JPS58170495A - アプラマイシンおよびオキシアプラマイシンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はアブラマイシン（Ａｐｒａｍｙｃｉｎ　）およ
びオギ７アグラマイ７ノ（Ｏｘｙａｐｒａｍｙｃｉｎ）
の製造法に関する。

ネブラマイ７　：ｙ　（Ｎｅｂｒａｍｙｃｉｎ）複合体
はストレプトマイセス・テネプラリウス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓｌｃｎｃｈｒａｒｉｕｓ　）　Ａ　Ｔ　Ｃ
Ｃ１７９２０の産生する８つのアミノ糖抗生物質成分、
即ちネブラマイシン因ｆ’ｌ、　　Ｉ、　　Ｉｌ、　Ｉ
ＩＩ、　ｆＶ、　Ｖ、　Ｖｌおよび■をもつ公知の抗生
物貨であり、その製造法についてはＡ旧−ｉ’ｍ１ｃｒ
ｏｂｉａｌ　　Ａｇｅｎｔｓ　　ａｎｄ　　Ｃｈｅｍｏ
ｔｈｅｒａｐｙ、　　１９６７゜３１４〜３４８．米国
特許第３６９１２７９号に記載さ才）ており、ストレフ
”トマイセス・テネフ゛ラリウスＮ　ＲＲ，１，３８１
６、ストレプトマイセスーテネプラリウスＡＴＣＣ１７
９２０の突然変異株によりネプラマイ／ン因子■および
■を産生されることが米国特許第３８５３７０９号に発
表さ・れている。

ネブラマイシン因子■は現在アブラマインンと名付けら
れているが、その化学構造はＡｎｎｕａｌｌＬｃｐｎｒ
ｔ　　ｉｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
、　９．９９　（１９７４）、Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｃｍ、
、　４１　（１２）、　２０８７〜２０９２　（１９７
６）に報告されていて、種々の動植物の病気の治療の抗
菌剤として有用であると記載されている（米国特許第３
６９１２７９号、米国特許第３８５３７０９号、米国特
許第３８７６７６７号）。またアブラマイン／はストレ
プトアロティクスｅヒンダスタヌス（Ｓｌｒ−ｅｐｔｏ
ａｌｌｏｔｅｉｃｕｓ　ｈｉｎｄｕｓｔａｎｕｓ）　Ａ
　Ｔ　ＣＣ：ｄ　１２１７　。

３１２１８および３１２・１９°によっても産生される
ことが特開昭５８−２０４９１号およびＪ、　Ａｎｔ　
１ｂｉｏｔ　ｉｃｓ　。

３１．４９７〜５１０（１９７８）に報告されている。

ネブラマイシ／因子■は覗在オキシアプラマイノンと名
付けられているが、その化学構造はＪ。

Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　、　４３　（７）、　１４３０
〜１４３４　（１９７８）などに報告されていて、前述
の米国特許第３８５３７０９号の他に、米国特許第８９
６２４２７号にその製造法が発表されている。

本発明者らは、レア・アクチノマイセテス科に分類され
る放線菌を純粋に分離し、その分離菌株についてアミン
糖抗生物質の検索を続けた結果、東京部下大島町の畑土
壌よｉ４離した放線菌ＡＣ２５８０株がアブラマイシン
およびオキシアプラマイゾンを産生ずることを見い出し
た。この菌株の分類学トの位置について明らかにすべく
同定した結果、本菌株はツソカロポリスポラ属に属する
微生物であると同定したつ本発明は、上記の知見に基い
て完成されたものである。

本発明は、サツカロポリスポラ属に属するアブおよび／
捷たはオキンアブラマイシンを蓄積せしめ、該培養物か
らアブラマイ／ンおよび／またはＡキ／アノ°ラマイン
ンを採取することを特徴とするｆゾラマインンおよび／
またはオキ／アグラマイ／ンの製造法であって、その目
的とするところＶｌ、−アプラマイ／ンおよびオキシア
プラマイ／ンを産生することが知られていないヤノカロ
ポリスボラ楓に属する微生物によるアブラマイシンおよ
びオギ／γブラマイノンの新規な製造法を提供すること
による。

“ｆゾラマインジおよび／またはオキシアプラマイ７／
生産菌（り１本抗生物質生産菌と称する）＆、ＬＸ’Ｊ
ノカロボリスポラ属に属するが、例えば本発明者らが分
離したヤッカロボリスポラ楓に属するＡＣ２５８０株は
、本発明に、最も有効に使用される菌株の一例であって
、本菌株の菌学的性質を示すと次の通りである。

