JPH07267992A - 新規なタンパク質ｐｈｂｐ−７０ - Google Patents
新規なタンパク質ｐｈｂｐ−７０Info
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- JPH07267992A JPH07267992A JP6061905A JP6190594A JPH07267992A JP H07267992 A JPH07267992 A JP H07267992A JP 6061905 A JP6061905 A JP 6061905A JP 6190594 A JP6190594 A JP 6190594A JP H07267992 A JPH07267992 A JP H07267992A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
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- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ヒトを含む哺乳動物の胎児および新生児の血
液から得られる還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分
析出で約６０〜８０ＫＤａの分子量を有数ＰＨＢＰ−７
０と名付けられた創傷治療活性を有するタンパク質。 【効果】 本発明により提供されるタンパク質ＰＨＢＰ
−７０は新規なタンパク質であり、線維芽細胞の増殖促
進活性を有するので創傷治療剤として有用である。
液から得られる還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分
析出で約６０〜８０ＫＤａの分子量を有数ＰＨＢＰ−７
０と名付けられた創傷治療活性を有するタンパク質。 【効果】 本発明により提供されるタンパク質ＰＨＢＰ
−７０は新規なタンパク質であり、線維芽細胞の増殖促
進活性を有するので創傷治療剤として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規なタンパク質、さ
らに詳しくは、ヘパリン結合性を有しかつ線維芽細胞増
殖作用を有するタンパク質に関する。本発明のタンパク
質はＰＨＢＰ−７０（Plasma Heparin Binding Protein
-70）と名付けられたものであり、ヒトを含む哺乳動物
の血液より得ることができる。
らに詳しくは、ヘパリン結合性を有しかつ線維芽細胞増
殖作用を有するタンパク質に関する。本発明のタンパク
質はＰＨＢＰ−７０（Plasma Heparin Binding Protein
-70）と名付けられたものであり、ヒトを含む哺乳動物
の血液より得ることができる。
【０００２】
【従来の技術】創傷治療の過程において種々の成長因子
が関与していることが知られている（Dijke et al., Bi
otechnology, (1989), vol.7, p.793-798)。特に、ＴＧ
Ｆ−β(transforming growth factor-β）やＰＤＧＦ
（platelet-derived growth factor）は、線維芽細胞を
増殖させ、障害部位へ細胞を誘引し、創傷の修復を促進
することが知られている。しかし、本発明物質が線維芽
細胞を増殖させたり、創傷治療に効果があるという報告
はこれまでなされていなかった。
が関与していることが知られている（Dijke et al., Bi
otechnology, (1989), vol.7, p.793-798)。特に、ＴＧ
Ｆ−β(transforming growth factor-β）やＰＤＧＦ
（platelet-derived growth factor）は、線維芽細胞を
増殖させ、障害部位へ細胞を誘引し、創傷の修復を促進
することが知られている。しかし、本発明物質が線維芽
細胞を増殖させたり、創傷治療に効果があるという報告
はこれまでなされていなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
