JPS5914451B2

JPS5914451B2 - 植物緑葉源抗炎症剤

Info

Publication number: JPS5914451B2
Application number: JP56032463A
Authority: JP
Inventors: 義秀萩原; 徹二宮内; 英俊大竹
Original assignee: Nippon Yakuhin Kaihatsu KK
Current assignee: Nippon Yakuhin Kaihatsu KK
Priority date: 1981-03-09
Filing date: 1981-03-09
Publication date: 1984-04-04
Also published as: JPS57146715A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、浸れた抗炎症作用を有し且つ実質的に無毒は
の天然イネ科植物緑葉青汁中の抗炎症成分を有効成分と
して含有することを特徴きする抗炎症剤に関する。

更に詳しくは、本発明はイネ科植物の緑葉青汁中の水可
溶性蛋白含有成分から分離された約４０％飽和の硫安水
溶液系に於て可溶性で且つ約８０％飽和の硫安水溶液系
に於て析出し得る抗炎症成分を有効成分きして含有する
ことを特徴とする抗炎症剤（こ関する。

天然イネ化植物、とく（こは麦類の成熟期前の緑葉（葉
及び茎の総称である）を、例えば搾汁して得られる青汁
が、多種多様な天然有用成分を豊富に含有するこきを知
って、本発明者等の一部の者によって、この青汁成分を
もとの青汁中の状態を保ったまま安定な粉末にできるこ
とが発見され、日本国特許第６４５３７８号（対応米国
特許第３．７８７，５９１号；英国特許第１，３５８，
０５２号、等）に開示されている。

ここに開示された提案によれば、麦類の成熟期前の緑葉
の機械的破砕物から粗大固形分を分離除去して得られる
青汁を、ｐＨ６〜９に中和処理し、噴霧乾燥又は凍結乾
燥することによって麦類緑葉の青汁成分の安定な粉末が
得られる。

更に、この提案には、得られた青汁成分粉末が、嗜好品
を包含する食品類、保健薬、化粧品を包含する医薬品類
などの広い分野に於て有用であることが記載され、その
一例として、青汁粉末、防風通を敷料エキス粉末、デン
プン、乳糖、タルク、ステアリン酸マグネシウム、エチ
ルアルコールを用いて錠剤を製造した例が示され、この
剤は動脈硬化予防及び治療用の保健医薬となることが開
示されている。

又、特開昭５４−１２９１１１号には、このような青汁
成分が潰腫瘍類を包含して癌及びその前駆症状の予防、
治療に対して優れた作用効果を有し、更に肝障害に対し
てもその予防治療効果の期待されることを開示している
。

しかしながら、これら従来の提案に於ては、このような
青汁成分が抗炎症成分を含有すること及びその利用に関
しては全く言及していない。

本発明者等は、イネ系植物の緑葉青汁中の有用成分につ
いて長年研究を続けてきたが、今回、該青汁中１こ実質
的に無毒性で且つ優れた抗炎症作用を呈する有用成分が
存在すること及びこの抗炎症成分が容易な手段で青汁中
から分離増得できることを発見した。

その有効成分の詳細は未だ不明であるが、イネ科植物の
緑葉青汁中の成る種の複合蛋白質物質の混合物系を含有
する複合成分と推測されている。

そして、後に実験的に詳しく示すように例えば約５ｍ
ｙ／ｋｇ（静注）場合によっては約０．１Ｔｖ／ｋ
ｙ（静注）、約２０■／ｋｇ（皮下注）場合によっては
約１即／ｋｇ（皮下）の如き少量の投与で、抗炎症剤
フェニルブタシン５０〜／ｋｙ（皮下注）１こ匹敵もし
くはそれを凌駕する浸れた抗炎症作用を発揮し、しかも
抗炎症用量に比し著るしく低毒性であるきいう驚くべき
ユニークな抗炎症作用を示す抗炎症成分であることを発
見した。

