶液（１５ｈｌＸ２）及び水（１５０ａｌ　Ｘ　３
　）の順で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒
を留去すると油状物質（４２，７ｇ）が得られ、これを
Ｔ　Ｆ　Ａ　（２３０ａｌ）に溶解して５分間（０℃）
次いで３０分間（室温）夫々攪拌した。

過剰のＴＦＡを留去した後、３．６Ｎ塩化水素をジオキ
サン（４ｈｌ）に加えてなる溶液に残留物を溶解し、更
に溶媒を留去して乾燥した。残渣をエーテルで再結晶化
すると、ＨＣＩ　ａ　Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　＊　０Ｐａｃ
（３５，４ｇ）が得られた。

ｍｐ　１３９〜１４２℃ ［α］Ｄ＝−１２，８０’　（Ｃ＝０．３５５、メタノ
ール中）実施例１−５ Ｂｏｃ　１１Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＨ（４，４３ｇ）とＮ
−メチルモルホリン（１，５２ｇ）を塩化メチレン（９
０ｍｌ）に加えた混合物を一１Ｏ〜＝１５℃に維持しな
がら、これにクロル炭酸イソブチル（２，０５ｇ）を加
え、同温度で２５分間攪拌した。次いでこの溶液を一４
０℃に冷却し、実施例１−４で得られたＨＣ：Ｉ　−Ｔ
ｈｒ（Ｂｚｌ）ＯＰａｃ（５，４８ｇ）とＮ−メチルモ
ルホリフ（１，５２ｇ）の塩化メチレン−ＤＭＦ　（容
量比３：１．２００　ｍｌ）混合溶液を、前記冷却液に
加えた。−３０〜−４０℃で１時間、更に０℃で１．５
時間攪拌を行なった後、混合物を減圧濃縮した。濃縮液
を酢酸エチル（３００１１１１）に溶解し、２％塩酸（
１０ｈｌＸ２）、水（１０ｈｌＸ３）、５％炭酸水素ナ
トリウム水溶液（ｌｏｈｌＸ２）及び水（１００ｍｌＸ
　３）　（Ｄ順に洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥
した。溶媒を蒸発乾燥し残液を石油エーテルで結晶化す
ると、Ｂｏｃ　舎５ｅｔ（Ｂｚｌ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）
　ｅ　０Ｐａｃが得られた。水晶は実施例１−６の原料
とする。

ｍｐ　５８〜６０℃ ［α］Ｄ＝−４，８５６（Ｃ＝ｏ、５ｏ、メタノール中
）薄層クロマトグラフィ　（シリカゲル：メルク社製） Ｒｆ＝０．４３　［ベンゼン：酢酸エチル（３：１）　
］ＩＲ）ＩＣ１１−’　（ヌジョール） ３３２０．１７４５．１７００．１８８０．１８８０実
施例１−６ 実施例１−５で得られたＢｏｃ　＊　５ｅｔ（Ｂｚｌ）
−Ｔｈｒ（Ｂｚり　Φ０Ｐａｃ（６，１ｇ）を室温下に
Ｔ　Ｆ　Ａ　（８０＋ｏｌ）と３０分間処理した。過剰
のＴＦＡを留去した後、残留物をアセトニトリル（１２
０ｍりに溶解した。この溶液を０℃に冷却し、これにＮ
−メチルモルホリン（１，０１ｇ）とＢｏｃ’　ｅ↑ｈ
ｒ（Ｂｚｌ）　Φ０Ｓｕ（４，０ｇ）を加えた。混合物
を０〜５℃で１０時間撹拌し、この間Ｎ−メチルモルホ
リンを加えてｐＨを約７．５に維持した。その後アセト
ニトリルを留去し、残渣を酢酸エチル（２００ｍｌ）に
溶解した。得られた溶液を、１０％くえん酸（１００ｍ
ｌＸ　２　）　、水（１００ｍｌＸ３）、５％炭酸水素
ナトリウム水溶液（１００ｍｌＸ２）、水（１００ｍｌ
　Ｘ　３　）の順序で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥
した。溶媒を留去し残留物を酢酸エチルとｎ−へキサン
の混液（容量比１：１０゜ＩＥ１５　ｍｌ）で再結晶し
た。結晶を集めるとＢｏＣΦＴｈｒ（Ｂｚｌ）　−５ｅ
ｔ（Ｂｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　１ＩＯＰａｃ（８
，４ｇ）が得られた。

諺ｐ　８０〜８２℃ ［α］Ｄ＝＋１１．８＠（Ｃ＝０．８１４、ＤＭＦ中）
薄層クロマトグラフィ（シリカゲル：メルク社製） Ｒｆ−０，３５（ベンゼン：酢酸エチル（３：ｌ）　］
ＩＲ１０層−１（ヌジョール） ３２２５．１７５０．１１１９０．１８４５実施例１−
７ 塩化メチレン（４５ｍｌ）、酢酸（５ｍｌ）　、　ＤＭ
Ｆ（５１）からなる混液に実施例１−６で得られたＢｏ
ｃ　＊　Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−５ｅｒ（Ｂｚｌ）　−Ｔ
ｈｒ（Ｂｚｌ）　＊　０Ｐａｃ（１，８８ｇ）を加えて
なる溶液に亜鉛末（ｔ−７ｇ）を加え室温で３時間処理
した。亜鉛末を濾去した後、濾液を約１０＋＋＋１まで
濃縮し酢酸エチル（７０ｍｌ）に溶解した。この溶液を
２．５％塩酸（５０＋＋＋ｌＸ２）及び水（５０＋ｏｌ
Ｘ　４）の順序で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した
後、溶媒を留去乾燥した。油状残留物をｎ−へキサン（
５ｈ＋１Ｘ２）で洗浄し、エーテル（２ｍｌ）とｎ−ヘ
キサン（７０＋ｏｌ）の混液で再結晶すると、Ｂｏｃ　
ΦＴｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｓｅｔ（Ｂｚｌ）−Ｔｈｒ（Ｂｚ
ｌ）ＯＨ（１，３０ｇ）が得られた。水晶は実施例１−
９の原料物質とする。

＋ｏｐ　１０１〜１０４℃ ［α］Ｄ＝＋２２．５°（Ｃ＝０．１９３、メタノール
中）実施例１−８ 実施例１−６で得られたＢｏｃ＊　Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　
−５ｅｔ（Ｂｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−０Ｐａｃ
（１，８０ｇ）を室温下Ｔ　Ｆ　Ａ　（１５ｍｌ）と３
０分間処理した。過剰のＴＦＡを留去した後、　３．８
Ｎ塩化水素のジオキサン（１ｍｌ）溶液と合し、ジオキ
サンを蒸発乾燥した。残留物をｎ−ヘキサンで再結晶し
、これを集め、減圧下水酸化カリウムペレットで乾燥す
ると、Ｈ（：ｌ　１１Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−３ｅｒ（Ｂｚ
ｌ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　拳０Ｐａｃ（１，４３ｇ）が
得られた。

ｍｐ　１２８〜１２８℃ ［（！］、＝−１１，２１°（Ｃ＝０．１９３、メタ／
　−ル中）実施例１−９ 実施例１−７で得られたＢｏｃｅ　Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　
−５ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）０）１　（７４
５ｍｇ）、実施例１−８テ得られたＭＣＩ　ＩＩＴｈｒ
（Ｂｚｌ）−９ｅｔ（Ｂｚｌ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　・
０Ｐａｃ　（７３１＋ｉｇ）及びＨＯＢ　Ｔ　（１４９
＋ｍｇ）をＤＭＦ（６１）に加えてなる混合物を水浴中
で冷却しておき、これにＷ　Ｓ　ＣＤ　（１５５＋ａｇ
）を加えた。同温度で３．５時間撹拌した後、酢酸エチ
ル（Ｂｏｗｌ）に加えて希釈した。この溶液を１０％く
えん酸（５Ｑ＋ａｌＸ２）、水（５０＋ａｌＸ２）　、
　２．５％炭酸水素ナトリウム水溶液、水（５０＋ａｌ
Ｘ　３　）の順序で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し
た後、溶媒を蒸発乾燥した。残留物をエーテルで結晶化
すると、Ｂｏａ　・７ｈｒ（Ｂｚ　ｌ）　−５ｅｒ（Ｂ
ｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−
５ｅｒ（Ｂｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−０Ｐａｃ　
（１，０８ｇ）が得られた。

