JPH10304886A - ビオチン生合成遺伝子を含むｄｎａ断片およびその利用 - Google Patents
ビオチン生合成遺伝子を含むｄｎａ断片およびその利用Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】スフィンゴモナス属に属する微生物由来のビオ
チン生合成に関与する遺伝子をビオチン生産微生物の遺
伝子工学的育種に利用する技術を提供する。 【解決手段】スフィンゴモナス属に属する微生物由来の
ビオチン生合成に関与する遺伝子を含むことを特徴とす
るDNA断片、該DNA断片を含むプラスミド、該プラスミド
を含むビオチン生産形質転換体、等。
チン生合成に関与する遺伝子をビオチン生産微生物の遺
伝子工学的育種に利用する技術を提供する。 【解決手段】スフィンゴモナス属に属する微生物由来の
ビオチン生合成に関与する遺伝子を含むことを特徴とす
るDNA断片、該DNA断片を含むプラスミド、該プラスミド
を含むビオチン生産形質転換体、等。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はビオチン生合成に関
与する遺伝子を含むDNA断片およびその利用に関する。
与する遺伝子を含むDNA断片およびその利用に関する。
【０００２】
【従来の技術】ビオチンはヒト、動植物やある種の微生
物に必要とされるビタミンの一つであり、ヒトや動物用
の食品添加物として有用である。従来、微生物を用いた
ビオチンの製造方法としては、ストレプトマイセス（St
reptomyces）属、ミクロモノスポア（Micromonospore）
属を用いる方法（特公昭41-21756号）、スポロボロマイ
セス（Sporobolomyces）属を用いる方法（特公昭42-307
4号）、バシルス（Bacillus ）属、クロモバクテリウム
（Chromobacterium）属、シュードモナス(Pseudomonas)
属を用いる方法（特開昭56-160998号）、スフィンゴモ
ナス（Sphingomonas）属を用いる方法（特開平6-13379
0）などが知られている。また、遺伝子工学的技術を用
いて、ビオチン生産能力を有する微生物から単離された
ビオチン生合成に関与する遺伝子を微生物に導入してビ
オチン生合成に関与する遺伝子の発現量を増大させるこ
とにより、ビオチン生合成反応を触媒する酵素の活性を
増大させ、ビオチン生産能を向上させる微生物の育種方
法も提案されている（特開昭61-202686、特開平2-2798
0、特開平7-231789等）。
物に必要とされるビタミンの一つであり、ヒトや動物用
の食品添加物として有用である。従来、微生物を用いた
ビオチンの製造方法としては、ストレプトマイセス（St
reptomyces）属、ミクロモノスポア（Micromonospore）
属を用いる方法（特公昭41-21756号）、スポロボロマイ
セス（Sporobolomyces）属を用いる方法（特公昭42-307
4号）、バシルス（Bacillus ）属、クロモバクテリウム
（Chromobacterium）属、シュードモナス(Pseudomonas)
属を用いる方法（特開昭56-160998号）、スフィンゴモ
ナス（Sphingomonas）属を用いる方法（特開平6-13379
0）などが知られている。また、遺伝子工学的技術を用
いて、ビオチン生産能力を有する微生物から単離された
ビオチン生合成に関与する遺伝子を微生物に導入してビ
オチン生合成に関与する遺伝子の発現量を増大させるこ
とにより、ビオチン生合成反応を触媒する酵素の活性を
増大させ、ビオチン生産能を向上させる微生物の育種方
法も提案されている（特開昭61-202686、特開平2-2798
0、特開平7-231789等）。
【０００３】微生物細胞内でのビオチンの生合成に関与
する遺伝子としては、エシェリヒア・コリ由来のbio
A、bio B、bio F、bio D、bio C、bio H 遺伝子が知ら
れている（Journal of Biological Chemistry ，vol.26
3 ，19577-19585(1988)）。bioA 遺伝子とは7,8-ジアミ
ノペラルゴン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有する
酵素をコードする遺伝子、bio B 遺伝子とはビオチンシ
ンターゼ活性を有する酵素をコードする遺伝子、bio F
遺伝子とは7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテターゼ
活性を有する酵素をコードする遺伝子、bio D 遺伝子と
はデスチオビオチンシンテターゼ活性を有する酵素をコ
ードする遺伝子、bio C 遺伝子とはビオチン生合成経路
の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階に関与する遺
伝子であり、bio H 遺伝子についてはその働きは明らか
でない。エシェリヒア・コリにおける生合成経路では、
細胞内のピメリルCo-Aが7-ケト-8-アミノペラルゴン酸
シンテターゼによって7-ケト-8-アミノペラルゴン酸に
変換され、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸は7,8-ジアミ
ノペラルゴン酸アミノトランスフェラーゼによってジア
ミノペラルゴン酸に変換され、ジアミノペラルゴン酸は
デスチオビオチンシンテターゼによってデスチオビオチ
ンに変換され、デスチオビオチンはビオチンシンターゼ
によってビオチンに変換されることによって、ビオチン
が合成される。また、bio C 遺伝子を欠失するとビオチ
ンの生成量が減少することから、該遺伝子はピメリルCo
-Aより上流の生合成段階の反応を触媒する活性を有する
酵素の遺伝子であると考えられている（発酵と工業，4
6,102〜111,(1988)）。エシェリヒア・コリ由来の bio
A、bio B、bio F、bio D、bio C、bio H 遺伝子の塩基
配列は既に特定されており、また、bio A、bio B、bio
F、bio D、bio C遺伝子はオペロンを形成しており一つ
のオペレーターによって転写の制御を受けていることが
知られている。また、エシェリヒア・コリ属以外の属に
属する微生物に由来するビオチン生合成に関与する遺伝
子としては、セラチア・マルセッセンス由来の遺伝子
（GenBank database , accession No.D17468）、バシラ
ス・サブチリス由来の遺伝子（特開平7-231789）が報告
されており、その塩基配列がそれぞれ特定されている。
これら遺伝子の塩基配列はエシェリヒア・コリのそれと
は異なるものの、その遺伝子産物の機能やビオチンの生
合成経路はほぼエシェリヒア・コリと同様であることが
わかっている。一方、バシラス・スファエリカス由来の
ビオチン生合成に関与する遺伝子が報告されている（Oh
sawa et al., Gene 80, 39-48(1989)、Gloeckler et a
l., Gene 87, 63-70(1990)）。バシラス・スファエリカ
スでは、ピメリルCo-Aより上流の生合成段階に関与する
遺伝子、bio遺伝子の順序およびクラスター化等がエシ
ェリヒア・コリとは異なる（Gloeckler et al., Gene 8
7, 63-70(1990)）。
する遺伝子としては、エシェリヒア・コリ由来のbio
A、bio B、bio F、bio D、bio C、bio H 遺伝子が知ら
れている（Journal of Biological Chemistry ，vol.26
3 ，19577-19585(1988)）。bioA 遺伝子とは7,8-ジアミ
ノペラルゴン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有する
酵素をコードする遺伝子、bio B 遺伝子とはビオチンシ
ンターゼ活性を有する酵素をコードする遺伝子、bio F
遺伝子とは7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテターゼ
活性を有する酵素をコードする遺伝子、bio D 遺伝子と
はデスチオビオチンシンテターゼ活性を有する酵素をコ
ードする遺伝子、bio C 遺伝子とはビオチン生合成経路
の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階に関与する遺
伝子であり、bio H 遺伝子についてはその働きは明らか
でない。エシェリヒア・コリにおける生合成経路では、
細胞内のピメリルCo-Aが7-ケト-8-アミノペラルゴン酸
シンテターゼによって7-ケト-8-アミノペラルゴン酸に
変換され、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸は7,8-ジアミ
ノペラルゴン酸アミノトランスフェラーゼによってジア
ミノペラルゴン酸に変換され、ジアミノペラルゴン酸は
デスチオビオチンシンテターゼによってデスチオビオチ
ンに変換され、デスチオビオチンはビオチンシンターゼ
によってビオチンに変換されることによって、ビオチン
が合成される。また、bio C 遺伝子を欠失するとビオチ
ンの生成量が減少することから、該遺伝子はピメリルCo
-Aより上流の生合成段階の反応を触媒する活性を有する
酵素の遺伝子であると考えられている（発酵と工業，4
6,102〜111,(1988)）。エシェリヒア・コリ由来の bio
A、bio B、bio F、bio D、bio C、bio H 遺伝子の塩基
配列は既に特定されており、また、bio A、bio B、bio
F、bio D、bio C遺伝子はオペロンを形成しており一つ
のオペレーターによって転写の制御を受けていることが
知られている。また、エシェリヒア・コリ属以外の属に
属する微生物に由来するビオチン生合成に関与する遺伝
子としては、セラチア・マルセッセンス由来の遺伝子
（GenBank database , accession No.D17468）、バシラ
ス・サブチリス由来の遺伝子（特開平7-231789）が報告
されており、その塩基配列がそれぞれ特定されている。
これら遺伝子の塩基配列はエシェリヒア・コリのそれと
は異なるものの、その遺伝子産物の機能やビオチンの生
合成経路はほぼエシェリヒア・コリと同様であることが
わかっている。一方、バシラス・スファエリカス由来の
ビオチン生合成に関与する遺伝子が報告されている（Oh
sawa et al., Gene 80, 39-48(1989)、Gloeckler et a
l., Gene 87, 63-70(1990)）。バシラス・スファエリカ
スでは、ピメリルCo-Aより上流の生合成段階に関与する
遺伝子、bio遺伝子の順序およびクラスター化等がエシ
ェリヒア・コリとは異なる（Gloeckler et al., Gene 8
7, 63-70(1990)）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしこれまでに、ス
フィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチン生合成
に関与する遺伝子については塩基配列や遺伝子産物の機
能はもとよりその構成も全く知られておらず、そのため
スフィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチン生合
成に関与する遺伝子をビオチン生産微生物の遺伝子工学
的育種に利用する技術は存在しなかった。
フィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチン生合成
に関与する遺伝子については塩基配列や遺伝子産物の機
能はもとよりその構成も全く知られておらず、そのため
スフィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチン生合
成に関与する遺伝子をビオチン生産微生物の遺伝子工学
的育種に利用する技術は存在しなかった。
【０００５】
【課題を解決するための手段】このような状況の下、本
発明者らは鋭意検討を行った結果、スフィンゴモナス属
に属する微生物からビオチン生合成に関与する遺伝子を
含むDNA断片を単離し、これをベクターに組み込んで宿
主生物に導入することにより、ビオチンまたはビオチン
前駆体の生産に用いるための形質転換体の創製が可能な
ことを見出し、本発明に至った。即ち、本発明は、 １）スフィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチン
生合成に関与する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断
片、 ２）遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテタ
ーゼ遺伝子、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミノトランス
フェラーゼ遺伝子、デスチオビオチンシンテターゼ遺伝
子、ビオチンシンターゼ遺伝子、ビオチン生合成経路の
中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応を触媒す
る活性を有する酵素の遺伝子、からなる群から1以上選
ばれることを特徴とする前項１記載のDNA断片、 ３）遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテタ
ーゼをコードする遺伝子であることを特徴とする前項１
記載のDNA断片、 ４）配列番号１に示されるアミノ酸配列、または、配列
番号１に示されるアミノ酸配列において１もしくは複数
個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加された
アミノ酸配列を有し、かつ7-ケト-8-アミノペラルゴン
酸シンテターゼ活性を有するタンパク質をコードする遺
伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 ５）配列番号２に示されるアミノ酸配列、または、配列
番号２に示されるアミノ酸配列において１もしくは複数
個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加された
アミノ酸配列を有し、かつ7-ケト-8-アミノペラルゴン
酸シンテターゼ活性を有するタンパク質をコードする遺
伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 ６）配列番号３、４、または５に示される塩基配列を有
する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 ７）遺伝子が、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミノトラン
スフェラーゼをコードする遺伝子であることを特徴とす
る前項１記載のDNA断片、 ８）配列番号６に示されるアミノ酸配列、または、配列
番号６に示されるアミノ酸配列において１もしくは複数
個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加された
アミノ酸配列を有し、かつ7,8-ジアミノペラルゴン酸ア
ミノトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質をコー
ドする遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 ９）配列番号７に示されるアミノ酸配列、または、配列
番号７に示されるアミノ酸配列において１もしくは複数
個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加された
アミノ酸配列を有し、かつ7,8-ジアミノペラルゴン酸ア
ミノトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質をコー
ドする遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 １０）配列番号８または９に示される塩基配列を有する
遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 １１）遺伝子が、デスチオビオチンシンテターゼをコー
ドする遺伝子であることを特徴とする前項１記載のDNA
断片、 １２）配列番号１０に示されるアミノ酸配列、または、
配列番号１０に示されるアミノ酸配列において１もしく
は複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加
されたアミノ酸配列を有し、かつデスチオビオチンシン
テターゼ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を
含むことを特徴とするDNA断片、 １３）配列番号１１示されるアミノ酸配列、または、配
列番号１１示されるアミノ酸配列において１もしくは複
数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加され
たアミノ酸配列を有し、かつデスチオビオチンシンテタ
ーゼ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む
ことを特徴とするDNA断片、 １４）配列番号１２または１３に示される塩基配列を有
する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 １５）遺伝子が、ビオチンシンターゼをコードする遺伝
子であることを特徴とする前項１記載のDNA断片、 １６）配列番号１４に示されるアミノ酸配列、または、
配列番号１４に示されるアミノ酸配列において１もしく
は複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加
されたアミノ酸配列を有し、かつビオチンシンターゼ活
性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含むことを
特徴とするDNA断片、 １７）配列番号１５に示されるアミノ酸配列、または、
配列番号１５に示されるアミノ酸配列において１もしく
は複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加
されたアミノ酸配列を有し、かつビオチンシンターゼ活
性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含むことを
特徴とするDNA断片、 １８）配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、か
つビオチンシンターゼ活性を有するタンパク質をコード
する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 １９）配列番号１６、１７、または１９に示される塩基
配列を有する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 ２０）遺伝子が、ビオチン生合成経路の中でピメリルCo
-Aより上流の生合成段階の反応を触媒する活性を有する
酵素をコードする遺伝子であることを特徴とする前項１
記載のDNA断片、 ２１）配列番号２０に示されるアミノ酸配列、または、
配列番号２０に示されるアミノ酸配列において１もしく
は複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加
されたアミノ酸配列を有し、かつビオチン生合成経路の
中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応を触媒す
る活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含むこ
とを特徴とするDNA断片、 ２２）配列番号２１に示されるアミノ酸配列、または、
配列番号２１に示されるアミノ酸配列において１もしく
は複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加
されたアミノ酸配列を有し、かつビオチン生合成経路の
中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応を触媒す
る活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含むこ
とを特徴とするDNA断片、 ２３）配列番号２２または２３に示される塩基配列を有
する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 ２４）スフィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチ
ン生合成に関与する遺伝子の部分塩基配列を有すること
を特徴とするDNA断片、 ２５）遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテ
ターゼ遺伝子、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミノトラン
スフェラーゼ遺伝子、デスチオビオチンシンテターゼ遺
伝子、ビオチンシンターゼ遺伝子、またはビオチン生合
成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応
を触媒する活性を有する酵素の遺伝子であることを特徴
とする前項２４記載のDNA断片、 ２６）スフィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチ
ン生合成に関与する遺伝子の、タンパク質をコードする
領域からなることを特徴とするDNA断片、 ２７）遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテ
ターゼ遺伝子、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミノトラン
スフェラーゼ遺伝子、デスチオビオチンシンテターゼ遺
伝子、ビオチンシンターゼ遺伝子、またはビオチン生合
成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応
を触媒する活性を有する酵素の遺伝子であることを特徴
とする前項２６記載のDNA断片、 ２８）スフィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチ
ン生合成に関与する遺伝子の、タンパク質をコードする
領域の上流に位置する遺伝子発現制御領域からなること
を特徴とするDNA断片、 ２９）遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテ
ターゼ遺伝子、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミノトラン
スフェラーゼ遺伝子、デスチオビオチンシンテターゼ遺
伝子、ビオチンシンターゼ遺伝子、またはビオチン生合
成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応
を触媒する活性を有する酵素の遺伝子であることを特徴
とする前項２８記載のDNA断片、 ３０）配列番号２４または２５に示される塩基配列を有
することを特徴とするDNA断片、 ３１）スフィンゴモナス属に属する微生物がスフィンゴ
モナス・ポウシモビルス（Sphingomonas paucimobili
s）JCM7511またはスフィンゴモナス・エスピー（Sphing
omonas sp.）SC42405であることを特徴とする前項１、
２、３、７、１１、１５、２０、２４、２５、２６、２
７、２８、または２９記載のDNA断片、 ３２）前項１〜３１記載のDNA断片を含むことを特徴と
するベクター。 ３３）前項１〜３１記載のDNA断片を宿主細胞内で複製
可能なベクターに挿入することを特徴とするベクターの
作製方法、 ３４）タンパク質をコードする領域の上流に遺伝子発現
制御領域が結合されてなることを特徴とする前項３２記
載のベクター、 ３５）前項１〜３１記載のDNA断片、または前項３２も
しくは３４記載のベクターが少なくとも１つ宿主細胞中
に導入されてなることを特徴とする形質転換体、 ３６）宿主細胞が微生物であることを特徴とする前項３
５記載の形質転換体、 ３７）前項３２または３４記載のベクターを宿主細胞に
導入することを特徴とする形質転換体の作製方法、を提
供するものである。
発明者らは鋭意検討を行った結果、スフィンゴモナス属
に属する微生物からビオチン生合成に関与する遺伝子を
含むDNA断片を単離し、これをベクターに組み込んで宿
主生物に導入することにより、ビオチンまたはビオチン
前駆体の生産に用いるための形質転換体の創製が可能な
ことを見出し、本発明に至った。即ち、本発明は、 １）スフィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチン
生合成に関与する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断
片、 ２）遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテタ
ーゼ遺伝子、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミノトランス
フェラーゼ遺伝子、デスチオビオチンシンテターゼ遺伝
子、ビオチンシンターゼ遺伝子、ビオチン生合成経路の
中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応を触媒す
る活性を有する酵素の遺伝子、からなる群から1以上選
ばれることを特徴とする前項１記載のDNA断片、 ３）遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテタ
ーゼをコードする遺伝子であることを特徴とする前項１
記載のDNA断片、 ４）配列番号１に示されるアミノ酸配列、または、配列
番号１に示されるアミノ酸配列において１もしくは複数
個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加された
アミノ酸配列を有し、かつ7-ケト-8-アミノペラルゴン
酸シンテターゼ活性を有するタンパク質をコードする遺
伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 ５）配列番号２に示されるアミノ酸配列、または、配列
番号２に示されるアミノ酸配列において１もしくは複数
個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加された
アミノ酸配列を有し、かつ7-ケト-8-アミノペラルゴン
酸シンテターゼ活性を有するタンパク質をコードする遺
伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 ６）配列番号３、４、または５に示される塩基配列を有
する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 ７）遺伝子が、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミノトラン
スフェラーゼをコードする遺伝子であることを特徴とす
る前項１記載のDNA断片、 ８）配列番号６に示されるアミノ酸配列、または、配列
番号６に示されるアミノ酸配列において１もしくは複数
個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加された
アミノ酸配列を有し、かつ7,8-ジアミノペラルゴン酸ア
ミノトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質をコー
ドする遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 ９）配列番号７に示されるアミノ酸配列、または、配列
番号７に示されるアミノ酸配列において１もしくは複数
個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加された
アミノ酸配列を有し、かつ7,8-ジアミノペラルゴン酸ア
ミノトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質をコー
ドする遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 １０）配列番号８または９に示される塩基配列を有する
遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 １１）遺伝子が、デスチオビオチンシンテターゼをコー
ドする遺伝子であることを特徴とする前項１記載のDNA
断片、 １２）配列番号１０に示されるアミノ酸配列、または、
配列番号１０に示されるアミノ酸配列において１もしく
は複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加
されたアミノ酸配列を有し、かつデスチオビオチンシン
テターゼ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を
含むことを特徴とするDNA断片、 １３）配列番号１１示されるアミノ酸配列、または、配
列番号１１示されるアミノ酸配列において１もしくは複
数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加され
たアミノ酸配列を有し、かつデスチオビオチンシンテタ
ーゼ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含む
ことを特徴とするDNA断片、 １４）配列番号１２または１３に示される塩基配列を有
する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 １５）遺伝子が、ビオチンシンターゼをコードする遺伝
子であることを特徴とする前項１記載のDNA断片、 １６）配列番号１４に示されるアミノ酸配列、または、
配列番号１４に示されるアミノ酸配列において１もしく
は複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加
されたアミノ酸配列を有し、かつビオチンシンターゼ活
性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含むことを
特徴とするDNA断片、 １７）配列番号１５に示されるアミノ酸配列、または、
配列番号１５に示されるアミノ酸配列において１もしく
は複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加
されたアミノ酸配列を有し、かつビオチンシンターゼ活
性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含むことを
特徴とするDNA断片、 １８）配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有し、か
つビオチンシンターゼ活性を有するタンパク質をコード
する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 １９）配列番号１６、１７、または１９に示される塩基
配列を有する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 ２０）遺伝子が、ビオチン生合成経路の中でピメリルCo
-Aより上流の生合成段階の反応を触媒する活性を有する
酵素をコードする遺伝子であることを特徴とする前項１
記載のDNA断片、 ２１）配列番号２０に示されるアミノ酸配列、または、
配列番号２０に示されるアミノ酸配列において１もしく
は複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加
されたアミノ酸配列を有し、かつビオチン生合成経路の
中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応を触媒す
る活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含むこ
とを特徴とするDNA断片、 ２２）配列番号２１に示されるアミノ酸配列、または、
配列番号２１に示されるアミノ酸配列において１もしく
は複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加
されたアミノ酸配列を有し、かつビオチン生合成経路の
中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応を触媒す
る活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含むこ
とを特徴とするDNA断片、 ２３）配列番号２２または２３に示される塩基配列を有
する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片、 ２４）スフィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチ
ン生合成に関与する遺伝子の部分塩基配列を有すること
を特徴とするDNA断片、 ２５）遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテ
ターゼ遺伝子、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミノトラン
スフェラーゼ遺伝子、デスチオビオチンシンテターゼ遺
伝子、ビオチンシンターゼ遺伝子、またはビオチン生合
成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応
を触媒する活性を有する酵素の遺伝子であることを特徴
とする前項２４記載のDNA断片、 ２６）スフィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチ
ン生合成に関与する遺伝子の、タンパク質をコードする
領域からなることを特徴とするDNA断片、 ２７）遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテ
ターゼ遺伝子、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミノトラン
スフェラーゼ遺伝子、デスチオビオチンシンテターゼ遺
伝子、ビオチンシンターゼ遺伝子、またはビオチン生合
成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応
を触媒する活性を有する酵素の遺伝子であることを特徴
とする前項２６記載のDNA断片、 ２８）スフィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチ
ン生合成に関与する遺伝子の、タンパク質をコードする
領域の上流に位置する遺伝子発現制御領域からなること
を特徴とするDNA断片、 ２９）遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテ
ターゼ遺伝子、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミノトラン
スフェラーゼ遺伝子、デスチオビオチンシンテターゼ遺
伝子、ビオチンシンターゼ遺伝子、またはビオチン生合
成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応
を触媒する活性を有する酵素の遺伝子であることを特徴
とする前項２８記載のDNA断片、 ３０）配列番号２４または２５に示される塩基配列を有
することを特徴とするDNA断片、 ３１）スフィンゴモナス属に属する微生物がスフィンゴ
モナス・ポウシモビルス（Sphingomonas paucimobili
s）JCM7511またはスフィンゴモナス・エスピー（Sphing
omonas sp.）SC42405であることを特徴とする前項１、
２、３、７、１１、１５、２０、２４、２５、２６、２
７、２８、または２９記載のDNA断片、 ３２）前項１〜３１記載のDNA断片を含むことを特徴と
するベクター。 ３３）前項１〜３１記載のDNA断片を宿主細胞内で複製
可能なベクターに挿入することを特徴とするベクターの
作製方法、 ３４）タンパク質をコードする領域の上流に遺伝子発現
制御領域が結合されてなることを特徴とする前項３２記
載のベクター、 ３５）前項１〜３１記載のDNA断片、または前項３２も
しくは３４記載のベクターが少なくとも１つ宿主細胞中
に導入されてなることを特徴とする形質転換体、 ３６）宿主細胞が微生物であることを特徴とする前項３
５記載の形質転換体、 ３７）前項３２または３４記載のベクターを宿主細胞に
導入することを特徴とする形質転換体の作製方法、を提
供するものである。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下、本発明をさらに詳細に説明
する。本発明においてスフィンゴモナス属に属する微生
物由来のビオチン生合成に関与する遺伝子とは、スフィ
ンゴモナス属に属する微生物細胞内でビオチン生合成に
関わる酵素の遺伝子のことであり、例えば、7-ケト-8-
アミノペラルゴン酸シンテターゼ遺伝子（以下、本発明
bio F遺伝子と記す。）、7,8-ジアミノペラルゴン酸ア
ミノトランスフェラーゼ遺伝子（以下、本発明bio A遺
伝子と記す。）、デスチオビオチンシンテターゼ遺伝子
（以下、本発明bio D伝子と記す。）、ビオチンシンタ
ーゼ遺伝子（以下、本発明bio B伝子と記す。）、ビオ
チン生合成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段
階の反応を触媒する活性を有する酵素遺伝子（以下、本
発明bio C遺伝子と記す。）などがあげられる。
する。本発明においてスフィンゴモナス属に属する微生
物由来のビオチン生合成に関与する遺伝子とは、スフィ
ンゴモナス属に属する微生物細胞内でビオチン生合成に
関わる酵素の遺伝子のことであり、例えば、7-ケト-8-
アミノペラルゴン酸シンテターゼ遺伝子（以下、本発明
bio F遺伝子と記す。）、7,8-ジアミノペラルゴン酸ア
ミノトランスフェラーゼ遺伝子（以下、本発明bio A遺
伝子と記す。）、デスチオビオチンシンテターゼ遺伝子
（以下、本発明bio D伝子と記す。）、ビオチンシンタ
ーゼ遺伝子（以下、本発明bio B伝子と記す。）、ビオ
チン生合成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段
階の反応を触媒する活性を有する酵素遺伝子（以下、本
発明bio C遺伝子と記す。）などがあげられる。
【０００７】本発明bio F遺伝子としては、例えば、ス
フィンゴモナス属に属する微生物由来の7-ケト-8-アミ
ノペラルゴン酸シンテターゼをコードする約1.１〜1.2
kbpの領域を含む遺伝子をあげることができる。さらに
具体的には、配列番号１もしくは２に示されるアミノ酸
配列、または、該アミノ酸配列において１もしくは複数
個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加された
アミノ酸配列を有し、かつ7-ケト-8-アミノペラルゴン
酸シンテターゼ活性を有するタンパク質をコードする遺
伝子や、配列番号３、４、または５に示される塩基配列
を有する7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテターゼ遺
伝子等があげられる。
フィンゴモナス属に属する微生物由来の7-ケト-8-アミ
ノペラルゴン酸シンテターゼをコードする約1.１〜1.2
kbpの領域を含む遺伝子をあげることができる。さらに
具体的には、配列番号１もしくは２に示されるアミノ酸
配列、または、該アミノ酸配列において１もしくは複数
個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加された
アミノ酸配列を有し、かつ7-ケト-8-アミノペラルゴン
酸シンテターゼ活性を有するタンパク質をコードする遺
伝子や、配列番号３、４、または５に示される塩基配列
を有する7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテターゼ遺
伝子等があげられる。
【０００８】本発明bio A遺伝子としては、例えば、ス
フィンゴモナス属に属する微生物由来の7,8-ジアミノペ
ラルゴン酸アミノトランスフェラーゼをコードする約1.
2〜1.3 kbpの領域を含む遺伝子をあげることができる。
さらに具体的には、配列番号６もしくは７に示されるア
ミノ酸配列、または、該アミノ酸配列において１もしく
は複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加
されたアミノ酸配列を有し、かつ7,8-ジアミノペラルゴ
ン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質
をコードする遺伝子や、配列番号８または９に示される
塩基配列を有する7,8-ジアミノペラルゴン酸アミノトラ
ンスフェラーゼ遺伝子等があげられる。
フィンゴモナス属に属する微生物由来の7,8-ジアミノペ
ラルゴン酸アミノトランスフェラーゼをコードする約1.
2〜1.3 kbpの領域を含む遺伝子をあげることができる。
さらに具体的には、配列番号６もしくは７に示されるア
ミノ酸配列、または、該アミノ酸配列において１もしく
は複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加
されたアミノ酸配列を有し、かつ7,8-ジアミノペラルゴ
ン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有するタンパク質
をコードする遺伝子や、配列番号８または９に示される
塩基配列を有する7,8-ジアミノペラルゴン酸アミノトラ
ンスフェラーゼ遺伝子等があげられる。
【０００９】本発明bio Dとしては、例えば、スフィン
ゴモナス属に属する微生物由来のデスチオビオチンシン
テターゼをコードする約0.6 kbpの領域を含む遺伝子を
あげることができる。さらに具体的には、配列番号１０
もしくは１１に示されるアミノ酸配列、または、該アミ
ノ酸配列において１もしくは複数個のアミノ酸が欠失、
置換、修飾、もしくは付加されたアミノ酸配列を有し、
かつデスチオビオチンシンテターゼ活性を有するタンパ
ク質をコードする遺伝子や、配列番号１２または１３に
示される塩基配列を有するデスチオビオチンシンテター
ゼ遺伝子等があげられる。
ゴモナス属に属する微生物由来のデスチオビオチンシン
テターゼをコードする約0.6 kbpの領域を含む遺伝子を
あげることができる。さらに具体的には、配列番号１０
もしくは１１に示されるアミノ酸配列、または、該アミ
ノ酸配列において１もしくは複数個のアミノ酸が欠失、
置換、修飾、もしくは付加されたアミノ酸配列を有し、
かつデスチオビオチンシンテターゼ活性を有するタンパ
ク質をコードする遺伝子や、配列番号１２または１３に
示される塩基配列を有するデスチオビオチンシンテター
ゼ遺伝子等があげられる。
【００１０】本発明bioB遺伝子としては、例えば、スフ
ィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチンシンター
ゼをコードする約1.0 〜1.1 kbpの領域を含む遺伝子を
あげることができる。さらに具体的には、配列番号１
４、１５、もしくは１８に示されるアミノ酸配列、また
は、該アミノ酸配列において１もしくは複数個のアミノ
酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加されたアミノ酸配
列を有し、かつビオチンシンターゼ活性を有するタンパ
ク質をコードする遺伝子や、配列番号１６、１７、また
は１９に示される塩基配列を有するビオチンシンターゼ
遺伝子等があげられる。
ィンゴモナス属に属する微生物由来のビオチンシンター
ゼをコードする約1.0 〜1.1 kbpの領域を含む遺伝子を
あげることができる。さらに具体的には、配列番号１
４、１５、もしくは１８に示されるアミノ酸配列、また
は、該アミノ酸配列において１もしくは複数個のアミノ
酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加されたアミノ酸配
列を有し、かつビオチンシンターゼ活性を有するタンパ
ク質をコードする遺伝子や、配列番号１６、１７、また
は１９に示される塩基配列を有するビオチンシンターゼ
遺伝子等があげられる。
【００１１】本発明bio C遺伝子としては、例えば、ス
フィンゴモナス属に属する微生物由来の、ビオチン生合
成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応
を触媒する活性を有する酵素をコードする約0.8〜0.9kb
pの領域を含む遺伝子をあげることができる。さらに具
体的には、配列番号２０もしくは２１に示されるアミノ
酸配列、または、該アミノ酸配列において１もしくは複
数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加され
たアミノ酸配列を有し、かつビオチン生合成経路の中で
ピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応を触媒する活
性を有するタンパク質をコードする遺伝子や、配列番号
２２または２３に示される塩基配列を有するビオチン生
合成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反
応を触媒する活性を有する酵素の遺伝子等があげられ
る。
フィンゴモナス属に属する微生物由来の、ビオチン生合
成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応
を触媒する活性を有する酵素をコードする約0.8〜0.9kb
pの領域を含む遺伝子をあげることができる。さらに具
体的には、配列番号２０もしくは２１に示されるアミノ
酸配列、または、該アミノ酸配列において１もしくは複
数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付加され
たアミノ酸配列を有し、かつビオチン生合成経路の中で
ピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応を触媒する活
性を有するタンパク質をコードする遺伝子や、配列番号
２２または２３に示される塩基配列を有するビオチン生
合成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反
応を触媒する活性を有する酵素の遺伝子等があげられ
る。
【００１２】本発明bio F、bio A、bio D、bio B、bio
C遺伝子を単離する目的に用いられる微生物は、スフィ
ンゴモナス属に属するビオチン生産菌、つまりビオチン
生合成に関与する遺伝子を有する微生物であれば、自然
界から分離された菌株でも該分離菌株に変異が導入され
た菌株でもよく、例えば特開平6-133790号に記載された
スフィンゴモナス・ポウシモビルス JCM7511株やスフィ
ンゴモナス・エスピー（Sphingomonas sp.）SC42405株
などがあげられる。スフィンゴモナス・ポウシモビルス
JCM7511株は理化学研究所生物系統保存施設において分
譲可能な状態で保管されており、また、スフィンゴモナ
ス・エスピー SC42405株は、ブダペスト条約下におい
て、通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に受
託番号FERM-BP3995として寄託（受理日：平成４年９月
３日）され、米国特許第５４３２０６７号に開示されて
いる。
C遺伝子を単離する目的に用いられる微生物は、スフィ
ンゴモナス属に属するビオチン生産菌、つまりビオチン
生合成に関与する遺伝子を有する微生物であれば、自然
界から分離された菌株でも該分離菌株に変異が導入され
た菌株でもよく、例えば特開平6-133790号に記載された
スフィンゴモナス・ポウシモビルス JCM7511株やスフィ
ンゴモナス・エスピー（Sphingomonas sp.）SC42405株
などがあげられる。スフィンゴモナス・ポウシモビルス
JCM7511株は理化学研究所生物系統保存施設において分
譲可能な状態で保管されており、また、スフィンゴモナ
ス・エスピー SC42405株は、ブダペスト条約下におい
て、通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に受
託番号FERM-BP3995として寄託（受理日：平成４年９月
３日）され、米国特許第５４３２０６７号に開示されて
いる。
【００１３】スフィンゴモナス属に属するビオチン生産
菌からビオチン生合成に関与する遺伝子を含むDNA断片
を調製する方法の一例を以下に示す。まず、スフィンゴ
モナス属に属する微生物の染色体DNAを、例えばBiochem
ica.Biophysica. Acta., vol.72, 619〜629 (1963)等に
記載される通常の染色体DNAの抽出方法により単離す
る。単離された染色体DNAを適当な制限酵素、例えば Sa
u 3AIなどで部分分解し、得られたDNA断片を適当なベク
ターに組み込み染色体DNAライブラリーを作製する。こ
こで用いられるベクターとしては、該染色体DNAライブ
ラリーを導入する菌株内で増殖、複製が可能なものであ
ればよく、例えばプラスミド、バクテリオファージやコ
スミドなどがあげられる。このようにして作製された染
色体DNAライブラリーから、ビオチン生合成に関与する
遺伝子を特定、単離する方法としては、ビオチン生合成
に関与する遺伝子が欠失しビオチン要求性を示す遺伝子
欠損変異株に染色体DNAライブラリーを導入し、得られ
た形質転換体の中からビオチン生産能を回復した菌株を
選択する方法が挙げられる。この方法に用いられるビオ
チン要求性変異株としては、導入されたスフィンゴモナ
ス属に属する微生物の染色体DNA断片が該菌体内で発現
可能であればよく、そのような変異株は例えば、Procee
ding of the National Academy of Sciences U.S.A., v
ol. 69, 2219 (1972)やJournal of Bacteriology, vol.
115, 662(1973)などに記載の公知の方法により調製する
ことができる。染色体DNAライブラリーをビオチン要求
性変異株に導入する方法としては、例えば塩化カルシウ
ムで菌体を処理する方法（Molecular Cloning, 2nd e
d., Cold SpringHarbor Laboratory Press(1989)）、エ
レクトロポーレーション法（Current Protocols in Mol
ecular Biology, vol.1, John Wiley & Sons. Inc. ISB
NO-471-50338-X(1987)）等の公知の方法があげられる。
こうして得られたビオチン要求性変異株の形質転換体
を、ビオチンを含まない適当な選択培地に塗沫して培養
し、生育してきた形質転換体を選択する。このようにし
て選択された形質転換体が、スフィンゴモナス属に属す
る微生物由来のビオチン生合成に関与する遺伝子を含む
DNA断片が組み込まれたベクターを保持する菌株の候補
である。該形質転換体より、例えばベクターがプラスミ
ドやコスミドであれば、アルカリ溶解法や煮沸法（Mole
cular Cloning, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laborat
ory Press(1989)）、またベクターがバクテリオファー
ジであれば密度勾配遠心やイオン交換クロマトグラフィ
ーを用いる方法（Current Protocols in Molecular Bio
logy, vol.1, John Wiley & Sons.Inc. ISBNO-471-5033
8-X(1987)）等の通常の方法により組換えベクターを抽
出し、その塩基配列をサンガーダイデオキシメディエイ
テッドチェインターミネーション法（Molecular Clonin
g, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press(19
89)）等の方法によって解析することにより、ベクター
に組み込まれたDNA断片の塩基配列を決定することがで
きる。決定された塩基配列中に見出される500 bp以上の
オープンリーディングフレームの中から、例えば、bio
F欠損変異株を用いて得られたDNA 断片であれば既知のb
io F遺伝子と、bio A欠損変異株を用いて得られたDNA断
片であれば既知のbioA遺伝子と、bio D欠損変異株を用
いて得られたDNA断片であれば既知のbio D遺伝子と、bi
o B欠損変異株を用いて得られたDNA断片であれば既知の
bio B遺伝子と、bio C欠損変異株を用いて得られたDNA
断片であれば既知の bio C遺伝子と、それぞれ塩基配列
の相同性の高いタンパク質コーディング領域を選び出せ
ば、これらをスフィンゴモナス属細菌のビオチン生合成
に関与する遺伝子であると特定することができる。ま
た、各コーディング領域ごとに適当な制限酵素で切り出
し、各コーディング領域を含むサブクローンを作製し、
例えば、bio F欠損変異株を用いて得られたDNA断片のサ
ブクローンであればbio F欠損変異株に、bio A欠損変異
株を用いて得られたDNA断片のサブクローンであればbio
A欠損変異株に、bio D欠損変異株を用いて得られたDNA
断片のサブクローンであればbio D欠損変異株に、bio B
欠損変異株を用いて得られたDNA断片のサブクローンで
あればbioB欠損変異株に、bio C欠損変異株を用いて得
られたDNA断片のサブクローンであればbio C欠損変異株
に、それぞれ導入して、ビオチンを含まない適当な選択
培地上での該遺伝子導入菌株の生育を調べることによ
り、生育可能となった欠損変異株に保持されているサブ
クローンに含まれるコーディング領域をスフィンゴモナ
ス属細菌のビオチン生合成に関与する各遺伝子と特定す
ることも可能である。
菌からビオチン生合成に関与する遺伝子を含むDNA断片
を調製する方法の一例を以下に示す。まず、スフィンゴ
モナス属に属する微生物の染色体DNAを、例えばBiochem
ica.Biophysica. Acta., vol.72, 619〜629 (1963)等に
記載される通常の染色体DNAの抽出方法により単離す
る。単離された染色体DNAを適当な制限酵素、例えば Sa
u 3AIなどで部分分解し、得られたDNA断片を適当なベク
ターに組み込み染色体DNAライブラリーを作製する。こ
こで用いられるベクターとしては、該染色体DNAライブ
ラリーを導入する菌株内で増殖、複製が可能なものであ
ればよく、例えばプラスミド、バクテリオファージやコ
スミドなどがあげられる。このようにして作製された染
色体DNAライブラリーから、ビオチン生合成に関与する
遺伝子を特定、単離する方法としては、ビオチン生合成
に関与する遺伝子が欠失しビオチン要求性を示す遺伝子
欠損変異株に染色体DNAライブラリーを導入し、得られ
た形質転換体の中からビオチン生産能を回復した菌株を
選択する方法が挙げられる。この方法に用いられるビオ
チン要求性変異株としては、導入されたスフィンゴモナ
ス属に属する微生物の染色体DNA断片が該菌体内で発現
可能であればよく、そのような変異株は例えば、Procee
ding of the National Academy of Sciences U.S.A., v
ol. 69, 2219 (1972)やJournal of Bacteriology, vol.
