JPS58219124A - ヒト上皮細胞増殖因子の製造法 - Google Patents
ヒト上皮細胞増殖因子の製造法Info
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- JPS58219124A JPS58219124A JP57103292A JP10329282A JPS58219124A JP S58219124 A JPS58219124 A JP S58219124A JP 57103292 A JP57103292 A JP 57103292A JP 10329282 A JP10329282 A JP 10329282A JP S58219124 A JPS58219124 A JP S58219124A
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- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はヒト上皮細胞増殖因子の製造法に関す′る。
ヒト尿中にヒト上皮細胞増殖因子が含有されていること
は知られている。本物質は分子間に３組のジスルフィド
架橋を有する、分子量約６．０００の直鎖ポリペブタイ
ドで、マウス顎下線より得られるマウ不上皮細胞増殖因
子と化学構造ならびに生理作用がきわめて類似した化合
物であり、胃酸分泌抑制作用ならびに上皮細胞増殖作用
等を有し、医薬品として有用な物質である。
は知られている。本物質は分子間に３組のジスルフィド
架橋を有する、分子量約６．０００の直鎖ポリペブタイ
ドで、マウス顎下線より得られるマウ不上皮細胞増殖因
子と化学構造ならびに生理作用がきわめて類似した化合
物であり、胃酸分泌抑制作用ならびに上皮細胞増殖作用
等を有し、医薬品として有用な物質である。
ヒト尿から上皮細胞増殖因子を得る方法としてはタンニ
ン酸沈澱法（ＨＧｒ６ｇｏｒｙ ｅｔ ａｌ、：Ｈ
ｏｐｐｅ−８ｅｙｌｅｒ’ｓ Ｚ、ｐｈｙｓｉｏｌ、
Ｃｈｅｍ、。
ン酸沈澱法（ＨＧｒ６ｇｏｒｙ ｅｔ ａｌ、：Ｈ
ｏｐｐｅ−８ｅｙｌｅｒ’ｓ Ｚ、ｐｈｙｓｉｏｌ、
Ｃｈｅｍ、。
ｌ堕３．１７６５（１９７５））ならびに安息香酸−ア
セトン粉末法（Ｓ、Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ、ＨＰ
ｒｏｃ、Ｎａｔ、、１゜Ａ ｃ ａ ｄ 、 Ｓ ｃ
ｉ −Ｕ Ｓ Ａ ７２１１３１７ （１９７５） ）
が知られているが、これらの方法はいずれもヒト上皮細
胞増殖因子を選択的に吸着できず、以後の精製に複雑な
工゛程を要し、また大量の有機溶媒を必要とするなどの
欠点がある。
セトン粉末法（Ｓ、Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ、ＨＰ
ｒｏｃ、Ｎａｔ、、１゜Ａ ｃ ａ ｄ 、 Ｓ ｃ
ｉ −Ｕ Ｓ Ａ ７２１１３１７ （１９７５） ）
が知られているが、これらの方法はいずれもヒト上皮細
胞増殖因子を選択的に吸着できず、以後の精製に複雑な
工゛程を要し、また大量の有機溶媒を必要とするなどの
欠点がある。
本発明者は従来の方法の欠点を排除し、簡便かつ安価に
大量の尿を処理して目的とする因子を採取できる方法に
ついて探究を重ねた。
大量の尿を処理して目的とする因子を採取できる方法に
ついて探究を重ねた。
その結果、ヒト上皮細胞増殖因子が式ｋｌ ２０８・２
Ｓ１０２・２Ｈ２０＊Ａ／２０８・（ｉｓｉ０２・２Ｈ
２０および２Ｍｇ０・６Ｓｉ０２・ＸＨ２Ｏの組成を有
する吸着体に選択的“０吸着″＝ａ、ｓｃ、：″・ま０
式”／、２°、８°９゜１０２ｅｘＨ２０，ｙｓｉ０２
＊ｘＨ２ＯおよびＡ／（ＯＨ）ａの組成を有する吸着体
に全く吸着されないことなどを見出した。
Ｓ１０２・２Ｈ２０＊Ａ／２０８・（ｉｓｉ０２・２Ｈ
２０および２Ｍｇ０・６Ｓｉ０２・ＸＨ２Ｏの組成を有
する吸着体に選択的“０吸着″＝ａ、ｓｃ、：″・ま０
式”／、２°、８°９゜１０２ｅｘＨ２０，ｙｓｉ０２
＊ｘＨ２ＯおよびＡ／（ＯＨ）ａの組成を有する吸着体
に全く吸着されないことなどを見出した。
その実験データは第１表に示される。データ中の吸着剤
は、実用上の価値を考慮して、安価、容易に入手可能、
再生可能、大量の尿処理に適しかつバッチ法と力・レム
法のいずれの操作にも使用できるものが選ばれている。
は、実用上の価値を考慮して、安価、容易に入手可能、
再生可能、大量の尿処理に適しかつバッチ法と力・レム
法のいずれの操作にも使用できるものが選ばれている。
実験において、各吸着剤を用いてヒト尿中の上皮細胞増
殖因子をｐＨを変化させた条件下で吸着させ、吸着剤か
ら因子をＩＮアンモニア水で溶出し、溶出液中のヒト上
皮細胞増殖因子の尿よりの回収率および純度を測定した
。
殖因子をｐＨを変化させた条件下で吸着させ、吸着剤か