課題は創傷治療に対して効果のある新たな治療薬として
用いることのできるタンパク質を提供することである。
課題は創傷治療に対して効果のある新たな治療薬として
用いることのできるタンパク質を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】ヒトを含む哺乳類動物の
血液中には、各細胞組織の成長を刺激する種々の成長因
子が含有されることが考えられる。量的に入手しやすい
ウシ血漿を出発原料として、新たな線維芽細胞増殖活性
を有する蛋白因子の精製分離を試みた。線維芽細胞増殖
活性測定のためには、例えば、Ｂａｌｂ／３Ｔ３細胞株
が使用できる。
血液中には、各細胞組織の成長を刺激する種々の成長因
子が含有されることが考えられる。量的に入手しやすい
ウシ血漿を出発原料として、新たな線維芽細胞増殖活性
を有する蛋白因子の精製分離を試みた。線維芽細胞増殖
活性測定のためには、例えば、Ｂａｌｂ／３Ｔ３細胞株
が使用できる。
【０００５】初めに、血漿に塩化バリウムを加えバリウ
ム吸着を行いカルシウム結合タンパク質を得た。この画
分を陰イオンカラムクロマトグラフィによりカラムに結
合する血液凝固因子を取り除いた。素通り画分につき、
種々の成長因子はヘパリンに結合しやすいことが知られ
ていたので、ヘパリンアフィニテイカラムクロマトグラ
フィでカラムに結合する画分を分離した。さらに、ゲル
ろ過カラム、陰イオンカラムクロマトグラフィ、逆相液
体クロマトグラフィにより、さらに細かい画分に分離し
た。これらの各画分について、線維芽細胞増殖活性を測
定した。こうして得られた活性画分のひとつについて、
Ｎ末端のアミノ酸配列及びアミノ酸組成を決定し、タン
パク質及び遺伝子配列データーベースと参照して、公知
のタンパク質であるかどうか調べた。その結果、新規な
タンパク質であることが判明した。
ム吸着を行いカルシウム結合タンパク質を得た。この画
分を陰イオンカラムクロマトグラフィによりカラムに結
合する血液凝固因子を取り除いた。素通り画分につき、
種々の成長因子はヘパリンに結合しやすいことが知られ
ていたので、ヘパリンアフィニテイカラムクロマトグラ
フィでカラムに結合する画分を分離した。さらに、ゲル
ろ過カラム、陰イオンカラムクロマトグラフィ、逆相液
体クロマトグラフィにより、さらに細かい画分に分離し
た。これらの各画分について、線維芽細胞増殖活性を測
定した。こうして得られた活性画分のひとつについて、
Ｎ末端のアミノ酸配列及びアミノ酸組成を決定し、タン
パク質及び遺伝子配列データーベースと参照して、公知
のタンパク質であるかどうか調べた。その結果、新規な
タンパク質であることが判明した。
【０００６】本タンパク質はＰＨＢＰ−７０と名付けら
れた。本発明により提供されるＰＨＢＰ−７０は、下記
の物理的性質及びＮ末端アミノ酸配列を有する、動物の
血液より単離された新規なタンパク質である。 (１) 分子量：約６０〜８０ＫＤａ（還元条件下でのＳ
ＤＳ−ＰＡＧＥ法による） (２) Ｎ末端アミノ酸配列：配列表配列番号１に示すア
ミノ酸配列 (３) 性質：ヘパリン結合性でありかつ線維芽細胞増殖
作用を有する。 ＰＨＢＰ−７０は、線維芽細胞増殖作用を失わせずに、
若干のアミノ酸残基の変更や化学修飾を加えたり、ある
いは、フラグメント化を行なうことにより、更に製剤に
適したタンパク質となることが期待できる。
れた。本発明により提供されるＰＨＢＰ−７０は、下記
の物理的性質及びＮ末端アミノ酸配列を有する、動物の
血液より単離された新規なタンパク質である。 (１) 分子量：約６０〜８０ＫＤａ（還元条件下でのＳ
ＤＳ−ＰＡＧＥ法による） (２) Ｎ末端アミノ酸配列：配列表配列番号１に示すア
ミノ酸配列 (３) 性質：ヘパリン結合性でありかつ線維芽細胞増殖
作用を有する。 ＰＨＢＰ−７０は、線維芽細胞増殖作用を失わせずに、
若干のアミノ酸残基の変更や化学修飾を加えたり、ある
いは、フラグメント化を行なうことにより、更に製剤に
適したタンパク質となることが期待できる。
【０００７】ＰＨＢＰ−７０は、水溶性が高く、創傷治
療には適当な水溶性基剤と混合して局所的に直接患部に
塗布する投与法が最もふさわしいが、その他にも全身性
