JPH1090273A - 抗トロンビンｉｉｉ含有溶液中のグリコサミノグリカンを定量する方法 - Google Patents
抗トロンビンｉｉｉ含有溶液中のグリコサミノグリカンを定量する方法Info
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- JPH1090273A JPH1090273A JP9220285A JP22028597A JPH1090273A JP H1090273 A JPH1090273 A JP H1090273A JP 9220285 A JP9220285 A JP 9220285A JP 22028597 A JP22028597 A JP 22028597A JP H1090273 A JPH1090273 A JP H1090273A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 抗トロンビンIII含有溶液中のグリコサミノ
グリカンを定量する方法を提供することを課題とする。 【解決手段】 ａ）抗トロンビンIII（ＡＴ III）とグ
リコサミノグリカンとの相互作用が阻害されるまでＡＴ
III含有溶液のイオン強度を増大させ、 ｂ）グリコサミノグリカンから遊離されたＡＴ IIIを溶
液から除去し、 ｃ）溶液中に残留するグリコサミノグリカンを脱塩し、
そして検出することを特徴とする抗トロンビンIII含有
溶液中のグリコサミノグリカンを測定する方法。 【効果】 本発明の測定法では、デキストラン硫酸を添
加する必要がなく、抗トロンビンIII含有溶液中のグリ
コサミノグリカン、特にヘパリンを簡便に定量すること
ができる。
グリカンを定量する方法を提供することを課題とする。 【解決手段】 ａ）抗トロンビンIII（ＡＴ III）とグ
リコサミノグリカンとの相互作用が阻害されるまでＡＴ
III含有溶液のイオン強度を増大させ、 ｂ）グリコサミノグリカンから遊離されたＡＴ IIIを溶
液から除去し、 ｃ）溶液中に残留するグリコサミノグリカンを脱塩し、
そして検出することを特徴とする抗トロンビンIII含有
溶液中のグリコサミノグリカンを測定する方法。 【効果】 本発明の測定法では、デキストラン硫酸を添
加する必要がなく、抗トロンビンIII含有溶液中のグリ
コサミノグリカン、特にヘパリンを簡便に定量すること
ができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、抗トロンビンIII
含有溶液およびその他のグリコサミノグリカン（ＧＡ
Ｇ）−結合タンパク質を含有する溶液中のグリコサミノ
グリカン例えばヘパリンの定量をすることができる方法
に関する。
含有溶液およびその他のグリコサミノグリカン（ＧＡ
Ｇ）−結合タンパク質を含有する溶液中のグリコサミノ
グリカン例えばヘパリンの定量をすることができる方法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】抗トロンビンIIIは、セリンプロテアー
ゼ阻害剤のファミリーに属するタンパク質である。例え
ばトロンビン、凝固因子Ｘａなどのようなプロテアーゼ
と複合体を形成することにより、ＡＴ IIIはこれらの酵
素のタンパク質分解活性を阻害する。阻害されたプロテ
アーゼの範囲に亘って、ＡＴ IIIは止血の調節に寄与し
ている。例えば、血管損傷と関連して、この阻害剤は凝
固因子の増大した阻害によって出血を停止させることが
でき、そして創傷の閉鎖（フィブリン、血小板）が起こ
ったときにはじめて活性化された凝固プロテアーゼの完
全な阻害が完結するものである。
ゼ阻害剤のファミリーに属するタンパク質である。例え
ばトロンビン、凝固因子Ｘａなどのようなプロテアーゼ
と複合体を形成することにより、ＡＴ IIIはこれらの酵
素のタンパク質分解活性を阻害する。阻害されたプロテ
アーゼの範囲に亘って、ＡＴ IIIは止血の調節に寄与し
ている。例えば、血管損傷と関連して、この阻害剤は凝
固因子の増大した阻害によって出血を停止させることが
でき、そして創傷の閉鎖（フィブリン、血小板）が起こ
ったときにはじめて活性化された凝固プロテアーゼの完
全な阻害が完結するものである。
【０００３】一方、ＡＴ IIIはグリコサミノグリカン類
（ＧＡＧｓ）によって例えば血管内皮に結合され、これ
によって血管壁における制御不能のフィブリン形成／血
栓形成を阻害する。これに関連して、ＧＡＧｓは受容体
