JPS59499B2 - ペプチド誘導体 - Google Patents
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、特定酵素活性測定用の螢光性基質又はその合
成中間体として有用な新規ペプチド誘導体に関するもの
である。
成中間体として有用な新規ペプチド誘導体に関するもの
である。
本発明者は、簡便で高感度に特定酵素の活性を測定でき
る酵素の基質を得るため鋭意研究を重ねた結果、一般式
で示されるペプチド誘導体の合成に成功し、さらにこの
新規ペプチド誘導体が簡便で高感度にその活性測定がで
きる酵素例えば、血液凝固第Ｍ因子（ＦａｃｔｏｒＸ［
ａ）の螢光性基質またはその合成中間体となることを見
出し、本発明を完成するに至つた。
る酵素の基質を得るため鋭意研究を重ねた結果、一般式
で示されるペプチド誘導体の合成に成功し、さらにこの
新規ペプチド誘導体が簡便で高感度にその活性測定がで
きる酵素例えば、血液凝固第Ｍ因子（ＦａｃｔｏｒＸ［
ａ）の螢光性基質またはその合成中間体となることを見
出し、本発明を完成するに至つた。
ただし、式中Ｒ０はセリル基、フエニルアラュルーセリ
ル基、スレオニル基、ロイシルースレオニル基であり、
Ｒ２は□又は□ＮＯ２である。
ル基、スレオニル基、ロイシルースレオニル基であり、
Ｒ２は□又は□ＮＯ２である。
本発明化合物のアミノ基およびグアニジノ基、並びに水
酸基を有する場合の水酸基は、保護されていてもよく、
使用する保護基、保護方法および脱離方法は、公知文献
、例えば、赤堀四部、金子武夫、成田耕造編、タンパク
質化学１アミノ酸・ペプチド、共立出版、昭和４４年等
、により一般に使用され、慣用されているものを採用す
ればよい０前記一般式のペプチド誘導体において、Ｎ末
端一アミノ基はアセチル、ベンゾイル等アシル基、カル
ボベンゾキシ基、第三アルキルオキシカルボニル基、ト
シル基、グルタリル基等のペプチドのＮ一末端−アミノ
基の保護基として常用されているもので保護されていて
もよく、また、水酸基はアルキル又はベンジル基等のペ
プチド合成上慣用される保護基によつて保護されていて
もよい。
酸基を有する場合の水酸基は、保護されていてもよく、
使用する保護基、保護方法および脱離方法は、公知文献
、例えば、赤堀四部、金子武夫、成田耕造編、タンパク
質化学１アミノ酸・ペプチド、共立出版、昭和４４年等
、により一般に使用され、慣用されているものを採用す
ればよい０前記一般式のペプチド誘導体において、Ｎ末
端一アミノ基はアセチル、ベンゾイル等アシル基、カル
ボベンゾキシ基、第三アルキルオキシカルボニル基、ト
シル基、グルタリル基等のペプチドのＮ一末端−アミノ
基の保護基として常用されているもので保護されていて
もよく、また、水酸基はアルキル又はベンジル基等のペ
プチド合成上慣用される保護基によつて保護されていて
もよい。
また、分子を構成するアルギニンのグアニジノ基は保護
されていてもよく、その保護基としては、ニトロ基、ト
シル基、Ｐ−メトキシベンゼンスルホニル基等ペプチド
合成に慣用されているＮ−グアニジノ保護基、その他酸
付加塩のごとくプロトンを付加したものも採用できる。
前記ペプチド誘導体は酢酸、塩酸等の酸付加塩や水和物
の形であつてもよい。
されていてもよく、その保護基としては、ニトロ基、ト
シル基、Ｐ−メトキシベンゼンスルホニル基等ペプチド
合成に慣用されているＮ−グアニジノ保護基、その他酸
付加塩のごとくプロトンを付加したものも採用できる。
前記ペプチド誘導体は酢酸、塩酸等の酸付加塩や水和物
の形であつてもよい。
前記一般式のペプチド誘導体においてＲがセリル基のも
のは、７一（セリルーアルギニル）アミノ−４−メチル
クマリンであり、Ｒがフエニルアラニルーセリル基のも
のは７一（フエニルアラニルーセリルーアルギニル）ア
ミノ−４−メチルクマリンであり、Ｒがスレオニル基の
ものは、７一（スレオニルーアルギニル）アミノ−４−
メチルクマリンであり、Ｒがロイシルースレオニル基の
ものは７一（ロイシルースレオニルーアルギニル）アミ
ノ−４−メチルクマリンである。
のは、７一（セリルーアルギニル）アミノ−４−メチル
クマリンであり、Ｒがフエニルアラニルーセリル基のも
のは７一（フエニルアラニルーセリルーアルギニル）ア
ミノ−４−メチルクマリンであり、Ｒがスレオニル基の
ものは、７一（スレオニルーアルギニル）アミノ−４−
メチルクマリンであり、Ｒがロイシルースレオニル基の
ものは７一（ロイシルースレオニルーアルギニル）アミ
ノ−４−メチルクマリンである。
本発明のペプチド誘導体のうちパラニトロアニリド誘導
体は、例えば下記のようにして製造することができる。
体は、例えば下記のようにして製造することができる。
Ｎα一保護一セリンのエステル体を常法によりそのヒド
ラジド誘導体に変換し、これとアルギニンのパラニトロ
アニリド誘導体とを反応せしめると、セリルーアルギニ
ンーパラニトロアニリド誘導体が得られる。
ラジド誘導体に変換し、これとアルギニンのパラニトロ
アニリド誘導体とを反応せしめると、セリルーアルギニ
ンーパラニトロアニリド誘導体が得られる。
Ｎα一保護−フエニルアラニルーセリンのエステル体を
常法によりそのヒドラジド誘導体に変換し、これとアル
ギニンのパラニトロアニリド誘導体とを反応せしめると
フエニルアラニルーセリルーアルギニンーパラニトロア
ニリド誘導体が得られる。
常法によりそのヒドラジド誘導体に変換し、これとアル
ギニンのパラニトロアニリド誘導体とを反応せしめると
フエニルアラニルーセリルーアルギニンーパラニトロア
ニリド誘導体が得られる。
Ｎα一保護一スレオニンのエステル体を常法によりその
ヒドラジド誘導体に変換し、これとアルギニンのパラニ
トロアニリド誘導体とを反応せしめると、スレオニルー
アルギニンーパラニトロアニリド誘導体が得られる。
ヒドラジド誘導体に変換し、これとアルギニンのパラニ
トロアニリド誘導体とを反応せしめると、スレオニルー
アルギニンーパラニトロアニリド誘導体が得られる。
Ｎα一保護−ロイシルースレオニンのエステルを常法に
よりそのヒドラジド誘導体に変換し、これとアルギニン
のパラニトロアニリド誘導体とを反応せしめるとロイシ
ルースレオニルーアルギニンーパラニトロアニリド誘導
体が得られる。
よりそのヒドラジド誘導体に変換し、これとアルギニン
のパラニトロアニリド誘導体とを反応せしめるとロイシ
ルースレオニルーアルギニンーパラニトロアニリド誘導
体が得られる。
本発明のメチルクマリン誘導体は、例えば下記のように
して製造することができる。アミノ基及びグアニジノ基
が保護されたアルギニンと７ーアミノ一４−メチルクマ
リンをシンクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣＤ）等
ペプチド合成に慣用される縮合剤の存在下で反応させた
後、ペプチド合成に慣用されている方法によりアミノ基
の保護基を脱離させると７ーアルギニルアミノ一４−メ
チルクマリンを製造できる。
して製造することができる。アミノ基及びグアニジノ基
が保護されたアルギニンと７ーアミノ一４−メチルクマ
リンをシンクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣＤ）等
ペプチド合成に慣用される縮合剤の存在下で反応させた
後、ペプチド合成に慣用されている方法によりアミノ基
の保護基を脱離させると７ーアルギニルアミノ一４−メ
チルクマリンを製造できる。
上記の如くして得た７一（Ｎα一保護、ＮＧ一保護−ア
ルギニル）−アミノ−４−メチルクマリンを出発原料と
して、さらにペプチド合成に慣用されている方法に従つ
て本発明のペプチド誘導体を製造することができる。例
えばアミノ基と水酸基が保護されたセリンと上記Ｎα一
無保護のメチルクマリン誘導体とを前記縮合剤の存在下
で反応させるか、あるいは前記セリンの活性エステルと
上記メチルクマリン誘導体とを反応させた後、同様に保
