JPS5982399A - 細胞毒性作用物質を結合させたステロイド化合物の誘導体類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）粒子は血漿コレステロ
ールの副側１における重要な因子であることが４ｏられ
ている。コレステロールは２つのタイプの液体：１）コ
レステロールのトリグリセリド、または２）コレステロ
ールの長鎖脂肪酸エステル、のいずれか一方として伝達
される。ＬＤＬ粒子は血液中に生じる、脂質に覆われた
小さな球体であり、通常疎水性の核としてコレステロー
ルエステルを含有している。ＬＤＬ粒子の表面はある種
のリン脂質、遊ｉ’ｊｌコレステロールおよびアポタン
パク質から構成され、これらａ、粒子を代謝部位へ直接
導く〔リポタンパク受容体による血漿コレステロールの
制御（Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆＰｌａｓｍａ　Ｃｈ
ｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｂｙ　ＬｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＲ
ｅｃｅｐｔｏｒｓ　）　、ブラウンら（Ｂｒｏｗｎ　ａ
ｔ　ａｌ、）、サイエンス誌（５ｃｉｅｎｃｅ　）　、
第２１２巻、第６２８頁、１．９８１年５月８日〕。

また、本発明以前に、ＬＤＬ粒子は内容物を除去するた
めに破壊でき、次にＬＤＬ粒子の核に異なる物質を入れ
て再構成できることが明らかにされている。この異なる
核物質による再構成は必ずしも安定なＬＤＬ粒子を与え
るとは限らないが、ある場合にはＬ　Ｄ　Ｌ粒子を与え
、その粒子は、き図した部位に到達する以前に核物質を
放出してしまう。理想的状態では、目的の物質を入れた
再構成ＬＤＬ粒子Ｑ、１標的細胞に達しエンドザイトー
シスにより細胞に取込壕れ、そこで標的細胞へ核物質を
放出する。これに関連して、ある種の癌細胞は正常体細
胞に比較してＬＤＬを異常に高く要求する。

本発明の目的のｊつは、癌細胞、特に骨髄性白血病を引
起こす細胞に対し細胞毒性物質として有効な新規な化合
物を提供することである。

他の目的はＬＤＬ粒子の核に容易に取込捷れ、標的細胞
内へ取込まれるまで安定である化合物を提供することで
ある。

更に他の目的はステロイド化合物と細胞毒性物質の非毒
性誘導体で、細胞内で容易に加水分解され、それにより
標的細胞内に致死量の細胞毒性物質を与える物質を提供
することである。これら及び他の目的は以下に詳糸１０
に述べる本出願人の発見により達成される。

本発明は細胞毒性物質のステロイド゛誘導体である化合
物に関するものであシ、該ステロイドは３位の水酸基が
不飽和長鎖（炭素数１２〜２０個）脂肪酸によジエステ
ル化され、１７位の側鎖がアミド態窒素を介してナイト
ロジエンマスタード化合物のような細胞毒性物質と結合
しているアルキルカルバモイル基から成っているアンド
ロステンを基本炭素骨格として有している。

特に、本発明は式： 〔式中、 Ｒ１は炭素数１．２−２０個の不飽和脂肪族カルボニル
°オキシ基であυ、 ｈは１゛−３の整数であり、 ＡＶｉａ　）　　Ｒ＜がＨ１１個アルキル、フェニルま
たはヘテロアリールである １１１ −Ｃ−Ｎ−０−Ｃ− ４ １ ｄ）　　−Ｃ−ＯＣ２Ｈ４− ＋＋ よシ選ばれた二価の結合部位を有する基であり、 Ｂは、アミン置換基を介して結合した細胞毒性物質から
誘導された基であシ、該゛細胞毒性物質はウラシルマス
タード、６−メルカプトプリン、チオグアニン、アドリ
アマイシン、プロカルバジン、マイトマイシンＣおよび
ビス−（２−クロロエチル）アミンから選ばれる〕のス
テロイドエステル類に関するものである。