投与として、静脈内注射剤又は皮下投与剤として投与す
ることができ、また、微粒子のエアロゾル製剤として、
経鼻又は経肺的に投与することができる。投与量は、局
所投与では１〜１００μg／投与部位／人／日、また全
身性投与では０.１〜１０mg／kg／日を投与する。以下
に実施例により、本発明を更に詳しく説明するが本発明
はこれらの実施例に限定されるものではない。
療には適当な水溶性基剤と混合して局所的に直接患部に
塗布する投与法が最もふさわしいが、その他にも全身性
投与として、静脈内注射剤又は皮下投与剤として投与す
ることができ、また、微粒子のエアロゾル製剤として、
経鼻又は経肺的に投与することができる。投与量は、局
所投与では１〜１００μg／投与部位／人／日、また全
身性投与では０.１〜１０mg／kg／日を投与する。以下
に実施例により、本発明を更に詳しく説明するが本発明
はこれらの実施例に限定されるものではない。
【０００８】
実施例１ ウシ血漿よりの線維芽細胞（Ｂａｌｂ／３Ｔ
３細胞）増殖促進因子の精製 １) ウシ血漿よりビタミンＫ依存性タンパク質の除去 ウシ血漿１９リットルに１リットルの抗凝固剤（３.８
％クエン酸ナトリウム、１０mM塩酸ベンズアミジン）を
加え、よく混和した。これに、２リットルの１Ｍ塩化バ
リウムを４℃にて撹拌しながら添加後、１時間放置し
た。白色沈殿物を遠心（４０００rpm、５分間）して集
め、３mM塩酸ベンズアミジン、０.０１Ｍ塩化バリウ
ム、０.０２％アジ化ナトリウムを含む塩化ナトリウム
で洗浄し遠心して沈殿物を得た。この操作を２回行っ
た。この沈殿物に１.５リットルの４０％飽和硫安（ｐ
Ｈ７.０）を加え、撹拌しながら４℃で一晩放置した。
沈殿物を遠心（４０００rpm、３０分）で除いた後、上
澄みに対し７０％飽和になるよう固形硫安を加え、１時
間放置した。これを遠心（４０００rpm、３０分）し、
その沈殿物を、１００mlのリン酸緩衝液Ａ（０.０５Ｍ
リン酸、０.２Ｍ塩化ナトリウム、1mM塩酸ベンズアミジ
ン、０.０２％アジ化ナトリウム、ｐＨ６.０）に溶か
し、同緩衝液で透析を行った。透析後、遠心（１５,０
００rpm、３０分）し、上清を得た（Hashimoto, N., et
al., J. Biochem, (1985), vol.97, p.1347-1355)。こ
の上清を、あらかじめ同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−
セファロースＣＬ−６Ｂ（カラムサイズ直径５cm×長さ
３０cm）のカラムに通しビタミンＫ依存性タンパク質を
吸着除去し素通り画分を得た。
３細胞）増殖促進因子の精製 １) ウシ血漿よりビタミンＫ依存性タンパク質の除去 ウシ血漿１９リットルに１リットルの抗凝固剤（３.８
％クエン酸ナトリウム、１０mM塩酸ベンズアミジン）を
加え、よく混和した。これに、２リットルの１Ｍ塩化バ
リウムを４℃にて撹拌しながら添加後、１時間放置し
た。白色沈殿物を遠心（４０００rpm、５分間）して集
め、３mM塩酸ベンズアミジン、０.０１Ｍ塩化バリウ
ム、０.０２％アジ化ナトリウムを含む塩化ナトリウム
で洗浄し遠心して沈殿物を得た。この操作を２回行っ
た。この沈殿物に１.５リットルの４０％飽和硫安（ｐ
Ｈ７.０）を加え、撹拌しながら４℃で一晩放置した。
沈殿物を遠心（４０００rpm、３０分）で除いた後、上
澄みに対し７０％飽和になるよう固形硫安を加え、１時
間放置した。これを遠心（４０００rpm、３０分）し、
その沈殿物を、１００mlのリン酸緩衝液Ａ（０.０５Ｍ
リン酸、０.２Ｍ塩化ナトリウム、1mM塩酸ベンズアミジ
ン、０.０２％アジ化ナトリウム、ｐＨ６.０）に溶か
し、同緩衝液で透析を行った。透析後、遠心（１５,０
００rpm、３０分）し、上清を得た（Hashimoto, N., et
al., J. Biochem, (1985), vol.97, p.1347-1355)。こ
の上清を、あらかじめ同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−
セファロースＣＬ−６Ｂ（カラムサイズ直径５cm×長さ