としてのみならず、ＡＴ IIIとプロテアーゼとの反応を
促進する。このようなＡＴ IIIとヘパリンまたはヘパラ
ン硫酸との非共有結合による相互作用の結果として、例
えば阻害剤分子において配座の変化が生じ、これによっ
てプロテアーゼとの複合体の形成速度が増加される。簡
略化するために、この効果を「活性化」と称する。
（ＧＡＧｓ）によって例えば血管内皮に結合され、これ
によって血管壁における制御不能のフィブリン形成／血
栓形成を阻害する。これに関連して、ＧＡＧｓは受容体
としてのみならず、ＡＴ IIIとプロテアーゼとの反応を
促進する。このようなＡＴ IIIとヘパリンまたはヘパラ
ン硫酸との非共有結合による相互作用の結果として、例
えば阻害剤分子において配座の変化が生じ、これによっ
てプロテアーゼとの複合体の形成速度が増加される。簡
略化するために、この効果を「活性化」と称する。
【０００４】例えば血栓症予防のためにＧＡＧと考えら
れているヘパリンを投与することによるこのような促進
効果を治療に利用している。例えば、手術中／手術後に
頻発する凝固カスケードを活性化するときに、産生され
るプロテアーゼのいくつかはＡＴ III／ヘパリンにより
効率よくかつ迅速に阻害され、このために血栓形成の危
険性が低減されるものである。これとは対照的に、過量
のヘパリンを投与したときには、出血が起こり得るの
で、患者のヘパリン血漿レベルをモニターしなければな
らず、必要に応じて例えばプロタミンによる中和を行わ
なければならない。
れているヘパリンを投与することによるこのような促進
効果を治療に利用している。例えば、手術中／手術後に
頻発する凝固カスケードを活性化するときに、産生され
るプロテアーゼのいくつかはＡＴ III／ヘパリンにより
効率よくかつ迅速に阻害され、このために血栓形成の危
険性が低減されるものである。これとは対照的に、過量
のヘパリンを投与したときには、出血が起こり得るの
で、患者のヘパリン血漿レベルをモニターしなければな
らず、必要に応じて例えばプロタミンによる中和を行わ
なければならない。
【０００５】血漿中のヘパリン濃度を評価する方法が長
い間使用されてきた。これらの方法は、例えば、デキス
トラン硫酸（ＤＸＳ）を使用して、ＡＴ IIIまたはその
他のＧＡＧ結合タンパク質に部分的に結合しているヘパ
リンを結合から排除することに基づくものである。その
後の検出システムは、ヘパリンと対照的に、これらの濃
度におけるＤＸＳにより著しく影響されることはない。
これらの検出システムは次いでＤＸＳにより遊離された
ヘパリンを溶液に添加する一定量のＡＴ IIIと反応させ
ることに基づくものである。ＡＴ III／ヘパリンで阻害
されなかった添加プロテアーゼ例えばＸａの量を色素産
生基質を用いて光度計による測光で測定する。凝固測定
法もまた使用することができる。試料中のヘパリン量
は、ヘパリンを増加量で用いてプロットした標準曲線か
ら算出する。僅か０.５IU／mlまたは０.１IU／mlの感度
を有する適当な試験が利用可能であり、これらの試験は
治療上有意義でかつ重要なヘパリンレベルに対応してい
る。
い間使用されてきた。これらの方法は、例えば、デキス
トラン硫酸（ＤＸＳ）を使用して、ＡＴ IIIまたはその
他のＧＡＧ結合タンパク質に部分的に結合しているヘパ
リンを結合から排除することに基づくものである。その
後の検出システムは、ヘパリンと対照的に、これらの濃
度におけるＤＸＳにより著しく影響されることはない。
これらの検出システムは次いでＤＸＳにより遊離された
ヘパリンを溶液に添加する一定量のＡＴ IIIと反応させ
ることに基づくものである。ＡＴ III／ヘパリンで阻害
されなかった添加プロテアーゼ例えばＸａの量を色素産
生基質を用いて光度計による測光で測定する。凝固測定
法もまた使用することができる。試料中のヘパリン量
は、ヘパリンを増加量で用いてプロットした標準曲線か
ら算出する。僅か０.５IU／mlまたは０.１IU／mlの感度
を有する適当な試験が利用可能であり、これらの試験は
治療上有意義でかつ重要なヘパリンレベルに対応してい
る。
【０００６】これとは対照的に、抗トロンビンIII濃縮
物を例えば先天性または後天性ＡＴIII欠損症に罹って
いる患者に治療を目的として投与する。例えば、血漿フ
ラクションから多数のこのような調製物を精製するのに
固定化ヘパリンを使用するので、これらの濃縮物中のヘ
パリンを定量することに関心がもたれている。試験のた
めに、これらの濃縮物は、通常はごく小量でしか存在し