ら因子をＩＮアンモニア水で溶出し、溶出液中のヒト上
皮細胞増殖因子の尿よりの回収率および純度を測定した
。
第 １ 表
（註）表中の吸着剤ム１は日本活性白土０株）、Ａ２
ｌＡ８ 、Ａ１２は和光紬薬工率ど株）、應４〜Ａ１１
は協和化学工業０株）の製品で、ＫＷはキヨーワード＠
（ＫＹＯＷＡＡＤ■）の略である。
ｌＡ８ 、Ａ１２は和光紬薬工率ど株）、應４〜Ａ１１
は協和化学工業０株）の製品で、ＫＷはキヨーワード＠
（ＫＹＯＷＡＡＤ■）の略である。
上記第１表から明らかなように、Ａ １ （Ａ７２０
ａ・（１８１０２・Ｈ２Ｏ）、人２ （ｋ１２０ｓ・２
ｓ１ｏ２・２Ｈ２０） 詔よびＡｌ Ｏ（２ＭｇＩＯ−
６Ｂ１０２＊ＸＨ２０） の吸着剤は従来のタンニン
酸吸着法詔よび安息香酸−アセトン粉末法よりも回収率
および純度に右いて優れている。
ａ・（１８１０２・Ｈ２Ｏ）、人２ （ｋ１２０ｓ・２
ｓ１ｏ２・２Ｈ２０） 詔よびＡｌ Ｏ（２ＭｇＩＯ−
６Ｂ１０２＊ＸＨ２０） の吸着剤は従来のタンニン
酸吸着法詔よび安息香酸−アセトン粉末法よりも回収率
および純度に右いて優れている。
一方、Ａ４ （Ａ／（ＯＨ）ａ）、＆１ｌ（Ａ／２０３
・９Ｓｉ０２ｅ！Ｈ２０）および／１６１２（５’５ｉ
０２ｅ、ｘＨ２Ｏ）ｃ７）吸着剤にはヒト上皮細胞増殖
因子はほとんど吸着されない。
・９Ｓｉ０２ｅ！Ｈ２０）および／１６１２（５’５ｉ
０２ｅ、ｘＨ２Ｏ）ｃ７）吸着剤にはヒト上皮細胞増殖
因子はほとんど吸着されない。
尿中には種々の生理活性物質、たとえば、尿プラスミノ
ーゲン・アクチベーター、ウロペプシン等のプロテアー
ゼが混在し、また妊婦尿には大量の胎盤性性腺刺激ホル
モンも存在する。これらの生理活性物質が゛ヒト上皮細
胞増殖因子調製物に含まれでいることは好ましくない。
ーゲン・アクチベーター、ウロペプシン等のプロテアー
ゼが混在し、また妊婦尿には大量の胎盤性性腺刺激ホル
モンも存在する。これらの生理活性物質が゛ヒト上皮細
胞増殖因子調製物に含まれでいることは好ましくない。
そこで、ヒト上皮細胞増殖因子を全く吸着しない上記の
Ａ４ ｌＡ１１および悉１２の吸着剤で尿を前処理した
場合としない場合において、上記の生理活性物質の含有
量を調べた。
Ａ４ ｌＡ１１および悉１２の吸着剤で尿を前処理した
場合としない場合において、上記の生理活性物質の含有
量を調べた。
被検尿としては正常ヒト尿と妊婦尿を用いた。
前処理としては上記８種の吸着剤のいずれか１
：。
：。
種を尿と一定時間接触させたのち吸着剤を除去した。か
くして得られた被処理尿に前記の吸着剤應１−Ａ２もし
くは厘１０のいずれかを加えて吸着操作を行い、吸着剤
を分離し、ＩＮ−アンモニア水で溶出し、溶出液中のヒ
ト上皮細胞増殖因子の収率、純度、プロテアーゼ活性な
らびにヒト胎盤性性腺刺激ホルモンの活性を調べ、第２
表Ａ詔よびＢに示される成績を得た。
くして得られた被処理尿に前記の吸着剤應１−Ａ２もし
くは厘１０のいずれかを加えて吸着操作を行い、吸着剤
を分離し、ＩＮ−アンモニア水で溶出し、溶出液中のヒ
ト上皮細胞増殖因子の収率、純度、プロテアーゼ活性な
らびにヒト胎盤性性腺刺激ホルモンの活性を調べ、第２
表Ａ詔よびＢに示される成績を得た。
第 ２ 表 ＡＣ正常ヒト尿）
第２表Ｂ（妊婦尿）
米ヒト胎盤性性腺刺激ホルモン
第２表ＡおよびＢから明らかなようにＡ１１（Ａ／２０
ａ・９Ｓ１０２・ｘＨ２Ｏ）＊Ａ１２（ＳｉＯ２） オ
よびＡ４ （Ａｌ（ＯＨ）Ｂ）の吸着剤で前処理すると
、未処理の場合にくらべて製品の収率見変らず、純度は
約２倍に上昇し、プロテアーゼ活性は陰性となる。また
同表Ｂによれば原料が妊婦尿の場合、扁１１ （Ａ１２
０８・９Ｓｉ０２・ＸＨ２Ｏ）の吸着剤がヒト胎盤性性
腺刺戟ホルモンを除去するのに優れていることが判る。
ａ・９Ｓ１０２・ｘＨ２Ｏ）＊Ａ１２（ＳｉＯ２） オ
よびＡ４ （Ａｌ（ＯＨ）Ｂ）の吸着剤で前処理すると
、未処理の場合にくらべて製品の収率見変らず、純度は
約２倍に上昇し、プロテアーゼ活性は陰性となる。また
同表Ｂによれば原料が妊婦尿の場合、扁１１ （Ａ１２
０８・９Ｓｉ０２・ＸＨ２Ｏ）の吸着剤がヒト胎盤性性
腺刺戟ホルモンを除去するのに優れていることが判る。
本発明は上記の新知見に基づくもので、ヒト尿に中性な
いし酸性条件下に式 ％式％ で式中、２はＡ／２０Ｂまたは２ＭｙＯを、Ｘ は化合
物の含水量によって定められる化合物１分子中の水の分
子数を表わす） で示されるアルミノまたはマグネシウムケイ酸塩の粉末
を加えて尿中の有効成分を該粉末に吸着させ、次いでア
ルカリ性溶液で溶出することを特徴とするヒト上皮細胞
増殖因子の製造法である。
いし酸性条件下に式 ％式％ で式中、２はＡ／２０Ｂまたは２ＭｙＯを、Ｘ は化合
物の含水量によって定められる化合物１分子中の水の分