３０cm）のカラムに通しビタミンＫ依存性タンパク質を
吸着除去し素通り画分を得た。
【０００９】２) ヘパリンアフィニテイカラムクロマト
グラフィ、ゲルろ過カラム、陰イオンカラムクロマトグ
ラフィ法による粗精製 リン酸緩衝液Ａで平衡化しておいたヘパリン−セファロ
ースＣＬ−６Ｂのカラム（直径１.６cm×長さ１５cm、
ファルマシア社）に流速１ml／分で展開する。その後、
リン酸緩衝液Ａで同カラムを充分に洗浄する。洗浄後、
ヘパリン−セファロースＣＬ−６Ｂのカラムに吸着した
ペプチド又はタンパク質を、塩化ナトリウム濃度にして
０.２〜１.５Ｍのリニアグラジェントにより溶出した。
溶出液は、吸光度光度計を用い、２８０nmの吸光度によ
りモニターした。溶出パターンを図１に示す。活性のあ
る画分約１２０mlを採取した。そして、この画分をフィ
ルトロン限外ろ過器を用いて濃縮後、あらかじめ、トリ
ス緩衝液（２０mMトリス塩酸、０.１Ｍ塩化ナトリウ
ム、ｐＨ８.０）で平衡化しておいたセファクリルＳ−
２００ＨＲのゲルろ過カラム（直径２.６cm×長さ９２c
m、ファルマシア社）に添加し、流速１ml／分で展開し
た。溶出液は、吸光度光度計を用い、２８０nmの吸光度
によりモニターした。活性のある第１ピーク約５１mlを
分取した。溶出パターンを図２に示す。次に、この画分
の１部を、同トリス緩衝液であらかじめ平衡化しておい
たＭｏｎｏ Ｑのカラム（直径０.５cm×長さ１０cm、フ
ァルマシア社）に展開し、同トリス緩衝液で洗浄後、塩
化ナトリウム濃度にして０.１〜１.０Ｍのリニアグラジ
ェントにより溶出した。溶出液は、吸光度光度計を用
い、２８０nmの吸光度によりモニターした。活性のある
画分約８mlを採取した。溶出パターンを図３に示す。
グラフィ、ゲルろ過カラム、陰イオンカラムクロマトグ
ラフィ法による粗精製 リン酸緩衝液Ａで平衡化しておいたヘパリン−セファロ
ースＣＬ−６Ｂのカラム（直径１.６cm×長さ１５cm、
ファルマシア社）に流速１ml／分で展開する。その後、
リン酸緩衝液Ａで同カラムを充分に洗浄する。洗浄後、
ヘパリン−セファロースＣＬ−６Ｂのカラムに吸着した
ペプチド又はタンパク質を、塩化ナトリウム濃度にして
０.２〜１.５Ｍのリニアグラジェントにより溶出した。
溶出液は、吸光度光度計を用い、２８０nmの吸光度によ
りモニターした。溶出パターンを図１に示す。活性のあ
る画分約１２０mlを採取した。そして、この画分をフィ
ルトロン限外ろ過器を用いて濃縮後、あらかじめ、トリ
ス緩衝液（２０mMトリス塩酸、０.１Ｍ塩化ナトリウ
ム、ｐＨ８.０）で平衡化しておいたセファクリルＳ−
２００ＨＲのゲルろ過カラム（直径２.６cm×長さ９２c
m、ファルマシア社）に添加し、流速１ml／分で展開し
た。溶出液は、吸光度光度計を用い、２８０nmの吸光度
によりモニターした。活性のある第１ピーク約５１mlを
分取した。溶出パターンを図２に示す。次に、この画分
の１部を、同トリス緩衝液であらかじめ平衡化しておい
たＭｏｎｏ Ｑのカラム（直径０.５cm×長さ１０cm、フ
ァルマシア社）に展開し、同トリス緩衝液で洗浄後、塩
化ナトリウム濃度にして０.１〜１.０Ｍのリニアグラジ
ェントにより溶出した。溶出液は、吸光度光度計を用
い、２８０nmの吸光度によりモニターした。活性のある
画分約８mlを採取した。溶出パターンを図３に示す。
【００１０】３) 逆相液体クロマトグラフィ法による精
製 操作１)で得た溶出液を、あらかじめ０.１％のトリフル
オロ酢酸（ＴＦＡ）と１０％アセトニトリルを含有する
水で平衡化しておいたコスモシール５Ｃ１８−３００カ
ラム（直径４.６mm×長さ２５０mm、ナカライテスク
社）に展開し、０.１％ＴＦＡと１０％アセトニトリル
を含む水で十分に洗浄した。その後、吸着したペプチド
又はタンパク質をアセトニトリル濃度にして１０〜７０
％のリニアグラジェントにより溶出した。溶出液は、２
１４nmの吸光度によりモニターし、ピークごとに採取し
た。活性のあるピーク（矢印）を採取した。溶出パター
ンを図４に示す。
製 操作１)で得た溶出液を、あらかじめ０.１％のトリフル
