JPH11124397A - プロテアソーム阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】ペプチジルエポキシ型プロテアソーム阻害剤、
プロテアソーム阻害剤として使用する化合物を有効成分
とする自己免疫疾患等の治療剤及びプロテアソーム阻害
作用を有する新規な化合物を提供すること。 【解決手段】一般式（１） 【化１】 （Ｒ¹ は置換か無置換のアシル、アミノ基がアシル化さ
れたアミノ酸残基又はアミノ基が保護されていてもよい
アミノ酸残基、Ｒ² は水素又はＣ１〜６のアルキル、Ｒ
³ 及びＲ⁴ は水素、Ｃ１〜６のアルキル、又はＲ³ とＲ
⁴ が共にメチレン）で表わされる化合物からなるプロテ
アソーム阻害剤、該一般式（１）で表わされる化合物を
有効成分とするプロテアソームの作用亢進に起因する疾
患の治療剤及び一般式（２） 【化２】 （Ｒ¹¹はアミノ基がアシル化されたアミノ酸残基又はア
ミノ基が保護されていてもよいアミノ酸残基、Ｒ¹²は水
素又はＣ１〜６のアルキル、Ｒ¹³及びＲ¹⁴は水素、Ｃ１
〜６のアルキル又はＲ¹³とＲ¹⁴が共にメチレン）で表わ
される化合物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、プロテアソーム阻
害剤に関する。さらに詳しくは、エポキシ−ペプチド誘
導体からなるプロテアソーム阻害剤、かかる化合物を有
効成分とする、自己免疫疾患、炎症性腸炎疾患、喘息及
びアルツハイマー病等の治療剤ならびに新規なエポキシ
−ペプチド誘導体に関する。

【０００２】

【従来の技術】プロテアソームは、最初、沈降係数２０
Ｓの触媒ユニットとして発見され、多機能性プロテアー
ゼと呼ばれていたが、現在ではプロテアソームの名前が
定着している。プロテアソームの構造は、特徴的な構造
を持つ巨大な多成分複合体である。例えば、２６Ｓプロ
テアソームは、触媒ユニットである２０Ｓプロテアソー
ム（円筒型分子）の両端にＵ字型の調整ユニットが会合
した分子量約２００万のダンベル型分子であり、真核生
物のＡＴＰ依存性プロテアーゼであることが明らかにさ
れている（組織培養, 22, 75-105 (1996))。

【０００３】近年、プロテアソームが、ＴＮＦ−α、Ｉ
Ｌ−１等の炎症性サイトカインの転写調節因子ＮＦ−κ
Ｂの活性化に重要な役割を担っていることが明らかにな
ってきている（Vito J. Palombella, et al., Cell, 7
8, 773-785 (1994)、DimitrisThanos, et al., Cell, 8
0, 529-532 (1995)) 。また、プロテアソームはアルツ
ハイマー病患者の脳に蓄積するアミロイドのプロセッシ
ングに重要な役割を担っていることが明らかになってき
ている（Shin-ichi Kojima,et al., FEBS, 304,57-60
(1992)）。

【０００４】このように、プロテアソームが細胞の増殖
や免疫系をはじめとする生命現象と深く関連している多
くの蛋白質の分解制御に重要な役割を果たしていること
が明確になってきた。

【０００５】一方で、このプロテアソームに対する阻害
剤の研究も進められており、例えば、有効なペプチジル
アルデヒド型プロテアソーム阻害剤として、Ｚ−Ｉｌｅ
−Ｇｌｕ（ＯＢｕ^t ) −Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｈ（アルデヒ
ド）が合成され、ＮＦ−κＢの活性化を阻害することが
見出されている（E.B.M.Traenckner et al.,EMBO J.,1
3,5433-5441,1994 ）。また、Ｚ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌ
ｅｕ−Ｈ（アルデヒド）が合成され、内在性抗原のプロ
セッシングや前駆体ＮＦ−κＢの成熟型への転換を阻害
するとともに、ＮＧＦ（神経成長因子）と同等以上の神
経突起伸長効果を有することが認められている（Y.Sato
et al.,Neurosci.Lett.,120,1-4,1990 ）。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、新規
なペプチジルエポキシ型プロテアソーム阻害剤を提供す
ることにある。本発明の他の目的は、プロテアソーム阻
害剤として使用される本発明の化合物を有効成分とす
る、自己免疫疾患、炎症性腸疾患、喘息及びアルツハイ
マー病等の治療剤を提供することにある。本発明のさら
に他の目的は、プロテアソーム阻害作用を有する新規な
化合物を提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】即ち、本発明の要旨は、
〔１〕 一般式（１）

【０００８】

【化３】

【０００９】（式中、Ｒ¹ は、置換若しくは無置換のア
シル基、置換若しくは無置換のアシル基でアシル化され
たアミノ基を有するアミノ酸残基、又はアミノ基が保護
基で保護されていてもよいアミノ酸残基を示し、Ｒ² は
水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｒ³ 及
びＲ⁴ は、水素原子若しくは炭素数１〜６のアルキル基
を示すか、又はＲ³ とＲ⁴ が共に一緒になってメチレン
基を示す）で表わされる化合物からなるプロテアソーム
阻害剤、〔２〕 一般式（１）において、Ｒ¹ が置換若
しくは無置換のアシル基であり、Ｒ² が水素原子であ
り、Ｒ³ とＲ⁴ は両者が共に一緒になってメチレン基を
示す、前記〔１〕記載のプロテアソーム阻害剤、〔３〕
一般式（１）において、Ｒ¹ が置換若しくは無置換の
アシル基でアシル化されたアミノ基を有するアミノ酸残
基、又はアミノ基が保護基で保護されていてもよいアミ
ノ酸残基であり、Ｒ² がメチル基であり、Ｒ³ 及びＲ⁴
が水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基である、前記
〔１〕記載のプロテアソーム阻害剤、〔４〕 前記
〔１〕〜〔３〕いずれかにおいて記載の一般式（１）で
表わされる化合物を有効成分とする、プロテアソームの
作用亢進に起因する疾患の治療剤、〔５〕 疾患が、自
己免疫疾患、炎症性腸炎疾患、喘息、およびアルツハイ
マー病からなる群より選ばれる前記〔４〕記載の治療
剤、〔６〕 自己免疫疾患が慢性関節リウマチである前
記〔５〕記載の治療剤、〔７〕 一般式（２）