子数を表わす） で示されるアルミノまたはマグネシウムケイ酸塩の粉末
を加えて尿中の有効成分を該粉末に吸着させ、次いでア
ルカリ性溶液で溶出することを特徴とするヒト上皮細胞
増殖因子の製造法である。
本発明においては、尿をそのまま用いてもよいが、予め
尿をｐＨ８〜９、望ましくは８．５として夾雑するムコ
多糖類等の不純物を沈澱させ、沖過その他の手段により
除去したものを用いるのが望ましい。
尿をｐＨ８〜９、望ましくは８．５として夾雑するムコ
多糖類等の不純物を沈澱させ、沖過その他の手段により
除去したものを用いるのが望ましい。
尿中のヒト上皮細胞増殖因子の吸着に用いられる吸着剤
は式Ａ／２０Ｂ・２（もしくは６）８１０２）・ＸＨ２
Ｏまたは２ＭｙＯ−６Ｓｉ０２−ｘＨ２Ｏで示すし、前
者の例としては、式Ａｌ２Ｏ８・６ｓｉｏ３・２Ｈ２０
（第１表における吸着剤厖１）、式Ａ／２０８・９＋９
１０２・２Ｈ２０（第１表における吸着剤＆、２）で示
されるアルミノケイ酸塩が挙げられる。また、後者の例
としては、式ＱＭ９０−６８１０２−ＸＨ２０で示すし
るマグネシウムケイ酸塩（第１表における吸着剤應１０
）が挙げられる。
は式Ａ／２０Ｂ・２（もしくは６）８１０２）・ＸＨ２
Ｏまたは２ＭｙＯ−６Ｓｉ０２−ｘＨ２Ｏで示すし、前
者の例としては、式Ａｌ２Ｏ８・６ｓｉｏ３・２Ｈ２０
（第１表における吸着剤厖１）、式Ａ／２０８・９＋９
１０２・２Ｈ２０（第１表における吸着剤＆、２）で示
されるアルミノケイ酸塩が挙げられる。また、後者の例
としては、式ＱＭ９０−６８１０２−ＸＨ２０で示すし
るマグネシウムケイ酸塩（第１表における吸着剤應１０
）が挙げられる。
これらの吸着剤は中性ないし弱酸性条件下に尿に加えら
れる。吸着剤が上記のアルミノケイ酸塩である場合、好
・ましいｐＨは５〜７である。ｐＨ５以下においては不
純物が吸着される傾向がある。
れる。吸着剤が上記のアルミノケイ酸塩である場合、好
・ましいｐＨは５〜７である。ｐＨ５以下においては不
純物が吸着される傾向がある。
また、そのアルミノケイ酸塩の平均粒経が数十メツシュ
の場合は、バッチ法で尿と接触させるのがよい。実用上
尿ＩＩ！当り２．５〜５２の吸着剤を約１時間接触させ
るのが好ましいが、吸着剤の尿に対する割合や尿との接
触時間は特に限定されない。
の場合は、バッチ法で尿と接触させるのがよい。実用上
尿ＩＩ！当り２．５〜５２の吸着剤を約１時間接触させ
るのが好ましいが、吸着剤の尿に対する割合や尿との接
触時間は特に限定されない。
吸着剤が上記のマグネシウムケイ酸塩である場合、吸着
剤の粒経は本発明の目的を達しつる限り特に限定されな
いが、吸着操作法によっては好ましい範囲があり、たと
えばバッチ法で吸着を行う場合の吸着剤の粒経は１００
〜２００メツシユ、カラム法では５０〜１００メツシユ
である・。また、吸着剤は酸性で尿に加えるのがよく、
好ましいｐＨは２〜３である。３以上のｐＨにおいては
ヒト上皮細胞増殖因子の吸着が阻害される傾向がある。
剤の粒経は本発明の目的を達しつる限り特に限定されな
いが、吸着操作法によっては好ましい範囲があり、たと
えばバッチ法で吸着を行う場合の吸着剤の粒経は１００
〜２００メツシユ、カラム法では５０〜１００メツシユ
である・。また、吸着剤は酸性で尿に加えるのがよく、
好ましいｐＨは２〜３である。３以上のｐＨにおいては
ヒト上皮細胞増殖因子の吸着が阻害される傾向がある。
吸着剤の使用量は特に限定されないが、実用上尿１７当
り５〜１０ノが好ましい。
り５〜１０ノが好ましい。
目的の因子を吸着した吸着剤は、たとえば沈降させて上
清と分離し、アルカリ性、好ましくはｐＨ１０〜１２、
の溶液で溶出する。この溶液の例としては１〜２Ｎ−ア
ンモニア水、１〜２ Ｎ −炭ｍナトリウム水溶液など
が挙げられる。溶出液中の因子を濃縮するため番こは、
アセトンのような水和性有機溶媒または硫酸アンモニウ
ムのような塩類を溶出液に加えて因子を沈澱させる方法
、凍結乾燥や減圧蒸留により溶出液から水分を除去する
方法などいずれも用いることができるが、尿を大量処理
する場合には硫酸アンモニウムを加える塩析法が好まし
い。
清と分離し、アルカリ性、好ましくはｐＨ１０〜１２、
の溶液で溶出する。この溶液の例としては１〜２Ｎ−ア
ンモニア水、１〜２ Ｎ −炭ｍナトリウム水溶液など
が挙げられる。溶出液中の因子を濃縮するため番こは、
アセトンのような水和性有機溶媒または硫酸アンモニウ
ムのような塩類を溶出液に加えて因子を沈澱させる方法
、凍結乾燥や減圧蒸留により溶出液から水分を除去する
方法などいずれも用いることができるが、尿を大量処理
する場合には硫酸アンモニウムを加える塩析法が好まし
い。
本発明に用いるヒト尿は、ある種の吸着剤で予備的に不
純物を除去し精製されていてもよい。
純物を除去し精製されていてもよい。
その吸着剤の一例は式Ａｌ２Ｏ３−９Ｓｉ０２ａＸＨ２