オロ酢酸（ＴＦＡ）と１０％アセトニトリルを含有する
水で平衡化しておいたコスモシール５Ｃ１８−３００カ
ラム（直径４.６mm×長さ２５０mm、ナカライテスク
社）に展開し、０.１％ＴＦＡと１０％アセトニトリル
を含む水で十分に洗浄した。その後、吸着したペプチド
又はタンパク質をアセトニトリル濃度にして１０〜７０
％のリニアグラジェントにより溶出した。溶出液は、２
１４nmの吸光度によりモニターし、ピークごとに採取し
た。活性のあるピーク（矢印）を採取した。溶出パター
ンを図４に示す。
【００１１】実施例２ 線維芽細胞増殖促進活性の測定 線維芽細胞株のＢａｌｂ／３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣより購
入、カタログNo. CCL163−Balb／3T3−clone Ａ31）を
９６ウエル培養プレートに１ウエル当たり５×１０3個
播種し、１０％仔牛血清添加ダルベーコ改変イーグルＭ
ＥＭ培地（以下ＤＭＥ）１００μlを加え、培養器中で
２４時間、３７℃で培養した。その後、培養液を除き、
細胞を洗浄後、低血清培地（０.２％仔牛血清添加ＤＭ
Ｅ）１００μlを加え、更に３日間培養した。そこへ、
実施例１により得た各画分を１０μl加え、１５時間培
養した。ついで、3Ｈ−チミジンを７４ＫＢｑ／mlにな
るよう加え、６時間培養した。培養後、培地を除き、細
胞を集め細胞中に取込まれた 3Ｈ−チミジンの量を測定
した。その結果、図４中のピーク１（矢印）の画分に細
胞増殖促進活性が認められた。
入、カタログNo. CCL163−Balb／3T3−clone Ａ31）を
９６ウエル培養プレートに１ウエル当たり５×１０3個
播種し、１０％仔牛血清添加ダルベーコ改変イーグルＭ
ＥＭ培地（以下ＤＭＥ）１００μlを加え、培養器中で
２４時間、３７℃で培養した。その後、培養液を除き、
細胞を洗浄後、低血清培地（０.２％仔牛血清添加ＤＭ
Ｅ）１００μlを加え、更に３日間培養した。そこへ、
実施例１により得た各画分を１０μl加え、１５時間培
養した。ついで、3Ｈ−チミジンを７４ＫＢｑ／mlにな
るよう加え、６時間培養した。培養後、培地を除き、細
胞を集め細胞中に取込まれた 3Ｈ−チミジンの量を測定
した。その結果、図４中のピーク１（矢印）の画分に細
胞増殖促進活性が認められた。
【００１２】実施例３ ピーク１のペプチドの物理化学
的性質の測定 １) Ｎ末端アミノ酸配列分析 実施例２で活性が確認された画分のペプチドにつき、Ｎ
末端配列をアミノ酸シークエンサー、モデル４７７Ａ
（アプライトバイオシステムズ社）により分析したとこ
ろ、配列表配列番号１に示すアミノ酸配列が確認され
た。この配列を、タンパク質データベースにより、一致
するものがあるか否かを調べたところ、新規なタンパク
質であることが確認された。
的性質の測定 １) Ｎ末端アミノ酸配列分析 実施例２で活性が確認された画分のペプチドにつき、Ｎ
末端配列をアミノ酸シークエンサー、モデル４７７Ａ
（アプライトバイオシステムズ社）により分析したとこ
ろ、配列表配列番号１に示すアミノ酸配列が確認され
た。この配列を、タンパク質データベースにより、一致
するものがあるか否かを調べたところ、新規なタンパク
質であることが確認された。
【００１３】２) アミノ酸組成分析 また、ピーク１の画分のペプチドのアミノ酸組成を、ア
ミノ酸分析機により調べた。表１にアミノ酸組成分析の
結果を示す。
ミノ酸分析機により調べた。表１にアミノ酸組成分析の
結果を示す。
【００１４】
【表１】アミノ酸 本件分析結果（＊1） Ａｓｐ ６０.３ （６０） Ｇｌｕ ８１.２ （８１） Ｓｅｒ ３５.６ （３６） Ｇｌｙ ３６.５ （３７） Ｈｉｓ １６.７ （１７） Ａｒｇ ４２.０ （４２） Ｔｈｒ ４３.７ （４４） Ａｌａ ４１.１ （４１） Ｐｒｏ ３５.２ （３５） Ｔｙｒ １８.９ （１９） Ｖａｌ ３７.７ （３８） Ｍｅｔ １２.９ （１３）1 /2Ｃｙｓ Ｎ.Ｄ. （＊2） Ｉｌｅ １８.８ （１９） Ｌｅｕ ７５.６ （７６） Ｐｈｅ ３２.３ （３２） Ｌｙｓ ４２.２ （４２） Ｔｒｐ Ｎ.Ｄ. （＊2） (＊1) 分子量70,000ダルトンとして計算。 (＊2) 未決定。