また、更に詳細には本発明は、カルバメート結合を介し
て細胞毒性物質を結合した２−ペンチル基から成る、１
７位の側鎖を有する３−ヒドロキシ−５−アンドロステ
ンの３−オレイルエステル類を包含する。

カルバメート結合の窒素原子は本出願人の新規ステロイ
ド化合物類の細胞毒性物質成分の一部を形成することが
できる。例えば、本出願人の発明の好適な化合物は式： の２−（３β−オレオイルオキシ−アンドロスト−５−
エンイル）１７β−プロピルオキシカルボニルビス（２
−クロロエチル）アミンである。

本出願人の発明のこれら化合物は、公知の文献に明らか
にされている既知の方法を用いてＬＤＬ粒子の核に自然
に存在するコレステロールエステル類に代えてＬＤＬ粒
子に入れることができることがわかった；［低密度リポ
タンパク質の内因性コレステロールエステルの内因性コ
レステロールリノール酸塩による置換Ｊ　　（Ｒｅｐｌ
ａｃｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ＥｎｄｏｇｅｎｏｕｓＣｈｏｌ
ｅｓｔｅｒｙｌ　Ｅｓｔｅｒｓ　ｏｆ　Ｌｏｗ　Ｄｅｎ
ｓｉｔｙＬｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｔｔｈ　　Ｅｎｄ
ｏｇｅｎｏｕｓ　　ＣｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌＬｉｎｏｌ
ｅａｔｅ　）　、クリーガー、エムａ　（Ｋｒｉｅｇｅ
ｒ。

Ｍ。）、エム９ニス、ブラウン（Ｍ、Ｓ。

Ｂｒｏｗｎ　）　、ジエー・アール。ファウスト（Ｊ。

Ｒ，Ｆａｕｓｔ　）　、ジエー。エル。ゴールドスタイ
ン（Ｊ、　Ｌ、　Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ　）　（１９７８
年）；「生物学的活性リポタンパク質粒子の再構成」（
Ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　Ｂｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌｌｙＡｃｔｉｖｅ　Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ
　Ｐａｒｔｉｃｌｅ　）　、生物化学ジャーナル（Ｊ。

Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　）　、第２５３巻：第４０９
３−４１４１頁、クリーガー。

エム、　（Ｋｒｉｅｇｅｒ＋　Ｍ、　）　、エム。ジエ
ー、マクホール（Ｍ、　Ｊ、　ＭｃＰｈａｕｌ　）　、
ジエー、エル。

ゴールトスダイン（Ｊ、　ｌ、、　Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ
　）　、エム。ニス、ブラウン（Ｍ、　Ｓ＠　Ｂｒｏｗ
ｎ　）（１９７９年）；「低密度リポタンパク質の中性
脂質の不飽和長鎖脂肪酸エステルによる置換Ｊ　　（Ｒ
ｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｎｅｕｔｒａｌ　Ｌｉｐ
ｉｄｓ　ｏｆＬｏｗ　Ｄｅｎｓｉｔｙ　Ｌｉｐｏｐｒｏ
ｔｅｉｎ　Ｗｉｔｈ　Ｅｓｔｅｒｓ　ｏｆＬｏｎｇ　−
Ｃｈａｉｎ　Ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ　Ｆａｔｔｙ　Ａ
ｃ１ｄｓ　）、生物化学ジャーナル（、Ｊ、　Ｂｉｏｌ
、　Ｃｈｅｍ、　）、第２５４巻：第３８４５−３８５
３頁。

ＬＤＬ粒子に対し高い要求度を有する癌細胞に対し、本
出願人の新規化合物をＬＤＬ粒子に入れて送り込むこと
ができる再構成の方法は数工程を含む。まずＬ　Ｄ　Ｌ
溶液を無菌的条件下透析し不適当な低分子量の不純物を
除く。水で希釈したＬ　Ｄ　Ｌ物質はＬＤＬ粒子を開い
てその中に含捷れるコレステロールエステル類を除くた
めに凍結し凍結乾燥を施す。