115, 662(1973)などに記載の公知の方法により調製する
ことができる。染色体DNAライブラリーをビオチン要求
性変異株に導入する方法としては、例えば塩化カルシウ
ムで菌体を処理する方法（Molecular Cloning, 2nd e
d., Cold SpringHarbor Laboratory Press(1989)）、エ
レクトロポーレーション法（Current Protocols in Mol
ecular Biology, vol.1, John Wiley & Sons. Inc. ISB
NO-471-50338-X(1987)）等の公知の方法があげられる。
こうして得られたビオチン要求性変異株の形質転換体
を、ビオチンを含まない適当な選択培地に塗沫して培養
し、生育してきた形質転換体を選択する。このようにし
て選択された形質転換体が、スフィンゴモナス属に属す
る微生物由来のビオチン生合成に関与する遺伝子を含む
DNA断片が組み込まれたベクターを保持する菌株の候補
である。該形質転換体より、例えばベクターがプラスミ
ドやコスミドであれば、アルカリ溶解法や煮沸法（Mole
cular Cloning, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laborat
ory Press(1989)）、またベクターがバクテリオファー
ジであれば密度勾配遠心やイオン交換クロマトグラフィ
ーを用いる方法（Current Protocols in Molecular Bio
logy, vol.1, John Wiley & Sons.Inc. ISBNO-471-5033
8-X(1987)）等の通常の方法により組換えベクターを抽
出し、その塩基配列をサンガーダイデオキシメディエイ
テッドチェインターミネーション法（Molecular Clonin
g, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press(19
89)）等の方法によって解析することにより、ベクター
に組み込まれたDNA断片の塩基配列を決定することがで
きる。決定された塩基配列中に見出される500 bp以上の
オープンリーディングフレームの中から、例えば、bio
F欠損変異株を用いて得られたDNA 断片であれば既知のb
io F遺伝子と、bio A欠損変異株を用いて得られたDNA断
片であれば既知のbioA遺伝子と、bio D欠損変異株を用
いて得られたDNA断片であれば既知のbio D遺伝子と、bi
o B欠損変異株を用いて得られたDNA断片であれば既知の
bio B遺伝子と、bio C欠損変異株を用いて得られたDNA
断片であれば既知の bio C遺伝子と、それぞれ塩基配列
の相同性の高いタンパク質コーディング領域を選び出せ
ば、これらをスフィンゴモナス属細菌のビオチン生合成
に関与する遺伝子であると特定することができる。ま
た、各コーディング領域ごとに適当な制限酵素で切り出
し、各コーディング領域を含むサブクローンを作製し、
例えば、bio F欠損変異株を用いて得られたDNA断片のサ
ブクローンであればbio F欠損変異株に、bio A欠損変異
株を用いて得られたDNA断片のサブクローンであればbio
A欠損変異株に、bio D欠損変異株を用いて得られたDNA
断片のサブクローンであればbio D欠損変異株に、bio B
欠損変異株を用いて得られたDNA断片のサブクローンで
あればbioB欠損変異株に、bio C欠損変異株を用いて得
られたDNA断片のサブクローンであればbio C欠損変異株
に、それぞれ導入して、ビオチンを含まない適当な選択
培地上での該遺伝子導入菌株の生育を調べることによ
り、生育可能となった欠損変異株に保持されているサブ
クローンに含まれるコーディング領域をスフィンゴモナ
ス属細菌のビオチン生合成に関与する各遺伝子と特定す
ることも可能である。
【００１４】さらに、取得した目的の遺伝子は、例えば
Molecular Cloning, 2nd ed., ColdSpring Harbor Labo
ratory Press(1989)等に記載の通常の変異導入方法によ
って、機能を増大させることが可能である。変異の導入
はビオチン生合成に関与する遺伝子であればいずれの遺
伝子にも行うことができる。特にビオチンの生合成経路
の律速段階であることの多いデスチオビオチンからビオ
チンへの変換反応を触媒するビオチンシンターゼをコー
ドしている bio B 遺伝子への変異の導入がビオチンの
生産性を向上させる上で有効である。また、導入する変
異は、例えば、酵素活性を増大したりタンパク質の安定
性を向上させるような、タンパク質をコードする領域中
の変異であってもよいし、遺伝子発現量を増大させるよ
うな、遺伝子発現制御領域の中の変異であってもよい。
変異を導入した遺伝子を、例えば、前述のようにビオチ
ン要求性を示す遺伝子欠損変異株に導入して発現させ、
遺伝子欠損を相補する能力を野生型遺伝子と比較するこ
とにより、ビオチン生産性の向上に寄与しうる変異遺伝
子を選択することができる。また、変異を導入した遺伝
子を微生物内で発現させ、導入遺伝子にコードされてい
る酵素の生成量、酵素活性、または該酵素によって触媒
される反応によって生成される化合物の生成量等を野生
型遺伝子を用いた場合と比較することにより、ビオチン
生産性の向上に寄与しうる変異遺伝子を選択することも
できる。なお、ビオチン生合成経路の中でピメリルCo-A
より上流の生合成段階の反応を触媒する活性を有する酵
素、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテターゼ、7,8-
ジアミノペラルゴン酸アミノトランスフェラーゼ、デス
チオビオチンシンテターゼの酵素活性は、例えば、Y.Iz
umi et al., Methods in Enzymolozy, vol.62, 326-33
8, (1979)等に記載の方法により測定することができ
る。また、ビオチンシンターゼの酵素活性は、例えば、
I.Sanyal et al., Archives of Biochemistry and Biop
hhysics, vol.326, 48-56,(1996)やA.Mejean et al., B
iochemical and Biophysical Research Communication
s, vol.217, 1231-1237, (1995)等に記載の方法で測定
すればよい。上記のような変異導入遺伝子として、具体
的には例えば、配列番号１９に示される塩基配列を有す
るビオチンシンターゼ遺伝子があげられる。該遺伝子
は、配列番号１６に示される塩基配列を有するビオチン
シンターゼ遺伝子と比較して、開始コドン（ATG）のAを
+1としたときの-57番目の塩基と706番目の塩基が置換さ
れている。また、変異導入遺伝子の例として、配列番号
５に示される塩基配列を有する7-ケト-8-アミノペラル
ゴン酸シンテターゼ遺伝子をあげることもできる。該遺
伝子は、配列番号４に示される塩基配列を有する7-ケト
-8-アミノペラルゴン酸シンテターゼ遺伝子と比較し
て、開始コドン（ATG）のAを+1としたときの-11番目の
塩基が置換されている。
Molecular Cloning, 2nd ed., ColdSpring Harbor Labo
ratory Press(1989)等に記載の通常の変異導入方法によ
って、機能を増大させることが可能である。変異の導入
はビオチン生合成に関与する遺伝子であればいずれの遺
伝子にも行うことができる。特にビオチンの生合成経路
の律速段階であることの多いデスチオビオチンからビオ
チンへの変換反応を触媒するビオチンシンターゼをコー
ドしている bio B 遺伝子への変異の導入がビオチンの
生産性を向上させる上で有効である。また、導入する変
異は、例えば、酵素活性を増大したりタンパク質の安定
性を向上させるような、タンパク質をコードする領域中
の変異であってもよいし、遺伝子発現量を増大させるよ
うな、遺伝子発現制御領域の中の変異であってもよい。
変異を導入した遺伝子を、例えば、前述のようにビオチ
ン要求性を示す遺伝子欠損変異株に導入して発現させ、
遺伝子欠損を相補する能力を野生型遺伝子と比較するこ
とにより、ビオチン生産性の向上に寄与しうる変異遺伝
子を選択することができる。また、変異を導入した遺伝
子を微生物内で発現させ、導入遺伝子にコードされてい
る酵素の生成量、酵素活性、または該酵素によって触媒
される反応によって生成される化合物の生成量等を野生
型遺伝子を用いた場合と比較することにより、ビオチン
生産性の向上に寄与しうる変異遺伝子を選択することも
できる。なお、ビオチン生合成経路の中でピメリルCo-A
より上流の生合成段階の反応を触媒する活性を有する酵
素、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸シンテターゼ、7,8-
ジアミノペラルゴン酸アミノトランスフェラーゼ、デス
チオビオチンシンテターゼの酵素活性は、例えば、Y.Iz
umi et al., Methods in Enzymolozy, vol.62, 326-33
8, (1979)等に記載の方法により測定することができ
る。また、ビオチンシンターゼの酵素活性は、例えば、
I.Sanyal et al., Archives of Biochemistry and Biop
hhysics, vol.326, 48-56,(1996)やA.Mejean et al., B
iochemical and Biophysical Research Communication
s, vol.217, 1231-1237, (1995)等に記載の方法で測定
すればよい。上記のような変異導入遺伝子として、具体
的には例えば、配列番号１９に示される塩基配列を有す
るビオチンシンターゼ遺伝子があげられる。該遺伝子
は、配列番号１６に示される塩基配列を有するビオチン
シンターゼ遺伝子と比較して、開始コドン（ATG）のAを
+1としたときの-57番目の塩基と706番目の塩基が置換さ
れている。また、変異導入遺伝子の例として、配列番号
５に示される塩基配列を有する7-ケト-8-アミノペラル
ゴン酸シンテターゼ遺伝子をあげることもできる。該遺
伝子は、配列番号４に示される塩基配列を有する7-ケト
-8-アミノペラルゴン酸シンテターゼ遺伝子と比較し
て、開始コドン（ATG）のAを+1としたときの-11番目の
塩基が置換されている。
【００１５】本発明における「スフィンゴモナス（Sphi
ngomonas）属に属する微生物由来のビオチン生合成に関
与する遺伝子を含むDNA断片」とは、スフィンゴモナス
属に属する微生物細胞内でビオチン生合成に関わる酵素
の遺伝子を１以上含むDNA断片を意味し、上述のように
して微生物から単離されたDNA断片であってもよいし、
種々の微生物株から単離されたビオチン生合成に関わる
酵素の遺伝子またはその変異導入遺伝子が連結されてな
るDNA断片であってもよい。
ngomonas）属に属する微生物由来のビオチン生合成に関
与する遺伝子を含むDNA断片」とは、スフィンゴモナス
属に属する微生物細胞内でビオチン生合成に関わる酵素
の遺伝子を１以上含むDNA断片を意味し、上述のように
して微生物から単離されたDNA断片であってもよいし、
種々の微生物株から単離されたビオチン生合成に関わる
酵素の遺伝子またはその変異導入遺伝子が連結されてな
るDNA断片であってもよい。
【００１６】また、本発明は、上記のようなスフィンゴ
モナス（Sphingomonas）属に属する微生物由来のビオチ
ン生合成に関与する遺伝子の部分塩基配列を有するDNA
断片をも提供する。該DNA断片は、例えば、ハイブリダ
イゼーション法に用いるプローブやPCR法におけるプラ
イマーとして有用である。PCR法におけるプライマーと
しては、一般的に、アニーリングの特異性が確保される
点からは塩基数が多い方がよいが、一方、塩基数が多く
なるに従って、PCR反応時にプライマー自身が高次構造
を取り易くアニーリング効率が悪くなる場合があり、合
成後の精製時に煩雑な操作が必要となることを考慮する
と、塩基数は多すぎない方がよい。通常、塩基数が15以
上50以下の１本鎖ＤＮＡからなる遺伝子断片が好まし
い。具体的には例えば、表１に示されるプライマーBF、
BR、BF1、BR1、C1、C6の塩基配列を有するDNA断片や、
表２に示されるプライマーBF4、BR4、F2、F3、CDA1、CD
A6、CDA3、CDA7の塩基配列を有するDNA断片をあげるこ
とができる。
モナス（Sphingomonas）属に属する微生物由来のビオチ
ン生合成に関与する遺伝子の部分塩基配列を有するDNA
断片をも提供する。該DNA断片は、例えば、ハイブリダ
イゼーション法に用いるプローブやPCR法におけるプラ
イマーとして有用である。PCR法におけるプライマーと
しては、一般的に、アニーリングの特異性が確保される
点からは塩基数が多い方がよいが、一方、塩基数が多く
なるに従って、PCR反応時にプライマー自身が高次構造
を取り易くアニーリング効率が悪くなる場合があり、合
成後の精製時に煩雑な操作が必要となることを考慮する
と、塩基数は多すぎない方がよい。通常、塩基数が15以
上50以下の１本鎖ＤＮＡからなる遺伝子断片が好まし
い。具体的には例えば、表１に示されるプライマーBF、
BR、BF1、BR1、C1、C6の塩基配列を有するDNA断片や、
表２に示されるプライマーBF4、BR4、F2、F3、CDA1、CD
A6、CDA3、CDA7の塩基配列を有するDNA断片をあげるこ
とができる。
【００１７】
【表１】PCRプライマー
【００１８】
【表２】PCRプライマー
【００１９】スフィンゴモナス属に属する微生物由来の
ビオチン生合成に関与する遺伝子は、タンパク質をコー
ドする領域及びその上流や下流に位置する遺伝子発現制
御領域を含有する。スフィンゴモナス属に属する微生物
由来のビオチン生合成に関与する遺伝子の、タンパク質
をコードする領域からなるDNA断片は、例えば、前記遺
伝子を宿主細胞内で発現させるためのベクターの構築に
おいて、これを宿主細胞内で機能可能なプロモーターと
結合する工程等に用いることができる。また、遺伝子発
現制御領域とは、タンパク質をコードする領域の上流や
下流に位置する、数10〜数100bpの領域で、その前後に
コードされているタンパク質の発現量の制御に大きな影
響を与える領域をいう。中でもタンパク質をコードする
領域の上流に位置するプロモーターは重要な遺伝子発現
制御領域である。具体的には、例えば、配列番号１６に
おいて開始コドン（ATG）のAを+1としたときの、-222〜
-1に示される塩基配列を有する領域、配列番号４におい
て開始コドン（ATG）のAを+1としたときの、-201〜-1に
示される塩基配列を有する領域等があげられる。遺伝子
発現制御領域を特定するには、例えば、スフィンゴモナ
ス属に属する微生物由来のビオチン生合成に関与する遺
伝子の、タンパク質をコードする領域の前後の塩基配列
に点変異や欠失、挿入等の変異を導入し、該遺伝子を微
生物で発現させて当該遺伝子にコードされている酵素の
生成量、酵素活性、または酵素によって触媒される反応
によって生成する化合物の生成量等を測定し、変異の導
入により前記の値が大きく変化を示す領域を見出すとよ
い。また、上記遺伝子のタンパク質をコードする領域
を、生成量や酵素活性の測定が容易なタンパク質をコー
ドする遺伝子に置き換えて同様に実験してもよい。以上
のような方法で遺伝子発現制御領域を特定し、これを取
得することができる。さらに、取得した遺伝子発現制御
領域は、前述のように例えばＰＣＲ法などにより、置
換、欠失、挿入等の変異を導入して、より遺伝子発現量
の高い遺伝子発現制御領域に改変することが可能であ
る。また、突然変異等により目的とするタンパク質の生
成量や酵素の活性が上昇した変異株から遺伝子を単離す
ることによって、遺伝子発現量の高い遺伝子発現制御領
域を取得することもできる。このような遺伝子発現制御
領域として、例えば、配列番号２４および２５に示され
る塩基配列を有する遺伝子発現制御領域をあげることが
できる。スフィンゴモナス属に属する微生物由来のビオ
チン生合成に関与する遺伝子の、上記のような遺伝子発
現制御領域からなるDNA断片は、例えば、遺伝子をスフ
ィンゴモナス属に属する微生物内で発現させるためのベ
クターの構築等に利用することができる。
ビオチン生合成に関与する遺伝子は、タンパク質をコー
ドする領域及びその上流や下流に位置する遺伝子発現制
御領域を含有する。スフィンゴモナス属に属する微生物
由来のビオチン生合成に関与する遺伝子の、タンパク質
をコードする領域からなるDNA断片は、例えば、前記遺
伝子を宿主細胞内で発現させるためのベクターの構築に
おいて、これを宿主細胞内で機能可能なプロモーターと
結合する工程等に用いることができる。また、遺伝子発
現制御領域とは、タンパク質をコードする領域の上流や
下流に位置する、数10〜数100bpの領域で、その前後に
コードされているタンパク質の発現量の制御に大きな影
響を与える領域をいう。中でもタンパク質をコードする
領域の上流に位置するプロモーターは重要な遺伝子発現
制御領域である。具体的には、例えば、配列番号１６に
おいて開始コドン（ATG）のAを+1としたときの、-222〜
-1に示される塩基配列を有する領域、配列番号４におい
て開始コドン（ATG）のAを+1としたときの、-201〜-1に
示される塩基配列を有する領域等があげられる。遺伝子
発現制御領域を特定するには、例えば、スフィンゴモナ
ス属に属する微生物由来のビオチン生合成に関与する遺
伝子の、タンパク質をコードする領域の前後の塩基配列
に点変異や欠失、挿入等の変異を導入し、該遺伝子を微
生物で発現させて当該遺伝子にコードされている酵素の
生成量、酵素活性、または酵素によって触媒される反応
によって生成する化合物の生成量等を測定し、変異の導
入により前記の値が大きく変化を示す領域を見出すとよ
い。また、上記遺伝子のタンパク質をコードする領域
を、生成量や酵素活性の測定が容易なタンパク質をコー
ドする遺伝子に置き換えて同様に実験してもよい。以上
のような方法で遺伝子発現制御領域を特定し、これを取
得することができる。さらに、取得した遺伝子発現制御
領域は、前述のように例えばＰＣＲ法などにより、置
換、欠失、挿入等の変異を導入して、より遺伝子発現量
の高い遺伝子発現制御領域に改変することが可能であ
る。また、突然変異等により目的とするタンパク質の生
成量や酵素の活性が上昇した変異株から遺伝子を単離す
ることによって、遺伝子発現量の高い遺伝子発現制御領
域を取得することもできる。このような遺伝子発現制御
領域として、例えば、配列番号２４および２５に示され
る塩基配列を有する遺伝子発現制御領域をあげることが
できる。スフィンゴモナス属に属する微生物由来のビオ
チン生合成に関与する遺伝子の、上記のような遺伝子発
現制御領域からなるDNA断片は、例えば、遺伝子をスフ
ィンゴモナス属に属する微生物内で発現させるためのベ
クターの構築等に利用することができる。
【００２０】こうして得られたスフィンゴモナス属に属
する微生物由来のビオチン生合成に関与する遺伝子また
はその部分塩基配列を有するDNA断片を、宿主細胞内で
複製可能なベクターに挿入することにより、前記遺伝子
またはその１部分を宿主細胞に導入するためのベクター
を構築することができる。さらに、前記遺伝子のタンパ
ク質をコードする領域の上流に遺伝子発現制御領域を結
合してベクターに組み込むことにより、該遺伝子を宿主
細胞で発現させるためのベクターを構築することができ
る。ここで使用されるDNA断片としては、例えば、前述
のようにして取得されたスフィンゴモナス属に属する微
生物のビオチン生合成に関与する遺伝子を含むDNA断片
をあらかじめベクターに連結しやすいように適当な制限
酵素で適当な大きさに切断したDNA断片や、適当な制限
酵素部位がなければPCRを用いて任意の制限酵素部位を
ビオチン生合成に関与する遺伝子の両端に導入したDNA
断片等をあげることができる。ベクターに挿入される遺
伝子としては、前述の本発明bio F、bio A、bio D、bio
B、bio C遺伝子からなる群から選ばれる１以上の遺伝
子であればよい。例えば、前記遺伝子の全てがベクター
に挿入されていてもよいし、そのうちのいくつかがベク
ターに挿入されていてもよい。さらに、特定の酵素活性
を上昇させる目的で特定の遺伝子を複数挿入してもよ
い。また、必要に応じて、後述の形質転換体の選抜に有
用な薬剤耐性遺伝子等の選択マーカー遺伝子や、宿主細
胞の染色体との相同組換えに利用される染色体DNA等
を、前記遺伝子と共に同一ベクター上に挿入することも
できる。タンパク質をコードする領域の上流に結合され
る遺伝子発現制御領域としては、宿主細胞内で遺伝子発
現を制御する機能を有する塩基配列であればよく、例え
ば、宿主細胞がスフィンゴモナス属に属する微生物であ
る場合には、前述のような、スフィンゴモナス属に属す
る微生物由来のビオチン生合成に関与する遺伝子の遺伝
子発現制御領域をあげることができる。また、宿主細胞
が大腸菌である場合には、例えば、大腸菌内で遺伝子発
現制御活性を示す市販のプロモーターを利用することが
できる。DNA断片を挿入するベクターは、宿主細胞内、
例えば微生物内で複製可能なベクターであればよく、例
えば宿主細胞がスフィンゴモナス属に属する微生物であ
る場合には、不和合性群Pに分類されるRK2やRK2由来の
プラスミドベクター（Plasmids, vol.13, 149-153, (19
85)、Journal of Bacteriology, vol. 167 , 604-610(1
986)）、不和合性群Qに分類されるRSF1010やRSF1010由
来のプラスミドベクター（Gene, vol. 16, 237-247, (1
981)）等が利用できる。また、宿主細胞が大腸菌である
場合には、大腸菌内で複製可能な市販のプラスミドやフ
ァージ等が利用できる。
する微生物由来のビオチン生合成に関与する遺伝子また
はその部分塩基配列を有するDNA断片を、宿主細胞内で
複製可能なベクターに挿入することにより、前記遺伝子
またはその１部分を宿主細胞に導入するためのベクター
を構築することができる。さらに、前記遺伝子のタンパ
ク質をコードする領域の上流に遺伝子発現制御領域を結
合してベクターに組み込むことにより、該遺伝子を宿主
細胞で発現させるためのベクターを構築することができ
る。ここで使用されるDNA断片としては、例えば、前述
のようにして取得されたスフィンゴモナス属に属する微
生物のビオチン生合成に関与する遺伝子を含むDNA断片
をあらかじめベクターに連結しやすいように適当な制限
酵素で適当な大きさに切断したDNA断片や、適当な制限
酵素部位がなければPCRを用いて任意の制限酵素部位を
ビオチン生合成に関与する遺伝子の両端に導入したDNA
断片等をあげることができる。ベクターに挿入される遺
伝子としては、前述の本発明bio F、bio A、bio D、bio
B、bio C遺伝子からなる群から選ばれる１以上の遺伝
子であればよい。例えば、前記遺伝子の全てがベクター
に挿入されていてもよいし、そのうちのいくつかがベク
ターに挿入されていてもよい。さらに、特定の酵素活性
を上昇させる目的で特定の遺伝子を複数挿入してもよ
い。また、必要に応じて、後述の形質転換体の選抜に有
用な薬剤耐性遺伝子等の選択マーカー遺伝子や、宿主細
胞の染色体との相同組換えに利用される染色体DNA等
を、前記遺伝子と共に同一ベクター上に挿入することも
できる。タンパク質をコードする領域の上流に結合され
る遺伝子発現制御領域としては、宿主細胞内で遺伝子発
現を制御する機能を有する塩基配列であればよく、例え
ば、宿主細胞がスフィンゴモナス属に属する微生物であ
る場合には、前述のような、スフィンゴモナス属に属す
る微生物由来のビオチン生合成に関与する遺伝子の遺伝
子発現制御領域をあげることができる。また、宿主細胞
が大腸菌である場合には、例えば、大腸菌内で遺伝子発
現制御活性を示す市販のプロモーターを利用することが
できる。DNA断片を挿入するベクターは、宿主細胞内、
例えば微生物内で複製可能なベクターであればよく、例
えば宿主細胞がスフィンゴモナス属に属する微生物であ
る場合には、不和合性群Pに分類されるRK2やRK2由来の
プラスミドベクター（Plasmids, vol.13, 149-153, (19
85)、Journal of Bacteriology, vol. 167 , 604-610(1
986)）、不和合性群Qに分類されるRSF1010やRSF1010由
来のプラスミドベクター（Gene, vol. 16, 237-247, (1
981)）等が利用できる。また、宿主細胞が大腸菌である
場合には、大腸菌内で複製可能な市販のプラスミドやフ
ァージ等が利用できる。
【００２１】このようにして構築された、ビオチン生合
成に関与する遺伝子を含むベクターを宿主細胞、例えば
宿主微生物に導入することにより形質転換体の創製が可
能になる。ビオチン生合成に関与する遺伝子を含むDNA
断片を導入する宿主細胞は、導入したDNA断片が安定に
保持され、遺伝子が発現されれば特に限定されない。例
えば、スフィンゴモナス属に属する微生物や、大腸菌等
をあげることができる。ベクターを宿主細胞に導入する
方法としては、通常の遺伝子工学的方法を用いることが
できる。例えば、宿主微生物に導入する方法としては、
塩化カルシウムで菌体を処理する方法（Molecular Clon
ing, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press
(1989)）や、エレクトロポーレーション法（Current Pr
otocols in Molecular Biology, vol.1, John Wiley &
Sons. Inc. ISBNO-471-50338-X(1987)）等の通常の方法
があげられる。また、相同組換えを利用して宿主細胞の
染色体に目的のDNA断片を挿入する遺伝子導入方法も用
いることができる。例えば、ビオチン生合成に関与する
遺伝子を含むDNA断片の両端に宿主細胞由来の染色体DNA
断片を結合してベクターに挿入し、これを宿主細胞に導
入する。ベクター上の染色体DNAと、宿主細胞の染色体D
NAの間で相同組換えが起こると、ビオチン生合成に関与
する遺伝子を含むDNA断片が宿主細胞の染色体に導入さ
れた形質転換体が得られる。上記のようにビオチン生合
成に関与する遺伝子を含むDNA断片を導入し、形質転換
された微生物は、ベクター等に含まれ遺伝子と共に導入
された選択マーカー遺伝子の表現型によって効率よく選
択できる。例えば、選択マーカー遺伝子が、アンピシリ
ン耐性遺伝子であれば、遺伝子導入操作後、菌体をアン
ピシリンを含む適当な栄養培地に塗布し、生育してきた
コロニーを釣菌分離することにより形質転換体を得るこ
とができる。このようにしてビオチン生合成に関与する
遺伝子を含むDNA断片が導入されてなる形質転換体を得
ることができる。該形質転換体は、ビオチン、および、
ビオチン生合成の前駆体である7-ケト-8-アミノペラル
ゴン酸、7,8-ジアミノペラルゴン酸およびデスチオビオ
チン等の製造に利用することができる。
成に関与する遺伝子を含むベクターを宿主細胞、例えば
宿主微生物に導入することにより形質転換体の創製が可
能になる。ビオチン生合成に関与する遺伝子を含むDNA
断片を導入する宿主細胞は、導入したDNA断片が安定に
保持され、遺伝子が発現されれば特に限定されない。例
えば、スフィンゴモナス属に属する微生物や、大腸菌等
をあげることができる。ベクターを宿主細胞に導入する
方法としては、通常の遺伝子工学的方法を用いることが
できる。例えば、宿主微生物に導入する方法としては、
塩化カルシウムで菌体を処理する方法（Molecular Clon
ing, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press
(1989)）や、エレクトロポーレーション法（Current Pr
otocols in Molecular Biology, vol.1, John Wiley &
Sons. Inc. ISBNO-471-50338-X(1987)）等の通常の方法
があげられる。また、相同組換えを利用して宿主細胞の
染色体に目的のDNA断片を挿入する遺伝子導入方法も用
いることができる。例えば、ビオチン生合成に関与する
遺伝子を含むDNA断片の両端に宿主細胞由来の染色体DNA
断片を結合してベクターに挿入し、これを宿主細胞に導
入する。ベクター上の染色体DNAと、宿主細胞の染色体D
NAの間で相同組換えが起こると、ビオチン生合成に関与
する遺伝子を含むDNA断片が宿主細胞の染色体に導入さ
れた形質転換体が得られる。上記のようにビオチン生合
成に関与する遺伝子を含むDNA断片を導入し、形質転換
された微生物は、ベクター等に含まれ遺伝子と共に導入
された選択マーカー遺伝子の表現型によって効率よく選
択できる。例えば、選択マーカー遺伝子が、アンピシリ
ン耐性遺伝子であれば、遺伝子導入操作後、菌体をアン
ピシリンを含む適当な栄養培地に塗布し、生育してきた
コロニーを釣菌分離することにより形質転換体を得るこ
とができる。このようにしてビオチン生合成に関与する
遺伝子を含むDNA断片が導入されてなる形質転換体を得
ることができる。該形質転換体は、ビオチン、および、
ビオチン生合成の前駆体である7-ケト-8-アミノペラル
ゴン酸、7,8-ジアミノペラルゴン酸およびデスチオビオ
チン等の製造に利用することができる。
【００２２】
【実施例】以下に、実施例をあげて本発明をより詳細に
説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもの
ではない。
説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもの
ではない。
【００２３】実施例１ ビオチン生合成に関与する遺伝
子の単離 （1-A）スフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511の染
色体DNAの調製 LB培地（1% トリプトン、0.5% 酵母エキス、1% NaCl）2
00 mlに、スフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511の
1白金耳を接種し、30℃で15時間振とう培養し、対数増
殖期の菌体を遠心分離（8000rpm、10分間）により集め
た。集められた菌体を20ml のAバッファー（25% ショ
糖、50mM Tris-HCl(pH8.0)）に懸濁し、2.5mlの塩化リ
ゾチーム溶液（50mg/ml）を加え、37℃で30分間保温し
た後、2.5mlのSDS溶液（10%(v/v)）と0.25mlのEDTA溶液
（0.5M）を加え、37℃で16時間保温した。次に、等量の
TE飽和フェノールを加え、ゆっくりとかき混ぜた後、遠
心分離（10,000rpm、10分間）し、上層を回収すること
により除タンパクを行い、さらに該除タンパク操作を5
回行った。次に回収された上層に2倍容量のエタノール
を加えてDNAを沈殿させ、ガラス棒でDNAを巻きつけて回
収し、70% エタノールで洗浄した後、風乾し、20 mlのT
Eバッファーに溶解し、20μlのRNase（10mg/ml）を加え
て、16時間、37℃で保温した。こうして、スフィンゴモ
ナス・ポウシモビルスJCM7511の染色体DNA約21mgを含む
DNA溶液を得た。
子の単離 （1-A）スフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511の染
色体DNAの調製 LB培地（1% トリプトン、0.5% 酵母エキス、1% NaCl）2
00 mlに、スフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511の
1白金耳を接種し、30℃で15時間振とう培養し、対数増
殖期の菌体を遠心分離（8000rpm、10分間）により集め
た。集められた菌体を20ml のAバッファー（25% ショ
糖、50mM Tris-HCl(pH8.0)）に懸濁し、2.5mlの塩化リ
ゾチーム溶液（50mg/ml）を加え、37℃で30分間保温し
た後、2.5mlのSDS溶液（10%(v/v)）と0.25mlのEDTA溶液
（0.5M）を加え、37℃で16時間保温した。次に、等量の
TE飽和フェノールを加え、ゆっくりとかき混ぜた後、遠
心分離（10,000rpm、10分間）し、上層を回収すること
により除タンパクを行い、さらに該除タンパク操作を5
回行った。次に回収された上層に2倍容量のエタノール
を加えてDNAを沈殿させ、ガラス棒でDNAを巻きつけて回
収し、70% エタノールで洗浄した後、風乾し、20 mlのT
Eバッファーに溶解し、20μlのRNase（10mg/ml）を加え
て、16時間、37℃で保温した。こうして、スフィンゴモ
ナス・ポウシモビルスJCM7511の染色体DNA約21mgを含む
DNA溶液を得た。
【００２４】（1-B）染色体DNAライブラリーの作製 （1-A）で得られた染色体DNA43μgを15Uの制限酵素Sau
3AIで37℃、2分間処理して部分分解した。この部分分解
染色体DNA断片とプラスミドベクターpUC19（宝酒造(株)
製）を制限酵素Bam HIで切断した後、脱リン酸化したも
のとを混合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）
を用いて付属の説明書に従い、部分分解染色体DNA断片
とプラスミドベクターpUC19を結合させ種々のDNA断片を
含んだ組換えプラスミドを作製した。
3AIで37℃、2分間処理して部分分解した。この部分分解
染色体DNA断片とプラスミドベクターpUC19（宝酒造(株)
製）を制限酵素Bam HIで切断した後、脱リン酸化したも
のとを混合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）
を用いて付属の説明書に従い、部分分解染色体DNA断片
とプラスミドベクターpUC19を結合させ種々のDNA断片を
含んだ組換えプラスミドを作製した。
【００２５】（1-C）ビオチン生合成に関与する遺伝子
のDNA断片を含む組換えプラスミドの選抜 （1-B）で得られた組換えプラスミドをジーンパルサー
（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエレ
クトロポーレーション法（印加電圧18 kV/cm、キャパシ
タンス25μF、抵抗 400Ω）によりbio F欠損変異大腸菌
（R874）、bioA欠損変異大腸菌（R879）、bio B欠損変
異大腸菌（R875）、bio C欠損変異大腸菌（R876）のそ
れぞれの菌株（Journal of Bacteriology, vol. 94, 20
65-2066(1972)、Journal of Bacteriology, vol. 112,
830-839 (1972)）に導入し、ビオチンを含まない選択寒
天培地（1.48% Na2HPO4-7H2O、0.3% KH2PO4、0.05% NaC
l、0.1% NH4Cl、0.005% アンピシリン、1.5% 寒天）に
塗布し、37℃、2日培養した。培地上で生育し、コロニ
ーを形成した菌株を釣菌し、LB 培地を用いて 37℃、16
時間培養し、アルカリ溶解法（Molecular Cloning, 2n
d ed., Cold SpringHarbor Laboratory Press(1989)）
によりプラスミドを抽出し、該プラスミドを制限酵素に
より切断し、アガロースゲル電気泳動を用いて調べたと
ころ、各欠損株に導入された組換えプラスミドは表３に
示す大きさの挿入断片を含んでいた。
のDNA断片を含む組換えプラスミドの選抜 （1-B）で得られた組換えプラスミドをジーンパルサー
（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエレ
クトロポーレーション法（印加電圧18 kV/cm、キャパシ
タンス25μF、抵抗 400Ω）によりbio F欠損変異大腸菌
（R874）、bioA欠損変異大腸菌（R879）、bio B欠損変
異大腸菌（R875）、bio C欠損変異大腸菌（R876）のそ
れぞれの菌株（Journal of Bacteriology, vol. 94, 20
65-2066(1972)、Journal of Bacteriology, vol. 112,
830-839 (1972)）に導入し、ビオチンを含まない選択寒
天培地（1.48% Na2HPO4-7H2O、0.3% KH2PO4、0.05% NaC
l、0.1% NH4Cl、0.005% アンピシリン、1.5% 寒天）に
塗布し、37℃、2日培養した。培地上で生育し、コロニ
ーを形成した菌株を釣菌し、LB 培地を用いて 37℃、16
時間培養し、アルカリ溶解法（Molecular Cloning, 2n
d ed., Cold SpringHarbor Laboratory Press(1989)）
によりプラスミドを抽出し、該プラスミドを制限酵素に
より切断し、アガロースゲル電気泳動を用いて調べたと
ころ、各欠損株に導入された組換えプラスミドは表３に
示す大きさの挿入断片を含んでいた。
【００２６】
【表３】欠損株の生育を相補する組換えプラスミド
【００２７】（1-D）ビオチン生合成に関与する遺伝子
を含むDNA断片の塩基配列の解析 （1-C）で得られた組換えプラスミドpBC01、pBC02、pBC
03、pBC04、pBC05について、キロシークエンス用デリー
ションキット（宝酒造(株)製）を用いて以下に示す方法
で種々の大きさの挿入断片を含むデリーションクローン
を作製した。組換えプラスミドpBC01、pBC02、pBC03、p
BC04、pBC05の各20μgを、pBC01はSma IとKpn I、pBC02
はPst IとXba I、pBC03、pBC04およびpBC05はXba IとSs
e 8387I、でそれぞれ切断し、フェノール抽出により酵
素を除いた後、エタノール沈澱によりDNAを沈澱させ
た。得られた DNAを100μlのExo IIIバッファー（50mM
Tris-HCl (pH8.0), 100mM NaCl, 5mM MgCl2, 10mM 2-メ
ルカプトエタノール）に溶解し、180ユニットのエキソ
ヌクレアーゼIIIを加えて撹拌し、37℃にてインキュベ
ートした。この溶液を1分ごとに10μlずつサンプリング
し、氷冷した100μlのMBヌクレアーゼバッファー（40mM
Na-acetate(pH4.5), 100mM NaCl, 2mM ZnCl 2, 10% グ
リセロール）中に混合し、65℃、5分間の処理によりエ
キソヌクレアーゼIIIを失活させた。この溶液を37℃に
もどした後、50ユニットのMBヌクレアーゼを加え、60分
間インキュベートし、フェノール抽出により酵素を除い
た後、エタノール沈澱によりDNAを沈澱させた。得られ
た DNAを、50μlのクレノーバッファー（7mM Tris-HCl
(pH7.5), 0.1mM EDTA , 20mM NaCl, 7mM MgCl2, dNTP各
0.1mM）に溶解し、2ユニットのクレノーフラグメント
を加え、37℃で15分間インキュベートした。この溶液の
10μlを100 μlのライゲーションソリューションA に加
え、さらに 12μ lのライゲーションソリューションBを
加えて、16℃で1時間インキュベートした後、エタノー
ル沈殿によりDNAを濃縮し、5μlの滅菌水に溶解して、
その溶液を大腸菌 JM109株に導入し、アンピシリン（0.
005%）を含む LB 寒天培地（1% トリプトン、0.5% 酵母
エキス、1% NaCl、1.5% 寒天）に塗布して、37℃で16時
間培養した。生育したコロニーからプラスミドを抽出し
て挿入DNA断片の大きさを調べ、pBC01のデリーションク
ローンとしては約250 bpずつ大きさの異なる250 bp〜1.
