JPS59196820A - ヒト上皮細胞増殖因子の熱処理方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はヒＩ・−１−皮細１１（ル増殖Ｕ、５子（以下
ｈ−ＴεＧ１♂と盾略する）の熱処理方法（こ関する、
ｑｔ　Ｌ　＜は、肝炎ウィルスを不活化するための熱処
１ｌｌｊ　Ｊこ際してｈ−１ろＧ　ｌ”の熟女゛だ性を
高ｙ）る方法に関４″る。 ｈ　−１３ＧＦはヒト尿より得られるポリペプクィドで
、胃酸分ｌｆ／？！Ｑｌ　’１ｉｌ１作用、ＳＷ２びに
七皮絹１１擺増埴作用を何することから、抗−カイヨウ
剤、ｉｌｌ易冶ゆ削として医薬品への応用が期待されて
いる（特願昭５７−　］　０　：３２９２号）。医薬品
として人体に使用する場合、原料尿に混在する司コヒ性
のある病原百三ウィルスを除いてお（必要かある。 近年輸血１こ伴う肝炎の発症が社会ｉ７１題化しており
その原因はヒト血液中に混在する肝炎ウィルス番こよる
ことが明らか

【こさ」ｔている。ヒト由来の血液、及び
尿よりｔｑられている製剤は肝炎ウィルスの混在する可
能性があり、肝炎ウィルスを不活（しすることは必須の
こととなっている。 例えは、ヒト血敵より得られろアルフミンやヒト尿より
得られるウロキナーゼ製剤については、６０′Ｃ１Ｏ時
間の加熱処理を行うことにより、こｉｔら製剤を変性す
ることな（肝炎の感・砦性を防雨しており、６０’Ｃ−
１０時間の加熱処理はＩ＋」炎ウィルスを不活化するの
に有効な方〆Ｊ【であるとされている。 しかＬながら、加熱処理の行える物質は限られており、
（ｉＵ”ｃｌＯ時間の処理１こ対し安定τなけれはなら
ない。 ｈ　−Ｅ　Ｇ　Ｆ　＋こついては６０　′ＣＩ　０時間
の加熱処理１こ関する報告はｊｊされていない。そこで
本発明者らは、種々の安定化剤、例えは一般１こ安定化
剤として用いられている、グルコース、マンノース、果
糖等の単糖類、ショ糖、マルトース、乳糖等の二糖類、
マンニット、ツルヒツト、キソリント零の糖アルコール
、グリシン、アラニン、バリン等の中性アミノ酸等を加
え、６０“Ｃ１０時間の加熱処理を行い、安定性を調べ
たが、−Ｉ″、記安定剤２加えた場合と加えない場合と
もに１＋−ＥＧ　Ｆ　ｍ液の調製ロットこと１こ異り、
一定した結束は得られなかつ／：７、ｈ−Ｅ　Ｇ　Ｆは
酸性ポリペプヌイドτ通′宮水溶？Ｉ夕２０−て場合ｐ
Ｈが４〜０の範囲に分７［Ｊシ、調″波１］ソトことに
わずか（こ異る１）Ｉ−Ｉ　の差か、ｈ−１ｉ（１Ｆの
熱安定シｌｌこ関勾していＺ）のではｔｘいかと名工し
し、ｌ＋　−Ｅ　Ｇ　Ｆ水＃；ンｉｉノｐＨｆｇ　２〜
ｌ　Ｏニ調・Ｎ（シ、各、）ＩＴ　ｉこおりる６０　’
Ｃ１０時間の加熱処理（こ対する安定性を調べたところ
、第１図に示すごと＜、１）１１５〜８の範囲Ｃ極めて
安定であることを見い出しＩＪｌ）　ｌ）”調整に（１
，０１Ｍ〜（＋、　１八Ｉのリン酸緩仙Ｉ：ン（ｋ、ト
リスＸ■仲ｌり、７ターｌし「俊緩陣ｆ液、ホウ酸緩別
液を用いた場合も同を策の結束が蒔られ、ｈ　−−Ｅ　
Ｇ　Ｆの安定性は塩濃度並Ｏ・（こ塩の種類に関係なく
、１）ＦＴのみｆこ依存することを見い出した。 本発明は以上述べた知見ｔこより完成されたもので、ｈ
−ＥＧ　Ｆを含有する水溶液を、４〜８のｐＴ（におい
て、加熱処理することを特徴と１−る１１＝　Ｅ　Ｇ　
Ｆの熱処理方法である。。 ｈ−ＥＧＦは粗製でも情裂物でもよく、たとえばヒト尿
、ヒト尿から精裂工程途ｔのＬ＋−ＩＥ　ＧＦ水溶液、
精製したｈ　−Ｅ　Ｇ　Ｆの水溶液のいずれも本発明を
適用することかできる。 本発明においては、このｈ−Ｅ　ＧＦを水（こ俗１０・
１′しｐｉ−１４〜８（こおいて加熱する。ｐＩ−１の
調整に緩衝液を用いてもよく、緩衝液としては、たとえ
は、リン酸維ｉｉｊ液、トリス緩衝液、７り〜ル酸Ｒ山
液、ホウ酸緩附液などが挙げられる。 加熱はｈ　−ＥＧ　Ｆの活性か失われない温度ならひ１
こ時間の範囲で行われるが、肝炎ウィルスを失７ｊ５ざ
ぜるためには、少くとも０（１’Ｃて約１０時間程度加
熱するのがよいが、所望により、さらに、Ｈ’Ｈ；い温
度でより短い時間加熱しでもよい。 かくして熱処理を経た肝炎ウィルスを含まない活性ｈ−
ＥＧＦ含有水溶液を得ることができる。 以下実施例を挙げて説明する。なお、Ｉ］ＥＧＦのｌ占
ｊ生の氾１１定はランオ・レセブクーアッセイｌこより
測定した。 実施例１ ｂ　−−Ｅ　Ｇ　Ｆ末５０　ｐｙ　’２１　ｍｉ’ｃ’
）　（１，Ｉ　Ｍリン酸に？Ｊ　＄１液（ｐＨ７，５）
に溶解し、カラスアンプル中（こ入れ゛Ｃ熔Ｈした後熱
水中で正確に６（）”０１０時間の加熱処理を行った後
、直ちに常温にもどし、ラジ第１−セブターア゛ノセイ
（訂）＋こて？ｉ！１１定したところｆ？Ｖｔｊｋ、の
ｌ】−１！：　Ｇ　Ｉ’　ｌ’１度Ｌｔ　５　Ｕ　１ｒ
Ｑ’　７’ｍｅ　テアッｔ：〕（１ｉｌ） １＝　１−−１−皮細胞増９１＋：ｉ因子の活性測定は
コーヘンら（８，０）ｈ　ｃ　ｎ、　Ｇ、　Ｃａ　ｒ　
ｐ　ｃ　ｎ　Ｌ　ｃ　］−：　Ｐ　＋°（１ｃ、　Ｎａ
　ｔ。 Ａに＋ｄ、Ｓ（、：ｉ、＋　ＵＳＡ７２．１３１７（１
９７５））　　のラノオレセフリーアンセイ（こへｆ、
拠して行なった。またこの測定に便Ｔ１」シたスクンタ
ードＩＩＴ−ＥＧＦおよび１２５１−ＩＴＩ−ＥＧ　Ｆ
はカーペンタ−ら（Ｇ。 Ｃ；ｌ　ｒｐｅｎｔｅｒ、　　　Ｓ、　　Ｃｏｈｅｎ　
　　ｅｔ、　　ａ／２゜　　二　Ｊ、Ｂｉｏ　ｌ？。 Ｃｈｅｍ、、２５０．４２９７（１，９７５））（１）
方法によりつくった。

