JPH09503743A

JPH09503743A - 神経学的疾患の治療方法

Info

Publication number: JPH09503743A
Application number: JP6525365A
Authority: JP
Inventors: キム，シニル; ビー．ハウエル，ステフェン
Original assignee: デポテックコーポレーション
Priority date: 1993-05-14
Filing date: 1993-05-14
Publication date: 1997-04-15
Also published as: WO1994026250A1

Abstract

(57)【要約】脳脊髄液（脳脊髄液）に、分散系に含有させた治療用薬剤を、薬剤が脳室腔内に存在しつづけることができるように投与することによって、ヒトの神経学的疾患を軽減する方法。

Description

【発明の詳細な説明】神経学的疾患の治療方法発明の背景１．発明の分野本発明は、ヒトの脳脊髄液（ＣＳＦ）に治療用薬剤をデリバリーするにあたって、徐放性の賦形剤を使用する神経学的疾患の治療方法に関する。２．関連技術の説明神経学的疾患は、治療が特に困難な疾患に属するものである。こうした疾患の治療を複雑にしている主要な要因として、薬剤を全身投与した場合に、多くの薬剤が血管脳関門を通過できないことがある。従来のドラッグデリバリーがこうした必要性に応えることができないことは、慢性の神経学的疾患、たとえば良性あるいは悪性の細胞増殖、または各種のウイルス性病因物質によって生じる疾患に際して特に問題がある。治療が最も困難な慢性の神経学的疾患の一つが、転移性浸潤によって生じる疾患、たとえば髄膜炎である。新生物性髄膜炎は、癌による軟髄膜の転移性浸潤によって生じ、急性白血病、リンパ腫、あるいは乳癌や肺癌の合併症であることが多い。剖検による研究では、固形腫瘍の患者の５−８％で、疾病の過程で軟髄膜への転移が生じていることが示されている。有効な全身治療によって生存率が上昇したこともあって、新生物性髄膜炎の発症率が上昇している可能性も具体的に示されている（Bleyer，Curr．Prob l．Cancer，12：184，1988）。新生物性髄膜炎の標準的治療法としては、薬剤を単独で、あるいは組み合わせて鞘内に投与する化学療法と、放射線療法とがある。脳脊髄幹全体を照射する放射線療法は、往々にして重篤な骨髄抑制を生じ、白血病性髄膜炎の場合を除き、活性の軟髄膜炎疾患を抑制するうえで不十分であった（Kogan，in Principle an d Practice of Radiation Oncology，Perez，et al．eds.，Lippincott，Philad elphia，PA，pp．1280-1281，1987）。同様に、全身化学療法も、活性の髄膜炎性悪性疾患では一般的に有効というわけではなく、これは、薬剤の血液−脳関門透過性が悪いためである（Blasberg，et al.，Can．Treat．Rep.，61: 633，197 7; Shapiro，et al.，New Eng．J．Med.，293: 161，1975）。新生物性髄膜炎の鞘内治療で最も一般に使用される３種の化学療法剤の１種であるシタラビンは、細胞周期特異性の薬剤で、ＤＮＡの合成中のみ細胞を死滅させる薬剤である。したがって、シタラビンのような薬剤を用いて最適の腫瘍死滅率を得るには、薬剤を絶えず静注したり、毎日頻繁に注射したりして、脳脊髄液中で治療有効量を長期にわたって保持する必要がある。こうした処置は、患者にとっては不快であり、医師にとっては時間を要し、感染性髄膜炎の危険性が増大するおそれもある。したがって、治療用薬剤が神経学的疾患と接触しつづけて軽減効果を発揮しうるような徐放性のデポの処方が必要とされている。本発明は、こうした必要性に応えるものである。発明の要約本発明は、治療用薬剤を分散系の一部として投与すると、ヒトの各種の神経学的疾患を治療する際の、治療用薬剤の臨床有効性を大きく向上させることができるという重要な発見から出発したものである。治療に際してこうしたアプローチをとると、比較的長期にわたって薬剤を有効な用量レベルに保持して、神経学的疾患が絶えず薬剤に暴露されているようにすることが可能となる。驚くべきことに、神経学的疾患の原発巣が頭蓋領域、たとえば脳室近辺であっても、治療用薬剤を含有する分散系を腰椎から効果的に投与することが可能である。図面の簡単な説明図１は、脳室内に投与したＤＴＣ１０１の脳室の脳脊髄液での薬物動態を、１２．５−１２５ｍｇの範囲の用量の関数として示すものである。