ないヘパリン量の検出または定量を可能とする目的で、
できるだけ濃縮された形態で使用しなければならない。
これに関連してＡＴ III濃度は２０IU／mlまたはそれ以
上のオーダー（ＡＴ III ３mg／mlまたはそれ以上に対
応する）であることが多いので、確定した試験システム
がＡＴ IIIの阻害ポテンシァルが増大することによって
簡単に混乱をきたし、それにより虚偽の結果が得られる
ことになる。このために、このような活性の増大を無視
し得るまで、濃縮物を希釈しなければならない。それ
で、このことは往々にして、ヘパリンの極微量を標準試
験法を用いてはもはや検出できないことを意味してい
る。比較目的で挙げると、試料中のヘパリン濃度の定量
に使用されている典型的な商業上の定量法には、ＡＴ I
II １IU／mlが含まれる。
物を例えば先天性または後天性ＡＴIII欠損症に罹って
いる患者に治療を目的として投与する。例えば、血漿フ
ラクションから多数のこのような調製物を精製するのに
固定化ヘパリンを使用するので、これらの濃縮物中のヘ
パリンを定量することに関心がもたれている。試験のた
めに、これらの濃縮物は、通常はごく小量でしか存在し
ないヘパリン量の検出または定量を可能とする目的で、
できるだけ濃縮された形態で使用しなければならない。
これに関連してＡＴ III濃度は２０IU／mlまたはそれ以
上のオーダー（ＡＴ III ３mg／mlまたはそれ以上に対
応する）であることが多いので、確定した試験システム
がＡＴ IIIの阻害ポテンシァルが増大することによって
簡単に混乱をきたし、それにより虚偽の結果が得られる
ことになる。このために、このような活性の増大を無視
し得るまで、濃縮物を希釈しなければならない。それ
で、このことは往々にして、ヘパリンの極微量を標準試
験法を用いてはもはや検出できないことを意味してい
る。比較目的で挙げると、試料中のヘパリン濃度の定量
に使用されている典型的な商業上の定量法には、ＡＴ I
II １IU／mlが含まれる。
【０００７】
【課題を解決するための手段】従って、本発明の目的
は、ＡＴ III含有溶液中のヘパリンを定量する方法であ
り、しかも当該溶液のＡＴ III濃度とは無関係の方法を
提供することにある。
は、ＡＴ III含有溶液中のヘパリンを定量する方法であ
り、しかも当該溶液のＡＴ III濃度とは無関係の方法を
提供することにある。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明の目的は次の如くして達成
される： １．ＡＴ III含有溶液のイオン強度を、ＡＴ IIIとヘパ
リンとの相互作用が阻害されるまで、またはヘパリンが
非共有結合から定量的に遊離されるまで、増大させる。
１５〜２５０mS、好ましくは２５〜１５０mSのイオン強
度を使用する。これらのイオン強度は例えばＮａＣｌの
ような塩の適当な量または非常に濃厚な原液の適当な量
を添加することによって得られる。通常の方法と比較し
て、本発明の方法ではＤＸＳを添加する必要がないとい
う利点が提供される。これはＡＴ III濃度が非常に高い
場合に特に有利である。それは、これらの場合、ＤＸＳ
を極端な量で添加しなければならず、これらの量が次の
検出システムを妨害するからである。
される： １．ＡＴ III含有溶液のイオン強度を、ＡＴ IIIとヘパ
リンとの相互作用が阻害されるまで、またはヘパリンが
非共有結合から定量的に遊離されるまで、増大させる。
１５〜２５０mS、好ましくは２５〜１５０mSのイオン強
度を使用する。これらのイオン強度は例えばＮａＣｌの
ような塩の適当な量または非常に濃厚な原液の適当な量
を添加することによって得られる。通常の方法と比較し
て、本発明の方法ではＤＸＳを添加する必要がないとい
う利点が提供される。これはＡＴ III濃度が非常に高い
場合に特に有利である。それは、これらの場合、ＤＸＳ
を極端な量で添加しなければならず、これらの量が次の
検出システムを妨害するからである。
【０００９】２．ＡＴ IIIは例えばＡＴ IIIに対するマ
トリックス結合抗体を用いて該溶液から除去される。好
ましい操作では、ＡＴ IIIは溶液から沈殿し、それから
例えば遠心分離または濾過によって分離される。同時
に、ヘパリンは上澄み中に定量的に残留する。沈殿は例
えば適当な量の硫酸アンモニウムを用いて実施すること
ができる。変性およびその次の分離には、酸特に好まし
くはトリクロロ酢酸（０.０５Ｍ〜飽和、好ましくは０.
