JPS5958002A - 臨床測定用微粒子およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 に関する。

免疫化学的臨床横歪において、体液中の微量物質、例え
ばＩ　Ａ，Ｉ　Ｄ，Ｉ　　Ｅ，ＩｇＧ等を測定ｇ　　　
　　　ｇ　　　　　　ｇ する場合、固体微粒子を担体として用いる方法が採用さ
れている。例えば、生物学的粒子として赤血球を抗原捷
たけ抗体で感作シ７、これを被険液中の抗原または抗体
と反応させ免液化学的凝集または凝集用１Ｆ反応によっ
て微量物質を測定する方法がある。また、赤血球等のか
わりに、最近非生物学的粒子として合成樹脂ラテックス
およびベントナイト、水晶等の鉱物等の微粒子が担体と
して用いられてきている。

従来、免疫化学的臨床検査に用いられている固体微粒子
世体の多くはその表面に特別な結合η能基がないため、
該Ｊ’Ｓ体と抗原せたは抗体との結合は、抗原または抗
体の単なる吸着性を利用した物理的吸着であり、従って
、結合力も弱く、操作中に結合が切れるものもあり免疫
化学的鵬床検査において測定誤差の原因となってい／こ
。

従来、非生物学的粒子の中で多く１吏用されているラテ
ックスは、低モノマー濃度で高乳化剤濃度下において触
媒を［史用したエマルジョン重合によって合成されたも
のが殆どであり、その粒径は００１〜２ミクロンと分布
も広く、粒径も１ミクロン以下のものが多い。通常の免
疫化学的測定に用いられる４１４体粒子は粒径が２〜６
ミクロン程度のものが好ましい。然しなから、エマルシ
ョン重合によってネ）“１５が２〜６ミクロンの微粒子
を合成するには長時間を要するかあるいは特異な合成条
件を設定する必要がある等数々の難点がある。史に、触
媒重合の重合は合成された粒子中に触媒等の不純物が混
入し粒子の物性を低下させるという欠点がある。ま／ζ
、米国特許Ｌ１１４，１３６号は、一旦合成したラテッ
クスに溶剤を添加して膨潤させ高速ミキサーで微（）ン
子化する方法を開示しているが、この様にして合成され
たラテックスは溶剤で膨潤しており且つ形状が必らずし
も球状でないことが予想され、直接重合法で合成したラ
テックスとは異なった性質を有するものと考えられる。

本発明者等は従来技術の欠点を改良すべく研究した結果
、特定のモノマーに室温以下の低温下で低線険の光また
は電離性放射線全照射することによって粒径０．５〜２
０ミクロンの固体微粒子が製造されることを発見した。

従って、本発明の主たる目的は粒径０．５〜２０ミクロ
ンの微粒子およびその製造方法を提供することである。

本発明の更なる目的は免疫化学反応、レセプター反応、
レクチン反応等を利用した臨床測定に使用される粒径０
５〜２０ミクロンの固体微粒子およびその製造方法を提
供することである。

本発明のその他の目的および利点は以下逐次明らかにさ
れる。

本発明に従って、同一分子中にアルデヒド基および重合
性二重結合を有する重合性単量体を室温以下の低温、好
ましくは５〜−１（１１１０℃に維持し、これに低線針
の光捷たは電離性放射線を照射し重合＋：１ｇ単量体を
重合することによって粒径０，５〜２０ミクロンの固体
微粒子が製造される。

更に、本発明に従って、同一分子中にアルデヒド基およ
び重合性二重結合を有する重合性単量体の固体微粒子が
製造される。

本発明の重要な特徴の一つは■〒合性単用体に何も添加
することなして一定の照射重合条件を設定することによ
って目的とする固体微粒子を製造する点にある。

本発明の特°徴に関して以下に詳しく解説する。

本発明で使用される重合性単量体はクロトンアルデヒド
、アクロレイン、メタアクロレイン、／トラール等分子
中にアルデヒド基及び重合性の二重結合を有するもので
ある。本発明で１史用するこれらの重合性単量体もビニ
ール系単量体であるため、これらの単量体を通常の放射
線重合法で重合すると塊状重合が進行し本発明の目的と
合致しない不均一系で無定形の重合体が析出生成される
。

このため本発明者等は照射重合条件を探索し研究した結
果、単量体のみに低温下で低線析の光または電離性放射
線を照射し、重合反応を緩慢に進行させ重合体を粒子状
に成長させ、重合後′８１．状の単量体から１１過分離
することによって目的とする固体微粒子を得ることが出
来ることを発見したものである。