得られた凍結乾燥物質はへブタンで抽出して大計のコレ
ステロールエステル類を除き、ＬＤＬ粒子の残った分を
残渣として残す。ヘプタンに溶解した適当量の本出願人
の化合物・項の１つをそのＬＤＬの残渣に加え混合物を
１０℃で約１時間保温する。混合物からヘプタンを除き
、残渣を緩衝液で希釈し４℃で数時間保温すると、本出
願人の化合物がＬＤＬ粒子の核内に取９込まれた再１イ
ク成Ｌ　Ｉ）　Ｌ粒子が製造される。この段階で再構成
ＬＤＬ粒子を水性緩衝溶液中で懸濁状態にし、遠心分離
によりＬ　Ｄ　Ｌ粒子を半固体状ペレットとして残して
分離し、上澄みの緩衝溶液をアスピレータ−により吸い
込んで除く。再構成ＬＤＬの半固１本状ペレットは、さ
らに経口投カに適した楽学的組成物に処方することンバ
できる。

本発明の化合物類は式： （式中、Ｒ，及びｎは上記の定義に従う）のステロイド
化合物とアミン基を含む細胞毒性作用物質との反応によ
り製造され、式：（式中、Ｒ１、ｎおよびＢは上記の定
義に従う）の化合物が製造される。

本出願人の発明の範囲内にある化合物類・Ｄ［ｆｌｌと
しては：細胞毒性化合物のアミノ基に結合しだ２−アル
キルオキシ力ルホニル置換基から成る１７位の側鎖を有
する３β−ヒドロキシ−５−アンドロステン化合物の３
β−オレオイル、３β−リノーレオイル、および３β−
リルノイルエステル類を含む。

本発明の特に好適な化合物類（は：２−（３β−オレオ
イルオキシ−アンドロスト−５−エン−１７β−イル）
プロピルオキシカフレボニルビス（２−クロロエチル）
アミン；４−（３β−オレオイルオキシ−アンドロスト
−５−エン−１７β−イル）ペンチルオキシカルボニル
　ヒス（２−クロロエチル）アミンである。

本発明の範囲内に含まれる他のｆヒ金物類はビス（２−
クロロエチル）アミン置換基を構造式： ％式％ ６−メルカプトプリンまたはチオグアニンから選ばれた
他の、■胞毒性物質に交換した上記ステロイドエステル
類の対応する誘導体類である。

本出願人の発明の化合物類は、ＬＤＬ粒子の核に入れら
れた場合生体内でまたは生体外で癌細胞の選択的致死に
有効であり、エンドサイト−シスによシ癌細胞に選択的
に吸収され、細胞内での加水分解により細胞毒性物質を
放出する。

本発明は急性骨髄性白血病を起こすようなある種の特異
的細胞の選択的致死に有効な新規の細胞毒性組成物を包
含する。これらの新規組成物は静脈投与用の薬学的組成
物及び式：（式中、ＲＩＸｎＸＡおよびＢは上記の式Ｉ
の定義に従う）のステロイドエステルの治療上有効な量
を含み、該ステロイドエステルは再構成ＬＤＬ粒子の核
に入れる。

さらに詳細には、本発明は、静脈投与のための薬学的賦
形剤、例えば滅菌蒸留水腫たは薬学的に許容される非毒
性滅菌水性緩両溶液、及び再構成Ｌ　Ｄ　Ｌ粒子の治療
上有効な量、例えば、式： 〔式中、Ｒ１はβ−リノーレオルオキシ基、β−オレオ
イルオキシ基、またはβ−リルノイルオキシ基を示す〕
を有するステロイドを活性核成分として約２０〜４０重
世襲、好ましくは３３重量％含む再構成ＬＤＬ粒子１日
１患者あたり０．１〜１．０ｇから成る１、急性骨髄性
白血病の治療に使用することを目的とする薬学的組成物
を包含する。

さらに詳細には、本発明は静脈投与のだめの薬学的賦形
剤及び３乃至６１ｎｇ／　ｋｇの４−（３β−オレオイ
ルオキシ−アンドロスト−５−エン−１７β−イル）ペ
ンチルオキシカルボニル　ビス（２−クロロエチル）ア
ミンを包含する薬学的組成物を含む。

