JPS59122446A - γ−インタ−フエロン関連ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なヒトγ−インターフェロン関連ペプチド
に関する。

本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護基、活性
基、その他に関して略号で表示する場合はＩＵＰＡＣ，
ＩＵＢの規定或いは当該分野における慣用記号に従うも
のとし、その例を次に挙げる。またアミノ酸等に関して
光学異性体がありうる場合は、特に明記しなければし体
を示すものとする。

Ｓ　ｓｒ　；セリン　　　　１−ｅｕ；ロイシンＡｓｎ
；アスパラギン　Ａｌａ：アラニンＧｉｎ：グルタミン
　　Ｇｌｕ：グルタミン酸Ａｒｏ：アルギニン　　Ｌ　
ｙｓ　：リジンＴ　ｙｒ　；チロシン　　　ｐ　ｈｅ　
：フェニルアラニンＭｅｔ：メチオニン　　ＡＳＩ）：
アスパラギン酸ＧＩＶニゲリシン ＯＮＰ：ｐ−二トロフエノキシ基 Ｔｏｓ；ｐ　−）ルエンスルホニル基 Ｂｏｃ　；第３級ブトキシカルボニル基Ｂｚｌ；ベンジ
ル基 ０Ｂｚｌ；ベンジルオキシ基 ＣＩＱ　８２１：２．６　　’）’）０）Ｌｉべ’、／
ジ）ＬｉＭＣ１−Ｚ　　：２−クロロベンジルオキシカ
ルボニル インターフェロンは、生体の細胞がウィルス感染を受け
た時に産生ずる抗ウィルス性糖蛋白質乃至は蛋白質であ
り、その利用によればウィルス性疾患の予防又は治療が
可能であるとされ、近年注目を集めつつある。現在解明
されているヒトのインターフェロンは、β型インターフ
ェロン（Ｆｌｂｒｏ　　ｂｌａｓｔ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒ
ｏｎ）　、β型インターフェロン（Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ
ｓ　　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ、　ＬｙｌＤｈ。

ｂｌａ８ｔ０１ｄ　　＋ｎｔｅｒｒｅｒｏｎ）及びγ型
インターフェロン（Ｉ　ｎ＋ｕｎｅ　　１ｎｔｅｒｆｅ
ｒｏｎ）に分類される。しかしながらこれらのインター
フェロンを単一な糖蛋白質乃至は蛋白質にまで精製する
技術は未だ確立されていない。

本発明者等は、ヒトのγ型インターフェロンに対して特
異的に反応する抗体を利用すれば、抗原−抗体反応によ
ってヒトγ型インターフェロンを精製できると考え、こ
の着想から感度よくヒトγ型インターフェロンを選択し
、該インターフェロンに対して特異反応性を示す抗体を
得るべく鋭意研究を進めてきた。その過程において、ヒ
トγ型インターフェロンのある特定部位のアミノ酸配列
を有するペプチドを合成し、これをハプテンとして抗原
を合成するに成功し、該抗原からヒトγ型インターフェ
ロンに対して特異反応性を有する所望の抗体が収得でき
ることを見出した。本発明はこの新しい知見に基づき完
成されたものである。

即ち本発明は一般式 ％式％ （１） 〔式中Ｒは水素原子又はＨ−Ｔ　ｙｒ基を示す。〕で表
わされるペプチド及び一般式 ％式％ （２） 〔式中Ｒは上記に同じ。〕 で表わされるペプチドからなる群より選ばれたヒトγ−
インターフェロン関連ペプチドに係る。

本発明の上記一般式（１）及び（２）で表わされるペプ
チドは、いずれも入手容易な市販のアミノ酸を利用して
、簡単な操作で容易に合成することができる。しかもこ
れら各ペプチドは、特定のアミノ酸配列を有することに
基づいて、これらをハプテンとして用いることにより、
１ｍ部位が明確な一定の抗原を大Ｉに作成できる。斯く
して得られる抗原からは天然のγインターフェロンを抗
原とする場合に比し、大量にしかも常に安定して、ヒト
γ型インターフェロンに対して特異性の高い抗体を収得
することができる。該抗体はこれを例えばアフィニティ
ークロマトグラフィー用担体と結合させて、該クロマト
グラフに利用してヒトγ型インターフェロンのＩＩ製に
用い得る。

本発明の一般式（１）及び（２）で表わされるペプチド
は、通常のペプチド合成法、具体的には［ザ　ペプチド
（Ｔｈｅ　　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　）　Ｊ第１巻（１９６
６年）　　（５ｃｈｒｏｄｅｒ　ａｎｄ　Ｌｕｈｋｅ著
、Ａｃａｄｅｍｌｃ　　ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ　　Ｙｏｒ
ｋ、ＬＩＳＡ）或いは「ペプチド合成Ｊ　〔東屋ら著、
丸善株式会社（１９７５年）〕に記載されるごとき方法
に従って、例えばアジド法、クロライド法、酸無水物法
、混ｌ無水物法、ＤＣＣ法、活性エステル法（ｐ−ニド
０フエニルエステル法、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド
エステル法、シアノメチルエステル法等）、ウッドワー
ド試薬Ｋを用いる方法、カルボ５− ジイミダゾール法、酸化還元法、ＤＣＣ／アディティブ
（ＨＯＮＢ、ＨＯＢｔ　、ＨＯ８Ｉｊ　’）法等により
製造できる。上記方法においては、同相合成法及び液相
合成法のいずれをも適用できる。通常本発明のペプチド
は、上記した一般のポリペプチドの合成法に従い、例え
ば末端アミノ酸に順次１個づつアミノ酸を縮合させる所
謂ステップワイズ法により、又は数個の７ラグメントに
分けてカップリングさせていく方法により製造される。

より詳細には、例えば同相合成法を採用する場合、Ｃ末
端アミノ酸をそのカルボキシル基によって、不溶性担体
に結合させる。不溶性担体としては、反応性カルボキシ
ル基と結合性を有するものであれば特に限定はなく、例
えばクロロメチル樹脂、プ０モメチル樹脂等のへ〇ゲノ
メチル樹脂やベンズヒドリルアミン樹脂、ヒドロキシメ
チル樹脂、フェノール樹脂、ｔｅｒｔ−アルキルオキシ
カルボニルヒドラジド化樹脂等を使用できる。