ｍｐ　１３６〜１３８℃ ［αコ。＝−７，０１＠（Ｃ＝０．２３　、メタノール
中）薄層クロマトグラフィ　（シリカゲル：メルク社製
） Ｒｆ＝０．３４　［クロロホルム：酢酸エチル（２：１
）　］実施例１−１０ 実施例１−９で得られたＢｏｃ　ＩＩＴｈｒ（Ｂｚｌ）
−３ｅｒ（Ｂｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−Ｔｈｒ（
Ｂｚｌ）　−５ｅｔ（Ｂｚｌ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　・
０Ｐａｃ（３，３ｇ）をＴＦＡ中で室温下３０分間処理
した。ＴＦＡを留去した後、油状残留物を、２．７５Ｎ
−塩化水素のジオキサン（２，２＋ａｌ）溶液に溶解し
た。この溶液を減圧下に濃縮し、油状残留物をｎ−へキ
サン（３０ｍｌ）で洗浄した後、エーテルで再結晶する
と、ＨＣＩ　・Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−５ｅｔ（Ｂｚｌ）　
−Ｔｈｒ（Ｂｚ　Ｉ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−５ｅｔ
（Ｂｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　・０Ｐａｃ（３，１
ｇ）が得られた。

ｍｐ　１１８〜１１８℃　（分解） ［ａ　］　ｎ　＝−８４−４”　（Ｃ””　１、メタノ
ール中）薄層クロマトグラフィ（シリカゲル：メルク社
製） Ｒｆ＝０．２８　［酢酸エチル：酢酸（１０：１）］実
施例１−１１ 実施例１−３で得られたＢｏｃ　ａ　Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−
Ｇｌｙ　ａＯ）１　（０，９９ｇ）、実施例１−１０で
得られたＨＣＩ　φＴｈｒ（Ｂｚｌ）　−Ｓｅｔ、（Ｂ
ｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−３
ｅｒ（Ｂｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　＊　０Ｐａｃ（
３，０ｇ）及びＨＯＢＴ（０，３８ｇ）をＤ　Ｍ　Ｆ　
（４０ｍｌ）に加えてなる混合物を水浴中で冷却しなが
ら、これにＷＳＣＤ　（０，４０ｇ）を加えた。この混
合物を０〜５℃で３時間攪拌し、更に室温で１５時間撹
拌した後、水（１５Ｃ１ｍｌ）と酢酸エチル（１５０ｎ
＋ｌ）の混液に注いだ。酢酸エチル層を分取して２％塩
酸（１００ｍｌ）、水（５０ｍｌＸ　３　）、２％炭酸
水素ナトリウム水溶液（１００＋ｓｌ）及び水（５０＋
ａｌＸ　３）の順序で洗浄し、更に硫酸マグネシウムで
乾燥した後、溶媒を留去した。残留物をエーテルで再結
晶すると、Ｂｏｃ　＊　Ｌｕｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ　−Ｔ
ｈｒ（Ｂｚｌ）　−５ｅｒ（Ｂｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚ
ｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−３ｅｔ（Ｂｚｌ）　−Ｔｈ
ｒ（Ｂｚｌ）　−０Ｐａｃ　（３，２５ｇ）が得られた
。

ｍｐ　１７２〜１７５℃　（分解） 薄層クロマトグラフィ（シリカゲル：メルク社製） Ｒｆ＝０．４２　［クロロホルム：メタノール（２０：
ｌ）］実施例１−１２ 実施例１−１１で得られたＢｏｃ　＊　Ｌｕｅ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−５ｅｔ（Ｂｚｌ）　−
Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−８ｅｒ（Ｂ
ｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　・０Ｐａｃ（３，４ｇ）
をＤ　Ｍ　Ｆ　（４０ｍｌ）と酢酸（２０ｍｌ）に加え
てなる溶液を水浴中で冷却しながら、これに亜鉛末（５
，０ｇ）を加え、室温に戻して１時間攪拌した。亜鉛末
を濾去した後、濾液を減圧下に濃縮した。濃縮液を酢酸
エチル（１００１）に溶解し１％塩酸（８０ｍｌ）及び
水Ｃ１００ｍｌＸ　２　）で洗浄した後、硫酸マグネシ
ウムで乾燥し、更に溶媒を蒸発乾燥した。残留物をイソ
プロピルエーテルで再結晶すると、Ｂｏｃ　ｅ　Ｌｕｅ
−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−５ｅｔ（Ｂ
ｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−
３ｅｔ（Ｂｚｌ）　−Ｔｈｒ（ｌｚｌ）　・ＯＨ（２，
２８ｇ）が得られた。水晶は実施例１−２２の原料物質
とした。

ｒｒｒｐ　１７３〜１７６℃　（分解）［α］Ｄ　＝＋
５’　（Ｃ＝１．ＤＭＦ中）薄層クロマトグラフィ（シ
リカゲル：メルク社製） Ｒｆ＝０．４１　［りａ　ｏ＊ルム：　Ｊ　））　／　
−ル（１０：１）］実施例１−１３ Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃ：１．−ｚ）　＠０ＨＩＩｔ−Ｂｕ
−ＮＨ２（７，３８ｇ）を酢酸エチルと希塩酸に分配し
、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を合して塩化ナ
トリウム飽和水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥
した。溶媒を留去した後、ＨＣＩ　・Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）
　９０Ｐａｃ（５，０ｇ）を塩化メチレン（１００ｍｌ
）とＤ　Ｍ　Ｆ　（７０ｍｌ）（７）混液に加えたもの
を、前記で得られた残留物に加えた。次いで一５０°Ｃ
に冷却シナがうＷｓｃＤ　（２，３４ｇ）を加えた。こ
れを３時間に亘って攪拌したが、この同温度は徐々に上
昇させて０℃とし、以下この温度に保ちながら更に１時
間攪拌した。この混合物を濃縮し、酢酸エチルと水の混
液中に加えた。有機層を分離し、残った水層を酢酸エチ
ルで２回抽出した後、有機層を合し、希塩酸、水、精度
酸水素ナトリウム水溶液、水及び塩化ナトリウム飽和水
溶液の順序で洗浄した。次いで硫酸マグネシウムで乾燥
し、濃縮した。残留物をエーテル−ジイソプロビルエー
テルで結晶化すると、Ｂｏｃ　ｅＬｙｓ（ＣＩ−ｚ）−
Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　拳０Ｐａｃ　（５，８５ｇ）が得ら
れた。

ｍｐ　７９〜８４．５℃ ［α］Ｄ　＝−９，３３°（Ｃ＝０．５、クロロホルム
中）元素分析：　Ｃ３８Ｈ４５Ｎ３　ｏ、、　ＣＩ計算
値　Ｃ：８３．０２　Ｈ：８．４０　Ｎ：５．８０実験
値　Ｃ：８１．９９　Ｈ：８．１２　Ｎ：６．４３実施
例１−１４ 実施例１−１３で得られたＢｏａ　＊　Ｌｙｓ（ＣＩ−
ｚ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−０Ｐａｃ（５，５ｇ）をＴ
　Ｆ　Ａ　（５０ｍｌ）とアニソール（５ｍｌ）の混液
と共に０℃で３０分、更に室温で３０分夫々処理した。

この混合物を濃縮し、残留物にエーテルを加えると、結
晶化物（５，１９ｇ）が得られた。これを塩化メチレン
（１００ｍｌ）に溶解し、更にＢｏｃｅ　Ｃｙｓ（Ａｃ
ｍ）　ａ　０９ｕ（２，８８ｇ）とトリエチルアミン（
１，２ｍ１）を加えた。混合物を室温で１５時間攪拌し
、３−（Ｎ、Ｎ−ジメチルアミン）プロピルアミン（０
，１ｍ１）を加えた。この、混合物を濃縮し酢酸エチル
で抽出した。有機層を、水、希塩酸、水及び塩化ナトリ
ウム飽和水溶液の順序で洗浄した。溶媒を留去した後、
残留物を酢酸エチルとエーテルの混合液で結晶化すると
、Ｂｏｃ　・Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｌｙｓ（ＣＩ−ｚ）−
Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　＊　０Ｐａｃ（４，９ｇ）が得られ
た。

ｍｐ　９３．５〜８７℃ ［α］Ｄ＝＋３．４１°（Ｃ：＝Ｏ，１３２９、クロロ
ホルム中） 元素分析：Ｃ４４Ｈ５６Ｎ５０１１ＳＣ１計算値　Ｃ：
５８．０４　Ｈ：８．２０　Ｎ：？、６９　Ｓ：３．５
２実験値　Ｃ：５７．Ｅ１８　Ｈ：８．１３　Ｎ７７．
４Ｂ　Ｓ：３．８８実施例１−１５ （１）実施例１−１４で得られたＢｏｃ　＊　Ｃｙｓ（
Ａｃｍ）−Ｌｙｓ（ＣＩ−ｚ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　争
０Ｐａｃ　（４，７４ｇ）をＴＦＡ（５０ｍｌ）及びア
ニソール（５ｍｌ）と０℃で３０分、室温で２０分夫々
処理した。この混合物を濃縮した後、残留物をジオキサ
ン（１０ｍｌ）に溶解し、更に１．７５Ｎ塩化水素のジ
オキサン（３ｍｌ）溶液を加えた。得られた混合物を再
び濃縮し残留物をエーテルで処理すると固形物が得られ
た。これをＤＭＦ（３０＋ａｌ）に溶解し、更にトリエ
チルアミン（３０＋＋１）を加えた。