【００１０】

【化４】

【００１１】（式中、Ｒ¹¹は、置換若しくは無置換のア
シル基でアシル化されたアミノ基を有するアミノ酸残
基、又はアミノ基が保護基で保護されていてもよいアミ
ノ酸残基を示し、Ｒ¹²は水素原子又は炭素数１〜６のア
ルキル基を示し、Ｒ¹³及びＲ¹⁴は、水素原子若しくは炭
素数１〜６のアルキル基を示すか、又はＲ¹³とＲ¹⁴が共
に一緒になってメチレン基を示す）で表わされる化合
物、〔８〕 一般式（２）において、Ｒ¹¹が置換若しく
は無置換のアシル基でアシル化されたアミノ基を有する
アミノ酸残基、又はアミノ基が保護基で保護されていて
もよいアミノ酸残基であり、Ｒ¹²がメチル基であり、Ｒ
¹³及びＲ¹⁴が水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基で
ある、前記〔７〕記載の化合物、

〔９〕 ２−（２−カ
ルバモイル−プロピオニル−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ）
−１−ヒドロキシ−２，３−エポキシプロパン、に関す
るものである。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明のプロテアソーム阻害剤
は、一般式（１）：

【００１３】

【化５】

【００１４】（式中、Ｒ¹ は、置換若しくは無置換のア
シル基、置換若しくは無置換のアシル基でアシル化され
たアミノ基を有するアミノ酸残基、又はアミノ基が保護
基で保護されていてもよいアミノ酸残基を示し、Ｒ² は
水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｒ³ 及
びＲ⁴ は、水素原子若しくは炭素数１〜６のアルキル基
を示すか、又はＲ³ とＲ⁴ が共に一緒になってメチレン
基を示す）で表わされる化合物からなる。即ち、本発明
のプロテアソーム阻害剤は、エポキシ基を有するペプチ
ド誘導体（エポキシ−ペプチド誘導体）という構造的特
徴を有する化合物からなる。

【００１５】本発明において、プロテアソーム阻害剤の
有するプロテアソーム阻害作用とは、プロテアソームの
蛋白質（高分子量）分解活性及びペプチド（低分子量）
分解活性を阻害することをいう。

【００１６】前記Ｒ¹ において、無置換のアシル基と
は、例えば脂肪族アシル基又は芳香族アシル基が挙げら
れる。脂肪族アシル基としては、炭素数が２〜３０の直
鎖状、分枝状又は環状のものが挙げられ、具体的には、
アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリ
ル基、バレリル基、イソバレリル基、ドデカノイル基、
ペンタデカノイル基、ドコサノイル基、ノナコサノイル
基等が挙げられる。芳香族アシル基としては、例えば、
ベンゾイル基、ベンジルカルボニル基、フェネチルカル
ボニル基、ナフチルカルボニル基、ナフチルメチルカル
ボニル基等が挙げられる。また、Ｒ¹ における置換アシ
ル基とは、例えば、前記無置換のアシル基の水素原子が
置換基で置換されたものが挙げられる。置換アシル基中
の置換基の数は特に限定されるものではなく、１個でも
２個以上でも構わない。置換基としては、例えば、水酸
基、アミノ基、ニトロ基、フッ素原子、塩素原子、臭素
原子、メトキシ基又はエトキシ基等のアルコキシ基、カ
ルバモイル基、メチルカルバモイル基又はジメチルカル
バモイル基等の置換アミノカルボニル基等が挙げられ
る。

【００１７】また、Ｒ¹ において、「置換若しくは無置
換のアシル基でアシル化されたアミノ基を有するアミノ
酸残基、又はアミノ基が保護基で保護されていてもよい
アミノ酸残基」におけるアミノ酸としては特に限定され
るものではなく、通常使用される各種のアミノ酸を意味
するが、好ましくは、セリン、スレオニン、イソロイシ
ン、ロイシン、ノルマルバリン等が挙げられる。

【００１８】前記「置換若しくは無置換のアシル基でア
シル化されたアミノ基を有するアミノ酸残基」におい
て、アミノ酸のアミノ基に置換する置換若しくは無置換
のアシル基としては、Ｒ¹ としての前記置換又は無置換
のアシル基と同様のものが挙げられる。無置換のアシル
基としては、なかでもアセチル基、プロピオニル基、ブ
チリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル
基等の脂肪族アシル基が好ましい。また、置換アシル基
における好ましい置換基としては、水酸基、カルバモイ
ル基、メチルカルバモイル基又はジメチルカルバモイル
基等の置換アミノカルボニル基等を挙げることができ
る。

【００１９】前記アミノ基の保護基としては一般に使用
されるものであれば何でもよく、例えばProtective Gro
up in Organic Synthesis (T. W. Greene 著、1981年)
等の成書に記載のものを使用することができる。好まし
くはベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブチルオキシカ
ルボニル基、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル基等
が挙げられる。

【００２０】前記Ｒ² において、炭素数１〜６のアルキ
ル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ｎ−
ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等が挙げら
れ、メチル基が好ましい。

【００２１】前記Ｒ³ 及びＲ⁴ において、炭素数１〜６
のアルキル基としては、メチル基、、エチル基、プロピ
ル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基
等が挙げられ、メチル基が好ましい。

【００２２】一般式（１）において、プロテアソーム阻
害剤として好適な化合物としては、 １）Ｒ¹ が置換若しくは無置換のアシル基であり、Ｒ²
が水素原子であり、Ｒ³及びＲ⁴ が共に一緒になってメ
チレン基である化合物、 ２）Ｒ¹ が置換若しくは無置換のアシル基でアシル化さ
れたアミノ基を有するアミノ酸残基、又はアミノ基が保
護基で保護されていてもよいアミノ酸残基であり、Ｒ²
がメチル基であり、Ｒ³ 及びＲ⁴ が水素原子又は炭素数
１〜６のアルキル基である化合物等が挙げられる。更に
具体的には、下記の化合物が好適なものとして挙げられ
るが、これらに限定されるものではない。

【００２３】即ち、２−｛６−メチルヘプタノイル−Ｓ
ｅｒ−（３，４−デヒドロ−Ｌｅｕ）｝−１−ヒドロキ
シ−２，３−エポキシプロパン、２−（６−メチルヘプ
タノイル−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ）−１−ヒドロキシ−２，３
−エポキシプロパン、２−｛６−メチルヘプタノイル−
Ｔｈｒ−（３，４−デヒドロ−Ｌｅｕ）｝−１−ヒドロ
キシ−２，３−エポキシプロパン、２−（６−メチルヘ
プタノイル−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ）−１−ヒドロキシ−２，
３−エポキシプロパン、２−（２−カルバモイル−プロ
ピオニル−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ）−１−ヒドロキシ
−２，３−エポキシプロパン、２−｛２−カルバモイル
−プロピオニル−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−（３，４−デヒドロ
−Ｌｅｕ）｝−１−ヒドロキシ−２，３−エポキシプロ
パン、２−（２−カルバモイル−プロピオニル−Ｔｈｒ
−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ）−１−ヒドロキシ−２，３−エポキ
シプロパン、２−｛２−カルバモイル−プロピオニル−
Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−（３，４−デヒドロ−Ｌｅｕ）｝−１
−ヒドロキシ−２，３−エポキシプロパン、２−（ベン
ジルオキシカルボニル−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ）−１
−ヒドロキシ−２，３−エポキシプロパン、２−（ベン
ジルオキシカルボニル−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ）−１
−ヒドロキシ−２，３−エポキシプロパン、２−（ベン
ジルオキシカルボニル−ｎ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ）
−１−ヒドロキシ−２，３−エポキシプロパン等であ
る。