護基を脱離させると、７一（Ｎα−セリルーアルギニル
）アミノ−４−メチルクマリンが得られるし、７一（Ｎ
α一無保護−セリル一ＮＧ一保護−アルギニルーアミノ
一４−メチルクマリンにさらに、アミノ基が保護された
フエニルアラニンの活性エステルとを反応させ、同様に
保護基を脱離させると、７一（フエニルアラニルーセリ
ルーアルギニル）−アミノ−４−メチルクマリンが得ら
れる。７一（Ｎα一無保護−ＮＧ一保護−アルギニル）
−アミノ−４−メチルクマリンとアミノ基が保護された
スレオニンの活性エステルとを反応させて、同様に保護
基を脱離させると７一（スレオニルーアルギニル）−ア
ミノ−４−メチルクマリンが得られる。
ルギニル）−アミノ−４−メチルクマリンを出発原料と
して、さらにペプチド合成に慣用されている方法に従つ
て本発明のペプチド誘導体を製造することができる。例
えばアミノ基と水酸基が保護されたセリンと上記Ｎα一
無保護のメチルクマリン誘導体とを前記縮合剤の存在下
で反応させるか、あるいは前記セリンの活性エステルと
上記メチルクマリン誘導体とを反応させた後、同様に保
護基を脱離させると、７一（Ｎα−セリルーアルギニル
）アミノ−４−メチルクマリンが得られるし、７一（Ｎ
α一無保護−セリル一ＮＧ一保護−アルギニルーアミノ
一４−メチルクマリンにさらに、アミノ基が保護された
フエニルアラニンの活性エステルとを反応させ、同様に
保護基を脱離させると、７一（フエニルアラニルーセリ
ルーアルギニル）−アミノ−４−メチルクマリンが得ら
れる。７一（Ｎα一無保護−ＮＧ一保護−アルギニル）
−アミノ−４−メチルクマリンとアミノ基が保護された
スレオニンの活性エステルとを反応させて、同様に保護
基を脱離させると７一（スレオニルーアルギニル）−ア
ミノ−４−メチルクマリンが得られる。
７一（Ｎα一無保護一スレオニルーアルギニル）−アミ
ノ−４−メチルクマリンとアミノ基が保護されたロイシ
ンの活性エステルとを反応させて、同様に保護基を脱離
させると７一（ロイシルースレオニルーアルギニル）−
アミノ−４−メチルクマリンが得られる。
ノ−４−メチルクマリンとアミノ基が保護されたロイシ
ンの活性エステルとを反応させて、同様に保護基を脱離
させると７一（ロイシルースレオニルーアルギニル）−
アミノ−４−メチルクマリンが得られる。
本発明のペプチド誘導体を製造するときの縮合反応は、
いずれも適当な溶媒例えばジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）、ジメチルスルホキシド、水あるいはこれらの混合
物の中で行うのがよい。
いずれも適当な溶媒例えばジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）、ジメチルスルホキシド、水あるいはこれらの混合
物の中で行うのがよい。
アミノ基成分と反応させるカルボキシル基成分は活性エ
ステルの形で用いるのが有利であるが、この活性エステ
ルとしては、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、
Ｐ−ニトロフエニルエステルなどが好適である。この活
性エステルを用いた反応は室温でも十分に進行するが、
所望に応じ加熱して反応を促進させることもできる。反
応終了後、反応混合物を濃縮乾固し、残留物をカラムク
ロマトグラフイ一により精製し、次いで凍結乾燥する。
ステルの形で用いるのが有利であるが、この活性エステ
ルとしては、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、
Ｐ−ニトロフエニルエステルなどが好適である。この活
性エステルを用いた反応は室温でも十分に進行するが、
所望に応じ加熱して反応を促進させることもできる。反
応終了後、反応混合物を濃縮乾固し、残留物をカラムク
ロマトグラフイ一により精製し、次いで凍結乾燥する。
これらの化合物の中で、アミノ基又はカルボキシル基に
保護基を有するものは、通常の保護基の脱離手段を用い
これを除去することができる。
保護基を有するものは、通常の保護基の脱離手段を用い
これを除去することができる。
例えばカルボベンゾキシ基やベンジルエステルは、アル
コールのような溶媒中で水素添加することにより、第三
級ブチルオキシカルボニル基は酢酸等の溶媒中トルエン
スルホン酸と９０分程度反応させることにより除去しう
る。本発明のペプチド誘導体において、所望に応じ遊離
形のものは酸付加塩に、また酸付加塩のものは遊離形の
ものにそれぞれ変換することができる。
コールのような溶媒中で水素添加することにより、第三
級ブチルオキシカルボニル基は酢酸等の溶媒中トルエン
スルホン酸と９０分程度反応させることにより除去しう
る。本発明のペプチド誘導体において、所望に応じ遊離
形のものは酸付加塩に、また酸付加塩のものは遊離形の
ものにそれぞれ変換することができる。
この酸付加塩の例としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、
リン酸塩などの無機酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、酒石酸
塩、コハク酸塩、クエン酸塩、トルエンスルホン酸塩な
どの有機酸塩がある。前記の如くして製造したペプチド
誘導体の同定は、元素分析、アミノ酸分析、紫外線吸収
スペクトルにより行つた。
リン酸塩などの無機酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、酒石酸
塩、コハク酸塩、クエン酸塩、トルエンスルホン酸塩な
どの有機酸塩がある。前記の如くして製造したペプチド
誘導体の同定は、元素分析、アミノ酸分析、紫外線吸収
スペクトルにより行つた。
本発明の化合物はいずれも、血液凝固第Ｍ因子（Ｆａｃ
ｔＯｒＸｌａ）等酵素により加水分解されるので、これ
ら特定酵素の合成基質として好適である。
ｔＯｒＸｌａ）等酵素により加水分解されるので、これ
ら特定酵素の合成基質として好適である。
本発明のペプチド誘導体を構成するアミノ酸はＬ一体、
Ｄ一体のいずれであつてもよいが、カルボキシ末端のア
ミノ酸がＤ一体のものは酵素が加水分解しないのでＬ一
体が好ましい。
Ｄ一体のいずれであつてもよいが、カルボキシ末端のア
ミノ酸がＤ一体のものは酵素が加水分解しないのでＬ一
体が好ましい。
以下実施例により本発明を詳細に説明する。
実施例 １Ｌ−セリンメチルエステル塩酸塩１７．２７
をジクロロメタン２００ｍ１にとかしトリエチルアミン
１５，４７を加えた溶液にｔ−ブチルオキシカルボニル
−Ｌ−フエニルアラニン一Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ
ドエステル３６．２７をテトラヒドロフラン２００ｍ１
にとかして加えた。
をジクロロメタン２００ｍ１にとかしトリエチルアミン
１５，４７を加えた溶液にｔ−ブチルオキシカルボニル
−Ｌ−フエニルアラニン一Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ
ドエステル３６．２７をテトラヒドロフラン２００ｍ１
にとかして加えた。
室温にて１５時間かきまぜた後、溶媒を減圧留去した。
残留物を酢酸エチル３００７ｒＬ１にとかし、０．５Ｎ
一塩酸１００ｄと共に振りまぜた。有機層を５％重炭酸
水素ソーダー水溶液１００ｍ１、次に水１００ＴＩＬＩ
と順次振りまぜた後、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥
した。乾燥剤を▲去した後有機層を減圧濃縮乾固した。
残留物にｎ−ヘキサン５００ｍ１を加えゲル状固体を得
た。ｆ取しｎ−ヘキサンで洗浄し乾喋しｔ−ブチルオキ
シカルボニル−Ｌ−フエニルアラニル一Ｌ−セリンメチ
ルエステルを得た。収量３６７（収率９８％）。融点
９０〜９３℃ 比旋光度〔α〕甘＝−０．１８（Ｃ＝２，７５、ＤＭＦ