（２）別途製造したＢｏｃ　＊　Ｇｌｙ−Ｐｒｏ　＊　
ＮＨＮＨ２（１，８９ｇ）をＤ　Ｍ　Ｆ　（３０ｍｌ）
に溶解し、２．７５Ｎ塩化水素のジオキサン（４，２！
３ｍ１）溶液を水浴冷却下に滴下した。次に第３級ブチ
ル亜硝酸（８０８ｍｇ）を加え、同温度で１５分間攪拌
した後、トリエチルアミン（１，１９ｇ）を加えて反応
液を中和し、（１）で得た溶液を加えた。更にトリエチ
ルアミン（２９１ｍｇ）を加え、水浴冷却下に攪拌しな
がら３．５時間後に更にトリエチルアミン（２４Ｏｎ＋
ｇ）を追加した。この間（４時間）に反応液の温度を徐
々に室温まで上昇、させた。この溶液を濃縮し酢酸エチ
ルと水の混液中に注いだ。水層を再び酢酸エチルで抽出
し、有機層を合して、塩酸、水及び塩化ナトリウム飽和
水溶液の順序で洗浄した後硫酸マグネシウムで乾燥し、
濃縮した。残留物（５，４２ｇ）をシクロヘキサンと酢
酸エチルの混液（１：８）で再結晶すると　、Ｂｏｃ　
拳　Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｌｙｓ（ＣＩ
−ｚ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−０Ｐａｃ　（４，５５ｇ
）が得られた。

ｍｐ　１１５　〜　ｌ１８℃ ［α］Ｄ＝−３５，８°（Ｃ＝０．８０５、ＤＭＦ中）
元素分析：Ｃ５、Ｈ６６Ｎ７０．３ＳＣ１計算値　Ｃ：
５８．２０　Ｈ：８．３２　Ｎ：９．３１　Ｓ：３．０
５実験値　Ｃ：５８．３７　Ｈ：６゜４８　Ｎ：９．１
２　Ｓ：３．２５実施例１−１６ Ｄ　Ｍ　Ｆ　（５０ｍｌ）と酢酸（５０ｍｌ）の混液に
、実施例１−１５で得られたＢｏｃ　＊　Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｌｙｓ（Ｃ：Ｉ−ｚ）−Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ）　−０Ｐａｃ（４，７ｇ）を溶解し、これを
氷冷しながら亜鉛末（７，１ｇ）を加え、室温で１時間
攪拌した。反応液を濾過して濾液を濃縮し、残留物をｎ
−へキサンで洗浄した後、水を加え、更に塩酸を加えて
ｐＨ２とした後酢酸エチルで抽出した。抽出液を水及び
塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾
燥した後、再び濃縮した。残留物をエーテルで処理する
と、Ｂｏａ　＊Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｌ
ｙｓ（ＣＩ−ｚ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　Φ０Ｈ（３，８
４ｇ）が得られた。水晶は実施例１−２０の原料物質と
した。

Ｎｐ　８６〜８３℃ ［α］Ｄ＝−４２，２８”　（Ｃ＝１、メタノール中）
元素分析：Ｃ４３Ｈ６ｏＮ７０．２ＳＣ１計算値　Ｃ：
５５．２７　Ｈ：（３，４７Ｎ：１０．４８　Ｓ：３．
４３Ｃ１：３．？９ 実験値　Ｃ：５３．６９　Ｈ：Ｅｉ、３５　Ｎ：１０．
１９　Ｓ：３．５３Ｃ１：３．７９ 実施例１−１７ Ｂｏａ　ＩＩＴｈｒ（Ｂｚｌ）　・０９ｕ（５，３ｇ）
　とｐＴｓＯＨｅ　Ｈ＋＋１１ｅ　ｌｌ０Ｂｚｌ（５，
０ｇ）を塩化メチレン（３０＋ａｌ）に溶解し、水浴中
で冷却しながらトリエチルアミン（１，８１ｍ１）を加
えた。更に４時間後及び５．５時間後に再びトリエチル
アミンを０．５４＋＊ｌ及び０．３８ｍ１添加した。反
応混合物を冷凍庫中で３日間放置した後、濃縮した。残
留物を酢酸エチルに溶解し、水、希塩酸、水及び塩化ナ
トリウム飽和水溶液の順序で洗浄し、硫酸マグネシウム
で乾燥した。

溶媒を留去した後、石油エーテルで結晶化すると、Ｂｏ
ａ　ｅ↑ｈｒ（Ｂｚｌ）−１１ｅ　・ＯＢｚ＋　（５，
９５ｇ）が得られた。

ｍｐ　４９〜５３．５℃ ［α］Ｄ＝　＋　９．３８°（Ｃ−１、クロロホルム中
）元素分析：０２９Ｈ４ＯＮ２０Ｇ 計１嘔【イα’ｉ　Ｃ：８７．９５　Ｈニア、８８　Ｎ
：５．４θ実験値　Ｃ：Ｈ３７，４２Ｈニア、８１　Ｎ
：５．４１］実施例１−１８ 実施例１−１７で得られたＢｏｃ　＊　Ｔｈｒ（Ｂｚｌ
）−１１ｅ−０Ｂｚｌ（５，５ｇ）をＴ　Ｆ　Ａ　（３
０ｍｌ）及びアニソール（５１）と共に０℃で２５分間
処理した。この混合物を濃縮してジオキサン（５１）に
溶解した。

この溶液に２．７５Ｎ塩化水素のジオキサン（５ｍｌ）
溶液を加え、濃縮した。残留物をｎ−へキサンで数回洗
浄し、その都度ｎ−へキサンは傾斜法で除去した。沈澱
物を塩化メチレン（５０ｉ１）に溶解し、Ｂｏｃ中Ｃｙ
ｓ（Ａｃｍ）　ｅ　０３ｕ（４，１８ｇ）とトリエチル
アミン（１，Ｅ１７ｍｌ）を水浴冷却下に加えた。室温
に戻して２８時間攪拌した後、３−　（Ｎ、Ｎ−ジメチ
ルアミノ）プロピルアミン（０，１８ｍ１）を加え、濃
縮した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、希塩酸
、水及び塩化ナトリウム飽和水溶液の順序で洗浄した後
、硫酸マグネシウムで乾燥し、更に濃縮した。残留物に
エーテルとジイソプロピルエーテルの混合物を加えて結
晶化させると、Ｂｏｃ　・Ｇｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ（
Ｂｚｌ）−１１ｓ　−０Ｂｚｌ　（４，７０ｇ）が得ら
れた。

ｍｐ　８２〜６４．５℃ ［α］、＝　＋　２４．４８°（Ｃ＝０．５３７、クロ
ロホルム中） 元素分析：Ｃ３，Ｈ５ｏＮ４０８Ｓ 計算値　Ｃ：８１．２０　Ｈ：？、３４　Ｎ：８．１８
　Ｓ：４．８？実験値　Ｃ：６０．４８　Ｈ：８．９９
　Ｎ：８．１０　Ｓ：４．？５５実施１−１９ 実施例１−１８で得られたＢｏｃ　＊　Ｃｙｓ（Ａｃｍ
）−Ｔｈｒ（Ｈｚりｉｌｅ　・０Ｂｚｌ（４，Ｏｇ）を
実施例１−１８の前段と同様にしてＴＦＡで処理し、更
にジオキサンに溶解させたＨＣＩで処理すると、）１Ｇ
１　・Ｈ・Ｇｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−１１
ｅ　＊　０Ｂｚｌ（３，８ｇ）が得られた。

実施例１−２０ 実施例１−１６−ｔ’得られたＢｏｃ　ｅ　Ｇｌｙ−Ｐ
ｒｏ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｌｙｓ（ＣＩ−ｚ）−Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ）　・０Ｈ（３，５ｇ）、実施例１−１９で得
られたＨＣＩ　＊　Ｈｅ　Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ（
Ｂｚｌ）−１１ｅ　争０Ｂｚｌ　（２，１２ｇ）及びｌ
−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０，５１ｇ）をＤ　
Ｍ　Ｆ　（５０ｍｌ）に加えてなる溶液に、ＷＳＣＤ　
（０，５８ｇ）を−３０℃で滴下した。３０分間で反応
温度な０℃にまで上昇させ、同温度のままでさらに３時
間攪拌した後、室温で一夜放置した。