8 kbpの挿入断片を有する 8 クローン、pBC02のデリー
ションクローンとしては約250 bpずつ大きさの異なる25
0 bp〜2.8kbpの挿入断片を有する12クローン、pBC03の
デリーションクローンとしては約250 bpずつ大きさの異
なる250 bp〜1.4 kbpの挿入断片を有する6クローン、pB
C04のデリーションクローンとしては約250 bpずつ大き
さの異なる250 bp〜1.4 kbpの挿入断片を有する6クロー
ン、pBC05のデリーションクローンとしては約250bpずつ
大きさの異なる250 bp〜3.7 kbpの挿入断片を有する15
クローン、をそれぞれ選抜した。各デリーションクロー
ンは、アルカリ溶解法（Molecular Cloning, 2nd ed.,C
old Spring Harbor Laboratory Press(1989)）により抽
出し、300 ngを鋳型にし、M13 プライマーM4（宝酒造
(株)製）またはM13 プライマーRV（宝酒造(株)製）をプ
ライマーに用いてABIプリズムダイターミネーターサイ
クルシークエンシングレディーリアクションキット（パ
ーキンエルマー社製）によりシークエンス反応を行い、
自動塩基配列解析装置373A（パーキンエルマー社製）を
用いて塩基配列を解析した。各組換えプラスミドの挿入
断片の塩基配列の中からビオチン生合成に関与する遺伝
子を特定するために、断片中に存在する500 bp以上のオ
ープンリーディングフレームの中から、既知のbio F遺
伝子、bio A遺伝子、bio D遺伝子、bio B遺伝子、bio C
遺伝子、とそれぞれ塩基配列の相同性の高いタンパク質
コーディング領域を選び出し、これらをスフィンゴモナ
ス属細菌の各遺伝子であると特定した。pBC01にはbio F
（配列番号３）が、pBC02にはbio D（配列番号１２）と
bio A（配列番号８）が、pBC03にはbio B（配列番号１
６）が、pBC04と pBC05には bio C（配列番号２２）
が、それぞれ含まれていた。また、独立して得られたpB
C01、pBC02の挿入断片の塩基配列を比較検討した結果、
pBC01と pBC02の挿入断片は染色体上ではひとつながり
のDNAであることが判明し、bio F、bio D、bio Aは一つ
のオペロンを形成していることが明らかになった。
を含むDNA断片の塩基配列の解析 （1-C）で得られた組換えプラスミドpBC01、pBC02、pBC
03、pBC04、pBC05について、キロシークエンス用デリー
ションキット（宝酒造(株)製）を用いて以下に示す方法
で種々の大きさの挿入断片を含むデリーションクローン
を作製した。組換えプラスミドpBC01、pBC02、pBC03、p
BC04、pBC05の各20μgを、pBC01はSma IとKpn I、pBC02
はPst IとXba I、pBC03、pBC04およびpBC05はXba IとSs
e 8387I、でそれぞれ切断し、フェノール抽出により酵
素を除いた後、エタノール沈澱によりDNAを沈澱させ
た。得られた DNAを100μlのExo IIIバッファー（50mM
Tris-HCl (pH8.0), 100mM NaCl, 5mM MgCl2, 10mM 2-メ
ルカプトエタノール）に溶解し、180ユニットのエキソ
ヌクレアーゼIIIを加えて撹拌し、37℃にてインキュベ
ートした。この溶液を1分ごとに10μlずつサンプリング
し、氷冷した100μlのMBヌクレアーゼバッファー（40mM
Na-acetate(pH4.5), 100mM NaCl, 2mM ZnCl 2, 10% グ
リセロール）中に混合し、65℃、5分間の処理によりエ
キソヌクレアーゼIIIを失活させた。この溶液を37℃に
もどした後、50ユニットのMBヌクレアーゼを加え、60分
間インキュベートし、フェノール抽出により酵素を除い
た後、エタノール沈澱によりDNAを沈澱させた。得られ
た DNAを、50μlのクレノーバッファー（7mM Tris-HCl
(pH7.5), 0.1mM EDTA , 20mM NaCl, 7mM MgCl2, dNTP各
0.1mM）に溶解し、2ユニットのクレノーフラグメント
を加え、37℃で15分間インキュベートした。この溶液の
10μlを100 μlのライゲーションソリューションA に加
え、さらに 12μ lのライゲーションソリューションBを
加えて、16℃で1時間インキュベートした後、エタノー
ル沈殿によりDNAを濃縮し、5μlの滅菌水に溶解して、
その溶液を大腸菌 JM109株に導入し、アンピシリン（0.
005%）を含む LB 寒天培地（1% トリプトン、0.5% 酵母
エキス、1% NaCl、1.5% 寒天）に塗布して、37℃で16時
間培養した。生育したコロニーからプラスミドを抽出し
て挿入DNA断片の大きさを調べ、pBC01のデリーションク
ローンとしては約250 bpずつ大きさの異なる250 bp〜1.
8 kbpの挿入断片を有する 8 クローン、pBC02のデリー
ションクローンとしては約250 bpずつ大きさの異なる25
0 bp〜2.8kbpの挿入断片を有する12クローン、pBC03の
デリーションクローンとしては約250 bpずつ大きさの異
なる250 bp〜1.4 kbpの挿入断片を有する6クローン、pB
C04のデリーションクローンとしては約250 bpずつ大き
さの異なる250 bp〜1.4 kbpの挿入断片を有する6クロー
ン、pBC05のデリーションクローンとしては約250bpずつ
大きさの異なる250 bp〜3.7 kbpの挿入断片を有する15
クローン、をそれぞれ選抜した。各デリーションクロー
ンは、アルカリ溶解法（Molecular Cloning, 2nd ed.,C
old Spring Harbor Laboratory Press(1989)）により抽
出し、300 ngを鋳型にし、M13 プライマーM4（宝酒造
(株)製）またはM13 プライマーRV（宝酒造(株)製）をプ
ライマーに用いてABIプリズムダイターミネーターサイ
クルシークエンシングレディーリアクションキット（パ
ーキンエルマー社製）によりシークエンス反応を行い、
自動塩基配列解析装置373A（パーキンエルマー社製）を
用いて塩基配列を解析した。各組換えプラスミドの挿入
断片の塩基配列の中からビオチン生合成に関与する遺伝
子を特定するために、断片中に存在する500 bp以上のオ
ープンリーディングフレームの中から、既知のbio F遺
伝子、bio A遺伝子、bio D遺伝子、bio B遺伝子、bio C
遺伝子、とそれぞれ塩基配列の相同性の高いタンパク質
コーディング領域を選び出し、これらをスフィンゴモナ
ス属細菌の各遺伝子であると特定した。pBC01にはbio F
（配列番号３）が、pBC02にはbio D（配列番号１２）と
bio A（配列番号８）が、pBC03にはbio B（配列番号１
６）が、pBC04と pBC05には bio C（配列番号２２）
が、それぞれ含まれていた。また、独立して得られたpB
C01、pBC02の挿入断片の塩基配列を比較検討した結果、
pBC01と pBC02の挿入断片は染色体上ではひとつながり
のDNAであることが判明し、bio F、bio D、bio Aは一つ
のオペロンを形成していることが明らかになった。
【００２８】実施例２ ビオチン生合成に関与する遺伝
子の単離 （2-A）スフィンゴモナス・エスピーSC42405の染色体DN
Aの調製 LB培地（1% トリプトン、0.5% 酵母エキス、1% NaCl）2
00mlに、スフィンゴモナス・エスピーSC42405の1白金耳
を接種し、30℃で15時間振とう培養し、対数増殖期の菌
体を遠心分離（8000 rpm、10分間）により集めた。集め
られた菌体を20mlのAバッファー（25% ショ糖、50mM Tr
is-HCl(pH 8.0)）に懸濁し、2.5mlの塩化リゾチーム溶
液（50mg/ml）を加え、37℃で30分間保温した後、2.5ml
のSDS溶液（10%(v/v)）と 0.25mlのEDTA溶液（0.5M）を
加え、37℃で16時間保温した。次に、等量のTE飽和フェ
ノールを加え、ゆっくりとかき混ぜた後、遠心分離（1
0,000rpm、10分間）し、上層を回収することにより除タ
ンパクを行い、さらに該除タンパク操作を5回行った。
次に回収された上層に2倍容量のエタノールを加えてDNA
を沈殿させ、ガラス棒でDNAを巻きつけて回収し、70%
エタノールで洗浄した後、風乾し、20mlのTEバッファー
に溶解し、20μlのRNase（10mg/ml）を加えて、16時
間、37℃で保温した。こうして、スフィンゴモナス・エ
スピーSC42405の染色体DNA 約21mgを含むDNA溶液を得
た。
子の単離 （2-A）スフィンゴモナス・エスピーSC42405の染色体DN
Aの調製 LB培地（1% トリプトン、0.5% 酵母エキス、1% NaCl）2
00mlに、スフィンゴモナス・エスピーSC42405の1白金耳
を接種し、30℃で15時間振とう培養し、対数増殖期の菌
体を遠心分離（8000 rpm、10分間）により集めた。集め
られた菌体を20mlのAバッファー（25% ショ糖、50mM Tr
is-HCl(pH 8.0)）に懸濁し、2.5mlの塩化リゾチーム溶
液（50mg/ml）を加え、37℃で30分間保温した後、2.5ml
のSDS溶液（10%(v/v)）と 0.25mlのEDTA溶液（0.5M）を
加え、37℃で16時間保温した。次に、等量のTE飽和フェ
ノールを加え、ゆっくりとかき混ぜた後、遠心分離（1
0,000rpm、10分間）し、上層を回収することにより除タ
ンパクを行い、さらに該除タンパク操作を5回行った。
次に回収された上層に2倍容量のエタノールを加えてDNA
を沈殿させ、ガラス棒でDNAを巻きつけて回収し、70%
エタノールで洗浄した後、風乾し、20mlのTEバッファー
に溶解し、20μlのRNase（10mg/ml）を加えて、16時
間、37℃で保温した。こうして、スフィンゴモナス・エ
スピーSC42405の染色体DNA 約21mgを含むDNA溶液を得
た。
【００２９】（2-B）染色体DNAライブラリーの作製 （2-A）で得られた染色体DNA50 μgを 15 Uの制限酵素S
au 3AIで37℃、2.5分間処理して部分分解した。この部
分分解染色体DNA断片とプラスミドベクターpUC19（宝酒
造(株)製）を制限酵素Bam HIで切断した後、脱リン酸化
したものとを混合し、ライゲーションキット（宝酒造
(株)製）を用いて付属の説明書に従い、部分分解染色体
DNA断片とプラスミドベクターpUC19を結合させ種々のDN
A断片を含んだ組換えプラスミドを作製した。
au 3AIで37℃、2.5分間処理して部分分解した。この部
分分解染色体DNA断片とプラスミドベクターpUC19（宝酒
造(株)製）を制限酵素Bam HIで切断した後、脱リン酸化
したものとを混合し、ライゲーションキット（宝酒造
(株)製）を用いて付属の説明書に従い、部分分解染色体
DNA断片とプラスミドベクターpUC19を結合させ種々のDN
A断片を含んだ組換えプラスミドを作製した。
【００３０】（2-C）ビオチン生合成に関与する遺伝子
のDNA断片を含む組換えプラスミドの選抜 （2-B）で得られた組換えプラスミドをジーンパルサー
（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエレ
クトロポーレーション法（印加電圧18 kV/cm、キャパシ
タンス 25μF、抵抗 400Ω）により bio F欠損変異大腸
菌（R874）、bio A欠損変異大腸菌（R879）、bio B欠損
変異大腸菌（R875）、bio C欠損変異大腸菌（R876）の
それぞれの菌株（Journal of Bacteriology, vol.94, 2
065-2066(1972)、Journal of Bacteriology, vol. 112,
830-839 (1972)）に導入し、該菌株をビオチンを含ま
ない選択寒天培地（1.71% Na2HPO4-12H2O、0.3% KH2P
O4、0.05% NaCl、0.1% NH4Cl、0.005% アンピシリン、
0.2mM IPTG、1.5% 寒天）に塗布し、37℃、2日培養し
た。培地上で生育し、コロニーを形成した菌株を釣菌
し、LB培地を用いて 37℃、16時間培養し、アルカリ溶
解法（Molecular Cloning,2nd ed., Cold Spring Harbo
r Laboratory Press(1989)）によりプラスミドを抽出
し、該プラスミドを制限酵素により切断し、アガロース
ゲル電気泳動を用いて調べたところ、各欠損株に導入さ
れた組換えプラスミドは表４に示す大きさの挿入断片を
含んでいた。
のDNA断片を含む組換えプラスミドの選抜 （2-B）で得られた組換えプラスミドをジーンパルサー
（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエレ
クトロポーレーション法（印加電圧18 kV/cm、キャパシ
タンス 25μF、抵抗 400Ω）により bio F欠損変異大腸
菌（R874）、bio A欠損変異大腸菌（R879）、bio B欠損
変異大腸菌（R875）、bio C欠損変異大腸菌（R876）の
それぞれの菌株（Journal of Bacteriology, vol.94, 2
065-2066(1972)、Journal of Bacteriology, vol. 112,
830-839 (1972)）に導入し、該菌株をビオチンを含ま
ない選択寒天培地（1.71% Na2HPO4-12H2O、0.3% KH2P
O4、0.05% NaCl、0.1% NH4Cl、0.005% アンピシリン、
0.2mM IPTG、1.5% 寒天）に塗布し、37℃、2日培養し
た。培地上で生育し、コロニーを形成した菌株を釣菌
し、LB培地を用いて 37℃、16時間培養し、アルカリ溶
解法（Molecular Cloning,2nd ed., Cold Spring Harbo
r Laboratory Press(1989)）によりプラスミドを抽出
し、該プラスミドを制限酵素により切断し、アガロース
ゲル電気泳動を用いて調べたところ、各欠損株に導入さ
れた組換えプラスミドは表４に示す大きさの挿入断片を
含んでいた。
【００３１】
【表４】欠損株の生育を相補する組換えプラスミド
【００３２】（2-D）ビオチン生合成に関与する遺伝子
を含むDNA断片の塩基配列の解析 （2-C）で得られた組換えプラスミドpBC11、pBC12、pBC
13、pBC14、pBC15について、キロシークエンス用デリー
ションキット（宝酒造(株)製）を用いて以下に示す方法
で種々の大きさの挿入断片を含むデリーションクローン
を作製した。組換えプラスミドpBC11、pBC12、pBC13、p
BC14、pBC15の各 20μgをpBC11は XbaIと Sse 8387I、p
BC12およびpBC13はPst IとXba I、pBC14およびpBC15はX
ba IとKpn I、でそれぞれ切断し、フェノール抽出によ
り酵素を除いた後、エタノール沈澱によりDNAを沈澱さ
せた。得られた DNA を 100μl の Exo IIIバッファー
（50mM Tris-HCl(pH8.0), 100mM NaCl , 5mM MgCl2 , 1
0mM 2-メルカプトエタノール）に溶解し、180ユニット
のエキソヌクレアーゼ IIIを加えて撹拌し、37℃にてイ
ンキュベートした。この溶液を1分ごとに10μlずつサン
プリングし、氷冷した100μlのMBヌクレアーゼバッファ
ー（40 mM Na-acetate(pH4.5), 100mM NaCl, 2mM ZnC
l2, 10% グリセロール）中に混合し、65℃、5 分間の処
理によりエキソヌクレアーゼIIIを失活させた。この溶
液を37℃にもどした後、50 ユニットのMBヌクレアーゼ
を加え、60 分間インキュベートし、フェノール抽出に
より酵素を除いた後、エタノール沈澱によりDNAを沈澱
させた。得られたDNAを、50μlのクレノーバッファー
（7mM Tris-HCl (pH7.5), 0.1mM EDTA, 20mM NaCl, 7mM
MgCl2, dNTP 各 0.1mM）に溶解し、2 ユニットのクレ
ノーフラグメントを加え、37℃で 15分間インキュベー
トした。この溶液の10μlを100 μlのライゲーションソ
リューションAに加え、さらに12μlの ライゲーション
ソリューションBを加えて、16℃で1時間インキュベート
した後、エタノール沈殿によりDNAを濃縮し、5μlの滅
菌水に溶解して、それを大腸菌 JM109に導入し、アンピ
シリン（0.005%）を含む LB寒天培地（1% トリプトン、
0.5% 酵母エキス、1% NaCl、1.5% 寒天）に塗布して、3
7℃で16時間培養した。生育したコロニーからプラスミ
ドを抽出して挿入DNA断片の大きさを調べ、pBC11のデリ
ーションクローンとしては約250bpずつ大きさの異なる2
50 bp〜2.3 kbpの挿入断片を有する9クローン、pBC12の
デリーションクローンとしては約250 bpずつ大きさの異
なる250 bp〜2.2 kbpの挿入断片を有する8クローン、pB
C13のデリーションクローンとしては約250bpずつ大きさ
の異なる250 bp〜2.6 kbpの挿入断片を有する10クロー
ン、pBC14のデリーションクローンとしては約250 bpず
つ大きさの異なる250 bp 〜1.9 kbpの挿入断片を有する
8クローン、pBC15のデリーションクローンとしては約 2
50 bpずつ大きさの異なる250 bp〜2.0 kbpの挿入断片を
有する8クローン、をそれぞれ選抜した。各デリーショ
ンクローンは、アルカリ溶解法（Molecular Cloning, 2
nd ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)）
により抽出し、300 ngを鋳型にし、M13プライマーM4
（宝酒造(株)製）またはM13プライマーRV（宝酒造(株)
製）をプライマーに用いてABIプリズムダイターミネー
ターサイクルシークエンシングレディーリアクションキ
ット（パーキンエルマー社製）によりシークエンス反応
を行い、自動塩基配列解析装置373A（パーキンエルマー
社製）を用いて塩基配列を解析した。各組換えプラスミ
ドの挿入断片の塩基配列の中からビオチン生合成に関与
する遺伝子遺伝子を特定するために、断片中に存在する
500 bp 以上のオープンリーディングフレームの中か
ら、既知のbio F遺伝子、bio A遺伝子、bio D遺伝子、b
ioB遺伝子、bio C遺伝子と、それぞれ塩基配列の相同性
の高いタンパク質コーディング領域を選び出し、これら
をスフィンゴモナス属細菌の各遺伝子であると特定し
た。pBC11には bio F（配列番号４）が、pBC12と pBC13
には bio D （配列番号１３）と bio A（配列番号９）
が、pBC14には bio B（配列番号１７）が、pBC15には b
io C（配列番号２３）が、それぞれ含まれていた。独立
して得られたpBC12、pBC13、pBC15の挿入断片の塩基配
列を比較検討した結果、pBC12、pBC13、pBC15の挿入断
片は染色体上ではひとつながりのDNAであり、bio Cの終
止コドンTGAとbio Dの開始コドンATGが塩基配列TGにお
いて重なり、またbio Dの終止コドンTGAとbio Aの開始
コドンATGが塩基配列TGにおいて重なり、bio C、bio D
、bio Aが一つのオペロンを形成していることが明らか
になった。
を含むDNA断片の塩基配列の解析 （2-C）で得られた組換えプラスミドpBC11、pBC12、pBC
13、pBC14、pBC15について、キロシークエンス用デリー
ションキット（宝酒造(株)製）を用いて以下に示す方法
で種々の大きさの挿入断片を含むデリーションクローン
を作製した。組換えプラスミドpBC11、pBC12、pBC13、p
BC14、pBC15の各 20μgをpBC11は XbaIと Sse 8387I、p
BC12およびpBC13はPst IとXba I、pBC14およびpBC15はX
ba IとKpn I、でそれぞれ切断し、フェノール抽出によ
り酵素を除いた後、エタノール沈澱によりDNAを沈澱さ
せた。得られた DNA を 100μl の Exo IIIバッファー
（50mM Tris-HCl(pH8.0), 100mM NaCl , 5mM MgCl2 , 1
0mM 2-メルカプトエタノール）に溶解し、180ユニット
のエキソヌクレアーゼ IIIを加えて撹拌し、37℃にてイ
ンキュベートした。この溶液を1分ごとに10μlずつサン
プリングし、氷冷した100μlのMBヌクレアーゼバッファ
ー（40 mM Na-acetate(pH4.5), 100mM NaCl, 2mM ZnC
l2, 10% グリセロール）中に混合し、65℃、5 分間の処
理によりエキソヌクレアーゼIIIを失活させた。この溶
液を37℃にもどした後、50 ユニットのMBヌクレアーゼ
を加え、60 分間インキュベートし、フェノール抽出に
より酵素を除いた後、エタノール沈澱によりDNAを沈澱
させた。得られたDNAを、50μlのクレノーバッファー
（7mM Tris-HCl (pH7.5), 0.1mM EDTA, 20mM NaCl, 7mM
MgCl2, dNTP 各 0.1mM）に溶解し、2 ユニットのクレ
ノーフラグメントを加え、37℃で 15分間インキュベー
トした。この溶液の10μlを100 μlのライゲーションソ
リューションAに加え、さらに12μlの ライゲーション
ソリューションBを加えて、16℃で1時間インキュベート
した後、エタノール沈殿によりDNAを濃縮し、5μlの滅
菌水に溶解して、それを大腸菌 JM109に導入し、アンピ
シリン（0.005%）を含む LB寒天培地（1% トリプトン、
0.5% 酵母エキス、1% NaCl、1.5% 寒天）に塗布して、3
7℃で16時間培養した。生育したコロニーからプラスミ
ドを抽出して挿入DNA断片の大きさを調べ、pBC11のデリ
ーションクローンとしては約250bpずつ大きさの異なる2
50 bp〜2.3 kbpの挿入断片を有する9クローン、pBC12の
デリーションクローンとしては約250 bpずつ大きさの異
なる250 bp〜2.2 kbpの挿入断片を有する8クローン、pB
C13のデリーションクローンとしては約250bpずつ大きさ
の異なる250 bp〜2.6 kbpの挿入断片を有する10クロー
ン、pBC14のデリーションクローンとしては約250 bpず
つ大きさの異なる250 bp 〜1.9 kbpの挿入断片を有する
8クローン、pBC15のデリーションクローンとしては約 2
50 bpずつ大きさの異なる250 bp〜2.0 kbpの挿入断片を
有する8クローン、をそれぞれ選抜した。各デリーショ
ンクローンは、アルカリ溶解法（Molecular Cloning, 2
nd ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)）
により抽出し、300 ngを鋳型にし、M13プライマーM4
（宝酒造(株)製）またはM13プライマーRV（宝酒造(株)
製）をプライマーに用いてABIプリズムダイターミネー
ターサイクルシークエンシングレディーリアクションキ
ット（パーキンエルマー社製）によりシークエンス反応
を行い、自動塩基配列解析装置373A（パーキンエルマー
社製）を用いて塩基配列を解析した。各組換えプラスミ
ドの挿入断片の塩基配列の中からビオチン生合成に関与
する遺伝子遺伝子を特定するために、断片中に存在する
500 bp 以上のオープンリーディングフレームの中か
ら、既知のbio F遺伝子、bio A遺伝子、bio D遺伝子、b
ioB遺伝子、bio C遺伝子と、それぞれ塩基配列の相同性
の高いタンパク質コーディング領域を選び出し、これら
をスフィンゴモナス属細菌の各遺伝子であると特定し
た。pBC11には bio F（配列番号４）が、pBC12と pBC13
には bio D （配列番号１３）と bio A（配列番号９）
が、pBC14には bio B（配列番号１７）が、pBC15には b
io C（配列番号２３）が、それぞれ含まれていた。独立
して得られたpBC12、pBC13、pBC15の挿入断片の塩基配
列を比較検討した結果、pBC12、pBC13、pBC15の挿入断
片は染色体上ではひとつながりのDNAであり、bio Cの終
止コドンTGAとbio Dの開始コドンATGが塩基配列TGにお
いて重なり、またbio Dの終止コドンTGAとbio Aの開始
コドンATGが塩基配列TGにおいて重なり、bio C、bio D
、bio Aが一つのオペロンを形成していることが明らか
になった。
【００３３】実施例３ 組換えプラスミド pJAWの作製 （E）プラスミドベクターpJAβ2の作製 プラスミドベクターRK2由来のプラスミドベクターpJAJ7
（Journal of Bacteriology, vol. 162, 604-614 (198
6)）1μgを制限酵素Pst IとBam HIで切断し、DNAブラン
ティングキット（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書
に従い切断末端の平滑化を行った。それらをアガロース
ゲル電気泳動により分離し、約10 kbpのDNA断片を単離
した。また、プラスミドベクター pBluescript SK(+)
（ストラタジーンクローニングシステムズ製）2μgを制
限酵素Hae IIIで切断し、DNAブランティングキット（宝
酒造(株)製）を用いて付属の説明書に従い切断末端の平
滑化を行った。それらをアガロースゲル電気泳動により
分離し、約0.7 kbpのDNA断片を単離した。こうして得ら
れた約10 kbpのDNA断片と約0.7 kbpのDNA断片全量を混
合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて
付属の説明書に従い、これらのDNA断片を結合させ、得
られたプラスミドを pJAβ2（図１）と命名した。
（Journal of Bacteriology, vol. 162, 604-614 (198
6)）1μgを制限酵素Pst IとBam HIで切断し、DNAブラン
ティングキット（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書
に従い切断末端の平滑化を行った。それらをアガロース
ゲル電気泳動により分離し、約10 kbpのDNA断片を単離
した。また、プラスミドベクター pBluescript SK(+)
（ストラタジーンクローニングシステムズ製）2μgを制
限酵素Hae IIIで切断し、DNAブランティングキット（宝
酒造(株)製）を用いて付属の説明書に従い切断末端の平
滑化を行った。それらをアガロースゲル電気泳動により
分離し、約0.7 kbpのDNA断片を単離した。こうして得ら
れた約10 kbpのDNA断片と約0.7 kbpのDNA断片全量を混
合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて
付属の説明書に従い、これらのDNA断片を結合させ、得
られたプラスミドを pJAβ2（図１）と命名した。
【００３４】（F）プラスミドpJAWの作製 実施例１（1-A）で得られた染色体DNAを鋳型に、表５に
示すプライマー BF とBR を用いてPCR（反応組成：10mM
Tris-HCl(pH8.8), 10mM KCl, 0.002(v/v)% Tween 20,
1.5mM MgCl2, 40μM 各 dNTP, 20pmol 各プライマー ,
0.5〜100 ng染色体DNA, 3U UlTmaTMDNApolymerase（パ
ーキンエルマー社製）/100μl、反応サイクル：97℃で2
分間保温した後、97℃で1分間次いで55℃で1分間さらに
72℃で1.5分間の保温を30サイクル行い、さらに、72℃
で7分間保温）を行ない、bioBのコーディング領域の上
流145 bpからコーディング領域の下流154 bpまでの合計
1325 bpを含み、その両端にXba I部位が導入されたDNA
断片を調製した。このDNA断片を制限酵素Xba Iで切断し
たDNA断片と、プラスミドベクター pJAβ2を制限酵素 X
ba Iで切断し脱リン酸化して得たDNA断片を混合し、こ
れらをライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて
付属の説明書に従い結合させ、得られたプラスミドをpJ
AW（図２）と命名した。
示すプライマー BF とBR を用いてPCR（反応組成：10mM
Tris-HCl(pH8.8), 10mM KCl, 0.002(v/v)% Tween 20,
1.5mM MgCl2, 40μM 各 dNTP, 20pmol 各プライマー ,
0.5〜100 ng染色体DNA, 3U UlTmaTMDNApolymerase（パ
ーキンエルマー社製）/100μl、反応サイクル：97℃で2
分間保温した後、97℃で1分間次いで55℃で1分間さらに
72℃で1.5分間の保温を30サイクル行い、さらに、72℃
で7分間保温）を行ない、bioBのコーディング領域の上
流145 bpからコーディング領域の下流154 bpまでの合計
1325 bpを含み、その両端にXba I部位が導入されたDNA
断片を調製した。このDNA断片を制限酵素Xba Iで切断し
たDNA断片と、プラスミドベクター pJAβ2を制限酵素 X
ba Iで切断し脱リン酸化して得たDNA断片を混合し、こ
れらをライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて
付属の説明書に従い結合させ、得られたプラスミドをpJ
AW（図２）と命名した。
【００３５】
【表５】 ＰＣＲプライマー
【００３６】実施例４ pJAWを導入した形質転換体の作
製 実施例３で得られたプラスミド pJAW をジーンパルサー
（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエレ
クトロポーレーション法（印加電圧 18 kV/cm、キャパ
シタンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィンゴモナス
・ポウシモビルスJCM7511に導入し、形質転換体である
スフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pJAWを得
た。
製 実施例３で得られたプラスミド pJAW をジーンパルサー
（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエレ
クトロポーレーション法（印加電圧 18 kV/cm、キャパ
シタンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィンゴモナス
・ポウシモビルスJCM7511に導入し、形質転換体である
スフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pJAWを得
た。
【００３７】実施例５ 組換えプラスミド pJA41の作製 実施例３で得られたプラスミドpJAWを制限酵素Eco 52I
とBsp 1286Iで部分分解して得られたDNA断片をアガロー
スゲル電気泳動で分離し、bio Bの開始コドンATGのAを+
1としたときの-72塩基目から718塩基目の塩基配列をpJA
Wから欠失させた約11.8 kbpのDNA断片を回収した。一方
で、実施例１（1-A）で得られた染色体DNAを鋳型に、表
５に示すプライマーBF1とBR1を用いてPCR（反応組成：1
0mM Tris-HCl(pH8.8) , 10mM KCl , 0.002(v/v)% Tween
20 ,1.5mM MgCl2 ,40μM 各 dNTP, 20 pmol 各プライ
マー , 0.5〜100ng 染色体DNA , 3 U UlTmaTMDNApolyme
rase（パーキンエルマー社製）/100 μl、反応サイク
ル：97℃で1分間保温した後、97℃で0.5分間次いで60℃
で1分間さらに72℃で1.5分間の保温を30サイクル行い、
さらに、72℃で7分間保温）を行ない、bio Bの翻訳開始
コドンのATGを+1としたときの-75塩基目から721塩基目
の塩基配列を有するDNA断片を調製した。次いで、このD
NA断片を制限酵素Eco 52IとBsp 1286Iで部分分解して得
られたDNA断片をアガロースゲル電気泳動で分離し、約
0.8 kbp のDNA断片を回収した。得られたDNA断片の塩基
配列を分析したところ、配列番号１９の塩基番号1〜133
6に示される塩基配列が確認された。こうして得られたD
NA断片をライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用い
て付属の説明書に従い結合させ、得られたプラスミドを
pJA41（図３）と命名した。
とBsp 1286Iで部分分解して得られたDNA断片をアガロー
スゲル電気泳動で分離し、bio Bの開始コドンATGのAを+
1としたときの-72塩基目から718塩基目の塩基配列をpJA
Wから欠失させた約11.8 kbpのDNA断片を回収した。一方
で、実施例１（1-A）で得られた染色体DNAを鋳型に、表
５に示すプライマーBF1とBR1を用いてPCR（反応組成：1
0mM Tris-HCl(pH8.8) , 10mM KCl , 0.002(v/v)% Tween
20 ,1.5mM MgCl2 ,40μM 各 dNTP, 20 pmol 各プライ
マー , 0.5〜100ng 染色体DNA , 3 U UlTmaTMDNApolyme
rase（パーキンエルマー社製）/100 μl、反応サイク
ル：97℃で1分間保温した後、97℃で0.5分間次いで60℃
で1分間さらに72℃で1.5分間の保温を30サイクル行い、
さらに、72℃で7分間保温）を行ない、bio Bの翻訳開始
コドンのATGを+1としたときの-75塩基目から721塩基目
の塩基配列を有するDNA断片を調製した。次いで、このD
NA断片を制限酵素Eco 52IとBsp 1286Iで部分分解して得
られたDNA断片をアガロースゲル電気泳動で分離し、約
0.8 kbp のDNA断片を回収した。得られたDNA断片の塩基
配列を分析したところ、配列番号１９の塩基番号1〜133
6に示される塩基配列が確認された。こうして得られたD
NA断片をライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用い
て付属の説明書に従い結合させ、得られたプラスミドを
pJA41（図３）と命名した。
【００３８】実施例６ pJA41を導入した形質転換体の
作製 実施例５で得られたプラスミドpJA41をジーンパルサー
（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエレ
クトロポーレーション法（印加電圧 18 kV/cm、キャパ
シタンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィンゴモナス
・ポウシモビルスJCM7511に導入し、スフィンゴモナス
・ポウシモビルスJCM7511/pJA41を得た。
作製 実施例５で得られたプラスミドpJA41をジーンパルサー
（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエレ
クトロポーレーション法（印加電圧 18 kV/cm、キャパ
シタンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィンゴモナス
・ポウシモビルスJCM7511に導入し、スフィンゴモナス
・ポウシモビルスJCM7511/pJA41を得た。
【００３９】実施例７ スフィンゴモナス・ポウシモビ
ルスJCM7511/pJAW、pJA41 のビオチン生産性 スフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pJAWとスフ
ィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pJA41の１白金
耳を小型試験管（18×150mm）に入れた3ml の培地（1%
グリセロール、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgS
O4・7H2O、0.005%テトラサイクリン(pH7.2)）にそれぞれ
植菌した。また対照として、遺伝子を導入していないス
フィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511の１白金耳を
小型試験管（18×150mm）に入れた3 mlの培地（1% グリ
セロール、2% ペプトン、0.15% K 2HPO4、0.15% MgSO4・7
H2O(pH7.2)）に植菌した。これら3種の菌を 30℃で２日
間培養（250 rpm）して、前培養液とした。こうして得
られたスフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pJAW
とスフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pJA41の
前培養液200μlを大型試験管（22×220mm）に入れた10
mlの培地（4% グリセロール、2% 酵母エキス、0.5% カ
ザミノ酸、0.1% K2HPO4、0.05% KCl、0.05% MgSO4-7H
2O、0.001% FeSO4-7H2O、0.001% MnSO4-4〜6H2O、0.000
002% チアミンHCl、0.005% テトラサイクリン(pH7.0)）
にそれぞれ植菌した。また対照として、スフィンゴモナ
ス・ポウシモビルスJCM7511の前培養液200μlを大型試
験管（22×220mm）に入れた10mlの培地（4% グリセロー
ル、2% 酵母エキス、0.5% カザミノ酸、0.1% K2HPO4、
0.05% KCl、0.05% MgSO4-7H2O、0.001% FeSO4-7H2O、0.
001%MnSO4-4〜6H2O、0.000002% チアミンHCl(pH7.0)）
に植菌した。これら3種の菌を30℃で4日間培養した（25
0 rpm）。それぞれの培養液中に生成蓄積したビオチン
の濃度を、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacil
lus plantarum）IFO 3070株を用いた微生物学的定量法
（和泉と山田、ビタミン学実験法II. 水溶性ビタミン.
p.481-499、日本ビタミン学会編、東京化学同人、198
5）により定量したところ生成したビオチンの濃度は表
６に示す通りであった。
ルスJCM7511/pJAW、pJA41 のビオチン生産性 スフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pJAWとスフ
ィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pJA41の１白金
耳を小型試験管（18×150mm）に入れた3ml の培地（1%
グリセロール、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgS
O4・7H2O、0.005%テトラサイクリン(pH7.2)）にそれぞれ
植菌した。また対照として、遺伝子を導入していないス
フィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511の１白金耳を
小型試験管（18×150mm）に入れた3 mlの培地（1% グリ
セロール、2% ペプトン、0.15% K 2HPO4、0.15% MgSO4・7
H2O(pH7.2)）に植菌した。これら3種の菌を 30℃で２日
間培養（250 rpm）して、前培養液とした。こうして得
られたスフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pJAW
とスフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pJA41の
前培養液200μlを大型試験管（22×220mm）に入れた10
mlの培地（4% グリセロール、2% 酵母エキス、0.5% カ
ザミノ酸、0.1% K2HPO4、0.05% KCl、0.05% MgSO4-7H
2O、0.001% FeSO4-7H2O、0.001% MnSO4-4〜6H2O、0.000
002% チアミンHCl、0.005% テトラサイクリン(pH7.0)）
にそれぞれ植菌した。また対照として、スフィンゴモナ
ス・ポウシモビルスJCM7511の前培養液200μlを大型試
験管（22×220mm）に入れた10mlの培地（4% グリセロー
ル、2% 酵母エキス、0.5% カザミノ酸、0.1% K2HPO4、
0.05% KCl、0.05% MgSO4-7H2O、0.001% FeSO4-7H2O、0.