）元素分析値：Ｃｌ８Ｈ２６Ｎ２Ｏ６ｌ／４Ｈ２０とし
ての計算値 Ｃ：５８．２８％、Ｈ：７．２０％、Ｎ：
７．５５％実測値 Ｃ：５８．４６％、Ｈ：７．３０％
、Ｎ：７．４３％ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フ
エニルアラニル一Ｌ−セリンメチルエステル１８．３７
をメチルアルコール５０ｍ１にとかし、８０％ヒドラジ
ン１水和物７．５ｍ１を加え、室温にて１５時間かきま
ぜた後減圧濃縮乾固した。
残留物を酢酸エチル３００７ｒＬ１にとかし、０．５Ｎ
一塩酸１００ｄと共に振りまぜた。有機層を５％重炭酸
水素ソーダー水溶液１００ｍ１、次に水１００ＴＩＬＩ
と順次振りまぜた後、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥
した。乾燥剤を▲去した後有機層を減圧濃縮乾固した。
残留物にｎ−ヘキサン５００ｍ１を加えゲル状固体を得
た。ｆ取しｎ−ヘキサンで洗浄し乾喋しｔ−ブチルオキ
シカルボニル−Ｌ−フエニルアラニル一Ｌ−セリンメチ
ルエステルを得た。収量３６７（収率９８％）。融点
９０〜９３℃ 比旋光度〔α〕甘＝−０．１８（Ｃ＝２，７５、ＤＭＦ
）元素分析値：Ｃｌ８Ｈ２６Ｎ２Ｏ６ｌ／４Ｈ２０とし
ての計算値 Ｃ：５８．２８％、Ｈ：７．２０％、Ｎ：
７．５５％実測値 Ｃ：５８．４６％、Ｈ：７．３０％
、Ｎ：７．４３％ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フ
エニルアラニル一Ｌ−セリンメチルエステル１８．３７
をメチルアルコール５０ｍ１にとかし、８０％ヒドラジ
ン１水和物７．５ｍ１を加え、室温にて１５時間かきま
ぜた後減圧濃縮乾固した。
残渣をエチルアルコールより再結晶しｔ−ブチルオキシ
カルボニル−Ｌ−フエニルアラニル一Ｌ−セリン−ヒド
ラジドを得た。収量 １２．８？（収率７０％）。
カルボニル−Ｌ−フエニルアラニル一Ｌ−セリン−ヒド
ラジドを得た。収量 １２．８？（収率７０％）。
融点 １７６〜１７７℃（分解）
比旋光度 〔α〕青＝−３．３３（Ｃ＝２．５２、ＤＭ
Ｆ）元素分析値：Ｃｌ７Ｈ２６Ｎ４Ｏ５としての計算値
Ｃ：５５．７２％、Ｈ：７．１５％、Ｎ：１５．２９
％実測値 Ｃ：５５．８３％、Ｈ：７．１７％、Ｎ：１
５．２８％ｔ−ブチルオキシカルボニル一Ｌ−フエニル
アラニル一Ｌ−セリンヒドラジド２．７５ｙをジメチル
ホルムアミド３０ｍ１にとかし、６．３規定一塩化水素
ジオキサン溶液２．４ｍ１を加え−３０℃に冷しインア
ミルナイトライト１．１７ｙを加え−１５℃にて１５分
間かきまぜた後−７０℃に冷しトリエチルアミン２．１
ｍ１を加えた。
Ｆ）元素分析値：Ｃｌ７Ｈ２６Ｎ４Ｏ５としての計算値
Ｃ：５５．７２％、Ｈ：７．１５％、Ｎ：１５．２９
％実測値 Ｃ：５５．８３％、Ｈ：７．１７％、Ｎ：１
５．２８％ｔ−ブチルオキシカルボニル一Ｌ−フエニル
アラニル一Ｌ−セリンヒドラジド２．７５ｙをジメチル
ホルムアミド３０ｍ１にとかし、６．３規定一塩化水素
ジオキサン溶液２．４ｍ１を加え−３０℃に冷しインア
ミルナイトライト１．１７ｙを加え−１５℃にて１５分
間かきまぜた後−７０℃に冷しトリエチルアミン２．１
ｍ１を加えた。
一方Ｌ−アルギニン−Ｐ−ニトロアニリド２塩酸塩１．
８４ｙをジメチルホルムアミド２０ｍ１にとかしトリエ
チルアミン０．７ｍ１を加えた。
８４ｙをジメチルホルムアミド２０ｍ１にとかしトリエ
チルアミン０．７ｍ１を加えた。
両者を−１０℃以下で混合し、−７℃にて２０時間かき
まぜた。減圧濃縮乾固し、残渣を酢酸エチル２００ｍ１
と飽和食塩水２００ｍ１にとかし振りまぜた。
まぜた。減圧濃縮乾固し、残渣を酢酸エチル２００ｍ１
と飽和食塩水２００ｍ１にとかし振りまぜた。
有機層はもう一度飽和食塩水２００ｍ１と振りまぜた後
、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し残留
物をシリカゲルカラムクロマトグラフイ一（カラムの大
きさ３Ｘ２０ＣＴｆＬ、溶媒系＝クロロホルムリメチル
アルコール：酢酸＝２０：２：１と２０：４：１）にて
精製した。主留分を濃縮乾固した後、酢酸１００ａにと
かし凍結乾燥し、ｔーブチルオキシカルボニル−Ｌ−フ
エニルアラニル一Ｌ−セリル一Ｌ−アルギニン−Ｐ−ニ
トロアニリド塩酸塩を得た。収量 ２．３５ｙ（収率７
１％） 融点 １５０℃（分解）比旋光度 〔α〕＝−
２３．１（Ｃ＝０．６４、ＤＭＦ）元素分析値：Ｃ２９
Ｈ４ＯＮ８Ｏ８、ＨＣｌ、ＣＨ３ＣＯＯＨとしての計算
値：Ｃ：５１．３４％、Ｈ：６．２５％、Ｎ：１５．４
５％実測値 Ｃ：５１．４０％、Ｈ：６，４１％、Ｎ：
１４．９６％ここで得られた化合物６６５ｆ７（１ミリ
モル）を、２規定塩化水素酢酸溶液５０ａに溶解し、室
温下３０分後濃縮乾固した。
、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し残留
物をシリカゲルカラムクロマトグラフイ一（カラムの大
きさ３Ｘ２０ＣＴｆＬ、溶媒系＝クロロホルムリメチル
アルコール：酢酸＝２０：２：１と２０：４：１）にて
精製した。主留分を濃縮乾固した後、酢酸１００ａにと
かし凍結乾燥し、ｔーブチルオキシカルボニル−Ｌ−フ
エニルアラニル一Ｌ−セリル一Ｌ−アルギニン−Ｐ−ニ
トロアニリド塩酸塩を得た。収量 ２．３５ｙ（収率７
１％） 融点 １５０℃（分解）比旋光度 〔α〕＝−
２３．１（Ｃ＝０．６４、ＤＭＦ）元素分析値：Ｃ２９
Ｈ４ＯＮ８Ｏ８、ＨＣｌ、ＣＨ３ＣＯＯＨとしての計算
値：Ｃ：５１．３４％、Ｈ：６．２５％、Ｎ：１５．４
５％実測値 Ｃ：５１．４０％、Ｈ：６，４１％、Ｎ：
１４．９６％ここで得られた化合物６６５ｆ７（１ミリ
モル）を、２規定塩化水素酢酸溶液５０ａに溶解し、室
温下３０分後濃縮乾固した。
残渣に酢酸２００ｍ１を加え凍結乾燥することによりＬ
−フエニルアラニル一Ｌ−セリル一Ｌ−アルギニン−ｐ
−ニトａアニリド２酢酸塩５９０ηを得た。比旋光度
〔α〕賃＝−２５．８。
−フエニルアラニル一Ｌ−セリル一Ｌ−アルギニン−ｐ
−ニトａアニリド２酢酸塩５９０ηを得た。比旋光度
〔α〕賃＝−２５．８。
（Ｃ＝１．１、ＤＭＦ）元素分析：
Ｃ２４Ｈ３４Ｎ８Ｏ６Ｃｌ２・２ＣＨ３Ｃ００Ｈ−Ｈ２
Ｏとしての計算値 Ｃ：４５，４７％、Ｈ：６．００％
、Ｎ：１５．１５％実測値 Ｃ：４５．８１％、Ｈ：５
．７７％、Ｎ：１５．０５％実施例 ２ Ｌ−スレオニン１３．１ｆｉ！にエチルアルコール２５
０ｍ１を加え塩化水素ガスを吹き込み飽和させ室温にて
２０時間放置した後、減圧濃縮乾固した。
Ｏとしての計算値 Ｃ：４５，４７％、Ｈ：６．００％
、Ｎ：１５．１５％実測値 Ｃ：４５．８１％、Ｈ：５
．７７％、Ｎ：１５．０５％実施例 ２ Ｌ−スレオニン１３．１ｆｉ！にエチルアルコール２５
０ｍ１を加え塩化水素ガスを吹き込み飽和させ室温にて
２０時間放置した後、減圧濃縮乾固した。
残留物にジクロロメタン２００ｍ１を加えトリエチルア
ミン１５．４ｍ１を加えた。この溶液にｔ−ブチルオキ
シカルボニル−Ｌ−ロイシン−Ｎ−ヒドロキシスクシン
イミドエステル３２．８７をテトラヒドロフラン２００
ｍ１にとかし加えた。室温にて１５時間かきまぜた後、
減圧濃縮乾固した。残渣を酢酸エチル３００ｍ１と１／
２Ｎ−ＨＣｌｌＯＯｍｌにとかし振りまぜつづいて有機
層を５％重炭酸水素ソーダー水溶液１００ｍ１、水１０
０７７Ｚ１と順次振りまぜた後、有機層を硫酸マグネシ
ウムで乾燥した。乾燥剤を▲去した後、減圧濃縮乾固し
、残留物に酢酸エチル５０ｍ１とｎ−ヘキサン４００７
ｎ１を加え冷してガラス棒でこすつて結晶化した。Ｐ取
しｎ−ヘキサンで洗浄し、ｔ−ブチルオキシカルボニル
−Ｌ−ロイシル一Ｌ−スレオニンエチルエステルを得た
。収量 ３４ｙ（９４％） 融点 ６７〜７０℃ 比旋光度 〔α〕甘＝−１９．３（Ｃ＝１．９５、ＤＭ
Ｆ）元素分析値 Ｃｌ７Ｈ３２Ｎ２Ｏ６としての計算値