反応混合物に酢酸エチル（１５０＋ｏｌ）と水（３００
ｍｌ）を加えて有機層と水層に分離した。水層を再び酢
酸エチルで抽出し、有機層を合した後、２％塩酸、２％
炭酸水素ナトリウム水溶液及び水の順序で洗浄し、濃縮
した。残留物をシリカゲル（４０ｇ）のカラムに展開し
、クロロホルムとメタノールの混合液（９８：２）で溶
出すると、Ｂｏｃ　＊　Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（Ａｃ
ｍ）−Ｌｙｓ（Ｃ：ｌ−ｚ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｃｙ
ｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−１１ｅ　１１０Ｂｚ
ｌ　（２，８７ｇ）が得られた。

ｍｐ　１８３〜１８８℃ ［α］　＝−１８，５８”（Ｃ＝１、ＤＭＦ中）元素分
析”　７８　ＨｌｏｏＮＩＩ　０１７　ｓ２Ｃ１計算値
　Ｃ：５８．３３　Ｈ：ｆｌ、７０　Ｎ：１０．２５　
Ｓ：４．２７実験値　Ｃ：５？、８７　Ｈ：８．５５　
Ｎ：１０．１１　Ｓ：４．４５実施例１−２１ 実施例１−２０で得られたＢｏｃ　−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−
Ｃｙ　ｓ　（Ａｃ＋ｍ）−Ｌｙｓ（Ｃ１ｚ）−Ｔｈ　ｒ
　（Ｂｚ　ｌ　）−Ｃｙｓ　（Ａｃｍ）　−Ｔｈ　ｒ　
（Ｂｚ　ｌ　）−Ｉｌｅ　ｅＯＢｚｌ（２，５ｇ）をＴ
　Ｆ　Ａ　（２５ｍｌ）及びアニソール（２，５ｍ１）
と共に室温で２０分間処理した。ＴＦＡを除去した後、
残留物を２．７５Ｎ塩化水素のジオキサン（２ｍｌ）溶
液に溶解し、ジオキサン（２０ｍｌ）を加えて希釈した
。ジオキサンを留去した後、残留物にエーテルを加えて
結晶化させると、ＨＣＩ　・Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（
Ａｃｍ）−Ｌｙｓ（ＣＩ−ｚ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｃ
：ｙｓ（八ｃｍ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−１１ｅ　・０Ｂ
ｚｌ　（２，３４ｇ）が得られた。

ｍｐ　１７８〜１８０℃　（分解） ［α：＋Ｄ　＝−２０，５’　（Ｃ＝１、ＤＭＦ中）薄
層クロマトグラフィ（シリカゲル：メルク社製） ＲｆＩ＝０．２３　（ｎ−ブタノール：酢酸：水：＝４
＝ｌ：５） 実施例１−２２ 実施例１−１６で得られたＢｏｃ　＠Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−
Ｇｌｙ−Ｔｈ　ｒ　（Ｂｚ　Ｉ　）−５ｅｔ（Ｂｚｌ）
−Ｔｈ　ｒ（Ｂｚｌ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｓｅｔ　（
Ｂｚ　］）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　・ＯＨ（０，４０ｇ）
と実施例１−２１で得られたＨＣＩ　ｅ　Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ｃｙｓ（Ａｃ＋＋＋）−Ｌｙｓ（ｆｌ；ｌｚ）−Ｔ
ｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）
−ＩＩｅ参〇Ｂｚｌ　（０，３’５ｇ）をＨＯＢ　Ｔ　
（３５，９ｇ）と共にＤＭＦ（７ｍｌ）に加え、０°Ｃ
に冷却した後、Ｗ　Ｓ　ＣＤ　（４１，２ｍｇ）を加え
た。同温度で１５時間攪拌した後、エーテル（８０＋ｏ
ｌ）で希釈した。析出した結晶状固形物を濾取し、水（
ｆｏｗり　、　５０％インプロパツールの水（１０ｍｌ
）溶液で順次洗浄すると、Ｂｏｃ　ｅ　Ｌｅｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｙ−Ｔｈ　ｒ　（Ｂｚ　１）−５ｅ　ｔ（Ｂｚ　
１）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−９ｅ　ｔ
　（Ｂｚ　Ｉ）−Ｔｈ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ　）−Ｇ　ｌｙ
−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｌｙｓ（Ｃ１ｚ）−Ｔｈ
ｒ　（Ｂｚ　Ｉ　）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ（Ｂｚ
ｌ）−１１ｅＯＢｚｌ　（０，８２ｇ）が得られた。

ｍｐ　２０？〜２１０℃　（分解） ［α］Ｄ　＝−９，３＠　（ｃ＝ｉ、ＤＭＦ中）薄層ク
ロマトグラフィ（シリカゲル：メルク社製） Ｒｆ＝０．４８　（クロロホルム：メタノール＝１０＝
１） 実施例１−２３ 実施例１−２２で得られたＢｏｃ　ａ　Ｌｅｕ−Ｐｒｏ
−Ｇｌｙ−Ｔｈ　ｒ（Ｂｚ　１）−８ｅｔ（Ｂｚ　１）
−Ｔｈ　ｒ（Ｂｚ　１）−Ｔｈｒ（Ｂｚ　１）−９ｅｔ
　（Ｂｚ　１）−Ｔｈ　ｒ　（Ｂｚ　Ｉ　）−Ｇ　Ｉ　
ｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ（Ａｃ＋ｗ）−Ｌｙｓ　（ｆｌｌ：
　ｌｚ）　−Ｔｈ　ｒ　（Ｂｚ　ｌ　）−Ｃｙｓ（Ａｃ
ｍ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−１１ｅ１１０Ｂｚｌ　（０，
５９ｇ）を弗化水素酸（６ｍｌ）とアニソール（０，８
ｍ１）と共に水浴中で１時間処理した。弗化水素酸を除
去した後、残留物を水（２０！ＩＩ）で抽出した。抽出
液をエーテル（２０ｍｌ）で洗浄した後、ダウエックス
Ｉ　Ｘ　２　（２，８Ｘ２１ｃＩ＋＋）のカラムを水（
１５０＋ａｌ）で溶出し、ニンヒドリン陽性分画（１５
０ｍｌ）を合わせ、約３０ｍ　ｌまで濃縮した。これを
凍結乾燥すると３．６ｇの粗製粉末が得られ、ＣＭ　−
５２（２，８Ｘ　４５ｃｍ）のカラムに通し、０．０５
Ｍピリジン−酢酸緩衝液（ｐＨ４，８）と０．２Ｍピリ
ジン−酢酸緩衝液（ｐＨ４，８）の各４００１から調製
された直線濃度勾配で展開した後、ＴＮＢＳ法により４
２０　ｎｍの波長で各分画（８＋ａｌ）の分解を行なっ
た。主ピーク分画（チューブＮｏ、３３−４５）を合し
、濃縮して凍結乾燥すると０．３０ｇの粉末が得られた
。この粉末をセファデックスＧ　−１５（３，ＩＸＥｉ
２ｃ＋ｍ）のカラムに通し、０．１％酢酸で展開した。

溶出液を２３０　ｎｒｔｒのＵＶ吸収で分析し、主ピー
ク分画を集め、再び濃縮後凍結乾燥すると、０．２８ｇ
の粉末が得られた。最後にこの粉末をセファデックスＧ
　−２５［３，Ｉ　Ｘ８２ｃ＋＋＋、溶媒：ｎ−ブタノ
ール−酢酸−水（４＋１：５、容量比）の分配クロマト
グラフィに展開して精製した。溶出液はＴＮＢＳ法に従
い各分画を分析し主ピーク分画（チューブＮｏ、１０９
〜１３３）を合し濃縮後凍結乾燥すると、Ｈ−Ｌｅｕ−
Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｓ
ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ　（Ａｃｍ
）　−Ｌｙｓ−Ｔｈ　ｒ−Ｃｙｓ　（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ
−Ｉ　ｌ　ｅ　−０Ｈ（０，１８ｇ）が得られた。

［α］Ｄ＝−８２．７°　（ｃ＝ｉ、水中）薄層クロマ
トグラフィ（シリカゲル：メルク社製） Ｒｆ’＝０．３１　（ｎ−ブタノール：酢酸：水：ピリ
ジン＝３：ｌ：２：１） 高速液体クロマトグラフィ 保持時間＝４．４分 カラム：ヌクレオジル１０　Ｃ（４Ｘ２５０ｍｍ）溶出
液：０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ４，５）ニアセトニトリ
ル（８２：１８） 流　速：　１．Ｏｍｌ／分 検　出：　ＵＶ２１Ｏｎ＋１１ 酸による加水分解のアミノ酸分析 Ｌｅｕ：１．００　Ｐｒｏ：２．５３（２）Ｇｌｙ：２
．１５（２）　Ｌｙｓ：１．００Ｓｅｒ：２．５＆（２
）　Ｔｈｒ：５．８？（６１）１１ｅ：０．９９ 実施例２ Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニール−〇−ベンジルセリン樹
脂［４ｇ、セリン含有量０．５４５ｍモル／ｇ、スチレ
ン−１％ジビニルベンゼン共重合体］を出発原料とし、
後述の実施例５−１に準じてＰｈｅ　、Ａｒｇ　、Ｖａ
ｌ　、Ｓｅｒ、Ａ　ｌａ　、Ｇｌｙ　、Ｇ　ｌｕ、Ｔｒ
ｐ、Ｌｅｕ　、Ｐｈｅ　、Ａ　ｒｇ　。

Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、Ｔｒｐの順に固相合成反応を
行なった。尚各ステップとも溶媒はθｏ１ずつ使用した
。

第８番目のアミノ酸（第１回目のＴｒｐ残基）を反応さ
せた後、工程２において塩化メチレンに５０％ＴＦＡを
加えた溶液に５％のエタンジチオールを加え、Ｂｏｃ基
の脱離反応を行った。最終的にＢｏｃ−Ｔｒ　ｐ−Ａ　
ｌ　ａ−Ｐｈｅ−Ａ　１ａ−Ａ　ｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ
−Ｔ　ｒｐ−Ｇｌ　ｕ−Ｇ　ｌ　ｙ　−Ａ　ｌａ　−脂
７．３５ｇが得られた。

その一部（０，７０ｇ）を、アニソール（１ｍｌ）及び
エタンジチオール（０，５＋ａｌ）の存在下、弗化水素
（１０ｍｌ）により、０℃×１時間処理した。弗化水素
を留去した後、残渣をエーテル（１０ｍｌ　Ｘ２）で洗
浄し、Ｔ　Ｆ　Ａ　（２０ｍｌ）で抽出した。抽出液を
留去し水酸化カリウムペレット上で５時間減圧乾燥した
後、エーテルで処理して粉末化すると、樹脂部分及び保
護基の脱離した粗製品（４２０ｍｇ）が得られた。

この粗製品（２１０＋ｍｇ）をＬＨ−２０のカラムクロ
マトグラフ（３Ｘ　８２ｃｍ）に展開し、５０％酢酸で
溶出した。溶出の各分画（７ｇ）を２８０　ｎｍの吸光
度測定にかけ、主ピーク分画（チューブＮｏ、２０〜３
０）を集めた。これを３０１まで濃縮した後凍結乾燥す
ると、粉末１２０　ｍｇが得られた。この粉末を、ｎ−
ブタノール／酢酸／水（容量比２：１：１０）の溶媒系
を用いるＬＨ−２０の逆相分画クロマトグラフに展開し
た。尚カラム（３，２Ｘ８Ｂｃｍ）には前述のＬＨ−２
０を予め上記溶媒系の上層で膨潤させて充填し、下層（
５１）と５０％酢酸（３１）の混合物に試料（８２ｍｇ
）を溶解してからカラムに加えた。カラムの展開は上記
溶媒系の下層を用いて行なった。溶出液は、エタノール
（１ｍｌ）を加えて平衡化した各分画毎に２８０　ｎｍ
の紫外線吸光度で検査し、主ピーク分画（チューブＮｏ
、２４〜３４）を合した後、減圧濃縮した。残渣な５０
％酢酸（２０＋ａｌ）に溶解し、凍結乾燥すると、Ｈ−
Ｔｒｐ−Ａ　１ａ−Ｐｈｅ−Ａ　Ｉａ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ
−Ｌｅｕ−Ｔ　ｒｐ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｙ−Ａ　１ａ−
Ｓｅｒ−Ｖａ　Ｉ　−Ａ　ｒｇ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−ＯＨ
ｃ７）粉末（３５ｍｇ）が得られた。

薄層クロマトグラフィ　（シリカゲル：メルク社製） Ｒｆ＝Ｏ，Ｅ１８　（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：
１：５）ニンヒドリンテストで検出 ２％トリプタミン含有３Ｎメタンスルホン酸によるアミ
ノ酸分解物のアミノ酸分析 Ｇｌｕ：　１．０（１）　Ａｌａ：３．１８（３）Ｐｈ
ａ：３．２６（３）　Ａｒｇ：２．１９（２）Ｌｅｕ：
１．０２（１）　Ｇｌｙ：１．１８（１）Ｓｅｒ：１．
９１（２）　Ｖａｌ：１．１３（１）Ｔｒｐ：１．８３
（２） 高速クロマトグラフィ 保持時間：　１ｉ３．２分 カラム：ヌクレオジルＩ　ＯＣｌ８（４Ｘ２５０＋＋ｗ
）溶出液：０．ＩＭ・に２ＨＰＯ−Ｈ３ＰＯ４（ｐＨ４
，５）２０％アセトニトリルから８０％アセトニトリル
迄の傾斜濃度溶媒（３０ 分） 流　速＝１１７分 検　出：　Ｕ　Ｖ２１Ｏｒ＋＋ｗ　、　２８０　ｎｍ実
施例３ 実施例１−２３’ｌ？得られたＨ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｙ−Ｔｈｒ−８ｅ　ｒ−Ｔｈ　ｒ−Ｔｈｒ−５ｅ　ｒ
−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ　（Ａｃｍ）−Ｌｙ
ｓ−Ｔｈ　ｒ−Ｃｙｓ（ＡｃＩｌ）−Ｔｈｒ−１１ｅ−
０）！　（１００ｍｇ）の水（３０ｍｌ）溶液に酢酸第
２水銀（３４，９ｍｇ）を加え、更に酢酸を加えてｐＨ
４に調整した後、室温で１時間攪拌した。次いで５分間
にわたって硫化水素ガスを吹込み、析出沈鍛を濾去した
。濾液を水（２２ｈｌ）で希釈し、希アンモニア水でｐ
Ｈ８，０に調整した後−夜攪拌した。この溶液を減圧濃
縮し、濃縮液（５ｍｌ）をセフ７デツクスＧ　−２５（
３，２Ｘ　１１ｅｃｍ）のカラムに通し、０．１％酢酸
で展開した。２３Ｏｒ＋＋＋＋のＵＶ吸収で溶出液を分
析し、全分画を集め、濃縮後凍結乾燥すると次に示す分
子内シスチン型ペプチド（８５ｍｇ）が得られた。

［α］Ｄ＝−３８，９’　（Ｃ＝　１、水中）薄層クロ
マトグラフィ　（シリカゲル：メルク社製） Ｒｆ＝０．３２　（ｎ−ブタノール：酢酸：水：ピリジ
ン＝３：１：２：１） 高速液体クロマトグラフィ 保持時間：４．８分 カラム：ヌクレオジル１０　ＣＩＢ　（４Ｘ　２５０ｍ
ｍ＋）溶出液：　０．Ｉ　Ｍ　−Ｋ２ＨＰＯ４−Ｈ３Ｐ
０４緩衝液（ｐＨ４，５）：ＣＨ３ＣＮ　（８２：１８
）流　速：　１．Ｏｍ１７分 検　出：　ＵＶ２１０　ｎｍ 酩による加水分解物のアミノ酸分析 Ｌｅｕ：１．００　Ｐｒｏ：２．０７（２）Ｇｌｙ：２
．００（２）　Ｌｙｓ：１．０１（１）１１ｅ：　１．
０２（１） Ｔｈｒ　＋　Ｓｅｒ：８．０５（８） （Ｃｙｓ）　２　：０．８１（１） 実施例４ 実施例１−２３で得られたＨ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ
−Ｔｈｒ−９ａ　ｒ−Ｔｈ　ｒ−Ｔｈ　ｒ−３ｅ　ｒ−
Ｔｈｒ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｐ　ｒｏ−Ｃｙｓ　（Ａｃｍ）−
Ｌｙｓ−Ｔｈ　ｒ−Ｃ：ｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ−１１
ｅ−ＯＨ（２０ｈｇ）を水（２１）に溶解し、酢ｆ！＃
第２水銀（７６，５＋ｗｇ）を加えた後、更に酢酸を加
えて、ｐＨ２とした。室温で１時間攪拌した後、硫化水
素を５分間吹込んだ。次に窒素を１゜分間吹込んで過剰
の硫化水素を除いた。析出した硫化水銀を濾去し濾液に
５％アンモニア水を加えてｐＨ８〜９とした後、室温で
一夜攪拌した。減圧濃縮し残留物を少量の０．１％酢酸
に溶解し、セファデックスＧ−２５のカラム（３，２Ｘ
　８０ｃｍ）に伺した後０．１％酢酸で溶出した。３０
０　ｍｌから４００　ｍｌまでの溶出画分を集めて凍結
乾燥した。得られた粉末（１００ｍｇ）をセファデック
スＧ−２５のカラム（３，２Ｘ　８５ｃｍ）でｎ−ブタ
ノール：ピリジン＝１％１１Ｆ（５：３：１）系の分配
クロマトグラフィに付した。　１．１８ｉから１．４５
ＪＪまでの溶出画分を集めて減圧濃縮した。残留物を少
量の水に溶かしてセファデックスＧ−２５のカラム（３
，２Ｘ　８５ｃｍ）にイヰし、０．１％酢酸で溶出した
。２９０　ｍｌ力ら３２０　ｍｌまでの溶出画分を集め
て凍結乾燥し、次に示す分子間シスチン型ペプチドの混
合物（３０，０ｍｇ）が得られた。