【００２４】なお、これらの化合物のうち、一般式
（１）においてＲ¹ が６−メチルヘプタノイル基の化合
物である２−｛６−メチルヘプタノイル−Ｓｅｒ−
（３，４−デヒドロ−Ｌｅｕ）｝−１−ヒドロキシ−
２，３−エポキシプロパンは、抗腫瘍活性を持つ公知の
抗生物質であるエポネマイシン（ジャーナル オフ ア
ンチバイオティックス、４３巻、８〜１８頁（１９９０
年）；Synthesis, 300〜304, 1994 ）と同一の化合物で
ある。本発明者らはこのエポネマイシンと同一の化合物
を新規な微生物から単離し、プロテアソーム阻害活性を
有することを新たに見い出した。

【００２５】このように、一般式（１）において、Ｒ¹
が６−メチルヘプタノイル基の化合物には公知物質が含
まれるが、Ｒ¹ が置換若しくは無置換のアシル基でアシ
ル化されたアミノ基を有するアミノ酸残基、又はアミノ
基が保護基で保護されていてもよいアミノ酸残基である
という構造的特徴を有する化合物は、新規な化合物であ
る。本明細書においては、これらの新規化合物の表示と
して特に一般式（２）で表している。

【００２６】一般式（２）

【００２７】

【化６】

【００２８】（式中、Ｒ¹¹は、置換若しくは無置換のア
シル基でアシル化されたアミノ基を有するアミノ酸残
基、又はアミノ基が保護基で保護されていてもよいアミ
ノ酸残基を示し、Ｒ¹²は水素原子又は炭素数１〜６のア
ルキル基を示し、Ｒ¹³及びＲ¹⁴は、水素原子若しくは炭
素数１〜６のアルキル基を示すか、又はＲ¹³とＲ¹⁴が共
に一緒になってメチレン基を示す）で表わされる化合
物。

【００２９】一般式（２）において、Ｒ¹¹が置換若しく
は無置換のアシル基でアシル化されたアミノ基を有する
アミノ酸残基、又はアミノ基が保護基で保護されていて
もよいアミノ酸残基としては、一般式（１）におけるＲ
¹ について説明したものと同様であり、Ｒ¹²、Ｒ¹³及び
Ｒ¹⁴についても一般式（１）におけるＲ² 、Ｒ³ 、Ｒ ⁴
とそれぞれ同様である。

【００３０】また、一般式（２）において、Ｒ¹¹が置換
若しくは無置換のアシル基でアシル化されたアミノ基を
有するアミノ酸残基、又はアミノ基が保護基で保護され
ていてもよいアミノ酸残基であり、Ｒ¹²がメチル基であ
り、Ｒ¹³が水素原子でＲ¹⁴がメチル基であるか、又はＲ
¹³及びＲ¹⁴が一緒になってメチレン基である化合物が好
適である。

【００３１】本発明の一般式（１）又は一般式（２）で
示される化合物を製造するには、エポネマイシンの合成
工程等の公知の一連の合成反応工程に準じて容易に合成
することができる（Tetrahedron Lett.,34,1047-1050(1
993)、Synthesis,300-304(March 1994) ）。

【００３２】例えば、ＳＰＡ−１３４４の合成を例にす
ると、Synthesis,300-304(March 1994) に記載の手順に
従って、あらかじめ次式で示されるプレエポキシ−アミ
ノ酸誘導体〔(3RS,4S)-4-Amino-2-tert-butyldimethyls
ilyloxymethyl-3-hydroxy-6-methyl-1,6-heptadiene 〕
（１０）とＮ末端修飾アミノ酸誘導体〔(S)-N-(6-Methy
lheptanoyl)serine 〕（１１）を合成し、次いでこれら
の化合物の縮合反応、エポキシ化反応により目的化合物
（ＳＰＡ−１３４４）を合成することができる。

【００３３】

【化７】

【００３４】具体的な合成ルートは、前記文献（Synthe
sis ）中のScheme１、Scheme２で示されている。また詳
細な反応条件などは該文献のp.301 〜303 において記載
されており、これらの条件に準じて行なえばよい。ま
た、ＳＰＡ−１３４４以外の本発明の一般式（１）又は
一般式（２）で表わされる化合物を合成するには、出発
原料を適宜選択して目的とする化合物の構造に対応した
プレエポキシ−アミノ酸誘導体とＮ末端修飾アミノ酸誘
導体をそれぞれ調製し、上記と同様の縮合反応、エポキ
シ化反応を行なうことにより容易に行なうことができ
る。各反応において使用される溶媒や、反応温度、時間
等の反応条件は特に限定されるものではなく、前記文献
（Synthesis ）に記載の条件に準じて、あるいは通常の
有機合成の手順に従って適宜選択して行なえばよい。

【００３５】あるいは、これらの化合物の産生能を有す
る微生物を培養し、培養物から回収する方法によっても
製造することができる。微生物の培養による方法の例と
して、以下のものを挙げて説明する。本発明で用いられ
る微生物としては、一般式（１）又は一般式（２）の化
合物の産生能を有するものであれば、特に限定されない
が、ストレプトミセス属に属する微生物が好適なものと
して例示される。例えば、２−｛６−メチルヘプタノイ
ル−Ｓｅｒ−（３，４−デヒドロ−Ｌｅｕ）｝−１−ヒ
ドロキシ−２，３−エポキシプロパン及び２−（２−カ
ルバモイル−プロピオニル−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ）
−１−ヒドロキシ−２，３−エポキシプロパンは、それ
ぞれStreptomyces sp. ＳＰＡ−１３４４及びStreptom
yces sp.ＳＰＡ−１７６１の培養物から回収し、単離・
精製して得ることができる。本明細書において、それぞ
れの化合物をＳＰＡ−１３４４及びＳＰＡ−１７６１と
表示する。それぞれの構造を次に示す。なお、ＳＰＡ−
１７６１には２種の異性体が存在し、本明細書ではそれ
ぞれＳＰＡ−１７６１Ａ、ＳＰＡ−１７６１Ｂと表示す
る。