次いでアミノ保護基を除去した後、一般式（１）及び（
２）で表わされるアミノ酸配列に従い順次６− アミノ基保護アミノ酸を、その反応性アミノ基及び反応
性カルボキシル基との縮合反応により結合させ、一段階
ずつ合成し、全配列を合成した後、ペプチドを不溶性担
体からはずすことにより製造される。

上記においてチロシン、グルタミン酸、アルギニン、リ
ジン、アスパラギン酸及びセリンの各アミノ酸は、その
側鎖官能基を保護しておくのが好ましく、これは通常の
保護基により保護され、反応終了後肢保護基は展層され
る。また反応に関与する官能基は、通常活性化される。

これら各反応方法は、公知であり、それらに用いられる
試薬等も公知のものから適宜選択される。

アミノ基の保護基としては、例えばベンジルオキシカル
ボニル ｔｅｒｔ−アミルオキシカルボニル、イソボルニルオキ
シカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル
、２−クロロ−ベンジルオキシカルボニル、アダマンチ
ルオキシカルボニル ロアセチル、フタリル、ホルミル、０−ニトロフェニル
スルフェニル、ジフェニルホスフィノチオイル基等が挙
げられる。

側鎖官能基の保護基としては、アスパラギン酸及びグル
タミン酸のカルボキシル基の保護基として、例えばＢＺ
Ｉ、Ｄ−メトキシベンジル、ｐ−二トロベンジル、トリ
チル、メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチル基等が挙げら
れる。

セリンの水酸基の保護基としては、例えばＢｚｌ、ｔｅ
ｒｔ−ブチル、アセチル、テトラヒドロピラニル基等が
挙げられる。

アルギニンの７ミノ基の保護基としては、例えばニトロ
、Ｔｏｓ，ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられる
。

リジンのアミノ基の保護基としては、例えばベンジルオ
キシカルボニル 基等が挙げられる。

チロシンの水酸基の保護基としては、例えばＢＺＩ、Ｃ
Ｉ，−Ｂｚｌ、ベンジルオキシカルボニル、アセチル、
Ｔｏｓ基等が挙げられる。

カルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば対
応する酸クロライド、酸無水物又は混合酸無水物、アジ
ド、活性エステル（ペンタクロロフェノール、ｐ−ニト
ロフェノール、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド、Ｎ−ヒ
ドロキシベンズトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノ
ルボルネン−２、３−ジカルボキシイミド等とのエステ
ル）等が挙げられる。尚ペプチド結合形成反応は、縮合
剤例えばジシクロへキシルカルボジイミド、カルボジイ
ミダゾール等のカルボジイミド試薬やテトラエチルピロ
ホスフィン等の存在下に実施し得る場合もある。

以下、本発明ペプチドの製造の一例につき反応行程式を
挙げて具体的に説明する。

（反応行程式−１〕 Ａ−Ｐｈｅ−ＯＨ　　　　　（イ） ↓ Ａ−Ｐｈｅ−Ｒ’　　　　　（ｏ） ↓ Ｈ−Ｐｈｅ−Ｒ’　　　　　（Ａ） ↓　Ａ　−　Ａ　ｓｐ−　Ｏ　Ｈ　　　　　（二）−〇
− Ａ−ＡＳＤ−Ｐｈｅ−Ｒ’　　　（ホ）Ｈ　−　ｐ　ｈ
ｅ　−　Ａ　ｓｎ　−　３　ｓｒ　−　Ａ　ｓｎ−１　
ｙｓ−１　ｙｓ　−　Ｌ　ｙｓ−Ａ　ｒｌＪ−　Ａ　８
１１−　Ａ　Ｓｌｌ−　Ｐ　ｈｅ−　Ｒ　’　　　　（
　ヘ）↓　Ａ−Ｔｙｒ−ＯＨ　　　　　（ト）Ａ　−　
Ｔｙｒ　−　Ｐ　ｈｅ　−　Ａ　ｓｎ　−　Ｓ　ｓｒ　
−　Ａ　ｓｎ−１　ｙｓ−１　ｙａ−Ｌｙｓ−Ａｒａ−
ＡｓＤ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｒ’　　（チ）↓ ＠　−　Ｔｙｒ　−　ｐ　ｈｅ　−　Ａ　ｓｎ　−　Ｓ
　ｅｒ　−　Ａ　ｓｎ−１　ｙｓ−１　ｙｓ−Ｌｙｓ−
Ａｒａ−Ａｓｆｌ−Ａｓｐ　−　Ｐｈｅ−ＯＨ　（　１
　ａ　　）〔式中Ａはアミノ基の保護基及びＲ１は不溶
性−　担体を示す。） 上記において、Ａの好ましいものとしては３ｏｃ。

ベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオ
キシカルボニル基等を、またＲ１の好ましいものとして
はクロロメチル化ポリスチレン等をそれぞれ例示するこ
とができる。

また、各反応において、使用するアミノ酸が反１　０− 応に関与しない側鎖官能基を有する場合は、常法通り、
前述した保護基により保護され、これは不溶性担体Ｒ１
の脱離と同時に脱離される。

上記方法において、アミノ酸（イ）と不溶性担体Ｒ１と
の反応は、常法に従いアミノ酸（イ）の反応性カルボキ
シル基を利用してこれをＲ１と結合させることによって
行なわれる。該反応は例えばクロロメチル化ポリスチレ
ンを使用する場合は適当な溶媒中、例えばトリエチルア
ミン、カリウム　ｔｅｒｔ−ブトキシド、炭酸セシウム
、水酸化セシウム等の１！基付性化物の存在下に行なわ
れる。

溶媒としては例えばジメチルホルムアミド、ジメチルス
ルホキシド、ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、ジ
クロロメタン、テトラヒドロフラン、Ｎ−メチルピロリ
ドン、ヘキサメチルリン酸トリアミド等又はこれらの混
合溶媒等を例示することができる。上記反応は、通常０
〜８５℃、好ましくは２５〜８０℃程度、数分〜２４時
間程度で終了する。アミノ酸と不溶性担体との使用割合
は通常後者１当量に対して前者を過剰量、一般に１〜３
倍当量とするのがよい。