５〜２Ｍ）を使用するのが好ましい。
トリックス結合抗体を用いて該溶液から除去される。好
ましい操作では、ＡＴ IIIは溶液から沈殿し、それから
例えば遠心分離または濾過によって分離される。同時
に、ヘパリンは上澄み中に定量的に残留する。沈殿は例
えば適当な量の硫酸アンモニウムを用いて実施すること
ができる。変性およびその次の分離には、酸特に好まし
くはトリクロロ酢酸（０.０５Ｍ〜飽和、好ましくは０.
５〜２Ｍ）を使用するのが好ましい。
【００１０】３．酸また塩の過剰量は例えば透析によっ
て低減され、これによりヘパリンの極微量が確実に検出
し得るために試料を甚だしく希釈しないようにするのが
肝要である。これらは時間を節減し、また標準化し易い
ので、所謂脱塩および塩交換カラムを使用するのが好ま
しく、またこれらのカラムはゲル濾過カラムとして当業
者に知られている。試料に対する希釈効果は大きいもの
ではない。
て低減され、これによりヘパリンの極微量が確実に検出
し得るために試料を甚だしく希釈しないようにするのが
肝要である。これらは時間を節減し、また標準化し易い
ので、所謂脱塩および塩交換カラムを使用するのが好ま
しく、またこれらのカラムはゲル濾過カラムとして当業
者に知られている。試料に対する希釈効果は大きいもの
ではない。
【００１１】４．得られたヘパリン含有溶液を適当な試
験システムで定量する。適当な試験システムは、例え
ば、一般にＧＡＧｓ（上記参照）の補因子活性に基づく
凝固測定または色素産生／蛍光発生定量法を意味するも
のと解される。測定すべきＧＡＧｓに対抗する抗体を用
いる例えばＥＬＩＳＡのような免疫化学的試験法もまた
使用できる。その他の適当な方法はクロマトグラフ技術
例えばＨＰＬＣまたは定量的電気泳動である。
験システムで定量する。適当な試験システムは、例え
ば、一般にＧＡＧｓ（上記参照）の補因子活性に基づく
凝固測定または色素産生／蛍光発生定量法を意味するも
のと解される。測定すべきＧＡＧｓに対抗する抗体を用
いる例えばＥＬＩＳＡのような免疫化学的試験法もまた
使用できる。その他の適当な方法はクロマトグラフ技術
例えばＨＰＬＣまたは定量的電気泳動である。
【００１２】本文に記載する方法はヘパリンに限定され
るものではなく、その他のＧＡＧｓ例えばヘパラン硫
酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸なども包含す
る。一方、ＡＴ III以外のタンパク質に結合しているＧ
ＡＧｓを測定するのにも使用できる。これらのタンパク
質の例には、ヘパリン補因子II、組織因子経路阻害剤、
プロテインＣ阻害剤または血小板第４因子があげられ
る。
るものではなく、その他のＧＡＧｓ例えばヘパラン硫
酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸なども包含す
る。一方、ＡＴ III以外のタンパク質に結合しているＧ
ＡＧｓを測定するのにも使用できる。これらのタンパク
質の例には、ヘパリン補因子II、組織因子経路阻害剤、
プロテインＣ阻害剤または血小板第４因子があげられ
る。
【００１３】
【実施例】次に実施例をあげて本発明の方法を明確に説
明する。異なった量のヘパリンをＡＴ III濃縮物に添加
した。１時間インキュベーションした後、溶液を次のと
おり処理した： １．結合されたヘパリンをＡＴ IIIとの複合体からＮａ
Ｃｌの添加によって遊離させた。 ２．トリクロロ酢酸を添加し、遠心分離することによ
り、ＡＴ IIIを除去した。 ３．上澄みを脱塩し、ＴＣＡをＮＰＡ−５ゲル濾過によ
って除去した。 ４．溶離液を色素発生定量法で試験し、標準曲線を用い
てヘパリン濃度を定量した。
明する。異なった量のヘパリンをＡＴ III濃縮物に添加
した。１時間インキュベーションした後、溶液を次のと
おり処理した： １．結合されたヘパリンをＡＴ IIIとの複合体からＮａ
Ｃｌの添加によって遊離させた。 ２．トリクロロ酢酸を添加し、遠心分離することによ
り、ＡＴ IIIを除去した。 ３．上澄みを脱塩し、ＴＣＡをＮＰＡ−５ゲル濾過によ
って除去した。 ４．溶離液を色素発生定量法で試験し、標準曲線を用い
てヘパリン濃度を定量した。
【００１４】抗トロンビンIII濃縮物（KyberninR P. Ce
nteon Pharma GmbH）を５０IU／mlの濃度となるように
溶解し、そしてアリコートにヘパリンを０、２０、５０
および８０mIU／mlで添加した。１時間インキュベーシ
ョンした後、５Ｍ ＮａＣｌの０.１mlを各試料０.４ml
に加え、それから混合物を２５℃で３０分間インキュベ
ートした。次に、各々の事例でトリクロロ酢酸１Ｍ溶液
の０.３mlを加え、混合物を氷浴中で５分間インキュベ
ートした。２分間遠心分離した後、上澄み（各事例０.