【００１５】３) 電気泳動による分析 ピーク１のペプチドの分子量を還元条件下のＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥにより確認したところ、約６０〜８０ＫＤａの分
子量を示した（図５）。図５はピーク１のペプチドの電
気泳動パターンを示し、図５においてレーン１はピーク
１のペプチドのバンドを示し、レーン２は分子量マーカ
ーを示す。
ＡＧＥにより確認したところ、約６０〜８０ＫＤａの分
子量を示した（図５）。図５はピーク１のペプチドの電
気泳動パターンを示し、図５においてレーン１はピーク
１のペプチドのバンドを示し、レーン２は分子量マーカ
ーを示す。
【００１６】上記１)、２)及び３)に示された結果よ
り、線維芽細胞の増殖活性を有するピーク１のペプチド
は新規なタンパク質であると確認された。
り、線維芽細胞の増殖活性を有するピーク１のペプチド
は新規なタンパク質であると確認された。
【００１７】実施例４ ＰＨＢＰ−７０の線維芽細胞増
殖活性の測定 さらに、実施例２により得たＰＨＢＰ−７０の用量依存
的細胞増殖促進活性を調べるために、ＰＨＢＰ−７０を
各ウエル当たり０.０３〜１０μg／mlになるように実施
例２の方法に従い加え、3Ｈ−チミジンの取込みを測定
した。ＰＨＢＰ−７０の線維芽細胞増殖活性の測定の結
果を表２に示す。データは各群（１郡４例）の平均と標
準偏差を示す。
殖活性の測定 さらに、実施例２により得たＰＨＢＰ−７０の用量依存
的細胞増殖促進活性を調べるために、ＰＨＢＰ−７０を
各ウエル当たり０.０３〜１０μg／mlになるように実施
例２の方法に従い加え、3Ｈ−チミジンの取込みを測定
した。ＰＨＢＰ−７０の線維芽細胞増殖活性の測定の結
果を表２に示す。データは各群（１郡４例）の平均と標
準偏差を示す。
【００１８】
【表２】 添加化合物 用量（μg／ml） 3Ｈ−チミジンの取込み（cpm） 対 照 群 ０ ４３７.４±５７.４ ＰＨＢＰ−７０ ０.３ ４３４.６±１３.１ １.０ ４６７.４±４４.３ ３.０ １６７０.３±８１.９ １０.０ ６３５６.９±６８.１
【００１９】この結果から、ＰＨＢＰ−７０は用量依存
的に細胞増殖促進活性を有することが確認された。
的に細胞増殖促進活性を有することが確認された。
【００２０】
【発明の効果】本発明により提供されるタンパク質ＰＨ
ＢＰ−７０は線維芽細胞の増殖促進活性を有するので創
傷治療剤として有用である。
ＢＰ−７０は線維芽細胞の増殖促進活性を有するので創
傷治療剤として有用である。
【００２１】
配列番号：１ 配列の長さ：１７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｎ末端フラグメント 起源： 生物名：ウシ（Bos taulus） 組織の種類：血漿 配列の特徴：なし 配列： Ser Met Ser Pro Glu Ala Gln Ala Gly Leu Glu Thr Leu Leu Thr Pro Met 1 5 10 15
【図１】ヘパリンアフィニテイカラムクロマトグラフィ
に結合し溶出された画分を、さらに逆相液体クロマトグ
ラフィにより展開したパターンを示す。矢印は本タンパ
ク質を含む活性画分である。
に結合し溶出された画分を、さらに逆相液体クロマトグ
ラフィにより展開したパターンを示す。矢印は本タンパ
ク質を含む活性画分である。
【図２】セファクリルＳ−２００ＨＲのゲルろ過カラム
による溶出画分を、吸光度光度計（２８０nm）を用いモ
ニターした溶出パターンである。
による溶出画分を、吸光度光度計（２８０nm）を用いモ
ニターした溶出パターンである。
【図３】Ｍｏｎｏ Ｑのカラム展開後、塩化ナトリウム
濃度０.１〜１.０Ｍのリニアグラジェントにより溶出
し、その溶出液を吸光度光度計（２８０nm）を用いモニ
ターした溶出パターンである。
濃度０.１〜１.０Ｍのリニアグラジェントにより溶出
し、その溶出液を吸光度光度計（２８０nm）を用いモニ
ターした溶出パターンである。
【図４】コスモシール５Ｃ１８−３００カラム展開後、