従って、本発明の目的は、イネ科植物からの天然源緑葉
青汁から導かれた優れた抗炎症作用を有する抗炎症剤を
提供するにある。

本発明の上記目的及び更に多くの他の目的ならびに利点
は、以下の記載から一層明らかとなるであろう。

本発明で用いる抗炎症成分は、イネ科植物の緑葉（本発
明においては葉及び茎の総称である）の青汁から分離さ
れる。

このようなイネ科植物としては、麦類が好ましく利用さ
れるが、他のイネ科植物も利用可能であり、たとえば、
ハトムギ、稲トウモロコシ、マイロの如き他のイネ科植
物を例示することができる。

以下、麦類を例に更に詳しく説明する。

麦類、たとえば大麦、裸麦、小麦、燕麦、ライ麦などの
緑葉、好ましくは成熟期前の緑葉を、例えば搾汁して得
られる青汁或はこのような青汁から前記日本国特許第６
４５３７８号公報明細書に詳細に説明されているように
して得られた該青汁粉末を水性媒体に再溶解した青汁が
利用できる。

このような緑葉青汁から、該青汁中の抗炎症成分を分離
護摩するには、好ましくは、該青汁を例えば遠心分離し
て、葉緑素、細肪破砕片、グラナ、水不溶囲蛋白類、水
不溶性多糖類その他の固形成分を分離除去し、得られた
緑葉青汁中の水可溶性蛋白含有成分系に、例えば硫安も
しくは硫安水溶液を加えて、約４０％飽和の硫安水溶液
系を形成し、系から析出する沈殿成分から液相成分を分
離護摩し、この液相に、硫安もしくは硫安水溶液を加え
て、約８０％飽和の硫安水溶液系を形成し、系から析出
する沈殿成分を採取することにより行なうことがで、き
る。

例えば上述のようにして採取できる約４０％飽和の硫安
水溶液系に於て可溶性で且つ約８０％飽和の硫安水溶液
系に於て析出し得る緑葉青汁から分離された抗炎症成分
は、好ましくは、水に溶解し、この溶液を内液とし、水
を外液として透析膜を用いて透析処理し、透析内液を採
取することにより精製できる。

更に又、得られた透析内液を硫安を用いて塩析すること
により抗炎症成分を再析させることができる。

本発明で用いるイネ科植物の緑葉青汁から分離された抗
炎症成分は、上記した例示手段における硫安の代りに、
例えば、塩安、食塩の如き塩析剤、エチルアルコール、
メチルアルコール、アセトンの如き極性有機溶媒などの
他の沈殿剤を利用して分離することもできる。

例えば、前記の緑葉青汁中の水可溶性蛋白含有成分系を
、上記硫安の例と同様にして上記塩析剤で処理すること
ができる。

又、例えば、該水可溶性蛋白含有成分系を、約２０〜約
６０％有機溶媒濃度となるように処理して、沈殿物を採
増し、上記と同様に透析処理して抗炎症成分を得ること
ができる。

更に、本発明で用いる抗炎症成分は、例えば、カルボキ
シメチルセルロース、ＤＥＡＥ−セファデックス、活性
炭、アルミナ、シリカゲルなどの如き各種のカラムを利
用したカラムクロマトグラフィー、たとえばセファデッ
クス−〇の如きゲル濾過剤を利用したゲル濾過法、電気
泳動法、等電点電気泳動法、限外沢過法、これらの適当
な組み合わせ手段などの他の精製手段で或は透析及びこ
れらの他の精製手段との組み合わせによって、更に精製
することもできる。

上述のようにして得ることのできるイネ科植物の緑葉青
汁から分離された抗炎症成分は、優れた抗炎症作用を示
し且つ極めて低毒性であって抗炎症剤として有用である
。

その急性毒性ＬＤ、ｏは、静注（マウス）で２００〜／
ｋｇ以上、皮下投与（マウス）で２０００〜／に９以上
、経口投与（マウス）で５ｇ１ｋｇ程度以上である。

該抗炎症成分は、経口投与、皮下注射投与、筋内向注射
投与、静脈注射投与、生薬投与、舌下投与、直腸内投与
、外用投与などの広い投与形態で投与することができる
。

投与量は症状、投与形態などによっても適宜に変更され
るが、例えば約１０〜約５０７ｎ？／ｋｇの経ロー回投
与量、約０．０５〜約１０〜／ｋｙの皮下、静脈内もし
くは筋肉内−回投与量、約０．１〜約４０Ｔｎ９／ｋｇ
の舌下もしくは直腸内−回投与量を例示することができ
る。