Ｃ：５６．６４％、Ｈ：８．９５％、Ｎ：７．７７％
実測値 Ｃ：５７．１６％、Ｈ：９．４０％、Ｎ：７．
４０％ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシルＬ−
スレオニンエチルエステル１８７をメチルアルコール５
０ｍ１にとかし８０％ヒドラジン１水和物７．５ｍ１を
加え室温にて一夜かきまぜた後減圧濃縮乾固した。
ミン１５．４ｍ１を加えた。この溶液にｔ−ブチルオキ
シカルボニル−Ｌ−ロイシン−Ｎ−ヒドロキシスクシン
イミドエステル３２．８７をテトラヒドロフラン２００
ｍ１にとかし加えた。室温にて１５時間かきまぜた後、
減圧濃縮乾固した。残渣を酢酸エチル３００ｍ１と１／
２Ｎ−ＨＣｌｌＯＯｍｌにとかし振りまぜつづいて有機
層を５％重炭酸水素ソーダー水溶液１００ｍ１、水１０
０７７Ｚ１と順次振りまぜた後、有機層を硫酸マグネシ
ウムで乾燥した。乾燥剤を▲去した後、減圧濃縮乾固し
、残留物に酢酸エチル５０ｍ１とｎ−ヘキサン４００７
ｎ１を加え冷してガラス棒でこすつて結晶化した。Ｐ取
しｎ−ヘキサンで洗浄し、ｔ−ブチルオキシカルボニル
−Ｌ−ロイシル一Ｌ−スレオニンエチルエステルを得た
。収量 ３４ｙ（９４％） 融点 ６７〜７０℃ 比旋光度 〔α〕甘＝−１９．３（Ｃ＝１．９５、ＤＭ
Ｆ）元素分析値 Ｃｌ７Ｈ３２Ｎ２Ｏ６としての計算値
Ｃ：５６．６４％、Ｈ：８．９５％、Ｎ：７．７７％
実測値 Ｃ：５７．１６％、Ｈ：９．４０％、Ｎ：７．
４０％ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシルＬ−
スレオニンエチルエステル１８７をメチルアルコール５
０ｍ１にとかし８０％ヒドラジン１水和物７．５ｍ１を
加え室温にて一夜かきまぜた後減圧濃縮乾固した。
残渣をエチルアルコール５０ｍ１にとかしエチルエーテ
ルを加えゲル状固体を得た。
ルを加えゲル状固体を得た。
▲取しエチルエーテルで洗浄しｔ−ブチルオキシカルボ
ニルＬ−ロイシル一Ｌ−スレオニンヒドラジドを得た。
収量 １５７（収率８７％）融点 １４６〜１４８℃ 比旋光度 〔α〕ヤ＝−２０．８（Ｃ＝１．４６、ＤＭ
Ｆ）元素分析値 Ｃｌ５Ｈ３ＯＮ４Ｏ５としての計算値
Ｃ：５２．００％、Ｈ：８，７３％、Ｎ：１６．１８
％実測値 Ｃ：５２．２９％．Ｈ：８．８７％、Ｎ：１
６．２０％ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシル
一Ｌ−スレオニンヒドラジド２．６０７をジメチルホル
ムアミド３０ｍ１にとかし、６．３規定一塩化水素ジオ
キサン溶液２．４ｍ１を加え−３０℃に冷しイソアミル
ナイトライト１．１７ｔを加え−１５℃にて１５分間か
きまぜた後−７０℃に冷しトリエチルアミン２．１ｍ１
！を加えた。
ニルＬ−ロイシル一Ｌ−スレオニンヒドラジドを得た。
収量 １５７（収率８７％）融点 １４６〜１４８℃ 比旋光度 〔α〕ヤ＝−２０．８（Ｃ＝１．４６、ＤＭ
Ｆ）元素分析値 Ｃｌ５Ｈ３ＯＮ４Ｏ５としての計算値
Ｃ：５２．００％、Ｈ：８，７３％、Ｎ：１６．１８
％実測値 Ｃ：５２．２９％．Ｈ：８．８７％、Ｎ：１
６．２０％ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシル
一Ｌ−スレオニンヒドラジド２．６０７をジメチルホル
ムアミド３０ｍ１にとかし、６．３規定一塩化水素ジオ
キサン溶液２．４ｍ１を加え−３０℃に冷しイソアミル
ナイトライト１．１７ｔを加え−１５℃にて１５分間か
きまぜた後−７０℃に冷しトリエチルアミン２．１ｍ１
！を加えた。
一方Ｌ−アルギニン−Ｐ−ニトロアニリド２塩酸塩１．
８４７をジメチルホルムアミド２０ｍ１にとかしトリエ
チルアミン０．７ｄを加えた。
８４７をジメチルホルムアミド２０ｍ１にとかしトリエ
チルアミン０．７ｄを加えた。
両者を−１０℃以下で混合し、Ｏ℃にて４５時間かきま
ぜた。
ぜた。
減圧濃縮乾固し、残渣を酢酸エチル２００ｍ１と飽和食
塩水２００ｍ１にとかし振りまぜた。
塩水２００ｍ１にとかし振りまぜた。
有機層はもう一度飽和食塩水２００ｍ１と振りまぜた後
、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し残留
物をシリカゲルカラムクロマトグラフイ一（カラムの大
きさ３×２０ｃｍ１溶媒系・クロロホルムリメチルアル
コール：酢酸：２０：２：１と２０：４：１）にて精製
した。主留分を濃縮乾固した後、酢酸１００ｍ１にとか
し凍結乾燥しｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシ
ル一Ｌ−スレオニルＬ−アルギニン−Ｐ−ニトロアニリ
ド塩酸塩を得た。収量 １．８２Ｖ（５６％） 融点 １５２℃（分解） 比旋光度 〔α〕甘＝−３１，６（Ｃ＝０．８２、ＤＭ
Ｆ）元素分析値 Ｃ２７Ｈ４４Ｎ８Ｏ８・ＨＣｌ−ＣＨ
３ＣＯＯＨとしての計算値 Ｃ：４９．３９％、Ｈ：７
．００％、Ｎ：１５．８９％実測値 Ｃ：４９．６７％
０Ｈ：７．３０％、Ｎ：１５．２４％実施例 ３ ｔ−ブチルオキJャJルボニル一Ｌ−フエニルアラニル一
Ｌ−セリンヒドラジド２．７５７をジメチルホルムアミ
ド３０ｍ１にとかし６．３規定塩化水素ジオキサン溶液
２．４ｍ１を加え−３０℃に冷しイソアミルナイトライ
ト１．１７７を加え−１５℃にて１５分間かきまぜた後
−７０℃に冷しトリエチルアミン２．１ｍ１を加えた。
、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し残留
物をシリカゲルカラムクロマトグラフイ一（カラムの大
きさ３×２０ｃｍ１溶媒系・クロロホルムリメチルアル
コール：酢酸：２０：２：１と２０：４：１）にて精製
した。主留分を濃縮乾固した後、酢酸１００ｍ１にとか
し凍結乾燥しｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシ
ル一Ｌ−スレオニルＬ−アルギニン−Ｐ−ニトロアニリ
ド塩酸塩を得た。収量 １．８２Ｖ（５６％） 融点 １５２℃（分解） 比旋光度 〔α〕甘＝−３１，６（Ｃ＝０．８２、ＤＭ
Ｆ）元素分析値 Ｃ２７Ｈ４４Ｎ８Ｏ８・ＨＣｌ−ＣＨ
３ＣＯＯＨとしての計算値 Ｃ：４９．３９％、Ｈ：７
．００％、Ｎ：１５．８９％実測値 Ｃ：４９．６７％
０Ｈ：７．３０％、Ｎ：１５．２４％実施例 ３ ｔ−ブチルオキJャJルボニル一Ｌ−フエニルアラニル一
Ｌ−セリンヒドラジド２．７５７をジメチルホルムアミ
ド３０ｍ１にとかし６．３規定塩化水素ジオキサン溶液
２．４ｍ１を加え−３０℃に冷しイソアミルナイトライ
ト１．１７７を加え−１５℃にて１５分間かきまぜた後
−７０℃に冷しトリエチルアミン２．１ｍ１を加えた。
一方、７一（カルボベンゾキシ一Ｌ−アルギニル）アミ
ノ−４−メチルクマリン塩酸塩２．５１７をメチルアル
コール５０ｍ１と酢酸１０Ｗ１１と水１０ｄにとかし５
％パラジウム一炭素触媒２５０７を加えかきまぜながら
水素ガスを室温、常圧にて３時間通じ接触カンゲンを行
つた、触媒を▲去した後減圧濃縮乾固した。残渣をジメ
チルホルムアミド２０ｄと水１５ｄと酢酸５ｍ１にとか
した。両者を−１０℃以下で混合し、トリエチルアミン
を加え、ＰＨを７に調整した後−７℃にて２０時間かき
まぜた。減圧濃縮乾固し残渣を酢酸エチル２００ｍ１と
メチルアルコール５０ｍｊと飽和食塩水２００Ｔ！Ｌｌ
にとかし振りまぜた。有機層はもう一度飽和食塩水１０
０ｍ１と振りまぜた後、有機層を濃縮乾固した。残渣を
シリカゲルカラムクロマトグラフイ一により精製した、
（カラムの大きさ３Ｘ２０ｃｍ１溶媒系 クロロホルム
リメチルアルコール：酢酸＝２０：２：１と２０：４：
１）主留分を濃縮乾固した後、酢酸１００ｍ１にとかし
凍結乾燥し７一（ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フ
エニルアラニル一Ｌ−セリル一Ｌ一アルギニル）アミノ