001%MnSO4-4〜6H2O、0.000002% チアミンHCl(pH7.0)）
に植菌した。これら3種の菌を30℃で4日間培養した（25
0 rpm）。それぞれの培養液中に生成蓄積したビオチン
の濃度を、ラクトバシラス・プランタルム（Lactobacil
lus plantarum）IFO 3070株を用いた微生物学的定量法
（和泉と山田、ビタミン学実験法II. 水溶性ビタミン.
p.481-499、日本ビタミン学会編、東京化学同人、198
5）により定量したところ生成したビオチンの濃度は表
６に示す通りであった。
【００４０】
【表６】 ＊遺伝子を導入していない株との比較で表した値
【００４１】実施例８ 組換えプラスミドpSP302の作製 実施例１で得られたプラスミドpBC01を制限酵素Bam HI
とPst Iで切断し、得られたDNA断片をアガロースゲル電
気泳動で分離することにより、bio Fの上流にあるbio
F、bio D、bio Aの発現を制御する領域と、bio Fのコー
ディング領域の大部分とを含む、約1.4 kbpのDNA断片を
得た。こうして得られたDNA断片と、制限酵素Bam HIとP
st Iで切断したプラスミドベクター pBluescript SKII
(+)（ストラタジーンクローニングシステムズ製）を混
合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて
付属の説明書に従い、これらのDNA断片を結合させ、得
られたプラスミドをpBC06と命名した。また、実施例１
で得られたプラスミドpBC02を制限酵素Pst IとEco RIで
切断し、得られたDNA断片をアガロースゲル電気泳動で
分離することにより、bio Fのコーディング領域の一部
分と、bio Dとbio Aのコーディング領域と、bio Aの下
流にあるbio F、bio D、bio Aの３’-非翻訳領域とを含
む、約2.2 kbpのDNA断片を得た。こうして得られたDNA
断片と、制限酵素Pst IとEco RIで切断したプラスミドp
BC06を混合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）
を用いて付属の説明書に従い、これらのDNA断片を結合
させ、得られたプラスミドをpSP105と命名した。さら
に、プラスミドpSP105を制限酵素Bam HIとHind IIIで切
断し、得られたDNA断片をアガロースゲル電気泳動で分
離することにより、bio F、bio D、bio Aのコーディン
グ領域と、bio F、bio D、bio Aの発現を制御する領域
を含む、約 3.6 kbpのDNA断片を得た。こうして得られ
たDNA断片と、制限酵素Bam HIとHind IIIで切断したプ
ラスミドpJA41を混合し、ライゲーションキット（宝酒
造(株)製）を用いて付属の説明書に従い、これらのDNA
断片を結合させ、得られたプラスミドをpSP302（図４）
と命名した。
とPst Iで切断し、得られたDNA断片をアガロースゲル電
気泳動で分離することにより、bio Fの上流にあるbio
F、bio D、bio Aの発現を制御する領域と、bio Fのコー
ディング領域の大部分とを含む、約1.4 kbpのDNA断片を
得た。こうして得られたDNA断片と、制限酵素Bam HIとP
st Iで切断したプラスミドベクター pBluescript SKII
(+)（ストラタジーンクローニングシステムズ製）を混
合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて
付属の説明書に従い、これらのDNA断片を結合させ、得
られたプラスミドをpBC06と命名した。また、実施例１
で得られたプラスミドpBC02を制限酵素Pst IとEco RIで
切断し、得られたDNA断片をアガロースゲル電気泳動で
分離することにより、bio Fのコーディング領域の一部
分と、bio Dとbio Aのコーディング領域と、bio Aの下
流にあるbio F、bio D、bio Aの３’-非翻訳領域とを含
む、約2.2 kbpのDNA断片を得た。こうして得られたDNA
断片と、制限酵素Pst IとEco RIで切断したプラスミドp
BC06を混合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）
を用いて付属の説明書に従い、これらのDNA断片を結合
させ、得られたプラスミドをpSP105と命名した。さら
に、プラスミドpSP105を制限酵素Bam HIとHind IIIで切
断し、得られたDNA断片をアガロースゲル電気泳動で分
離することにより、bio F、bio D、bio Aのコーディン
グ領域と、bio F、bio D、bio Aの発現を制御する領域
を含む、約 3.6 kbpのDNA断片を得た。こうして得られ
たDNA断片と、制限酵素Bam HIとHind IIIで切断したプ
ラスミドpJA41を混合し、ライゲーションキット（宝酒
造(株)製）を用いて付属の説明書に従い、これらのDNA
断片を結合させ、得られたプラスミドをpSP302（図４）
と命名した。
【００４２】実施例９ pSP302を導入した形質転換体の
作製 実施例８で得られたプラスミドpSP302をジーンパルサー
（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエレ
クトロポーレーション法（印加電圧 18kV/cm、キャパシ
タンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィンゴモナス・
ポウシモビルスJCM7511に導入し、スフィンゴモナス・
ポウシモビルスJCM7511/pSP302を得た。
作製 実施例８で得られたプラスミドpSP302をジーンパルサー
（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエレ
クトロポーレーション法（印加電圧 18kV/cm、キャパシ
タンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィンゴモナス・
ポウシモビルスJCM7511に導入し、スフィンゴモナス・
ポウシモビルスJCM7511/pSP302を得た。
【００４３】実施例１０ 組換えプラスミドpSP304の作
製 実施例１（1-A）で得られた染色体DNAを鋳型に、表５に
示すプライマー C1とC6を用いてPCRを行ない、bio Cの
コーディング領域の上流387 bpからコーディング領域の
下流196 bpまでの合計1435 bpを含み、その上流側の末
端にHind III部位が、下流側の末端にXho I部位が導入
されたDNA断片を調製した。このDNA断片を制限酵素Hind
IIIとXho Iで切断した断片と、プラスミドpSP302を制
限酵素Hind IIIとXho Iで切断して得られたDNA断片を混
合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて
付属の説明書に従いこれらを結合させ、得られたプラス
ミドをpSP304（図５）と命名した。
製 実施例１（1-A）で得られた染色体DNAを鋳型に、表５に
示すプライマー C1とC6を用いてPCRを行ない、bio Cの
コーディング領域の上流387 bpからコーディング領域の
下流196 bpまでの合計1435 bpを含み、その上流側の末
端にHind III部位が、下流側の末端にXho I部位が導入
されたDNA断片を調製した。このDNA断片を制限酵素Hind
IIIとXho Iで切断した断片と、プラスミドpSP302を制
限酵素Hind IIIとXho Iで切断して得られたDNA断片を混
合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて
付属の説明書に従いこれらを結合させ、得られたプラス
ミドをpSP304（図５）と命名した。
【００４４】実施例１１ pSP304を導入した形質転換体
の作製 実施例１０で得られたプラスミドpSP304をジーンパルサ
ー（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエ
レクトロポーレーション法（印加電圧 18 kV/cm、キャ
パシタンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィンゴモナ
ス・ポウシモビルスJCM7511に導入し、スフィンゴモナ
ス・ポウシモビルスJCM7511/pSP304を得た。
の作製 実施例１０で得られたプラスミドpSP304をジーンパルサ
ー（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエ
レクトロポーレーション法（印加電圧 18 kV/cm、キャ
パシタンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィンゴモナ
ス・ポウシモビルスJCM7511に導入し、スフィンゴモナ
ス・ポウシモビルスJCM7511/pSP304を得た。
【００４５】実施例１２ スフィンゴモナス・ポウシモ
ビルスJCM7511 pSP302、pSP304のビオチン生産性 スフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pSP302とス
フィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pSP304の１白
金耳を小型試験管（18×150mm）に入れた3mlの培地（1%
グリセロール、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% Mg
SO4・7H2O、0.005% テトラサイクリン(pH7.2)）に植菌し
た。また対照として、遺伝子を導入していないスフィン
ゴモナス・ポウシモビルスJCM7511の１白金耳を小型試
験管（18×150mm）に入れた3mlの培地（1% グリセロー
ル、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgSO4・7H2O(pH
7.2)）にそれぞれ植菌した。これら3種の菌を30℃で２
日間培養（250 rpm）して、前培養液とした。こうして
得られたスフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pS
P302とスフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pSP3
04の前培養液200μlを大型試験管（22×220mm）に入れ
た10mlの培地（4% グリセロール、2% 酵母エキス、0.5%
カザミノ酸、0.1% K2HPO4、0.05% KCl、0.05%MgSO4-7H
2O、0.001% FeSO4-7H2O、0.001% MnSO4-4〜6H2O、0.005
% テトラサイクリン(pH7.0)）にそれぞれ植菌した。ま
た対照として、スフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7
511の前培養液200μlを大型試験管（22×220mm）に入れ
た10mlの培地（4% グリセロール、2% 酵母エキス、0.5%
カザミノ酸、0.1% K2HPO4、0.05% KCl、0.05% MgSO4-7
H2O、0.001% FeSO4-7H2O、0.001% MnSO4-4〜6H2O(pH7.
0)）に植菌した。これら3種の菌を30℃で4日間培養した
（250 rpm）。それぞれの培養液中に生成蓄積したビオ
チンの濃度を、ラクトバシラス・プランタルム（Lactob
acillus plantarum）IFO 3070株を用いた微生物学的定
量法（和泉と山田、ビタミン学実験法II. 水溶性ビタミ
ン. p.481-499、日本ビタミン学会編、東京化学同人、1
985）により定量したところ生成したビオチンの濃度
は、表７に示す通りであった。
ビルスJCM7511 pSP302、pSP304のビオチン生産性 スフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pSP302とス
フィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pSP304の１白
金耳を小型試験管（18×150mm）に入れた3mlの培地（1%
グリセロール、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% Mg
SO4・7H2O、0.005% テトラサイクリン(pH7.2)）に植菌し
た。また対照として、遺伝子を導入していないスフィン
ゴモナス・ポウシモビルスJCM7511の１白金耳を小型試
験管（18×150mm）に入れた3mlの培地（1% グリセロー
ル、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgSO4・7H2O(pH
7.2)）にそれぞれ植菌した。これら3種の菌を30℃で２
日間培養（250 rpm）して、前培養液とした。こうして
得られたスフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pS
P302とスフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pSP3
04の前培養液200μlを大型試験管（22×220mm）に入れ
た10mlの培地（4% グリセロール、2% 酵母エキス、0.5%
カザミノ酸、0.1% K2HPO4、0.05% KCl、0.05%MgSO4-7H
2O、0.001% FeSO4-7H2O、0.001% MnSO4-4〜6H2O、0.005
% テトラサイクリン(pH7.0)）にそれぞれ植菌した。ま
た対照として、スフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7
511の前培養液200μlを大型試験管（22×220mm）に入れ
た10mlの培地（4% グリセロール、2% 酵母エキス、0.5%
カザミノ酸、0.1% K2HPO4、0.05% KCl、0.05% MgSO4-7
H2O、0.001% FeSO4-7H2O、0.001% MnSO4-4〜6H2O(pH7.
0)）に植菌した。これら3種の菌を30℃で4日間培養した
（250 rpm）。それぞれの培養液中に生成蓄積したビオ
チンの濃度を、ラクトバシラス・プランタルム（Lactob
acillus plantarum）IFO 3070株を用いた微生物学的定
量法（和泉と山田、ビタミン学実験法II. 水溶性ビタミ
ン. p.481-499、日本ビタミン学会編、東京化学同人、1
985）により定量したところ生成したビオチンの濃度
は、表７に示す通りであった。
【００４６】
【表７】スフィンゴモナス・ポウシモビルスJCM7511/pS
P302、pSP305、pSP304 のビオチン生産性 ＊遺伝子を導入していない株との比較で表した値
P302、pSP305、pSP304 のビオチン生産性 ＊遺伝子を導入していない株との比較で表した値
【００４７】実施例１３ 組換えプラスミドpSS301の作
製 実施例２（２-A）で得られた染色体DNAを鋳型に、表８
に示すプライマー BF4とBR4を用いてPCR（反応組成：1
×Expand HF バッファー, 1.5mM MgCl2, 200μM各 dNT
P, 300 nM 各プライマー, 0.5〜100 ng 染色体DNA, 2.6
U ExpandTMhighfidelity PCR System 酵素ミックス（ベ
ーリンガーマンハイム(株)製）/50 μl、反応サイク
ル：97℃で2分間保温した後、97℃で15秒間次いで60℃
で30秒間さらに72℃で1.5分間の保温を10サイクル行
い、さらに、97℃で15秒間次いで60℃で30秒間さらに72
℃で1.5分間(1サイクルごとに20秒ずつ増加して)の保温
を15サイクル行い、最後に72℃で7分間保温）を行な
い、bio Bのコーディング領域の上流151 bpからコーデ
ィング領域の下流151 bpまでの合計1358 bpを含み、そ
の両端にXba I部位が導入されたDNA断片を調製した。こ
のDNA断片を制限酵素Xba Iで切断した断片と、プラス
ミドベクター pJAβ2を制限酵素Xba Iで切断し脱リン酸
化したDNA断片を混合し、ライゲーションキット（宝酒
造(株)製）を用いて付属の説明書に従いこれらを結合さ
せ、得られたプラスミドを pSS301（図６）と命名し
た。
製 実施例２（２-A）で得られた染色体DNAを鋳型に、表８
に示すプライマー BF4とBR4を用いてPCR（反応組成：1
×Expand HF バッファー, 1.5mM MgCl2, 200μM各 dNT
P, 300 nM 各プライマー, 0.5〜100 ng 染色体DNA, 2.6
U ExpandTMhighfidelity PCR System 酵素ミックス（ベ
ーリンガーマンハイム(株)製）/50 μl、反応サイク
ル：97℃で2分間保温した後、97℃で15秒間次いで60℃
で30秒間さらに72℃で1.5分間の保温を10サイクル行
い、さらに、97℃で15秒間次いで60℃で30秒間さらに72
℃で1.5分間(1サイクルごとに20秒ずつ増加して)の保温
を15サイクル行い、最後に72℃で7分間保温）を行な
い、bio Bのコーディング領域の上流151 bpからコーデ
ィング領域の下流151 bpまでの合計1358 bpを含み、そ
の両端にXba I部位が導入されたDNA断片を調製した。こ
のDNA断片を制限酵素Xba Iで切断した断片と、プラス
ミドベクター pJAβ2を制限酵素Xba Iで切断し脱リン酸
化したDNA断片を混合し、ライゲーションキット（宝酒
造(株)製）を用いて付属の説明書に従いこれらを結合さ
せ、得られたプラスミドを pSS301（図６）と命名し
た。
【００４８】
【表８】
【００４９】実施例１４ pSS301を導入した形質転換体
の作製 実施例１３で得られたプラスミドpSS301をジーンパルサ
ー（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエ
レクトロポーレーション法（印加電圧 18 kV/cm、キャ
パシタンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィンゴモナ
ス・エスピーSC42405に導入し、形質転換体であるスフ
ィンゴモナス・エスピー SC42405/pSS301を得た。
の作製 実施例１３で得られたプラスミドpSS301をジーンパルサ
ー（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いてエ
レクトロポーレーション法（印加電圧 18 kV/cm、キャ
パシタンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィンゴモナ
ス・エスピーSC42405に導入し、形質転換体であるスフ
ィンゴモナス・エスピー SC42405/pSS301を得た。
【００５０】実施例１５ スフィンゴモナス・エスピー
SC42405/pSS301 のビオチン生産性 スフィンゴモナス・エスピー SC42405/pSS301の１白金
耳を、小型試験管（18×150mm）に入れた3 ml の培地
（1% グリセロール、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15
% MgSO4・7H2O、0.005% テトラサイクリン(pH7.2)）に植
菌した。また対照として、遺伝子を導入していないスフ
ィンゴモナス・エスピーSC42405 の１白金耳を、小型試
験管（18x150mm）に入れた3mlの培地（1% グリセロー
ル、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgSO4・7H2O(pH
7.2)）に植菌した。これら2種の菌を30℃で２日間培養
（250 rpm）して、前培養液とした。こうして得られた
スフィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS301の前培養液
160μlを、大型試験管（22×220mm）に入れた8mlの培地
（6% グリセロール、2% 酵母エキス、0.5% カザミノ
酸、0.1% K2HPO4、0.05% KCl、0.05% MgSO4・7H2O、0.01%
FeSO4・7H2O、0.1% MnSO4-4〜6H2O、0.005% テトラサイ
クリン(pH7.0)）に植菌した。また対照として、スフィ
ンゴモナス・エスピーSC42405 の前培養液160μlを、大
型試験管（22×220mm）に入れた8 mlの培地（6% グリセ
ロール、2% 酵母エキス、0.5% カザミノ酸、0.1% K2HPO
4、0.05% KCl、0.05% MgSO4・7H2O、0.01% FeSO4・7H2O、
0.1% MnSO4-4〜6H2O(pH7.0)）に植菌した。これら2種の
菌を30℃で4日間培養した（250 rpm）。それぞれの培養
液中に生成蓄積したビオチンの濃度を、ラクトバシラス
・プランタルム（Lactobacillus plantarum）IFO 3070
株を用いた微生物学的定量法（和泉と山田、ビタミン学
実験法II. 水溶性ビタミン. p.481-499、日本ビタミン
学会編、東京化学同人、1985）により定量したところ生
成したビオチンの濃度は表９に示す通りであった。
SC42405/pSS301 のビオチン生産性 スフィンゴモナス・エスピー SC42405/pSS301の１白金
耳を、小型試験管（18×150mm）に入れた3 ml の培地
（1% グリセロール、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15
% MgSO4・7H2O、0.005% テトラサイクリン(pH7.2)）に植
菌した。また対照として、遺伝子を導入していないスフ
ィンゴモナス・エスピーSC42405 の１白金耳を、小型試
験管（18x150mm）に入れた3mlの培地（1% グリセロー
ル、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgSO4・7H2O(pH
7.2)）に植菌した。これら2種の菌を30℃で２日間培養
（250 rpm）して、前培養液とした。こうして得られた
スフィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS301の前培養液
160μlを、大型試験管（22×220mm）に入れた8mlの培地
（6% グリセロール、2% 酵母エキス、0.5% カザミノ
酸、0.1% K2HPO4、0.05% KCl、0.05% MgSO4・7H2O、0.01%
FeSO4・7H2O、0.1% MnSO4-4〜6H2O、0.005% テトラサイ
クリン(pH7.0)）に植菌した。また対照として、スフィ
ンゴモナス・エスピーSC42405 の前培養液160μlを、大
型試験管（22×220mm）に入れた8 mlの培地（6% グリセ
ロール、2% 酵母エキス、0.5% カザミノ酸、0.1% K2HPO
4、0.05% KCl、0.05% MgSO4・7H2O、0.01% FeSO4・7H2O、
0.1% MnSO4-4〜6H2O(pH7.0)）に植菌した。これら2種の
菌を30℃で4日間培養した（250 rpm）。それぞれの培養
液中に生成蓄積したビオチンの濃度を、ラクトバシラス
・プランタルム（Lactobacillus plantarum）IFO 3070
株を用いた微生物学的定量法（和泉と山田、ビタミン学
実験法II. 水溶性ビタミン. p.481-499、日本ビタミン
学会編、東京化学同人、1985）により定量したところ生
成したビオチンの濃度は表９に示す通りであった。
【００５１】
【表９】 ＊遺伝子を導入していない株との比較で表した値
【００５２】実施例１６ 組換えプラスミドpSS305の作
製 実施例２（2-A）で得られた染色体DNAを鋳型に、表８に
示すプライマー F2とF3を用いてPCR（反応組成：1×Exp
and HF バッファー, 1.5 mM MgCl2, 200 μM各 dNTP, 3
00 nM 各プライマー, 0.5〜100 ng 染色体DNA, 2.6U Ex
pandTMhigh fidelity PCR System 酵素ミックス（ベー
リンガーマンハイム(株)製）/ 50 μl、反応サイクル：
97℃で2分間保温した後、97℃で15秒間次いで60℃で30
秒間さらに72℃で1.5分間の保温を10サイクル行い、さ
らに、97℃で15秒間次いで60℃で30秒間さらに72℃で1.
5分間(1サイクルごとに20秒ずつ増加)の保温を15サイク
ル行い、最後に72℃で7分間保温）を行ない、bio Fのコ
ーディング領域の上流201 bpからコーディング領域の下
流46 bpまでの合計1408 bpを含み、その上流側の末端に
Spe I部位、その下流側の末端にPst I部位が導入された
DNA断片を調製した。このDNA断片を制限酵素Spe IとPst
Iで切断した断片と、プラスミドベクター pBluescript
SK(+)（ストラタジーンクローニングシステムズ製）を
制限酵素Spe IとPst Iで切断して得られたDNA断片を混
合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて
付属の説明書に従いこれらを結合させ、得られたプラス
ミドをpSS202と命名した。また、実施例２（2-A）で得
られた染色体DNAを鋳型に、表８に示すプライマーCDA1
とCDA6を用いてPCR（反応組成：1×Expand HF バッファ
ー, 1.5 mM MgCl2,200 μM 各 dNT , 300 nM 各プライ
マー, 0.5〜100 ng 染色体DNA, 2.6U Expand TMhigh fid
elity PCR System酵素ミックス（ベーリンガーマンハイ
ム(株)製）/50 μl、反応サイクル：97℃で2分間保温し
た後、97℃で15秒間次いで60℃で30秒間さらに72℃で1.
5分間の保温を10サイクル行い、さらに、97℃で15秒間
次いで60℃で30秒間さらに72℃で1.5分間(1サイクルご
とに20秒ずつ増加)の保温を15サイクル行い、最後に72
℃で7分間保温）を行ない、bio Cのコーディング領域の
上流の配列209 bpと、bio Cのコーディング領域762 bp
と、bio Dのコーディング領域の前半約300bpからなる、
合計1287 bpを含み、その上流側の末端にPst I部位、そ
の下流側の末端にHind III部位が導入されたDNA断片を
調製した。これらのDNA断片を制限酵素Pst IとHind III
で切断した断片と、プラスミドベクターpBluescript SK
(+)（ストラタジーンクローニングシステムズ製）を制
限酵素Pst IとHind IIIで切断して得られたDNA断片を混
合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて
付属の説明書に従いこれらを結合させ、得られたプラス
ミドをpSS205と命名した。また、実施例２（2-A）で得
られた染色体DNAを鋳型に、表８に示すプライマーCDA3
とCDA7を用いてPCR（反応組成：1×Expand HF バッファ
ー, 1.5 mM MgCl2,200μM 各 dNTP, 300 nM 各プライマ
ー, 0.5〜100 ng 染色体DNA, 2.6U Expand TMhigh fidel
ity PCR System 酵素ミックス（ベーリンガーマンハイ
ム(株)製）/50 μl、反応サイクル：97℃で2分間保温し
た後、97℃で15秒間次いで60℃で30秒間さらに72℃で1.
5分間の保温を10サイクル行い、さらに、97℃で15秒間
次いで60℃で30秒間さらに72℃で1.5分間(1サイクルご
とに20秒ずつ増加)の保温を15サイクル行い、最後に72
℃で7分間保温）を行ない、bio Dのコーディング領域の
後半約400 bpと、bio Aのコーディング領域1251 bpと、
その下流の塩基配列208bpからなる、合計1653 bpを含
み、その上流側の末端にHind III部位、その下流側の末
端にXho I部位が導入されたDNA断片を調製した。これら
のDNA断片を制限酵素Hind IIIとXho Iで切断した断片
と、プラスミドベクターpBluescript SK(+)（ストラタ
ジーンクローニングシステムズ製）を制限酵素Hind III
とXho Iで切断して得られたDNA断片を混合し、ライゲー
ションキット（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書に
従いこれらを結合させ、得られたプラスミドをpSS206と
命名した。さらに、以上のようにして得られたプラスミ
ドpSS205を制限酵素Pst IとHindIIIで切断し、得られた
DNA断片をアガロースゲル電気泳動で分離することによ
り、bio Cのコーディング領域の上流の配列209 bpと、b
io Cのコーディング領域762 bpと、bio Dのコーディン
グ領域の前半約300bpからなる、合計1287bpを含み、そ
の上流側の末端にPst I部位、その下流側の末端にHind
III部位が導入されたDNA断片を調製した。こうして得ら
れたDNA断片と、制限酵素Pst IとHind IIIで切断したpS
S206を混合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）
を用いて付属の説明書に従い、これらのDNA断片を結合
させ、得られたプラスミドをpSS2071と命名した。次にp
SS2071を制限酵素Cla Iで切断し、ライゲーションキッ
ト（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書に従い、DNA
断片をセルフライゲーションさせ、得られたプラスミド
をpSS207と命名した。さらに、プラスミドpSS202を制限
酵素Spe IとPst Iで切断し、得られたDNA断片をアガロ
ースゲル電気泳動で分離することにより、bio Fのコー
ディング領域の上流201bpからコーディング領域の下流
46bpまで合計1408 bpを含み、その上流側の末端にSpe I
部位、その下流側の末端にPst I部位が導入されたDNA断
片を調製した。こうして得られたDNA断片と、制限酵素S
pe IとPst Iで切断したpSS207を混合し、ライゲーショ
ンキット（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書に従
い、これらのDNA断片を結合させ、得られたプラスミド
をpSS209と命名した。そして、プラスミドpSS209を制限
酵素Spe IとXho Iで切断し、得られたDNA断片をアガロ
ースゲル電気泳動で分離することにより、bio F、bio
C、bio D、bioAを含み、その上流側の末端にSpe I部
位、その下流側の末端にXho I部位が導入されたDNA断片
を調製した。こうして得られたDNA断片と、制限酵素Spe
IとXho Iで切断したpJAβ2を混合し、ライゲーション
キット（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書に従い、
これらのDNA断片を結合させ、得られたプラスミドをpSS
305（図７）と命名した。
製 実施例２（2-A）で得られた染色体DNAを鋳型に、表８に
示すプライマー F2とF3を用いてPCR（反応組成：1×Exp
and HF バッファー, 1.5 mM MgCl2, 200 μM各 dNTP, 3
00 nM 各プライマー, 0.5〜100 ng 染色体DNA, 2.6U Ex
pandTMhigh fidelity PCR System 酵素ミックス（ベー
リンガーマンハイム(株)製）/ 50 μl、反応サイクル：
97℃で2分間保温した後、97℃で15秒間次いで60℃で30
秒間さらに72℃で1.5分間の保温を10サイクル行い、さ
らに、97℃で15秒間次いで60℃で30秒間さらに72℃で1.
5分間(1サイクルごとに20秒ずつ増加)の保温を15サイク
ル行い、最後に72℃で7分間保温）を行ない、bio Fのコ
ーディング領域の上流201 bpからコーディング領域の下
流46 bpまでの合計1408 bpを含み、その上流側の末端に
Spe I部位、その下流側の末端にPst I部位が導入された
DNA断片を調製した。このDNA断片を制限酵素Spe IとPst
Iで切断した断片と、プラスミドベクター pBluescript
SK(+)（ストラタジーンクローニングシステムズ製）を
制限酵素Spe IとPst Iで切断して得られたDNA断片を混
合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて
付属の説明書に従いこれらを結合させ、得られたプラス
ミドをpSS202と命名した。また、実施例２（2-A）で得
られた染色体DNAを鋳型に、表８に示すプライマーCDA1
とCDA6を用いてPCR（反応組成：1×Expand HF バッファ
ー, 1.5 mM MgCl2,200 μM 各 dNT , 300 nM 各プライ
マー, 0.5〜100 ng 染色体DNA, 2.6U Expand TMhigh fid
elity PCR System酵素ミックス（ベーリンガーマンハイ
ム(株)製）/50 μl、反応サイクル：97℃で2分間保温し
た後、97℃で15秒間次いで60℃で30秒間さらに72℃で1.
5分間の保温を10サイクル行い、さらに、97℃で15秒間
次いで60℃で30秒間さらに72℃で1.5分間(1サイクルご
とに20秒ずつ増加)の保温を15サイクル行い、最後に72
℃で7分間保温）を行ない、bio Cのコーディング領域の
上流の配列209 bpと、bio Cのコーディング領域762 bp
と、bio Dのコーディング領域の前半約300bpからなる、
合計1287 bpを含み、その上流側の末端にPst I部位、そ
の下流側の末端にHind III部位が導入されたDNA断片を
調製した。これらのDNA断片を制限酵素Pst IとHind III
で切断した断片と、プラスミドベクターpBluescript SK
(+)（ストラタジーンクローニングシステムズ製）を制
限酵素Pst IとHind IIIで切断して得られたDNA断片を混
合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて
付属の説明書に従いこれらを結合させ、得られたプラス
ミドをpSS205と命名した。また、実施例２（2-A）で得
られた染色体DNAを鋳型に、表８に示すプライマーCDA3
とCDA7を用いてPCR（反応組成：1×Expand HF バッファ
ー, 1.5 mM MgCl2,200μM 各 dNTP, 300 nM 各プライマ
ー, 0.5〜100 ng 染色体DNA, 2.6U Expand TMhigh fidel
ity PCR System 酵素ミックス（ベーリンガーマンハイ
ム(株)製）/50 μl、反応サイクル：97℃で2分間保温し
た後、97℃で15秒間次いで60℃で30秒間さらに72℃で1.
5分間の保温を10サイクル行い、さらに、97℃で15秒間
次いで60℃で30秒間さらに72℃で1.5分間(1サイクルご
とに20秒ずつ増加)の保温を15サイクル行い、最後に72
℃で7分間保温）を行ない、bio Dのコーディング領域の
後半約400 bpと、bio Aのコーディング領域1251 bpと、
その下流の塩基配列208bpからなる、合計1653 bpを含
み、その上流側の末端にHind III部位、その下流側の末
端にXho I部位が導入されたDNA断片を調製した。これら
のDNA断片を制限酵素Hind IIIとXho Iで切断した断片
と、プラスミドベクターpBluescript SK(+)（ストラタ
ジーンクローニングシステムズ製）を制限酵素Hind III
とXho Iで切断して得られたDNA断片を混合し、ライゲー
ションキット（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書に
従いこれらを結合させ、得られたプラスミドをpSS206と
命名した。さらに、以上のようにして得られたプラスミ
ドpSS205を制限酵素Pst IとHindIIIで切断し、得られた
DNA断片をアガロースゲル電気泳動で分離することによ
り、bio Cのコーディング領域の上流の配列209 bpと、b
io Cのコーディング領域762 bpと、bio Dのコーディン
グ領域の前半約300bpからなる、合計1287bpを含み、そ
の上流側の末端にPst I部位、その下流側の末端にHind
III部位が導入されたDNA断片を調製した。こうして得ら
れたDNA断片と、制限酵素Pst IとHind IIIで切断したpS
S206を混合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）
を用いて付属の説明書に従い、これらのDNA断片を結合
させ、得られたプラスミドをpSS2071と命名した。次にp
SS2071を制限酵素Cla Iで切断し、ライゲーションキッ
ト（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書に従い、DNA
断片をセルフライゲーションさせ、得られたプラスミド
をpSS207と命名した。さらに、プラスミドpSS202を制限
酵素Spe IとPst Iで切断し、得られたDNA断片をアガロ
ースゲル電気泳動で分離することにより、bio Fのコー
ディング領域の上流201bpからコーディング領域の下流
46bpまで合計1408 bpを含み、その上流側の末端にSpe I
部位、その下流側の末端にPst I部位が導入されたDNA断
片を調製した。こうして得られたDNA断片と、制限酵素S
pe IとPst Iで切断したpSS207を混合し、ライゲーショ
ンキット（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書に従
い、これらのDNA断片を結合させ、得られたプラスミド
をpSS209と命名した。そして、プラスミドpSS209を制限
酵素Spe IとXho Iで切断し、得られたDNA断片をアガロ
ースゲル電気泳動で分離することにより、bio F、bio
C、bio D、bioAを含み、その上流側の末端にSpe I部
位、その下流側の末端にXho I部位が導入されたDNA断片
を調製した。こうして得られたDNA断片と、制限酵素Spe
IとXho Iで切断したpJAβ2を混合し、ライゲーション
キット（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書に従い、
これらのDNA断片を結合させ、得られたプラスミドをpSS
305（図７）と命名した。
【００５３】実施例１７ 組換えプラスミドpSS304の作
製 実施例１６で得られたプラスミド pSS305を鋳型に、M13
プライマーRV（宝酒造(株）製）と表８に示すプライマ
ー R1を用いて、また、M13プライマーM4（宝酒造(株）
製）とMUTB1プライマー（宝酒造(株）製）を用いてそれ
ぞれPCR（反応組成：1×Expand HF バッファー, 1.5mM
MgCl2, 200μM 各 dNTP , 300nM 各プライマー, 0.5〜
100 ng鋳型DNA, 2.6U ExpandTMhigh fidelity PCR Syst
em 酵素ミックス（ベーリンガーマンハイム(株)製）/50
μl、反応サイクル：97℃で2分間保温した後、97℃で15
秒間次いで60℃で30秒間さらに72℃で1.5分間の保温を1
0サイクル行い、さらに、97℃で15秒間次いで60℃,30秒
間さらに72℃で1.5分間(1サイクルごとに20秒ずつ増加)
の保温を15サイクル行い、最後に72℃で7分間保温）を
行なった。PCR後の反応液からセントリコン100（アミコ
ンInc.製）によって余剰のプライマーやdNTP を除去
後、TEバッファーを加えて50μlとし、そのうちの0.5μ
lずつを混合した。これに5μlの10×Expand HF バッフ
ァー、4μlの各2.5mM dNTP、38.62μlの滅菌蒸留水、0.
38μlのExpandTMhigh fidelity PCR System 酵素ミック
ス（3.5U/μl）（ベーリンガーマンハイム(株)製）を加
えて、94℃で10分間加熱後、60分間かけて37℃まで冷却
し、37℃で15分間保温した。この反応液に0.5μlの20pm
ol M13プライマーRV（宝酒造(株）製）と0.5μlの20pmo
l M13プライマーM4（宝酒造(株）製）を加えてPCR（反
応サイクル：97℃で2分間保温した後、97℃で15秒間次
いで60℃で30秒間さらに72℃で1.5分間の保温を10サイ
クル行い、さらに、97℃で15秒間次いで60℃で30秒間さ
らに72℃で1.5分間(1サイクルあたり20秒ずつ増加)の保
温を15サイクル行い、最後に72℃で7分間保温）を行な
った。得られたDNA断片を制限酵素Not IとHind IIIで切
断し、制限酵素Not IとHind IIIで切断したプラスミド
ベクター pBluescript SK(+)（ストラタジーンクローニ
ングシステムズ製）を混合し、ライゲーションキット
（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書に従い結合させ
た。得られたクローンの中から、塩基配列を解析するこ
とにより、bio Fの開始コドン（ATG）のAを+1としたと
きに-11番目のCがGに置換された変異型bio Fの塩基配列
（配列番号５）を有するクローンを選び出し、これをプ
ラスミドpSS201と命名した。次にプラスミドpSS201を制
限酵素Spe IとPst Iで切断し、得られたDNA断片をアガ
ロースゲル電気泳動で分離することにより、bio Fのコ
ーディング領域の上流201 bpからコーディング領域の下
流46 bpまでの合計1408 bpを含み、その上流側の末端に
Spe I部位、その下流側の末端にPst I部位が導入された
DNA断片を調製した。こうして得られたDNA断片と、制限
酵素Spe IとPst Iで切断したpSS207を混合し、ライゲー
ションキット（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書に
従い、これらのDNA断片を結合させ、得られたプラスミ
ドをpSS208と命名した。さらに、プラスミド pSS208を
制限酵素Spe IとXho Iで切断し、得られたDNA断片をア
ガロースゲル電気泳動で分離することにより、変異型bi
o Fならびにbio C、bio Dおよびbio Aを含み、その上流
側の末端にSpe I部位、その下流側の末端にXho I部位が
導入されたDNA断片を調製した。こうして得られたDNA
断片と制限酵素Spe IとXho Iで切断したpJAβ2を混合
し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて付
属の説明書に従い、これらのDNA断片を結合させ、得ら
れたプラスミドをpSS304（図８）と命名した。
製 実施例１６で得られたプラスミド pSS305を鋳型に、M13
プライマーRV（宝酒造(株）製）と表８に示すプライマ
ー R1を用いて、また、M13プライマーM4（宝酒造(株）
製）とMUTB1プライマー（宝酒造(株）製）を用いてそれ
ぞれPCR（反応組成：1×Expand HF バッファー, 1.5mM
MgCl2, 200μM 各 dNTP , 300nM 各プライマー, 0.5〜
100 ng鋳型DNA, 2.6U ExpandTMhigh fidelity PCR Syst
em 酵素ミックス（ベーリンガーマンハイム(株)製）/50
μl、反応サイクル：97℃で2分間保温した後、97℃で15
秒間次いで60℃で30秒間さらに72℃で1.5分間の保温を1
0サイクル行い、さらに、97℃で15秒間次いで60℃,30秒
間さらに72℃で1.5分間(1サイクルごとに20秒ずつ増加)
の保温を15サイクル行い、最後に72℃で7分間保温）を
行なった。PCR後の反応液からセントリコン100（アミコ
ンInc.製）によって余剰のプライマーやdNTP を除去
後、TEバッファーを加えて50μlとし、そのうちの0.5μ
lずつを混合した。これに5μlの10×Expand HF バッフ
ァー、4μlの各2.5mM dNTP、38.62μlの滅菌蒸留水、0.
38μlのExpandTMhigh fidelity PCR System 酵素ミック
ス（3.5U/μl）（ベーリンガーマンハイム(株)製）を加
えて、94℃で10分間加熱後、60分間かけて37℃まで冷却
し、37℃で15分間保温した。この反応液に0.5μlの20pm
ol M13プライマーRV（宝酒造(株）製）と0.5μlの20pmo
l M13プライマーM4（宝酒造(株）製）を加えてPCR（反
応サイクル：97℃で2分間保温した後、97℃で15秒間次
いで60℃で30秒間さらに72℃で1.5分間の保温を10サイ
クル行い、さらに、97℃で15秒間次いで60℃で30秒間さ
らに72℃で1.5分間(1サイクルあたり20秒ずつ増加)の保
温を15サイクル行い、最後に72℃で7分間保温）を行な
った。得られたDNA断片を制限酵素Not IとHind IIIで切
断し、制限酵素Not IとHind IIIで切断したプラスミド
ベクター pBluescript SK(+)（ストラタジーンクローニ
ングシステムズ製）を混合し、ライゲーションキット
（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書に従い結合させ
た。得られたクローンの中から、塩基配列を解析するこ
とにより、bio Fの開始コドン（ATG）のAを+1としたと
きに-11番目のCがGに置換された変異型bio Fの塩基配列
（配列番号５）を有するクローンを選び出し、これをプ
ラスミドpSS201と命名した。次にプラスミドpSS201を制
限酵素Spe IとPst Iで切断し、得られたDNA断片をアガ
ロースゲル電気泳動で分離することにより、bio Fのコ
ーディング領域の上流201 bpからコーディング領域の下
流46 bpまでの合計1408 bpを含み、その上流側の末端に
Spe I部位、その下流側の末端にPst I部位が導入された
DNA断片を調製した。こうして得られたDNA断片と、制限
酵素Spe IとPst Iで切断したpSS207を混合し、ライゲー
ションキット（宝酒造(株)製）を用いて付属の説明書に
従い、これらのDNA断片を結合させ、得られたプラスミ
ドをpSS208と命名した。さらに、プラスミド pSS208を
制限酵素Spe IとXho Iで切断し、得られたDNA断片をア
ガロースゲル電気泳動で分離することにより、変異型bi
o Fならびにbio C、bio Dおよびbio Aを含み、その上流
側の末端にSpe I部位、その下流側の末端にXho I部位が
導入されたDNA断片を調製した。こうして得られたDNA
断片と制限酵素Spe IとXho Iで切断したpJAβ2を混合
し、ライゲーションキット（宝酒造(株)製）を用いて付
属の説明書に従い、これらのDNA断片を結合させ、得ら
れたプラスミドをpSS304（図８）と命名した。
【００５４】実施例１８ pSS304、pSS305を導入した形
質転換体の作製 実施例１７で得られたプラスミドpSS304、pSS305をジー
ンパルサー（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を
用いてエレクトロポーレーション法（印加電圧18 kV/c
m、キャパシタンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィ
ンゴモナス・エスピーSC42405に導入し、スフィンゴモ
ナス・エスピーSC42405/pSS304および、スフィンゴモナ
ス・エスピーSC42405/pSS305を得た。
質転換体の作製 実施例１７で得られたプラスミドpSS304、pSS305をジー
ンパルサー（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を
用いてエレクトロポーレーション法（印加電圧18 kV/c
m、キャパシタンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィ
ンゴモナス・エスピーSC42405に導入し、スフィンゴモ
ナス・エスピーSC42405/pSS304および、スフィンゴモナ
ス・エスピーSC42405/pSS305を得た。
【００５５】実施例１９ スフィンゴモナス・エスピー
SC42405/pSS304および、スフィンゴモナス・エスピーSC
42405/pSS305のビオチン生産性およびビオチン関連物質
生産性 スフィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS304および、ス
フィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS305の１白金耳を
小型試験管（18×150mm）に入れた3mlの培地（1% グリ
セロール、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgSO4・7
H2O、0.005% テトラサイクリン(pH7.2)）にそれぞれ植
菌した。また対照として、遺伝子を導入していないスフ
ィンゴモナス・エスピーSC42405の１白金耳を小型試験
管（18×150mm）に入れた3mlの培地（1% グリセロー
ル、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgSO4・7H2O(pH
7.2)）に植菌した。これら３種の菌を30℃で２日間培養
（250rpm）して、前培養液とした。こうして得られたス
フィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS304および、スフ
ィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS305の前培養液160
μlを大型試験管（22×220mm）に入れた8mlの培地（6%
グリセロール、2% 酵母エキス、0.5% カザミノ酸、0.1%
K2HPO4、0.05% KCl、0.05% MgSO4・7H2O、0.01%FeSO4・7H
2O、0.1% MnSO4・4〜6H2O、0.005% テトラサイクリン(pH
7.0)）にそれぞれ植菌した。また対照として、スフィン
ゴモナス・エスピーSC42405の前培養液160μlを 大型試
験管（22×220 mm）に入れた8mlの培地（6% グリセロー
ル、2%酵母エキス、0.5% カザミノ酸、0.1% K2HPO4、0.0
5% KCl、0.05% MgSO4・7H2O、0.01% FeSO4・7H2O、0.1% M
nSO4・4〜6H2O(pH7.0)）に植菌した。これら３種の菌を3
0℃で4日間培養した（250 rpm）。それぞれの培養液中
に生成蓄積したビオチンの濃度を、ラクトバシラス・プ
ランタルム（Lactobacillus plantarum）IFO 3070株を
用い、またビオチン関連化合物の濃度をサッカロミセス
・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）た微生物学
的定量法（和泉と山田、ビタミン学実験法II. 水溶性ビ
タミン. p.481-499、日本ビタミン学会編、東京化学同
人、1985）によりそれぞれ定量したところ生成したビオ
チンならびにビオチン生合成の前駆体である7-ケト-8-
アミノペラルゴン酸、7,8-ジアミノペラルゴン酸および
デスチオビオチン（以下、ビオチン関連物質と記す。）
の濃度は、表１０に示す通りであった。
SC42405/pSS304および、スフィンゴモナス・エスピーSC
42405/pSS305のビオチン生産性およびビオチン関連物質
生産性 スフィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS304および、ス
フィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS305の１白金耳を
小型試験管（18×150mm）に入れた3mlの培地（1% グリ
セロール、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgSO4・7
H2O、0.005% テトラサイクリン(pH7.2)）にそれぞれ植
菌した。また対照として、遺伝子を導入していないスフ
ィンゴモナス・エスピーSC42405の１白金耳を小型試験
管（18×150mm）に入れた3mlの培地（1% グリセロー
ル、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgSO4・7H2O(pH
7.2)）に植菌した。これら３種の菌を30℃で２日間培養
（250rpm）して、前培養液とした。こうして得られたス
フィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS304および、スフ
ィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS305の前培養液160
μlを大型試験管（22×220mm）に入れた8mlの培地（6%
グリセロール、2% 酵母エキス、0.5% カザミノ酸、0.1%
K2HPO4、0.05% KCl、0.05% MgSO4・7H2O、0.01%FeSO4・7H
2O、0.1% MnSO4・4〜6H2O、0.005% テトラサイクリン(pH
7.0)）にそれぞれ植菌した。また対照として、スフィン
ゴモナス・エスピーSC42405の前培養液160μlを 大型試
験管（22×220 mm）に入れた8mlの培地（6% グリセロー
ル、2%酵母エキス、0.5% カザミノ酸、0.1% K2HPO4、0.0
5% KCl、0.05% MgSO4・7H2O、0.01% FeSO4・7H2O、0.1% M
nSO4・4〜6H2O(pH7.0)）に植菌した。これら３種の菌を3
0℃で4日間培養した（250 rpm）。それぞれの培養液中
に生成蓄積したビオチンの濃度を、ラクトバシラス・プ
ランタルム（Lactobacillus plantarum）IFO 3070株を
用い、またビオチン関連化合物の濃度をサッカロミセス
・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）た微生物学
的定量法（和泉と山田、ビタミン学実験法II. 水溶性ビ
タミン. p.481-499、日本ビタミン学会編、東京化学同
人、1985）によりそれぞれ定量したところ生成したビオ
チンならびにビオチン生合成の前駆体である7-ケト-8-
アミノペラルゴン酸、7,8-ジアミノペラルゴン酸および
デスチオビオチン（以下、ビオチン関連物質と記す。）
の濃度は、表１０に示す通りであった。
【００５６】
【表１０】スフィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS304
およびスフィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS305のビ
オチン生産性およびビオチン関連物質生産性 ＊遺伝子を導入していない株との比較で表した値
およびスフィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS305のビ
オチン生産性およびビオチン関連物質生産性 ＊遺伝子を導入していない株との比較で表した値
【００５７】実施例２０ 組換えプラスミド pSS306の
作製 プラスミド pSS209を制限酵素Spe IおよびXho Iで切断
し、得られたDNA断片をアガロースゲル電気泳動で分離
することにより、bio F、bio C、bio D、bio Aを含み、
その上流側の末端にSpe I部位、その下流側の末端にXho
I部位が導入されたDNA断片を調製した。こうして得ら
れたDNA断片と、制限酵素 Spe IおよびXhoIで切断したp
SS301を混合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)
製）を用いて付属の説明書に従い、これらのDNA断片を
結合させ、得られたプラスミドをpSS306（図９）と命名
した。
作製 プラスミド pSS209を制限酵素Spe IおよびXho Iで切断
し、得られたDNA断片をアガロースゲル電気泳動で分離
することにより、bio F、bio C、bio D、bio Aを含み、
その上流側の末端にSpe I部位、その下流側の末端にXho
I部位が導入されたDNA断片を調製した。こうして得ら
れたDNA断片と、制限酵素 Spe IおよびXhoIで切断したp
SS301を混合し、ライゲーションキット（宝酒造(株)
製）を用いて付属の説明書に従い、これらのDNA断片を
結合させ、得られたプラスミドをpSS306（図９）と命名
した。
【００５８】実施例２１ pSS306を導入した形質転換体
の作製 実施例２０で得られたプラスミド pSS306をジーンパル
サー（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いて
エレクトロポーレーション法（印加電圧 18kV/cm、キャ
パシタンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィンゴモナ
ス・エスピーSC42405に導入し、スフィンゴモナス・エ
スピーSC42405/pSS306を得た。
の作製 実施例２０で得られたプラスミド pSS306をジーンパル
サー（バイオラッドラボラトリーズ Inc.製）を用いて
エレクトロポーレーション法（印加電圧 18kV/cm、キャ
パシタンス 25μF、抵抗 400Ω）によりスフィンゴモナ
ス・エスピーSC42405に導入し、スフィンゴモナス・エ
スピーSC42405/pSS306を得た。
【００５９】実施例２２ スフィンゴモナス・エスピー
SC42405/pSS306のビオチン生産性 スフィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS306の１白金耳
を小型試験管（18×150mm）に入れた3mlの培地（1% グ
リセロール、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgSO4
・7H2O、0.005 % テトラサイクリン(pH7.2)）に植菌し
た。また対照として、遺伝子を導入していないスフィン
ゴモナス・エスピーSC42405 の１白金耳を小型試験管
（18×150mm）に入れた3mlの培地（1% グリセロール、2
% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgSO4・7H2O(pH7.