薄層クロマトグラフィ　（シリカゲル：メルク社製） Ｒｆ＝０．２４　（ｎ−ブタノール：酢酸：水：ビリジ
ン＝３：１：２：１） 高速液体クロマトグラフィ 保持時間：５．０分、７．３分 カラム：ヌクレオジルｌ　ＯＣ１８Ｃ１３（４Ｘ２５０
溶出液：０．１ＭｌｌＫ２ＨＰＯ４−Ｈ３Ｐ０４緩衝液
（ｐＨ２，５）ニアセトニトリル（８：　２）流　速：
　１．Ｏｍ１７分 検　出：　ＵＶ２１０　ｎｍ 実施例５−１ Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−５−アセトアミドメチル
システィン樹脂［４，０ｇ、システィン含有ｉ０．４８
ｍモル／ｇ、スチレン−１％ジビニルベンゼン共重合体
］を出発原料とし、下記表に示す固相合成法のスケジュ
ールに従ってペプチド結合形成反応を行なった。反応に
供したアミノ酸の反応順序はＳｅｔ　、Ｔｈｒ　、Ｐｒ
ｏ　、Ｓｅｒ　、Ｈｉｓ　、Ａｓｎ　、Ｓｅｒ　、Ｔｈ
ｒ　、Ｐｒｏ　。

Ｓｅ　ｒ　、Ｇｌｎ　、Ｓｅｒ　、Ａｓｎ、Ｇｌｎ　、
Ｇｌｙ　、Ｐｒｏ、Ｃｙｓ　、Ｔｈｒ　、Ｐｒｏ　、Ａ
　ｌａであり、表のスケジュールを２０サイクルくり返
すことにより２１個のアミノ酸残基を有するペプチドを
合成した。なおこれらのアミノ酸のα−アミ７基はｔ−
ブトキシカルボニル基で、その他の側鎖官能基について
は、Ｓｅｔ、Ｔｈｒはベンジル基で、Ｈｉｓはｐ−）ル
エンスホニル基で、Ｃｙｓはアセトアミドメチル基でそ
れぞれ保護しておいた。

即ち表の第１〜１１工程に示す手順に従って出発原料（
又は出発原料のＮ−末端アミン基にアミノ酸をカップル
させることによってペプチド鎖を延長させていって得ら
れる中間物質）に、同表の溶媒及び試薬を順次作用させ
ることによってペプチド鎖を延長していった。尚同表の
内筒８工程に当るカップリング反応は一般的には塩化メ
チレン溶液中で行なったが、Ｓ−アセトアミドメチル基
で保護されたＮ−ｔ−ブトキシカルボニルＣｙｓを反応
させるときだけは、塩化メチレンとジメチルホルムアミ
ドの（ａ：Ｘ）混合液を用いた。またＡｓｎやＧｉｎを
カップリング反応させるに当っては、それぞれのＮ−ｔ
−ブトキシカルボニル保護アミノ酸をＮ−ヒドロキシベ
ンゾトリアゾールのジメチルホルムアミド−塩化メチレ
ン（１７１）混合液に加えて、活性化した上で第８工程
に使用した。又第７番目（Ｓｅｒ）を第８番目（Ｔｈｒ
）。

第１５番目（Ｇｌｙ）の各カップリング反応については
、ジクロロメタンとジメチルホルムアミドの混液（Ｘ＋
１）を用い、特に第８番目（Ｔｈｒ）及び第１５番目（
Ｇｌｙ）のカップリング反応においては、Ｎ−ヒドロキ
シベンゾトリアゾールを添加した。

各カップリング反応が完遂されたか否かの検査は、カイ
ザーのニンヒドリンテストによシ、プロリンについては
イサチンテストによった。そしてカップリングが不十分
であると分かったとき（実験では第１６番目のＰｒｏと
第１８番目のＴｈｒのカップリング反応）は、表におけ
る第８〜１１工程を繰シ返した。このとき２度目のカッ
プリング反応は、塩化メチレン−ジメチルホルムアミド
混液（３＋１）にＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾールを
加えたものを当量添加して反応を行なった。

一番最後のＡｌａをカップリングし終えた段階で、得ら
た樹脂状物をメタノールで洗浄し減圧下に乾燥を行なっ
たところ、次式で示されるペプチド樹脂（ｓ、４ｇｇ）
を得ることができた。

Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｃｙｓ（
Ａｃｍ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（
Ｂｚｌ）−Ｇｉｎ−５ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ　）−８ｅｒ（Ｂｚｌ　）−Ａｓｎ−Ｈ３５（
Ｔｏｓ）−８ｅｒ（Ｂｚｌ）実施例５−２ 実施例５−１で得たペプチド樹脂（４，２０ｇ）をアニ
ソール（５Ｔｎｌ）の存在下液体弗化水素（５０ＴＲ１
）中、０℃で１時間攪拌処理した。次に弗化水素を留去
し、残留物に水（１’ＯＯｍＡ’）及びエーテル（５０
ｄ）を加えた。樹脂状物を炉去した後水層を分離し、こ
れをダウエックス１×２（アセテート型＋３ＱＱ＋ｒｔ
ｌ）のカラムに展開し、水で溶出した。ニンヒドリンテ
スト陽性分画を集めて凍結乾燥すると、粗製のＨ−Ａｌ
ａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｐｒｏ−Ｇｌ
ｙ−Ｇ、Ｉｎ−ＡｓｎＩｎ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｇｌｎ−
８ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−５ｅｒ−Ａｓｎ（（ｉｓ−３
ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−８ｅｒ−Ｃｙｓ（Ａ　（１，１
ｇｇ）が得られた。この粗製品を、０．０１Ｍピリジン
−酢酸緩衝液（ｐＨ５，４）で平衡化したカルボキシメ
チルセルロースの、！’７／Ｆム（３，２ｘ６０ｃｍ）
に付し、０．０１Ｍピリジン−酢酸緩衝液と０．１Ｍピ
リジン−酢酸緩衝液の各１．２１から調製された直線濃
度勾配で溶出した。１０ｇずつの両分を、トリニドはベ
ンゼンスルホン酸法（波長４２０ｎｍ）で検査していき
、主画分とし階１７２〜１８５を集めて凍結乾燥すると
、若干精製されたペプチド（３４９■）が得られた。水
晶を分取用μｍボンダバックＣＩ８カラム（商標ウォー
ターズ社製）を用いた高速液体り四マトグ２フイに通し
、流速３．　ＯＴＩＬ６／分で０．１チＴＦＡ−アセト
ニトリル（８５：１５）を溶離液として精製した。精製
は６０ｆｎｇの試料を２０■ずつ３回に分け、主画分を
集めて濃縮した。残留物を０．１　Ｍの酢酸７ンモニウ
ム溶液に溶解し、セファデックスＧ−１５（２，３Ｘ４
９Ｃｍ）のカラムに通した後、０．１チ酢酸で溶出した
。３ｇずつの画分をとシ、分画ＮＣＬ１５〜２０を集め
て凍結乾燥すると精製された前述のペプチド（５５■）
が得られた。

６Ｎ塩酸による加水分解物のアミノ酸分析Ａｌａ　＋　
１．００　Ｐｒｏ　７０．８８Ｘ４Ｔｈｒ　ｓ　Ｏ，７
９Ｘ３　Ｇｌｙ　ｓ　１．０４Ｇｉｎ　：　１．１８Ｘ
２　Ａｓｐ　＋　１．０２Ｘ２Ｓｅｒ　：　０．８１Ｘ
５　Ｈｌｓ　ｓ　１．１８酵素分解物のアミノ酸分析 分析条件！　ｐＨ７の０１１Ｍ燐酸緩衝液（４００μ）
に基質（２，２５■）を溶解し プロリン特異性エンドペプチダー ゼ（酵素番号３．４．２１．２６　： １ｍｇ／ｍ！溶液を２０μｌ）で３７°Ｃの下２時間処
理した。ｐＨ８の０．１ Ｍ燐酸緩衝液（６００μｌ）を追加 し、更にアミノベププチダーゼＭ（ ２単位）を加え３７℃で２０．５時 間インキュベートした。