−４−メチルクマリン塩酸塩を得た。収量 ２．２ｙ（
６３％） 融点 １５５℃（分解） 比旋光度 〔α〕甘一一２６．２（Ｃ＝０．６１、ＤＭ
Ｆ）元素分析値 Ｃ３３Ｈ４３Ｎ７Ｏ８・ＨＣＩｌ２Ｃ
Ｈ３ＣＯＯＨとしての計算値 Ｃ：５４．０４％、Ｈ：
６．３７％、Ｎ：１１．９３％実測値 Ｃ：５３．０９
％、Ｈ：６．４４％、Ｎ：１１．７６％実施例 ４ ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシル一Ｌ−スレ
オニンヒドラジド２．６０７をジメチルホルムアミド３
０ｍ１にとかし６．３規定一塩化水素ジオキサン溶液２
．４ｍ１を加え−３０℃に冷しイソアミルナイトライト
１．１７ｆｉ！を加え−１５℃にて１５分間かきまぜた
後−７０℃に冷しトリエチルアミン２．１ｍ１を加えた
。
ノ−４−メチルクマリン塩酸塩２．５１７をメチルアル
コール５０ｍ１と酢酸１０Ｗ１１と水１０ｄにとかし５
％パラジウム一炭素触媒２５０７を加えかきまぜながら
水素ガスを室温、常圧にて３時間通じ接触カンゲンを行
つた、触媒を▲去した後減圧濃縮乾固した。残渣をジメ
チルホルムアミド２０ｄと水１５ｄと酢酸５ｍ１にとか
した。両者を−１０℃以下で混合し、トリエチルアミン
を加え、ＰＨを７に調整した後−７℃にて２０時間かき
まぜた。減圧濃縮乾固し残渣を酢酸エチル２００ｍ１と
メチルアルコール５０ｍｊと飽和食塩水２００Ｔ！Ｌｌ
にとかし振りまぜた。有機層はもう一度飽和食塩水１０
０ｍ１と振りまぜた後、有機層を濃縮乾固した。残渣を
シリカゲルカラムクロマトグラフイ一により精製した、
（カラムの大きさ３Ｘ２０ｃｍ１溶媒系 クロロホルム
リメチルアルコール：酢酸＝２０：２：１と２０：４：
１）主留分を濃縮乾固した後、酢酸１００ｍ１にとかし
凍結乾燥し７一（ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フ
エニルアラニル一Ｌ−セリル一Ｌ一アルギニル）アミノ
−４−メチルクマリン塩酸塩を得た。収量 ２．２ｙ（
６３％） 融点 １５５℃（分解） 比旋光度 〔α〕甘一一２６．２（Ｃ＝０．６１、ＤＭ
Ｆ）元素分析値 Ｃ３３Ｈ４３Ｎ７Ｏ８・ＨＣＩｌ２Ｃ
Ｈ３ＣＯＯＨとしての計算値 Ｃ：５４．０４％、Ｈ：
６．３７％、Ｎ：１１．９３％実測値 Ｃ：５３．０９
％、Ｈ：６．４４％、Ｎ：１１．７６％実施例 ４ ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシル一Ｌ−スレ
オニンヒドラジド２．６０７をジメチルホルムアミド３
０ｍ１にとかし６．３規定一塩化水素ジオキサン溶液２
．４ｍ１を加え−３０℃に冷しイソアミルナイトライト
１．１７ｆｉ！を加え−１５℃にて１５分間かきまぜた
後−７０℃に冷しトリエチルアミン２．１ｍ１を加えた
。
一方、７一（カルボベンゾキシ一Ｌ−アルギニル）アミ
ノ−４−メチルクマリン塩酸塩２．５１７をメチルアル
コール５０ＷＬＩと酢酸１０ｍ１と水１０ｍ１にとかし
５％パラジウム一炭素触媒２５０ｙを加えかきまぜなが
ら水素ガスを室温常圧にて３時間通じ接触カンゲンを行
つた。触媒を▲去した後、減圧濃縮乾固し残渣をジメチ
ルホルムアミド２０ｍ１と水１５ｍ１と酢酸５ｍ１にと
かした。両者を−１０℃以下で混合しトリエチルアミン
を加えＰＨ７に調整した後、Ｏ℃にて４５時間かきまぜ
た。
ノ−４−メチルクマリン塩酸塩２．５１７をメチルアル
コール５０ＷＬＩと酢酸１０ｍ１と水１０ｍ１にとかし
５％パラジウム一炭素触媒２５０ｙを加えかきまぜなが
ら水素ガスを室温常圧にて３時間通じ接触カンゲンを行
つた。触媒を▲去した後、減圧濃縮乾固し残渣をジメチ
ルホルムアミド２０ｍ１と水１５ｍ１と酢酸５ｍ１にと
かした。両者を−１０℃以下で混合しトリエチルアミン
を加えＰＨ７に調整した後、Ｏ℃にて４５時間かきまぜ
た。
減圧濃縮乾固し残渣を酢酸エチル２００ｍ１とメチルア
ルコール５０ｍ１と飽和食塩水２００ｄにとかし振りま
ぜた。有機層はもう一度飽和食塩水１００ｍ１と振りま
ぜた後、有機層を濃縮乾固した。残渣をシリカゲルクロ
マトグラフイ一により精製した。（カラムの大きさ３×
２０ｃｍ１溶媒系 クロロホルムリメチルアルコール：
酢酸＝２０：２：１と２０：４：１）主留分を濃縮乾固
した後、酢酸１００ｍ１にとかし凍結乾燥し、７一（ｔ
−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシル一Ｌ−スレオ
ニル一Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メチルクマリン塩
酸塩を得た〇収量 １．９０７（５６％）融点 １６０
℃（分解） 比旋光度 〔α〕帛一一４０．０（Ｃ−０．３５、ＤＭ
Ｆ）元素分析値 Ｃ３，Ｈ４７Ｎ７Ｏ８・ＨＣｌ・２ＣＨ３Ｃ００Ｈとし
ての計算値 Ｃ：５２．３９％、Ｈ：７．０４％、Ｎ：
１２．２２％実測値 Ｃ：５１．９６％、Ｈ：７．１９
％、Ｎ：１２．４４％実施例 ５ ７−（カルボベンゾキシ一Ｌ−アルギニル）アミノ−４
−メチルクマリン塩酸塩５．０２ｙを酢酸２０ｍ１１メ
チルアルコール１００ｍ１と水２０ｍ１にとかし５％パ
ラジウム一炭素触媒５００ηを加えかきまぜながら室温
、常圧にて水素ガスを３時間通じ接触還元を行つた。
ルコール５０ｍ１と飽和食塩水２００ｄにとかし振りま
ぜた。有機層はもう一度飽和食塩水１００ｍ１と振りま
ぜた後、有機層を濃縮乾固した。残渣をシリカゲルクロ
マトグラフイ一により精製した。（カラムの大きさ３×
２０ｃｍ１溶媒系 クロロホルムリメチルアルコール：
酢酸＝２０：２：１と２０：４：１）主留分を濃縮乾固
した後、酢酸１００ｍ１にとかし凍結乾燥し、７一（ｔ
−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシル一Ｌ−スレオ
ニル一Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メチルクマリン塩
酸塩を得た〇収量 １．９０７（５６％）融点 １６０
℃（分解） 比旋光度 〔α〕帛一一４０．０（Ｃ−０．３５、ＤＭ
Ｆ）元素分析値 Ｃ３，Ｈ４７Ｎ７Ｏ８・ＨＣｌ・２ＣＨ３Ｃ００Ｈとし
ての計算値 Ｃ：５２．３９％、Ｈ：７．０４％、Ｎ：
１２．２２％実測値 Ｃ：５１．９６％、Ｈ：７．１９
％、Ｎ：１２．４４％実施例 ５ ７−（カルボベンゾキシ一Ｌ−アルギニル）アミノ−４
−メチルクマリン塩酸塩５．０２ｙを酢酸２０ｍ１１メ
チルアルコール１００ｍ１と水２０ｍ１にとかし５％パ
ラジウム一炭素触媒５００ηを加えかきまぜながら室温
、常圧にて水素ガスを３時間通じ接触還元を行つた。
触媒を▲去し溶媒を減圧留去し得られた残渣をジメチル
ホルムアミド２０ｍ１と水２ｍ１にとかし、ｔ−ブチル
オキシカルボニニル一０−ベンジル−Ｌ−セリン−Ｎ−
ヒドロキシスクシンイミドエステル４．７ｆ７を加え２
０時間かきまぜた。溶媒を減圧留去しシリカゲルカラム
クロマトグラフイ一（カラムの大きさ４×２０Ｃ！！Ｌ
溶媒系クロロホルムリメチルアルコール：酢酸＝８５：
１５：５）にて精製し主留分を濃縮乾固し残渣にエーテ
ルを加え粉末とし▲取し７一（ｔ−ブチルオキシカルボ
ニル−０−ベンジル−Ｌ−セリル一Ｌ−アルギニル）ア
ミノ−４−メチルクマリン塩酸塩を得た。
ホルムアミド２０ｍ１と水２ｍ１にとかし、ｔ−ブチル
オキシカルボニニル一０−ベンジル−Ｌ−セリン−Ｎ−
ヒドロキシスクシンイミドエステル４．７ｆ７を加え２
０時間かきまぜた。溶媒を減圧留去しシリカゲルカラム
クロマトグラフイ一（カラムの大きさ４×２０Ｃ！！Ｌ
溶媒系クロロホルムリメチルアルコール：酢酸＝８５：
１５：５）にて精製し主留分を濃縮乾固し残渣にエーテ
ルを加え粉末とし▲取し７一（ｔ−ブチルオキシカルボ
ニル−０−ベンジル−Ｌ−セリル一Ｌ−アルギニル）ア
ミノ−４−メチルクマリン塩酸塩を得た。
収量 ２．６７（収率４０％）。