かくして得られる一般式（ロ）の同相化アミノ酸の保護
基Ａの脱離反応は、常法により行なわれる。該方法とし
ては例えばパラジウム、パラジウム黒等の触媒を用いる
水素添加、液体アンモニア中金属ナトリウムによる還元
等の還元的方法、トリフルオロ酢酸、塩化水素酸、弗化
水素、メタンスルホン酸、臭化水素酸等の強酸によるア
シドリシス等を例示することができる。上記触媒を用い
る水素添加は、例えば水素圧１気圧、０〜４０℃にて行
ない得る。触媒の使用−としては通常１００ｍ！１１〜
１ｇ程度とするのがよく、一般に１〜４８時間程時間段
応は終了する。また上記アシドリシスは、無溶媒下、通
常Ｏ〜３０℃程度、好ましくは０〜２０℃程度で約１５
分〜１時間程度を要して行なわれる。酸の使用量は原料
化合物に対し通常５〜１０倍量程度とするのがよい。該
アシドリシスにおいて保護基Ａのみを脱離する場合は、
酸としてトリフルオロ酢酸又は塩化水素酸を使用するの
が好ましい。更に上記液体アンモニア中金属ナトリウム
による還元は、反応液がパーマネントブルーに３０秒〜
１０分間程度呈色しているような量の金属ナトリウムを
用い、通常−４０℃〜−７０℃程度にて行ない得る。

次いで得られる一般式（ハ）の同相化アミノ酸とアミノ
酸（ニ）（もしくはそのカルボキシル基の活性化された
もの）との反応は、溶媒の存在下に行なわれる。該溶媒
としては、ペプチド縮合反応に慣用される公知の各種の
もの、例えば無水ジメチルホルムアミド、ジメチルスル
ホキシド（ＤＭＳＯ）　、ピリジン、クロロホルム、ジ
オキサン、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、酢酸
エチル、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメチルリン酸ト
リアミド或いはこれらの混合溶媒等を例示することがで
きる。また該反応は、必要に応じて、通常のペプチド結
合形成反応に用いられる試薬、例えばＮ　、Ｎ−ジシク
ロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）　、Ｎ−エチル−
Ｎ′−ジメチルアミノカルボジイミド、１−エチル−３
−ジイソプロピルアミノカルボジイミド １３ー ルー３−（２−モルホリニル−４−エチル）カルボジイ
ミド等のカルボジイミド類等の脱水縮合剤の存在下に行
なうことができる。アミノ酸（ハ）とアミノ酸（二）と
の使用割合としては、特に限定はないが、通常前者に対
して後者を等モル量〜１０倍モル量、好ましくは等モル
量〜５倍モル量とするのがよい．、ｌ１２水縮合剤の使
用量も特に限定はなく、通常アミノ酸（二）に対して、
好ましくは当モル量程度使用される。反応温度はペプチ
ド結合形成反応に使用される通常の範囲、一般には約−
４０℃〜約６０℃、好ましくは約−２０℃〜約４０℃の
範囲から適宜選択される。反応時間は一般に数分〜３０
時間程度とされる。

かくして得られる一般式（ホ）のペプチドは、上記と同
様に保護基ＡのｐＡＩＬ一般式（１）で表わされるアミ
ノ酸配列に従い、Ａ　−　Ａ　ＳＤ−　０　１−（、Ａ
−ＡＩ”ＣＩ−ＯＨ％Ａ−ＬＶＳ−ＯＨ１Ａ−ＬＶＳ−
ＯＨ，Ａ−Ｌｙｓ−ＯＨ％Ａ−Ａｓｎ−ＯＨ，Ａ−Ｓｅ
ｒ−ＯＨ１Ａ−Ａｓｎ−ＯＨ，　Ａ−Ｐｈｅ−０１−１
。

Ａ　−　Ｔ　ｙｒ−　Ｏ　Ｈの各アミノ酸もしくはその
カルボ１４− キシ基の活性化されたものと順次縮合反応させることに
より行なわれ、斯くして一般式（チ）で表わされるペプ
チドに誘導することができる。これら縮合反応及び保護
基Ａの脱離反応は、それぞれ前記した方法と同様にして
行なわれる。

また得られるペプチド（チ）は、同様にして保護基Ａの
脱離、アミノ酸の側鎖官能基の保護基の脱離及び不溶性
担体Ｒ１の脱離により、一般式（１）中ＲがＨ−Ｔｙｒ
基を表わすペプチド（１ａ）に誘導される。ここでアミ
ノ酸の側鎖官能基の保護基及び不溶性担体Ｒ＋の脱離反
応は、保護基Ａの脱離反応と同様に行ない得、この場合
酸として弗化水素又は臭化水素酸を用いるのが好ましい
。

また、Ｒが水素原子を示す本発明のペプチドは、上記反
応において得られる一般式（へ）のペプチドから、上記
と同様にして、アミノ酸の側鎖官能基の保護基及び不溶
性担体Ｒ１を脱離させることにより製造することができ
る。尚、上記方法において使用される各アミノ酸は、い
ずれも公知の市販品でよい。

以上のようにして製造された一般式（１）の本発明ペプ
チドは、反応混合物から通常のペプチドの分離手段例え
ば抽出、分配、カラムクロマトグラフィー等により単離
精製される。