実ノ血汐り１ 化合物１．３β−オキシ−２３，２４−ビスノルコレン
−５−酸、１７３ｒｎｑ　（０，５ミリモル）及び４−
ジメチルアミノピリジン、１２２　ｍｇ　（］ミリモル
）のピリジン溶液２ｍｌを塩化ベセオイル１５０■（０
，５ミリモル）で２５°ＣＣ２時間、さらにＺｏｏｏ（
、で１５分処理する。溶媒を減圧留去する。残渣をｃ攬
３に溶解し、水性Ｈ３ＰＯ４及び飽和食塩水で洗浄し、
ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過した後、減圧濃縮すると■、
３３３　ｍｑを得る。Ｉ　Ｆｔ　（μ）　　：　５．７
５（エステル）、５．８５　（Ｃ０ＯＨ）　；　５．８
５（７）吸収はモルホリンの添加によシ消失する。メチ
ルエステル体（ＣＨ２Ｎ２）のＭＳ：６２５゜ＮＭＲ（
δ）　：　４．６　（ＣＨＯＯＣ１８Ｈ３３）。

実施例２ 化合物１１．２４３　ｍｑ　（０，３９８ミリモル）の
ＣＨ２α２溶液１．５　ｍに塩化オキサリル０．０４０
７（０，４６９ミリモル）及びＤＭＦｏ、０００８ｍｌ
を加える。２５°Ｇで１８時間経過後、溶媒を減圧留去
すると、Ｎ２２４ｍｇを力える。

Ｉ　Ｒ（ｆｉ）：　５．５６　（ＣＯＣｌ）、５．７５
（エステル）。

実施例３ 化合物Ｉ（３，２９ミリモル）のジオキサン溶ｆ７．５
　ｍｌをＮａＢｆ（４１５２ｍｑ　（４ミリモル）のジ
オキサン溶液５ｍ７！に７分にわたって加える。

２５°０で５分、１ＯＯ０Ｃで１０分反応させた後、溶
媒全減圧留去し、次に水、水性ＨＣｆ！、Ｋ２　ＨＰ　
０４　　で順に処理し中性にする。混合物をＣＨ２α２
で２回抽出し、そのＣＨ２α２層を飽和食塩水で洗浄し
、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過、減圧濃縮すると１ｖの粗
生成物１．９４−９　ｇを寿る。

このうち、４３６ｍ９を分取用液クロマトグラフィー（
ＰＬＣ）によりシリカケルを用いてクロマトグラフを行
い、ＣＨα３　　Ｅ　ｔ　ＯＡ　ｃ　５０：１、Ｒｆ　
０．４で溶出すると、純粋のＩＶ２３０ｍｇを得る。Ｍ
Ｓ：５９６゜ＮＭＲ：３．６（Ｃ状２０ＩＩ）。

実施例４ ／ アミン（Ｖｆ 化合物ＩＶ　２７１　ｍｑ　（０，４，５ミリモル）の
工・−チル溶液１０ｍＪにホスゲン３７（１，７Ｍベン
ゼン中）を加える。混合物を２５°Ｏで３０分放置後、
減圧濃縮し、化合物■を残す。これにＨＮ　（ＣＨ２Ｃ
Ｈ２Ｑ！　）　２と４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭ
ＡＰ）それぞれ０．４５ミリモルずつを加え、混合物を
３日間反則さぜる。酢酸エチルを加え、Ｍ機溶媒層を水
、水性に２ＨＰＯ４および飽和食塩水で洗浄、Ｋ２ＣＯ
３で脱水し、濾過、減圧濃縮を行い、次にＣＨＣ／！３
−ＥｔＱＡｃ（酢酸エチル）５０：ｌを用いたシリカゲ
ルによる分取用液体クロマトグラフィーを経て、化合物
ＶＩ　１．４８　ｍ９を得る。ＮＭＲ：３．６．８１（
Ｎ（ＣＨ２Ｃ旦２（ｙ！、）２゜ＭＳ：／１８１α２　
　（Ｍ＋−Ｃ１８Ｈ３３０２）。