2)）に植菌した。これら2種の菌を30℃で２日間培養（2
50rpm）して、前培養液とした。こうして得られたスフ
ィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS306の前培養液160
μlを大型試験管（22×220mm）に入れた8mlの培地（6%
グリセロール、2% 酵母エキス、0.5% カザミノ酸、0.1%
K2HPO4、0.05% KCl、0.05% MgSO4・7H2O、0.01% FeSO4・7
H2O、0.1% MnSO4・4〜6H2O、0.005% テトラサイクリン(p
H7.0)）に植菌した。また対照として、スフィンゴモナ
ス・エスピーSC42405の前培養液160μlを大型試験管（2
2×220mm）に入れた8mlの培地（6% グリセロール、2%
酵母エキス、0.5% カザミノ酸、0.1% K2HPO4、0.05% KC
l、0.05% MgSO4・7H2O、0.01% FeSO4・7H2O、0.1% MnSO4・
4〜6H2O(pH7.0)）に植菌した。これら2種の菌を30℃で4
日間培養した（250 rpm）。それぞれの培養液中に生成
蓄積したビオチンの濃度を、ラクトバシラス・プランタ
ルム（Lactobacillus plantarum）IFO 3070株を用い、
またビオチン関連化合物の濃度をサッカロミセス・セレ
ビシエ（Saccharomyces cerevisiae）た微生物学的定量
法（和泉と山田、ビタミン学実験法II.水溶性ビタミン.
p.481-499、日本ビタミン学会編、東京化学同人、198
5）によりそれぞれ定量したところ生成したビオチンお
よびビオチン関連化合物の濃度は、表１１に示す通りで
あった。
SC42405/pSS306のビオチン生産性 スフィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS306の１白金耳
を小型試験管（18×150mm）に入れた3mlの培地（1% グ
リセロール、2% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgSO4
・7H2O、0.005 % テトラサイクリン(pH7.2)）に植菌し
た。また対照として、遺伝子を導入していないスフィン
ゴモナス・エスピーSC42405 の１白金耳を小型試験管
（18×150mm）に入れた3mlの培地（1% グリセロール、2
% ペプトン、0.15% K2HPO4、0.15% MgSO4・7H2O(pH7.
2)）に植菌した。これら2種の菌を30℃で２日間培養（2
50rpm）して、前培養液とした。こうして得られたスフ
ィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS306の前培養液160
μlを大型試験管（22×220mm）に入れた8mlの培地（6%
グリセロール、2% 酵母エキス、0.5% カザミノ酸、0.1%
K2HPO4、0.05% KCl、0.05% MgSO4・7H2O、0.01% FeSO4・7
H2O、0.1% MnSO4・4〜6H2O、0.005% テトラサイクリン(p
H7.0)）に植菌した。また対照として、スフィンゴモナ
ス・エスピーSC42405の前培養液160μlを大型試験管（2
2×220mm）に入れた8mlの培地（6% グリセロール、2%
酵母エキス、0.5% カザミノ酸、0.1% K2HPO4、0.05% KC
l、0.05% MgSO4・7H2O、0.01% FeSO4・7H2O、0.1% MnSO4・
4〜6H2O(pH7.0)）に植菌した。これら2種の菌を30℃で4
日間培養した（250 rpm）。それぞれの培養液中に生成
蓄積したビオチンの濃度を、ラクトバシラス・プランタ
ルム（Lactobacillus plantarum）IFO 3070株を用い、
またビオチン関連化合物の濃度をサッカロミセス・セレ
ビシエ（Saccharomyces cerevisiae）た微生物学的定量
法（和泉と山田、ビタミン学実験法II.水溶性ビタミン.
p.481-499、日本ビタミン学会編、東京化学同人、198
5）によりそれぞれ定量したところ生成したビオチンお
よびビオチン関連化合物の濃度は、表１１に示す通りで
あった。
【００６０】
【表１１】スフィンゴモナス・エスピーSC42405/pSS306
のビオチン生産性 ＊遺伝子を導入していない株との比較で表した値
のビオチン生産性 ＊遺伝子を導入していない株との比較で表した値
【００６１】
【発明の効果】本発明により、スフィンゴモナス（Sphi
ngomonas）属に属する微生物由来のビオチン生合成に関
与する遺伝子を含むDNA断片およびそれを利用したビオ
チン生産形質転換体を提供可能とした。
ngomonas）属に属する微生物由来のビオチン生合成に関
与する遺伝子を含むDNA断片およびそれを利用したビオ
チン生産形質転換体を提供可能とした。
【００６２】
配列番号：1 配列の長さ：369 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 起源 生物名：スフィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingom
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列 Met Leu Asp Phe His Arg Ala Asp Leu Ala Arg Leu Ala Ala Arg Asp 5 10 15 Arg Leu Arg Val Leu Ala Pro Gln Arg Gly Lys Asp Phe Ala Ser Asn 20 25 30 Asp Tyr Leu Gly Leu Ala Asn Ser Pro Arg Leu Ala Ala Ala Ile Ala 35 40 45 Ala Ala Val Glu Glu Gly Val Pro Val Gly Ser Gly Gly Ser Arg Leu 50 55 60 Leu Arg Gly Asn His Pro Glu His Glu Ala Leu Glu Ala Asp Ala Ala 65 70 75 80 Ala Phe Phe Gly Ala Glu Ala Ser Leu Tyr Phe Ser Ser Gly Tyr Gly 85 90 95 Ala Asn Val Ala Ile Leu Ala Thr Leu Pro Gln Arg Gly Asp Leu Ile 100 105 110 Val His Asp Ser Leu Val His Ala Ser Met Arg Leu Val His His Gln 115 120 125 His Arg Ile Val Pro Ile Gly Gly Arg Leu Glu Ile Gly Glu Arg Arg 130 135 140 Gly Val Ala Val His Ala Val Lys Ala Phe Asp Arg Asp Pro His Gly 145 150 155 160 Ala Leu Ala Ala Leu Val Ala Pro Cys Pro Asp Arg Ile Leu Glu Gly 165 170 175 Arg Cys Ile Val Met Arg Arg Arg His Gly Leu Gly Thr Arg Gln Ala 180 185 190 His Pro Leu Met His Ala Thr Gly Val Phe Gly Glu Arg Gly Gln Gly 195 200 205 Leu Ser Ile Ala Gly Glu Arg Val Val Thr Leu His Thr Cys Gly Lys 210 215 220 Ala Met Gly Cys Glu Gly Ala Leu Val Ala Gly Pro Thr Ile Val Arg 225 230 235 240 Asp Tyr Leu Val Asn Arg Gly Arg Gly Phe Ile Phe Ser Thr Ala Pro 245 250 255 Ser Pro Leu Met Ala Arg Gly Val Arg Glu Ala Leu Arg Ile Leu Ala 260 265 270 Asp Glu Pro Glu Arg Arg Thr Ala Leu His Asp Arg Ile Ala Leu Ala 275 280 285 Gly Ala Arg Leu Gly Arg Arg Gly Ala Leu Ala Gln Gly Thr Pro Ile 290 295 300 Leu Pro Leu Ile Leu His Asp Asn Gly Arg Thr Met Arg Ala Ala Glu 305 310 315 320 Ala Leu Gln Ala Leu Gly Tyr Asp Ile Arg Gly Ile Arg Pro Pro Thr 325 330 335 Val Pro Val Gly Ser Ala Arg Leu Arg Leu Ser Ile Thr Leu Asn Val 340 345 350 Glu Ala Ala Asp Ile Leu Ala Leu Asp Gln Ala Leu Gln Glu Val Leu 355 360 365 Ala 369
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列 Met Leu Asp Phe His Arg Ala Asp Leu Ala Arg Leu Ala Ala Arg Asp 5 10 15 Arg Leu Arg Val Leu Ala Pro Gln Arg Gly Lys Asp Phe Ala Ser Asn 20 25 30 Asp Tyr Leu Gly Leu Ala Asn Ser Pro Arg Leu Ala Ala Ala Ile Ala 35 40 45 Ala Ala Val Glu Glu Gly Val Pro Val Gly Ser Gly Gly Ser Arg Leu 50 55 60 Leu Arg Gly Asn His Pro Glu His Glu Ala Leu Glu Ala Asp Ala Ala 65 70 75 80 Ala Phe Phe Gly Ala Glu Ala Ser Leu Tyr Phe Ser Ser Gly Tyr Gly 85 90 95 Ala Asn Val Ala Ile Leu Ala Thr Leu Pro Gln Arg Gly Asp Leu Ile 100 105 110 Val His Asp Ser Leu Val His Ala Ser Met Arg Leu Val His His Gln 115 120 125 His Arg Ile Val Pro Ile Gly Gly Arg Leu Glu Ile Gly Glu Arg Arg 130 135 140 Gly Val Ala Val His Ala Val Lys Ala Phe Asp Arg Asp Pro His Gly 145 150 155 160 Ala Leu Ala Ala Leu Val Ala Pro Cys Pro Asp Arg Ile Leu Glu Gly 165 170 175 Arg Cys Ile Val Met Arg Arg Arg His Gly Leu Gly Thr Arg Gln Ala 180 185 190 His Pro Leu Met His Ala Thr Gly Val Phe Gly Glu Arg Gly Gln Gly 195 200 205 Leu Ser Ile Ala Gly Glu Arg Val Val Thr Leu His Thr Cys Gly Lys 210 215 220 Ala Met Gly Cys Glu Gly Ala Leu Val Ala Gly Pro Thr Ile Val Arg 225 230 235 240 Asp Tyr Leu Val Asn Arg Gly Arg Gly Phe Ile Phe Ser Thr Ala Pro 245 250 255 Ser Pro Leu Met Ala Arg Gly Val Arg Glu Ala Leu Arg Ile Leu Ala 260 265 270 Asp Glu Pro Glu Arg Arg Thr Ala Leu His Asp Arg Ile Ala Leu Ala 275 280 285 Gly Ala Arg Leu Gly Arg Arg Gly Ala Leu Ala Gln Gly Thr Pro Ile 290 295 300 Leu Pro Leu Ile Leu His Asp Asn Gly Arg Thr Met Arg Ala Ala Glu 305 310 315 320 Ala Leu Gln Ala Leu Gly Tyr Asp Ile Arg Gly Ile Arg Pro Pro Thr 325 330 335 Val Pro Val Gly Ser Ala Arg Leu Arg Leu Ser Ile Thr Leu Asn Val 340 345 350 Glu Ala Ala Asp Ile Leu Ala Leu Asp Gln Ala Leu Gln Glu Val Leu 355 360 365 Ala 369
【００６３】配列番号：２ 配列の長さ：387 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 起源 生物名：スフィンゴモナス・エスピー（Sphingomonas s
p.） 株名：SC42405 配列 Met Ser Arg Leu Asp Ser Phe Phe Ala Ala Ala Leu Asp Arg Ile Asp 5 10 15 Arg Ala Gly Gln Arg Arg Thr Leu Arg Pro Ala Ala Leu Glu Lys Gly 20 25 30 Gly Arg Val His Arg Asp Gly His Glu Leu Ile Asp Phe Ser Ser Asn 35 40 45 Asp Tyr Leu Gly Leu Ala Arg His Pro Leu Leu Ile Glu Arg Ala Arg 50 55 60 Ala Trp Thr Glu Ala His Gly Thr Gly Ser Gly Ala Ser Arg Leu Val 65 70 75 80 Thr Gly Thr Ser Ala Thr His Leu Ala Ile Glu Ala Arg Ile Ala Arg 85 90 95 Phe Lys His Ala Glu Ala Ala Leu Val Phe Ala Ser Gly Trp Gln Ala 100 105 110 Asn Ala Ala Val Ile Pro Ala Leu Leu Ala Ala Val Pro Gly Ser Ala 115 120 125 Val Phe Thr Asp Arg Leu Ile His Ala Ser Met His Ala Gly Leu Ala 130 135 140 Ile Ser Gly Thr Arg Gln His Arg Phe Arg His Asn Asp Leu Asp His 145 150 155 160 Leu Glu Glu Leu Leu Ala Ser Lys Gly Ala Glu Ala Ser Ala Arg Leu 165 170 175 Ile Leu Thr Glu Ser Val Phe Ser Met Asp Gly Asp Arg Ala Asp Ile 180 185 190 Ala Arg Leu Ala Glu Ile Ala Ala Arg His Asp Ala Phe Leu Phe Val 195 200 205 Asp Glu Ala His Ala Thr Gly Val Leu Gly Pro Gly Gly Ala Gly Leu 210 215 220 Ser Ala Glu Val Pro Gly Gly Ile Asp Leu Val Met Gly Thr Phe Ser 225 230 235 240 Lys Ala Leu Gly Gly Phe Gly Ala Tyr Val Ala Gly Ser Gln Val Met 245 250 255 Ile Asp Tyr Leu Val Asn Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Thr Thr Ala 260 265 270 Pro Pro Pro Ala Val Leu Gly Ala Ile Asp Ala Ala Leu Asp Leu Val 275 280 285 Pro Gly Met Asp Ala Glu Arg Ala His Leu Ala Ala Leu Gly Gln Gln 290 295 300 Leu Arg Ser Gly Leu Ala Ala Leu Gly Ile Asp His Gly Ala Ser Ser 305 310 315 320 Thr Gln Ile Val Pro Ala Val Ile Gly Ala Glu Val Ala Ala Leu Asp 325 330 335 Leu Ser Arg Lys Leu Glu Glu Arg Gly Leu Leu Ala Ser Ala Ile Arg 340 345 350 Pro Pro Thr Val Pro Pro Gly Thr Ser Arg Leu Arg Leu Ala Leu Arg 355 360 365 Ala Thr His Ala Pro Ser Asp Ile Asp Ala Leu Leu Asn Ala Ile Glu 370 375 380 Ala Cys Arg 385 387
p.） 株名：SC42405 配列 Met Ser Arg Leu Asp Ser Phe Phe Ala Ala Ala Leu Asp Arg Ile Asp 5 10 15 Arg Ala Gly Gln Arg Arg Thr Leu Arg Pro Ala Ala Leu Glu Lys Gly 20 25 30 Gly Arg Val His Arg Asp Gly His Glu Leu Ile Asp Phe Ser Ser Asn 35 40 45 Asp Tyr Leu Gly Leu Ala Arg His Pro Leu Leu Ile Glu Arg Ala Arg 50 55 60 Ala Trp Thr Glu Ala His Gly Thr Gly Ser Gly Ala Ser Arg Leu Val 65 70 75 80 Thr Gly Thr Ser Ala Thr His Leu Ala Ile Glu Ala Arg Ile Ala Arg 85 90 95 Phe Lys His Ala Glu Ala Ala Leu Val Phe Ala Ser Gly Trp Gln Ala 100 105 110 Asn Ala Ala Val Ile Pro Ala Leu Leu Ala Ala Val Pro Gly Ser Ala 115 120 125 Val Phe Thr Asp Arg Leu Ile His Ala Ser Met His Ala Gly Leu Ala 130 135 140 Ile Ser Gly Thr Arg Gln His Arg Phe Arg His Asn Asp Leu Asp His 145 150 155 160 Leu Glu Glu Leu Leu Ala Ser Lys Gly Ala Glu Ala Ser Ala Arg Leu 165 170 175 Ile Leu Thr Glu Ser Val Phe Ser Met Asp Gly Asp Arg Ala Asp Ile 180 185 190 Ala Arg Leu Ala Glu Ile Ala Ala Arg His Asp Ala Phe Leu Phe Val 195 200 205 Asp Glu Ala His Ala Thr Gly Val Leu Gly Pro Gly Gly Ala Gly Leu 210 215 220 Ser Ala Glu Val Pro Gly Gly Ile Asp Leu Val Met Gly Thr Phe Ser 225 230 235 240 Lys Ala Leu Gly Gly Phe Gly Ala Tyr Val Ala Gly Ser Gln Val Met 245 250 255 Ile Asp Tyr Leu Val Asn Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Thr Thr Ala 260 265 270 Pro Pro Pro Ala Val Leu Gly Ala Ile Asp Ala Ala Leu Asp Leu Val 275 280 285 Pro Gly Met Asp Ala Glu Arg Ala His Leu Ala Ala Leu Gly Gln Gln 290 295 300 Leu Arg Ser Gly Leu Ala Ala Leu Gly Ile Asp His Gly Ala Ser Ser 305 310 315 320 Thr Gln Ile Val Pro Ala Val Ile Gly Ala Glu Val Ala Ala Leu Asp 325 330 335 Leu Ser Arg Lys Leu Glu Glu Arg Gly Leu Leu Ala Ser Ala Ile Arg 340 345 350 Pro Pro Thr Val Pro Pro Gly Thr Ser Arg Leu Arg Leu Ala Leu Arg 355 360 365 Ala Thr His Ala Pro Ser Asp Ile Asp Ala Leu Leu Asn Ala Ile Glu 370 375 380 Ala Cys Arg 385 387
【００６４】配列番号：３ 配列の長さ：1536 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物名：スフィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingom
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：427..1536 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 GATCCTGATC GCGGTCCCGG CGCATCAATG GATGTGGTCG GCGCATGACG TGGTGAACCA 60 TCACCATCGT CGGTATTCGA AGACGACCTT GGGGTCCGCG ATCGAGAAGG CGGGCCTGAA 120 ACCCCGCAAG CTCGGCTATT TCAACTCGCT GCTCTTCCCG CTCGCCGCGG CCGCGCGGAT 180 CGCCGGACGG ATCACGGGGC GCGACGACAG CGACGACTCG CCACCGCCCG CGCCGCTCAA 240 CAAAACGTTC GAGGCGATCT TCCGGTTGGA GCGGCATCTG GTCGGCCGTG TGCCGATGAC 300 CCCGGGGGTT TCGATCGTGA CCTTGGCGGA GCCTGCCTGA CGGCGGGTGG AGCGAAGTCG 360 AAGGCCACGG GAATCCCTAA CCTTTCCGGG TTCCGCTCTC CTGCCTAGCT GGGTAGGGAA 420 GCCCCC ATG CTG GAC TTT CAT CGC GCC GAT CTG GCC CGA CTG GCC GCG 468 CGG GAC CGA TTG CGG GTG CTG GCC CCG CAG CGT GGC AAG GAT TTC GCG 516 TCC AAC GAT TAT CTG GGC TTG GCG AAC AGC CCC CGC CTC GCC GCC GCC 564 ATC GCC GCC GCG GTC GAG GAG GGC GTC CCC GTT GGG TCG GGC GGA TCG 612 CGA TTG CTG CGC GGC AAT CAC CCC GAA CAT GAG GCG CTG GAG GCG GAC 660 GCC GCC GCG TTC TTC GGG GCG GAG GCG AGC CTG TAT TTC TCC TCG GGC 708 TAC GGT GCC AAT GTC GCG ATC CTG GCG ACG CTG CCA CAG CGC GGC GAC 756 CTG ATC GTC CAC GAC TCG CTC GTC CAT GCC AGC ATG CGC CTC GTC CAC 804 CAC CAG CAT CGC ATC GTG CCG ATC GGC GGC CGC CTG GAG ATC GGC GAG 852 CGG CGC GGT GTC GCC GTC CAT GCT GTA AAG GCT TTC GAC CGC GAT CCA 900 CAC GGT GCC CTT GCC GCC CTG GTC GCG CCA TGC CCG GAT CGC ATC CTC 948 GAA GGC CGA TGC ATC GTT ATG CGC CGC CGC CAC GGC CTC GGC ACG CGA 996 CAG GCG CAT CCC CTC ATG CAT GCC ACC GGC GTC TTC GGC GAG CGG GGA 1044 CAG GGG CTG AGC ATC GCA GGC GAG CGG GTG GTG ACG CTC CAC ACC TGT 1092 GGC AAG GCG ATG GGC TGC GAG GGT GCG CTG GTC GCC GGG CCG ACG ATC 1140 GTG CGC GAC TAT CTG GTC AAT CGC GGG AGG GGC TTC ATC TTC TCG ACC 1188 GCG CCC TCG CCG CTG ATG GCA CGC GGG GTG CGC GAG GCG CTT CGC ATC 1236 CTG GCC GAC GAG CCC GAG CGG CGC ACC GCG CTG CAC GAC CGG ATC GCG 1284 CTG GCG GGC GCG CGG CTG GGC CGC CGC GGT GCG CTG GCG CAG GGC ACG 1332 CCG ATC CTG CCG CTG ATC CTG CAC GAC AAT GGC CGC ACC ATG CGC GCC 1380 GCT GAG GCG CTG CAG GCG CTT GGC TAT GAC ATA CGC GGC ATC CGC CCG 1428 CCG ACC GTG CCC GTG GGC TCG GCG CGG CTG CGG CTG TCG ATC ACT TTG 1476 AAT GTC GAG GCG GCG GAC ATC CTC GCC CTC GAC CAA GCA TTG CAA GAG 1524 GTT CTG GCA TGA 1536
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：427..1536 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 GATCCTGATC GCGGTCCCGG CGCATCAATG GATGTGGTCG GCGCATGACG TGGTGAACCA 60 TCACCATCGT CGGTATTCGA AGACGACCTT GGGGTCCGCG ATCGAGAAGG CGGGCCTGAA 120 ACCCCGCAAG CTCGGCTATT TCAACTCGCT GCTCTTCCCG CTCGCCGCGG CCGCGCGGAT 180 CGCCGGACGG ATCACGGGGC GCGACGACAG CGACGACTCG CCACCGCCCG CGCCGCTCAA 240 CAAAACGTTC GAGGCGATCT TCCGGTTGGA GCGGCATCTG GTCGGCCGTG TGCCGATGAC 300 CCCGGGGGTT TCGATCGTGA CCTTGGCGGA GCCTGCCTGA CGGCGGGTGG AGCGAAGTCG 360 AAGGCCACGG GAATCCCTAA CCTTTCCGGG TTCCGCTCTC CTGCCTAGCT GGGTAGGGAA 420 GCCCCC ATG CTG GAC TTT CAT CGC GCC GAT CTG GCC CGA CTG GCC GCG 468 CGG GAC CGA TTG CGG GTG CTG GCC CCG CAG CGT GGC AAG GAT TTC GCG 516 TCC AAC GAT TAT CTG GGC TTG GCG AAC AGC CCC CGC CTC GCC GCC GCC 564 ATC GCC GCC GCG GTC GAG GAG GGC GTC CCC GTT GGG TCG GGC GGA TCG 612 CGA TTG CTG CGC GGC AAT CAC CCC GAA CAT GAG GCG CTG GAG GCG GAC 660 GCC GCC GCG TTC TTC GGG GCG GAG GCG AGC CTG TAT TTC TCC TCG GGC 708 TAC GGT GCC AAT GTC GCG ATC CTG GCG ACG CTG CCA CAG CGC GGC GAC 756 CTG ATC GTC CAC GAC TCG CTC GTC CAT GCC AGC ATG CGC CTC GTC CAC 804 CAC CAG CAT CGC ATC GTG CCG ATC GGC GGC CGC CTG GAG ATC GGC GAG 852 CGG CGC GGT GTC GCC GTC CAT GCT GTA AAG GCT TTC GAC CGC GAT CCA 900 CAC GGT GCC CTT GCC GCC CTG GTC GCG CCA TGC CCG GAT CGC ATC CTC 948 GAA GGC CGA TGC ATC GTT ATG CGC CGC CGC CAC GGC CTC GGC ACG CGA 996 CAG GCG CAT CCC CTC ATG CAT GCC ACC GGC GTC TTC GGC GAG CGG GGA 1044 CAG GGG CTG AGC ATC GCA GGC GAG CGG GTG GTG ACG CTC CAC ACC TGT 1092 GGC AAG GCG ATG GGC TGC GAG GGT GCG CTG GTC GCC GGG CCG ACG ATC 1140 GTG CGC GAC TAT CTG GTC AAT CGC GGG AGG GGC TTC ATC TTC TCG ACC 1188 GCG CCC TCG CCG CTG ATG GCA CGC GGG GTG CGC GAG GCG CTT CGC ATC 1236 CTG GCC GAC GAG CCC GAG CGG CGC ACC GCG CTG CAC GAC CGG ATC GCG 1284 CTG GCG GGC GCG CGG CTG GGC CGC CGC GGT GCG CTG GCG CAG GGC ACG 1332 CCG ATC CTG CCG CTG ATC CTG CAC GAC AAT GGC CGC ACC ATG CGC GCC 1380 GCT GAG GCG CTG CAG GCG CTT GGC TAT GAC ATA CGC GGC ATC CGC CCG 1428 CCG ACC GTG CCC GTG GGC TCG GCG CGG CTG CGG CTG TCG ATC ACT TTG 1476 AAT GTC GAG GCG GCG GAC ATC CTC GCC CTC GAC CAA GCA TTG CAA GAG 1524 GTT CTG GCA TGA 1536
【００６５】配列番号：４ 配列の長さ：1408 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物名：スフィンゴモナス・エスピー（Sphingomonas s
p.） 株名：SC42405 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：202..1365 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 ACCGGAATGA CAGGCGGACA GCAGCAATAG GGCGGCAAGA GAGAGCGGCA GGGATCGCAT 60 CAGACGGGCA TCCTTCGGTT TTTCCTTTGC CGTTCCAACG CGCGAGGAAG GCGGCGGCTT 120 CACGTCCCGC CGCGAAATCG ATGCCCCTCC CGGCCAGCCA AGCATTGTGC CGGACGCCCG 180 CTTGCCATAC CGGCAGGGGC G ATG AGC AGG CTC GAT TCC TTC TTC GCA GCG 231 GCG CTC GAC CGG ATC GAC CGC GCC GGA CAA CGC CGC ACC TTG CGC CCC 279 GCC GCA CTC GAA AAG GGT GGC CGC GTC CAC CGC GAC GGG CAC GAA CTG 327 ATA GAT TTC TCC AGC AAC GAC TAT CTC GGC CTC GCC CGC CAC CCG CTG 375 CTG ATC GAG CGC GCC CGC GCC TGG ACG GAA GCC CAC GGC ACC GGC TCC 423 GGC GCC TCG CGA CTG GTG ACG GGA ACC AGC GCC ACC CAT CTC GCG ATC 471 GAG GCC CGC ATC GCC CGG TTC AAG CAT GCC GAA GCC GCG CTG GTC TTC 519 GCC AGC GGC TGG CAG GCC AAT GCC GCG GTG ATC CCC GCC CTG CTC GCC 567 GCC GTA CCC GGT TCA GCA GTC TTC ACC GAC CGG CTG ATC CAT GCC TCG 615 ATG CAC GCG GGC CTC GCG ATC TCG GGC ACC CGC CAG CAC CGC TTC CGC 663 CAT AAC GAC CTC GAT CAT CTG GAG GAA CTG CTG GCG AGC AAG GGC GCC 711 GAA GCC TCC GCC CGC CTG ATC CTC ACC GAG AGC GTG TTC TCG ATG GAC 759 GGC GAC CGC GCC GAC ATT GCC CGC CTG GCC GAG ATC GCC GCC CGC CAC 807 GAC GCA TTC CTG TTC GTG GAC GAA GCC CAT GCC ACC GGC GTG CTC GGC 855 CCC GGC GGC GCG GGC CTC TCG GCG GAA GTG CCC GGC GGG ATC GAC CTC 903 GTC ATG GGC ACC TTC AGC AAG GCG CTC GGC GGT TTC GGC GCC TAT GTC 951 GCC GGG TCA CAA GTG ATG ATC GAC TAC CTC GTC AAC GCG GCG AGC GGC 999 TTC ATC TTC ACC ACC GCC CCG CCG CCT GCC GTG CTG GGC GCC ATC GAC 1047 GCC GCG CTC GAC CTC GTG CCG GGC ATG GAT GCC GAG CGC GCC CAT CTT 1095 GCC GCG CTG GGT CAG CAG CTG CGC TCC GGC CTC GCC GCG CTC GGC ATC 1143 GAT CAC GGC GCA TCG AGC ACG CAG ATC GTC CCC GCC GTG ATC GGC GCG 1191 GAG GTC GCC GCG CTC GAC CTC TCC CGC AAG CTG GAA GAG CGC GGA CTG 1239 CTC GCT TCC GCG ATC CGC CCG CCC ACG GTG CCG CCC GGC ACC AGC CGC 1287 CTG CGC CTG GCG CTG CGC GCG ACC CAT GCG CCA AGC GAT ATC GAT GCC 1335 CTG CTG AAC GCG ATC GAG GCC TGC CGG TGA AGCTGCTTTT CGCCCATGGC 1385 TGGGGCTTCG ACCACACGTT CTG 1408
p.） 株名：SC42405 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：202..1365 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 ACCGGAATGA CAGGCGGACA GCAGCAATAG GGCGGCAAGA GAGAGCGGCA GGGATCGCAT 60 CAGACGGGCA TCCTTCGGTT TTTCCTTTGC CGTTCCAACG CGCGAGGAAG GCGGCGGCTT 120 CACGTCCCGC CGCGAAATCG ATGCCCCTCC CGGCCAGCCA AGCATTGTGC CGGACGCCCG 180 CTTGCCATAC CGGCAGGGGC G ATG AGC AGG CTC GAT TCC TTC TTC GCA GCG 231 GCG CTC GAC CGG ATC GAC CGC GCC GGA CAA CGC CGC ACC TTG CGC CCC 279 GCC GCA CTC GAA AAG GGT GGC CGC GTC CAC CGC GAC GGG CAC GAA CTG 327 ATA GAT TTC TCC AGC AAC GAC TAT CTC GGC CTC GCC CGC CAC CCG CTG 375 CTG ATC GAG CGC GCC CGC GCC TGG ACG GAA GCC CAC GGC ACC GGC TCC 423 GGC GCC TCG CGA CTG GTG ACG GGA ACC AGC GCC ACC CAT CTC GCG ATC 471 GAG GCC CGC ATC GCC CGG TTC AAG CAT GCC GAA GCC GCG CTG GTC TTC 519 GCC AGC GGC TGG CAG GCC AAT GCC GCG GTG ATC CCC GCC CTG CTC GCC 567 GCC GTA CCC GGT TCA GCA GTC TTC ACC GAC CGG CTG ATC CAT GCC TCG 615 ATG CAC GCG GGC CTC GCG ATC TCG GGC ACC CGC CAG CAC CGC TTC CGC 663 CAT AAC GAC CTC GAT CAT CTG GAG GAA CTG CTG GCG AGC AAG GGC GCC 711 GAA GCC TCC GCC CGC CTG ATC CTC ACC GAG AGC GTG TTC TCG ATG GAC 759 GGC GAC CGC GCC GAC ATT GCC CGC CTG GCC GAG ATC GCC GCC CGC CAC 807 GAC GCA TTC CTG TTC GTG GAC GAA GCC CAT GCC ACC GGC GTG CTC GGC 855 CCC GGC GGC GCG GGC CTC TCG GCG GAA GTG CCC GGC GGG ATC GAC CTC 903 GTC ATG GGC ACC TTC AGC AAG GCG CTC GGC GGT TTC GGC GCC TAT GTC 951 GCC GGG TCA CAA GTG ATG ATC GAC TAC CTC GTC AAC GCG GCG AGC GGC 999 TTC ATC TTC ACC ACC GCC CCG CCG CCT GCC GTG CTG GGC GCC ATC GAC 1047 GCC GCG CTC GAC CTC GTG CCG GGC ATG GAT GCC GAG CGC GCC CAT CTT 1095 GCC GCG CTG GGT CAG CAG CTG CGC TCC GGC CTC GCC GCG CTC GGC ATC 1143 GAT CAC GGC GCA TCG AGC ACG CAG ATC GTC CCC GCC GTG ATC GGC GCG 1191 GAG GTC GCC GCG CTC GAC CTC TCC CGC AAG CTG GAA GAG CGC GGA CTG 1239 CTC GCT TCC GCG ATC CGC CCG CCC ACG GTG CCG CCC GGC ACC AGC CGC 1287 CTG CGC CTG GCG CTG CGC GCG ACC CAT GCG CCA AGC GAT ATC GAT GCC 1335 CTG CTG AAC GCG ATC GAG GCC TGC CGG TGA AGCTGCTTTT CGCCCATGGC 1385 TGGGGCTTCG ACCACACGTT CTG 1408
【００６６】配列番号：５ 配列の長さ：1408 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物名：スフィンゴモナス・エスピー（Sphingomonas s
p.） 株名：SC42405 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：202..1365 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 ACCGGAATGA CAGGCGGACA GCAGCAATAG GGCGGCAAGA GAGAGCGGCA GGGATCGCAT 60 CAGACGGGCA TCCTTCGGTT TTTCCTTTGC CGTTCCAACG CGCGAGGAAG GCGGCGGCTT 120 CACGTCCCGC CGCGAAATCG ATGCCCCTCC CGGCCAGCCA AGCATTGTGC CGGACGCCCG 180 CTTGCCATAC GGGCAGGGGC G ATG AGC AGG CTC GAT TCC TTC TTC GCA GCG 231 GCG CTC GAC CGG ATC GAC CGC GCC GGA CAA CGC CGC ACC TTG CGC CCC 279 GCC GCA CTC GAA AAG GGT GGC CGC GTC CAC CGC GAC GGG CAC GAA CTG 327 ATA GAT TTC TCC AGC AAC GAC TAT CTC GGC CTC GCC CGC CAC CCG CTG 375 CTG ATC GAG CGC GCC CGC GCC TGG ACG GAA GCC CAC GGC ACC GGC TCC 423 GGC GCC TCG CGA CTG GTG ACG GGA ACC AGC GCC ACC CAT CTC GCG ATC 471 GAG GCC CGC ATC GCC CGG TTC AAG CAT GCC GAA GCC GCG CTG GTC TTC 519 GCC AGC GGC TGG CAG GCC AAT GCC GCG GTG ATC CCC GCC CTG CTC GCC 567 GCC GTA CCC GGT TCA GCA GTC TTC ACC GAC CGG CTG ATC CAT GCC TCG 615 ATG CAC GCG GGC CTC GCG ATC TCG GGC ACC CGC CAG CAC CGC TTC CGC 663 CAT AAC GAC CTC GAT CAT CTG GAG GAA CTG CTG GCG AGC AAG GGC GCC 711 GAA GCC TCC GCC CGC CTG ATC CTC ACC GAG AGC GTG TTC TCG ATG GAC 759 GGC GAC CGC GCC GAC ATT GCC CGC CTG GCC GAG ATC GCC GCC CGC CAC 807 GAC GCA TTC CTG TTC GTG GAC GAA GCC CAT GCC ACC GGC GTG CTC GGC 855 CCC GGC GGC GCG GGC CTC TCG GCG GAA GTG CCC GGC GGG ATC GAC CTC 903 GTC ATG GGC ACC TTC AGC AAG GCG CTC GGC GGT TTC GGC GCC TAT GTC 951 GCC GGG TCA CAA GTG ATG ATC GAC TAC CTC GTC AAC GCG GCG AGC GGC 999 TTC ATC TTC ACC ACC GCC CCG CCG CCT GCC GTG CTG GGC GCC ATC GAC 1047 GCC GCG CTC GAC CTC GTG CCG GGC ATG GAT GCC GAG CGC GCC CAT CTT 1095 GCC GCG CTG GGT CAG CAG CTG CGC TCC GGC CTC GCC GCG CTC GGC ATC 1143 GAT CAC GGC GCA TCG AGC ACG CAG ATC GTC CCC GCC GTG ATC GGC GCG 1191 GAG GTC GCC GCG CTC GAC CTC TCC CGC AAG CTG GAA GAG CGC GGA CTG 1239 CTC GCT TCC GCG ATC CGC CCG CCC ACG GTG CCG CCC GGC ACC AGC CGC 1287 CTG CGC CTG GCG CTG CGC GCG ACC CAT GCG CCA AGC GAT ATC GAT GCC 1335 CTG CTG AAC GCG ATC GAG GCC TGC CGG TGA AGCTGCTTTT CGCCCATGGC 1385 TGGGGCTTCG ACCACACGTT CTG 1408
p.） 株名：SC42405 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：202..1365 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 ACCGGAATGA CAGGCGGACA GCAGCAATAG GGCGGCAAGA GAGAGCGGCA GGGATCGCAT 60 CAGACGGGCA TCCTTCGGTT TTTCCTTTGC CGTTCCAACG CGCGAGGAAG GCGGCGGCTT 120 CACGTCCCGC CGCGAAATCG ATGCCCCTCC CGGCCAGCCA AGCATTGTGC CGGACGCCCG 180 CTTGCCATAC GGGCAGGGGC G ATG AGC AGG CTC GAT TCC TTC TTC GCA GCG 231 GCG CTC GAC CGG ATC GAC CGC GCC GGA CAA CGC CGC ACC TTG CGC CCC 279 GCC GCA CTC GAA AAG GGT GGC CGC GTC CAC CGC GAC GGG CAC GAA CTG 327 ATA GAT TTC TCC AGC AAC GAC TAT CTC GGC CTC GCC CGC CAC CCG CTG 375 CTG ATC GAG CGC GCC CGC GCC TGG ACG GAA GCC CAC GGC ACC GGC TCC 423 GGC GCC TCG CGA CTG GTG ACG GGA ACC AGC GCC ACC CAT CTC GCG ATC 471 GAG GCC CGC ATC GCC CGG TTC AAG CAT GCC GAA GCC GCG CTG GTC TTC 519 GCC AGC GGC TGG CAG GCC AAT GCC GCG GTG ATC CCC GCC CTG CTC GCC 567 GCC GTA CCC GGT TCA GCA GTC TTC ACC GAC CGG CTG ATC CAT GCC TCG 615 ATG CAC GCG GGC CTC GCG ATC TCG GGC ACC CGC CAG CAC CGC TTC CGC 663 CAT AAC GAC CTC GAT CAT CTG GAG GAA CTG CTG GCG AGC AAG GGC GCC 711 GAA GCC TCC GCC CGC CTG ATC CTC ACC GAG AGC GTG TTC TCG ATG GAC 759 GGC GAC CGC GCC GAC ATT GCC CGC CTG GCC GAG ATC GCC GCC CGC CAC 807 GAC GCA TTC CTG TTC GTG GAC GAA GCC CAT GCC ACC GGC GTG CTC GGC 855 CCC GGC GGC GCG GGC CTC TCG GCG GAA GTG CCC GGC GGG ATC GAC CTC 903 GTC ATG GGC ACC TTC AGC AAG GCG CTC GGC GGT TTC GGC GCC TAT GTC 951 GCC GGG TCA CAA GTG ATG ATC GAC TAC CTC GTC AAC GCG GCG AGC GGC 999 TTC ATC TTC ACC ACC GCC CCG CCG CCT GCC GTG CTG GGC GCC ATC GAC 1047 GCC GCG CTC GAC CTC GTG CCG GGC ATG GAT GCC GAG CGC GCC CAT CTT 1095 GCC GCG CTG GGT CAG CAG CTG CGC TCC GGC CTC GCC GCG CTC GGC ATC 1143 GAT CAC GGC GCA TCG AGC ACG CAG ATC GTC CCC GCC GTG ATC GGC GCG 1191 GAG GTC GCC GCG CTC GAC CTC TCC CGC AAG CTG GAA GAG CGC GGA CTG 1239 CTC GCT TCC GCG ATC CGC CCG CCC ACG GTG CCG CCC GGC ACC AGC CGC 1287 CTG CGC CTG GCG CTG CGC GCG ACC CAT GCG CCA AGC GAT ATC GAT GCC 1335 CTG CTG AAC GCG ATC GAG GCC TGC CGG TGA AGCTGCTTTT CGCCCATGGC 1385 TGGGGCTTCG ACCACACGTT CTG 1408