Ａ１ａ＋　１．００　Ｐｒｏ：　０．９４Ｘ４Ｔｈｒ＋
Ｇｌｎ：　４．０５　Ｃｙｓ（Ａｃｍ）　＋　０．９６
ｘ２Ｇｌｙ　＋　０．９　９　Ｓｅｒ十Ａｓｎ　：　５
．７４尚Ｈｉｓはアンモニアピークが重なった為定量で
きなかった。

〔α〕Ｄニー１３２．７６°　（Ｃ＝０．２５水中）薄
層クロマトグラフィ（メルク社製セル四−ス）Ｒｆ＝０
．６５　（ｎ−ブタノール：酢酸；水：ビリジン＝２　
：　２　：　２　：　１　）ニンヒドリン及びパウリ試
薬で陽性 高速液体クロマトグラフィ 保持時間二４．２分 カラム：ヌクレオジルｌ０Ｃ１Ｂ　（４Ｘ２５０ｍｍ）
溶出液：　０．ＩＭ−Ｈ，ＰＯ４−に２ＨＰＯ，緩衝液
（ＰＨ４，８）　ニアセトニトリル（８８７１２）流速
：　ｘ、ｏｍｌ／分 検出’ＵＶ　２１０ｎｍ 実施例６−１ 実施例５−２で得られたＨ−Ａｌ　ａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ
−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｉｎ−Ａｓｎ
−５ｅｒ−Ｇｌｎ−８ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−３ｅｒ−
Ａｓｎ−Ｈｉｓ−８ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｃ
ｙｓ（Ａｃｍ）−０Ｈ（１４７ｆｎ９　）を水（１００
ＴＬｅ）に溶解し、酢酸水銀（４６ｒ＋ｖ）を加えた。

更に１％酢酸を加えてＰＨ４とし１．５時間攪拌した。

反応混合物中に硫化水素を１５分間吹込み、更に窒素ガ
スを１５分間吹込んで残留硫化水素を放散させた。

混合物をセルロースパッドで沖過した後、少量の水で洗
浄し、ろ液と洗浄液を合した（　１５２ｍ−ｇ）。

これに０．２８％アンモニア水を加えてｐＨ８とし、１
１６時間攪拌した後、濃縮した。残留物をセファデック
スＧ−７５のカラム（３，２Ｘ７１ＣＩＩ＋）に展開し
Ｏ１慢酢酸で溶出して６ｇずつの画分に分けた。主画分
（ｌｔｌｎ２７−３６）を集め凍結乾燥すると、 で示される分子内シスチン型ペプチドの粗製品（８８，
２■）が得られた。

実施例６−２ 実施例６−１で得た粗製ペプチド（８０〜）を分取用μ
ｍボンダパック０□８カラム（７，８Ｘ３００ｍｍ）（
商標、ウォーターズ社製）を用いた高速液体りｐマドグ
ラフィに付し、ｏ、ｔ％ＴＦＡ−アセトニトリル（８５
７１５）を溶出液として精製した。

精製は８０■の試料を２０ｍｆｌずつ４回に分けて行い
主画分を集めて濃縮した。残留物を０．１Ｍ炭酸水素ア
ンモニウム水溶液に溶融し、セファデックスＧ−１５の
カラム（ｚ、３ｘ４９ｃｍ）に溶解し、０．１％酢酸で
溶出した。そして各３ｇの画分を分取し、主画分（分画
陽１３〜２１）を集めて凍結乾燥すると、実施例５−１
で述べた構造の分子内シスチン型ペプチドを精製品とし
て得ることができた（４９．２■）。

６Ｎ塩酸による加水分解物のアミノ酸分析Ａｌａ　：　
１．００　Ｐｒｏ　：　０．８６Ｘ４Ｔｈｒ　：　０．
８７Ｘ３　Ｇｌｙ　：　１．０２Ｇｉｎ　：　１．０３
Ｘ２　Ａｓｐ　：　０．９８Ｘ２Ｓｅｒ　：　０．８Ｘ
５　Ｈｉｓ　：　１．１７Ｃ５ｒｓｔｉｎｅ：０．５１ 酵素分解物のアミノ酸分析 分解条件＋　ｐＨ８の０．１Ｍ燐酸緩衝液（５００ｄ）
に基質（１，６４ｆ＃）を溶解し 以後実施例４−２に記載した条件 （但ｔ、インキュベーションは２０ 時間）に従った。

Ａｈａ　＋　１．００　Ｐｒｏ　ｊ　０．８８Ｘ４Ｔｈ
ｒ−Ｉ−Ｇｌｎ：３．７７　Ｃｙｓｔｉｎｅ＋１．０１
Ｇｌ　ｙ　：　１，１８　Ｓｅｒ＋Ａｓｎ　：　４．９
５〔α）Ｄ＝−１３１，０４°（Ｃ＝０．５０　、　Ｈ
２Ｏ）薄層クロマトグラフィ（メルク社製セルロース）
Ｒｆ＝０．５６（ｎ−ブタノール：酢酸：水：ピリジン
＝２　：　２　：　２二１）ニンヒドリン及びパウリ試
薬で陽性 高速液体クロマトグラフィ 、　保持時間：６．１分 カジム：ヌクレオジル１０Ｃ１［１（４ｘ２５０ｍｍ）
溶出液；０．１％ＴＦＡ−アセトニトリル（８８：１２
） 流速：１．０ゴ／分 検出＋ＵＶ２１０ｎｍ 実施例７−１ Ｎ−ｔ−７’）キシカルボニル−〇−ベンジルセリン樹
脂（２，１５ｇ）［セリン含有量；　０．８２ｍモル／
ｇ、スチレンー１％ジビニルベンゼン共重合体］を出発
材料とし、実施例４−１の表に固相法合成法ノスケジュ
ールに゛従いペプチド結合形成反応に付した。但し第３
工程は氷冷した５チトリエチルアミ・ンと塩化メチレン
の混液によシ、１．５分間処理することによって行なっ
た。反応に供したアミノ酸の反応順序はＳｅｒ＋Ｐｒｏ
＋１１ｅ＋Ｐｒｏ＋１１ｅｙＣｙｓ＋Ｔｈｒ＋Ｃｙｓｓ
Ａｓｎ＋Ｇ１ｙｔＡｓｐｔＳｅｒ＊Ｐｒｏ＋Ｌｙｓ＋Ｔ
ｈｒｊＣｙｓｊＣｙｓであジ、表のスケジュールを１５
サイクルくり返すことによシ１６個のアミノ酸残基を有
するペプチドを合成した。なお、これらのアミノ酸のα
−アミン基はｔ−ブトキシカルボニル基で、その他の側
鎖官能基については、、　Ｓｅｔ＋Ｔｈｒはベンジル基
で、　Ｃｙｓはアセトアミドメチル基で、Ａｓｐはシク
ロヘキシルエステルで、Ｌｙｓハ２−クロロベンジルオ
キシカルボニル基でそれぞれ保護しておいた。

即ち表の第１〜１１工程に示す手順に従って出発原料（
又は出発原料のＮ−末端アミン基にアミノ酸をカップル
させることによってペプチド鎖を延長させていって得ら
れる中間物質）に、同表の溶媒及び試薬を順次作用させ
ることによってペプチド鎖を延長していった。尚同手順
のうち第８工程に当るカップリング反応は一般的には塩
化メチレン溶液中で行なったが、Ｓ−アセトアミドメチ
ル基で保護されたＣｙｓを反応させるときだけは、塩化
メチレンとジメチルホルムアミドの（２：Ｘ）混合液を
用いた。また、Ａｓｎのカップリング反応に当ってはＮ
−ｔ−ブトキシカルボニルアスパラギンをＮ−ヒドロキ
シベンゾトリアシー／ｌ／（１，１当量）とジシクロへ
キシルカルボジイミド（１当量）のジメチルホルムアミ
ド−塩化メチレン（１：　１）混合液に加え、０℃で１
０分間攪拌することによって活性化した上で第８工程に
使用した。第７番目以降のアミノ酸を導入する（　Ｃｙ
ｓを用いる第１番目の反応の終了後ンに当っては、表に
示した第２工程は、塩化メチレン−トリフルオロ酢酸混
合液中に５容量チのエタンジチオールを添加して行なっ
た。又更にＡｓｐをカップリング反応させた後第１２番
目以降のアミノ酸を導入するに当っては第６エ程の中和
は、トリエチルアミンの水冷溶液を用いて行ない、且つ
処理時間も１．５分に短縮した。

各カップリング反応を完遂させたか否かの検査は、カイ
ザーのニンヒドリンテストによった。そしてカップリン
グが不十分であることが検知されたときは、表における
第８，９ｔｌＯ，１１及び１の各工程を、この記載順に
従って繰シ返した。