また、一般式（２）で表わされる本発明のペプチドも、
上記と同様にして製造することができる。

かくして得られる本発明のペプチドは、これに＋２５　
）、１３１　１等の放射性物質やパーオキシダーゼ（Ｐ
ＯＸ）　、キモトリプシノーゲン、プロカルボキシペプ
チダーゼ、グリセロアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素
、アミラーゼ、ホスホリラーゼ、Ｄ−Ｎａｓｅ　、　Ｐ
−Ｎａｓｅ　、β−ガラクトシダーゼ、グルコース−６
−７オスフエートデハイドロゲナーゼ、オルニチンデカ
ルボキシラーゼ等の各種酵素試薬等を導入することによ
り、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）法又はエンザイム
イムノアツセイ（ＥＩＡ）法において用いられる標識抗
原として利用できる。上記放射性物質の導入は、通常の
方法により実施できる。例えば放射性ヨードは、クロラ
ミンＴを用いる酸化的ヨード化法（Ｗ、　　Ｍ、　　Ｈ
ｕｎｔｅｒ　ａｎｄ　　Ｆ、　　Ｃ，Ｇｒｅｅｎｗｏｏ
ｄ：Ｎａｔｕｒｅ、１９４　．４９５　　（１９６２）
、Ｂｌｏｃｈｅｉ＋Ｊ、８９　．１４４　　、（１９６
３）参照）等により行なねる。具体的には、適当な溶媒
例えば０．２Ｍ　リン酸緩衝液（ｐ　Ｈ−７，４）等の
溶媒中、クロラミンＴの存在下室温付近にて１０〜３０
秒程度で行なわれる。ペプチド、放射性ヨード及びクロ
ラミンＴの使用割合は、例えばチロシン当り放射性ヨー
ド１個を導入する場合には、ペプチド中に含まれるチロ
シン分子１ナノモルに対して放射性ヨードを１ミリキユ
一リー程度、クロラミンＴを１０〜１００ナノモル程度
用いるのがよく、またチロシン当り放射性ヨード２個を
導入する場合には、ペプチド中に含まれるチロシン分子
１ナノモルに対して放射性ヨードを２ミリキユ一リー程
度、クロラミンＴを１０〜１００ナノモル程度用いるの
がよい。斯くして製造される放射性ヨードにより標識化
されたペプチドは、通常の分離手段、例えば抽出、分配
、カラムクロマトグラフィー、透析等により単離精製さ
れる。このようにし１７− て得られるペプチドは必要ならば凍結乾燥させて保存し
ておくこともできる。

酵素試薬の導入は、通常のカップリング法例えばエルラ
ンガ−（Ｂ、　Ｆ、　Ｅｒｌａｎｇｅｒ　）らの方法（
Ａｃｔａ、Ｅ　ｎｄｏｃｒｌｎｏｌ、５ｕｐｐ１．．１
６８　．２０６（１９７２））及び力ロール（Ｍ、　Ｈ
，Ｋａｒｏｌ）らの方法（Ｐ　ｒｏｅ、Ｎ　ａｔｌ、Ａ
　ｃａｄ、３　ｃｌ。　ＬＩＳＡ、。

５７　．７１３　（１９６７））等の公知の方法によっ
て行なうことができる。すなわち、ペプチドと酵素をＮ
ａｌ０Ｌ等の酸化剤の存在下、ｐＨ４〜６の緩衝液、例
えば１■Ｍ酢酸緩衝液（ＤＨ４，４）中で、室温付近で
２〜５時間反応させ、次いでＮａ　ＢＮ２等で還元する
ことによって行なわれる。酵素はペプチド１モルに対し
て１〜３倍モル量程度用いられる。酸化剤はペプチドの
１００〜３００倍モル程度、還元剤は酸化剤の１〜２倍
モル程度用いられるのが好ましい。斯くして製造される
酵素により標識化されたペプチドは、上記放射性ヨード
標識ペプチドと同様に単離ｌＩ顎され、保存することが
できる。

１８− 以下、本発明のペプチドをハプテンとして利用した抗原
の製造方法につき詳述する。

上記抗原は本発明ペプチドをハプテンとし、これをハプ
テン−担体結合ｌ！ｉｔ薬の存在下に、適当な担体と反
応させることにより製造される。上記においてハプテン
に結合される担体としては、通常抗原の作成に肖り慣用
される高分子の天然もしくは合成の蛋白質を広く使用で
きる。該担体としては例えば馬血清アルブミン、牛血清
アルブミン、ウサギ血清アルブミン、人血清アルブミン
、ヒツジ血清アルブミン等の動物の面清アルブミン類；
馬血清グロブリン、牛血清グロブリン、ウサギ血清グロ
ブリン、人血清グロブリン、ヒツジ血清グロブリン等の
動物の血清グロブリン類；馬チログロブリン、牛チログ
ロブリン、ウサギチログロブリン、人チログロブリン、
ヒツジチログロブリン等の動物のチログロブリン類；馬
ヘモグロブリン、牛ヘモグロブリン、ウサギヘモグロブ
リン、人ヘモグロブリン、ヒツジヘモグロブリン等の動
物のヘモグロブリン類：キーホール　リンベット　ヘモ
シアニン（ＫＬＨ）等の動物のヘモシアニン類二回虫よ
り抽出された蛋白質（アスカ−リス抽出物、特開昭５６
−１６４１４号公報、Ｊ　、　　Ｉ　ｕ＋ｕｎ、。

１１１．２６０〜２６Ｂ　（１９７３）、Ｊ。

Ｉｇｖｕｎ、、１　２２　　．３０２　〜３０８　　（
１９７９）　　、Ｊ、ｌ１ｉｕｎ、、９８　．８９３〜
９００　（１９６７）及びＡ■、Ｊ　、　Ｐ　ｈｙｓｉ
ｏｆ、、上史史、５７５〜５７８（１９６０）に記載さ
れたもの又はこれらを更に精製したもの）；ポリリジン
、ポリグルタミン酸、リジン−グルタミン酸共重合体、
リジン又はオルニチンを含む共重合体等を挙げることが
できる。

ハプテン−担体結合試薬としては、通常抗原の作成に当
り慣用されているものを広く使用できる。

具体的にはアミノ基とアミノ基とを架橋結合させる、例
えばグリオキサール、ビスジアゾタイズドベンジジン（
ＢＤＢ）　、マロンジアルデヒド、ゲルタールアルデヒ
ド、スクシンアルデヒド、アジボアルデヒド等の脂肪族
ジアルデヒド類：チオール基とチオール基とを架橋結合
させる、例えばＮ　　、Ｎ’−ｏ−フェニレンジマレイ
ミド、Ｎ　。