０（式中Ｘは前記と同義）で示されるアルミノケイ酸塩
で、このものはキヨーワード■７Ｏ−０（協和化学工業
０株）製）の商品名で市販されている。
０（式中Ｘは前記と同義）で示されるアルミノケイ酸塩
で、このものはキヨーワード■７Ｏ−０（協和化学工業
０株）製）の商品名で市販されている。
これはバッチ法、カラム法いずれの操作法でも尿中の不
純物を吸着する目的で用いることができ、吸着は弱酸性
条件下、好ましくはｐＨａ〜５で行うのがよい。５を越
えるｐＨに３いては、不純物吸着の効果が弱くなる傾向
がある。吸着剤の粒経は好ましくは５０〜２００メツシ
ユであるが、それ以外の粒経でも粉末の形ならば用いつ
る。また、その使用量は特に限定されないが、実用上尿
１１当り５〜１０２が好ましい。尿との接触時間は一般
に約２時間で充分である。
純物を吸着する目的で用いることができ、吸着は弱酸性
条件下、好ましくはｐＨａ〜５で行うのがよい。５を越
えるｐＨに３いては、不純物吸着の効果が弱くなる傾向
がある。吸着剤の粒経は好ましくは５０〜２００メツシ
ユであるが、それ以外の粒経でも粉末の形ならば用いつ
る。また、その使用量は特に限定されないが、実用上尿
１１当り５〜１０２が好ましい。尿との接触時間は一般
に約２時間で充分である。
不純物の吸着に用いる吸着剤の他の例はケイ酸であり、
一般に式ｙｓｉ０２・ＸＨ２Ｏで示され、その例として
はケイソウ士、シリカゲルなどが挙げられる。吸着は弱
酸性条件下、好ましくはｐＨ４〜６で行うのがよい。こ
の吸着剤の吸着操作法、好ましい粒径、使用量、接触時
間などは前記のアルミノケイ酸塩の場合と同様である。
一般に式ｙｓｉ０２・ＸＨ２Ｏで示され、その例として
はケイソウ士、シリカゲルなどが挙げられる。吸着は弱
酸性条件下、好ましくはｐＨ４〜６で行うのがよい。こ
の吸着剤の吸着操作法、好ましい粒径、使用量、接触時
間などは前記のアルミノケイ酸塩の場合と同様である。
また、不純物の吸着には水酸化アルミニウムも用いられ
、それは一般に式ｋｌ（ＯＨ）ｓで表わされる。吸着は
はゾ中性の条件下で行うのがよく、好ましい使用量は尿
１ｊ当り２．５〜５ｙである。この吸着剤の吸着操作法
、好ましい粒径、接触時間は前記のアルミノケイ酸塩の
場合と同様である。
、それは一般に式ｋｌ（ＯＨ）ｓで表わされる。吸着は
はゾ中性の条件下で行うのがよく、好ましい使用量は尿
１ｊ当り２．５〜５ｙである。この吸着剤の吸着操作法
、好ましい粒径、接触時間は前記のアルミノケイ酸塩の
場合と同様である。
正常ヒト尿をヒト上皮細胞増殖因子製造の原料として用
いる場合には、前、記のアルミノケイ酸塩、ケイ酸およ
び水酸化アルミニウムをいずれも尿から予め不純物を吸
着、除去するための吸着剤として用いることができる。
いる場合には、前、記のアルミノケイ酸塩、ケイ酸およ
び水酸化アルミニウムをいずれも尿から予め不純物を吸
着、除去するための吸着剤として用いることができる。
妊婦尿を原料とする場合も同様であるが°、この場合、
特に好ま−しいのは前記のアルミノケイ酸塩である。
特に好ま−しいのは前記のアルミノケイ酸塩である。
前処理およびヒト上皮細胞増殖因子の吸着に用いる吸着
剤の組合せは、以下に示す実施例に限定されず、適宜選
択できることは言うまでもない。
剤の組合せは、以下に示す実施例に限定されず、適宜選
択できることは言うまでもない。
次に実施例を挙げてさらに詳しく本発明を説明する。
実施例１
正常ヒト尿１１を４Ｎ−水酸化ナトリウム液で１）Ｈ８
，５とし、生じた沈澱を戸去した後６Ｎ−塩酸でｐＨ８
，０とし、合成マグネシウムケイ酸塩２ＭｐＯｅ６Ｓｉ
０２ｅｘＨ２０（第１表ニ詔ける吸着剤鳥１０）１（ｌ
を加えて２時間接触させ、静置後上清と吸着剤を分離し
１’Ｏｍｌ’の水で吸着剤を洗い２０ｍｅのＩＮ−アン
モニア水゛で溶出した。溶出液をｐＨ５，６とし、硫酸
アンモニウムを５０チ飽和になるように加えてヒト上皮
細胞増殖因子を沈澱さ □せる。得られたヒ
ト上皮細胞増殖因子は２８．５μ２で総たん白質量当り
の純度は０．２５ ％収率は９５チであった。
，５とし、生じた沈澱を戸去した後６Ｎ−塩酸でｐＨ８
，０とし、合成マグネシウムケイ酸塩２ＭｐＯｅ６Ｓｉ
０２ｅｘＨ２０（第１表ニ詔ける吸着剤鳥１０）１（ｌ
を加えて２時間接触させ、静置後上清と吸着剤を分離し
１’Ｏｍｌ’の水で吸着剤を洗い２０ｍｅのＩＮ−アン
モニア水゛で溶出した。溶出液をｐＨ５，６とし、硫酸
アンモニウムを５０チ飽和になるように加えてヒト上皮
細胞増殖因子を沈澱さ □せる。得られたヒ
ト上皮細胞増殖因子は２８．５μ２で総たん白質量当り
の純度は０．２５ ％収率は９５チであった。
実施例２
正常ヒト尿１１を４Ｎ−水酸化ナトリウム液でｐＨ８，
５とし生じた沈澱を戸去した後、６Ｎ−塩酸にてｐＨ６
，０とし、カオリン（第１表における吸着剤Ａ２）５ｐ