【００３６】

【化８】

【００３７】

【化９】

【００３８】前記Streptomyces sp. ＳＰＡ−１３４４
及びStreptomyces sp. ＳＰＡ−１７６１は、国内で採
集された土壌試料より分離されたもので、通商産業省工
業技術院生命工学工業技術研究所に、１９９７年７月１
８日に、それぞれＦＥＲＭＰ−１６３４０及びＦＥＲＭ
Ｐ−１６３４１として寄託されている。

【００３９】本菌株の菌学的性質を以下に述べる。 １．Streptomyces sp. ＳＰＡ−１３４４ （以下、ＳＰＡ−１３４４株と略す。） ＳＰＡ−１３４４株は、長崎県平戸市内で採集した土壌
試料より分離された放線菌で、その菌学的性質は次のと
おりである。

【００４０】(a) 形態的性質 ＳＰＡ−１３４４株は、イースト・麦芽寒天培地、スタ
ーチ・無機塩寒天培地、グリセリン・アスパラギン寒天
培地などの培地上でよく生育し、基生菌糸は単純分岐を
なし、気菌糸を形成する。気菌糸上には胞子の長い連鎖
（２０〜５０個程度の胞子より成る）を作り、胞子鎖形
状は螺旋状である。胞子は、直径０．４〜０．６μｍ、
長さ０．７〜１．２μｍの円筒状で、胞子連結部が竹の
節状に盛り上がる。胞子表面はしわ状である。基生菌糸
や気菌糸の分断、胞子のう、鞭毛胞子、菌核等の特殊な
構造は認められない。

【００４１】(b) 培養的性質 各種培地上で２７℃、３週間培養したＳＰＡ−１３４４
株の培養的性質は次のとおりである。

【００４２】(1) イースト・麦芽寒天培地（ISP 培地 N
o.2 ） 生育及び気菌糸着生は良好である。気菌糸色調は灰色で
ある。基生菌糸の色調は黄色である。培地中への拡散性
色素はない。

【００４３】(2) オートミール寒天培地（ISP 培地 No.
3 ） 生育は良好である。気菌糸は着生するが培養が進むと粘
液塊状となる。気菌糸色調は灰色または黒色である。基
生菌糸の色調は黄色である。培地中への拡散性色素はな
い。

【００４４】(3) スターチ・無機塩寒天培地（ISP 培地
No.4 ） 生育及び気菌糸着生は良好である。気菌糸色調は灰色で
ある。基生菌糸の色調は黄色である。培地中への拡散性
色素はない。

【００４５】(4) グリセリン・アスパラギン寒天培地
（ISP 培地 No.5 ） 生育及び気菌糸着生は良好である。気菌糸色調は灰色で
ある。基生菌糸の色調は黄色である。培地中への拡散性
色素はない。

【００４６】 (c) 生理学的性質 (1) 生育温度範囲 14〜37℃（イースト・麦芽寒天培地、２週間培養） (2) メラニン様色素の生成 ペプトン・イースト・鉄寒天培地（ISP 培地 No.6 ） 陰性 チロシン寒天培地（ISP 培地 No.7 ） 陰性 (3) 炭素源の利用性 Ｌ−アラビノース 陽性 Ｄ−フラクトース 陽性 Ｄ−グルコース 陽性 イノシトール 陽性 Ｄ−マンニトール 陽性 ラフィノース 陽性 Ｌ−ラムノース 陽性 シュークロース 陽性 Ｄ−キシロース 陽性

【００４７】(d) 化学分類学的性質及びその他の性質 (1) 細胞壁ジアミノ酸の分析 LL−ジアミノピメリン酸を検出 (2) デンプン加水分解 陰性

【００４８】以上の結果から、ＳＰＡ−１３４４株をSt
reptomyces属に属する菌株と同定し、Streptomyces sp.
ＳＰＡ−１３４４と命名した。

【００４９】 ２．Streptomyces sp. ＳＰＡ−１７６１ （以下、ＳＰＡ−１７６１株と略す。） ＳＰＡ−１７６１株は、福岡県久留米市内で採集した土
壌試料より分離された放線菌で、その菌学的性質は次の
とおりである。 (a) 形態的性質 ＳＰＡ−１７６１株は、イースト・麦芽寒天培地、オー
トミール寒天培地、スターチ・無機塩寒天培地などの培
地上でよく生育し、基生菌糸は単純分岐をなし、気菌糸
を形成する。気菌糸上には胞子の長い連鎖 (10〜50個程
度の胞子より成る) を作り、胞子鎖形状は環状またはゆ
るい螺旋状である。胞子は、直径 0.4〜0.7 μｍ、長さ
0.8〜1.4 μｍの楕円状で、胞子表面は平滑である。基
生菌糸や気菌糸の分断、胞子のう、鞭毛胞子、菌核等の
特殊な構造は認められない。

【００５０】(b) 培養的性質 各種培地上で27℃、３週間培養したＳＰＡ−１７６１株
の培養的性質は次のとおりである。

【００５１】(1) イースト・麦芽寒天培地（ISP 培地 N
o.2 ） 生育及び気菌糸着生は良好である。気菌糸色調は灰色で
ある。基生菌糸の色調は茶色である。培地中への拡散性
色素は茶色である。

【００５２】(2) オートミール寒天培地（ISP 培地 No.
3 ） 生育及び気菌糸着生は良好である。気菌糸色調は灰色で
ある。基生菌糸の色調は茶色である。培地中への拡散性
色素は茶色である。

【００５３】(3) スターチ・無機塩寒天培地（ISP 培地
No.4 ） 生育及び気菌糸着生は良好である。気菌糸色調は灰色で
ある。基生菌糸の色調は黄色である。培地中への拡散性
色素はない。

【００５４】(4) グリセリン・アスパラギン寒天培地
（ISP 培地 No.5 ） 生育及び気菌糸着生は良好である。気菌糸色調は灰色で
ある。基生菌糸の色調は茶色である。培地中への拡散性
色素は茶色である。

【００５５】 (c) 生理学的性質 (1) 生育温度範囲 11〜46℃（イースト・麦芽寒天培地、２週間培養） (2) メラニン様色素の生成 ペプトン・イースト・鉄寒天培地（ISP 培地 No.6 ） 陽性 チロシン寒天培地培地（ISP 培地 No.7 ） 陰性 (3) 炭素源の利用性 Ｌ−アラビノース 陽性 Ｄ−フラクトース 陽性 Ｄ−グルコース 陽性 イノシトール 陽性 Ｄ−マンニトール 陽性 ラフィノース 陽性 Ｌ−ラムノース 陽性 シュークロース 陰性 Ｄ−キシロース 陽性