Ｎ′−ｍ−フェニレンジマレイミド等のシマレイミド化
合物；アミノ基とチオール基とを架橋結合させる、例え
ばメタマレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシン
イミドエステル、４−（マレイミドメチル）−シクロヘ
キサン−１−カルボキシル−Ｎ′−ヒドロキシスクシン
イミドエステル等のマレイミドカルボキシル−Ｎ−ヒド
ロキシスクシンイミドエステル類；アミノ基とカルボキ
シル基とをアミド結合させる通常のペプチド結合形成反
応に用いられる試薬、例えばＮ　、Ｎ−ジシク０へキシ
ルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’　−ジメチルアミ
ノカルボジイミド、１−エチル−３−ジイソプロピルア
ミノカルポジイミド、１−シクロへキシル−３−（２−
モルホリニル−４−エチル）カルボジイミド等のカルボ
ジイミド類等の脱水縮合剤等を挙げることができる。ま
た上記ハプテン−担体結合試薬としては、ｐ−ジアゾニ
ウムフェニル酢酸等のジアゾニウムアリールカルボン酸
−と通常のペプチド結合形成反応試薬、例えば上記脱水
縮合剤とを組合せたものも使用可能で２１− ある。

上記抗原の製造反応は、例えば水溶液もしくはＥＩＨ７
〜１０の通常の緩衝液中、好ましくはｐＨ８〜９の緩衝
液中、０〜４０℃、好ましくは室温付近で行なわれる。

該反応は通常約１〜２４時間、好ましくは３〜５時間で
完結する。上記において用いられる代表的緩衝液として
は、次のものを例示できる。

０．２Ｎ水酸化ナトリウム−０，２Ｍホウ酸−０，２Ｍ
塩化カリウム緩衝液、 ０．２Ｍ炭酸ナトリウム−０，２Ｍホウ酸−０，２Ｍ塩
化カリウム緩衝液、 ０．０５Ｍ四ホウ酸ナトリウムー０．２Ｍホウ酸−０，
０５Ｍ塩化ナトリウム緩衝液、０．１Ｍリン酸二水素カ
リウム−０，０５Ｍ四ホウ酸ナトリウム緩衝液 上記においてハプテン、ハプテン−担体結合試薬及び担
体の使用割合は、適宜に決定できるが、通常ハプテンに
対して担体を２〜６倍重量程度、好ましくは３〜５倍重
量程度、及びハプテン−担２２− 体結合試薬を５〜１０倍モル程度用いるのがよい。

上記反応によりハプテン−担体結合試薬を仲介させて担
体とハブテンとが結合したペプチド−担体複合体からな
るヒトγ型インターフェロン抗原が収得される。

反応終了後骨られる抗原は常法に従い、例えば透析法、
ゲル濾過法、分別沈澱法等により容易に単離精製できる
。

斯くして得られる抗原は、通常蛋白質１モルに対してペ
プチドが平均５〜２０モル結合したものであり、いずれ
も引き続き該抗原に対して特異性の高い抗体の製造を可
能とするものである。

該抗原による抗体の製造は、上記抗原を哺乳動物に投与
し、生体内に所望抗体を産生させ、これを採取すること
により実施される。

抗体の製造に供せられる哺乳動物としては、特に制限は
ないが、通常ウサギやモルモットを用いるのが好ましい
。抗体の産生に当っては、上記により得られる抗原の所
定量を生理食塩水で適当濃度に希釈し、７０インドの補
助液（Ｃｏ−ｐｌｅｔｅＦ　ｒｅｕｎｄ　’　ｓ　　Ａ
ｊｕｖａｎｔ）と混合して懸濁液を調整し、これを哺乳
動物体に投与すればよい。例えばウサギに上記懸濁液を
皮肉注射（抗原の量として０．５〜５　ｍａ１回）し、
以後２週間毎に２〜１０ケ月、好ましくは４〜６ケ月間
投与し免疫化させればよい。抗体の採取は、上記懸濁液
の最終投与の１〜２週間経過後、免疫化された動物から
採血し、これを遠心分離後、血清を分離することにより
行なわれる。上記によれば、用いる抗原に対して優れた
特異性を有する抗体を収得でき、これはＲＩＡ法、ＥＩ
Ａ法等に利用してヒトγ型インターフェロンの定量に用
い得る。

以下本発明を更に詳しく説明するため、一般式（１）及
び（２）で表わされる本発明ペプチドの製造例及びこれ
により得られるペプチドからの抗原及び抗体の製造例を
挙げるが、本発明はこれらに限定されるものではない。

尚、各製造例におけるＲｆｉ！はシリカゲル上の薄層ク
ロマトグラフィーにて下記混合溶媒を用いて測定したも
のである。

Ｒｆ＋・ｎ−ブタノール−酢酸−水（４：１：５）Ｒｆ
２・・・ｎ−ブタノール−酢酸−ビリジン−水（１５：
３：１０：１２） 〈ペプチドの製造〉 製造例　１ ■　カリウム　ｔｅｒｔ−ブトキシド１２．４ミリ当量
のＤＭＳＯ溶液３溶液３虹 ３、６５ａを溶解し、クロロメチル化ポリスチレン樹脂
（１．３２ミリ当量／ｇ樹脂、財団法人蛋白質研究奨励
金）５Ωを加えて、８０℃で３０分反応させる。樹脂を
ＤＭＳｏ，５０％酢酸／クロロホルム、塩化メチレンの
順に、充分に洗浄し、減圧乾燥してＢ　ｏｃ　−　Ｐ　
ｈｅ−樹脂６．０４０を得る。

一部を加水分解後アミノ酸分析を行なった結果、アミノ
酸０．１７ミリモル／ｇ樹脂であった。

■　上記■で得たＢ　ｏｃ　−　Ｐ　ｈｅ−樹脂５．８
８ＣＩをクロロホルム３０１Ｑで３回゛洗浄後、５０％
トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）のクロロホルム溶液３０■
Ｑに加え、室温で２０分間反応させる。樹脂をクロロホ
ルム３０１１２で１回、塩化メチレン３〇２５− １（ｉで５回、１０％トリエチルアミンの塩化メチレン
溶液３０１Ｑで３回、次いで塩化メチレン３０１Ｑで６
回それぞれ洗浄してＨ−ｐｈｅ＝樹脂を得る。