該抗炎症成分は、製薬的）こ許容し得る種々の担体もし
くは希釈剤、更には各種の補助剤などを利用して、各種
の細形の組成物とするこきができる３例えば、粉剤、散
剤、顆粒剤、粒剤、錠剤、水剤、シロップ剤などの如き
経口投与剤形；皮下、皮肉、筋肉内、静脈内、腹腔内、
を髄腔内などの如き注射投与剤形；直腸、肛門、尿道、
腟などの坐細形；軟膏、硬膏、パスタ−、リニメント、
ローション、バック、膏薬、塗布、吸入、湿布、噴霧、
眼薬、含漱剤、口洗剤などの如き外用剤形；舌下錠剤形
；その他各種の細形であることができる。

このような細形に調剤するのに利用する気体、液体もし
くは固体の担体乃至希釈剤、各種補助剤の例としては、
製薬的に許容し得る任意の気体、液体もしくは固体の添
加剤が利用できる。

そのような添加剤の例としては、フレオンガス、圧縮空
気、炭酸ガス、アルゴンなどの如き気体担体もしくは希
釈剤；精製水、注射用精製水、滅菌水、注射用滅菌水、
生理食塩水、エタノール、メタノール、クリセリン、フ
ロピレンゲリコール、クロロフタノール、アセトン、石
油ベンジン、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコ
ール、ポリオキシエチレンクリコール及びそのアルキル
エーテル類、多価アルコール類、オリーブ油、落花生油
、椿油、大豆油、桐油、アマニ油、トウモロコシ油、胚
芽油、ヤシ油、豚脂、ラノリン、パラフィン、流動パラ
フィン、蝋、ステアリン酸、松脂、ロジン、カカオ脂、
牛脂の如きアルコール類乃至油脂類、硬化油類、オレイ
ン酸カルシ・クム、ステアリン酸カルシウム、ナトリウ
ム石鹸、カリウム石鹸、塩化ベンザルコニウム、塩化ベ
ンゼトニウム、ソルビット、マンニット、水飴、キシリ
ットの如き液体担体もしくは希釈剤；乳糖、白糖、殿粉
類、デキストリン、キジロール、カップリングシュガー
、ＣＭＣそのアルカリ金属塩類、メチルセルロース、ヒ
ドロキシアルキルセルロース、寒天、ゼラチン、卵黄、
卵白、カゼイン、レシチン、アラビアガム、トラガント
ガム、ペクチン、ペクチン酸アルカリ金属塩、アルギン
酸及びその塩類及びエステル類、ステアリン酸マグネシ
ウム、アスベスト、クルク、ベントナイト、カオリン、
酸化亜鉛、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、
クエン酸もしくはその塩類、安息香酸もしくはその塩類
、パラオキシ安息香酸もしくはその塩類もしくはエステ
ル類、ソルビン酸、デヒドロ酢酸、硼酸、亜硫酸ソーダ
、アセトン酸性亜硫酸ソーダ、アスコルビン酸、トコフ
ェロール、酵母末の如き固体担体もしくは希釈剤；更に
は、上記例示の各種細形に公知の他の基剤類などで例示
できる。

本発明の抗炎症剤は各種の炎症に対して利用でき、例え
ば、各種皮膚炎、筋肉炎、神経炎、粘膜炎、骨膜炎、内
臓炎、鍵鞘炎、関節炎、関節周囲炎、各種の感染性もし
くはアレルギー性炎症、関節リウマチ、痛風、熱傷、挫
傷、打撲症、切開傷、手術後および外傷後の炎症、腫張
、湿診、持掛、中耳炎、歯鍜炎の如き炎症を例示できる
。