【００５６】 (d) 化学分類学的性質及びその他の性質 (1) 細胞壁ジアミノ酸の分析 LL- ジアミノピメリン酸を検出 (2) デンプン加水分解 陽性

【００５７】以上の結果から、ＳＰＡ−１７６１株をSt
reptomyces属に属する菌株と同定し、Streptomyces sp.
ＳＰＡ−１７６１と命名した。

【００５８】本発明では、前記のようなStreptomyces属
に属する微生物を培養することにより、培養物から２−
｛６−メチルヘプタノイル−Ｓｅｒ−（３，４−デヒド
ロ−Ｌｅｕ）｝−１−ヒドロキシ−２，３−エポキシプ
ロパン（ＳＰＡ−１３４４）、あるいは２−（２−カル
バモイル−プロピオニル−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ）−
１−ヒドロキシ−２，３−エポキシプロパン（ＳＰＡ−
１７６１）を回収することにより製造することができ
る。

【００５９】本発明の製造方法において、微生物の培養
は通常の培養、回収方法により、目的の化合物を単離・
精製することができる。即ち、微生物の培養に使用され
る培地は液体でも固体でもよいが、通常は液体培地によ
る振盪培養または通気攪拌培養が有利である。培地組成
としては、生産菌が利用する栄養素を含有するものであ
ればよく、特に限定されるものではないが、炭素源とし
ては例えばグルコース、シュークロース、ラクトース、
グリセリン、デンプン、デキストリン、糖蜜等が挙げら
れる。窒素源としては、例えばペプトン、カザミノ酸等
の蛋白質加水分解物、肉エキス、酵母エキス、大豆粕、
綿実粕、コーンスティープリカー、アミノ酸類等の有機
窒素源や、アンモニウム塩や硝酸塩等の無機窒素源が挙
げられる。その他、浸透圧調整、ｐＨ調整、微量成分の
補給等のために、各種リン酸塩、硝酸マグネシウム、塩
化ナトリウム、炭酸カルシウム等の無機塩類を添加する
ことも可能である。さらに菌の生育を促進する目的で、
各種ビタミン類、核酸関連化合物等を培地に添加しても
よい。なお、培養期間中に、シリコン油、ポリプロピレ
ングリコール誘導体、大豆油等の消泡剤を添加すること
も可能である。培養温度としては、好ましくは２０〜３
７℃、更に好ましくは２５〜３０℃の範囲の温度が挙げ
られる。培養期間としては例えば３〜７日間が挙げられ
る。培地のｐＨとしては例えば中性付近の範囲が挙げら
れる。

【００６０】培養物からＳＰＡ−１３４４あるいはＳＰ
Ａ−１７６１を採取するには、微生物の生産する代謝物
の培養液から、通常使用される単離手段が使用できる。
培養液上清中からの単離法としては、培養濾液からの通
常の単離法、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法また
は吸着もしくは分配クロマトグラフィーおよびゲル濾過
クロマトグラフィー等が挙げられる。これらの単離法
は、単独または組み合わせて行うことができる。また高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）や薄層クロマト
グラフィーなどによる単離精製もできる。培養菌体から
目的物を単離する場合は、濾過もしくは遠心分離等の手
段で集めた菌体から、有機溶媒を用いて直接、抽出でき
る。抽出に使用する有機溶媒としてはアセトン、メタノ
ール等が挙げられる。抽出物は、培養液上清からの単離
精製法と同様の方法で目的物を得ることができる。な
お、ＳＰＡ−１７６１株を用いるＳＰＡ−１７６１の製
造方法は、具体的には後述の製造例１に、またＳＰＡ−
１３４４株を用いるＳＰＡ−１３４４の製造方法は、具
体的には後述の製造例２に記載されている。

【００６１】このようにして得られた化合物は、プロテ
アソームの阻害作用を有することから、プロテアソーム
阻害剤として有用であり、プロテアソームの作用亢進に
起因する疾患の治療剤となる。また、本発明のプロテア
ソーム阻害剤は、ＴＮＦ−αに対する阻害活性も有する
ことから、自己免疫疾患の抑制機能を果たすとも考えら
れる。プロテアソームの作用亢進に起因すると考えられ
ている種々の疾患としては、自己免疫疾患、炎症、神経
細胞変性疾患等が挙げられ、より具体的には、特に慢性
関節リウマチ等の自己免疫疾患、炎症性腸炎疾患、喘
息、アルツハイマー病等を挙げることができる。

【００６２】従って、本発明は、本発明の化合物を有効
成分とする自己免疫疾患治療剤を提供する。自己免疫疾
患治療剤としては、慢性関節リウマチ疾患治療剤が好ま
しい。また、本発明は、本発明の化合物を有効成分とす
る炎症性腸炎疾患治療剤、喘息治療剤及びアルツハイマ
ー病治療剤を提供する。

【００６３】本発明の治療剤の自己免疫疾患、炎症、神
経細胞変性疾患等における有効性は、プロテアソーム阻
害活性と共に、ＴＮＦ−αに対する阻害活性によっても
確認することができる。かかる阻害活性の測定方法は、
実施例１及び２に記載されている。

【００６４】慢性関節リウマチ疾患治療剤等の自己免疫
疾患治療剤、炎症性腸炎疾患治療剤、喘息治療剤及びア
ルツハイマー病治療剤等の本発明の治療剤は、かかる病
気の治療剤として経口的又は非経口的に投与することが
できる。すなわち、通常用いられる投与形態、例えば錠
剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等として経口投与するこ
とができ、あるいは液剤、乳剤、懸濁液剤、リポソーム
剤などとして筋肉内注射又は皮下注射することができ、
また、坐剤として直腸投与することもできる。このよう
な剤形は、医薬として許容される通常の担体、賦型剤、
結合剤、安定剤、緩衝剤、溶解補助剤、等張剤等と本発
明の有効成分を配合することにより製造することができ
る。

【００６５】投与量、投与回数は、患者の症状、症歴、
年齢、体重、投与形態等によって異なるが、例えば成人
に経口投与する場合、通常、１日当たり５〜５００mg、
好ましくは１０〜１００mgの範囲で適宜調節して、１回
又は数回に分けて投与することができる。

【００６６】

【実施例】以下、製造例及び実施例により本発明をさら
に詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例などによ
りなんら限定されるものではない。