ａ形態的特徴 ＡＣ２５８０株は、スダーチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ
培地４　）　（Ｉｎｔｅｒ、　Ｊ、　Ｓｙｓｔｅｍ、　
Ｂａｃｌｅｒｉｏｌ、　、１６゜３１３〜３４０（１９
６６））上で３７℃、ｌＯ〜１４日間培養後、観察した
所見は次の通りである、基土菌糸は曲線状で、分枝を伴
って伸長］２、菌糸の部分により、あるいは培養後期に
は分断を生じ、直径０４〜０６μであり、胞子は着生し
ない。

基土菌糸より生じた気菌糸は曲線または直線状で単純分
枝を伴って伸長し、直径は０５〜０７μであり、その先
端は通常ループ状またはゆるく２〜８回巻いた螺旋を形
成し、中には曲線状または直線状のものもある。気菌糸
は分節してビ　ズ鎖様に通常１０個以上の多数連鎖した
胞子を形成し、し、ばしば胞子と胞子の間は空の菌糸部
分により仕切られている。

胞ｒは卵形または短円筒形で、大きさは０５〜０、７　
ｘ　０．７〜１３μであり、その表面は直線状または曲
線状の長い毛様物質が房状に多数生えた殻で穆われでい
る。

基土菌糸や気菌糸に胞子のう、菌核または鞭毛胞子を形
成しない。

［）次の各培地における生育状態 各培地上で３７℃、１４日間培養後、観察した所見は第
１表の通りである。色の表示はＣｏ１ｏｒ１１旧ｍｏｎ
ｙ　Ｍａｎｕａｌ第４版１９５８年（Ｃｏｎｔａｉｎｅ
ｒ（１ｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ）
による色の分類に従った。

（（′にの各生理的性質 （１）を除き、培養は３７℃で行った ■　生育温度範囲（ＩＳＰ培地培地上２上２４〜５０　
”（：で１生育するが、至適温度は８０〜４５℃である
。

■）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトンゼラーｆ／
培地ヒ）；陽性 ａ）　スターチの加水分解（ＩＳＰ培地培地上４上陽性 （０脱脂牛乳の凝固、ペプトン化；凝固：陰性、ペプト
ン化８陽性 ６）メラニン様色素の生成（ＩＳＰ培ｋＡ６および７ヒ
）；陰性 （０５１１Ｔ化水素の生成（ＩＳＰ培地培地上６上い、
酢酸鉛含有ｐ紙で試験）；陽性 ０゛〕　　硝酸塩の還元；陽性（Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌ、、７８　。

１５〜２７（１９５７）に従った〕 （印　酸素の要求性；好気性 （５１）　　リゾチームに対する耐性度；感受性ＩＪｎ
ｔｅｒ。

Ｊ、　Ｓｙｓｔｅｍ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、　　２７
　、１７６〜１７８（１９７７）に従った〕 ω　塩化ナトリウムに対する耐性＃（基礎培地：１ｓｐ
培地４２）；０〜１４チで生育、１５チリ１゜では生育
（７ない。

■　抗生物質に対する耐性塵 Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、３’２　、　１８０〜１
８６　（１９７９）の方法に従って、各抗生物質に対す
る生育最少１ｕ＋止濃度（ＭＩＣ）は第２表の通りでを
る。

第２表 抗生物質名　　　　　　　　　Ｍ　Ｉ　Ｃ（ｔｒｙ／ｍ
ｌ）カナマインン　　　　　　　　　〉１００ゲンタマ
イ／ン　　　　　　　　〉１００パロモマイ／ン　　　
　　　　　　　５０ストレプトマイシン　　　　　　　
　２５ネオマイノン　　　　　　　　　　　１００トブ
ラマイシン　　　　　　　　）１００リフアンピンン　
　　　　　　　〈　１ｚ５０イコマイシンＡ、、１　　
　　　　　＞ｔｏ。

■　各種物質の分解能 Ｔ、　Ｒ，Ｇ、Ｇｒａｙら編；　Ｅｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ
　　５ｏｉｌｈａｔｌｔ１　ｒｉ　　１１．　２９３〜
’＋２１．　　Ｌｉｖｅｒｐｏｏｌ　　　Ｕｎｉｖｅｒ
ｓｉ　ｔｙ　’Ｐｒｅｓｓ、　Ｌｉｖｅｒｐｏｏｌ、　
１９６７、Ｊ、Ｇｅｎ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、、６９．８８〜８０　（１９７
１）およびＪ、（ｉｅｎ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　８
８　、７５〜８５（１９７５）の方法に従って、各種物
質に対する分解能を測定した結果は第３表の通りである
。