図２は、最大脳脊髄液シタラビン濃度（図２ａ）ならびにＡＵＣ（図２Ｂ）を、用量の関数として示す。図３は、脳室のシタラビン濃度（黒丸）と腰椎のシタラビン濃度（白丸）の比較［図ＡならびにＢは、それぞれ、シタラビン合計濃度と遊離シタラビン濃度］と、ＤＴＣ１０１の粒子数（図Ｃ）とを、ＤＴＣ１０１の脳室内投与後の経過時間の関数として示す。図４は、ＤＴＣ１０１を腰椎に投与した後の、経過時間の関数としての脳室の脳脊髄液のシタラビン濃度（実線）、そして、３分ならびに１４日経過後の腰椎の脳脊髄液のシタラビン濃度（破線）を示す。好適実施態様の詳細な説明本発明は、神経学的疾患を軽減するにあたって、治療用薬剤を脳脊髄液（ＣＳＦ）に投与する方法に関する。治療用薬剤が神経学的疾患を軽減するうえで驚くべき効果を有しているのは、治療用薬剤を分散系中に存在させたことによって、脳室腔内に治療用薬剤が持続的に存在しうるようになったからである。本発明の方法を用いると、治療用薬剤を神経学的疾患の領域に持続的に存在させることができるので、慢性で、臨床上の効果が特に達成しにくいこうした疾患を治療する上で特に有効な手段が得られる。「神経学的疾患」という用語は、適切な治療用薬剤に対して応答しやすい脳、脊柱、ならびに関連組織、たとえば髄膜で生ずる任意の疾患を称するものである。本発明の方法が有効な各種神経学的疾患には、細胞増殖性疾患に関連した疾患もある。「細胞増殖性疾患」という用語は、悪性ならびに非悪性の細胞群で、周囲の組織と形態学的外観が往々にして異なるものを包含する。したがって、細胞増殖性疾患は、良性腫瘍あるいは悪性腫瘍に起因する疾患である可能性がある。後者の場合には、悪性腫瘍を、さらに、原発性の腫瘍、または転移性の腫瘍、すなわち全身の各部位から拡散してきた腫瘍として特徴づけることができる。原発性腫瘍は、グリア細胞（星状細胞腫、欠乏起膠腫、膠芽細胞腫）、脳室上衣細胞（脳室上衣腫）、ならびに支持組織（髄膜腫、シュバン細胞腫、脈絡叢のパピロマ）から生じることがある。子どもの場合、腫瘍はどちらかといえば原始的な細胞（髄芽細胞腫、神経芽細胞腫、脊索腫）から生じるのが代表的であるのに対して、成人の場合、星状細胞腫ならびに膠芽細胞腫が最も一般的である。しかし、最も一般的な中枢神経系の腫瘍は総じて転移性で、軟髄膜を浸潤する腫瘍は特にそうである。転移によって髄膜を浸潤するのが一般的である腫瘍としては、非ホジキンリンパ腫、白血病、黒色腫、ならび胸、肺、胃腸起源の腺癌がある。本発明の方法は、感染性疾患の結果として生じる神経学的疾患を軽減するうえでも有用である。無菌性髄膜炎ならびに脳炎は、ウイルスによって生じる中枢神経系の疾患である。本発明の方法が有している治療用薬剤の持続的存在を可能とする能力を最も享受しうるウイルス性感染症としては、遅発ウイルスあるいはレトロウイルスによってひきおこされるウイルス性疾患がある。レトロウイルスとして特に重要なのは、レンチウイルスで、そうしたレンチウイルスとしては、ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２がある。本発明の方法によれば、原核生物によって引き起こされた感染性疾患に起因する神経学的疾患を治療することもできる。一般的に、原核生物病因物質としては、細菌、たとえばヘモフィルス・インフルエンゼ、ナイセリア・メニンギティディス、ストレプトコッカス・ニューモニア、シュードモナス・エルギノーサ（緑膿菌）、エシェリキア・コリ（大腸菌）、クレブシエラ・エンテロバクター、プロテウス属の種、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（結核菌）、スタフィロコッカス・アウレウス、ならびにリステリア・モノサイトゲネスがある。また、感染性疾患は、真核生物、たとえば菌類によって引き起こされたものでもよい。本発明の方法で治療を行うことのできる重要な菌類としては、クリプトコッカス、コクシディオイデス・イミチス、ヒストプラズマ、カンジダ、ノカルジア、ならびにブラストミセスがある。本発明の方法で使用する治療用薬剤は、デリバリーシステム、たとえばマクロ分子複合体、ナノカプセル、微小球、あるいはビーズの形状とした合成あるいは天然重合体、ならびに脂質含有系、たとえば水中油型乳液、ミセル、混合ミセル、合成膜小胞、および再封止赤血球に含有させて、脳脊髄液に投与される。これらのシステムは、まとめて、分散系として知られている。こうした系を構成する粒子は、通常、粒径が約２０ｎｍ−５０μｍである。粒径をこうした範囲とすると、粒子を製剤用緩衝液に懸濁させ、注射器を用いて脳脊髄液に注入することが可能となる。