を加えて２時間接触させる。静置後上清と吸着剤を分離
し１０ｒｎｌ！の水で吸着剤を洗浄し次いで２０ｍｅの
ＩＮ−アンモニア水１こて溶出する。溶出液のｐＨを中
性とし硫酸アンモニウムを５０チ飽和になるように加え
ヒト上皮細胞増殖因子を得た。得られた上皮細胞増殖因
子は２７．７μ２で総たん白質当りの純度は０．２５％
収率は９９％であった。
５とし生じた沈澱を戸去した後、６Ｎ−塩酸にてｐＨ６
，０とし、カオリン（第１表における吸着剤Ａ２）５ｐ
を加えて２時間接触させる。静置後上清と吸着剤を分離
し１０ｒｎｌ！の水で吸着剤を洗浄し次いで２０ｍｅの
ＩＮ−アンモニア水１こて溶出する。溶出液のｐＨを中
性とし硫酸アンモニウムを５０チ飽和になるように加え
ヒト上皮細胞増殖因子を得た。得られた上皮細胞増殖因
子は２７．７μ２で総たん白質当りの純度は０．２５％
収率は９９％であった。
実施例８
正常ヒト尿１１を４Ｎ−水酸化ナトリウム液でｐＨ８，
５とし生じた沈澱を戸去した後６Ｎ−塩酸でｐＨ６，５
とし、合成アルミノケイ酸ｔｌＷＡ／２０ｓ・１３ｓ１
０２・Ｈ２０（第１表における吸着剤煮１）５２を加え
て１時間接触させ静置後上清と吸着剤とを分離し、ｌＯ
ｍｅの水で吸着剤を水洗した後に２０ｍｅのＩＮ−アン
モニア水にて溶出した。溶出液を中性とし硫酸アンモニ
ウムを５０％飽和になるよう加えヒト上皮細胞増殖因子
を沈澱させる。得られた上皮細胞増殖因子は２９．４μ
？、総たん白質当りの純度はｏ、 ｇ ８ ｓ、回収率
は９９％であった。
５とし生じた沈澱を戸去した後６Ｎ−塩酸でｐＨ６，５
とし、合成アルミノケイ酸ｔｌＷＡ／２０ｓ・１３ｓ１
０２・Ｈ２０（第１表における吸着剤煮１）５２を加え
て１時間接触させ静置後上清と吸着剤とを分離し、ｌＯ
ｍｅの水で吸着剤を水洗した後に２０ｍｅのＩＮ−アン
モニア水にて溶出した。溶出液を中性とし硫酸アンモニ
ウムを５０％飽和になるよう加えヒト上皮細胞増殖因子
を沈澱させる。得られた上皮細胞増殖因子は２９．４μ
？、総たん白質当りの純度はｏ、 ｇ ８ ｓ、回収率
は９９％であった。
実施例４
正常ヒト尿ｌ！を４Ｎ−水酸化ナトリウム液でｐ）Ｉ
ｓ、 ５と７し、生じた沈澱をＦ去し６Ｎ−塩酸でｐＨ
７，０とし水酸化アルミニウムの粉末５ｙを加え２時間
接触させる。静置後上清と吸着剤とを分離し上清を６Ｎ
−塩酸にてＩ）Ｈ８，０とし、例１に゛おいて用いたと
同様の合成マグネシウムケイ酸塩ｇＭｆ！ｏ＊５Ｂ１０
９＊ＸＨ２Ｏ（キヨーワード ６００）を１０２加えて
２時間接触させる。静置後上浦と吸着剤とを分離し、１
０１Ｒ１の水で吸着剤を洗い、ＩＮ−アンモニア水２０
−にて溶出する。溶出液をＩ）Ｈ５，６とした後硫酸ア
ンモニウムを５０チ飽和になるように加えヒト上皮細胞
増殖因子を沈澱させる。得られた上皮細胞増殖因子はｇ
６．８μ？。
ｓ、 ５と７し、生じた沈澱をＦ去し６Ｎ−塩酸でｐＨ
７，０とし水酸化アルミニウムの粉末５ｙを加え２時間
接触させる。静置後上清と吸着剤とを分離し上清を６Ｎ
−塩酸にてＩ）Ｈ８，０とし、例１に゛おいて用いたと
同様の合成マグネシウムケイ酸塩ｇＭｆ！ｏ＊５Ｂ１０
９＊ＸＨ２Ｏ（キヨーワード ６００）を１０２加えて
２時間接触させる。静置後上浦と吸着剤とを分離し、１
０１Ｒ１の水で吸着剤を洗い、ＩＮ−アンモニア水２０
−にて溶出する。溶出液をＩ）Ｈ５，６とした後硫酸ア
ンモニウムを５０チ飽和になるように加えヒト上皮細胞
増殖因子を沈澱させる。得られた上皮細胞増殖因子はｇ
６．８μ？。
総たん白質当りの純度は０．４８ ’１回収率は９８％
であった。
であった。
実施例５
妊婦尿ｌｌを４Ｎ−水酸化す） ＩＪウム液でｐＨ８，
５とし、生じた沈澱を戸去し６Ｎ−塩酸でｐＨ４５とし
た後合成アルミノケイ酸塩Ａ／２０８・９ＳｉＱ ２
＊ Ｘ Ｈ２０（第１表における吸着剤ｍｌ １ ）
１０ノを加えて２時間接触させる。静置後上滑と吸着剤
を分離し、上清に合成アルミノケイ酸塩Ａ／２０８・Ｑ
Ｓ ｉ Ｏ２＠ Ｈ２０（第１表における吸着剤＆１
）５２を加え２時間攪拌する。静置後上清と吸着剤とを
分離し、吸着剤を１０ｍｅの水で洗った後２０ｍｅのＩ
Ｎ−アンモニア水で溶出する。溶出液を中性とし〜硫酸
アンモニウムを５０％飽和になるように加えヒト上皮細
胞増殖因子を沈澱させる。得られた上皮細胞増殖因子は
２６．５μ２、廟、たん白質当りの純度は０．４１ ％
、回収率は８８．３ ％であった。また胎盤性性腺刺激
ホルモンはたん白質１ツ中に活性を認めなかった。
５とし、生じた沈澱を戸去し６Ｎ−塩酸でｐＨ４５とし
た後合成アルミノケイ酸塩Ａ／２０８・９ＳｉＱ ２
＊ Ｘ Ｈ２０（第１表における吸着剤ｍｌ １ ）
１０ノを加えて２時間接触させる。静置後上滑と吸着剤
を分離し、上清に合成アルミノケイ酸塩Ａ／２０８・Ｑ
Ｓ ｉ Ｏ２＠ Ｈ２０（第１表における吸着剤＆１