融点 １５０℃（分解）
比旋光度 〔α〕青＝−２０，５（Ｃ＝０．４３、ＤＭ
Ｆ）。
Ｆ）。
元素分析値：Ｃ３ｌＨ４ＯＯ７Ｎ６・ＨＣｌ−ＣＨ３Ｃ
ＯＯＨとしての計算値 Ｃ：５６，２０％、Ｈ：６．４
３％、Ｎ：１１．９２％実測値 Ｃ：５５．７１％、Ｈ
：６．２９％、Ｎ：１２．００％実施例 ６ ７−（カルボベンゾキノン一Ｌ−アルギニル）アミノ−
４−メチルクマリ７塩酸塩５．０２７を酢酸２０ｍ１１
メチルアルコール１００ｍ１１水２０ｍ１にとかし５％
パラジウム一炭素触媒５００〜を加えかきまぜながら室
温、常圧にて水素ガスを３時間通じ接触還元を行つた。
ＯＯＨとしての計算値 Ｃ：５６，２０％、Ｈ：６．４
３％、Ｎ：１１．９２％実測値 Ｃ：５５．７１％、Ｈ
：６．２９％、Ｎ：１２．００％実施例 ６ ７−（カルボベンゾキノン一Ｌ−アルギニル）アミノ−
４−メチルクマリ７塩酸塩５．０２７を酢酸２０ｍ１１
メチルアルコール１００ｍ１１水２０ｍ１にとかし５％
パラジウム一炭素触媒５００〜を加えかきまぜながら室
温、常圧にて水素ガスを３時間通じ接触還元を行つた。
触媒を▲去し溶媒を減圧留去し得られた残渣をジメチル
ホルムアミド２０ｍ１と水２ｍ１にとかし、ｔ−ブチル
オキシカルボニル−０−ベンジル−Ｌースレオニン−Ｎ
−ヒドロキシスクシンイミドエステル４，９７を加え２
０時間かきまぜた後、減圧濃縮乾固し残渣をシリカゲル
カラムクロマトグラフイ一（カラムの大きさ４×２０へ
溶媒系クロロホルムリメチルアルコール：酢酸−９５：
５：３と８５：１５：５）にて精製した。
ホルムアミド２０ｍ１と水２ｍ１にとかし、ｔ−ブチル
オキシカルボニル−０−ベンジル−Ｌースレオニン−Ｎ
−ヒドロキシスクシンイミドエステル４，９７を加え２
０時間かきまぜた後、減圧濃縮乾固し残渣をシリカゲル
カラムクロマトグラフイ一（カラムの大きさ４×２０へ
溶媒系クロロホルムリメチルアルコール：酢酸−９５：
５：３と８５：１５：５）にて精製した。
主留分を濃縮し残渣を熱酢酸２０Ｗ１１にとかし再結晶
し、７一（ｔ−ブチルオキシカルボニル−０−ベンジル
一Ｌ−スレオニル一Ｌ−アルギニル）アミノ−４ーメチ
ルクマリン塩酸塩を得た。収量 ３．１７０ 融点 ２１８℃（分解） 比旋光度 〔α〕青一一２４．４（Ｃ＝０．７１、ＤＭ
Ｆ）元素分析値 Ｃ３２Ｈ４２Ｏ７Ｎ６・ＨＣｌ．ＣＨ
３ＣＯＯＨとしての計算値 Ｃ：５６．７７％、Ｈ：６
．５９％、Ｎ：１１．６９％実測値 Ｃ：５７．３３％
、Ｈ：６．５１％、Ｎ：１１．７４％実施例 ７ Jヨ黶iｔ−ブチルオキシカルボニル−０−ベンジル−Ｌ
−セリル一Ｌ−アルギニル）アミノ−４メチルクマリン
塩酸塩１．２９７に酢酸４ｍ１とＰ−トルエンスルホン
酸１水和物４５９ｍ９を加え２０℃にて３時間かきまぜ
た後エーテル１００ｍ１を加え生じる粉末を▲取した。
し、７一（ｔ−ブチルオキシカルボニル−０−ベンジル
一Ｌ−スレオニル一Ｌ−アルギニル）アミノ−４ーメチ
ルクマリン塩酸塩を得た。収量 ３．１７０ 融点 ２１８℃（分解） 比旋光度 〔α〕青一一２４．４（Ｃ＝０．７１、ＤＭ
Ｆ）元素分析値 Ｃ３２Ｈ４２Ｏ７Ｎ６・ＨＣｌ．ＣＨ
３ＣＯＯＨとしての計算値 Ｃ：５６．７７％、Ｈ：６
．５９％、Ｎ：１１．６９％実測値 Ｃ：５７．３３％
、Ｈ：６．５１％、Ｎ：１１．７４％実施例 ７ Jヨ黶iｔ−ブチルオキシカルボニル−０−ベンジル−Ｌ
−セリル一Ｌ−アルギニル）アミノ−４メチルクマリン
塩酸塩１．２９７に酢酸４ｍ１とＰ−トルエンスルホン
酸１水和物４５９ｍ９を加え２０℃にて３時間かきまぜ
た後エーテル１００ｍ１を加え生じる粉末を▲取した。
この粉末をジメチルホルムアミド１０ＴＬＩにとかしト
リエチルアミンを加えＰＨ７に調整し、ｔ−ブチルオキ
シカルボニル−Ｌ−フエニルアラニン一Ｎ−ヒドロキシ
スクシンイミドエステル１．０９７を加え室温２０時間
かきまぜた。濃縮乾固し残留物を酢酸エチル５０ｍ１に
とかし０．５規定一塩酸、水各５０ｍ１で洗浄し硫酸マ
グネシウムで乾燥した。濃縮乾固し残留物をシリカゲル
カラムクロマトグラフイ一（カラムの大きさ２×１５ｃ
ｒｆＬ１溶媒系クロロホルムリメチルアルコール；酢酸
−９５：５：３と９５：３０：３）により精製した。
リエチルアミンを加えＰＨ７に調整し、ｔ−ブチルオキ
シカルボニル−Ｌ−フエニルアラニン一Ｎ−ヒドロキシ
スクシンイミドエステル１．０９７を加え室温２０時間
かきまぜた。濃縮乾固し残留物を酢酸エチル５０ｍ１に
とかし０．５規定一塩酸、水各５０ｍ１で洗浄し硫酸マ
グネシウムで乾燥した。濃縮乾固し残留物をシリカゲル
カラムクロマトグラフイ一（カラムの大きさ２×１５ｃ
ｒｆＬ１溶媒系クロロホルムリメチルアルコール；酢酸
−９５：５：３と９５：３０：３）により精製した。
主留分を濃縮乾固し残留物を酢酸５０ｍ１にとかし凍結
乾燥し、７一（ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フエ
ニルアラニル一０−ベンジル−Ｌーセリル一Ｌ−アルギ
ニル）アミノ−４−メチルクマリン塩酸塩を得た。収量
１．２１７（収率７６％）。
乾燥し、７一（ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フエ
ニルアラニル一０−ベンジル−Ｌーセリル一Ｌ−アルギ
ニル）アミノ−４−メチルクマリン塩酸塩を得た。収量
１．２１７（収率７６％）。
融点 １５０℃（分解）
比旋光度 〔α〕一一１０．６（Ｃ−０．５２、ＤＭＦ
）元素分析値：Ｃ４ＯＨ４９Ｏ８Ｎ７・ＨＣｌ．ＣＨ３
ＣＯＯＨとして計算値 Ｃ：５９，１８覧Ｈ：６．３９
％、Ｎ：１１，５１％実測値 Ｃ：５９．５１％、Ｈ：
６．１０％、Ｎ：１０．８３％ここで得られた化合物７
９２〜（１ミリモル）を弗化水素反応容器中アニソール
１．０ｍ１および弗化水素１０ｍ１と共にＯ℃１５分間
反応させた後、弗化水素を留去した。
）元素分析値：Ｃ４ＯＨ４９Ｏ８Ｎ７・ＨＣｌ．ＣＨ３
ＣＯＯＨとして計算値 Ｃ：５９，１８覧Ｈ：６．３９
％、Ｎ：１１，５１％実測値 Ｃ：５９．５１％、Ｈ：
６．１０％、Ｎ：１０．８３％ここで得られた化合物７
９２〜（１ミリモル）を弗化水素反応容器中アニソール
１．０ｍ１および弗化水素１０ｍ１と共にＯ℃１５分間
反応させた後、弗化水素を留去した。
残留物にジエチルエーテルを加え可溶物を除去した。残
渣を水４０ｍ１に溶解し、タウケミカル社製イオン交換
樹脂「ダウエツクス１×２」（アセテート型）２×１５
ｃｒｒＬのカラムを通過させた。水１００ＷＬ１を使用
し、溶出した。溶出液を濃縮乾固し、残留物をフアルマ
シア社製「セフアデツクスＧ−２５」４×８０ＣＴＩＬ
のカラムを使用し、溶媒系としてｎ−ブタノール／酢酸
／水（４：１：５）を使用する分配クロマトグラフィ一
で精製した。主留分を濃縮し、得られた残留物にジエチ
ルエーテルを加え粉末状の７一（Ｌーフエニルアラニル
一Ｌ−セリル一Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メチルク
マリン２酢酸塩（収量２１０η）を得た。比旋光度 〔
α〕青一一２３．１酸（Ｃ＝０．７１、ＤＭＦ）元素分
析：Ｃ３２Ｈ４３Ｎ７ＯｌＯ・２Ｈ２０としての計算値
Ｃ：５３．２５％、Ｈ：６．５６％、Ｎ：１３．５９
％実測値 Ｃ：５３．０１％、Ｈ：６．７１％、Ｎ：１
３．７７％実施例 ８ 実施例５で得られた７一（ｔ−ブチルオキシカルボニル
−０−ベンジル−Ｌ−セリル一Ｌ−アルギニル）アミノ
−４−メチルクマリン塩酸塩６４５η（１ミリモル）を
、実施例７と同様の方法により弗化水素法で保護基を脱
離することにより、７一（Ｌ−セリル一Ｌ−アルギニル
）アミノ−４−メチルクマリン２酢酸塩（シリカゲル薄
層クロマトグラフイ一で単一スポツトを与える。
渣を水４０ｍ１に溶解し、タウケミカル社製イオン交換
樹脂「ダウエツクス１×２」（アセテート型）２×１５
ｃｒｒＬのカラムを通過させた。水１００ＷＬ１を使用
し、溶出した。溶出液を濃縮乾固し、残留物をフアルマ