粒子は脳室から投与することもできるが、鞘内に投与する方が好ましい。特に好適なのは、腰椎穿刺による粒子の注入である。分散系の調製にあたって使用する材料は、通常、フィルター滅菌による滅菌が可能で、無毒で、生分解性であり、たとえば、アルブミン、エチルセルロース、カゼイン、ゼラチン、レシチン、リン脂質、ダイズ油をこの方法で使用することができる。重合体分散系は、マイクロカプセル化のコアセルベーションと似た方法で調製することができる。場合によっては、比重を変えることによって分散系の密度を変更して、分散液の密度を脳脊髄液より高くしたり、低くしたりすることができる。たとえば、イオヘキソール、イオジキサノール、メトリザミド、スクロース、トレハロース、グルコースをはじめとする比重の高い生体適合性の分子を加えることによって、分散物質の比重を高くすることができる。本発明で使用することのできる分散系の一種としては、治療用薬剤の重合体マトリクスへの分散液がある。治療用薬剤は、重合体マトリクスが分解あるいは生分解されるにつれて放出され、分解あるいは生分解された重合体マトリクスは、可溶性生成物となって、体外へと排出される。こうした目的では、いくつかの群の合成重合体、たとえば、ポリエステル（Pitt，et al.，in Controlled Releas e of Bioactive Materials，R．Baker，Ed．Academic Press，New York，1980）、ポリアミド（Sidman，et al.，Journal of Membrane Science，7:227，1979）、ポリウレタン（Maser，et al.，Journal of Polymer Science，Polymer Sympo sium，66: 259，1979）、ポリオルトエステル（Heller，et al.，Polymer Engin eering Science，21: 727，1981）、ポリ無水物（Leong，et al.，Biomaterials ，7: 364，1986）が研究されている。ＰＬＡならびにＰＬＡ／ＰＧＡのポリエステルについては、多数の研究がすでになされている。こうした研究がなされているのは、もちろん、利便性や安全性を配慮してのことである。これらの重合体は、生分解性の縫合糸としてすでに使用されているので入手が容易であり、分解して無毒の乳酸ならびにグリコール酸となる（U.S．4,578,384、U.S．4,765，973 を参照されたい。これらの文献は、本明細書に参考文献として包含される。）。固体重合体分散系は、塊状重合、界面重合、溶液重合、ならびに開環重合といった重合法を使用することによって合成することができる（Odian，G.，Princip les of Polymerization，2nd ed.，John Wiley & Sons，New York，1981）。これらの方法のうちの任意のものを用いることによって、機械的特性、化学的特性、生分解特性が多岐にわたる各種の異なった合成重合体が得られ、各種の特性や性質のこうした違いは、反応温度、反応物質の濃度、溶媒の種類、反応時間といったパラメータを変化させることによって制御することができる。場合によっては、固体重合体分散系を、まず大きめの塊として生成してから、粉砕などの処理を行って、適当な生理緩衝液への分散状態を維持するうえで十分に小さい粒子とすることもできる（U.S．4,452,025、U.S．4，389，330,、U.S．4,696,258を参照されたい。これらの文献は、本明細書に参考文献として包含される。）。生分解性の板、円柱、球から治療用薬剤が放出されるメカニズムは、Hopfenbe rg（in Controlled Release Polymeric Formul ations，pp．26-32，Paul，D.R ．and Harris，F.W.，Eds.，American Chemical Society，Washington，D.C.，1 976）によって記載されている。放出量がマトリクスの崩壊によって主に調節されるようなこうしたデバイスからの添加剤の放出は、下記の単純な式によって表される。Ｍ_t／Ｍ_∞＝１−［１−ｋ₀ｔ／Ｃ₀ａ］ⁿ 式中のｎは、球では３、円柱では２、板では１である。記号ａは、球あるいは円柱の半径、または板の半分の厚さを表す。Ｍ_tとＭ_∞は、それぞれ、時間ｔならびに無限時間の経過後の放出薬剤質量である。本発明の分散系としては、合成膜小胞が最も好適である。