【００６７】配列番号：６ 配列の長さ：415 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 起源 生物名：スフィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingom
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列 Met Thr Ser Pro Val Trp His Pro Phe Thr Gln His Gly Leu Gly Glu 5 10 15 Pro Ile Pro Lys Val Ala Ser Ala Ser Gly Ala Val Leu Thr Thr Val 20 25 30 Asp Gly Arg Glu Val Ile Asp Ala Ile Ser Ser Trp Trp Val Thr Thr 35 40 45 His Gly His Asn His Pro Arg Ile Ser Ala Ala Ile Ala Glu Gln Ala 50 55 60 Gly Lys Leu Asp Gln Ile Ile Phe Ala Gly Trp Thr His Glu Pro Ala 65 70 75 80 Glu Glu Val Ala Ala Glu Leu Val Arg Ile Thr Pro Pro Lys Leu Thr 85 90 95 Arg Val Phe Phe Ser Asp Ser Gly Ser Thr Ala Val Glu Val Ala Leu 100 105 110 Lys Met Ala Leu Gly Tyr Trp Leu His Arg Gly Glu Pro Arg His Arg 115 120 125 Ile Leu Val Leu Glu His Ser Tyr His Gly Asp Thr Ile Gly Ala Met 130 135 140 Ser Val Gly Ala Arg Gly Val Tyr Asn Gln Ala Tyr Ala Pro Leu Leu 145 150 155 160 Phe Asp Val Gly Thr Ile Pro Tyr Pro Thr Asp Ile Gln Ala Thr Leu 165 170 175 Asp Thr Leu Glu Ala Glu Cys Arg Ala Gly Ala Ala Ala Phe Ile Val 180 185 190 Glu Pro Leu Val Leu Gly Ala Gly Gly Met Leu Phe Tyr Ala Ala Glu 195 200 205 Thr Leu Ala Ala Met Arg Glu Ile Cys Ala Ala His Gly Val Leu Phe 210 215 220 Ile Ala Asp Glu Val Met Thr Gly Trp Gly Arg Thr Gly Thr Ile Phe 225 230 235 240 Ala Cys Asp Gln Ala Gly Val Val Pro Asp Ile Leu Cys Leu Ser Lys 245 250 255 Gly Leu Thr Gly Gly Ala Val Pro Leu Ala Val Thr Leu Ala Thr Glu 260 265 270 Ala Ile Phe Gln Ala His Trp Ser Glu Thr Asp Arg Ser Lys Gln Phe 275 280 285 Phe His Ser Ser Ser Tyr Thr Ala Asn Pro Ile Ala Cys Ala Ala Ala 290 295 300 Ala Ala Asn Leu Ala Ile Trp Arg Glu Glu Pro Val Gln Ala Arg Ile 305 310 315 320 Asp Ala Leu Ala Glu Arg Gln Arg Ala His Leu Ala Thr Ile Ala Gly 325 330 335 Arg Asp Ala Val Arg Asn Pro Arg Ala Leu Gly Thr Ile Ala Ala Phe 340 345 350 Glu Leu Gly Ala Gly Gln Asp Tyr Leu Ser Asp Leu Gly Pro Arg Leu 355 360 365 Leu Ala His Phe Arg Glu Arg Asp Leu Leu Val Arg Pro Met Gly Asn 370 375 380 Ser Ile Tyr Val Met Pro Pro Tyr Ser Ile Thr Pro Glu Gln Leu Ala 385 390 395 400 405 410 415
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列 Met Thr Ser Pro Val Trp His Pro Phe Thr Gln His Gly Leu Gly Glu 5 10 15 Pro Ile Pro Lys Val Ala Ser Ala Ser Gly Ala Val Leu Thr Thr Val 20 25 30 Asp Gly Arg Glu Val Ile Asp Ala Ile Ser Ser Trp Trp Val Thr Thr 35 40 45 His Gly His Asn His Pro Arg Ile Ser Ala Ala Ile Ala Glu Gln Ala 50 55 60 Gly Lys Leu Asp Gln Ile Ile Phe Ala Gly Trp Thr His Glu Pro Ala 65 70 75 80 Glu Glu Val Ala Ala Glu Leu Val Arg Ile Thr Pro Pro Lys Leu Thr 85 90 95 Arg Val Phe Phe Ser Asp Ser Gly Ser Thr Ala Val Glu Val Ala Leu 100 105 110 Lys Met Ala Leu Gly Tyr Trp Leu His Arg Gly Glu Pro Arg His Arg 115 120 125 Ile Leu Val Leu Glu His Ser Tyr His Gly Asp Thr Ile Gly Ala Met 130 135 140 Ser Val Gly Ala Arg Gly Val Tyr Asn Gln Ala Tyr Ala Pro Leu Leu 145 150 155 160 Phe Asp Val Gly Thr Ile Pro Tyr Pro Thr Asp Ile Gln Ala Thr Leu 165 170 175 Asp Thr Leu Glu Ala Glu Cys Arg Ala Gly Ala Ala Ala Phe Ile Val 180 185 190 Glu Pro Leu Val Leu Gly Ala Gly Gly Met Leu Phe Tyr Ala Ala Glu 195 200 205 Thr Leu Ala Ala Met Arg Glu Ile Cys Ala Ala His Gly Val Leu Phe 210 215 220 Ile Ala Asp Glu Val Met Thr Gly Trp Gly Arg Thr Gly Thr Ile Phe 225 230 235 240 Ala Cys Asp Gln Ala Gly Val Val Pro Asp Ile Leu Cys Leu Ser Lys 245 250 255 Gly Leu Thr Gly Gly Ala Val Pro Leu Ala Val Thr Leu Ala Thr Glu 260 265 270 Ala Ile Phe Gln Ala His Trp Ser Glu Thr Asp Arg Ser Lys Gln Phe 275 280 285 Phe His Ser Ser Ser Tyr Thr Ala Asn Pro Ile Ala Cys Ala Ala Ala 290 295 300 Ala Ala Asn Leu Ala Ile Trp Arg Glu Glu Pro Val Gln Ala Arg Ile 305 310 315 320 Asp Ala Leu Ala Glu Arg Gln Arg Ala His Leu Ala Thr Ile Ala Gly 325 330 335 Arg Asp Ala Val Arg Asn Pro Arg Ala Leu Gly Thr Ile Ala Ala Phe 340 345 350 Glu Leu Gly Ala Gly Gln Asp Tyr Leu Ser Asp Leu Gly Pro Arg Leu 355 360 365 Leu Ala His Phe Arg Glu Arg Asp Leu Leu Val Arg Pro Met Gly Asn 370 375 380 Ser Ile Tyr Val Met Pro Pro Tyr Ser Ile Thr Pro Glu Gln Leu Ala 385 390 395 400 405 410 415
【００６８】配列番号：７ 配列の長さ：417 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 起源 生物名：スフィンゴモナス・エスピー（Sphingomonas s
p.） 株名：SC42405 配列 Met Thr Ser Ser Val Trp His Pro Phe Thr Gln His Gly Leu Gln Glu 5 10 15 Pro Val Pro Leu Val Thr His Ala Glu Gly Ala Leu Leu His Thr Ala 20 25 30 Asp Gly Lys Ala Val Val Asp Ala Val Ser Ser Trp Trp Val Thr Thr 35 40 45 His Gly His Ser His Pro Arg Ile Lys Ala Ala Ile Ala Glu Gln Ala 50 55 60 Gln Lys Leu Asp Gln Ile Ile Phe Ala Gly Trp Thr His Glu Pro Ala 65 70 75 80 Glu Gln Val Ala Ala Gly Leu Arg Ala Ile Met Pro Glu Ser Leu Thr 85 90 95 Arg Val Phe Phe Ser Asp Ser Gly Ser Thr Ser Val Glu Val Ala Leu 100 105 110 Lys Met Ala Leu Gly Tyr Trp His Trp Arg Gly Glu Asn Arg His Arg 115 120 125 Ile Val Val Met Glu Asn Ser Tyr His Gly Asp Thr Ile Gly Ala Met 130 135 140 Ser Val Gly Glu Arg Gly Val Phe Asn Gln Pro Tyr Glu Pro Leu Leu 145 150 155 160 Phe Asp Val Gly Arg Ile Pro Phe Pro Ala Ala Gly Ala Glu Gln Ala 165 170 175 Thr Leu Asp Ala Leu Glu Ala Ile Cys Arg Gln Pro Asp Thr Ala Ala 180 185 190 Leu Ile Val Glu Pro Leu Ile Leu Gly Ala Gly Gly Met Leu Val Tyr 195 200 205 Ser Ser Glu Thr Leu Ala Ala Met Gln Ala Ile Cys Ala Arg His Gly 210 215 220 Val Leu Phe Ile Ala Asp Glu Val Met Thr Ala Trp Gly Arg Thr Gly 225 230 235 240 Thr Leu Leu Ala Cys Glu Gln Ala Ser Val Val Pro Asp Ile Leu Cys 245 250 255 Leu Ser Lys Gly Leu Thr Gly Gly Ala Val Pro Leu Ala Val Thr Met 260 265 270 Ala Ser Glu Ala Ile Phe Glu Ala His Tyr Ser Thr Asp Arg Ala Arg 275 280 285 Met Phe Phe His Ser Ser Ser Tyr Thr Ala Asn Pro Ile Ala Cys Ala 290 295 300 Ala Ala Ala Ala Asn Leu Ala Ile Trp Arg Glu Glu Pro Val Leu Glu 305 310 315 320 Arg Ile Ala Ala Leu Ala Gly Lys Gln Ala Thr Trp Ile Glu Lys Leu 325 330 335 Gly Gln Phe Cys His Phe Asp Asn Pro Arg Thr Ile Gly Thr Ile Ala 340 345 350 Ala Leu Asp Leu Arg Thr Ser Gly Thr Ser Gly Tyr Met Ser Asp Leu 355 360 365 Ala Pro Arg Leu Met Ala Phe Phe Arg Glu Arg Asp Val Leu Leu Arg 370 375 380 Pro Leu Gly Asn Thr Val Tyr Val Met Pro Pro Tyr Cys Ile Ser Asp 385 390 395 400 Asn Gln Leu Gly Gln Val Trp Glu Ala Val Gly Glu Ala Val Ile Ser 405 410 415 Phe 417
p.） 株名：SC42405 配列 Met Thr Ser Ser Val Trp His Pro Phe Thr Gln His Gly Leu Gln Glu 5 10 15 Pro Val Pro Leu Val Thr His Ala Glu Gly Ala Leu Leu His Thr Ala 20 25 30 Asp Gly Lys Ala Val Val Asp Ala Val Ser Ser Trp Trp Val Thr Thr 35 40 45 His Gly His Ser His Pro Arg Ile Lys Ala Ala Ile Ala Glu Gln Ala 50 55 60 Gln Lys Leu Asp Gln Ile Ile Phe Ala Gly Trp Thr His Glu Pro Ala 65 70 75 80 Glu Gln Val Ala Ala Gly Leu Arg Ala Ile Met Pro Glu Ser Leu Thr 85 90 95 Arg Val Phe Phe Ser Asp Ser Gly Ser Thr Ser Val Glu Val Ala Leu 100 105 110 Lys Met Ala Leu Gly Tyr Trp His Trp Arg Gly Glu Asn Arg His Arg 115 120 125 Ile Val Val Met Glu Asn Ser Tyr His Gly Asp Thr Ile Gly Ala Met 130 135 140 Ser Val Gly Glu Arg Gly Val Phe Asn Gln Pro Tyr Glu Pro Leu Leu 145 150 155 160 Phe Asp Val Gly Arg Ile Pro Phe Pro Ala Ala Gly Ala Glu Gln Ala 165 170 175 Thr Leu Asp Ala Leu Glu Ala Ile Cys Arg Gln Pro Asp Thr Ala Ala 180 185 190 Leu Ile Val Glu Pro Leu Ile Leu Gly Ala Gly Gly Met Leu Val Tyr 195 200 205 Ser Ser Glu Thr Leu Ala Ala Met Gln Ala Ile Cys Ala Arg His Gly 210 215 220 Val Leu Phe Ile Ala Asp Glu Val Met Thr Ala Trp Gly Arg Thr Gly 225 230 235 240 Thr Leu Leu Ala Cys Glu Gln Ala Ser Val Val Pro Asp Ile Leu Cys 245 250 255 Leu Ser Lys Gly Leu Thr Gly Gly Ala Val Pro Leu Ala Val Thr Met 260 265 270 Ala Ser Glu Ala Ile Phe Glu Ala His Tyr Ser Thr Asp Arg Ala Arg 275 280 285 Met Phe Phe His Ser Ser Ser Tyr Thr Ala Asn Pro Ile Ala Cys Ala 290 295 300 Ala Ala Ala Ala Asn Leu Ala Ile Trp Arg Glu Glu Pro Val Leu Glu 305 310 315 320 Arg Ile Ala Ala Leu Ala Gly Lys Gln Ala Thr Trp Ile Glu Lys Leu 325 330 335 Gly Gln Phe Cys His Phe Asp Asn Pro Arg Thr Ile Gly Thr Ile Ala 340 345 350 Ala Leu Asp Leu Arg Thr Ser Gly Thr Ser Gly Tyr Met Ser Asp Leu 355 360 365 Ala Pro Arg Leu Met Ala Phe Phe Arg Glu Arg Asp Val Leu Leu Arg 370 375 380 Pro Leu Gly Asn Thr Val Tyr Val Met Pro Pro Tyr Cys Ile Ser Asp 385 390 395 400 Asn Gln Leu Gly Gln Val Trp Glu Ala Val Gly Glu Ala Val Ile Ser 405 410 415 Phe 417
【００６９】配列番号：８ 配列の長さ：1448 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物名：スフィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingom
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..1248 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 ATG ACC TCG CCG GTC TGG CAT CCC TTC ACC CAG CAT GGT CTG GGC GAG 48 CCG ATT CCT AAG GTG GCT TCC GCC TCT GGC GCG GTG CTG ACC ACC GTC 96 GAT GGC CGC GAG GTG ATC GAT GCC ATC TCT AGC TGG TGG GTG ACC ACG 144 CAC GGG CAC AAC CAT CCC CGC ATC AGC GCC GCC ATC GCC GAG CAG GCA 192 GGC AAG CTC GAC CAG ATC ATC TTC GCC GGC TGG ACC CAT GAG CCG GCC 240 GAG GAG GTT GCC GCC GAG CTG GTA CGG ATC ACG CCG CCC AAG CTG ACG 288 CGG GTG TTC TTT TCC GAT TCT GGT TCG ACG GCG GTC GAG GTC GCG CTG 336 AAG ATG GCG CTG GGC TAC TGG CTC CAC CGG GGC GAG CCG CGC CAC CGC 384 ATC CTC GTC CTC GAA CAC AGC TAT CAT GGC GAC ACG ATC GGC GCG ATG 432 TCG GTC GGC GCG CGG GGG GTA TAC AAC CAG GCT TAT GCG CCG TTG CTG 480 TTC GAT GTC GGC ACC ATC CCC TAT CCG ACC GAC ATA CAG GCG ACG CTC 528 GAC ACG CTG GAG GCG GAG TGC CGG GCG GGC GCG GCG GCG TTC ATC GTC 576 GAG CCG CTG GTG CTG GGG GCG GGG GGC ATG CTC TTC TAC GCC GCC GAA 624 ACG CTG GCC GCG ATG CGT GAG ATA TGC GCG GCG CAT GGC GTG CTG TTC 672 ATC GCT GAT GAG GTG ATG ACC GGA TGG GGG CGC ACC GGC ACG ATC TTC 720 GCC TGT GAC CAG GCG GGC GTG GTC CCC GAT ATC CTC TGC CTG TCC AAG 768 GGG CTG ACC GGC GGT GCG GTA CCG CTG GCG GTG ACA CTG GCG ACC GAG 816 GCG ATC TTC CAG GCG CAC TGG TCG GAA ACC GAT CGG TCG AAG CAG TTC 864 TTC CAC TCG TCC AGC TAC ACC GCC AAC CCG ATC GCC TGC GCG GCG GCG 912 GCC GCC AAT CTG GCG ATC TGG CGC GAG GAG CCG GTG CAG GCG CGG ATC 960 GAC GCG CTC GCC GAG CGG CAG CGG GCG CAT CTG GCG ACG ATC GCG GGG 1008 CGG GAT GCG GTG CGA AAC CCG CGC GCG CTC GGC ACC ATC GCG GCG TTC 1056 GAA CTG GGG GCG GGG CAG GAT TAT CTC TCC GAT CTG GGA CCC CGG TTG 1104 CTG GCC CAT TTC CGG GAG CGC GAT CTG CTC GTC CGG CCG ATG GGC AAT 1152 AGC ATC TAT GTC ATG CCG CCC TAT TCC ATT ACG CCC GAG CAA CTG GCG 1200 CGC ATT TGG GGC GGC ATC GAT GAG GCG ATT GCC CGC TTC GGG AGT 1245 TGA GACGGGCCGG GGCCTTTGAC TTTACGGCAT TTCATTTGCT TTATCCGGCG 1298 ACGATCGAAA AGGGAGCGGG CATGGGCGTG GCGAAGACTG GGGCGATGGG GGCTCTGGCA 1358 TCGGTGACGG CGCTGATGTG GGGCCTGGCC GCCACCGCGC AGACGACCCC GCCCGCCGCC 1418 AACCCGGCCA CCCCGCCGCT GGGCCCGATC 1448
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..1248 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 ATG ACC TCG CCG GTC TGG CAT CCC TTC ACC CAG CAT GGT CTG GGC GAG 48 CCG ATT CCT AAG GTG GCT TCC GCC TCT GGC GCG GTG CTG ACC ACC GTC 96 GAT GGC CGC GAG GTG ATC GAT GCC ATC TCT AGC TGG TGG GTG ACC ACG 144 CAC GGG CAC AAC CAT CCC CGC ATC AGC GCC GCC ATC GCC GAG CAG GCA 192 GGC AAG CTC GAC CAG ATC ATC TTC GCC GGC TGG ACC CAT GAG CCG GCC 240 GAG GAG GTT GCC GCC GAG CTG GTA CGG ATC ACG CCG CCC AAG CTG ACG 288 CGG GTG TTC TTT TCC GAT TCT GGT TCG ACG GCG GTC GAG GTC GCG CTG 336 AAG ATG GCG CTG GGC TAC TGG CTC CAC CGG GGC GAG CCG CGC CAC CGC 384 ATC CTC GTC CTC GAA CAC AGC TAT CAT GGC GAC ACG ATC GGC GCG ATG 432 TCG GTC GGC GCG CGG GGG GTA TAC AAC CAG GCT TAT GCG CCG TTG CTG 480 TTC GAT GTC GGC ACC ATC CCC TAT CCG ACC GAC ATA CAG GCG ACG CTC 528 GAC ACG CTG GAG GCG GAG TGC CGG GCG GGC GCG GCG GCG TTC ATC GTC 576 GAG CCG CTG GTG CTG GGG GCG GGG GGC ATG CTC TTC TAC GCC GCC GAA 624 ACG CTG GCC GCG ATG CGT GAG ATA TGC GCG GCG CAT GGC GTG CTG TTC 672 ATC GCT GAT GAG GTG ATG ACC GGA TGG GGG CGC ACC GGC ACG ATC TTC 720 GCC TGT GAC CAG GCG GGC GTG GTC CCC GAT ATC CTC TGC CTG TCC AAG 768 GGG CTG ACC GGC GGT GCG GTA CCG CTG GCG GTG ACA CTG GCG ACC GAG 816 GCG ATC TTC CAG GCG CAC TGG TCG GAA ACC GAT CGG TCG AAG CAG TTC 864 TTC CAC TCG TCC AGC TAC ACC GCC AAC CCG ATC GCC TGC GCG GCG GCG 912 GCC GCC AAT CTG GCG ATC TGG CGC GAG GAG CCG GTG CAG GCG CGG ATC 960 GAC GCG CTC GCC GAG CGG CAG CGG GCG CAT CTG GCG ACG ATC GCG GGG 1008 CGG GAT GCG GTG CGA AAC CCG CGC GCG CTC GGC ACC ATC GCG GCG TTC 1056 GAA CTG GGG GCG GGG CAG GAT TAT CTC TCC GAT CTG GGA CCC CGG TTG 1104 CTG GCC CAT TTC CGG GAG CGC GAT CTG CTC GTC CGG CCG ATG GGC AAT 1152 AGC ATC TAT GTC ATG CCG CCC TAT TCC ATT ACG CCC GAG CAA CTG GCG 1200 CGC ATT TGG GGC GGC ATC GAT GAG GCG ATT GCC CGC TTC GGG AGT 1245 TGA GACGGGCCGG GGCCTTTGAC TTTACGGCAT TTCATTTGCT TTATCCGGCG 1298 ACGATCGAAA AGGGAGCGGG CATGGGCGTG GCGAAGACTG GGGCGATGGG GGCTCTGGCA 1358 TCGGTGACGG CGCTGATGTG GGGCCTGGCC GCCACCGCGC AGACGACCCC GCCCGCCGCC 1418 AACCCGGCCA CCCCGCCGCT GGGCCCGATC 1448
【００７０】配列番号：９ 配列の長さ：1459 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物名：スフィンゴモナス・エスピー（Sphingomonas s
p.） 株名：SC42405 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..1253 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 ATG ACG TCA TCG GTC TGG CAC CCC TTC ACC CAG CAC GGC CTG CAA GAG 48 CCG GTC CCG CTG GTC ACC CAT GCC GAG GGC GCG CTG CTC CAC ACG GCT 96 GAC GGC AAG GCA GTG GTG GAC GCG GTG TCC TCG TGG TGG GTG ACG ACC 144 CAC GGC CAC TCC CAT CCG CGC ATC AAG GCC GCC ATC GCG GAG CAG GCG 192 CAG AAG CTC GAC CAG ATC ATC TTC GCC GGA TGG ACC CAC GAA CCC GCC 240 GAG CAA GTC GCA GCA GGC CTG CGC GCG ATC ATG CCG GAA AGC CTG ACG 288 CGG GTG TTC TTC TCC GAT TCG GGT TCG ACC AGC GTG GAA GTC GCG CTG 336 AAG ATG GCG CTC GGC TAC TGG CAC TGG CGC GGC GAG AAC CGC CAC CGC 384 ATC GTC GTG ATG GAA AAC TCC TAC CAC GGC GAC ACC ATC GGC GCG ATG 432 TCG GTG GGC GAG CGC GGC GTG TTC AAC CAG CCC TAC GAA CCG CTG CTG 480 TTC GAC GTG GGC CGC ATT CCC TTC CCC GCC GCC GGG GCC GAG CAG GCA 528 ACG CTG GAC GCA CTC GAA GCG ATC TGC CGC CAG CCG GAC ACC GCC GCG 576 CTG ATC GTC GAG CCG CTG ATC CTC GGC GCC GGC GGC ATG CTG GTC TAT 624 TCG TCC GAG ACG CTC GCC GCG ATG CAG GCG ATC TGC GCC CGC CAC GGC 672 GTG CTC TTC ATC GCC GAC GAA GTG ATG ACC GCC TGG GGC CGC ACC GGC 720 ACC CTC CTC GCC TGC GAA CAG GCA AGC GTG GTC CCG GAC ATC CTC TGC 768 CTC TCC AAG GGC CTG ACC GGC GGT GCC GTC CCG CTC GCT GTC ACG ATG 816 GCC AGC GAA GCG ATC TTC GAG GCG CAC TAC TCC ACC GAC CGC GCG CGG 864 ATG TTC TTC CAC TCC TCC AGC TAC ACC GCG AAC CCG ATC GCC TGC GCC 912 GCC GCC GCC GCC AAC CTG GCT ATC TGG CGC GAG GAA CCG GTG CTG GAA 960 CGC ATC GCC GCG CTG GCC GGG AAA CAG GCG ACG TGG ATC GAG AAG CTC 1008 GGC CAG TTC TGC CAC TTC GAC AAT CCC CGC ACG ATC GGC ACC ATC GCC 1056 GCG CTC GAC CTC AGG ACC TCA GGC ACC AGC GGC TAC ATG AGC GAC CTC 1104 GCC CCG CGC CTG ATG GCG TTC TTC CGC GAG CGG GAC GTG CTG TTG CGG 1152 CCG CTG GGG AAC ACC GTC TAC GTC ATG CCG CCT TAC TGC ATT TCC GAT 1200 AAT CAG CTT GGG CAG GTT TGG GAG GCT GTC GGG GAA GCG GTG ATT TCG 1248 TTT TAA GAACGATTTT AAGATGAAGG ATGAAGAGCA GGGGTCAAAA CCCCTGCACC 1304 CCATTACTGT CGAGGTCAGG TACGACCTAT CCGTCTTGCG CCCATGGCAG CGTCGGGAGG 1364 CATATTGGCT GCGCCGCAAG GAGCGCACTA CGCATAGGGC GCGCGCGACG TCGACATTCC 1424 GAGGGTCTGG GGGATCATCC CCCAGGACTT CTCCC 1459
p.） 株名：SC42405 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..1253 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 ATG ACG TCA TCG GTC TGG CAC CCC TTC ACC CAG CAC GGC CTG CAA GAG 48 CCG GTC CCG CTG GTC ACC CAT GCC GAG GGC GCG CTG CTC CAC ACG GCT 96 GAC GGC AAG GCA GTG GTG GAC GCG GTG TCC TCG TGG TGG GTG ACG ACC 144 CAC GGC CAC TCC CAT CCG CGC ATC AAG GCC GCC ATC GCG GAG CAG GCG 192 CAG AAG CTC GAC CAG ATC ATC TTC GCC GGA TGG ACC CAC GAA CCC GCC 240 GAG CAA GTC GCA GCA GGC CTG CGC GCG ATC ATG CCG GAA AGC CTG ACG 288 CGG GTG TTC TTC TCC GAT TCG GGT TCG ACC AGC GTG GAA GTC GCG CTG 336 AAG ATG GCG CTC GGC TAC TGG CAC TGG CGC GGC GAG AAC CGC CAC CGC 384 ATC GTC GTG ATG GAA AAC TCC TAC CAC GGC GAC ACC ATC GGC GCG ATG 432 TCG GTG GGC GAG CGC GGC GTG TTC AAC CAG CCC TAC GAA CCG CTG CTG 480 TTC GAC GTG GGC CGC ATT CCC TTC CCC GCC GCC GGG GCC GAG CAG GCA 528 ACG CTG GAC GCA CTC GAA GCG ATC TGC CGC CAG CCG GAC ACC GCC GCG 576 CTG ATC GTC GAG CCG CTG ATC CTC GGC GCC GGC GGC ATG CTG GTC TAT 624 TCG TCC GAG ACG CTC GCC GCG ATG CAG GCG ATC TGC GCC CGC CAC GGC 672 GTG CTC TTC ATC GCC GAC GAA GTG ATG ACC GCC TGG GGC CGC ACC GGC 720 ACC CTC CTC GCC TGC GAA CAG GCA AGC GTG GTC CCG GAC ATC CTC TGC 768 CTC TCC AAG GGC CTG ACC GGC GGT GCC GTC CCG CTC GCT GTC ACG ATG 816 GCC AGC GAA GCG ATC TTC GAG GCG CAC TAC TCC ACC GAC CGC GCG CGG 864 ATG TTC TTC CAC TCC TCC AGC TAC ACC GCG AAC CCG ATC GCC TGC GCC 912 GCC GCC GCC GCC AAC CTG GCT ATC TGG CGC GAG GAA CCG GTG CTG GAA 960 CGC ATC GCC GCG CTG GCC GGG AAA CAG GCG ACG TGG ATC GAG AAG CTC 1008 GGC CAG TTC TGC CAC TTC GAC AAT CCC CGC ACG ATC GGC ACC ATC GCC 1056 GCG CTC GAC CTC AGG ACC TCA GGC ACC AGC GGC TAC ATG AGC GAC CTC 1104 GCC CCG CGC CTG ATG GCG TTC TTC CGC GAG CGG GAC GTG CTG TTG CGG 1152 CCG CTG GGG AAC ACC GTC TAC GTC ATG CCG CCT TAC TGC ATT TCC GAT 1200 AAT CAG CTT GGG CAG GTT TGG GAG GCT GTC GGG GAA GCG GTG ATT TCG 1248 TTT TAA GAACGATTTT AAGATGAAGG ATGAAGAGCA GGGGTCAAAA CCCCTGCACC 1304 CCATTACTGT CGAGGTCAGG TACGACCTAT CCGTCTTGCG CCCATGGCAG CGTCGGGAGG 1364 CATATTGGCT GCGCCGCAAG GAGCGCACTA CGCATAGGGC GCGCGCGACG TCGACATTCC 1424 GAGGGTCTGG GGGATCATCC CCCAGGACTT CTCCC 1459
【００７１】配列番号：１０ 配列の長さ：206 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 起源 生物名：スフィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingom
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列 Met Ser Ala Ile Ile Val Thr Gly Thr Asp Thr Glu Ile Gly Lys Thr 5 10 15 Val Phe Ser Ala Ala Leu Thr Gly Ala Leu Gly Ala Ser Tyr Trp Lys 20 25 30 Pro Val Gln Ala Gly Thr Asp Glu Glu Gly His Gly Asp Ala Glu Thr 35 40 45 Val Ser Ala Leu Ser Gly Arg Pro Val Leu Pro Ser Ala Tyr Arg Leu 50 55 60 Lys Thr Pro Cys Ser Pro His Leu Ala Ala Glu Ile Asp Gly Val Thr 65 70 75 80 Ile Glu Ile Asp Arg Leu Val Leu Pro Gln Val Asp Gly Pro Leu Val 85 90 95 Ala Glu Gly Ala Gly Gly Val Leu Val Pro Val Thr Arg Gln Leu Leu 100 105 110 Phe Ala Asp Leu Phe Ala Arg Trp Gly Arg Pro Val Val Leu Val Ala 115 120 125 Arg Thr Gly Leu Gly Thr Ile Asn His Ser Leu Leu Ser Ile Glu Ala 130 135 140 Leu Arg Ala Arg Gly Val Asp Val Leu Gly Val Ala Phe Val Gly Asp 145 150 155 160 Ala Val Glu Asp Ser Glu Ala Thr Ile Ala Ala Ile Gly Gly Val Lys 165 170 175 Arg Leu Gly Arg Leu Pro Arg Leu Ala Thr Leu Asn Arg Glu Thr Leu 180 185 190 Thr Glu Ala Phe Ala Ala His Phe Arg Ser Glu Asp Phe Arg 195 200 205 206
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列 Met Ser Ala Ile Ile Val Thr Gly Thr Asp Thr Glu Ile Gly Lys Thr 5 10 15 Val Phe Ser Ala Ala Leu Thr Gly Ala Leu Gly Ala Ser Tyr Trp Lys 20 25 30 Pro Val Gln Ala Gly Thr Asp Glu Glu Gly His Gly Asp Ala Glu Thr 35 40 45 Val Ser Ala Leu Ser Gly Arg Pro Val Leu Pro Ser Ala Tyr Arg Leu 50 55 60 Lys Thr Pro Cys Ser Pro His Leu Ala Ala Glu Ile Asp Gly Val Thr 65 70 75 80 Ile Glu Ile Asp Arg Leu Val Leu Pro Gln Val Asp Gly Pro Leu Val 85 90 95 Ala Glu Gly Ala Gly Gly Val Leu Val Pro Val Thr Arg Gln Leu Leu 100 105 110 Phe Ala Asp Leu Phe Ala Arg Trp Gly Arg Pro Val Val Leu Val Ala 115 120 125 Arg Thr Gly Leu Gly Thr Ile Asn His Ser Leu Leu Ser Ile Glu Ala 130 135 140 Leu Arg Ala Arg Gly Val Asp Val Leu Gly Val Ala Phe Val Gly Asp 145 150 155 160 Ala Val Glu Asp Ser Glu Ala Thr Ile Ala Ala Ile Gly Gly Val Lys 165 170 175 Arg Leu Gly Arg Leu Pro Arg Leu Ala Thr Leu Asn Arg Glu Thr Leu 180 185 190 Thr Glu Ala Phe Ala Ala His Phe Arg Ser Glu Asp Phe Arg 195 200 205 206
【００７２】配列番号：１１ 配列の長さ：20９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 起源 生物名：スフィンゴモナス・エスピー（Sphingomonas s
p.） 株名：SC42405 配列 Met Arg Pro Leu Ile Val Thr Gly Thr Asp Thr Glu Ile Gly Lys Thr 5 10 15 Val Phe Ala Ala Ala Leu Ala Gly Ala Leu Gly Ser His Tyr Trp Lys 20 25 30 Pro Val Gln Ala Gly Leu Glu Glu Asp Gly Gly Asp Gly Asp Arg Val 35 40 45 Ala Arg Leu Ser Gly Leu Pro Ala Ser His Ile Leu Pro Glu Ala Tyr 50 55 60 Arg Leu Ala Thr Pro Cys Ser Pro His Leu Ala Ala Glu Ile Asp Gly 65 70 75 80 Val Glu Ile Asp Pro Glu Arg Leu Ala Leu Pro Gln Val Asp Gly Pro 85 90 95 Leu Val Val Glu Gly Ala Gly Gly Val Met Val Pro Leu Thr Arg Thr 100 105 110 Thr Thr Tyr Ala Asp Gln Phe Ala Arg Trp Asn Ala Pro Val Val Leu 115 120 125 Val Ala Arg Thr Met Leu Gly Thr Ile Asn His Ser Leu Leu Ser Ile 130 135 140 Glu Ala Leu Arg Ala Arg Gly Val Glu Val Leu Gly Val Ala Phe Val 145 150 155 160 Gly Asp Pro Met Glu Asp Ser Glu Ala Thr Ile Cys Ala Met Ala Asn 165 170 175 Val Arg Arg Leu Gly Arg Leu Pro Arg Leu Ala Ser Leu Thr Pro Glu 180 185 190 Asn Leu Ala Lys Ala Phe Ala Glu Asn Phe His Ile Gly Asp Phe Thr 195 200 205 Gln 209
p.） 株名：SC42405 配列 Met Arg Pro Leu Ile Val Thr Gly Thr Asp Thr Glu Ile Gly Lys Thr 5 10 15 Val Phe Ala Ala Ala Leu Ala Gly Ala Leu Gly Ser His Tyr Trp Lys 20 25 30 Pro Val Gln Ala Gly Leu Glu Glu Asp Gly Gly Asp Gly Asp Arg Val 35 40 45 Ala Arg Leu Ser Gly Leu Pro Ala Ser His Ile Leu Pro Glu Ala Tyr 50 55 60 Arg Leu Ala Thr Pro Cys Ser Pro His Leu Ala Ala Glu Ile Asp Gly 65 70 75 80 Val Glu Ile Asp Pro Glu Arg Leu Ala Leu Pro Gln Val Asp Gly Pro 85 90 95 Leu Val Val Glu Gly Ala Gly Gly Val Met Val Pro Leu Thr Arg Thr 100 105 110 Thr Thr Tyr Ala Asp Gln Phe Ala Arg Trp Asn Ala Pro Val Val Leu 115 120 125 Val Ala Arg Thr Met Leu Gly Thr Ile Asn His Ser Leu Leu Ser Ile 130 135 140 Glu Ala Leu Arg Ala Arg Gly Val Glu Val Leu Gly Val Ala Phe Val 145 150 155 160 Gly Asp Pro Met Glu Asp Ser Glu Ala Thr Ile Cys Ala Met Ala Asn 165 170 175 Val Arg Arg Leu Gly Arg Leu Pro Arg Leu Ala Ser Leu Thr Pro Glu 180 185 190 Asn Leu Ala Lys Ala Phe Ala Glu Asn Phe His Ile Gly Asp Phe Thr 195 200 205 Gln 209
【００７３】配列番号：１２ 配列の長さ：621 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物名：スフィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingom
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..621 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 ATG AGC GCC ATC ATC GTC ACC GGC ACT GAT ACC GAG ATC GGC AAG ACC 48 GTC TTC TCC GCC GCG CTG ACC GGC GCG TTG GGG GCG AGC TAT TGG AAG 96 CCG GTC CAG GCG GGA ACC GAC GAG GAA GGG CAT GGC GAT GCC GAG ACG 144 GTG TCG GCC CTG AGC GGA CGT CCG GTC CTG CCC TCC GCC TAT CGG TTG 192 AAG ACG CCC TGC TCG CCG CAT CTG GCC GCC GAG ATC GAC GGG GTG ACG 240 ATC GAG ATC GAT CGG CTG GTG CTG CCG CAG GTG GAC GGG CCG CTG GTC 288 GCC GAG GGG GCG GGC GGC GTG CTG GTG CCG GTG ACG CGG CAG TTG CTG 336 TTC GCC GAT CTC TTC GCC CGC TGG GGC CGG CCG GTG GTG CTG GTC GCG 384 CGG ACC GGG CTG GGG ACG ATC AAC CAC AGC CTG TTG TCG ATC GAG GCG 432 TTG CGC GCG CGC GGC GTG GAC GTG CTG GGG GTC GCG TTC GTC GGT GAC 480 GCA GTC GAG GAT AGC GAG GCC ACC ATC GCC GCG ATC GGC GGG GTG AAG 528 CGA CTC GGC CGC CTG CCG CGT CTG GCC ACG CTA AAT CGC GAG ACA CTG 576 ACC GAG GCG TTC GCG GCG CAT TTC CGG AGC GAG GAT TTC CGA TGA 621
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..621 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 ATG AGC GCC ATC ATC GTC ACC GGC ACT GAT ACC GAG ATC GGC AAG ACC 48 GTC TTC TCC GCC GCG CTG ACC GGC GCG TTG GGG GCG AGC TAT TGG AAG 96 CCG GTC CAG GCG GGA ACC GAC GAG GAA GGG CAT GGC GAT GCC GAG ACG 144 GTG TCG GCC CTG AGC GGA CGT CCG GTC CTG CCC TCC GCC TAT CGG TTG 192 AAG ACG CCC TGC TCG CCG CAT CTG GCC GCC GAG ATC GAC GGG GTG ACG 240 ATC GAG ATC GAT CGG CTG GTG CTG CCG CAG GTG GAC GGG CCG CTG GTC 288 GCC GAG GGG GCG GGC GGC GTG CTG GTG CCG GTG ACG CGG CAG TTG CTG 336 TTC GCC GAT CTC TTC GCC CGC TGG GGC CGG CCG GTG GTG CTG GTC GCG 384 CGG ACC GGG CTG GGG ACG ATC AAC CAC AGC CTG TTG TCG ATC GAG GCG 432 TTG CGC GCG CGC GGC GTG GAC GTG CTG GGG GTC GCG TTC GTC GGT GAC 480 GCA GTC GAG GAT AGC GAG GCC ACC ATC GCC GCG ATC GGC GGG GTG AAG 528 CGA CTC GGC CGC CTG CCG CGT CTG GCC ACG CTA AAT CGC GAG ACA CTG 576 ACC GAG GCG TTC GCG GCG CAT TTC CGG AGC GAG GAT TTC CGA TGA 621