）５２を加え２時間攪拌する。静置後上清と吸着剤とを
分離し、吸着剤を１０ｍｅの水で洗った後２０ｍｅのＩ
Ｎ−アンモニア水で溶出する。溶出液を中性とし〜硫酸
アンモニウムを５０％飽和になるように加えヒト上皮細
胞増殖因子を沈澱させる。得られた上皮細胞増殖因子は
２６．５μ２、廟、たん白質当りの純度は０．４１ ％
、回収率は８８．３ ％であった。また胎盤性性腺刺激
ホルモンはたん白質１ツ中に活性を認めなかった。
（註）
ヒト上皮細胞増殖因子の活性測定はコーヘンら（Ｂ、Ｃ
ｏｈｅｎ、Ｇ、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ：Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ
、。
ｏｈｅｎ、Ｇ、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ：Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ
、。
Ａ ｃ ａｄ、８ Ｑ ｉ 、＊ ［Ｔ ” Ａ ７２
ｍ １８１７ （１９７５） ）のラジオレセプター
アッセイに準拠して行なった。
ｍ １８１７ （１９７５） ）のラジオレセプター
アッセイに準拠して行なった。
またこの測定に使用したスタンダードｍ−ＥＧＦオヨび
１２５１−ｍ−ＥＧＦはカーペンタ−ら（Ｇ。
１２５１−ｍ−ＥＧＦはカーペンタ−ら（Ｇ。
Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ、Ｓ、Ｃｏｈｅｎ ｅｔ、ａＩ！
、；、ｒ、Ｂｉｏ／。
、；、ｒ、Ｂｉｏ／。
ＣＭｍ、、２５０．４２９７（１９７５））の方法によ
りつくった。
りつくった。
たん白質の測定はウシ血清アルブミンを標準としてＬｏ
ｗｒｙ−Ｆｏ／ｉｎ法（０，Ｈ，Ｌｏｗｒｙ、Ｎ、、Ｔ
。
ｗｒｙ−Ｆｏ／ｉｎ法（０，Ｈ，Ｌｏｗｒｙ、Ｎ、、Ｔ
。
Ｒｏｗｅ／ｒｏｕｇｈ、ｅｔ、ａ／、：Ｊ、Ｂｉｏ／、
Ｃｈｅｍ、。
Ｃｈｅｍ、。
１９３．２６５（１９５１））を用いた。
ヒト胎盤性性腺刺激ホルモンの測定はＵＣＧタイトレー
ジョンセット（米国ニューシャーシー州、Ｃａｒｔｅｒ
−Ｖｌａｌｊθ０１３ ■ｎｃ、製〕を用いて行なっ
た。
ジョンセット（米国ニューシャーシー州、Ｃａｒｔｅｒ
−Ｖｌａｌｊθ０１３ ■ｎｃ、製〕を用いて行なっ
た。
プロテアーゼ活性の測定はカゼインを基質としてマクド
ナルドら、の方法（Ｃ、Ｂｉ 、 ＭｃＤｏｎａ７ｄａ
ｎｄＬ、Ｌ、Ｃｈｅｎ：Ａｎａ／、Ｂｉｏｃ、ｈｅｍ、
、１０゜１’７５（１９ｆ１５））に従って行なった。
ナルドら、の方法（Ｃ、Ｂｉ 、 ＭｃＤｏｎａ７ｄａ
ｎｄＬ、Ｌ、Ｃｈｅｎ：Ａｎａ／、Ｂｉｏｃ、ｈｅｍ、
、１０゜１’７５（１９ｆ１５））に従って行なった。
（自発）手続ネ甫正書
昭和５７年 ７月 ９日
ヒト上皮細胞増殖因子の製造法
３、補正をする者
事件との関係 特許出願人
住所 兵庫県神戸市東灘区御影本町３丁目４番２０号
名称 日本ケミカルリサーチ株式会社
代表者 芦１）信
４、代理人
５、補正の対称 明細書の詳細な説明の欄６、補正の
内容 別紙の通り −・ 補正の内容 明細書の詳細な説明の欄のうち
内容 別紙の通り −・ 補正の内容 明細書の詳細な説明の欄のうち
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 ヒト尿に中性ないし酸性条件下曇こ武Ｚ−２（も
しくは６）Ｓｉ０２−ＸＨ２０Ｃ式中、２はＡ／２０３
または２ ＭｙＯを、Ｘは化合物の含水量によって定め
られる化合物１分子中の水の分子数を表わす）で示され
るアｌレミノまたはマグネシウムケイ酸塩の粉末を加え
て尿中の有効成分を該粉末に吸着させ、次いでアルカリ
性溶液で溶出することを特徴とするヒト上皮細胞増殖因
子の製造法 ２、ヒト尿が、式Ａ／２０３＊９Ｓｉ０２＊ＸＨ２０（
式中Ｘは前記と同義）で示されるアルミノケイ酸塩、ケ
イ酸または水酸化アルミニウムの粉末を加え不純物を吸
着させ、吸着体を除去することにより、予め精製されて
いる特許請求の範囲第１項記載の製造法 ３、 ヒト尿中の有効成分を吸着させるためのアルミノ
ケイ酸塩が式 Ａｌ２０３ｓ２（もしくは（１）８１０２ｓｘＨ２０（
式中Ｘは前記と同義）で示される特許請求の範囲第１項
もしくは第２項記載の製造法 ４、 ヒト尿中の有効成分を吸着させるためのマグネシ
ウムケイ酸塩が式 ％式％ ０式中、Ｘは前記と同義）で示される特許請求の範囲第
１項記載の製造法 ５、 ヒト尿に、式Ａ／２０３−９Ｓｉ０２ｓＸＨ２０
で示されるアルミノケイ酸塩を弱酸性条件下、好ましく
はｐＨ３〜５において接触させるか、ケイ酸を弱酸性条
件下、好ましくはｐＨ４〜６において接触させるか、ま
たは水酸化アルミニウムを中性条件下に接触させて不純