第３表（十；陽性、−；陰性） チロ７ン　　　；　＋　ケラチン　　　；　−カゼイ／
　　　；　十　尿素　　　　　；　＋キャ／ザン　　；
　十　エラスチン　　；　＋ヒポギザ／ナノ；　」−キ
シラン　　　；　−ｆアニン　　　；　＋　セルロース
　　：　−エスクリン　　；　＋・ （１；次の各炭素源の同化性 （１）糖類１基礎培地；ＩＳＰ培地４９．＋；陽性。

±；疑しい、−；陰性〕 ｌ、−°γラビノース；士　トレハロース　　；＋ｌ）
−ソルビトール；＋　シュクロース　　；＋１）　ノｊ
ラクトース；→　Ｌ−ソルボース　；＋１）　グルコー
ス　；十　Ｄ−ソルビトール；＋グリセリン　　　；＋
　ズルントール　　；−１−イノシトール；＋　キノロ
ース　　　；ＩＤ−マンノース　；＋　サリシン　　　
　；＋Ｄ−マンニトール；＋　セロビオース　　；１メ
レジトース　　；−スターチ　　　　；＋メリビオース
　　；−アドニトール　　；Ｆβ−ラ　り　ト　−　ス
　　　；　十　　　エ　リ　ス　リ　ト　−　ル　　　
；）マルトース　　　；＋　α−Ｄ−メチルグラフィノ
ース　　；＋　リコ／ド　　　　；←Ｌ　ラムノース　
；＋　セルロース　　　；−Ｄ−リボース　　；＋ （１１）有機酸（Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　　７８
　、　１５〜２７（１９５７）に従った。＋；陽性、−
；陰性１酢酸ナトリウム　　　　　　；＋ プロピオン酸ナトリウム　　；十 酪酸ナトリウム　　　　　　；＋ クエン酸ナトリウム　　　　；＋ フマル酸ナトリウム　　　　；４ リンゴ酸ナトリウム　　　　；＋ コハク酸ナトリウム　　　　；＋ 的イｉ酸　す　ト　リ　ウ　ム　　　　　　　　　　　
　　　　；　＋じルビ／酸ナトリウム　　　　；ト 安息香酸ナトリウム　　　　　；− ノ′ジビ／酸　　　　　　　　　；十 七バ／ン酸　　　　　　　　　；＋ （・、染色性 グラノ、染色は陽性で、抗酸性染色は陰性である。

ｆ菌体組成 （Ｄ　Ｈ，Ｂｃｃｋｃ　ｒらの方法（Ａｐｐｌ、　Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ、　。

１２．４２１〜４２３　（１９６４））により分析した
ジアミノピメリン酸はメゾ型が検出された。

また、Ｌｃｃｈｅｖａｌｉｅｒの方法（Ｊ、　Ｌａｂ、
　ＣＩ　ｉｎ。

Ｍｃｄ、、７１．９３４〜９４４（１９６８））により
分析（た糖はアラビノースとガラクトースが検出された
、 （ｔり）１．　Ｍｎｒｄａｒｓｋａらの方法（Ｊ、　Ｇ
ｅｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、。

’１１．ＴＴ〜８６　（１９７２））による脂質の分析
ｔ（おいて、脂質Ｌ　ＣＮ　−Ａは検出されず、またり
。

Ｅ、　Ｍｉｎｎｉｋｉｎらの方法（Ｊ、Ｇｅｎ、Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ、。

影８，２００〜２０４（１９７５））による分析におい
て、ノカルドミコール酸またはミコール酸は検出されな
かった。

以上の菌学的性質から、ＡＣ２５８０株の特徴的性状を
まとめると、 １）形態において、分断性のある基土菌糸より生じた気
菌糸にゆるく巻いた螺旋状および直線状または曲線状の
胞子連鎖を形成し、胞子は長い毛様物質の生えた殻に徨
われでおり、 ２）菌体分析において、メゾ−ジアミノピメリン酸、ア
ラビノースおよびガラクトースが検出され、脂質Ｌ　Ｃ
Ｎ　−Ａ　、ノカルドミコール酸およびミコール酸は検
出されず、 ３）染７色性において、ダラム染色は陽性、抗酸性染色
は陰性であり、 ４）好気性である。