実施例５ メチル３β−ヒドロキシ−コレン−５−エート　　（■
） 化合物■、３β−ヒドロキシ−コレン−５＝酸、５．３
１．９をＣＨα３−Ｅｔｏｕ　　１　：　１溶液１０〇
−中でジアゾメタンで菟色が残るまで処理し、次に酢酸
を色が消失するまで滴下する。この溶液を水性Ｎ　８２
　Ｃ０３及び飽和食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し
、濾過、減圧濃縮を行い、化合物■５．３９９．！？を
得る。Ｎ’ＭＲ（δ　、ＣＤα３１　　：　　３．’６
　　（Ｃ００Ｃ抛　）。３５（ＣＨＯ）ｌ　　）ｏ　　
ＭＳ　　：　　３８８゜実施例６ エート（ＩＸ） 次に塩化オレオイル４６４ｍｇ（１，５４ミリモル）の
ＣＨ２ＣＩＶ２溶液５−を加える。混合物を２５°　で
１７時間撹拌後、水で処理し、水性Ｈ３ＰＯ４、水およ
び飽和水性Ｎａ２ＣＯａで洗浄し１、Ｋ２ＣＯ３および
ＭｇＳＯ４で順に脱水し、濾過、減圧濃縮すると、化合
物１×９９７ｍ＆を油状物として得る。ＩＲ：５．７３
μ（Ｃ＝Ｏ）のみ。

ＮＭ　Ｒ：　４，６　ＣＨＯＣＯＣ１７Ｈ３３ｏＭＳ　
：　６５２゜実施例７ 化合物■、１０３〜をＬｉＩ　４９７叩とＤＭＦ２８　
ｍｅ中で６時間加熱還流させ、最初の４時間で２５ｍＪ
をゆつくシ留去する。残渣を冷却し、エーテルで希釈し
、ＪＮＨＣｔ、水で３回、飽和食塩水で洗浄し、ＭｇＳ
Ｏ４で脱水し、濾過、減圧濃縮すると約１０係の未反応
■を含む化合ｔｌＸ、　　１０　Ｂｌｎｇを得る。ＭＳ
：６３８、ＮＭＲ：３．６はとんど消失。

実施例８ （■） 化合物Ｘ、１Ｏ−８１ＷのＣＨ２Ｃ／！２溶液１．　ｍ
ｌを塩化オキサリル０．０５９−及びＤＭＦｏ、００１
−で１時間処理し、減圧濃縮すると、Ｘを得る。ＩＲ：
５．５４及び５．７５　（ＣＯＣｌ及びエスチル）。試
料を一旦ベンゼンで洗い、ジオキサ゛ン１．５　ｍｌに
溶解し、ＮａＢＨ４３７ｍｇで２５°こで５分、１００
°Ｃ−で１０分処理する。混合物を０°Ｃに冷却し、水
で処理し、Ｈαで酸性とした後、Ｋ２ＨＰ　０４で中和
し、ＣＨ２（Ｊ２Ｔ２回抽出する。有機溶媒層を飽オＵ
食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、瀘過、減圧濃縮
を行い、シリカゲルによる分取用液体クロマトグラフィ
ーに付し、ＣＨα３−ＥｔＯＡｃ　　５０　：　Ｉ、Ｒ
ｆ＝０．５で溶出すると純粋な■５２Ｔｎｇを得る。

