JPS59198992A - 微生物蛋白単離物の精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ドイツ特許出願公開第２．１！１７，０３８号明細書の
記載から、単細胞蛋白物質特に酵母および細菌から低級
脂肪族アルコール６０〜８ｏ容童チを含有する水溶液を
用いて抽出することにより不快な風味および臭気を有す
る物質を抽出することは知られている。

ドイツ特許第２６３３６６６号公報からは、第１段階で
微生物細胞塊を低級アルカノール、低級グリコール、お
よび低級グリコールのメチルまたはエチルエーテルから
なる群から選ばれた極性溶媒およびアンモニアからなる
抽出用混合物を用いて処理し（その際総水分含量は溶媒
量に基づき最高で６０Ｎ量チでありそしてアンモニア濃
度は同じく溶媒に基づき好１しくは１〜１。

１量チである）、次に細胞塊の残留物を水で処理するこ
とによシこの細胞塊中の脂質および核酸含ｔ１゛を減少
させることが知られている。この方法においては抽出用
混合物により脂質および大部分の臭気産生性および風味
産生性物質が抽出され、一方では１段階または数段階で
遂行されうる水処理により核酸が除去される。かくして
得られた蛋白単離物は実質上臭気および風味がなくそし
て人間の食品を含む多くの使用目的に直接使用されうる
。

しかしながら実際上、特に特殊な使用目的を妨げる不快
な臭気および／または風味がかかる蛋白単離物に付着す
るのを常に回避できるわけではない。ドイツ特許出願公
開第２，１３７，０３８号明細書の記載による水性脂肪
族アルコールを用いる抽出はこの場合効果がない。

今や微生物蛋白単削物をヒドロキシ、ホルミル、ケトお
よひカルボキシからなる群から選ばれた少くとも２個の
官能基を官有する親水性の低分子脂肪族化合物ｌおよび
／またはホスフェートを含有する水浴液で処理するなら
ば微生物蛋白単訓物からＴ１しからぬ臭気おまひ風味を
産生ずる物質を除去しうることが見出された。本発明の
好１しい態様をＪυ、下ＶＣ詳細に説明する。

「低分子」脂肪族化合物としてはまず第一に２〜６個の
炭累原子を有する炭素鎖を含有するか筐たは二糖類およ
び寡糖類の場合はこれら単位の２個またはそれ以上を含
有するものがあげ　５　− られる。

蛋白単離物またはそれから調製きれた官能化された誘導
体は人間の食品への使用が意図されるので本発明による
抽出の助剤としては宿性の少ない化合物が使用されよう
。それゆえ生理学的に危険の々い物質が好ましく、脂肪
族化合物では香味作用酸、糖、およびグリセリンおよび
糖アルコールのようなポリオールが好ましい。

物質が蛋白単離物から容易にそして実際上定量的に分離
されうる場合は、例えば蓚酸のような他の助剤も使用さ
れうる。何故なら残留する残余量は受容しうる限界より
はるかに下方にあるからである。

、ｈ　、Ｘ　７エートとしてはオルトホスフェート、オ
リゴホスフェートおよびポリホスフェートがあげられ、
その際ポリホスフェートは長鎖および環状でありうる。

好１しいのは特に易溶性の　６　− ナトリウムおよびカリウム塩の形態をしたオルトホスフ
ェートおよびジホスフェートである。

酸反応性の脂肪族化合物は好寸しくけそれらのアルカリ
十知塩および特にアルカリ塩の形態で使用される。好着
しいのは既述した蓚酸と並んでグリフール酸、グリオキ
シル酸、ピルビン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、ア
スコルビン酸、軸に乳酸、クエン酸およびりんご酸、な
らひにアルドン酸系列、アルダン酸系列およびウロンｍ
系列の糖酸ならびに相当するラクトン特にグルコン酸−
δ−ラクトンである。

さらに、好塘しい抽出助剤は糖である。すなわち単糖類
の系列からげペントースおよびヘキソース系列のアルド
ースおよびケトース、特に葡萄糖および果糖であり、三
糖類では特に蔗糖でありそして寡糖類でけ認に殿粉シロ
ップのようなｙｅ粉の力１！水分解生成物である。

官能基としてヒドロキシ基のみを有する脂肪族化合物と
しては既述したグリセリンの他にエリスリトール、ペン
タエリスリトールおヨヒなかんスく糖アルコール特にソ
ルビトールが適する。

これら抽出助剤の混合物例えば蔗糖のような脂肪族化合
物または脂肪族化合物の混合物例えば蓚酸官有グリオキ
シル酸または糖アルコール−糖混合物と組み合せたホス
フェートも好ましい。