これらの特徴的性状をもとに、ＡＣ２５８０株の分類学
的位置を同定すべく、種々の文献より検索したところ、
サツカロポリスボラ属（Ｓａ　ｃｃ　ｈａ　ｒｏ　−ｐ
ｏｌｙｓｐｏｒａ　Ｌａｃｅｙ　＆　Ｇｏｏｄｆｅｌｌ
ｏｗ）　（Ｊ、　０（Ｉｎ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　８８　、７５〜８５　（１９
７５１）に１會め°Ｃよく一致したので、ＡＣ’２３ｇ
０株はす％力１」ポリスボラ属１こ属するものと同定し
、サッカ「Ｊポリスボラ１１スビシーズ（５ａｃｃｈａ
ｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａｓｐ、）ＡＣ２３ｇＯと称する
ことｔこした〇本菌株はＴ業ｉ々術院微生物工業枝術研
究所に寄＋ｌＬ番ジノ、機工＠菌寄第乙２３り号（Ｆｇ
ＲＭ　　Ｐ−６２３９）として寄託されている。

Ｃバーまでｔこ、アブラマイシン生産菌としては、スル
ブトマイセス・テネブラリウスお工びスルプ１アロティ
クス・ヒンダスタヌスが知られており、ｆたオキシアブ
ラマイシン生産菌としては、ストレプトマイセス・テ不
ブラリウスが知られている。

そこで、ＡＣ２ＳｇＯ株とアブラマイシン生産１貞とし
て公知の菌株であるストレプトマイセステ不フ゛ラリウ
スおよびストレプトアロティクスｅヒ／ダスタヌスとの
比較を試みた。

マｒ１　　ストレプトマイセス・テネブラリクスの菌学
的１〆１質に関する記ｕｌｃ　Ａｎｔｌｒｎｉｃｒｏｂ
ｉａｌ　　Ａｇｅｎｔｓａｎｄ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａ
ｐｙ、　　／　９６７．３２１７〜３３／　〕ならびに
ストレプトマイセス自テネブラリウスＡＴＣＣ／９７：
２０　（以下単にＡＴＣＣ／［７コ０と称する）を用い
ての観察結果およびストレプトアロティクスφヒンダス
タヌスの菌学的性質に関する記載（Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉ
ｏｔｉｃｓ　、　ＬＬ、　ＩＩ　９７〜５１０　（／り
７ｇ）、特開面３３−２０１７り／号〕ならびｔこスト
レプトアロティクス・ヒンダスタヌスＡＴＣＣ３／２／
７　（以下単１こｆｉ、ＴＣＣ３／２／７と称する）ｆ
用いての観察結果と水ＡＣ２３ざ０株との菌学的性質の
比較を第ｔｌＰおよび第５表ｅこホす０ 第３　ＴｈＸＩ　　炭素源の同化性の比較十；利用する
。　±；利用性が疑わしい一；利用しない ストレプトマイセス・テネプラリウスとＡＣ２３ｇＯ株
とは気菌糸状の胞子連８Ｊｅこ螺旋を形成して類似して
いる０しかしながら、 （１）　　ストレプトマイセス・テネブラリウスは気菌