【００７４】配列番号：１３ 配列の長さ：62７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物名：スフィンゴモナス・エスピー（Sphingomonas s
p.） 株名：SC42405 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..627 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 ATG AGA CCG CTT ATC GTC ACC GGA ACC GAT ACC GAG ATC GGC AAG ACC 48 GTC TTC GCC GCC GCG CTC GCG GGC GCC CTC GGC TCA CAT TAC TGG AAG 96 CCG GTG CAG GCA GGC CTC GAA GAA GAC GGC GGC GAC GGC GAC CGC GTG 144 GCG CGC CTC TCC GGC CTG CCT GCC AGC CAT ATT CTG CCC GAA GCC TAT 192 CGC CTC GCC ACC CCC TGC TCG CCG CAC CTC GCC GCC GAG ATC GAC GGG 240 GTG GAA ATC GAT CCC GAG CGC CTC GCC TTG CCG CAA GTG GAC GGT CCG 288 CTG GTG GTC GAA GGC GCA GGC GGC GTC ATG GTC CCG CTC ACC CGG ACC 336 ACG ACT TAT GCC GAC CAG TTC GCG CGG TGG AAC GCC CCG GTC GTG CTG 384 GTG GCG CGC ACG ATG CTC GGC ACG ATC AAC CAT TCG CTG CTC TCC ATC 432 GAG GCC CTG CGC GCG CGC GGC GTC GAA GTG CTG GGC GTG GCC TTC GTC 480 GGC GAT CCG ATG GAA GAC AGC GAG GCG ACG ATC TGC GCC ATG GCC AAT 528 GTC CGC CGC CTC GGC CGC CTG CCC CGC CTC GCC TCG CTG ACC CCG GAG 576 AAC CTC GCC AAG GCC TTC GCC GAA AAC TTC CAT ATC GGA GAT TTC ACG 624 CAA 627
p.） 株名：SC42405 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..627 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 ATG AGA CCG CTT ATC GTC ACC GGA ACC GAT ACC GAG ATC GGC AAG ACC 48 GTC TTC GCC GCC GCG CTC GCG GGC GCC CTC GGC TCA CAT TAC TGG AAG 96 CCG GTG CAG GCA GGC CTC GAA GAA GAC GGC GGC GAC GGC GAC CGC GTG 144 GCG CGC CTC TCC GGC CTG CCT GCC AGC CAT ATT CTG CCC GAA GCC TAT 192 CGC CTC GCC ACC CCC TGC TCG CCG CAC CTC GCC GCC GAG ATC GAC GGG 240 GTG GAA ATC GAT CCC GAG CGC CTC GCC TTG CCG CAA GTG GAC GGT CCG 288 CTG GTG GTC GAA GGC GCA GGC GGC GTC ATG GTC CCG CTC ACC CGG ACC 336 ACG ACT TAT GCC GAC CAG TTC GCG CGG TGG AAC GCC CCG GTC GTG CTG 384 GTG GCG CGC ACG ATG CTC GGC ACG ATC AAC CAT TCG CTG CTC TCC ATC 432 GAG GCC CTG CGC GCG CGC GGC GTC GAA GTG CTG GGC GTG GCC TTC GTC 480 GGC GAT CCG ATG GAA GAC AGC GAG GCG ACG ATC TGC GCC ATG GCC AAT 528 GTC CGC CGC CTC GGC CGC CTG CCC CGC CTC GCC TCG CTG ACC CCG GAG 576 AAC CTC GCC AAG GCC TTC GCC GAA AAC TTC CAT ATC GGA GAT TTC ACG 624 CAA 627
【００７５】配列番号：１４ 配列の長さ：341 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 起源 生物名：スフィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingom
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列 Met Thr Thr Thr Pro Ala Leu Ser Ser Glu Ala Thr Pro Arg Thr Asp 5 10 15 Trp Thr Arg Ala Glu Ile Ala Ala Leu Phe Asp Leu Pro Phe Thr Glu 20 25 30 Leu Leu Phe Arg Ala Ala Glu Val His Arg Ala His His Ala Ala Asp 35 40 45 Gln Val Gln Leu Ser Thr Leu Leu Ser Ile Lys Thr Gly Gly Cys Pro 50 55 60 Glu Asp Cys Gly Tyr Cys Ser Gln Ser Thr His Ala Asp Thr Gly Leu 65 70 75 80 Lys Ala Thr Lys Leu Met Asp Pro Arg Ala Val Leu Gln Ala Ala Ala 85 90 95 Gln Ala Lys Asp His Gly Ser Thr Arg Phe Cys Met Gly Ala Ala Trp 100 105 110 Arg Asn Pro Lys Asp Arg Asp Met Pro Ala Ile Val Glu Met Val Lys 115 120 125 Gly Val Arg Ala Met Gly Met Glu Thr Cys Met Thr Leu Gly Met Leu 130 135 140 Thr Asp Ala Gln Ala Gln Thr Leu Ala Glu Ala Gly Leu Asp Tyr Tyr 145 150 155 160 Asn His Asn Ile Asp Thr Ser Pro Glu Arg Tyr Gly Asp Val Ile Thr 165 170 175 Thr Arg Ser Phe Gly Glu Arg Leu Glu Thr Leu Glu His Val Arg Asp 180 185 190 Ala Gly Ile Asn Val Cys Cys Gly Gly Ile Val Gly Met Gly Glu Thr 195 200 205 Arg Gly Asp Arg Val Gly Phe Ile His Ala Leu Ala Thr Leu Pro Val 210 215 220 His Pro Gly Ser Val Pro Val Asn Ala Leu Val Pro Val Lys Gly Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly Asp Met Leu Ala Asp Thr Pro Leu Ala Lys Ile Asp Asp 245 250 255 Ile Glu Phe Val Arg Thr Val Ala Val Ala Arg Ile Thr Met Pro His 260 265 270 Ser Met Val Arg Leu Ser Ala Gly Arg Glu Ser Met Ser Asp Ala Thr 275 280 285 Gln Ala Leu Cys Phe Leu Ala Gly Ala Asn Ser Ile Phe Thr Gly Asp 290 295 300 Lys Leu Leu Thr Ala Gly Asn Ala Gly Asp Asp Lys Asp Ala Ala Leu 305 310 315 320 Phe Ala Arg Leu Gly Leu Thr Pro Met Ala Ala Glu Cys Lys Val Glu 325 330 335 Leu Glu Ala Ala Glu 340 341
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列 Met Thr Thr Thr Pro Ala Leu Ser Ser Glu Ala Thr Pro Arg Thr Asp 5 10 15 Trp Thr Arg Ala Glu Ile Ala Ala Leu Phe Asp Leu Pro Phe Thr Glu 20 25 30 Leu Leu Phe Arg Ala Ala Glu Val His Arg Ala His His Ala Ala Asp 35 40 45 Gln Val Gln Leu Ser Thr Leu Leu Ser Ile Lys Thr Gly Gly Cys Pro 50 55 60 Glu Asp Cys Gly Tyr Cys Ser Gln Ser Thr His Ala Asp Thr Gly Leu 65 70 75 80 Lys Ala Thr Lys Leu Met Asp Pro Arg Ala Val Leu Gln Ala Ala Ala 85 90 95 Gln Ala Lys Asp His Gly Ser Thr Arg Phe Cys Met Gly Ala Ala Trp 100 105 110 Arg Asn Pro Lys Asp Arg Asp Met Pro Ala Ile Val Glu Met Val Lys 115 120 125 Gly Val Arg Ala Met Gly Met Glu Thr Cys Met Thr Leu Gly Met Leu 130 135 140 Thr Asp Ala Gln Ala Gln Thr Leu Ala Glu Ala Gly Leu Asp Tyr Tyr 145 150 155 160 Asn His Asn Ile Asp Thr Ser Pro Glu Arg Tyr Gly Asp Val Ile Thr 165 170 175 Thr Arg Ser Phe Gly Glu Arg Leu Glu Thr Leu Glu His Val Arg Asp 180 185 190 Ala Gly Ile Asn Val Cys Cys Gly Gly Ile Val Gly Met Gly Glu Thr 195 200 205 Arg Gly Asp Arg Val Gly Phe Ile His Ala Leu Ala Thr Leu Pro Val 210 215 220 His Pro Gly Ser Val Pro Val Asn Ala Leu Val Pro Val Lys Gly Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly Asp Met Leu Ala Asp Thr Pro Leu Ala Lys Ile Asp Asp 245 250 255 Ile Glu Phe Val Arg Thr Val Ala Val Ala Arg Ile Thr Met Pro His 260 265 270 Ser Met Val Arg Leu Ser Ala Gly Arg Glu Ser Met Ser Asp Ala Thr 275 280 285 Gln Ala Leu Cys Phe Leu Ala Gly Ala Asn Ser Ile Phe Thr Gly Asp 290 295 300 Lys Leu Leu Thr Ala Gly Asn Ala Gly Asp Asp Lys Asp Ala Ala Leu 305 310 315 320 Phe Ala Arg Leu Gly Leu Thr Pro Met Ala Ala Glu Cys Lys Val Glu 325 330 335 Leu Glu Ala Ala Glu 340 341
【００７６】配列番号：１５ 配列の長さ：352 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 起源 生物名：スフィンゴモナス・エスピー（Sphingomonas s
p.） 株名：SC42405 配列 Met Thr Met Thr Asp Thr Pro Ala Ile Thr Ala Arg Thr Asp Trp Thr 5 10 15 Arg Glu Glu Ile Ala Ala Leu Phe Asp Leu Pro Phe Thr Glu Leu Val 20 25 30 Phe Arg Ala Ala Glu Val His Arg Ala Ser His Pro His Asn Glu Val 35 40 45 Gln Leu Ser Thr Leu Leu Ser Ile Lys Thr Gly Gly Cys Val Glu Asp 50 55 60 Cys Gly Tyr Cys Ser Gln Ser Val Ser Ala Asn Ser Gly Val Lys Ala 65 70 75 80 Thr Lys Leu Met Glu Val Gln Gln Val Leu Gln Arg Ala Ala Gln Ala 85 90 95 Ala Asp Gln Gly Ser Thr Arg Phe Cys Met Gly Ala Ala Trp Arg Asn 100 105 110 Pro Lys Asp Arg Asp Met Pro Ala Ile Ile Glu Met Val Lys Gly Val 115 120 125 Arg Ala Met Gly Met Glu Thr Cys Met Thr Arg Gly Met Leu Thr Pro 130 135 140 Asp Gln Ala Asp Met Leu Ser Glu Ala Gly Leu Asp Tyr Tyr Asn His 145 150 155 160 Asn Ile Asp Thr Ser Pro Glu Arg Tyr Asp Gln Val Ile Thr Thr Arg 165 170 175 Thr Met Asp Asp Arg Leu Asp Thr Leu Ser Asn Val Arg Met Ala Gly 180 185 190 Ile Asn Val Cys Ser Gly Gly Ile Val Gly Met Gly Glu Thr Arg Ala 195 200 205 Asp Arg Val Gly Phe Val His Thr Leu Ala Thr Leu Pro Asp His Pro 210 215 220 Gln Ser Val Pro Val Asn Ala Leu Val Pro Val Lys Gly Thr Val Leu 225 230 235 240 Gly Asp Met Leu Ala Asp Thr Pro Leu Ala Lys Ile Asp Asp Val Glu 245 250 255 Phe Val Arg Thr Val Ala Val Ala Arg Ile Thr Met Pro Leu Ser Met 260 265 270 Val Arg Leu Ser Ala Gly Arg Glu Ser Met Ser Glu Met Thr Gln Ala 275 280 285 Met Cys Phe Met Ala Gly Ala Asn Ser Ile Phe Thr Gly Asp Lys Leu 290 295 300 Leu Thr Ala Pro Asn Ser Gly Asp Asp Asn Asp Ala Ala Met Phe Ala 305 310 315 320 Arg Leu Gly Ile Lys Pro Met Ala Ile Glu Leu Thr Pro Ala Gln Val 325 330 335 Glu Ala Gln Arg Met Pro Lys Gly Cys Ala Lys Leu Glu Ala Ala Glu 340 345 350 352
p.） 株名：SC42405 配列 Met Thr Met Thr Asp Thr Pro Ala Ile Thr Ala Arg Thr Asp Trp Thr 5 10 15 Arg Glu Glu Ile Ala Ala Leu Phe Asp Leu Pro Phe Thr Glu Leu Val 20 25 30 Phe Arg Ala Ala Glu Val His Arg Ala Ser His Pro His Asn Glu Val 35 40 45 Gln Leu Ser Thr Leu Leu Ser Ile Lys Thr Gly Gly Cys Val Glu Asp 50 55 60 Cys Gly Tyr Cys Ser Gln Ser Val Ser Ala Asn Ser Gly Val Lys Ala 65 70 75 80 Thr Lys Leu Met Glu Val Gln Gln Val Leu Gln Arg Ala Ala Gln Ala 85 90 95 Ala Asp Gln Gly Ser Thr Arg Phe Cys Met Gly Ala Ala Trp Arg Asn 100 105 110 Pro Lys Asp Arg Asp Met Pro Ala Ile Ile Glu Met Val Lys Gly Val 115 120 125 Arg Ala Met Gly Met Glu Thr Cys Met Thr Arg Gly Met Leu Thr Pro 130 135 140 Asp Gln Ala Asp Met Leu Ser Glu Ala Gly Leu Asp Tyr Tyr Asn His 145 150 155 160 Asn Ile Asp Thr Ser Pro Glu Arg Tyr Asp Gln Val Ile Thr Thr Arg 165 170 175 Thr Met Asp Asp Arg Leu Asp Thr Leu Ser Asn Val Arg Met Ala Gly 180 185 190 Ile Asn Val Cys Ser Gly Gly Ile Val Gly Met Gly Glu Thr Arg Ala 195 200 205 Asp Arg Val Gly Phe Val His Thr Leu Ala Thr Leu Pro Asp His Pro 210 215 220 Gln Ser Val Pro Val Asn Ala Leu Val Pro Val Lys Gly Thr Val Leu 225 230 235 240 Gly Asp Met Leu Ala Asp Thr Pro Leu Ala Lys Ile Asp Asp Val Glu 245 250 255 Phe Val Arg Thr Val Ala Val Ala Arg Ile Thr Met Pro Leu Ser Met 260 265 270 Val Arg Leu Ser Ala Gly Arg Glu Ser Met Ser Glu Met Thr Gln Ala 275 280 285 Met Cys Phe Met Ala Gly Ala Asn Ser Ile Phe Thr Gly Asp Lys Leu 290 295 300 Leu Thr Ala Pro Asn Ser Gly Asp Asp Asn Asp Ala Ala Met Phe Ala 305 310 315 320 Arg Leu Gly Ile Lys Pro Met Ala Ile Glu Leu Thr Pro Ala Gln Val 325 330 335 Glu Ala Gln Arg Met Pro Lys Gly Cys Ala Lys Leu Glu Ala Ala Glu 340 345 350 352
【００７７】配列番号：１６ 配列の長さ：1420 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物名：スフィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingom
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：223..1248 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 GATCCCCGAG CTGATCGGCC ATCTGCGCGA GGCGGGCCGC GCGGATATCA AGGTCATCGC 60 GGGTGGCGTT ATTCCCGCAC AGGACTATCA GGCACTCTAC GATGCCGGGG TACAGGCGAT 120 TTTCGGTCCC GGCACCAATC TTGTGAAAGC GGCCGAGGAT GTGCTGAGGC TGCTGGGACA 180 TAATATGCCG CCCGAGGCGG GCGAATGACA GGACGACACG TG ATG ACG ACG ACA 234 CCC GCG CTG AGC TCC GAG GCG ACC CCG CGC ACC GAC TGG ACC CGC GCC 282 GAG ATC GCC GCG CTG TTC GAC CTG CCC TTC ACC GAG CTG TTG TTC CGC 330 GCG GCC GAG GTG CAC CGC GCG CAT CAC GCC GCC GAT CAG GTT CAG CTG 378 TCG ACG CTG TTG TCG ATC AAG ACG GGC GGC TGC CCC GAG GAT TGC GGC 426 TAT TGC AGC CAG TCG ACC CAT GCC GAT ACC GGG CTG AAG GCG ACC AAG 474 CTG ATG GAC CCG CGC GCC GTG CTG CAG GCG GCG GCG CAG GCC AAG GAT 522 CAC GGC TCG ACG CGC TTC TGC ATG GGC GCG GCC TGG CGC AAC CCC AAG 570 GAT CGC GAC ATG CCC GCC ATC GTG GAG ATG GTG AAG GGC GTG CGC GCC 618 ATG GGC ATG GAA ACC TGC ATG ACG CTG GGC ATG CTG ACC GAT GCA CAG 666 GCG CAG ACG CTC GCC GAG GCG GGG CTG GAC TAT TAC AAT CAC AAT ATC 714 GAC ACG TCG CCC GAG CGT TAT GGC GAC GTC ATC ACC ACG CGC AGC TTC 762 GGC GAG CGG TTG GAG ACG TTG GAG CAT GTC CGC GAT GCC GGC ATC AAT 810 GTA TGC TGT GGC GGT ATT GTC GGC ATG GGT GAG ACG CGC GGC GAC CGG 858 GTC GGC TTC ATC CAT GCG CTT GCC ACC CTG CCG GTC CAT CCG GGC AGC 906 GTG CCG GTG AAC GCG CTG GTG CCG GTC AAG GGC ACG GTA TTG GGC GAT 954 ATG TTG GCC GAC ACG CCG CTG GCC AAG ATC GAC GAT ATC GAA TTC GTC 1002 CGC ACC GTC GCG GTT GCG CGC ATC ACC ATG CCG CAT TCG ATG GTC CGC 1050 CTG TCG GCG GGG CGC GAG AGC ATG TCG GAT GCC ACC CAG GCT TTG TGC 1098 TTC CTG GCG GGC GCG AAC TCG ATC TTC ACC GGC GAC AAG CTG CTG ACT 1146 GCG GGC AAT GCG GGC GAC GAC AAG GAC GCA GCG CTC TTC GCC CGG CTG 1194 GGG CTC ACG CCC ATG GCG GCG GAG TGC AAG GTG GAA TTG GAA GCG GCG 1242 GAG TAA ACAGGCTTCG CCGGTTGTCC CCGGCGAAAG CCGGAGCCCA GTTGCGGTGA 1298 AGTAGGGGTG GTGCGCCACC CGAATGGCAT TCGACACGGA CCAACGACAT AATAGGAGAG 1358 GTATCCCCGT GTTCCAGAAA ATCCTGATCG CCAATCGCGG GGAAATCGCG TGCCGGGTGA 1418 TC 1420
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：223..1248 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 GATCCCCGAG CTGATCGGCC ATCTGCGCGA GGCGGGCCGC GCGGATATCA AGGTCATCGC 60 GGGTGGCGTT ATTCCCGCAC AGGACTATCA GGCACTCTAC GATGCCGGGG TACAGGCGAT 120 TTTCGGTCCC GGCACCAATC TTGTGAAAGC GGCCGAGGAT GTGCTGAGGC TGCTGGGACA 180 TAATATGCCG CCCGAGGCGG GCGAATGACA GGACGACACG TG ATG ACG ACG ACA 234 CCC GCG CTG AGC TCC GAG GCG ACC CCG CGC ACC GAC TGG ACC CGC GCC 282 GAG ATC GCC GCG CTG TTC GAC CTG CCC TTC ACC GAG CTG TTG TTC CGC 330 GCG GCC GAG GTG CAC CGC GCG CAT CAC GCC GCC GAT CAG GTT CAG CTG 378 TCG ACG CTG TTG TCG ATC AAG ACG GGC GGC TGC CCC GAG GAT TGC GGC 426 TAT TGC AGC CAG TCG ACC CAT GCC GAT ACC GGG CTG AAG GCG ACC AAG 474 CTG ATG GAC CCG CGC GCC GTG CTG CAG GCG GCG GCG CAG GCC AAG GAT 522 CAC GGC TCG ACG CGC TTC TGC ATG GGC GCG GCC TGG CGC AAC CCC AAG 570 GAT CGC GAC ATG CCC GCC ATC GTG GAG ATG GTG AAG GGC GTG CGC GCC 618 ATG GGC ATG GAA ACC TGC ATG ACG CTG GGC ATG CTG ACC GAT GCA CAG 666 GCG CAG ACG CTC GCC GAG GCG GGG CTG GAC TAT TAC AAT CAC AAT ATC 714 GAC ACG TCG CCC GAG CGT TAT GGC GAC GTC ATC ACC ACG CGC AGC TTC 762 GGC GAG CGG TTG GAG ACG TTG GAG CAT GTC CGC GAT GCC GGC ATC AAT 810 GTA TGC TGT GGC GGT ATT GTC GGC ATG GGT GAG ACG CGC GGC GAC CGG 858 GTC GGC TTC ATC CAT GCG CTT GCC ACC CTG CCG GTC CAT CCG GGC AGC 906 GTG CCG GTG AAC GCG CTG GTG CCG GTC AAG GGC ACG GTA TTG GGC GAT 954 ATG TTG GCC GAC ACG CCG CTG GCC AAG ATC GAC GAT ATC GAA TTC GTC 1002 CGC ACC GTC GCG GTT GCG CGC ATC ACC ATG CCG CAT TCG ATG GTC CGC 1050 CTG TCG GCG GGG CGC GAG AGC ATG TCG GAT GCC ACC CAG GCT TTG TGC 1098 TTC CTG GCG GGC GCG AAC TCG ATC TTC ACC GGC GAC AAG CTG CTG ACT 1146 GCG GGC AAT GCG GGC GAC GAC AAG GAC GCA GCG CTC TTC GCC CGG CTG 1194 GGG CTC ACG CCC ATG GCG GCG GAG TGC AAG GTG GAA TTG GAA GCG GCG 1242 GAG TAA ACAGGCTTCG CCGGTTGTCC CCGGCGAAAG CCGGAGCCCA GTTGCGGTGA 1298 AGTAGGGGTG GTGCGCCACC CGAATGGCAT TCGACACGGA CCAACGACAT AATAGGAGAG 1358 GTATCCCCGT GTTCCAGAAA ATCCTGATCG CCAATCGCGG GGAAATCGCG TGCCGGGTGA 1418 TC 1420
【００７８】配列番号：１７ 配列の長さ：1358 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物名：スフィンゴモナス・エスピー（Sphingomonas s
p.） 株名：SC42405 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：152..1210 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 TGCTGCGCCT GCTCGGCCAC AACATGCCGC CGCTCGGTTC TTCGCTGGAA GCGGCGGAAT 60 AAGGATGGCC ACGCTGGATC GACGCCGCGC TTGCCCCTAT GACCGGGGTT TGGCCGCGCG 120 TCATCCCGCG CGCAGACCGG CCGCCTGAGG A ATG ACT ATG ACT GAC ACC CCC 172 GCC ATC ACT GCA CGT ACC GAC TGG ACC CGT GAG GAA ATC GCG GCG CTG 220 TTC GAC CTG CCG TTC ACC GAA CTG GTG TTC CGC GCA GCC GAA GTC CAT 268 CGC GCC AGC CAT CCG CAC AAC GAA GTG CAG CTT TCC ACG CTG CTT TCG 316 ATC AAG ACC GGC GGC TGC GTG GAA GAC TGC GGC TAT TGC TCA CAG TCG 364 GTT TCG GCC AAC AGC GGC GTC AAG GCG ACC AAG CTG ATG GAA GTG CAG 412 CAG GTG CTG CAG CGC GCG GCG CAG GCG GCG GAT CAG GGC TCT ACC CGC 460 TTC TGC ATG GGC GCC GCC TGG CGC AAC CCC AAG GAC CGC GAC ATG CCC 508 GCC ATC ATC GAG ATG GTG AAG GGC GTG CGC GCC ATG GGC ATG GAA ACC 556 TGC ATG ACG CGG GGC ATG CTG ACG CCC GAT CAG GCG GAC ATG CTC TCC 604 GAA GCG GGT CTC GAT TAC TAC AAC CAC AAC ATC GAC ACC TCG CCC GAG 652 CGT TAC GAT CAG GTG ATC ACC ACG CGC ACG ATG GAT GAC CGC CTC GAT 700 ACG CTG TCG AAC GTG CGT ATG GCG GGC ATC AAC GTC TGC TCC GGC GGC 748 ATC GTC GGC ATG GGT GAG ACG CGC GCC GAC CGC GTG GGC TTC GTT CAC 796 ACG CTG GCG ACG CTG CCC GAT CAC CCG CAG TCG GTG CCG GTC AAC GCG 844 CTG GTT CCT GTG AAG GGC ACC GTG CTG GGC GAC ATG CTG GCC GAT ACC 892 CCG CTT GCC AAG ATC GAC GAT GTG GAA TTC GTG CGC ACC GTC GCG GTG 940 GCG CGC ATC ACC ATG CCG CTG TCG ATG GTG CGC CTC TCG GCC GGC CGC 988 GAA TCG ATG TCC GAA ATG ACG CAG GCG ATG TGC TTC ATG GCC GGC GCG 1036 AAC TCG ATC TTC ACC GGC GAC AAG CTG CTG ACC GCA CCG AAC TCC GGC 1084 GAC GAC AAC GAC GCG GCG ATG TTC GCC CGT CTC GGC ATC AAG CCG ATG 1132 GCC ATC GAA CTG ACC CCG GCG CAA GTC GAA GCC CAG CGC ATG CCC AAG 1180 GGC TGC GCC AAG CTG GAA GCT GCG GAA TAA CGAATGGGGC ACCGCGCACC 1230 CTTCCATCCC CGTCATGCTG AACTTGTTTC AGCATCCATT TCGCCGTTCG GACCGATGGC 1290 CTGTGCGGCG CGATGGACCC TGAGCCGTCA GGCCAGCGGA GCTAAACAAG TTCAGGGGGA 1350 CGATGAGG 1358
p.） 株名：SC42405 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：152..1210 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 TGCTGCGCCT GCTCGGCCAC AACATGCCGC CGCTCGGTTC TTCGCTGGAA GCGGCGGAAT 60 AAGGATGGCC ACGCTGGATC GACGCCGCGC TTGCCCCTAT GACCGGGGTT TGGCCGCGCG 120 TCATCCCGCG CGCAGACCGG CCGCCTGAGG A ATG ACT ATG ACT GAC ACC CCC 172 GCC ATC ACT GCA CGT ACC GAC TGG ACC CGT GAG GAA ATC GCG GCG CTG 220 TTC GAC CTG CCG TTC ACC GAA CTG GTG TTC CGC GCA GCC GAA GTC CAT 268 CGC GCC AGC CAT CCG CAC AAC GAA GTG CAG CTT TCC ACG CTG CTT TCG 316 ATC AAG ACC GGC GGC TGC GTG GAA GAC TGC GGC TAT TGC TCA CAG TCG 364 GTT TCG GCC AAC AGC GGC GTC AAG GCG ACC AAG CTG ATG GAA GTG CAG 412 CAG GTG CTG CAG CGC GCG GCG CAG GCG GCG GAT CAG GGC TCT ACC CGC 460 TTC TGC ATG GGC GCC GCC TGG CGC AAC CCC AAG GAC CGC GAC ATG CCC 508 GCC ATC ATC GAG ATG GTG AAG GGC GTG CGC GCC ATG GGC ATG GAA ACC 556 TGC ATG ACG CGG GGC ATG CTG ACG CCC GAT CAG GCG GAC ATG CTC TCC 604 GAA GCG GGT CTC GAT TAC TAC AAC CAC AAC ATC GAC ACC TCG CCC GAG 652 CGT TAC GAT CAG GTG ATC ACC ACG CGC ACG ATG GAT GAC CGC CTC GAT 700 ACG CTG TCG AAC GTG CGT ATG GCG GGC ATC AAC GTC TGC TCC GGC GGC 748 ATC GTC GGC ATG GGT GAG ACG CGC GCC GAC CGC GTG GGC TTC GTT CAC 796 ACG CTG GCG ACG CTG CCC GAT CAC CCG CAG TCG GTG CCG GTC AAC GCG 844 CTG GTT CCT GTG AAG GGC ACC GTG CTG GGC GAC ATG CTG GCC GAT ACC 892 CCG CTT GCC AAG ATC GAC GAT GTG GAA TTC GTG CGC ACC GTC GCG GTG 940 GCG CGC ATC ACC ATG CCG CTG TCG ATG GTG CGC CTC TCG GCC GGC CGC 988 GAA TCG ATG TCC GAA ATG ACG CAG GCG ATG TGC TTC ATG GCC GGC GCG 1036 AAC TCG ATC TTC ACC GGC GAC AAG CTG CTG ACC GCA CCG AAC TCC GGC 1084 GAC GAC AAC GAC GCG GCG ATG TTC GCC CGT CTC GGC ATC AAG CCG ATG 1132 GCC ATC GAA CTG ACC CCG GCG CAA GTC GAA GCC CAG CGC ATG CCC AAG 1180 GGC TGC GCC AAG CTG GAA GCT GCG GAA TAA CGAATGGGGC ACCGCGCACC 1230 CTTCCATCCC CGTCATGCTG AACTTGTTTC AGCATCCATT TCGCCGTTCG GACCGATGGC 1290 CTGTGCGGCG CGATGGACCC TGAGCCGTCA GGCCAGCGGA GCTAAACAAG TTCAGGGGGA 1350 CGATGAGG 1358
【００７９】配列番号：１８ 配列の長さ：341 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 起源 生物名：スフィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingom
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列 Met Thr Thr Thr Pro Ala Leu Ser Ser Glu Ala Thr Pro Arg Thr Asp 5 10 15 Trp Thr Arg Ala Glu Ile Ala Ala Leu Phe Asp Leu Pro Phe Thr Glu 20 25 30 Leu Leu Phe Arg Ala Ala Glu Val His Arg Ala His His Ala Ala Asp 35 40 45 Gln Val Gln Leu Ser Thr Leu Leu Ser Ile Lys Thr Gly Gly Cys Pro 50 55 60 Glu Asp Cys Gly Tyr Cys Ser Gln Ser Thr His Ala Asp Thr Gly Leu 65 70 75 80 Lys Ala Thr Lys Leu Met Asp Pro Arg Ala Val Leu Gln Ala Ala Ala 85 90 95 Gln Ala Lys Asp His Gly Ser Thr Arg Phe Cys Met Gly Ala Ala Trp 100 105 110 Arg Asn Pro Lys Asp Arg Asp Met Pro Ala Ile Val Glu Met Val Lys 115 120 125 Gly Val Arg Ala Met Gly Met Glu Thr Cys Met Thr Leu Gly Met Leu 130 135 140 Thr Asp Ala Gln Ala Gln Thr Leu Ala Glu Ala Gly Leu Asp Tyr Tyr 145 150 155 160 Asn His Asn Ile Asp Thr Ser Pro Glu Arg Tyr Gly Asp Val Ile Thr 165 170 175 Thr Arg Ser Phe Gly Glu Arg Leu Glu Thr Leu Glu His Val Arg Asp 180 185 190 Ala Gly Ile Asn Val Cys Cys Gly Gly Ile Val Gly Met Gly Glu Thr 195 200 205 Arg Gly Asp Arg Val Gly Phe Ile His Ala Leu Ala Thr Leu Pro Val 210 215 220 His Pro Gly Ser Val Pro Val Asn Ala Leu Val Leu Val Lys Gly Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly Asp Met Leu Ala Asp Thr Pro Leu Ala Lys Ile Asp Asp 245 250 255 Ile Glu Phe Val Arg Thr Val Ala Val Ala Arg Ile Thr Met Pro His 260 265 270 Ser Met Val Arg Leu Ser Ala Gly Arg Glu Ser Met Ser Asp Ala Thr 275 280 285 Gln Ala Leu Cys Phe Leu Ala Gly Ala Asn Ser Ile Phe Thr Gly Asp 290 295 300 Lys Leu Leu Thr Ala Gly Asn Ala Gly Asp Asp Lys Asp Ala Ala Leu 305 310 315 320 Phe Ala Arg Leu Gly Leu Thr Pro Met Ala Ala Glu Cys Lys Val Glu 325 330 335 Leu Glu Ala Ala Glu 340 341
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列 Met Thr Thr Thr Pro Ala Leu Ser Ser Glu Ala Thr Pro Arg Thr Asp 5 10 15 Trp Thr Arg Ala Glu Ile Ala Ala Leu Phe Asp Leu Pro Phe Thr Glu 20 25 30 Leu Leu Phe Arg Ala Ala Glu Val His Arg Ala His His Ala Ala Asp 35 40 45 Gln Val Gln Leu Ser Thr Leu Leu Ser Ile Lys Thr Gly Gly Cys Pro 50 55 60 Glu Asp Cys Gly Tyr Cys Ser Gln Ser Thr His Ala Asp Thr Gly Leu 65 70 75 80 Lys Ala Thr Lys Leu Met Asp Pro Arg Ala Val Leu Gln Ala Ala Ala 85 90 95 Gln Ala Lys Asp His Gly Ser Thr Arg Phe Cys Met Gly Ala Ala Trp 100 105 110 Arg Asn Pro Lys Asp Arg Asp Met Pro Ala Ile Val Glu Met Val Lys 115 120 125 Gly Val Arg Ala Met Gly Met Glu Thr Cys Met Thr Leu Gly Met Leu 130 135 140 Thr Asp Ala Gln Ala Gln Thr Leu Ala Glu Ala Gly Leu Asp Tyr Tyr 145 150 155 160 Asn His Asn Ile Asp Thr Ser Pro Glu Arg Tyr Gly Asp Val Ile Thr 165 170 175 Thr Arg Ser Phe Gly Glu Arg Leu Glu Thr Leu Glu His Val Arg Asp 180 185 190 Ala Gly Ile Asn Val Cys Cys Gly Gly Ile Val Gly Met Gly Glu Thr 195 200 205 Arg Gly Asp Arg Val Gly Phe Ile His Ala Leu Ala Thr Leu Pro Val 210 215 220 His Pro Gly Ser Val Pro Val Asn Ala Leu Val Leu Val Lys Gly Thr 225 230 235 240 Val Leu Gly Asp Met Leu Ala Asp Thr Pro Leu Ala Lys Ile Asp Asp 245 250 255 Ile Glu Phe Val Arg Thr Val Ala Val Ala Arg Ile Thr Met Pro His 260 265 270 Ser Met Val Arg Leu Ser Ala Gly Arg Glu Ser Met Ser Asp Ala Thr 275 280 285 Gln Ala Leu Cys Phe Leu Ala Gly Ala Asn Ser Ile Phe Thr Gly Asp 290 295 300 Lys Leu Leu Thr Ala Gly Asn Ala Gly Asp Asp Lys Asp Ala Ala Leu 305 310 315 320 Phe Ala Arg Leu Gly Leu Thr Pro Met Ala Ala Glu Cys Lys Val Glu 325 330 335 Leu Glu Ala Ala Glu 340 341
【００８０】配列番号：１９ 配列の長さ：1336 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物名：スフィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingom
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：151..1176 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 TCTAGAACAG GACTATCAGG CACTCTACGA TGCCGGGGTA CAGGCGATTT TCGGTCCCGG 60 CACCAATCTT GTGAAAGCGG CCGAGGATGT GCTAAGGCTG CTGGGACATA ATATGCCGCC 120 CGAGGCGGGC GAATGACAGG ACGACACGTG ATG ACG ACG ACA CCC GCG CTG AGC 174 TCC GAG GCG ACC CCG CGC ACC GAC TGG ACC CGC GCC GAG ATC GCC GCG 222 CTG TTC GAC CTG CCC TTC ACC GAG CTG TTG TTC CGC GCG GCC GAG GTG 270 CAC CGC GCG CAT CAC GCC GCC GAT CAG GTT CAG CTG TCG ACG CTG TTG 318 TCG ATC AAG ACG GGC GGC TGC CCC GAG GAT TGC GGC TAT TGC AGC CAG 366 TCG ACC CAT GCC GAT ACC GGG CTG AAG GCG ACC AAG CTG ATG GAC CCG 414 CGC GCC GTG CTG CAG GCG GCG GCG CAG GCC AAG GAT CAC GGC TCG ACG 462 CGC TTC TGC ATG GGC GCG GCC TGG CGC AAC CCC AAG GAT CGC GAC ATG 510 CCC GCC ATC GTG GAG ATG GTG AAG GGC GTG CGC GCC ATG GGC ATG GAA 558 ACC TGC ATG ACG CTG GGC ATG CTG ACC GAT GCA CAG GCG CAG ACG CTC 606 GCC GAG GCG GGG CTG GAC TAT TAC AAT CAC AAT ATC GAC ACG TCG CCC 654 GAG CGT TAT GGC GAC GTC ATC ACC ACG CGC AGC TTC GGC GAG CGG TTG 702 GAG ACG TTG GAG CAT GTC CGC GAT GCC GGC ATC AAT GTA TGC TGT GGC 750 GGT ATT GTC GGC ATG GGT GAG ACG CGC GGC GAC CGG GTC GGC TTC ATC 798 CAT GCG CTT GCC ACC CTG CCG GTC CAT CCG GGC AGC GTG CCG GTG AAC 846 ACG CCG CTG GCC AAG ATC GAC GAT ATC GAA TTC GTC CGC ACC GTC GCG 942 GTT GCG CGC ATC ACC ATG CCG CAT TCG ATG GTC CGC CTG TCG GCG GGG 990 CGC GAG AGC ATG TCG GAT GCC ACC CAG GCT TTG TGC TTC CTG GCG GGC 1038 GCG AAC TCG ATC TTC ACC GGC GAC AAG CTG CTG ACT GCG GGC AAT GCG 1086 GGC GAC GAC AAG GAC GCA GCG CTC TTC GCC CGG CTG GGG CTC ACG CCC 1134 ATG GCG GCG GAG TGC AAG GTG GAA TTG GAA GCG GCG GAG TAA 1176 ACAGGCTTCG CCGGTTGTCC CCGGCGAAAG CCGGAGCCCA GTTGCGGTGA AGTAGGGGTG 1236 GTGCGCCACC CGAATGGCAT TCGACACGGA CCAACGACAT AATAGGAGAG GTATCCCCGT 1296 GTTCCAGAAA ATCCTGATCG CCAATCGCGG GGAATCTAGA 1336