【００６７】製造例１ ２−（２−カルバモイル−プロピオニル−Ｌ−スレオニ
ル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−ロイシル）−１−ヒドロキシ
−２，３−エポキシプロパン（ＳＰＡ−１７６１Ａ及び
Ｂ）の製造 （１）ＳＰＡ−１７６１株をグルコース２％、シューク
ロース５％、綿実粕２％、硝酸ナトリウム０．１％、リ
ン酸２カリウム０．０５％、塩化カリウム０．０７％、
Ｌ−ヒスチジン０．１％、硫酸マグネシウム・７水和物
０．００１４％の組成からなる液体培地１００ｍｌを入
れた０．５リットル容の坂口フラスコ２本に接種し、２
７℃で５日間振とう培養して種母を作成した。次いでグ
ルコース２％、シュークロース５％、綿実粕２％、硝酸
ナトリウム０．１％、リン酸２カリウム０．０５％、塩
化カリウム０．０７％、Ｌ−ヒスチジン０．１％、硫酸
マグネシウム・７水和物０．００１４％の組成からなる
液体培地３リットルを入れた５リットル容タンクに上記
種母を１００ｍｌずつ添加接種し、通気量１．５リット
ル／ｍｉｎ、攪拌６００ｒｐｍ、２７℃で４日間通気攪
拌培養した。

【００６８】（２）得られた培養液６リットルを４℃、
８０００ｒｐｍで５分間高速遠心分離し、培養上清５．
５リットルを得た。この上清液５．５リットルをダイア
イオンＨＰ−２０（三菱化学工業社製）０．５リットル
を充填したカラムに通液吸着させた。溶出液としてメタ
ノール水溶液を使用しメタノール濃度を段階的に増加さ
せ溶出させた。６０％メタノールで溶出させた画分を集
め、この溶出液を１／２量まで減圧濃縮し１．５リット
ルのｎ−ブタノールで抽出した。このｎ−ブタノール抽
出液を減圧濃縮し黄色粉末２．６ｇを得た。

【００６９】この粉末を２５ｍｌのメタノールに溶解
し、１０％メタノールで平衡化させた逆相系ＯＤＳ（ナ
カライテスク社製）１リットルを充填したカラムに吸着
させ、１０％メタノール４リットル、２５％メタノール
４リットルで順次溶出させた。得られた２５％メタノー
ル溶出画分を減圧濃縮し黄色粉末０．６ｇを得た。この
粉末を少量のメタノールに溶解し、２０％メタノールで
平衡化させた逆相系高速液体クロマト用ＯＤＳカラム
（ウォーター社製、直径５０ｍｍ、長さ３００ｍｍ）に
通液吸着させた後に、流速５０ｍｌ／ｍｉｎでメタノー
ル濃度を増加させ溶出させた。プロテアソーム阻害活性
画分を集め、減圧濃縮し黄色粉末７０ｍｇを得た。この
粉末を少量のメタノールに溶解し、２５％メタノールで
平衡化させた逆相系高速液体クロマト用ＯＤＳカラム
（山村化学社製、直径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ）に通
液吸着させた後に、流速１０ｍｌ／ｍｉｎでメタノール
濃度を増加させ溶出させた。同様に、プロテアソーム阻
害活性画分を集め、減圧濃縮し白色粉末２０ｍｇを得
た。この粉末を少量のメタノールに溶解し、１０％アセ
トニトリルで平衡化させた逆相系高速液体クロマト用Ｏ
ＤＳカラム（山村化学社製、直径２０ｍｍ、長さ２５０
ｍｍ）に通液吸着させた。流速１０ｍｌ／分でアセトニ
トリル濃度を１０％から４０分後、２０％になるように
増加させ溶出させた。プロテアソーム阻害活性を示した
３１．２min のピークを分取し減圧濃縮し白色粉末６ｍ
ｇ（ＳＰＡ−１７６１Ａ）を得た。また３３．０min の
ピークを分取し減圧濃縮し白色粉末６ｍｇ（ＳＰＡ−１
７６１Ｂ）を得た。

【００７０】なお、本実験におけるプロテアソーム阻害
活性画分の取得は、実施例１に記載の方法によりプロテ
アソーム阻害活性を検出することにより行った。

【００７１】得られたＳＰＡ−１７６１Ａの構造解析デ
ータを以下に示す。 （１）質量分析値： 陽イオンＦＡＢＭＳスペクトル：ｍ／ｚ ４８９（Ｍ＋
Ｈ）⁺ 陰イオンＦＡＢＭＳスペクトル：ｍ／ｚ ４８７（Ｍ−
Ｈ）^- （２）高分解能ＦＡＢＭＳ： （Ｍ＋Ｈ）⁺ ｍ／ｚ 実測値：４８９．２６１３ Ｃ₂₁Ｈ₃₇Ｎ₄ Ｏ₉ として計算値：４８９．２５６１ （３）〔α〕_D ²⁰ ＋４．３°（ｃ＝０．０３、メタノ
ール溶液） （４）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中、末端
吸収のみ観測された。 （５）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム錠にて測定
したスペクトルを図１に示す。 （６）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重ジメチルスルフォキ
シド（ｄ₆ −ＤＭＳＯ）中、５００ＭＨｚで測定したス
ペクトルを図２に示す。 （７）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重ジメチルスルフォキ
シド（ｄ₆ −ＤＭＳＯ）中、１２５ＭＨｚで測定したス
ペクトルを図３に示す。

【００７２】得られたＳＰＡ−１７６１Ｂの構造解析デ
ータを以下に示す。 （１）質量分析値： 陽イオンＦＡＢＭＳスペクトル：ｍ／ｚ ４８９（Ｍ＋
Ｈ）⁺ 陰イオンＦＡＢＭＳスペクトル：ｍ／ｚ ４８７（Ｍ−
Ｈ）^- （２）〔α〕_D ²⁰ ＋３．８°（ｃ＝０．０３、メタノ
ール溶液） （３）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中、末端
吸収のみ観測された。 （４）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重ジメチルスルフォキ
シド（ｄ₆ −ＤＭＳＯ）中、５００ＭＨｚで測定したス
ペクトルを図４に示す。 （５）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重ジメチルスルフォキ
シド（ｄ₆ −ＤＭＳＯ）中、１２５ＭＨｚで測定したス
ペクトルを図５に示す。

【００７３】構造解析研究の結果、ＳＰＡ−１７６１
Ａ、ＳＰＡ−１７６１Ｂとは構造異性体であることが判
明した。

【００７４】製造例２ ２−｛６−メチルヘプタノイル−Ｌ−セリル−（３，４
−デヒドロ−Ｌ−ロイシル）｝−１−ヒドロキシ−２，
３−エポキシプロパン（ＳＰＡ−１３４４）の製造 （１）ＳＰＡ−１３４４株をグルコース２％、シューク
ロース５％、綿実粕２％、硝酸ナトリウム０．１％、リ
ン酸２カリウム０．０５％、塩化カリウム０．０７％、
Ｌ−ヒスチジン０．１％、硫酸マグネシウム・７水和物
０．００１４％の組成からなる液体培地３００ｍｌを入
れた２リットル容の坂口フラスコ３０本に接種し、２７
℃で７日間振とう培養した。