糸１こ特徴的な構造、即ち菌核やクラスターを形成する
のに対し、ＡＣ２３ｇＯ株は前項すの各培地における生
育状態で示した全ての培地上でのｍ％では、このような
構造が観察さねなかったこと、（２）ストレフトマイセ
ス・テネプラリウスの胞ト表面が平滑であるのＶこ対し
、ＡＣ２３ｇＯ株は長い毛様構造を有すること、 （５）　　ストレプトマイセスｅテネブラリウスの気菌
糸の色は黄色ないし黄褐色を呈するのｔこ対し、Ａｃ、
：ｚｓｇｏ株は白色であること、 （４）　　ストレプトマイセス・テネブラリウスの町浴
ｆ１色素は赤色系で、０．０’　３　Ｎ塩酸添カロ１こ
より黄色ニｔ　化−ｒるｔｎ　＋コア１Ｌ−１ＡＣ２３
ｇＯ株）、を黄色［い（夕（會は色であり、０．０３Ｎ
塩酸または０．０！；Ｎ’−ＮａＯＩ（を添加しても変
化が認められないこと、（５）　　ストレフトマイセス
・テネプラリウスの気菌糸の形成は螢光ｔこより形成阻
害を受けるのｔこ対し、ＡＣ；１５ｇ０株では気菌糸形
成阻害は認められないこと、　　　　　　　　　　　　
　　　　　、−（６）　　前ｇｅ　ｔ　ｔコ記４ｄｔ　
ノ方法４コＬ　４）、ＡＴＣＣ／９７認０の菌体組成の
分析ではメゾ−ジアミノピメリン酸、ガラクトースおよ
びマンノースがＭｌれるり、７）に郊ＩＬ％ＡＣ２３ｇ
Ｏ株はメゾージアミノビメリ／酸、ガラクトースおよび
アラビノースが検出されており、マンノースとアラビノ
、−スの存否において相違が認められること、 （７１＋ｉｉ＋　記Ｃ■ｃ　ｉｅ　載）方法ｔコＬ　Ｑ
、ＡＴＣＣ／９７２０のリゾチーム１こ対する耐性度を
調べたところｌｌ１ｌｊ性であるのｅこ対し、ｋ’（＃
３ＫＯ株は感受性であること、 （８）　　基礎ｊＬｊｔｊ（ＩＳＰ培地Ａ２）Ｉｌｌ−
オけるＡＴＣＣ／り７−０の地化す）　ＩＩウム１こ対
する耐ｆトを調べたところ、塩化ナトリウム７％１で生
育（１、ｇ以 ％発止では生育しなかったのｔこ幻し、ＡＣ２３ｇＯ株
は／グ％１で生育し、７５％以上では生育しないこと、 （９）　　ストレプトマイセス°・テネブラリウスはＩ
ＩＲｌ１ｍ牛乳を凝固するσ）？こ対し２、ＡＣ２！；
ざ０蛛は凝固しないこと（、 （１０）　　炭素源の利用性において、ラフィノースお
↓びＬ−ラムノースは明瞭な差異が認められること、以
上示した品性状が明らかｔこ相違することをこ工１）、
ＡＣ２３ｇＯａとストレプトマイセス・テ不ブラリウス
とは分類学上区別されるべきものである０ また＼ストレブトアロテイクスーヒンダスタヌスとＡＣ
２３ｇＯ株とは、気菌糸上の胞子連鎖に螺旋を形成し、
基土菌糸が黄色系で、メラニン様色素を生成せず、生育
温度が耐熱性であることなトりこおいて類似している。