実験では、Ｃｙｓ（第６番目）、Ｇ１ｎ＋Ａｓｐ、Ｓｅ
ｒのカップリング反応について夫々前述の繰シ返し処理
を行なった。一番最後のＴｈｒをカップリングし終えた
段階で、得られた樹脂状物をメタノールで洗浄し更に減
圧下に乾燥を行なったところ、次式で示されるベプチ、
ド樹脂（ｓ、７ｓｓｇ）を得ることができた。

Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（ＣＩ−ｚ’）−Ｐｒｏ−５ｅｔ（
Ｂｚ　１　）−Ａｓｐ（ＯＨｅｘ）−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−
Ｃｙｓ　（Ａｃｍ）−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　１　）−Ｃｙｓ
　（Ａｃｍ）−Ｉ　１ｅ−Ｐｒｏ−Ｉ　１ｅ−Ｐｒｏ−
８ｅｒ（Ｂｚｌ　）−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−樹脂実施Ｍ７
−２ 実施例７−１で得たペプチド樹脂（１，４５１Ｆ）をア
ニソール（２，０−）の存在下ぶつ化水素（２５ｍｇ）
中、−７〜−５℃で１時間攪拌した。その後同温度で２
時間、および室温で１時間要してぶつ化水素を減圧留去
した。残留物にＩＮ酢酸（６０ｍ）とエーテル（４０ｄ
りを加え、水冷下に１時間攪拌した＠樹脂状物を濾去し
てＩＮ酢酸で洗浄した。濾液、洗液を合し、エーテル層
を分離後水層をダウエックスＩＸ２　（酢酸型、１　ｓ
　ｏ−）のカラムに通し、凍結乾燥すると粗製のＨ−Ｃ
ｙｓ　（Ａｃｍ）−Ｃｙｓ（Ａａｍ）−Ｔｈｒ−Ｌｙ　
ｓ−Ｐ　ｒ　ｏ−８ｏｒ−Ａ　ｇｐ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ａ　
ｓ　ｎ−Ｃｙｓ　（Ａ　ａ　ｍ）−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ　（
Ａａｍ）−１１＠−Ｐ　ｒｏ−１１ｅ−Ｐ　ｒｏ−８ａ
　ｒ−Ｂｅ　ｒ−ＯＨ（６６７１９）が得られた。

この粗ｆＲ品（６６７１ｑ）をカルボキシメチルセルレ
ース〔ワット７２０Ｍ−５２，２，８Ｘ５６信、０．１
Ｍピリジン−酢酸緩衝液（ｐｕｓ、４）で平衝化したも
の〕のカラムに通し、０．１Ｍ〜０．４Ｍの間を直線勾
配的に濃度変換させた同一緩衝液（各１０００ｍ）で溶
出し・４１９−３０の画分を集めて凍結乾燥すると、１
１１１１ｉ品（４４８岬）が得られた。

薄層り冑マドグラアイ（メルク社製セル四−ス）ａｔ−
ｏ、ａｏ（ｎ−ブ＃　／−ル：酢酸：　水：　ヒリジン
−３：１：２：１）ニンヒドリンテストで検出 高速液体り四マドグラフィ 保持時間：５．２分 カラム：ヌクレオジＡ１５　Ｇ、、（４Ｘ１５０ｍ１１
）溶出液：　０．Ｉ　Ｍ　ＩＨ，ＰＯ，−ＨＫ！ＰＯ，
緩衝液（ＰＨ４，８）−アセトニトリル（８２：１８） 流速：０．７ｍ／分 検出：ＵＶ２１０ｎｍ 実施例７−３ 実施例７−２で得られたＨ−Ｃｙｓ（人ｏｍ）−Ｃｙｓ
　（Ａｏｍ）−Ｔｈｒ−Ｌ　ｙｓ−Ｐ　ｒｏ−８ｅ　ｒ
−Ａ　ｕｐ−Ｇ　１ｙ−Ａ　ａｎ−Ｃｙｓ　（Ａ　ｏｎ
）イｈｒ−Ｃｙｇ　（Ａｏ　ｍ）−１１ｅ−Ｐ　ｒｏ−
１１ｅ−Ｐｒ　ｏ−８ｏｒ−８＠ｒ−ＯＨ（２９，６ｑ
　）を水（２０，０ａｄ）に溶解し、酢酸第２水銀（１
９，７キ）−の水（２，０ｍ　）溶液を追加した後、０
．１４ｉｆｌ：酸で１−を加えてＰＨ４とした。室温で
２時間攪拌した後硫化水素を５分間吹込み、更に窒素ガ
スを５分ｌｉｔ！吹込んで残留硫化水素を放散した。反
応液をメンブレンフィルター（０，４５μｍ）で濾過し
、濾液と洗液を合わせた（ａＸ、Ｓ＊）。このうち０．
２０ｍをとり出し、０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ８，０）
　と５，５−ジチオビス（２−二トロ安息香酸）（エル
マン試薬）の０．０１Ｍ（ｐＨ７，０の０，１Ｍ燐酸緩
衝液）溶液２滴を加え、正確に５ｔｌｔとした。これを
１時間放置してから４１２ｎｍの吸光度を測定したとこ
ろ０．８９３であった。これは元の溶液中に、次式で示
すペプチドが１２．９４μモル（理論値の９２．４％存
在することを意味する。

Ｈ−Ｃ７５−Ｃｙ　ａ−Ｔｈｒ−Ｌ７８−Ｐ　ｒ　Ｏ−
３ｅ　ｒ−Ａ　ａ　ｐ−Ｇ　１ｙ−Ａｓ　ｍ−ＣＹ　５
−Ｔｈ　ｒ−Ｃｙｓ−ＩＩｓ−Ｐｒｏ−ＩＩｓ−Ｐｒｏ
−８ｉｒ−８ｓｒ−ＯＨ実施例８ 実施例７−２で得られたＨ　−Ｃｙｓ（Ａｏｍ）−Ｃｙ
ｓ（Ａａｍ）−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−８ｅ　ｒ−Ａ
ｓｐ−Ｇｌｙ−ＡＩＩ　ｎ−Ｃｙｓ　（Ａａｍ）−Ｔｈ
ｒ−Ｃｙｓ（−Ａｏｍ）−１ｉｅ−Ｐｒｏ−１ｉｅ−Ｐ
ｒｏ−８ｅｒ−８ｉｒ−ＯＨ（７，０１１９）を０．１
％酢酸（２ゴ）に溶解し、酢酸第２水銀（８，５Ｗ）の
０．１％酢酸（ｌ−）溶液に室温下加えた０同温度で３
時間攪拌した後、２−メルカプトエタノール（０，３８
ｍ）　を加え、室温で一夜放置した。翌日析出不溶物を
濾去し、濾液を七ファデックスＧ＝　１５　（２，Ｉ３
Ｘ　３５５１　）のカラムに付した後＼０．１％酢膳で
溶出した。３ｇずつの両分を得１分先々度計で各両分の
２８０ｎｍにおける吸光度を測定し、第１５〜１９画分
を集める。全体を希釈して２３ｍｇとし、このうち０．
４０ｄｔ−採ってエルマンの方法によりチオール基の定
量を行なったところ、理論値に対し６５．０％のチオー
ルを認めた。また高速液体クマ！トグラフイによると保
持時間２１分で、はぼ単一ピークのペプチドが認められ
た。水晶は実施例７−８で得られたペプチドと同一であ
った。尚使用カラムはヌクレオジルｓｃ、、（４Ｘ　２
５０ｍ１１）、溶出液はｏ、ｉ外トリフルオロ酢酸でア
セトニトリル直線濃度勾配は１〜５０％（３０分）、流
速は１．０ｍ／分、検出は２１０■で行なった。

前記の溶液に、１００倍に希釈した濃アンモニア水（３
，５ｍ　）を加えてｐＨ８とし、開栓下室温で２４時間
攪拌した後凍結乾燥すると１次式で示されるペプチドの
混合物（５，８りが得られた。

高速液体クロマトグラフィ 保持時間＝２０分 カヲム：ヌクレオジμｍ　０　Ｃｌ８（４Ｘ２５０鱈）
溶出液二〇、１％、トリフルオロ酢酸 アセ）−４！Ｊ／Ｌ’直線濃度勾配 Ｉ９ｂ→５０％（８０分間） 流速：１．０ゴ／ｍｉｎ 検出：ＵＶ２１０ｎｍ 出願人　財団法人　化学及血清療法研究所向　藤沢薬品
工業株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （但し上記各式において、Ｒ４は水素またはメルカプト
   保護基を意味する） から選ばれるペプチドまたは医薬として許容されるそれ
   らの塩。