【００７５】（２）得られた培養液９リットルを４℃、
８０００ｒｐｍで５分間高速遠心分離し、培養上清８リ
ットルを得た。この上清液を８リットルの酢酸エチルで
抽出した。酢酸エチル抽出液を減圧濃縮し、黄色油状物
３０ｇを得た。この油状物を２５ｍｌのアセトンに溶解
し、アセトン−ｎ−ヘキサン（２５：７５）の混合溶媒
で平衡化させたシリカゲル（メルク社製）１リットルを
充填したカラムに吸着させ、アセトン−ｎ−ヘキサン
（２５：７５、２リットル、４０：６０、２リットル及
び６０：４０、４リットル）の混合溶媒で順次溶出させ
た。得られたアセトン−ｎ−ヘキサン（６０：４０）溶
出画分を減圧濃縮し、黄色油状物３ｇを得た。この油状
物を10ｍｌのクロロホルムに溶解し、クロロホルム−メ
タノール（４０：１）の混合溶媒で平衡化させたシリカ
ゲル（メルク社製）３００ｍｌを充填したカラムに吸着
させ、クロロホルム−メタノール（４０：１、０．５リ
ットル、２０：１、１リットル）の混合溶媒で順次溶出
させた。得られたクロロホルムーメタノール（２０：
１）溶出画分を減圧濃縮し、黄色油状物１．５ｇを得
た。この油状物を少量のジメチルスルフォキシドに溶解
し、３０％アセトニトリルで平衡化させた逆相系高速液
体クロマト用ＯＤＳカラム（ウォーター社製、直径５０
ｍｍ、長さ３００ｍｍ）に通液吸着させた後に、流速５
０ｍｌ／分でアセトニトリル濃度を増加させ溶出させ
た。プロテアソーム阻害活性画分を集めて減圧濃縮し、
黄色粉末30ｍｇを得た。この粉末を少量のジメチルスル
フォキシドに溶解し、４０％アセトニトリルで平衡化さ
せた逆相系高速液体クロマト用ＯＤＳカラム（山村化学
社製、直径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ）に通液吸着させ
た後に、流速１０ｍｌ／分でアセトニトリル濃度を増加
させ溶出させた。プロテアソーム阻害活性画分を集めて
減圧濃縮し、白色粉末5 ｍｇを得た。この粉末を少量の
ジメチルスルフォキシドに溶解し、３５％アセトニトリ
ルで平衡化させた逆相系高速液体クロマト用ＯＤＳカラ
ム（山村化学社製、直径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍ）
に通液吸着させた後に、流速１ｍｌ／分で３５％アセト
ニトリルで溶出させた。プロテアソーム阻害活性画分を
集めて減圧濃縮し、白色粉末１．２ｍｇ（ＳＰＡ−１３
４４）を得た。

【００７６】なお、本実験におけるプロテアソーム阻害
活性画分の取得は、実施例１に記載の方法によりプロテ
アソーム阻害活性を検出することにより行った。

【００７７】得られたＳＰＡ−１３４４の構造解析デー
タを以下に示す。 （１）質量分析値： 陽イオンＦＡＢＭＳスペクトル：ｍ／ｚ ３９９（Ｍ＋
Ｈ）⁺ 陰イオンＦＡＢＭＳスペクトル：ｍ／ｚ ３９７（Ｍ−
Ｈ）^- （２）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル 重アセトン（ｄ₆ −アセトン）中、５００ＭＨｚで測定
したスペクトルを図６に示す。 （３）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル 重アセトン（ｄ₆ −アセトン）中、１２５ＭＨｚで測定
したスペクトルを図７に示す。

【００７８】ＳＰＡ−１３４４は、構造解析研究の結
果、ジャーナル オフ アンチバイオティックス、４３
巻、８〜１８頁（１９９０年）に記載の抗腫瘍ペプチド
（エポネマイシン）と同一化合物であることが明らかに
なった。

【００７９】実施例１ ＳＰＡ−１３４４及びＳＰＡ−１７６１Ｂのプロテアソ
ーム阻害活性 プロテアソームはラット脳組織より公知の方法（コジマ
他、ＦＥＢＳ、３０４巻、５７〜６０頁、１９９２年）
により精製した酵素溶液を使用した。具体的には、ラッ
ト脳組織に５倍量の０．１Ｍ ＨＥＰＥＳバッファー
（ｐＨ７．２５）を加え、氷冷下ホモゲナイズ抽出した
溶液を、４００００Ｇで冷却下３０分高速遠心分離し、
上清を酵素粗精製液として得た。酵素粗精製液１３０ｍ
ｌを２０ｍＭトリス塩酸バッファー（ｐＨ７．５）で平
衡化した陰イオン交換樹脂ＥＭＤ−ＤＥＡＥを充填した
カラムに通液しプロテアソームを吸着させた。樹脂に吸
着したプロテアソームを塩化ナトリウム濃度を増加させ
ることにより溶出させた。プロテアソームを塩化ナトリ
ウム濃度約０．５Ｍで溶出した。プロテアソーム阻害活
性を測定するための基質としてＳｕｃ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ
−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＭＣＡ（ペプチド研究所社製）を用
いた。

【００８０】被験化合物として、製造例１で得られたＳ
ＰＡ−１７６１Ｂ、及び製造例２で得られたＳＰＡ−１
３４４を用いた。１μｌのＤＭＳＯに溶解した各化合物
に、０．１ＭのＨＥＰＥＳバッファー（ｐＨ７．２５）
で調製した２０μＭのＳｕｃ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ
−Ｔｙｒ−ＭＣＡ溶液５０μｌを添加した後、プロテア
ソーム溶液５０μｌを加え３７℃で２時間インキュベー
トした。遊離したアミノメチルクマリンの蛍光強度をＥ
ｘ３５５ｎｍ、Ｅｍ４６０ｎｍで測定した。被験化合物
を添加しない場合の蛍光強度を１００としてプロテアソ
ームの活性を５０％阻害する化合物の量（ＩＣ₅₀）を算
出した。その結果を表１に示す。

【００８１】

【表１】

【００８２】実施例２ ＳＰＡ−１３４４のＴＮＦ−α阻害活性 ヒト血管内皮細胞ＨＵＶＥＣ細胞（クラボウ社製）を使
用し、ＴＮＦ−αで処理した際に発現するＥ−セレクチ
ンの発現量を測定することによりＴＮＦ−α阻害活性を
アッセイした。