Ｍ　Ｓ　：　６２４、Ｎ　Ｍ　Ｒ：　３．６　（ＣＨ２
０Ｈ）。

実施例９ ミン（ＸＩＶ） 化合物知、３３〃夕をホスゲンｌ　ｍｌ　（１，７Ｍベ
ンゼン溶液）で２５°Ｃ１１６時間処理する。

溶媒を減圧留去するとＸＩが残る。ＩＲ：５．６１．５
．７６（ＣＯα及びエステル）、化合物ｘｉのベンゼン
溶液１−にＨＮ（ＣＨ２ＣＨ２α）２０．０９０−と４
−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ１１３ｍｇを加え
る。２５°Ｃで３時間反応させた後、反応混合物を水で
処理し、水性Ｈ３ＰＯ４、水、水性に２ＨＰＯ４、飽和
食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過、減圧濃縮
を行い、シリカゲルによる分取用液体クロマトグラフィ
ーに伺し、ＣＨＱ！３（Ｒｆ　＝０．６　）で溶出する
と純粋なＸＩＶ　２９−を得る。ＭＳニア９２．７９３
．７９４　　ＮＭＲ：４．１　（ＣＨ，０ＣＯＮＲ２）
、３．７Ｎ（Ｃ其２Ｃ■２α）２゜ 実施例１０ 薬学的投与形態 本明細書第１θ頁第７２行目乃至第７３頁第６行目に記
載した方法に従って、以下の物質を製造し、各々を滅菌
蒸留水で１００　ｍｌに希釈する： ａ）活性核成分として２−（３β−オレオイルオキシ−
アンドロスト−５−エン−１７β−イル）プロピルオキ
シカルボニル−ビス（２−クロロエチル）アミン３５０
１１１ｇを含有する再構成Ｌ　Ｄ　Ｌ　１０００　ｍ９
の１００−滅菌蒸留水溶液 ｂ）活性核成分として４−（３β−オレオイルオキシ−
アンドロスト−５−エン−１７β−イル）ペンチルオキ
シカルボニルビス（２−クロロエチル）アミン３５０ｍ
９を含有する再構成ＬＤＬ１００（ｌ１ｇのＩ　ＯＯｍ
ｌ滅菌−蒸留水溶液。

上記のそれぞれの水性１け濁液は体重約７０ｋｙの患者
の典型的な１日投与星を包含する。

この投与量は患者の体重に基いて調節し、静脈注射で投
与する。

出願人　　：　　メルク　エンド　カムパニーインコー
ポレーテツド

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式： 〔式中、 Ｒ，は炭素数１２〜２０個の不飽和脂肪族カルボニルオ
   キシ基であり、 ｎは１〜３の整数であり、 Ａはａ）Ｒ４が水素、低級アルキル、フェニルまたはヘ
   テロアリールであ ０　　　　　　　０ １１１す る一Ｃ−Ｎ−０−Ｃ−、寸たは ｂ）　　　−ｏ−Ｃ−、 より選ばれた二価の結合部位を有する基であり、 Ｂはアミノ態窒素を介して結合している糸［Ｂ胞毒性物
   質の一価の基である〕を有するステロイドエステル。 ２、　８がヒス−（２−クロロエチＡ　）アミン、ウラ
   シルマスタード、６−メノしブコプトブ１ノン、チオグ
   アニン、アドリアマイシン、フ００ロ力ルバジンマイト
   マイシンＣより選ばれたＡｆｌｌｌ胞毒性物質の一価の
   基である！Ｉ寺♂Ｆ　ｍ！’（求の範囲第１項記載の化
   合物。 ３、　Ｒ１が３β−オレオイル副′キシ、３β−リノー
   レオイルオキシ、°３β−ＩＪルノイルオキシ基よシ選
   ばれる特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ４、式： 〔式中、Ｂは式、−Ｎ　（−ＣＨ２ＣＨ２α）２で示さ
   れるヒス（２−クロロエチルアミノ）基である〕を有す
   る特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ５．４−（３β−オレオイルオキシ−アンドロスト−５
   −エン−１７−イル）プロピルオキシカルボニルビス（
   ２−クロロエチル）アミンである特許請求の範囲第１項
   記載の化合物。 ６．４−（３β−オレオイルオキシ−アンドロスト−５
   −エン−１７−イル）ペンチルオキシカルボニルビス（
   ２−クロロエチル）アミンである特許請求の範囲第１項
   記載の化合物。 ７、式： を有するステロイドエステル酸塩化物と反応性アミン基
   を有する細胞毒性物質とを一緒に反応させることを特徴
   とする式： 〔式中、Ｒ４、ｎ、Ａ、Ｂは！特許請求の範囲第１項の
   定義に従う〕を有する化合物の製造方法。