アセトニトリル濃度１０〜７０％のリニアグラジェント
により溶出し、その溶出液を吸光度光度計（２１４nm）
を用いモニターした溶出パターンである。
アセトニトリル濃度１０〜７０％のリニアグラジェント
により溶出し、その溶出液を吸光度光度計（２１４nm）
を用いモニターした溶出パターンである。
【図５】ピーク１のペプチドの電気泳動パターンを示す
図である。
図である。
Claims (4)
- 【請求項１】 還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分
析で約６０〜８０ＫＤａの分子量を有し、アミノ末端配
列が配列表の配列番号１のアミノ酸配列を有するタンパ
ク質ＰＨＢＰ−７０。 - 【請求項２】 哺乳動物の血液由来である、請求項１の
タンパク質ＰＨＢＰ−７０。 - 【請求項３】 ヘパリン結合性成長因子である、請求項
１または２のタンパク質ＰＨＢＰ−７０。 - 【請求項４】 請求項１ないし３のいずれかの項のタン
パク質ＰＨＢＰ−７０を含む創傷治療剤。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6061905A JPH07267992A (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | 新規なタンパク質ｐｈｂｐ−７０ |
| EP95103837A EP0675135A3 (en) | 1994-03-31 | 1995-03-16 | Protein PHBP-70 with heparin-binding and fibroblast-proliferating properties. |
| AU16174/95A AU689852B2 (en) | 1994-03-31 | 1995-03-29 | Novel protein PHBP-70 |
| KR1019950006971A KR100371976B1 (ko) | 1994-03-31 | 1995-03-30 | 혈장헤파린결합단백질-70 |
| CA002145960A CA2145960A1 (en) | 1994-03-31 | 1995-03-30 | Protein phbp-70 |
| US08/414,427 US5545720A (en) | 1994-03-31 | 1995-03-31 | Protein PHBP-70 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6061905A JPH07267992A (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | 新規なタンパク質ｐｈｂｐ−７０ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07267992A true JPH07267992A (ja) | 1995-10-17 |
Family
ID=13184646
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6061905A Pending JPH07267992A (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | 新規なタンパク質ｐｈｂｐ−７０ |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5545720A (ja) |
| EP (1) | EP0675135A3 (ja) |
| JP (1) | JPH07267992A (ja) |
| KR (1) | KR100371976B1 (ja) |
| AU (1) | AU689852B2 (ja) |