シア社製「セフアデツクスＧ−２５」４×８０ＣＴＩＬ
のカラムを使用し、溶媒系としてｎ−ブタノール／酢酸
／水（４：１：５）を使用する分配クロマトグラフィ一
で精製した。主留分を濃縮し、得られた残留物にジエチ
ルエーテルを加え粉末状の７一（Ｌーフエニルアラニル
一Ｌ−セリル一Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メチルク
マリン２酢酸塩（収量２１０η）を得た。比旋光度 〔
α〕青一一２３．１酸（Ｃ＝０．７１、ＤＭＦ）元素分
析：Ｃ３２Ｈ４３Ｎ７ＯｌＯ・２Ｈ２０としての計算値
Ｃ：５３．２５％、Ｈ：６．５６％、Ｎ：１３．５９
％実測値 Ｃ：５３．０１％、Ｈ：６．７１％、Ｎ：１
３．７７％実施例 ８ 実施例５で得られた７一（ｔ−ブチルオキシカルボニル
−０−ベンジル−Ｌ−セリル一Ｌ−アルギニル）アミノ
−４−メチルクマリン塩酸塩６４５η（１ミリモル）を
、実施例７と同様の方法により弗化水素法で保護基を脱
離することにより、７一（Ｌ−セリル一Ｌ−アルギニル
）アミノ−４−メチルクマリン２酢酸塩（シリカゲル薄
層クロマトグラフイ一で単一スポツトを与える。
）を得た。得られた全量をＤＭＦ２Ｏｍｌに溶解し、こ
れにカルボベンゾキシ一Ｌ−フエニルアラニンＮ−ヒド
ロキシスクシンイミドエステル４００Ｗ！９を加え室温
で１夜かきまぜた後濃縮した。残留物を、「セフアデツ
クスＧ−２５］の４×８０？のカラムを使用し、溶媒系
として、ｎ−ブタノーノレ／酢酸／水／ｎ−ヘキサン（
４：１：５：２）を使用する分配クロマトグラフイ一に
より精製した。主留分を濃縮し残留物に酢酸５０ｍ１を
加え凍結乾燥することにより７一（Ｎα一カルボベンゾ
キシ一Ｌ−フエニルアラニル一Ｌ−セリル一Ｌ−アルギ
ニル）アミノ−４−メチルクマリン酢酸塩（収量１９０
η）を得た。比旋光度 〔α〕１譬一一２３．８ン（Ｃ
−０．８３、ＤＭＦ）元素分析値： Ｃ３６Ｈ４，Ｎ７Ｏ８・３ＣＨ３Ｃ００Ｈ・２Ｈ２０と
しての計算値 Ｃ：５５．０７％、Ｈ：６．２７％、Ｎ
：１０，７１％実測値 Ｃ：５４．６６％、Ｈ：６．２
８％、Ｎ：１０，８０％Ｍ因子の活性を沖淀した。
れにカルボベンゾキシ一Ｌ−フエニルアラニンＮ−ヒド
ロキシスクシンイミドエステル４００Ｗ！９を加え室温
で１夜かきまぜた後濃縮した。残留物を、「セフアデツ
クスＧ−２５］の４×８０？のカラムを使用し、溶媒系
として、ｎ−ブタノーノレ／酢酸／水／ｎ−ヘキサン（
４：１：５：２）を使用する分配クロマトグラフイ一に
より精製した。主留分を濃縮し残留物に酢酸５０ｍ１を
加え凍結乾燥することにより７一（Ｎα一カルボベンゾ
キシ一Ｌ−フエニルアラニル一Ｌ−セリル一Ｌ−アルギ
ニル）アミノ−４−メチルクマリン酢酸塩（収量１９０
η）を得た。比旋光度 〔α〕１譬一一２３．８ン（Ｃ
−０．８３、ＤＭＦ）元素分析値： Ｃ３６Ｈ４，Ｎ７Ｏ８・３ＣＨ３Ｃ００Ｈ・２Ｈ２０と
しての計算値 Ｃ：５５．０７％、Ｈ：６．２７％、Ｎ
：１０，７１％実測値 Ｃ：５４．６６％、Ｈ：６．２
８％、Ｎ：１０，８０％Ｍ因子の活性を沖淀した。
Ｍ因子（Ａ２８Ｏ−１．７２）、ａ因子
（Ａ２８Ｏ−０．０２８）及びＨＭＷキニノーゲン（Ｈ
ＭＷ−Ｋ）６５、３２．５、３．２５、０．６５又は０
Ｐモル／７１１１をそれぞれ５μｌずつ混合し、次いで
これにカオリン（１．２５Ｗ９／ＭＯｌＯμｌを加え、
３０分間、３７℃でインキユベート後、７一（ｔ−ブチ
ルオキシカルボニル−Ｌ−フエニルアラニル一Ｌ−セリ
ル一Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メチルクマリン（−
ＢＯｃ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ一Ａｒｇ−ＭＣＡ）（１０ｍＭ
）５μｌを加えて、反応により遊離した７ーアミノ一４
−メチルクマリン（＝ＡＭＣ）を日立螢光光度計を用い
て定量した。
ＭＷ−Ｋ）６５、３２．５、３．２５、０．６５又は０
Ｐモル／７１１１をそれぞれ５μｌずつ混合し、次いで
これにカオリン（１．２５Ｗ９／ＭＯｌＯμｌを加え、
３０分間、３７℃でインキユベート後、７一（ｔ−ブチ
ルオキシカルボニル−Ｌ−フエニルアラニル一Ｌ−セリ
ル一Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メチルクマリン（−
ＢＯｃ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ一Ａｒｇ−ＭＣＡ）（１０ｍＭ
）５μｌを加えて、反応により遊離した７ーアミノ一４
−メチルクマリン（＝ＡＭＣ）を日立螢光光度計を用い
て定量した。
なお、ａ因子は、０．１Ｍ塩化ナトリウムとウシ血清ア
ルブミン（０．１労／ｄ）を含む０．０２Ｍトリス緩衝
液（ＰＨ８．Ｏ）に溶解したものを用いた。結果を図１
に示した。
ルブミン（０．１労／ｄ）を含む０．０２Ｍトリス緩衝
液（ＰＨ８．Ｏ）に溶解したものを用いた。結果を図１
に示した。
これより、ＨＭＷ（ＨｉｇｈＭＯｌｅｃｕｌａｒＷｅｉ
ｇｈｔ）−Ｋの量に依存してＸＩａの活性が発現してい
ることがわかり、故に、ＢＯｃ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒ
ｇ−ＭＣＡを活用しつつＸ［ａの定量が可能であること
がわかる。表１に第因子（ＦａｃｔＯｒ［Ｘａ）第Ｍ因
子（ＦａｃｔＯｒＸＩａ）及び第因子（ＦａｃｔＯｒＸ
ｌＩａ）の本発明のメチルクマリン誘導体に対する相対
反応率を示した。
ｇｈｔ）−Ｋの量に依存してＸＩａの活性が発現してい
ることがわかり、故に、ＢＯｃ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒ
ｇ−ＭＣＡを活用しつつＸ［ａの定量が可能であること
がわかる。表１に第因子（ＦａｃｔＯｒ［Ｘａ）第Ｍ因
子（ＦａｃｔＯｒＸＩａ）及び第因子（ＦａｃｔＯｒＸ
ｌＩａ）の本発明のメチルクマリン誘導体に対する相対
反応率を示した。
これによると、ＢＯｃ−Ｐｈｅ一Ｓｅｒ−Ａｒｇ−ＭＣ
Ａは第ａ因子及び第因子によつても若干水解されるもの
の、この内第因子が第Ｍ因子の画分に夾雑してくること
は殆んどないので、第Ｍ因子の活性測定に影響する可能
性はない。また、第因子が夾雑していても、ＢＯｃ−Ｐ
ｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−ＭＣＡに対する水解能は約１／
５なので、殆んど無視できる。また、第Ｍａ因子の基質
として７一（ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシ
ル一Ｌ−スレオニル一Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メ
チルクマリン（＝ＢＯｃ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｍ
ＣＡ）がＢＯｃ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−ＭＣＡより
一層特異的であることがわかつた（表１参照）。
Ａは第ａ因子及び第因子によつても若干水解されるもの
の、この内第因子が第Ｍ因子の画分に夾雑してくること
は殆んどないので、第Ｍ因子の活性測定に影響する可能
性はない。また、第因子が夾雑していても、ＢＯｃ−Ｐ
ｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−ＭＣＡに対する水解能は約１／
５なので、殆んど無視できる。また、第Ｍａ因子の基質
として７一（ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ロイシ
ル一Ｌ−スレオニル一Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メ