【００８３】ＨＵＶＥＣ細胞をトリプシン処理によりフ
ラスコから剥離し、剥離した細胞をヒト血管内皮細胞増
殖用低血清液体培地（クラボウ社製）で約４００００細
胞／ｍｌに希釈した。細胞希釈液を組織培養用９６穴培
養プレート（Ｆａｌｃｏｎ社製）に１００μｌ／ウエル
となるようにまき込んだ後、被験化合物としてＳＰＡ−
１３４４の溶液を最終濃度０から２０μｇ／ｍｌになる
ように加え、ＣＯ₂ インキュベーター内（５％ＣＯ₂ ）
で３７℃で培養した。１時間後、リコンビナントヒトＴ
ＮＦ−α（ギブコ社製）を３０ｐｇ／ｍｌになるように
添加し４時間培養後、細胞を０．１％グルタルアルデヒ
ド溶液で固定した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０添加ＰＢ
Ｓ（−）（以下、Ｔ−ＰＢＳと略す）で一回洗浄後、Ｐ
ＢＳ（−）で５０００倍に希釈したＥ−セレクチン抗体
（Ｓｅｒｏｔｅｃ社製）を５０μｌ／ウエルになるよう
に添加したあと、３７℃で１．５時間反応を行った。反
応後、Ｔ−ＰＢＳで１回洗浄を行った後、ＰＢＳ（−）
で１０００倍に希釈したペルオキシダーゼ標識抗マウス
ＩｇＧ抗体（Kirkegaard & Perry Laboratories 社製）
を５０μｌ／ウエルとなるように添加した後、３７℃で
１時間反応を行った。反応後、Ｔ−ＰＢＳで２回洗浄を
行った後、3,3',5,5' −テトラメチルベンジジン溶液
（Kirkegaard & Perry Laboratories 社製）を１００μ
ｌ／ウエルとなるように添加して、遮光下で１０分間反
応させた後、１Ｍリン酸溶液を１００μｌ／ウエルとな
るように添加して反応を停止させた。各吸光度をマイク
ロプレートリーダーを用いて、波長５７０ｎｍで測定を
行った。なお、ＴＮＦ−α阻害活性は被験化合物を添加
しない場合のＥ−セレクチンの発現量を１００として、
ＴＮＦ−αの活性を５０％阻害する化合物の量（Ｉ
Ｃ₅₀）を算出した。ＳＰＡ−１３４４のＩＣ₅₀は０．３
μｇ／ｍｌであった。

【００８４】

【発明の効果】本発明により、自己免疫疾患、炎症性腸
炎疾患、喘息、アルツハイマー病等の治療に有用なプロ
テアソーム阻害剤が提供される。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ＳＰＡ−１７６１Ａの赤外線吸収スペ
クトルを示す図である。

【図２】図２は、ＳＰＡ−１７６１Ａの¹ Ｈ−ＮＭＲス
ペクトルを示す図である。

【図３】図３は、ＳＰＡ−１７６１Ａの¹³Ｃ−ＮＭＲス
ペクトルを示す図である。

【図４】図４は、ＳＰＡ−１７６１Ｂの¹ Ｈ−ＮＭＲス
ペクトルを示す図である。

【図５】図５は、ＳＰＡ−１７６１Ｂの¹³Ｃ−ＮＭＲス
ペクトルを示す図である。

【図６】図６は、ＳＰＡ−１３４４の¹ Ｈ−ＮＭＲスペ
クトルを示す図である。

【図７】図７は、ＳＰＡ−１３４４の¹³Ｃ−ＮＭＲスペ
クトルを示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/55 ＡＣＪ Ａ６１Ｋ 37/64 ＡＣＤ ＡＥＤ ＡＣＪ Ｃ０７Ｋ 5/083 ＡＥＤ (72)発明者 熊谷 和夫 兵庫県宝塚市高司４丁目２番１号 住友製 薬株式会社内 (72)発明者 細谷 宜生 兵庫県宝塚市高司４丁目２番１号 住友製 薬株式会社内

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（１） 【化１】 （式中、Ｒ¹ は、置換若しくは無置換のアシル基、置換
   若しくは無置換のアシル基でアシル化されたアミノ基を
   有するアミノ酸残基、又はアミノ基が保護基で保護され
   ていてもよいアミノ酸残基を示し、Ｒ² は水素原子又は
   炭素数１〜６のアルキル基を示し、Ｒ³ 及びＲ⁴ は、水
   素原子若しくは炭素数１〜６のアルキル基を示すか、又
   はＲ³ とＲ⁴ が共に一緒になってメチレン基を示す）で
   表わされる化合物からなるプロテアソーム阻害剤。
2. 【請求項２】 一般式（１）において、Ｒ¹ が置換若し
   くは無置換のアシル基であり、Ｒ² が水素原子であり、
   Ｒ³ とＲ⁴ は両者が共に一緒になってメチレン基を示
   す、請求項１記載のプロテアソーム阻害剤。
3. 【請求項３】 一般式（１）において、Ｒ¹ が置換若し
   くは無置換のアシル基でアシル化されたアミノ基を有す
   るアミノ酸残基、又はアミノ基が保護基で保護されてい
   てもよいアミノ酸残基であり、Ｒ² がメチル基であり、
   Ｒ³ 及びＲ⁴が水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基
   である、請求項１記載のプロテアソーム阻害剤。
4. 【請求項４】 請求項１〜３いずれかにおいて記載の一
   般式（１）で表わされる化合物を有効成分とする、プロ
   テアソームの作用亢進に起因する疾患の治療剤。
5. 【請求項５】 疾患が、自己免疫疾患、炎症性腸炎疾
   患、喘息、およびアルツハイマー病からなる群より選ば
   れる請求項４記載の治療剤。
6. 【請求項６】 自己免疫疾患が慢性関節リウマチである
   請求項５記載の治療剤。
7. 【請求項７】 一般式（２） 【化２】 （式中、Ｒ¹¹は、置換若しくは無置換のアシル基でアシ
   ル化されたアミノ基を有するアミノ酸残基、又はアミノ
   基が保護基で保護されていてもよいアミノ酸残基を示
   し、Ｒ¹²は水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示
   し、Ｒ¹³及びＲ¹⁴は、水素原子若しくは炭素数１〜６の
   アルキル基を示すか、又はＲ¹³とＲ¹⁴が共に一緒になっ
   てメチレン基を示す）で表わされる化合物。
8. 【請求項８】 一般式（２）において、Ｒ¹¹が置換若し
   くは無置換のアシル基でアシル化されたアミノ基を有す
   るアミノ酸残基、又はアミノ基が保護基で保護されてい
   てもよいアミノ酸残基であり、Ｒ¹²がメチル基であり、
   Ｒ¹³及びＲ¹⁴が水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基
   である、請求項７記載の化合物。
9. 【請求項９】 ２−（２−カルバモイル−プロピオニル
   −Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ）−１−ヒドロキシ−２，３
   −エポキシプロパン。