本発明で１ψ用する電離性放射線源としては電子１ｉ１
、Ｘ線、γ線等が任意に用いられ、照射される線…はｌ
Ｘ１０６Ｒ以下であることが好ましい。

本発明で単量体に光または電離性放射＃ｌを照射するに
当っては単量体を室温以下、好ましくは５〜−１０［１
℃にＳ４１］持しておくことが必要である。

単諸体不−低霊に維持する方法としては通常採用されて
いる如何なる方法でもよい。

本発明で使用する単騎体がアルデヒド基ヲ有しているも
のであるということも本発明の重要な特徴の一つである
。即ち、使用する単量体がアルデヒド基をもっているた
め照射重合によって得られる固体微粒子の表面はアルデ
ヒド基でおおわれている。従って、本発明の固体微粒子
に抗原・抗体などを固定する場きは、固体微粒子−を水
等で洗浄後一定条件で抗原・抗体などに接触させるだけ
でよく、これにより化学結合によって粒子表面に抗原・
抗体などが強固に固定された固定化物が製造される。尚
、固体微粒子に抗原・抗体などを固定化するには照射重
合反応の途中に抗原・抗体などを添加して重合と同時に
固定化することも出来る。

即ち、本づ６明は低ｆｆ１Ｆｌ下、低線量で重合反応が
行われるため、重合反応過程に抗原・抗体などが存在し
てもそれらが失活する恐れはない。

従来の粒子状ラテックスに抗原・抗体などを固定する場
合１丁、ラテックスへの非特異吸着性を利用しているた
めラテックス表面から抗原・抗体などが脱離し勝ちであ
る等欠点があった。然しなから、本発明の固体微粒子の
表面はタンパク質などとの結合能力の大きいアルデヒド
基という官能基で構成されているため微量の抗原・抗体
などとも結合する。従って、粒子担体を利用しての免疫
化学的測定においても感１ｊ、ｆが高く、体液中の微量
物質を検出することができるという特徴がある。

本発明の固体微粒子は一般に免疫反応だけでなく、レセ
プター反応、レクチン反応等の全ての結合反応を利用し
た臨床測定に担体として使用することができ、又これら
の反応を利用しての生物活性物質の分離および精製に使
用することができる。

本発明は同一分子中にアルデヒド基および知合温下でｌ
Ｘ１０Ｒ以下の低線量の光または電離性放射線を照射す
ること全構成とするもので、特定の反応条件に制約され
ない、例えば、重合反応中に単量体全攪拌してもよくし
なくてもよい、又、重合条件を適当に設定することによ
って粒子の粒径を希望する範囲に制御することが出来る
。

以下、実施例で本発明の構成および効果を具体的に明ら
かにするが、これら実施例は本発明の一態様に過ぎず、
何ら本発明を限定するものではない。

実施例１ アクロレイン１０ｆｋガラス容器に入れ、これを四塩化
炭素と液体窒素から成る一２４℃の寒剤中に入れ容器全
体を充分冷却した。ついでこの幌要ヲ維持したままコバ
ルト６ｏがら放射されるγ線を５×１０５Ｒ／時の線量
率で１時間照射しアクロレインを１１合さぜた。重合完
了後生成された粒子を遠心分１ｌｉｌ′１機にて分シ１
（シた後、メタノールで６回洗浄して未成Ｌ６、アクロ
レインを除去し、更に水で２回洗浄した後乾燥した。得
られた粒子の１１１は１．５９７で、その粒径は２〜６
ミクロンの１や囲にあった。

実施例２ 実施例１で得られた粒子を用いて、ヒトＩｇＧをウサギ
に免疫して得られた抗ヒトＩｇＧ・ラビット血清をガン
マ−クロプリン分画し、これ’ｔ　０．５ＭＮ　ａ　Ｃ
１ｋ　ｆ　ｔｒ　Ｏ，Ｉ　ＭＮ　ａ　ＨＣＯ３）緩衝溶
１（ｐＨ８，９４）に溶解したものを用いて抗体の感作
を行った。

すなわち、実施例１で得られた粒子１０ｍｙ’を上記緩
衝溶液３　ｔｎｅ　Ｋ　）Ｊｎえ室幅で２時間放置した
。−次に、０２Ｍダリシン水溶液を加え室温で２時間放
置した後、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離を行って
ダリシン被覆抗ヒト■ｇＧラビットＩｇＧ感作−粒子を
得た。これを０．　Ｄ　Ｉ　Ｍ　ＰＢＳ　緩衝溶液に懸
濁させた。この感作粒子２．３　Ｘ　１０”ケ／ｍｌ？
とりヒトＩｇＧ　Ｏ，６７■／−に加え６７℃で１時間
放置し凝集状態を観察した結果粒子同志の著しい凝集が
認められた。

実施例 クロトンアルデヒド１０ｇｔガラス容器に入れ水で０℃
に冷却し、この温度でセシウム１３７より放射されるγ
線を４×１ｏ５Ｒ／時の線量率で２時間照射しクロトン
アルデヒドを重合させた。重合完了後、３０００ｒｐｍ
で１０分間遠心分離を行い、粒子を取り出し、これを実
施例１のよってメタノールおよび水で洗浄し乾燥して粒
径１〜２ミクロンの微粒子を１２得た。