５ml）をＮＰＡ−５カラム（Pharmacia Biotech GmbHか
ら入手）でクロマトグラフィー処理し、溶離液を集め
た。
nteon Pharma GmbH）を５０IU／mlの濃度となるように
溶解し、そしてアリコートにヘパリンを０、２０、５０
および８０mIU／mlで添加した。１時間インキュベーシ
ョンした後、５Ｍ ＮａＣｌの０.１mlを各試料０.４ml
に加え、それから混合物を２５℃で３０分間インキュベ
ートした。次に、各々の事例でトリクロロ酢酸１Ｍ溶液
の０.３mlを加え、混合物を氷浴中で５分間インキュベ
ートした。２分間遠心分離した後、上澄み（各事例０.
５ml）をＮＰＡ−５カラム（Pharmacia Biotech GmbHか
ら入手）でクロマトグラフィー処理し、溶離液を集め
た。
【００１５】ヘパリンは次の如くして定量した： 試料または標準品（ヘパリン）０.０５ml ＡＴ III試薬（ＡＴ III ０.２５IU／ml、１００mMトリ
ス／ＨＣｌ、pH７.５で希釈、５０mM ＮａＣｌ）０.０
５ml ２５℃で１０分間インキュベーション ＦＸａ試薬（Behring Diagnostics；OWLG）０.０５ml ２５℃で３分間インキュベーション ＦＸａ基質（Behring Diagnostics；OWLH）０.０５ml ２５℃で２５分間インキュベーション ５０％酢酸 ０.０５ml
ス／ＨＣｌ、pH７.５で希釈、５０mM ＮａＣｌ）０.０
５ml ２５℃で１０分間インキュベーション ＦＸａ試薬（Behring Diagnostics；OWLG）０.０５ml ２５℃で３分間インキュベーション ＦＸａ基質（Behring Diagnostics；OWLH）０.０５ml ２５℃で２５分間インキュベーション ５０％酢酸 ０.０５ml
【００１６】ＯＤ405nmで測定および用意しておいたヘ
パリン標準曲線を用いる評価 ヘパリン標準曲線は０〜２００mIU／ml（ヘパリンの０
／３.１２５／６.２５／１２.５／２５／５０／１００
／２００mIU／ml）の濃度範囲で作成した。濃度を△Ｏ
Ｄに対してプロットし、そしてこの曲線を用いてヘパリ
ン濃度を算出した。各事例について、これらの測定を３
日間連続して実施した。
パリン標準曲線を用いる評価 ヘパリン標準曲線は０〜２００mIU／ml（ヘパリンの０
／３.１２５／６.２５／１２.５／２５／５０／１００
／２００mIU／ml）の濃度範囲で作成した。濃度を△Ｏ
Ｄに対してプロットし、そしてこの曲線を用いてヘパリ
ン濃度を算出した。各事例について、これらの測定を３
日間連続して実施した。
【００１７】結果：
【表１】
Claims (5)
- 【請求項１】 ａ）抗トロンビンIII（ＡＴ III）とグ
リコサミノグリカンとの相互作用が阻害されるまでＡＴ
III含有溶液のイオン強度を増大させ、 ｂ）グリコサミノグリカンから遊離されたＡＴ IIIを溶
液から除去し、 ｃ）溶液中に残留するグリコサミノグリカンを脱塩し、
そして検出することを特徴とする抗トロンビンIII含有
溶液中のグリコサミノグリカンを測定する方法。 - 【請求項２】 イオン強度を１５mSと２５０mSとの間に
調節する請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 ＡＴ IIIを酸沈殿によって除去する請求
項１または２に記載の方法。 - 【請求項４】 脱塩をゲル濾過によって実施する請求項
１〜３に記載の方法。 - 【請求項５】 グリコサミノグリカンがヘパリンである
請求項１〜４に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19633214:1 | 1996-08-17 | ||
| DE19633214 | 1996-08-17 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1090273A true JPH1090273A (ja) | 1998-04-10 |
Family
ID=7802907
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9220285A Abandoned JPH1090273A (ja) | 1996-08-17 | 1997-08-15 | 抗トロンビンｉｉｉ含有溶液中のグリコサミノグリカンを定量する方法 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6117647A (ja) |
| EP (1) | EP0825443B1 (ja) |
| JP (1) | JPH1090273A (ja) |
| KR (1) | KR100452014B1 (ja) |
| AT (1) | ATE200580T1 (ja) |
| AU (1) | AU715808B2 (ja) |
| CA (1) | CA2213166A1 (ja) |
| DE (1) | DE59703340D1 (ja) |
| DK (1) | DK0825443T3 (ja) |
| ES (1) | ES2155954T3 (ja) |
| GR (1) | GR3035991T3 (ja) |
| PT (1) | PT825443E (ja) |
Families Citing this family (4)
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|---|---|---|---|---|
| US9029530B2 (en) | 2009-01-02 | 2015-05-12 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Detection of oligosaccharides |
| US8809009B2 (en) | 2009-01-02 | 2014-08-19 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Methods of diagnosing a disease and methods of monitoring treatment of a disease by quantifying a non-reducing end glycan residual compound and comparing to a second biomarker |