【図面の簡単な説明】

第１図は各種１）１−Ｉ　に調整したｈ　−ＥＧ　Ｆの
各水溶液を、それぞれ６０’Ｃ，］、０時間ＩＪ１．Ｉ
熱したのち、実施例１の（註）に記される測定法により
残存する］＋　−Ｅ　Ｇ　Ｆの活性を測定したグラフで
ある。図面（こおいて、縦軸は活性残存率（沙、横・１
ｉ１１は１）［■　を示す。 手絖有１ｉ　、ＫＥｔ”−Ｊ：：（自弁）昭和５８年　
５月２０日 １２１訂庁長官殿 １　、　、ｉＪＧ　ｆｌ、　（１）表示　＋１ｒｉ和５
８年１４許願第７０２３５Ｑ２、発明の名称 じ１・１皮細胞ｉ９殖囚了の熱処狸万払：１．ｒ市正を
りる者 ・１１イノ１どの関係　　特ム′１出Ｍ＋人イ１所　只
沖県神戸市東灘区御影本町３丁ロア１山２０号 名相Ｉ　ＩＪ本／／ミカルリリーｆ株式会７１代　入　
’？’＋　　　　　　　　　　　　　　Ｚ’＋　　Ｉ−
ＩＪ　　　　イｔ１１、代理人 補正の内容 明細書、第３頁、第８行目、 ポリベプメイド　　を ポリペブタ−イド　　とムエ正し２Ｌす。 同頁、第９行＋ｆｆｌ　。 溶液どして場合　　を 溶液としに一場合　　と６１正しよ！Ｊ’以１

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ヒト」二皮細胞増殖因子を含有する水？ｒス液を、４〜
   ８の１）Ｉ■において、加熱処理することを特徴とする
   ヒｌ−七皮細胞増・埴因子の熱処理り法１゜