本発明による精製はドイツ特許第２．６５３．６６６号
公報記載の方法に従い実施されうる。しかしながら抽出
助剤が核酸抽出において添加される場合が特に好ましい
。数段階の核酸抽出においては本発明による抽出助剤は
第１段階でまたはそれより後の段階でまたは数段階にお
いて添加されうる。

本発明による処理はおよそ０〜１００℃、好ましくは約
２０〜９０℃％に４０〜８０℃の範囲で遂行はれつる。

数段階工程においては温度は各段階で同一またけ異なり
うる。

蛋白物質の使用目的に応じて多かれ少なかれ多すの抽出
助剤残弛指が蛋白残留物中に残留できる。例えば蛋白質
が飲料、焼き菓子類またはデザートのような甘味食品に
加工される場合は糖が、または蛋白質が肉または腸詰め
製品、チーズおよびチーズ類似製品着たＦｉ（他の）パ
ン塗布物に使用されるべき場合はホスフェートである。

水溶液中におけるホスフェートおよび／または脂肪族化
合物の含量は下限は効力により限定され、一方上限は原
則的に溶解度のみにより限定される。何故なら、前記し
たように抽出剤は多くの場合抽出生成物中に残留しつる
からであ　９− る。一般に助剤濃度０，１〜３好ましくは０．２〜２特
に０．５〜１重量係が選択される。

本発明による精製法を他の蛋白質、例えば化学的に変性
された微生物蛋白に適用することも勿論可能である。

本発明を下記の例により詳細に説明する。百分率は重匍
によるものとする。

例　　１ 水１を中の蔗糖５ｆの溶液中にドイツ特許第２．６！＞
３，６６６号公報例１記載の噴霧乾燥された蛋白単離物
１００りを攪拌下に加える。この懸濁液を８０℃に加熱
しそしてこの温度で３０分間さらに攪拌する。次に蛋白
単離物を遠心分離により抽出溶液から分離しそして乾燥
する。

かくして得られた微生物蛋白単離物は改良された風味お
よび臭気により卓越している。蛋白成分の組成は抽出前
のそれと同じである。

−１〇− 例　　２ 付着するｇ糖を除去するために遠心分離した固体を新た
に水１ｔと攪拌するという修正を加えて例１の操作を反
復する。新たに遠心分離した後蛋白単離物を乾燥する。

このものは同様に改良でれた風味および臭気を示しそし
て抽出前と同じアミノ酸組成を有する。

例　　３ オだ核酸を含有するドイツ特許第２，６３３，６６６号
公報例１記載の脱脂畑れた＃Ｉｉ胞塊を出発物質として
使用する。この細胞塊９０７を０．５％蔗糖溶液９００
ｆｎ１．中に懸濁させ、この懸濁液を５５℃に加湿しそ
してこの温度でさらに２０分間攪拌する。３０℃に冷却
した後遠心分離する。得られた沈降物に水９００　ｍＩ
！を加えそして２０℃で１０分間攪拌する。次に新たに
遠心分離しそして沈降物′！ｌ−減圧下減圧源する。

ドイツ特許第２，６３６，６６６号公報例１記載の生成
物に比較して本例の生成物は改良された臭気および風味
にすぐれている。核酸含禁およびアミノ酸組成は同一で
ある。

例　　４ 両方の抽出段階においてオルト燐酸ジナトリウムの０５
％溶液を使用して例２の操作を反復する。同様に改良さ
れた臭気および風味を有しそして変化の橙いアミノ酸組
成を有する生成物が得られる。

例　　５ 蔗糖をンルビトールにより置換して例１の操作を反復す
る。匹敵しうる品質の生成物が得られる。

例　　６〜８ 蔗糖を乳酸、りんご酸または酒石酸により置倹して例１
の操作を行い、品質的に匹敵しりる生成物が得られる。

例　　９〜１１ 蔗糖を乳酸、殿粉シロップまたはグリセリンにより置換
してヤ１１３記載の操作を行い、品質的に匹敵しつる生
成物が得られる。

例　　１２ 両方の抽出段階において０．５俤ジ燐酸ナトリウム溶液
を使用して例３の記載に従い操作を行うことにより同様
に改良された臭気および風味を有しそして変化のないア
ミノ酸組成を有する生成物が得られる。

例　　１３ 第１段階で乳酸を使用しそして苛性ソーダを用いてＴ）
Ｈ６〜７に調製し、そして次に第２段階で蔗糖溶液を使
用して例゛２記載の操作を行うことにより、改良された
臭気と風味および変化のないアミノ酸組成を有する生成
物が得られる。