以下、実施例により、本発明抗炎症成分の採取及び薬理
効果についての数例を示す。

実施例１成熟期前の大麦の緑葉（茎および葉を総称する）の搾汁
物より粗大固形分を分離して得られた青汁の噴霧乾燥粉
末１．Ｏｋｐに水１Ｍを加え懸濁液を作り、遠心分離し
、炉液９１を得た。

これに硫酸アンモニアを加え４０％飽和となし、生じた
沈殿を吸引濾過し、ｐ液に硫酸アンモニアを加え８０％
飽和となし、冷処に静置し沈殿層を遠心分離１こより沈
殿物を集得した。

沈殿物を５０ｒｒＬＭ’Ｊン酸カリ緩衝液５００ｒｆＬ
ｌにとかし、５０ｒｆＬＭリン酸カリ緩衝液（こ対して
透析を行なった。

透析内液に硫酸アンモニアを加え１００％飽和となし、
前述と同様（こして沈殿物を集め、１０ｒｒＬＭリン酸
カリ緩衝液にとかし、透析を行ない、透析内液的４００
ｒｎｌを得た。

これを真空凍結乾燥し、生理活性物誓約５ｇを得た。

実施例２成熟期前の大麦の緑葉（茎および葉を総称する）の搾汁
物より粗大固形分を分離して得られた青汁の噴霧乾燥粉
末１ｋｇに５０ｍＭ ’）ン酸緩衝液（ｐＨ７，８
）１０７を加え分散させ吸引濾過し、ｒ液８５０ＩＩＬ
ｌを得た。

Ｐ液に硫酸アンモニウムを加え４０％飽和となし、生じ
た沈殿を吸引戸別する。

得られたＰ液に硫酸アンモニアを加え８０％飽和とする
。

これを冷処に静置し沈降層を遠心分離しく１２０００Ｇ
）沈殿物を増得した。

これを５０ｍＭのリン酸カリ緩衝液５００ｒＩＬｌにき
かし、透析チューブに入れ２日間５０ｒｒＬＭリン酸カ
リ緩衝沿に対し透析を行なった。

透析内液をＤＥＡＭ−セファデックス−Ａ４０カラム（
４，５ＣｒＩｌＸ８０ｃｍベット容積１１２本）５０
ｒｒＬＭ、１５０ｒｒＬＭ、３００ｒｒＬＭのリン酸カ
リ緩衝液で順次離容さし、溶出液約５１を得た。

これに硫酸アンモニウムを加え飽和とし、沈殿物を遠心
分離により集め、５０ｒｆＬＭリン酸カリ緩衝液４００
ｒＩＬｌにとかし再び透析を行った。

透析内液を再びＤＦ、ＡＥセファデックスカラムに通し
、前述き同様の処理をし精製成約５４を得た。

これに再び硫酸アンモニウムを加え１００％飽和となし
、得たる沈殿を１０ｒｒＬＭリン酸カリ緩衝液にとかし
、１０ｒｒＬＭリン酸カリ緩衝液に対し透析を行った。

透析内液を真空凍結乾燥し生理活性物質４．５ｇを得た
。

実施例２′ 上記実施例２で得た生理活性物質３ｇを水（蒸留水）３
０ｍｌに溶解し、セファデックスＧ−５０ゲルを充填し
たカラム（ベッド量１２００ｒＩＬ１１内径５Ｃ１ｒＬ
）に流して吸着させ、水を溶出液として、順次流出する
流出液を３分画に分画護摩した。