物を吸着さげる特許請求の範囲第２項記載の製造法 ６、 ケイ酸の組成が式ｙ Ｓ ｉ Ｏ２・Ｘ’Ｈ２０
（式中旭Ｘは前記と同義、ｙは化合物１分子中のシリカ
分子の数を表わす）で示される特許請求の範囲第２項も
しくは第３項記載の製造法 ７、水酸化アルミニウムの組成が式Ａ ｌ ２ （ＯＨ
） Ｂで示される特許請求の範囲第２項もしくは第５項
記載の製造法
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57103292A JPS58219124A (ja) | 1982-06-15 | 1982-06-15 | ヒト上皮細胞増殖因子の製造法 |
| US06/502,661 US4528186A (en) | 1982-06-15 | 1983-06-09 | Method of producing human epidermal growth factor |
| DE8383303439T DE3379379D1 (en) | 1982-06-15 | 1983-06-14 | Method of producing human epidermal growth factor |
| EP83303439A EP0097057B1 (en) | 1982-06-15 | 1983-06-14 | Method of producing human epidermal growth factor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57103292A JPS58219124A (ja) | 1982-06-15 | 1982-06-15 | ヒト上皮細胞増殖因子の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58219124A true JPS58219124A (ja) | 1983-12-20 |
| JPH0322399B2 JPH0322399B2 (ja) | 1991-03-26 |
Family
ID=14350207
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57103292A Granted JPS58219124A (ja) | 1982-06-15 | 1982-06-15 | ヒト上皮細胞増殖因子の製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4528186A (ja) |
| EP (1) | EP0097057B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58219124A (ja) |
| DE (1) | DE3379379D1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IN165717B (ja) * | 1986-08-07 | 1989-12-23 | Battelle Memorial Institute | |
| US4717717A (en) * | 1986-11-05 | 1988-01-05 | Ethicon, Inc. | Stabilized compositions containing epidermal growth factor |
| US5226912A (en) | 1987-08-26 | 1993-07-13 | United States Surgical Corporation | Combined surgical needle-braided suture device |
| US5222978A (en) | 1987-08-26 | 1993-06-29 | United States Surgical Corporation | Packaged synthetic absorbable surgical elements |
| US5366081A (en) | 1987-08-26 | 1994-11-22 | United States Surgical Corporation | Packaged synthetic absorbable surgical elements |
| US5472702A (en) * | 1987-08-26 | 1995-12-05 | United States Surgical Corporation | Sterilization of growth factors |
| US5306289A (en) * | 1987-08-26 | 1994-04-26 | United States Surgical Corporation | Braided suture of improved characteristics |