「合成膜小胞」という用語は、通常リポソームとして知られている、同心円状の空間を１つ以上有する構造、ならびに単一の二重層膜によって画された複数の非同心円状の空間を有する構造のことを称するものである。リン脂質を水性溶媒に分散すると、リン脂質は膨潤して水和し、水性媒体が脂質二重層を隔てている多重ラメラの同心円状の二重層小胞を自発的に形成する。こうした系は、通常、多重ラメラリポソームあるいは多重ラメラ小胞（ＭＬＶ）と称され、直径が、約１００ｎｍ−約４μｍの範囲である。ＭＬＶを超音波処理すると、直径が約２０ｎｍ−約５０ｎｍの範囲の小型の単ラメラ小胞（ＳＵＶ）が生じ、このＳＵＶは、その中心部分に水性溶液を含有している。合成膜小胞の組成は、通常、リン脂質、特に相転移温度の高いリン脂質と、ステロイド、特にコレステロールとの組み合わせである。他のリン脂質あるいは脂質を使用することも可能である。合成膜小胞を製造するうえで有用な脂質の例としては、ホスファチジル化合物、たとえばホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴ脂質、セレブロシド、ならびにガングリオシドがある。特に有用なのは、脂質部分が１４−１８個の炭素原子、特に、１６−１８個の炭素原子を含んでおり、飽和しているジアシルホスファチジルグリセロールである。リン脂質の具体例としては、卵ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ならびにジステアロイルホスファチジルコリンがある。治療用薬剤を含有する小胞を調製するにあたっては、薬剤の封入効率、薬剤の不安定性、得られる小胞群の均一性ならびに粒径、薬剤対脂質の比、製剤の透過性の不安定性、ならびに処方剤の製剤学的許容性といった変化するものについて考慮する必要がある（Szoka，et al.，Annual Reviews of Biophysics and Bioengineering，9:467，1980; Deame r，et al.，in Liposomes，Marcel Dekker，New York，1983，27; Hope，et al. ，Chem．Phys．Lipids，40: 89，1986）。場合によっては、各種の程度の標的特異性を有する合成膜小胞を製造することも可能である。小胞のターゲティングは、解剖学的要因とメカニズム的要因とに基づいて分類されている。解剖学的分類は、選択性のレベル、たとえば器官特異性であるのか、細胞特異性であるのか、小器官特異性であるのかに基づいている。メカニズム的ターゲティングは、さらに、ターゲティングが受動的であるか能動的であるかにもとづいて区別することができる。受動的ターゲティングでは、洞様毛細血管を含む器官の細網内皮系（RES）の細胞に運ばれるという小胞の天然の傾向を利用する。一方、能動的ターゲティングでは、小胞を特異的なリガンド、たとえばモノクローナル抗体、糖、糖脂質、あるいはタンパク質とカップリングしたり、小胞の組成あるいは粒径を変えたりすることにより、小胞の改変を行って、天然に局在化が生じる部位以外の器官や細胞の種類にターゲテイングされるようにする。また、小胞が、毛細血管床に物理的に局在化してもよい。本発明では、分散系として、再封止した赤血球を使用することもできる。赤血球を低張溶媒に懸濁すると、膨潤が生じて細胞膜が破断する。その結果、直径約２００−５００オングストロームの孔が形成され、細胞内環境と細胞外環境の平衡化が生じることとなる。次にこの周囲溶媒のイオン強度を等張条件に調整し、細胞を３７°Ｃでインキュベートすると、孔が閉じ、赤血球が再封止される。この技術を使用すると、再封止した赤血球の内部に治療用薬剤を封入することができる。分散系の表面は、各種の方法で改変することができる。非脂質物質を、連結基を介して、一種以上の疎水基、たとえば約１２−２０個の炭素原子からなるアルキル鎖に結合させることもできる。合成膜小胞デリバリーシステムの場合、脂質基を脂質二重層に組み込んで、その化合物と膜二重層の安定的な結合状態(assoc iation)を保つことができる。その場合、脂質の鎖をその化合物と結合させるにあたって、各種の連結基を使用することができる。リガンドの場合にしてもレセプターの場合にしても、合成膜小胞と結合する分子の数は、小胞のサイズならびに結合分子のサイズ、標的細胞のレセプターあるいはリガンドに対するその分子の結合親和性などに応じて、場合によって変わってくる。大抵の場合、結合分子は、小胞の外側膜の二重層中の分子の総数に対する結合分子のパーセントにもとづいて、約０．０５−約２モル％、好ましくは約０．１−約１モル％が、小胞上に存在する。