| CA (1) | CA2145960A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003094937A1 (en) * | 2002-05-09 | 2003-11-20 | Medigenes | A pharmaceutical composition for treatment of wounds containing blood plasma or serum |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU6670198A (en) * | 1997-02-28 | 1998-09-18 | The Texas A & M University System | Heparan sulfate/heparin interacting protein compositions and methods of use |
| KR20070113876A (ko) * | 2006-05-26 | 2007-11-29 | 메디제네스(주) | 혈장성분을 함유하는 창상 치료용 약학 조성물 |
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|---|---|---|---|---|
| US5166317A (en) * | 1988-10-31 | 1992-11-24 | Houston Biotechnology Incorporated | Neurotrophic factor |
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| EP0488196A3 (en) * | 1990-11-30 | 1993-04-07 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Hst-2, a member of the heparin binding growth factor family |
-
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- 1994-03-31 JP JP6061905A patent/JPH07267992A/ja active Pending
-
1995
- 1995-03-16 EP EP95103837A patent/EP0675135A3/en not_active Withdrawn
- 1995-03-29 AU AU16174/95A patent/AU689852B2/en not_active Ceased
- 1995-03-30 KR KR1019950006971A patent/KR100371976B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-03-30 CA CA002145960A patent/CA2145960A1/en not_active Abandoned
- 1995-03-31 US US08/414,427 patent/US5545720A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003094937A1 (en) * | 2002-05-09 | 2003-11-20 | Medigenes | A pharmaceutical composition for treatment of wounds containing blood plasma or serum |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR950032281A (ko) | 1995-12-20 |
| EP0675135A3 (en) | 1996-02-07 |
| US5545720A (en) | 1996-08-13 |
| KR100371976B1 (ko) | 2003-03-31 |
| AU689852B2 (en) | 1998-04-09 |
| EP0675135A2 (en) | 1995-10-04 |
| CA2145960A1 (en) | 1995-10-01 |
| AU1617495A (en) | 1995-10-12 |
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