| US5359831A (en) | 1989-08-01 | 1994-11-01 | United States Surgical Corporation | Molded suture retainer |
| US5246104A (en) * | 1989-08-01 | 1993-09-21 | United States Surgical Corporation | Molded suture retainer |
| US5434135A (en) * | 1990-08-02 | 1995-07-18 | Indu Parikh | Growth factor compositions, preparation and use |
| US5360790A (en) * | 1990-12-11 | 1994-11-01 | The Regents Of The University Of Michigan | Method and formulations for the therapy of acute renal failure |
| CA2059245C (en) * | 1991-02-08 | 2004-07-06 | Michael P. Chesterfield | Method and apparatus for calendering and coating/filling sutures |
| AU2489992A (en) | 1991-08-16 | 1993-03-16 | Chiron Corporation | Muteins of epidermal growth factor exhibiting enhanced binding at low ph |
| JP4051475B2 (ja) * | 1996-03-15 | 2008-02-27 | バイオイコール アーゲー | 成長因子複合体の抽出方法 |
| US20090192554A1 (en) * | 2008-01-29 | 2009-07-30 | Confluent Surgical, Inc. | Bioabsorbable block copolymer |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR811180A (fr) * | 1936-03-16 | 1937-04-08 | Euchemia Nv | Procédé pour l'obtention d'hormones |
| JPS5167229A (en) * | 1974-12-09 | 1976-06-10 | Nippon Steel Corp | Kirudokono zokaihoho |
| SU537681A1 (ru) * | 1975-05-16 | 1976-12-05 | Всесоюзный научно-исследовательский институт технологии кровезаменителей и гормональных препаратов | Способ получени хорионического гонадотропина |
| JPS6025112A (ja) * | 1983-07-21 | 1985-02-07 | 新興化学工業株式会社 | 電気絶縁用粘着性複合体 |
-
1982
- 1982-06-15 JP JP57103292A patent/JPS58219124A/ja active Granted
-
1983
- 1983-06-09 US US06/502,661 patent/US4528186A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-06-14 DE DE8383303439T patent/DE3379379D1/de not_active Expired
- 1983-06-14 EP EP83303439A patent/EP0097057B1/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0097057A2 (en) | 1983-12-28 |
| JPH0322399B2 (ja) | 1991-03-26 |
| EP0097057A3 (en) | 1985-07-03 |
| EP0097057B1 (en) | 1989-03-15 |
| DE3379379D1 (en) | 1989-04-20 |
| US4528186A (en) | 1985-07-09 |
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