一般に、ターゲティングされたデリバリーシステムの表面に結合させる各種の化合物は、分散系が所望の組織に能動的に「ホームイン」することを可能とするリガンドならびにレセプターとする。リガンドは、レセプターと称されるまた別の化合物と特異的に結合し、リガンドとレセプタで相同なペアを形成するような任意の所望の化合物とすることができる。分散系の表面に結合させる化合物は、分子量が約１２５−２００であるような小型のハプテンから、これよりはるかに大型の、分子量が約６０００以上である、但し一般には１００万以下であるような抗体まで、多岐にわたるものとすることができる。タンパク質性のリガンドとレセプターが特に重要である。一般に、特定のエフェクタ分子と結合する表面膜タンパク質は、レセプターと称される。しかし、本発明で使用するレセプターの大半は抗体である。これらの抗体は、モノクローナル抗体でもポリクローナル抗体でもよく、エピトープ決定基と結合することのできる断片、たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）₂、ならびにＦｖでもよい。タンパク質、たとえば抗体の合成膜小胞との結合技術は周知のものである（U.S．4,806,466、U.S．4,857，735を参照されたい。これらの文献は、本明細書に参考文献として包含される。）。「治療用薬剤」という用語は、本明細書で本発明の組成物について使用する場合には、薬剤、放射性同位元素、ならびに免疫調整剤を包含するものであって、制限はない。当業者であれば、他の同様の物質についても、承知しているか、あるいはすぐに確認できるはずである。治療用薬剤と、所定の種類の分散系との組み合わせで、その組み合わせが他の組み合わせより適合性が高いというような組み合わせは当然ありうる。たとえば、固体重合体分散系の製造方法は、タンパク質性の治療用物質が有する持続性の生物活性とは適合しない可能性がある。しかし、特定の治療用物質と特定の分散系との非適合性の組み合わせを生ずるような諸条件は周知であったり、容易に確認できたりするので、こうした問題が生じる可能性を回避するのも日常的な作業である。分散系に含有させることのできる薬剤としては、非タンパク質性の薬剤ならびにタンパク質性の薬剤がある。「非タンパク質性の薬剤」という用語は、古典的に薬剤と称されていた化合物、たとえば、マイトマイシンＣ、ダウノルビシン、ビンブラスチン、ＡＺＴ、ならびに各種ホルモンを包含するものである。特に重要なのは、抗腫瘍性の細胞周期特異的な薬剤、たとえばシタラビン、メトトレキセート、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フロキシウリジン（ＦＵＤＲ）、ブレオマイシン、６−メルカプト−プリン、６− チオグアニン、フルダラビンリン酸塩、ビンクリスチン、ならびにビンブラスチンである。本発明で使用できる他の同様の物質についても、当業者には周知のはずである。分散系に含有させることのできるタンパク質性の薬剤としては、免疫調整剤をはじめとする生体応答調整剤、ならびに抗生物質がある。「生体応答調整剤」という用語は、特定の所望の治療効果、たとえば、腫瘍細胞の破壊を増強するようなかたちで免疫応答の調整に関与する物質を包含するものである。免疫応答調整剤の例としては、リンホカインのような化合物がある。リンホカインの例としては、腫瘍壊死因子、インターロイキン、リンホトキシン、マクロファージ活性化因子、遊走阻止因子、コロニー刺激因子、ならびにインターフェロンがある。分散系に含有させることのできるインターフェロンとしては、α−インターフェロン、β−インターフェロン、γ−インターフェロン、ならびにそのサブタイプがある。また、こうしたタンパク質性の薬剤から誘導したり、それとは独立に誘導したりしたペプチドあるいは多糖の断片を含有させることもできる。当業者であれば、タンパク質性の薬剤として作用しうる他の物質についても、承知しているか、あるいはすぐに確認できるはずである。細胞増殖性疾患、たとえば腫瘍を治療するにあたって放射性同位元素を使用する際には、腫瘍の分布および大きさ、そして同位元素の安定性および放射性といった要因によっては、ある種の放射性同位元素の方が、別の放射性同位元素より好適な場合もある。存在している悪性腫瘍の種類によっても、ある種の放射体の方が、別の放射体より好ましい場合がある。一般に、免疫療法では、αおよびβ 粒子を放射する放射性同位元素が好適である。たとえば、患者が固形腫瘍の病巣を有している場合であれば、数ミリの組織を貫通しうる高エネルギーのβ放射体、たとえば⁹⁰Ｙが好適であろう。