Ｂｏａ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−０Ｈ（７）０．８１（１
　’Ｆｒ塩化メチレンに溶かした溶液２５ｍＱに上記Ｈ
ーＰｈｅー樹脂を加え、次いでＤＣＣの０．５１（＋を
塩化メチレンに溶かした溶液５■Ｑを加え、室温で２時
間反応させる。樹脂を塩化メチレン３０腸Ｑで６回洗浄
後、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）　−ＯＨの０．８１ｇ
及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ　）
０．３４ａの塩化メチレン溶液２５■Ｑに加え、次いで
ＤＣＣの０．５１（Ｉを塩化メチレンに溶かした溶液５
ＩＱを加えて再度同様に反応させるに１カツプリング法
）。樹脂を塩化メチレンで充分に洗浄してＢｏａ−ＡＳ
ｐ（ＯＢｚｌ）　−Ｐｈｅ−樹脂を得る。

■　上記■と同様にして、Ｂ　ｏｃ−　Ａ　ｓｐ　（　
Ｏ　Ｂ　ｚｌ　）−Ｐｈｅ−樹脂の脱ＢＯＣ化を行ない
、次いで下記アミノ酸を順次縮合及び脱臼０Ｃ反応に付
す。

２６− Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨ０，８１ｇＢｏａ−
Ａｒｏ（Ｔｏｓ）−ＯＨ１、１１ΩＢｏａ−Ｌｙｓ（Ｃ
Ｉ　−Ｚ）　−ＯＨ１，０４Ｑを３回繰返す Ｂｏｃ−Ａｓｎ−ＯＮＰ　　　　　　０．８８０及びＨ
ＯＢｔ　　　　　　　　　　　０．３４ΩＢｏａ−８ｅ
ｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ０，７４ＱＢｏａ−Ａｓｎ−ＯＮＰ
　　　　　　Ｏ，ａｓｐ及びＨＯＢｔ　　　　　　　　
　　　０．３４０Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ０，６６Ｇ 斯くしてＨ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−８ａｒ（Ｂｚｌ）　−Ａ
ｓｎ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）−Ｌｙ
ｓ（ＣＩ−Ｚ）−Ａｒｏ（Ｔｏｓ）−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
）−Ａ８Ｄ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−樹脂の７．７９０を
得る。

このうち３．７５０をアニソール４園Ｑ及び弗化水素４
０−Ｑに溶かし、−２０℃で３０分、次いで０℃で３０
分反応させた後、弗化水素を留去し、残渣を乾燥後、１
０％酢酸にて抽出し、エーテルにて洗浄後、凍結乾燥す
る。次いでセファデックスＧ−１０（ファルマシア社、
溶出液１０％酢酸）によるゲルか過、次いでＬＨ−２０
（ファルマシア社、溶出液、１／１００ＯＮ−ＨＣＩ！
　）にて精製して、）ｌ−ｐｈｅ−Ａｓｎ−８ｅｒ−Ａ
ｓｎ−１ｙｓ−Ｌ　ＶＳ−Ｌ　ＶＳ−Ａ　ｒｉ　Ａ　８
０−　Ａ　Ｓ＋１−　Ｐ　ｈｏ−ＯＨ１７）３５０■ｇ
を得る。以下このペプチドを「ペプチドＡ」と呼ぶ。

Ｒｆ値： Ｒｆ　ｌ−０，０１Ｒｆ　２−０．３５元素分析値： （Ｏｓ　＋　Ｈｅ　ａ　Ｎ＋　ｅ　Ｏ＋　ａ　・８Ｈ２
０・５ＣＨｓＣＯＯＨとして） Ｃ（％）　　Ｈ（％）　　　Ｎ（％） 理論値　　４６．７３　７．１３　１４．５８分析Ｉｆ
　　　４６．４８　７．４０　１４．４６製造例　２ 前記製造例１で得たＨ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−８ｅｔ（Ｂｚ
ｌ）−Ａｓｎ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ
）−Ｌｙｓ（ＣＩ　−Ｚ）　−Ａｒｏ（Ｔｏｓ）−Ａｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）　−Ａｔｐ（ＯＢｚｌ）　−Ｐｈｅ−樹
脂４．０４ａにＢｏａ−Ｔｙｒ（Ｃ１２Ｂｚｌ）　　Ｏ
Ｈ１，０６（ｌを前記製造例１−■と同様にして反応さ
せ、次いで１−■と同様にして脱保護基及び脱樹脂反応
を行ない、同様に精製して、Ｈ−Ｔ　ｙｒ−Ｐ　ｈｅ　
−Ａ　ｓｎ　−Ｓ　ｅｒ　−Ａ　ｓｎ　−Ｌ　ＶＢ　−
Ｌ　ｖＳ−Ｌ　ＶＳ　−Ａｒａ−ＡＳＩ）−ＡＤＤ　−
Ｐｈｅ−ＯＨ（以下「ペプチドＢ」と呼ぶ）２５８鵬０
を得る。

Ｒｆ値： Ｒｆｌ−０，０１Ｒｆ２−０．３６ 元素分析値： （ＣｙｏＨ＋ｏ２Ｎ２ｏ０２ｏ　・１０Ｈａ０・５ＣＨ
ａＣＯＯＨとして） Ｃ（％）　　Ｈ（％）　　　Ｎ（％） 理論ＩＦ　　　４７，４７　７．０７　１３．８４分析
値　　４７．２０　７．３０　１３．９２製造例　３ ベンズヒドリルアミン樹脂（０，５６ミリ当量／ｇ樹脂
、財団法人蛋白質研究奨励金）１．７８９を用い、前記
製造例１−■及び１−■と同様にして、下記アミノ酸を
順次縮合及び脱Ｂｏｃ反応に付す。

２９− Ｂｏａ−Ｇｌｕ−ＯＢ、ｚｌ　　　　　　０．　８４０
Ｂｏａ−８ｏｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ０，７４ＱＢｏａ−Ａ
ｌａ−ＯＨ０，４７０ Ｂｏａ−Ａｒｏ（Ｔｏｓ）−ＯＨ’１．０７ａを２回Ｂ
ｏａ−Ｇｌｙ−ＯＨ０，４３゜ Ｂｏａ−Ｇｌｎ−ＯＮＰ　　　　　　０．９２゜Ｂ　ｏ
ｃ　−Ｐ　ｈｅ−０）１　　　　　　０．６６゜Ｂｏａ
−Ｌｅｕ−ＯＨ”ＨＱＯＯ，６２ｇＢｏＣ−Ｍｅｔ−Ｏ
Ｈ０，６２０ Ｂｏａ−Ｇｌｎ−ＯＮＰ　　　　　　０．９２゜Ｂｏａ
−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ０，７４ａ斯くして、Ｈ−８
ｅｒ（Ｂｚｌ）　−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｌ　ｅｕ−Ｐｈｅ
−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｏ（Ｔｏａ）　−Ａｒ。