| US8232073B2 (en) | 2009-01-02 | 2012-07-31 | Zacharon Pharmaceuticals, Inc. | Quantification of non-reducing end glycan residual compounds |
| WO2010078515A2 (en) * | 2009-01-02 | 2010-07-08 | Zacharon Pharmaceuticals, Inc. | Polymer end group detection |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE64470T1 (de) * | 1985-09-05 | 1991-06-15 | E Thye Yin | Verfahren und zusammensetzungen zur bestimmung von heparin. |
| GB8913183D0 (en) * | 1989-06-08 | 1989-07-26 | Central Blood Lab Authority | Chemical products |
| US5320945A (en) * | 1989-07-14 | 1994-06-14 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method and reagent for the determination of antithrombin III |
| DE3923340A1 (de) * | 1989-07-14 | 1991-01-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von antithrombin iii |
| JPH0694713A (ja) * | 1991-07-31 | 1994-04-08 | Masashi Funayama | アンチトロンビンｉｉｉ活性の測定方法とそれを用いたアンチトロンビンｉｉｉ活性の測定キット |
| JPH078298A (ja) * | 1993-06-28 | 1995-01-13 | Nippon Shoji Kk | アンチトロンビンｉｉｉ活性の測定方法および該測定用試薬キット |
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1997
- 1997-07-12 ES ES97111880T patent/ES2155954T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-12 AT AT97111880T patent/ATE200580T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-07-12 DE DE59703340T patent/DE59703340D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-12 EP EP97111880A patent/EP0825443B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-12 DK DK97111880T patent/DK0825443T3/da active
- 1997-07-12 PT PT97111880T patent/PT825443E/pt unknown
- 1997-08-13 US US08/910,121 patent/US6117647A/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-08-15 CA CA002213166A patent/CA2213166A1/en not_active Abandoned
- 1997-08-15 AU AU34196/97A patent/AU715808B2/en not_active Ceased
- 1997-08-15 JP JP9220285A patent/JPH1090273A/ja not_active Abandoned
- 1997-08-16 KR KR1019970039077A patent/KR100452014B1/ko not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-06-06 GR GR20010400844T patent/GR3035991T3/el not_active IP Right Cessation
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
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| GR3035991T3 (en) | 2001-09-28 |
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| ATE200580T1 (de) | 2001-04-15 |
| KR19980018719A (ko) | 1998-06-05 |
| DK0825443T3 (da) | 2001-08-06 |
| US6117647A (en) | 2000-09-12 |
| AU715808B2 (en) | 2000-02-10 |
| PT825443E (pt) | 2001-08-30 |
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|---|---|---|---|
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20040811 |
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A762 Effective date: 20041130 |