しかしながら、 （リ　　ストレプトアロティクス・ヒンダスタヌスは気
亀糸ｔこ一核やクラスターを形成【１、さらには、胞子
のうを形成して、その中（鞭毛を有する胞子のう胞子（
鞭毛胞子）を含有するのに対し、−母エキス・麦芽エキ
ス寒天培地およびグリセリン・アスパラギン寒天培地上
、２ｇ℃で３〜４Ｉ週間培養および前項す各培地におけ
る生育状態で示した全ての培地上で３７℃、２〜ｑ週間
培養稜の観察−こおいても、一核、クラスター、胞子の
うおよびｑ礒Ｕ＆子はＩＩＭ察されないこと、 （２）　　ストレプトアロティクス・ヒンダスタヌスの
胞子表面は平滑であるのに対し、ＡＣ２３ＩＯ株は長い
毛様構造を有すること、 （５）　　ストレプトアロティクス・ヒンダスタヌスは
気前糸形成が豊富であるのに対し、　Ａｃ、２ｊ、ｒＯ
しベージュ色を呈するのに対し、ｋｃ２３１ｒＯ株のそ
れは白色であること。

（Ｓ）　　Ｘトレプトアロティクス会ヒンダスタヌスは
基土−糸に球状体を形成するのｔこ対し、ＡＣ２３ざ０
株では観察されないこと、 （６）　　ストレプトアロティクス・ヒンダスタヌスは
基土菌糸に分断性がないのに対し、ＡＣ，２３５０株で
は分断性を有すること、 （７）　　前記ｆに記載の方゛法ｋｚす、ＡＴＣＣ３／
２／７の―体組成の分析ではメゾ−ジアミノピメリン酸
、ガラクトースおよびマンノースが検出されるのに対し
％ＡＣ２３１０株はメゾ−ジアミノピメリン酸、ガラク
トースおよびアラビノースが検出されており、マンノー
スとアラビノースの存否において相違が認められること
、 （８）　　前記Ｃ■に記載ノ方法ＣＺす、ＡＴＣＣＪ／
コ／７のリゾチームに対する耐性度を調べたところ、耐
性であるのに対し、ＡＣ２３ＩＯ株は感受性であること
、 （９）　　基礎培地（ＩＳＰ培地、％２）におけるＡＴ
ＣＣ３／２／７の塩化す、トリウムに対する耐性ｔｄべ
几ところ、塩化ナトリウムＳＩｓまで生育し、６嘔以上
では生育しなかつ九のに対し、ＡＣ２５８０株は１４−
まで生育し、１５Ｉｓ以上で祉生じ、ＡＣ２５８０株は
凝固しないこと、ａσ　炭素源の利用性において、イノ
シトール、Ｄ　−マンニトール、ラフィノース、Ｌ−５
ムノース、１）−ソルビトールおよびＤ−キシロースに
明瞭な差異が認められること、 以上に示した諸性状が明らかに相違することに上り、Ａ
Ｃ２５８０株とストレプトアロティクス・ヒンダスタヌ
スとは分類学上区別されるべきものである。

以に、本抗生物質生産菌について説明したが、放［１の
一般的性状として蘭学上の性質は極めて変異し易く、一
定したものではなく、自然的にあるいけ通常行われる紫
外線照射、放射線照射または変異誘導剤を用いる人工的
変異手段により変異゛することけ周知の事実であり、こ
のような人工的変異株は勿論、自然変異株も含め、サツ
カロポリスポラ属に属し、アブラマイシンおよび／また
はオキシアプラマイシンを生産する能力を有する一株は
すべて本発明に使用することができる。

本発明においては、先ずサツカロポリスボラ楓に属する
本抗生物質生産菌が適当な培地に培養される。本菌の培
養においてれ通常放線菌の培養法が一般に用いられる。

培地としては微生物が同化し得る炭素源、消化し得る窒
素源、さらには、必要に応じ、無機塩などを含有させた
栄養培地が使用されるう同化し得る炭素源としては、グ
ルＪ　−ス、フラクトース、ガラクトース、フンノース
、グリセリン、糖蜜、澱粉、デキストリン、コー／・キ
ス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・スチープ・り一カー、
綿実粕、カゼイン、大豆蛋白分解物、アミノ酸、尿素な
どの有機窒素源、硝酸塩、アンモニウム塩などの無機窒
素化合物が単独または組合せて用いられる。その他、必
要に応じ、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、
マグネシウム塩、リン酸塩などの無機塩類が添加される
。さらに、培地には、必要に応じて、本抗生物質生産菌
や、１′ゲラマイ／ノおよび／またはオキ７アプラマイ
ン；−（１＝）　）本初生物質と称する）の生産を促進
する微−栄養−ｔ、発育促進物質、前駆物質を適当に添
加し、てもよい。

培養は通常振とう捷たは通気攪拌培養などの好気的条件
Ｆで行うのがよい、工業的には深部通気攪拌培養が好ま
しい。培地のｐＨはや＼酸性ないｌ中性附近で培養を行
うのが好ましい。培養温度は通常３０〜４５℃付近に保
つのがよい。培養時１１１１は静体培養の場合、通常２
〜５日培養を行うと本抗生物質が生成、蓄積される−好
ましくは培養物中の本抗生物質の蓄積量が最大に達した
ときに＋７＜　１を終了すればよい。これらの培地組成
、培地の液性、培養温度、攪拌速度、通気量などの培養
条件ｔ、１使用する菌株の種類や外部の条件などに応じ
−４好ましい結果が得られるように適宜調節、選択さｔ
Ｉることは言うまでもない。液体培養におい−Ｃ発泡が
あるときは、シリコン油、植物油、界面活性剤などの消
泡剤を適宜使用される。

このようにして得られた培養物中に蓄積された本抗生物
質は主として培養Ｆ液中に含有されるので、培養物を涙
過補助剤、例えばセライト、パーライト、ハイ、フロー
スーベーセルなどを加えて０ｉ過するか、または遠心分
離して培養Ｆ液と菌体とに分離し、その培養Ｆ液から本
抗生物質を採取するのが有利である。