一方、白血病のように悪性疾患が単一の標的細胞から構成されている場合であれば、短い距離で高エネルギーのα放射体、たとえば²¹²Ｂｉが好適であろう。治療目的で分散系に含有させることのできる放射性同位元素の例としては、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、⁹⁰Ｙ、⁶⁷Ｃｕ、²¹²Ｂｉ、²¹¹Ａｔ、²¹ ² Ｐｂ、⁴⁷Ｓｃ、¹⁰⁰Ｐｄ、ならびに¹⁸⁸Ｒｅがある。分散系に含有させることのできる他の放射性同位元素についても、当業者には周知のはずである。分散系に抗体を含有させる場合には、抗体は、モノクローナル抗体であっても、ポリクローナル抗体であっても、治療用薬剤で標識しても、しなくてもよい。「抗体」あるいは「イムノグロブリン」という用語は、本明細書で使用する場合には、完全な分子ばかりでなく、細胞増殖性あるいは感染性の神経学的疾患の病因物質上に存在しているエピトープ決定基と結合することのできる断片、たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）₂、ならびにＦｖも包含するものである。抗体に結合する場合には、治療用薬剤は、直接結合することも、間接的に結合することもできる。間接的な結合の例としては、スペーサ部分を使用する例がある。こうしたスペーサ部分は、可溶性とすることも、不溶性とすることも可能で（Diener，et al.，Science，2 31: 148，1986）、薬剤が標的部位で抗体分子から放出されるよう選択することができる。免疫療法に際して抗体と結合させることのできる治療用薬剤の例としては、上述の薬剤および放射性同位元素、ならびにレクチンおよびトキシンがある。レクチンは、通常は植物性物質から単離されるタンパク質で、特定の糖部分と結合する。多くのレクチンは、細胞を凝集させたり、リンパ球を刺激したりすることも可能である。しかし、リシンは毒性のレクチンで、免疫治療に際して使用されてきた。その際には、リシンのαペプチド鎖（リシンの毒性を生じている部分）を抗体分子と結合させ、毒性効果の部位特異的デリバリーを実現するのが好適である。トキシンは、植物、動物、あるいは微生物によって産生される有毒物質で、用量が十分多いと往々にして致死性ともなりうる物質である。ジフテリアトキシンは、コリネバクテリウム・ジフテリア（Corynebacterium diphtheria）によって産生される物質で、治療に使用することができる。このトキシンは、αならびに βサブユニットから構成されており、適切な条件下では、これらのサブユニットを分離することができる。毒性のα成分を抗体と結合して、抗体が特異性を有している標的細胞への部位特異的デリバリーに使用することができる。モノクローナル抗体と組み合わせることのできる他の治療用薬剤も公知であり、当業者であれば、容易に確認することができる。標識あるいは未標識抗体も、各種の治療用薬剤、たとえば本明細書に記載した治療用薬剤と組み合わせて使用することができる。特に好ましいのは、モノクローナル抗体と、免疫調整剤あるいは他の生体応答調整剤との併用療法である。一例を挙げると、モノクローナル抗体は、α−インターフェロンと組み合わせて使用することができる。この治療法は、腫瘍細胞によるモノクローナル抗体に対して反応性の抗原の発現を増大させることによって、モノクローナル抗体の腫瘍へのターゲティングを増強するものである（Greiner，et al.，Science，235: 895 ，1987）。複数の非同心円状の空間を有する合成膜小胞を使用した分散系は、非同心円状の空間のそれぞれに各種の治療用薬剤を封入することができるので、併用療法で特に有用である。当業者であれば、各種の生体応答調整剤から適当なものを選び出して、併用するモノクローナル抗体あるいは他の治療用薬剤の薬効を増強する所望のエフェクタ機能を創出することができるはずである。本発明のモノクローナル抗体を、各種の治療用薬剤、たとえば本明細書に記載した治療用薬剤と組み合わせて使用する場合には、モノクローナル抗体と治療用薬剤の投与は、通常、実質的に同時期に行うこととなる。「実質的に同時期」という用語は、モノクローナル抗体と治療用薬剤が、時間的に相当近接して同時に投与されることを意味する。通常、治療用薬剤を投与してから、モノクローナル抗体を投与するのが好適である。たとえば、治療用薬剤を、モノクローナル抗体を投与する１−６日前に投与することができる。治療用薬剤の投与は、たとえば、神経学的疾患の性状、患者の状態、薬剤の半減期といった要因に応じて、毎日行うことも、あるいは任意の間隔をおいて行うこともできる。