（Ｔｏｓ）　−Ａ　Ｉａ−８ｅｒ　（Ｂｚｌ）　−Ｇｌ
ｕ　（０Ｂｚｌ）−樹脂３．２３０を得る。このうち１
．５ｇを弗化水素１５ＩＱ、アニソールｌ、５ＩＱ及び
エタンジオール０．５ｍ　Ｑと混合し、−２０℃で３０
分間次いで０℃で３０分間撹拌後、弗化水素を留去し、
残渣を乾燥する。１０％酢酸にて抽出し、エーテルにて
洗浄後、凍結乾燥する。次いで七フ３０− アデツクスＧ−２５（ファルマシア社、溶出液１０％酢
酸）にて精製して、Ｈ−３ｅｒ　−Ｑ　Ｉｎ−Ｍ　ｅｔ
　−Ｌ　ｅｕ　−Ｐ　ｈｅ−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇ　＋ｙ　−
Ａ　ＮＪ　−Ａ　ｒＱ　−Ａ　Ｉａ　−Ｓ　ｅｒ　−Ｇ
　Ｉｎ　−ＯＨの２３５鴎Ｑを得る。以下これを「ペプ
チドＣ」と呼ぶ。

Ｒｆ値： Ｒｆｌ−０，０１Ｒｆ２−０．３８ 元素分析値： （Ｃｓ　ａ　Ｈ９ｖ　Ｎ２１０ｔ　ａ　Ｓ・４Ｈ２０・
２ＣＨ３Ｃ０ＯＨとして） Ｃ（％）　Ｈ（％）　　　Ｎ（％） 理論値　　４６．５２　７．１２　１８．３７分析値　
　４６．４３　７．３８　１８．５１製造例　４ 製造例３で得たＨ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）　−Ｇｌｎ−Ｍｅ
ｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ａｒａ（Ｔｏｓ
）　−Ａｒ。

（Ｔｏｓ）　−Ａｌａ−８ｅｔ（Ｂｚｌ）　−Ｇｌｕ（
ＯＢｚｌ）−樹脂の０．８（ｌ　ｋ：Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（
Ｃ１２Ｂｚｌ）−ＯＨの０．２６０を前記製造例１−■
と同様にして反応させ、次いで１−〇と同様にして脱保
護基及び脱樹脂反応を行ない、同様に精製して、Ｈ−Ｔ
　ｙｒ　−Ｓ　ｅｒ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｍ　ａｔ　−Ｌ　
ｅｕ　−Ｐ　ｈｅ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇ　ＩＶ−Ａ　ｒＱ
−Ａ　ｒＱ−Ａ　Ｉａ−Ｓ　ｅｒ−Ｇ　Ｉｎ−ＯＨの９
５−ｇを得る。以下これを［ペプチドＤＪと呼ぶ。

Ｒｒ値： Ｒｆｌ−０，０１Ｒｆ２−０．３９ 元素分析値： （ＣａｙＨ＋ｏａＮ２２０２ｏＳ・５Ｈ２０゜２ＣＨｓ
　Ｃ０ＯＨとして） Ｃ（％）　　Ｈ（％）　　　Ｎ（％） 理論ｌｉ１　　４７，８６　７．０１　１７．２９分析
（１４８，１０７，２５１７，０３〈抗原の製造〉 製造例　１ ペプチドの製造例２で得たペプチドＢの５．５５ｍｏ及
び牛血清アルブミン（ＢＳＡ）の１０．２３ｍｇ！０．
１６Ｍ　　＊つＷ１塩ａ＊＊（０，１３Ｍ　　Ｎａ　　
Ｃ１、ｐ　Ｈ−９，０＞２ｉ＋　　Ｑに溶かす。この溶
液に、ＢＤＢの１．６４１１１１の同緩衝液３．０Ｉ　
Ｑを加え、４℃にて５時間撹拌する。その後反応混合物
を水１Ｑで透析し、透析中水を５回交換する。その後ペ
プチド−蛋白複合体を含む溶液を凍結乾燥してヒトγ型
インターフェロン抗原１７．２７１（＋を得る。以下こ
の抗原を「抗原■」と言う。

抗原■はＢ５Ａｌモルに対してペプチドＢが平均８モル
結合したものである。尚このペプチド８とＢＳＡとの結
合率は、得られる抗原工を更にセファデックスＧ−５０
（溶出液：生理食塩水、検出：ｏｏ　　２８０ｎｌ、流
出速度：３ｍ＋１／時間、分取量：１１Ｑづつ）でゲル
ｔＦ遇した際、未反応の　ＢＳＡ及びペプチドＢの存在
は認められないことより、該ゲル濾過によってＢＳＡに
結合したペプチドＢのフラクションと他の生成体くペプ
チドＢの２１体）のフラクションとを分離し、ペプチド
２量体の標準濃度の検量線を作成して、上記２量体の量
を求め、これを出発原料として用いたペプチドＢの量か
ら差し引いた値がすべてＢＳＡに結合しているとして求
めたものである。以下の抗原の製造例においても同様と
する。

３３− 製造例　２ ペプチドの製造例３で得たペプチドＣの５■Ｑ及びＢＳ
Ａの２５−ｇを水４■Ｑに溶解する。この溶液にジシク
ロヘキシルカーポジイミド（ＤＣＧ）の２００１（］を
加え、室温で５時間撹拌する。次に反応混合物を水２Ｑ
を用いて４℃にて４８時間を要して透析する。透析中５
回水を交換する。その後ペプチド−蛋白質複合体を含む
溶液を凍結乾燥してヒトγ型インターフェロン抗原を得
る。以下この抗原を「抗原■」と言う。抗原■はＢ５Ａ
１モルに対してペプチドＣが平均１２モル結合したもの
である。