培養Ｆ液から本抗生物質を分離、精製するためには、ア
ミノ糖抗生物質を分離する技術の分野で知られた種々の
方法で行い得る。例えば陽イＡ／交換樹脂または他の固
体吸着剤を用いるクロマトグラフィーのような方法によ
って培養液から分離できる。好捷しくけ、培養Ｆ液をｐ
Ｈ７に調節し、アンバーライトＩ　ＲＣ−５０、ＣＧ−
５０などの弱酸性陽イオン交換樹脂、最も好捷しくけア
ンモニウム型を用いるクロマトグラフィーによる方法あ
るいはＣＭ−セルロースなどのイオン交換セ／１０−ス
、ＣＭ−セファデックスなどのイオン交換セファデック
スなどを用いるクロマトグラフィーによる方法である。

次いで吸着された本抗生物質を弱塩基の溶出剤、例えば
希薄な水酸化アンモニウムｌ＠計で、必要に応じその濃
度を順序変えて、溶出すｔｌばよい。このようにして得
られた溶出液を同一成分を含むフラク／ヨンを合せ、濃
縮または凍結乾燥して各々アプラマインンおよびオキシ
ｆゾラーフイ７／を得ることができる。

さらに、精製を必要とする場合には、　Ｎ上記のクロマ
トグラフィーを繰り返し行うことによね分離、精製でき
る。

次に実施例を挙げて本発明の方法を具体的に説明するが
、これにより本発明を限定するものではない。

実施例 ５１１０ｍ／’容三角フラスコにグルコース１チ、デキ
ストリフ１％、カゼイン分解物（１５％、酵母エキス０
５％、炭酸カル／ラム０１チを含む液体培地（＋３　Ｉ
ｆ　？　Ｏ）　１００ｍ／を分注し、１２０℃で２０分
間殺菌した後、各培地１０本にづソヵロポリスポラ・ス
ビーノーズＡＣ２１８０の斜面寒天培地よりの−白金耳
を接種し、３０℃で７２時間攪拌培養した。。

得られた種培養物を上記と同一組成の培地２０１を仕込
んだ３０１容ジャーファーメンタ−に移植し、３０℃で
４７時間、攪拌速度２５Ｏｒ、ｐ、ｍ。。

通気量１５１／分の通気条件下で通気攪拌培養した。

２５０１容醗酵タンクにグルコースα２チ、グリセリン
４チ、可溶性デンプン０２％、ペプトン０５チ、大豆粉
０５％、エビオス０５％、食塩０５％、炭酸カル／ラム
０２チを含む液体培地１ｐＨ？ｏ）２００ｍ／！を仕込
み、加熱殺菌した後、上記培養物１０１を移植し、３０
℃で１２０時間、攪拌速度１１０ｒ、　ｐｏｍ、　、通
気量１００１７分の通気条件下で通気攪拌培養して培養
物１９０１を得た。これにバーライ）５ｋｇを加えて濾
過し、得られた培養Ｆ液をアンバーライトＪＲＣ−５０
（ローム・アンド・ハース社製）（アンモニウム型）１
０１のカラ１、にチャーニジし、水洗した後、２Ｎアン
モニア水２０１で溶出した。全溶出液を１００ｍ／まで
減圧濃縮した。次いで、この濃縮液を６Ｎ硫酸でＩ）　
Ｉ−１？　０にＡｈ”ｂ　Ｌ　、ＣＭ−セファデックス
Ｃ−２５（ファルマ／−γ・ファイン・ケミカル社製）
（アンモニア水、型）５００ｍＣのカラムにチャージし
た。水洗した後、・０から００８Ｎの直線型濃度勾配に
よるアンモニア水６１で溶出し、溶出液は２０　ｍｌづ
つ分画した３、各分画はクロロホルム−メタノール−１
４＄ｆノ七ニア水（１：２：１）を展開溶媒とする／す
力ゲル薄層クロマトグラフィーにより追跡し、ご／ヒド
リ７発色により目的物を確認した。１９４〜２０６両分
がオキシアブラマイ７ノのみを含有し２１９〜２４２両
分がアクラマイノンのみを含有１７た。こ第１らの自分
を各々集めて減圧濃縮し、次いで凍結乾燥してオキゾア
プラマイシン１，８２、アプラマイ／ンａ７ｆを得た。