本発明の組成物に関して使用する場合、「治療上有効な」という用語は、治療用薬剤が、その治療用薬剤が目的としている特定の医学上の効果を達成するのに十分な濃度で存在することを意味する。達成しうる所望の医療効果としては、化学療法、抗生物質療法、ならびに代謝の調節があるが、これらに限定されるものではない。正確な用量は、その特定の治療用薬剤の種類および所望の効果といった要因、ならびに年齢、性別、一般的状態などの患者側の要因に左右される。当業者であれば、こうした各種の要因を考慮し、使用して、過度の実験を行わなくても、治療上有効な濃度を容易に設定することができるはずである。以上の記載は、本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲は、これらの記載によって限定されるものではない。実際、当業者であれば、過度の実験を行わなくても、本明細書の教示内容にもとづいて、さらなる実施態様を容易に考案し、製造することができるはずである。実施例１デポ／ＡＲＡ−Ｃ（ＤＴＣ１０１）の製造この実施例では、単一の二重層膜で画され、ａｒａ−Ｃの入った複数の非同心円状の空間を有する合成膜小胞の製造について説明する。２インチの撹拌用ブレードを装着した１３リットル入りのガラス製ホモジナイザー容器中で、ジオレイルレシチン（８．３ｇ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（１．６６ｇ）、コレステロール（６．１５ｇ）、およびトリオレイン（１．７３ｇ）を、８００ｍｌのクロロホルムと混合した（脂質相）。次に、シトシンアラビノシド（３３ｍｇ／ｍｌ）を０．１５１ＮＨＣｌ（最終容量、１．２リットル）に溶解し、ホモジナイザー容器に加えた。油中水型のエマルジョンを形成するために、混合用ブレードを、８００ｒｐｍで１０分間回転させた。遊離塩基リシン（４０ｍＭ）ならびにグルコース（３．２％）を含む低イオン強度の水性成分をホモジナイザーに加えてクロロホルム小球を形成し、混合用ブレードを３５００ｒｐｍで９０秒間回転させた。クロロホルムを除去するべく、窒素ガスを６２リットル／分で混合物の中に３０分間吹き込み、その間容器を３５°Ｃに加熱した。得られた生成物を精製し、ポリスルホン中空糸（孔径０．１ μ、表面積８平方フィート）を使用したダイアフィルトレーションによって濃縮した。実施例２デポ／ＡＲＡ−Ｃ封入物を用いた鞘内ならびに脳室内投与による治療Ａ．患者ならびに方法癌という組織学的診断結果と、新生物性髄膜炎という放射線学的あるいは細胞学的検査結果とを有している１２名の患者を治療した。このヒトで研究は、ＵＣＳＤのヒューマン・サブジェクツ・コミッティーによる承認を得てから実施されたものである。実施状況に要件はなく、研究以前に脳脊髄液内投与による化学療法を行っていてもよいとされた。患者には、合計４７用量のＤＴＣ１０１が与えられた。４名の患者が血液学的悪性疾患に罹患しており、８名の患者が固形腫瘍に罹患していた（表１）。５名の患者に、全身的化学療法による並行的な治療を行った。芽球クリーゼ状態の慢性髄膜炎性白血病の患者１名以外の全患者の右側脳室に、オマヤレザバーを載置した。治療としては、２−３週に１回、保存剤を含有しない０．９％ＮａＣｌ溶液へ懸濁させたＤＴＣ１０１を、脳室あるいは腰椎鞘経由で、一回の注射で投与した。レザバーは、ＤＴＣ１０１の投与後ならびに脳脊髄液をサンプリングするごとに、自己由来の脳脊髄液で洗浄した。Ｂ．処置評価が可能であった２名の患者では、３回以上のサイクルを行ってから、初回量の１２．５ｍｇを増量した（２５、３７．５、５０、１２５ｍｇ）。病状が進行するか、最大量の７用量となるまで治療を継続した。最初の一連の検査では、病歴および理学検査ならびに一通りの神経学的検査、全血球数（ＣＢＣ）および血小板数、細胞学的検査用の脳脊髄液試料、血清の化学的性質、適当な造影剤を用いたまたは用いないＣＴあるいはＭＲスキャン、インジウム−DTPA脳脊髄液流動研究を行った（Chamberlain，et al.，Neurol.，40:435-438，1990; Chamberlain，et al.，Neurol.，41: 1765-1 769，1991）。ＤＴＣ１０１の各サイクルの前に、神経学的履歴を一通り調べ、検査を行い、血球数と化学的性質を調べ、細胞学的検査用の脳脊髄液の試料を採取した。一週間以上の間隔をおいて２回続けて行った脳脊髄液の細胞学的検査が陰性であった場合に、完全な細胞学的応答が生じたと定義し、完全な応答を示さないものは、無応答と判定した。細胞学的所見が陰性から陽性に変わった場合に、進行性の疾患であると判定した。