１３− 例　　１４ 例１３に記載の抽出剤を使用して例３の記載に従い操作
を行うことにより同様に比較しうる生成物が得られる。

なおドイツ特許第２，６５６，６６６号公報の例１を参
考１でに付記すると次のようである。

メチロモナス・クララ（Ｍｅｔｈｙｌｏｍｏｎａｓ　ｃ
ｌａｒａ）ＡＴＣＣ３１２１６を、唯一の炭素源として
のメタノール、唯一の窒素源としてのアンモニア、ホス
フェート、鉄塩、マグネシウム塩およびその他の慣用の
痕跡元累を含有する培養溶液中で好気性条件下に培養し
た。それにより得られる細菌細胞塊を溶液から分離しそ
して噴霧乾燥畜せた。

この細胞塊１００ｔにメタノール３００　ｔ’ｆｒ：加
えた。攪拌下にこの懸濁液中にＮＴ（３ガス１０ｔを導
入して溶解させた。冷却することによｐ温度は導入の間
２５〜３５℃に保持された。メタ１４− ノール、アンモニアおよび細胞塊からなる混合物を２Ｄ
Ｃで３０分間４）′を拌した。

固相と液相と全分割するために洲過しそして固体残留物
をメタノール３００ｄで１回洗った。

新たＶＣｌ／＝沸した抜工つのＰ液を合した。この褐色
溶液は使用された出発物質の脂質を含有した、。

メタノールおよびアンモニアは真空蒸留（１００トル、
４００）により除去した。使用された細胞物質の９５重
量％に達する残留物は遊離の脂肪酸、グリセリド、燐脂
質および二次代謝産物からなる暗褐色の悪臭のあるペー
ストであった。

抽出された細胞塊を沖過することにより得られた固体残
留物’（１１−４０℃で真空下（１００）ル）に５時間
乾燥した。臭気がなくそして出発物質より明るい色を有
する脱脂された細胞塊９０２が祷られた。

核酸含量全減少はせるためにこの細胞塊を水９０〇−中
に懸濁した。攪拌により均質化された懸濁液ＯｐＨ値は
６．９２であった。

温度を５５℃に上昇させたのちさらに２０分間攪拌し、
３０℃に冷却しそして遠心分離により固相および液相に
分離した。得られた沈降物を新たに水９００−と混合し
そして２ＤＣで１０分間攪拌した。次に新たに遠心分離
しそして沈降物を減圧下に乾燥した。

収量は６５２であった。核酸含量は初めの１１２％から
１．５％に低下し、脂肪含量は７％から０．８％に低下
した。この生成物は乾燥状態で無臭であり、水で湿らせ
ると快い臭気を有した。

なおドイツ特許第２，６３３．Ｓ　６６号は米国特許第
４．２０６，２４３号に相当する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）微生物蛋白単離物を精製するに当り、ヒドロキシ、
   ホルミル、ケトおよびカルボキシからなる群から選ばれ
   た少くとも２個の官’に？基金含有する親水性低分子脂
   肪族化合物および／またけホスフェートを含有する水溶
   液を用いてこの単離物を処理することを特徴とする方法
   。 ２）単離物全香味作用酸、糖またはポリオールの水溶液
   で処理することを特徴とする特許許請求の範囲第１頂記
   軟の方法。 ３）ホスフェートがナトリウムまたはカリウムオルトま
   たはジホスフェートであることを特徴とする前記特許請
   求の範囲第１項記載の方法。 ４）アルカリ土類塩またはアルカリ塩の形態をした酸性
   反応する脂肪族化合物を使用することを特徴とする前記
   特許請求の範囲第１項１たは第２項記載の方法。 ５）単離物として脱脂した核酸含有細胞塊を使用するこ
   とを特徴とする前記特許請求の範囲第１〜４項のいずれ
   か一つに記載の方法。 ６）抽出剤が同一であるかすたけ１なる数段階で処理が
   遂行されることを特徴とする前記特許請求の範囲第１〜
   ５項のいずれか一つに記載の方法。 ７）水溶液が乳酸、りんご酸またはクエン酸を含有する
   ことを特徴とする前記特許請求の範囲第１〜６項のいず
   れか一つに記載の方法。 ８）処理が第１番目の段階で乳酸を用いてそして続く段
   階で蔗糖溶液を用いて遂行されることを特徴とする前記
   特許請求の範囲第１〜７項のいずれか一つに記載の方法
   。 ９）処理が約０〜１００℃好寸しくに２０〜９０℃特に
   ４０〜８０℃で遂行きれることを特徴とする特許 一つに記載の方法。 １０）　　食品才たは食品添加剤としての前記特許請求
   の範囲第１〜９項記載の方法により得られた生成物の使
   用。