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：151..1176 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 TCTAGAACAG GACTATCAGG CACTCTACGA TGCCGGGGTA CAGGCGATTT TCGGTCCCGG 60 CACCAATCTT GTGAAAGCGG CCGAGGATGT GCTAAGGCTG CTGGGACATA ATATGCCGCC 120 CGAGGCGGGC GAATGACAGG ACGACACGTG ATG ACG ACG ACA CCC GCG CTG AGC 174 TCC GAG GCG ACC CCG CGC ACC GAC TGG ACC CGC GCC GAG ATC GCC GCG 222 CTG TTC GAC CTG CCC TTC ACC GAG CTG TTG TTC CGC GCG GCC GAG GTG 270 CAC CGC GCG CAT CAC GCC GCC GAT CAG GTT CAG CTG TCG ACG CTG TTG 318 TCG ATC AAG ACG GGC GGC TGC CCC GAG GAT TGC GGC TAT TGC AGC CAG 366 TCG ACC CAT GCC GAT ACC GGG CTG AAG GCG ACC AAG CTG ATG GAC CCG 414 CGC GCC GTG CTG CAG GCG GCG GCG CAG GCC AAG GAT CAC GGC TCG ACG 462 CGC TTC TGC ATG GGC GCG GCC TGG CGC AAC CCC AAG GAT CGC GAC ATG 510 CCC GCC ATC GTG GAG ATG GTG AAG GGC GTG CGC GCC ATG GGC ATG GAA 558 ACC TGC ATG ACG CTG GGC ATG CTG ACC GAT GCA CAG GCG CAG ACG CTC 606 GCC GAG GCG GGG CTG GAC TAT TAC AAT CAC AAT ATC GAC ACG TCG CCC 654 GAG CGT TAT GGC GAC GTC ATC ACC ACG CGC AGC TTC GGC GAG CGG TTG 702 GAG ACG TTG GAG CAT GTC CGC GAT GCC GGC ATC AAT GTA TGC TGT GGC 750 GGT ATT GTC GGC ATG GGT GAG ACG CGC GGC GAC CGG GTC GGC TTC ATC 798 CAT GCG CTT GCC ACC CTG CCG GTC CAT CCG GGC AGC GTG CCG GTG AAC 846 ACG CCG CTG GCC AAG ATC GAC GAT ATC GAA TTC GTC CGC ACC GTC GCG 942 GTT GCG CGC ATC ACC ATG CCG CAT TCG ATG GTC CGC CTG TCG GCG GGG 990 CGC GAG AGC ATG TCG GAT GCC ACC CAG GCT TTG TGC TTC CTG GCG GGC 1038 GCG AAC TCG ATC TTC ACC GGC GAC AAG CTG CTG ACT GCG GGC AAT GCG 1086 GGC GAC GAC AAG GAC GCA GCG CTC TTC GCC CGG CTG GGG CTC ACG CCC 1134 ATG GCG GCG GAG TGC AAG GTG GAA TTG GAA GCG GCG GAG TAA 1176 ACAGGCTTCG CCGGTTGTCC CCGGCGAAAG CCGGAGCCCA GTTGCGGTGA AGTAGGGGTG 1236 GTGCGCCACC CGAATGGCAT TCGACACGGA CCAACGACAT AATAGGAGAG GTATCCCCGT 1296 GTTCCAGAAA ATCCTGATCG CCAATCGCGG GGAATCTAGA 1336
【００８１】配列番号：２０ 配列の長さ：283 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 起源 生物名：スフィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingom
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列 Met Ala Glu Asp Ser Pro Ser Arg Ala Arg Ile Ala Gln Ala Phe Asp 5 10 15 Ala Ala Ala Ala Tyr Asp Ala Tyr Ala Val Val Gln Arg Gln Val Ala 20 25 30 Ala Trp Leu Ala Glu Arg Ile Val Ala Val Ala Pro Pro Arg Pro Arg 35 40 45 Val Leu Glu Val Gly Cys Gly Thr Gly Phe Leu Thr Gln Ala Ala Trp 50 55 60 Pro Arg Leu Asp Arg Pro Glu Trp Leu Met Thr Asp Ile Ala Pro Glu 65 70 75 80 Met Leu Ala Arg Gly Arg Ala Gln Met Pro Asp Leu Cys Ala Arg Val 85 90 95 Met Asp Gly Glu Arg Pro Asp Leu Ala Gly Glu Ala Pro Phe Asp Leu 100 105 110 Ile Val Ser Ser Leu Ala Val Gln Trp Phe Ser Asp Leu Glu Gly Gly 115 120 125 Leu Gln Arg Leu Ala Ala Leu Leu Ala Pro Gly Gly Arg Met Leu Val 130 135 140 Thr Thr Leu Ala Gln Gly Thr Phe Ala Gly Trp His Ala Ala His Arg 145 150 155 160 Ala Glu Gly Tyr Glu Ala Gly Ser His Ala Tyr Pro Thr Val Glu Ala 165 170 175 Leu Ala Ala Met Ala Leu Pro Gly Leu Gly Val Ala Thr Arg Arg Phe 180 185 190 Glu Gln Arg His Glu Thr Ala Ala Asp Phe Met Arg Ala Leu Arg Ala 195 200 205 Ile Gly Ala Gly Thr Pro Arg Val Gly His Arg Pro Ile Pro Pro Gly 210 215 220 Ala Met Arg Arg Ile Ala Lys Arg Phe Glu Val Gly Gly Ala Val Ala 225 230 235 240 Thr Tyr Glu Val Ala Leu Met Asp Ile Pro Asn Pro Val Gln Pro Glu 245 250 255 Arg Ser Arg Arg Pro Arg Ala Thr Arg Glu Ala Gly Arg Val Leu Arg 260 265 270 Phe Arg Ser Ala Arg Thr Glu Val Gly Gly Lys 275 280 283
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列 Met Ala Glu Asp Ser Pro Ser Arg Ala Arg Ile Ala Gln Ala Phe Asp 5 10 15 Ala Ala Ala Ala Tyr Asp Ala Tyr Ala Val Val Gln Arg Gln Val Ala 20 25 30 Ala Trp Leu Ala Glu Arg Ile Val Ala Val Ala Pro Pro Arg Pro Arg 35 40 45 Val Leu Glu Val Gly Cys Gly Thr Gly Phe Leu Thr Gln Ala Ala Trp 50 55 60 Pro Arg Leu Asp Arg Pro Glu Trp Leu Met Thr Asp Ile Ala Pro Glu 65 70 75 80 Met Leu Ala Arg Gly Arg Ala Gln Met Pro Asp Leu Cys Ala Arg Val 85 90 95 Met Asp Gly Glu Arg Pro Asp Leu Ala Gly Glu Ala Pro Phe Asp Leu 100 105 110 Ile Val Ser Ser Leu Ala Val Gln Trp Phe Ser Asp Leu Glu Gly Gly 115 120 125 Leu Gln Arg Leu Ala Ala Leu Leu Ala Pro Gly Gly Arg Met Leu Val 130 135 140 Thr Thr Leu Ala Gln Gly Thr Phe Ala Gly Trp His Ala Ala His Arg 145 150 155 160 Ala Glu Gly Tyr Glu Ala Gly Ser His Ala Tyr Pro Thr Val Glu Ala 165 170 175 Leu Ala Ala Met Ala Leu Pro Gly Leu Gly Val Ala Thr Arg Arg Phe 180 185 190 Glu Gln Arg His Glu Thr Ala Ala Asp Phe Met Arg Ala Leu Arg Ala 195 200 205 Ile Gly Ala Gly Thr Pro Arg Val Gly His Arg Pro Ile Pro Pro Gly 210 215 220 Ala Met Arg Arg Ile Ala Lys Arg Phe Glu Val Gly Gly Ala Val Ala 225 230 235 240 Thr Tyr Glu Val Ala Leu Met Asp Ile Pro Asn Pro Val Gln Pro Glu 245 250 255 Arg Ser Arg Arg Pro Arg Ala Thr Arg Glu Ala Gly Arg Val Leu Arg 260 265 270 Phe Arg Ser Ala Arg Thr Glu Val Gly Gly Lys 275 280 283
【００８２】配列番号：２１ 配列の長さ：254 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 起源 生物名：スフィンゴモナス・エスピー（Sphingomonas s
p.） 株名：SC42405 配列 Met Asn Ala Pro Arg Glu Arg Val Ser Arg Ala Phe Ala Ala Ala Pro 5 10 15 Asp Tyr Asp Gly His Ala Arg Ile Gln Arg Glu Val Ala Gln Thr Leu 20 25 30 Ala Ala Arg Ile Ala Ala Leu Asp Leu Pro Pro Asn Pro Arg Val Leu 35 40 45 Glu Ile Gly Cys Gly Thr Gly Phe Leu Thr Gln Ala Leu Ala Gly Leu 50 55 60 Asp Gly Asp Trp Leu Val Thr Asp Leu Ala Pro Glu Met Leu Glu Arg 65 70 75 80 Cys Arg Ser Arg Leu Gly Glu Ser Ala Arg His Arg Phe Ala Val Leu 85 90 95 Asp Gly Glu Tyr Gly Ala Pro Asp Gly Ala Pro Phe Asp Leu Ile Cys 100 105 110 Ser Ser Leu Ala Val Gln Trp Phe Asp Asp Thr Pro Ala Ala Leu Ala 115 120 125 Arg Met Ala Gly Trp Leu Ala Pro Gly Gly His Leu Met Val Thr Thr 130 135 140 Leu Gly Pro Gly Ser Phe Ala Glu Trp Arg Ala Ala His Glu Ala Glu 145 150 155 160 Gly Leu Glu Pro Gly Thr Pro His Phe Ala Asp Ile Ala Ala Phe Gly 165 170 175 Asp Leu Val His Ala Val Glu His Pro Val Glu His His Ala Asp Pro 180 185 190 Leu Ala Phe Leu His Ala Leu Lys Ala Ile Gly Ala Gln Thr Ala Glu 195 200 205 Ala Gly His Arg Pro Leu Ser Pro Gly Gln Leu Arg Arg Val Met Ala 210 215 220 Arg Phe Ala Gln Ser Gly Cys Pro Gln Asn Gly Cys Lys Val Thr Tyr 225 230 235 240 Glu Val Val Thr Cys His Leu His Arg Glu Ser Ser Leu Ser 245 250 254
p.） 株名：SC42405 配列 Met Asn Ala Pro Arg Glu Arg Val Ser Arg Ala Phe Ala Ala Ala Pro 5 10 15 Asp Tyr Asp Gly His Ala Arg Ile Gln Arg Glu Val Ala Gln Thr Leu 20 25 30 Ala Ala Arg Ile Ala Ala Leu Asp Leu Pro Pro Asn Pro Arg Val Leu 35 40 45 Glu Ile Gly Cys Gly Thr Gly Phe Leu Thr Gln Ala Leu Ala Gly Leu 50 55 60 Asp Gly Asp Trp Leu Val Thr Asp Leu Ala Pro Glu Met Leu Glu Arg 65 70 75 80 Cys Arg Ser Arg Leu Gly Glu Ser Ala Arg His Arg Phe Ala Val Leu 85 90 95 Asp Gly Glu Tyr Gly Ala Pro Asp Gly Ala Pro Phe Asp Leu Ile Cys 100 105 110 Ser Ser Leu Ala Val Gln Trp Phe Asp Asp Thr Pro Ala Ala Leu Ala 115 120 125 Arg Met Ala Gly Trp Leu Ala Pro Gly Gly His Leu Met Val Thr Thr 130 135 140 Leu Gly Pro Gly Ser Phe Ala Glu Trp Arg Ala Ala His Glu Ala Glu 145 150 155 160 Gly Leu Glu Pro Gly Thr Pro His Phe Ala Asp Ile Ala Ala Phe Gly 165 170 175 Asp Leu Val His Ala Val Glu His Pro Val Glu His His Ala Asp Pro 180 185 190 Leu Ala Phe Leu His Ala Leu Lys Ala Ile Gly Ala Gln Thr Ala Glu 195 200 205 Ala Gly His Arg Pro Leu Ser Pro Gly Gln Leu Arg Arg Val Met Ala 210 215 220 Arg Phe Ala Gln Ser Gly Cys Pro Gln Asn Gly Cys Lys Val Thr Tyr 225 230 235 240 Glu Val Val Thr Cys His Leu His Arg Glu Ser Ser Leu Ser 245 250 254
【００８３】配列番号：２２ 配列の長さ：1582 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物名：スフィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingom
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：489..1340 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 GATCTGGGTC GCGGCGCTGT TGGCGGCGTT GTTGCCGGTC GATCGGCTGG TCGCGCCCGA 60 TTGCGAGTCG GGCTGGTTCG ATCAGGTCGT GGTGCGCGGG GTGTCGCTGC CGCTCGTCAT 120 GCTGTTGCGG ATCGTCGCGC ATTGGCTGGC CTTTGCGCCG CCGCTGATGC TGGCGGCGAT 180 GGTCGCAGGC GGTTTGTTCG GGCTGGATGG CGCCGCGTTG GTGAGGGTCG AGACCGGATT 240 GCTGCTCGGT ACGCCGGGGC TCGCCGCGCT GGCGGTGGCG ACGGGGGCGC TGACGGCGGG 300 CTTGCGCGGT GCGGGAGCGG TGGCGGGGTT GCTGCTGTTA CCGCTCGCCC TGCCGCTGCT 360 GATCGATCTT CGGGGCTAGC GATGACGGCA TGGGCGGGGC CAAGCTGCTC GCCGCCGTGT 420 CGCTGTTGCT GGTCGCGGGT GCGCCCTGGC TGGCGGCGGC GGCGATCCGG TCGGTGCGCG 480 ACTGAGCC ATG GCC GAA GAC AGT CCA TCG CGC GCG CGG ATC GCG CAG GCC 530 TTT GAC GCG GCG GCG GCC TAT GAC GCC TAT GCG GTG GTG CAG CGC CAA 578 GTG GCC GCG TGG CTA GCC GAA CGA ATC GTC GCG GTC GCC CCG CCG AGG 626 CCC CGC GTG CTG GAG GTC GGG TGC GGC ACA GGC TTC CTG ACA CAG GCG 674 GCA TGG CCC CGG CTT GAT CGC CCC GAA TGG TTG ATG ACC GAT ATC GCA 722 CCC GAG ATG CTG GCC CGG GGC AGG GCG CAG ATG CCG GAT CTG TGT GCG 770 CGG GTG ATG GAT GGC GAG CGC CCC GAT CTG GCG GGC GAA GCG CCG TTC 818 GAC CTG ATC GTC AGC AGC CTG GCG GTG CAG TGG TTT TCC GAT CTG GAG 866 GGC GGC CTG CAG CGG CTG GCG GCG CTG CTC GCC CCT GGC GGG CGG ATG 914 CTG GTG ACG ACT CTG GCG CAA GGG ACA TTC GCC GGC TGG CAT GCC GCG 962 CAT CGG GCG GAG GGA TAT GAG GCG GGG AGT CAC GCC TAT CCA ACG GTC 1010 GAG GCG CTC GCG GCC ATG GCG TTG CCG GGG CTT GGG GTC GCC ACG CGA 1058 CGC TTC GAG CAG CGG CAC GAG ACG GCG GCG GAC TTC ATG CGC GCA CTA 1106 CGG GCG ATC GGG GCG GGG ACA CCG CGT GTT GGG CAC CGC CCG ATC CCG 1154 CCG GGC GCG ATG CGG CGG ATC GCG AAG CGC TTT GAG GTA GGC GGG GCG 1202 GTG GCG ACC TAT GAG GTC GCG TTG ATG GAC ATT CCC AAC CCC GTT CAG 1250 CCT GAG CGA AGT CGA AGG CCA CGC GCG ACG CGA GAG GCG GGG CGT GTG 1298 CTT CGA TTT CGC TCA GCA CGA ACG GAG GTT GGA GGT AAG TAG 1340 GCTTGGGTTG GCGTTTATCG GCTCCACCGC GCCCAGATGG CCGTGGGCAG GATCAGCCCG 1400 CGTGCTTCCT CGCGCACACC GAGTTCGCCG CATTCGACCT TGCCCGGCAG GTCGCCCATC 1460 ACTTGGCGGA GCATCTCGCC GATCGCCAGC GCCGACATGC GCACCGCATA GACGGTCAGG 1520 AACAGGAAGC GCGAATTCGC GTCGAGCAGC TTGCGGCAAT CGGCGATCAG GCCGGGCAGA 1580 TC 1582
onas paucimobilis） 株名：JCM7511 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：489..1340 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 GATCTGGGTC GCGGCGCTGT TGGCGGCGTT GTTGCCGGTC GATCGGCTGG TCGCGCCCGA 60 TTGCGAGTCG GGCTGGTTCG ATCAGGTCGT GGTGCGCGGG GTGTCGCTGC CGCTCGTCAT 120 GCTGTTGCGG ATCGTCGCGC ATTGGCTGGC CTTTGCGCCG CCGCTGATGC TGGCGGCGAT 180 GGTCGCAGGC GGTTTGTTCG GGCTGGATGG CGCCGCGTTG GTGAGGGTCG AGACCGGATT 240 GCTGCTCGGT ACGCCGGGGC TCGCCGCGCT GGCGGTGGCG ACGGGGGCGC TGACGGCGGG 300 CTTGCGCGGT GCGGGAGCGG TGGCGGGGTT GCTGCTGTTA CCGCTCGCCC TGCCGCTGCT 360 GATCGATCTT CGGGGCTAGC GATGACGGCA TGGGCGGGGC CAAGCTGCTC GCCGCCGTGT 420 CGCTGTTGCT GGTCGCGGGT GCGCCCTGGC TGGCGGCGGC GGCGATCCGG TCGGTGCGCG 480 ACTGAGCC ATG GCC GAA GAC AGT CCA TCG CGC GCG CGG ATC GCG CAG GCC 530 TTT GAC GCG GCG GCG GCC TAT GAC GCC TAT GCG GTG GTG CAG CGC CAA 578 GTG GCC GCG TGG CTA GCC GAA CGA ATC GTC GCG GTC GCC CCG CCG AGG 626 CCC CGC GTG CTG GAG GTC GGG TGC GGC ACA GGC TTC CTG ACA CAG GCG 674 GCA TGG CCC CGG CTT GAT CGC CCC GAA TGG TTG ATG ACC GAT ATC GCA 722 CCC GAG ATG CTG GCC CGG GGC AGG GCG CAG ATG CCG GAT CTG TGT GCG 770 CGG GTG ATG GAT GGC GAG CGC CCC GAT CTG GCG GGC GAA GCG CCG TTC 818 GAC CTG ATC GTC AGC AGC CTG GCG GTG CAG TGG TTT TCC GAT CTG GAG 866 GGC GGC CTG CAG CGG CTG GCG GCG CTG CTC GCC CCT GGC GGG CGG ATG 914 CTG GTG ACG ACT CTG GCG CAA GGG ACA TTC GCC GGC TGG CAT GCC GCG 962 CAT CGG GCG GAG GGA TAT GAG GCG GGG AGT CAC GCC TAT CCA ACG GTC 1010 GAG GCG CTC GCG GCC ATG GCG TTG CCG GGG CTT GGG GTC GCC ACG CGA 1058 CGC TTC GAG CAG CGG CAC GAG ACG GCG GCG GAC TTC ATG CGC GCA CTA 1106 CGG GCG ATC GGG GCG GGG ACA CCG CGT GTT GGG CAC CGC CCG ATC CCG 1154 CCG GGC GCG ATG CGG CGG ATC GCG AAG CGC TTT GAG GTA GGC GGG GCG 1202 GTG GCG ACC TAT GAG GTC GCG TTG ATG GAC ATT CCC AAC CCC GTT CAG 1250 CCT GAG CGA AGT CGA AGG CCA CGC GCG ACG CGA GAG GCG GGG CGT GTG 1298 CTT CGA TTT CGC TCA GCA CGA ACG GAG GTT GGA GGT AAG TAG 1340 GCTTGGGTTG GCGTTTATCG GCTCCACCGC GCCCAGATGG CCGTGGGCAG GATCAGCCCG 1400 CGTGCTTCCT CGCGCACACC GAGTTCGCCG CATTCGACCT TGCCCGGCAG GTCGCCCATC 1460 ACTTGGCGGA GCATCTCGCC GATCGCCAGC GCCGACATGC GCACCGCATA GACGGTCAGG 1520 AACAGGAAGC GCGAATTCGC GTCGAGCAGC TTGCGGCAAT CGGCGATCAG GCCGGGCAGA 1580 TC 1582
【００８４】配列番号：２３ 配列の長さ：971 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物名：スフィンゴモナス・エスピー（Sphingomonas s
p.） 株名：SC42405 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：210..971 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 TTGCGCGATG AGGAGGCCAC CTTGCCCGCC GTCCCCATCA TCTCGCTTCA AGGCGCGCGC 60 GACCCGCTTC TGCCCGAAGC GATGCGCGCA CATGTCTTCC GGAACGCCGC CGTGCGCCGG 120 ATCGAATGCG AGACCGGAGG GCACCTCCTC CCGCTCGAAG TGCCGGAATT CTGCGCGCAA 180 GCCGTGCGCG ACATGATCGA GACGCTGGC ATG AAC GCC CCC CGC GAG CGC GTC 233 AGC CGC GCC TTT GCC GCC GCG CCC GAC TAC GAC GGC CAT GCC CGC ATC 281 CAG CGT GAG GTC GCA CAA ACA CTC GCC GCC CGG ATC GCC GCG CTC GAC 329 CTG CCT CCA AAC CCG CGC GTG CTG GAG ATC GGC TGC GGC ACC GGT TTT 377 CTC ACG CAG GCG CTG GCC GGG CTG GAT GGC GAC TGG CTC GTC ACC GAT 425 CTT GCG CCC GAA ATG CTG GAG CGC TGT CGC AGC CGC CTG GGC GAA AGC 473 GCC CGG CAC CGC TTT GCC GTG CTC GAT GGC GAA TAT GGC GCA CCG GAC 521 GGC GCA CCG TTC GAC CTG ATC TGC TCC AGC CTC GCC GTG CAA TGG TTC 569 GAC GAT ACC CCG GCC GCC CTC GCC CGC ATG GCA GGC TGG CTG GCA CCG 617 GGC GGG CAC CTC ATG GTG ACG ACA CTC GGC CCC GGC AGC TTC GCC GAA 665 TGG CGC GCC GCG CAT GAA GCG GAG GGG CTG GAA CCC GGC ACG CCC CAC 713 TTC GCG GAC ATC GCC GCC TTC GGC GAC CTC GTC CAC GCG GTC GAG CAC 761 CCC GTC GAG CAT CAC GCC GAT CCG CTG GCC TTC CTC CAC GCC CTC AAG 809 GCC ATC GGC GCG CAG ACC GCC GAA GCC GGA CAC CGC CCC CTT TCC CCC 857 GGC CAG CTT CGC CGC GTC ATG GCA CGT TTC GCC CAA AGC GGA TGC CCC 905 CAA AAC GGA TGC AAA GTG ACT TAC GAA GTC GTG ACC TGC CAC CTA CAC 953 CGA GAA TCG AGC CTT TCA 971
p.） 株名：SC42405 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：210..971 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 TTGCGCGATG AGGAGGCCAC CTTGCCCGCC GTCCCCATCA TCTCGCTTCA AGGCGCGCGC 60 GACCCGCTTC TGCCCGAAGC GATGCGCGCA CATGTCTTCC GGAACGCCGC CGTGCGCCGG 120 ATCGAATGCG AGACCGGAGG GCACCTCCTC CCGCTCGAAG TGCCGGAATT CTGCGCGCAA 180 GCCGTGCGCG ACATGATCGA GACGCTGGC ATG AAC GCC CCC CGC GAG CGC GTC 233 AGC CGC GCC TTT GCC GCC GCG CCC GAC TAC GAC GGC CAT GCC CGC ATC 281 CAG CGT GAG GTC GCA CAA ACA CTC GCC GCC CGG ATC GCC GCG CTC GAC 329 CTG CCT CCA AAC CCG CGC GTG CTG GAG ATC GGC TGC GGC ACC GGT TTT 377 CTC ACG CAG GCG CTG GCC GGG CTG GAT GGC GAC TGG CTC GTC ACC GAT 425 CTT GCG CCC GAA ATG CTG GAG CGC TGT CGC AGC CGC CTG GGC GAA AGC 473 GCC CGG CAC CGC TTT GCC GTG CTC GAT GGC GAA TAT GGC GCA CCG GAC 521 GGC GCA CCG TTC GAC CTG ATC TGC TCC AGC CTC GCC GTG CAA TGG TTC 569 GAC GAT ACC CCG GCC GCC CTC GCC CGC ATG GCA GGC TGG CTG GCA CCG 617 GGC GGG CAC CTC ATG GTG ACG ACA CTC GGC CCC GGC AGC TTC GCC GAA 665 TGG CGC GCC GCG CAT GAA GCG GAG GGG CTG GAA CCC GGC ACG CCC CAC 713 TTC GCG GAC ATC GCC GCC TTC GGC GAC CTC GTC CAC GCG GTC GAG CAC 761 CCC GTC GAG CAT CAC GCC GAT CCG CTG GCC TTC CTC CAC GCC CTC AAG 809 GCC ATC GGC GCG CAG ACC GCC GAA GCC GGA CAC CGC CCC CTT TCC CCC 857 GGC CAG CTT CGC CGC GTC ATG GCA CGT TTC GCC CAA AGC GGA TGC CCC 905 CAA AAC GGA TGC AAA GTG ACT TAC GAA GTC GTG ACC TGC CAC CTA CAC 953 CGA GAA TCG AGC CTT TCA 971
【００８５】配列番号：２４ 配列の長さ：１５０ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物名：スフィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingom
onas paucimobilis ） 株名：JCM7511 配列 TCTAGAACAG GACTATCAGG CACTCTACGA TGCCGGGGTA CAGGCGATTT TCGGTCCCGG 60 CACCAATCTT GTGAAAGCGG CCGAGGATGT GCTAAGGCTG CTGGGACATA ATATGCCGCC 120 CGAGGCGGGC GAATGACAGG ACGACACGTG 150
onas paucimobilis ） 株名：JCM7511 配列 TCTAGAACAG GACTATCAGG CACTCTACGA TGCCGGGGTA CAGGCGATTT TCGGTCCCGG 60 CACCAATCTT GTGAAAGCGG CCGAGGATGT GCTAAGGCTG CTGGGACATA ATATGCCGCC 120 CGAGGCGGGC GAATGACAGG ACGACACGTG 150
【００８６】配列番号：２５ 配列の長さ：201 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：染色体DNA 起源 生物種：スフィンゴモナス・エスピー（Sphingomonas s
p.） 株名：SC42405 配列 ACCGGAATGA CAGGCGGACA GCAGCAATAG GGCGGCAAGA GAGAGCGGCA GGGATCGCAT 60 CAGACGGGCA TCCTTCGGTT TTTCCTTTGC CGTTCCAACG CGCGAGGAAG GCGGCGGCTT 120 CACGTCCCGC CGCGAAATCG ATGCCCCTCC CGGCCAGCCA AGCATTGTGC CGGACGCCCG 180 CTTGCCATAC GGGCAGGGGC G 201
p.） 株名：SC42405 配列 ACCGGAATGA CAGGCGGACA GCAGCAATAG GGCGGCAAGA GAGAGCGGCA GGGATCGCAT 60 CAGACGGGCA TCCTTCGGTT TTTCCTTTGC CGTTCCAACG CGCGAGGAAG GCGGCGGCTT 120 CACGTCCCGC CGCGAAATCG ATGCCCCTCC CGGCCAGCCA AGCATTGTGC CGGACGCCCG 180 CTTGCCATAC GGGCAGGGGC G 201
【図１】プラスミドpJAβ2の構造と制限酵素地図を示
す。
す。
【図２】プラスミドpJAWの構造と制限酵素地図を示す。
【図３】プラスミドpJA41の構造と制限酵素地図を示
す。
す。
【図４】プラスミドpSP302の構造と制限酵素地図を示
す。
す。
【図５】プラスミドpSP304の構造と制限酵素地図を示
す。
す。
【図６】プラスミドpSS301の構造と制限酵素地図を示
す。
す。
【図７】プラスミドpSS305の構造と制限酵素地図を示
す。
す。
【図８】プラスミドpSS304の構造と制限酵素地図を示
す。
す。
【図９】プラスミドpSS306の構造と制限酵素地図を示
す。
す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 光田 賢 兵庫県宝塚市高司４丁目２番１号 住友化 学工業株式会社内
Claims (37)
- 【請求項１】スフィンゴモナス属に属する微生物由来の
ビオチン生合成に関与する遺伝子を含むことを特徴とす
るDNA断片。 - 【請求項２】遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸
シンテターゼ遺伝子、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミノ
トランスフェラーゼ遺伝子、デスチオビオチンシンテタ
ーゼ遺伝子、ビオチンシンターゼ遺伝子、ビオチン生合
成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応
を触媒する活性を有する酵素の遺伝子、からなる群から
1以上選ばれることを特徴とする請求項１記載のDNA断
片。 - 【請求項３】遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン酸
シンテターゼをコードする遺伝子であることを特徴とす
る請求項１記載のDNA断片。 - 【請求項４】配列番号１に示されるアミノ酸配列、また
は、配列番号１に示されるアミノ酸配列において１もし
くは複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付
加されたアミノ酸配列を有し、かつ7-ケト-8-アミノペ
ラルゴン酸シンテターゼ活性を有するタンパク質をコー
ドする遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片。 - 【請求項５】配列番号２に示されるアミノ酸配列、また
は、配列番号２に示されるアミノ酸配列において１もし
くは複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付
加されたアミノ酸配列を有し、かつ7-ケト-8-アミノペ
ラルゴン酸シンテターゼ活性を有するタンパク質をコー
ドする遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片。 - 【請求項６】配列番号３、４、または５に示される塩基
配列を有する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片。 - 【請求項７】遺伝子が、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミ
ノトランスフェラーゼをコードする遺伝子であることを
特徴とする請求項１記載のDNA断片。 - 【請求項８】配列番号６に示されるアミノ酸配列、また
は、配列番号６に示されるアミノ酸配列において１もし
くは複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付
加されたアミノ酸配列を有し、かつ7,8-ジアミノペラル
ゴン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有するタンパク
質をコードする遺伝子を含むことを特徴とするDNA断
片。 - 【請求項９】配列番号７に示されるアミノ酸配列、また
は、配列番号７に示されるアミノ酸配列において１もし
くは複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは付
加されたアミノ酸配列を有し、かつ7,8-ジアミノペラル
ゴン酸アミノトランスフェラーゼ活性を有するタンパク
質をコードする遺伝子を含むことを特徴とするDNA断
片。 - 【請求項１０】配列番号８または９に示される塩基配列
を有する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片。 - 【請求項１１】遺伝子が、デスチオビオチンシンテター
ゼをコードする遺伝子であることを特徴とする請求項１
記載のDNA断片。 - 【請求項１２】配列番号１０に示されるアミノ酸配列、
または、配列番号１０に示されるアミノ酸配列において
１もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もし
くは付加されたアミノ酸配列を有し、かつデスチオビオ
チンシンテターゼ活性を有するタンパク質をコードする
遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片。 - 【請求項１３】配列番号１１示されるアミノ酸配列、ま
たは、配列番号１１示されるアミノ酸配列において１も
しくは複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もしくは
付加されたアミノ酸配列を有し、かつデスチオビオチン
シンテターゼ活性を有するタンパク質をコードする遺伝
子を含むことを特徴とするDNA断片。 - 【請求項１４】配列番号１２または１３に示される塩基
配列を有する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片。 - 【請求項１５】遺伝子が、ビオチンシンターゼをコード
する遺伝子であることを特徴とする請求項１記載のDNA
断片。 - 【請求項１６】配列番号１４に示されるアミノ酸配列、
または、配列番号１４に示されるアミノ酸配列において
１もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もし
くは付加されたアミノ酸配列を有し、かつビオチンシン
ターゼ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含
むことを特徴とするDNA断片。 - 【請求項１７】配列番号１５に示されるアミノ酸配列、
または、配列番号１５に示されるアミノ酸配列において
１もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もし
くは付加されたアミノ酸配列を有し、かつビオチンシン
ターゼ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含
むことを特徴とするDNA断片。 - 【請求項１８】配列番号１８に示されるアミノ酸配列を
有し、かつビオチンシンターゼ活性を有するタンパク質
をコードする遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片。 - 【請求項１９】配列番号１６、１７、または１９に示さ
れる塩基配列を有する遺伝子を含むことを特徴とするDN
A断片。 - 【請求項２０】遺伝子が、ビオチン生合成経路の中でピ
メリルCo-Aより上流の生合成段階の反応を触媒する活性
を有する酵素をコードする遺伝子であることを特徴とす
る請求項１記載のDNA断片。 - 【請求項２１】配列番号２０に示されるアミノ酸配列、
または、配列番号２０に示されるアミノ酸配列において
１もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もし
くは付加されたアミノ酸配列を有し、かつビオチン生合
成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応
を触媒する活性を有するタンパク質をコードする遺伝子
を含むことを特徴とするDNA断片。 - 【請求項２２】配列番号２１に示されるアミノ酸配列、
または、配列番号２１に示されるアミノ酸配列において
１もしくは複数個のアミノ酸が欠失、置換、修飾、もし
くは付加されたアミノ酸配列を有し、かつビオチン生合
成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段階の反応
を触媒する活性を有するタンパク質をコードする遺伝子
を含むことを特徴とするDNA断片。 - 【請求項２３】配列番号２２または２３に示される塩基
配列を有する遺伝子を含むことを特徴とするDNA断片。 - 【請求項２４】スフィンゴモナス属に属する微生物由来
のビオチン生合成に関与する遺伝子の部分塩基配列を有
することを特徴とするDNA断片。 - 【請求項２５】遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン
酸シンテターゼ遺伝子、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミ
ノトランスフェラーゼ遺伝子、デスチオビオチンシンテ
ターゼ遺伝子、ビオチンシンターゼ遺伝子、またはビオ
チン生合成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段
階の反応を触媒する活性を有する酵素の遺伝子であるこ
とを特徴とする請求項２４記載のDNA断片。 - 【請求項２６】スフィンゴモナス属に属する微生物由来
のビオチン生合成に関与する遺伝子の、タンパク質をコ
ードする領域からなることを特徴とするDNA断片。 - 【請求項２７】遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン
酸シンテターゼ遺伝子、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミ
ノトランスフェラーゼ遺伝子、デスチオビオチンシンテ
ターゼ遺伝子、ビオチンシンターゼ遺伝子、またはビオ
チン生合成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段
階の反応を触媒する活性を有する酵素の遺伝子であるこ
とを特徴とする請求項２６記載のDNA断片。 - 【請求項２８】スフィンゴモナス属に属する微生物由来
のビオチン生合成に関与する遺伝子の、タンパク質をコ
ードする領域の上流に位置する遺伝子発現制御領域から
なることを特徴とするDNA断片。 - 【請求項２９】遺伝子が、7-ケト-8-アミノペラルゴン
酸シンテターゼ遺伝子、7,8-ジアミノペラルゴン酸アミ
ノトランスフェラーゼ遺伝子、デスチオビオチンシンテ
ターゼ遺伝子、ビオチンシンターゼ遺伝子、またはビオ
チン生合成経路の中でピメリルCo-Aより上流の生合成段
階の反応を触媒する活性を有する酵素の遺伝子であるこ
とを特徴とする請求項２８記載のDNA断片。 - 【請求項３０】配列番号２４または２５に示される塩基
配列を有することを特徴とするDNA断片。 - 【請求項３１】スフィンゴモナス属に属する微生物がス
フィンゴモナス・ポウシモビルス（Sphingomonas pauci
mobilis）JCM7511またはスフィンゴモナス・エスピー
（Sphingomonas sp.）SC42405であることを特徴とする
請求項１、２、３、７、１１、１５、２０、２４、２
５、２６、２７、２８、または２９記載のDNA断片。 - 【請求項３２】請求項１〜３１記載のDNA断片を含むこ
とを特徴とするベクター。 - 【請求項３３】請求項１〜３１記載のDNA断片を宿主細
胞内で複製可能なベクターに挿入することを特徴とする
ベクターの作製方法。 - 【請求項３４】タンパク質をコードする領域の上流に遺
伝子発現制御領域が結合されてなることを特徴とする請
求項３２記載のベクター。 - 【請求項３５】請求項１〜３１記載のDNA断片、または
請求項３２もしくは３４記載のベクターが少なくとも１
つ宿主細胞中に導入されてなることを特徴とする形質転
換体。 - 【請求項３６】宿主細胞が微生物であることを特徴とす
る請求項３５記載の形質転換体。 - 【請求項３７】請求項３２または３４記載のベクターを
宿主細胞に導入することを特徴とする形質転換体の作製
方法。
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|---|---|---|---|
| JP04726398A JP4329129B2 (ja) | 1997-03-03 | 1998-02-27 | ビオチン生合成遺伝子を含むｄｎａ断片およびその利用 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4783897 | 1997-03-03 | ||
| JP9-47838 | 1997-03-03 | ||
| JP04726398A JP4329129B2 (ja) | 1997-03-03 | 1998-02-27 | ビオチン生合成遺伝子を含むｄｎａ断片およびその利用 |
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|---|---|
| JPH10304886A true JPH10304886A (ja) | 1998-11-17 |
| JP4329129B2 JP4329129B2 (ja) | 2009-09-09 |
Family
ID=12786519
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04726398A Expired - Fee Related JP4329129B2 (ja) | 1997-03-03 | 1998-02-27 | ビオチン生合成遺伝子を含むｄｎａ断片およびその利用 |
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