実施例４ 実施例ろで得られた微粒子２０ｍｙ”ｘ、ヒト胎盤性ゴ
ナド）ｏビン（ＨＬＧＩ−ウサギに免疫して得られた抗
ヒト胎盤性コゝヲードトロビンウサギ血清のがンマーグ
ロプリン分画を０．１係含むダリシン緩衝液に加え室温
で３ｏ分間放置した後、３０００ｒｌ）ｍで１０分間遠
尼・分離を行ってグリシン被覆抗ヒト胎盤性ゴナドトロ
ピンＩｇＧラビツＦ　Ｉ　ｇＧ感作−ｋ子を得た。この
感作−粒子をグリシン緩衝液に懸濁させてＨＬＧ　　検
出試薬とした。この抗ＨＬＧ−■ｇＧ感作−粒子は０．
２ＩＵ／ＴｎｅのＨＬＧ　の存在で凝集を示した。

実施例５ アクロレイン５°　をガラス容器にとり、これを氷−Ｋ
ＣＩ寒剤で一１１℃に冷却し、この温度でコバルト６０
より放射されるγ線ｋＩＸ１０５Ｒ／時の線量率で６時
間照射しアクロレインを重合させた。粒子径は６〜４ミ
クロンの微粒子が得られた。

実施例６ 実施例５で得られた微粒子のヒトリンパ球（Ｂセル）の
マーカーとしての有効性を調べた。

ヒ）ＩｇＧ’ｔウサギに免疫してえられた抗ヒトＩｇＧ
ラビット血清全ガンマ−グロブリン分画し、これｋ　０
．５　ＭＮａＣｌを含む０．１　Ｍ　Ｎ　ａ　ＨＣＯａ
の緩衝液（ｐＨ８，９４）にとかし感作用液とし、これ
に実施例５で得た微粒子１０■を入れ室温で６０分間放
置し、再に０．２　Ｍグリシン溶液を加え室温で６０分
間放置した。ろＯＯＯｒｐｍで５分間遠心分離をしてグ
リシン被覆抗ヒト■ｇＧラビットＩｇＧ感作−粒子を得
、これを０．０１ＭＰＢＳ　緩衝溶液に懸濁させた。

培養白血球細胞であるフジマキ細胞（Ｂセル参）または
モルト細胞（１゛セル系）を言むハンクス副液（０，２
％ＢＳＡ’（ｒ含む）に上記のグリシン被Ｐ７　抗ヒト
ＩｇＧラビットＩｇＧ感作−粒子Ｓｍｙづつを加えろ７
℃で１時間放置した後、凝集性を調べた結束、モルト細
胞には粒子の凝集が認められなかったが、フジマキ細胞
には、細胞の周囲に沢山の粒子が、凝集しているのが認
められた２、 実施例７ アクロレイン５７をガラス容器にとり、これにヒトＩｇ
Ｇｋウサギに免疫して得られた抗ヒトＩｇＧラビットＩ
ｇＧ　１０　”！　ｋ　ｏ、　Ｉ　Ｍ　Ｎａ　ＨＣＯａ
　緩衝液１０ｍ７！にとかした溶液１　ｍｌを加えた。

容器全体孕Ｏ℃に冷却し液を攪拌しながらコバルト６０
からのｒ線を１×１０５Ｒ／時の線量率で２時間照射し
アクロレインを重合して、抗ヒト■ｇＧラビットＩｇＧ
感作−粒子（粒径２〜５ミクロン）を得た。

実施例８ 実施例７で得た抗ヒト■ｇＧラビットＩ、Ｇ感作−粒子
を０．０１　Ｍ　ＰＢＳ　緩衝液で５回洗浄し、最後に
０．０１　ＭＰＢＳ緩衝液に懸濁させた。この粒子５　
Ｘ　１０　　／ｍｅ　　ｆとり、ヒトＩｇＧ　ｏ、　５
　ｍｇ／　ｍｅ　ヲ加え、６７℃でろ０分間放ドし凝集
状態を観察した結果、粒子同志の著しい凝集が認められ
た。

特許出願人　　日本原子力研究所 （外１名） 代　理　人　　弁理士　湯践　　恭　三、・′１（外４
名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　表面にアルデヒド基を有する粒径０５〜２０ミクロ
   ンの臨床測定用微粒子。 ２、同一分子中にアルデヒド基および重合性二ｉＦ結合
   を有する車合性単−゛体を室温以下に維持した状態で光
   または電離性放射線を照射することから成る表面にアル
   デヒド基を有する粒径０，５〜２０ミクロンの臨床測定
   用微粒子を製造する方法。 ３、同一分子中にアルデヒド基およびｒ［合性二市結合
   を有する重合性単量体および住物汁・ト竹質’ｉｆ　４
   ＜’自愛された粒径０５〜２０ミクロンの臨床測定用微
   粒子全製造する方法。