各生理活性物質分画を限外濾過で濃縮したのち、凍結乾
燥して分画１１分画■及び分画■を、夫々、１．２５
ｇ、０．９５ｇ、０．１ｇの収量で得た。

実施例３（抗炎症作用試験）実験方法以下の実験はすべて２５±１℃の室温で行なった。

実験動物は体重１００ｇ前後のウィスター系雄性ラット
を用い、１群それぞれ６匹よりなる。

実施例１の生理活性物質Ｄ−０１または実施例２の生理
活性物質ＤＡ−０２は生理食塩液に溶解した。

フェニルブタシンはＴｗｅｅｎ６０を１滴加えてめのう
乳鉢内ですりつぶしたのち生理食塩液１５ＷＬｌを加え
て懸濁させた。

これらの被検液はすべて１０ｍ１／ｋｇの割りにラット
に皮下注射または静脈注射した。

被検液投与３０分後に１％力ラう−ニンの生理食塩液態
濁液０．１ｍｌをラットの右後肢足煎皮下に注射し、
左足踪には同時に生理食塩液０．１ｒｎｌを皮下注射
した。

対照群には被検液と同量の生理食塩液を皮下または静脈
内に注射した。

足容積はラットの足を鯉の深さまで水銀槽内に浸し、Ｕ
ｇｏＢａ５ｉｌｅ社製のＶｏｌｕｍｅｄｉｆｆ
ｅｒｅｎｔｉａｌｍｅｔｅｒを介して記録計に記録せ
しめた。

足容積はカラゲーニン注射後８時間にわたって測定し、
浮腫強度は左右の足容積の差（Ｉ７２１）で表わし、次
式に従って被検薬の浮腫抑制率を算出した。

足容積の測定は盲検法により、測定者の主観の混入を防
いだ。

実験結果Ｄ −０，１を３８．６■／ゆまたは１５４．２ダ／ゆ
ラット皮下（こ注射した群の浮腫強度と対照群のそれを
図１に示す。

図２にはＤＡ−０２を２０Ｔｎｇ／ｋｇ皮下注射した群
の浮腫強度およびフェニルブタシン５０タ／ｋｇ皮下
投与群、対照群の浮腫強度を示す。

図３にはＤＡ−０２，５ダ／ｋｇ静注、ＤＡ−０２２０
■／ゆ皮下性、ＤＡ−０２，１０■／ｋｙ静注した群お
よび対照群の浮腫強度を示す。

図４にはＤＡ−０２１０■／ｋｇ皮下注、ＤＡ−０２５
０■／に９静注した群および対照群の浮腫強度を示す。

表１にはＤ−０１、ＤＡ−０２およびフェニルブタシン
による浮腫最大抑制率を示す。

図１，２，３，４に示すようにＤＡ−０２は５■／ゆ
の静注、Ｄ−０１は３８．６ダ／ｋｇの皮下性、ＤＡ−
０２１０１ｎ９／ｋｇの皮下性でそれぞれ有意（危険率
１％以下）でカラゲーニン浮腫抑制効果を示した。

また表１に示すようにＤ−０１３８，６■／ｋｙ皮下注
、ＤＡ−０２１０■／ｋｙ皮下注、ＤＡ−０２５ｍ９／
ｋｇ静注でフェニルブタシン５０〜／ｋｇ皮下注による
抗浮腫作用より強い抗浮腫作用を示す。

ＤＡ−０２、Ｄ−０１はう゛ント］こ上ａ己イずレノ用
量を投与したときも投与後ラットの行動その他に何ら異
常をもたらさなかった。

実施例４（抗炎症作用試験）前記実施例２′で得た分画１及び■の夫々について、実
施例３と同様にして、ラットカラゲーニン浮腫最大抑制
率を測定算出した結果、いづれも、０．２■／に！９・
静注で浮腫抑制率３１．３％、１〜／ｋｇ・静注で浮腫
抑制率５０．８％、１〜／ｋｇ・皮下で浮腫抑制率３
５．１％であった。

【図面の簡単な説明】

添付図面中、第１図は実施例１で得た生理活性物質Ｄ−
０１のラット足浮腫強度への影響を示すグラフ、第２図
は実施例２で得た生理活性物質ＤＡ−０２及びフェニル
ブタシン（対照）による浮腫強度への影響を示すグラフ
、そして第３図及び第４図はＤＡ−０２による浮腫強度
への影響を示すグラフである。

Claims

【特許請求の範囲】１イネ科植物の緑葉青汁中の水可溶性蛋白含有成分か
ら分離された約４０％飽和の硫安水溶液系に於て可溶性
で且つ約８０％飽和の硫安水溶液系に於て析出し得る抗
炎症成分を有効成分として含有することを特徴とする抗
炎症剤。２該緑葉青汁が麦類の成熟期前の緑葉青汁である特許
請求の範囲第１項記載の抗炎症剤。