製造例　３ ペプチドの製造例３で得たペプチドＣの４１０及びＢＳ
Ａの２０＋ｏを酢酸アンモニウムｌ１ｉｉ液（０，１モ
ル、ｐＨ−７，０）の２■Ｑに溶かす。

この溶液に０．１モルのゲルタールアルデヒド溶液０．
１１１１２加え、室温で５時間撹拌する。その後反応混
合物を４８時間、４℃で水１Ｑで透析する。その後、ペ
プチド−蛋白質複合体を含む溶３４− 液を凍結乾燥してヒトγ型インターフェロン抗原の２２
１（ｌを得る。以下この抗原を「抗原■」と呼ぶ。

得られた抗原■は、Ｂ５Ａ１モルに対してペプチドＣが
平均９モル結合したものである。

製造例　４ 前記抗原の製造例１において、ペプチドＢの代りにペプ
チドＡを用いて、同様にして目的抗原を得る。また、前
記抗原の製造例２においてペプチドＣに代りペプチドＤ
を用いて、同様にして目的抗原を得る。

く抗体の製造〉 製造例　１ 抗原の製造例１で得た抗原工の３０μｇを１．５■ｅの
生理食塩水に溶解後、これにフロイントの補助液１．５
Ｉ　Ｑを加えて調整した懸濁液を、それぞれ７羽のウサ
ギ（Ｎ　ｅｗ　−Ｚ　ｅａｌａｎｄｗｈｉｔｅ　　ｒａ
ｂｂｌｔｓ　）　　（２，５〜３．０ｋＯ）　ニ皮下投
与し、２週間毎に６回同量を投与する。更にその後１ケ
月毎に３回、最初に投与した量と同量を投与する。最終
投与後７日経過してのち試験動物から採血し、遠心分離
して抗血清をそれぞれ採取して、ヒトγ型インターフェ
ロン抗体（以下「抗体■〜■」と夫々呼ぶ）を得る。

製造例　２ 上記製造例１に於いて、１０羽のウサギに抗原■のそれ
ぞれ６０μｇを使用する以外は同様の操作により、ヒト
γ型インターフェロン抗体（抗体■〜ＸＶＩ）を夫々得
る。

く標識ペプチドの製造〉 ペプチドの製造例２で得たペプチドＢをクロラミンＴを
用いる方法で以下の通り標識化する。

即ち上記ペプチド５μｇの０．５モルリン酸塩ＩＩ衝１
１（ＤＨ７，５）１０μＱにＮａ（”５１）（ｃａｒｒ
ｉｅｒ　　ｆｒｅｅ　　Ｎ、　Ｅ、　Ｎ、　）　１ミリ
キユーリーの０．５モルリン酸塩ｍｔｉ液２０μＱを加
え、つぎにクロラミンＴ６０μＱの０．５モルリン酸塩
緩衝液２０μＱを加える。室温で２５秒間撹拌して１５
０Ｉｇのメタ重亜硫酸ナトリウム（〜８２ＳＱ　Ｏｗｌ
　）の０．５Ｍリン＊ｍｍ衝液２０μＱを加えることで
反応を終わらせる。次いで反応液に１％の冷沃化ナトリ
ウム水溶液１００μＱを加え、反応混合物を高速液体ク
ロマトグラフィー〔１０〜４０％エタノール　ｇｒａｄ
ｌｅｎｔｌｏ、１ＭトリスＨｃＱ１衝液（１）Ｈ８，Ｏ
）１、０ｇ＋　Ｑ／ｉ＋ｉｎ　、逆相クロマト〕にて精
製して、１２５ＩでＳ識されたペプチドＢを得る。該標
膳ペプチドの放射活性は１１２８μＣ１／μｇであった
。

０力価の測定 上記で得られる抗体の力価を次の通り測定する。

即ち抗体をそれぞれ生理食塩水で１０．１０２．１０３
．１０４．１０５・・・・・・・・倍に希釈（イニシャ
ル）し、これらのそれぞれ１００μＱに、■１２５標謙
ペプチド（上記で得られる標識ペプチドを約９５００Ｑ
Ｄ−になるように希釈したもの）０．１１１１及び０．
０５モルリン酸塩緩衝液（ｐ　Ｈ−７，４）（０，２５
％ＢＳＡ、１０ｉ＋　ＭＥＤ丁Ａ及び０．０２％Ｎａ　
Ｎｓを含む）０．２ＩＱを加え、４℃で２４時間インキ
ュベー３７− トし、生成した抗体と１１２５標識抗原との結合体を、
デキストランーー性炭法及び遠心分離法（４℃、３０分
間、３０００ｒｌｌｌ）により未反応（結合しない）　
１１１２５標識ペプチドから分離し、その放射線をカウ
ントし、各希釈濃度にお゛ける抗体の１１２５標識ペプ
チドとの結合率（％）を測定する。縦軸に抗体の１１２
５標識ペプチドとの結合率（％）及び横軸に抗体の希釈
倍率（イニシャル濃度）をとり、各々の濃度において結
合率をプロットする。結合率が５０％となる抗体の希釈
倍率即ち抗体の力価を求める。抗体Ｉ−ＸＶＩについて
得られた結果を下記第１表に示す。

第　　１　　表 体　　　　　力　　　　　　　　抗　　体　　　　　力
　　価Ｉ　　　３２８０　　ｒＸ　　　３０００Ｉ　　
＜１０００　　Ｘ　　１８４００ｍ　　　２０００　　
ＸＩ　　４４０００ＴＶ　　１９２００　　ＸＩＩ　１
８００００Ｖ　　８００００　　ＸＩ［［１６８００３
８− Ｖｌ　　　　　５２０００　　　　　ＸｒＶ　　　２０
００００Ｖｌ　　　　　＜１０００　　　　　ＸＶ　　
　　３０８００■　　　　　　　死　　亡　　　　　　
　ＸＶＩ　　　　　１２８００ＸＶＩ　　　　　　７８
００ 本発明に従い得られた抗体は、いずれもヒトγ型インタ
ーフェロンに対して特異性よく反応する。

（以　上） ３９− ＝３２１−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ■　一般式 ％式％ 〔式中Ｒは水素原子又はＨ−Ｔｙｒ基を示す。〕で表わ
   されるペプチド及び一般式 ％式％ 〔式中Ｒは上記に同じ。〕 で表わされるペプチドからなる群より選ばれたヒトγ−
   インターフェロン関連ペプチド。