チルクマリン（＝ＢＯｃ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｍ
ＣＡ）がＢＯｃ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−ＭＣＡより
一層特異的であることがわかつた（表１参照）。
その他、本発明のペプチド誘導体が第因子のすぐれた基
質となることを確認した。
質となることを確認した。
図１は第Ｍ因子（ＦａｃｔＯｒＸｌａ）の活性測定結果
を示したものである。
を示したものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるペプチド誘導体およびその酸付加塩。 ただし、式中のＲ＿１はセリル基、フエニルアラニル−
セリル基、スレオニル基、ロイシル基、フエニルアラニ
ル−セリル基、スレオニル基、ロイシル−スレオニル基
であり、Ｒ＿２は▲数式、化学式、表等があります▼又
は▲数式、化学式、表等があります▼あり、Ｎ末端−ア
ミノ基および水酸基は保護されていてもよい。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP53135634A JPS59499B2 (ja) | 1978-11-02 | 1978-11-02 | ペプチド誘導体 |
| US06/087,922 US4257939A (en) | 1978-11-02 | 1979-10-25 | Peptide derivative |
| SE7909032A SE448169B (sv) | 1978-11-02 | 1979-10-31 | Peptidderivat till anvendning som substrat for bestemning av enzymatisk aktivitet |
| DE19792944086 DE2944086A1 (de) | 1978-11-02 | 1979-10-31 | Peptidderivate |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP53135634A JPS59499B2 (ja) | 1978-11-02 | 1978-11-02 | ペプチド誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5562055A JPS5562055A (en) | 1980-05-10 |
| JPS59499B2 true JPS59499B2 (ja) | 1984-01-07 |
Family
ID=15156385
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP53135634A Expired JPS59499B2 (ja) | 1978-11-02 | 1978-11-02 | ペプチド誘導体 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4257939A (ja) |
| JP (1) | JPS59499B2 (ja) |
| DE (1) | DE2944086A1 (ja) |
| SE (1) | SE448169B (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4409140A (en) * | 1979-04-23 | 1983-10-11 | Smith Robert E | Substrates and method for determining enzymes |
| WO1982000641A1 (en) * | 1980-08-25 | 1982-03-04 | Ab Kabivitrum | Peptide substrates for determination of protease activity |
| US4388233A (en) * | 1981-05-15 | 1983-06-14 | The Regents Of The University Of California | Synthetic substrates for enzyme analysis |
| DE3244030A1 (de) * | 1982-11-27 | 1984-05-30 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Chromogene verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| FR2555577B1 (fr) * | 1983-11-24 | 1987-07-31 | Flork Michel | Nouveaux derives de peptides, leur procede de preparation et leur emploi comme reactif biologique |
| US9040046B2 (en) | 2011-01-31 | 2015-05-26 | Kai Xu | Sodium pump antibody agonists and methods of treating heart disease using the same |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE380257B (sv) * | 1972-05-02 | 1975-11-03 | Bofors Ab | Nya diagnostiskt verksamma substrat med hog specificitet till trombin och andra proteolytiska enzymer av typen peptidyl-peptid-hydrolaser |
| SE407058B (sv) * | 1974-12-05 | 1979-03-12 | Kabi Ab | Nya kromogena enzymsubstrat for serinproteaser |
| SE407571B (sv) * | 1975-07-11 | 1979-04-02 | Kabi Ab | Nya kromogena enzymsubstrat for serinproteaser |
| CH634662A5 (de) * | 1976-05-28 | 1983-02-15 | Pentapharm Ag | Verwendung von tripeptidderivaten zur quantitativen bestimmung von plasminogen-aktivatoren. |
| JPS5524147A (en) * | 1978-08-10 | 1980-02-21 | Ajinomoto Co Inc | Peptide derivative |
-
1978
- 1978-11-02 JP JP53135634A patent/JPS59499B2/ja not_active Expired
-
1979
- 1979-10-25 US US06/087,922 patent/US4257939A/en not_active Expired - Lifetime
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5562055A (en) | 1980-05-10 |
| SE448169B (sv) | 1987-01-26 |
| DE2944086A1 (de) | 1980-05-14 |
| US4257939A (en) | 1981-03-24 |
| SE7909032L (sv) | 1980-05-03 |
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