ｆノラマインン 性状；白色粉末 融点　２４５°Ｃ（分解） ｌαば　１１６２°（Ｃ＝１．水） １１ｖ；エンド ＭＷ　（Ｆ　Ｔ）ｍａｓｓ　）　；　５３９分子式：　
Ｃ２１Ｈ４＋　Ｎｓ　０ｎ ＴＬＣ；　ｎｆＡ＝（１３２、Ｒｆ、＝Ｑ２２担体； 展開溶媒； Ａ；クロロホルム−メタノール−２８チア／モニア水（
２’ｌ：２） Ｂ；クロロホルム−メタノール−１４％−ｆ／モニア水
（１：２：１） オキ／アグラマイ７ノ 性状；白色粉末 融点；）２６５℃（分解） 〔αバ＋１７０’（（’＝ｌ、水） Ｕ■；エンド ＭＷ　（Ｐ　Ｄｍａｓｓ　）　；　５５５分子式：　Ｃ
２１Ｈ４１Ｈ５０１２ ＴＬＣ’；　ＲｆＡ　＝（１：３１、ＲｆＢ　＝Ｑｘｔ
；上記の性状、さらにＩＲ，ＮＭＦＬなどにより文献記
載のアブラマインン〔Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、、　４１
（１２）、２０８７〜２０９２　（１９７６））および
オキンアブラマイ／ン（Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ。、
４８（７）。

１４３０〜１４３４（１９７８）１のそれと一致した。

特許出願人 東洋醸造株式会社 代表者伊東富士馬 特許庁長官　若　杉　和　夫　殿 ／、　事件の表示 昭和５７年特許願第４１６乙グ号 コ　発明の名称 アブラマイシンおよびオキンアプラマイシンの製造法 ３　補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　静岡県田方郡大仁町三福６３２の／≠　補正命令
の日付 自　　発 よ　補正の対象 明細書の特許請求の範囲の欄および発明の（２）発明の
詳細な説明の欄 明細書第２頁第ｇ行の「抗生物置」を「抗生物質」と訂
正する。

明細書第３頁第１Ｓ行の［レア・アクチノマイセテス科
」を「レア・アクチノマイセテス類」と訂正する。

明細書第３頁第１ｇ行〜７９行、同第５頁第２行、乙行
、同第１１頁第３行、／乙行、同第７５頁第１行、＋行
、／４Ｚ行、同第１乙頁第７行、同第１７頁表、同第１
り頁表、同第２０頁第１イ［、／／行、７３行、／り行
、同第２７頁第２行、７行、７２行、１ｇ行、同第２２
頁第３行、７行、７２行、／乙行、同第２３頁第７２行
、／Ｓ行、／ｇ行、同第、２１１頁第１行、１行、り行
、７５行、２０行、同第２Ｓ頁第グ行、７０行、同第２
９頁第１Ｓ行の「Ａｃｘｓｇｏ株」を「Ａ　ｅ　２３ざ
０株」と訂正する。

明細書第３頁第１行〜第り行の［観察１こおいても、菌
核、」を１観察においても、Ａｃ、２５ｇｏ株（こは菌
核、」と訂正する。

明細書第２６頁第１乙行の「綿実粕、」を「綿実粉、」
と訂正する。

！　特許請求の範囲 （１）サツカロポリスボラ属ｔこ属するアブラマインン
および／またはオキシアプラマイシン生産菌を培地シこ
培養して培養物中にアブラマイシンおよび／またはオキ
シアプラマイシンを蓄積せしめ、該培養物からアブラマ
イシンおよび／またはオキシアプラマイシンを採取する
ことを特徴とするアブラマイシンおよび／またはオキシ
アプラマイシンの製造法。

（２）　　サツカロポリスボラ属に属するアブラマイゾ
ンおよび／またはオキシアプフマイシン生産菌がサツカ
ロポリスポラ・スピーシーズＡｃ２３ｇＱ（ＦＥＢＭ　
　Ｐ　　６２３９）”’Ｑある特許請求の範囲第１項記
載の製造法。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）　　サツカロポリスボラ属に属するアプラマイン
   ンおよび／またはオキシアプラマインン生産菌を培地に
   培養して培養物中にアブラマイ／／および／またはオキ
   シアプラマイシンを畜積せしめ、該培養物からアブラマ
   インンおよび／またはオキシアブラマイシンを採取する
   ことを特徴とするアブラマイシンおよび／またはオキ／
   アプラマインンの製造法。
2. （２）　　サツカロポリスポラ属に属するアブラマイ／
   ンおよび／またはオキシアブラマインン生産菌がサツカ
   ロポリスボラ・スピーシーズＡＣ２５８０（ＦＥＴｔＭ
   　　Ｐ−６２８９）である特許請求の範囲第１項記載の
   製造法。