実質の中枢神経系の病変、あるいは中枢神経系の外側の病変の変化は、ＣＳＲ内の治療によって影響を受けるとは考えられないので、応答の判定に際して使用しなかった。処置によって生じた各種の中毒症状は、米国国立癌研究所（National Cancer Institute）の「共通中毒症状スケール（Common Toxicity Scale）」で評価した。図１は、１２．５−１２５ｍｇの範囲の各種用量のＤＴＣ１０１を脳室内に投与した後の、脳脊髄液でのシタラビンの薬物動態を示すものであり、その際、脳脊髄液の試料は、ＤＴＣ１０１を投与したのと同じ脳室から採取した。図Ａ：シタラビンの合計濃度。図Ｂ：遊離シタラビンの濃度。データの各点は、３回以上のコースから得られた平均値であり、誤差バーは、平均の標準誤差を示す。最大許容量（７５ｍｇ）を脳室内に投与した後、脳室の遊離シタラビン（デポフォーム（DepoFoam）粒子から脳脊髄液に放出されるシタラビン）の濃度は、平均初期（α）半減期が９．４±１．６時間（SEM）、末期（β）半減期が１４．１±２３時間（SEM）で指数的に低減した。合計脳室濃度は（遊離シタラビン＋封入シタラビン）も、同様に指数的に低減した。薬物動態学的研究脳室の脳脊髄液と血液の試料を、投与直前と、投与後１時間、そして１、２、４、７、１４、２１日後に採取した。何人かの患者では、腰椎の脳脊髄液の試料を、腰椎の脳脊髄液の細胞学的性質の評価の一部として、上記採取時点の１時点で採取した。腰椎内投与に関しては、１時間後の試料のかわりに、腰椎嚢の試料を投与の３分後に採取した。採取した脳脊髄液ならびに血液の試料は、いずれも、最終濃度で４０μＭのテトラヒドロウリジンの入った試験管に採取し、シタラビンがシチジンデアミナーゼによってインビトロで異化作用を生じてウラシルアラビノシド（ara-U）となるのを防止した。ヘパリンを加えた血液試料をただち氷上に載置し、遠心分離によって血液細胞から血漿を単離した。脳脊髄液の試料を６００×ｇで５分間遠心分離して、デポフォームの粒子を遊離シタラビン分画から分離した（上清）。２００μｌのメタノールと蒸留水中で順次撹拌することによって、デポフォームのペレットを溶解した。脳脊髄液の遊離シタラビン分画は、それ以上の処理を行なわずに分析した。血漿を、限外濾過した（ＹＭＴ膜、 No．4104；米国マサチューセッツ州ダンバース(Danvers，MA)、アミコン社(Amic on Corp.)）。脳脊髄液と血漿の試料を−２０°Ｃで凍結保存しておいてから、すでに記載されている方法（Kaplan，JG，et al.，J．Neuro-Onc.，9：225-229 ，1990）を改変した方法で分析した。試料の分析は、高速液体クロマトグラフィー装置（米国マサチューセッツ州ミルフォード（Milford， MA）、ウォーターズアソシエーツ（Waters Associates））を、２５４ｍｍと２８０ｍｍ紫外線検出装置、２つの直列につないだペコスフィア（Pecosphere）Ｃ −１８逆相カラム（３Ｘ３Ｃカートリッジ、米国コネティカット州ノーウォーク（Norwalk，CT）、パーキン−エルマー（Perkin-Elmer））、ならびに流速１．０ｍｌ／分の無勾配流動相である６．７ｍＭリン酸カリウム／３．３ｍＭリン酸混合物（ｐＨ２．８）とともに使用することによって行った。シタラビンの保持時間は６分間、主要な代謝産物であるara-Ｕの保持時間は７分間であった。互いに干渉するピークはなかった。薬物動態学的曲線は、指数関数Ｃ（ｔ）＝Ａｅ^-αt＋ＢＥ^βtにあてはまり、ここで、Ｃ（ｔ）は時間５の時点での濃度、ＡおよびＢは定数、そしてαおよびβは初期速度定数および末期速度定数である。ＲＳＴＲＩＰプログラム（マイクロマッツ・サイエンティフィック・ソフトウェア（MicroMath Scientific Software）、米国ユタ州ソルトレークシティ（Salt Lake City，UT））を使用して、反復非線形回帰によって曲線をあてはめた。濃度一時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、線形台形公式によって最後に測定した濃度まで決定し、無限大まで外挿法によって推定した。シタラビンのＣＳＲからのクリアランスを、シタラビンの投与量をＡＵＣで割ることによって決定した。脳脊髄液中のシタラビンの初期分布容積（Ｖ_d）を、シタラビンの用量を１時間の時点で測定した濃度で割ることによって、計算した。表２には、薬物動態学的パラメータの詳細を、用量の関数として示す。用量を１２．５ｍｇから１２５ｍｇに増大させても、半減期（Ｔ_1/2）、分布容積（Ｖ_d）、ならびにクリアランス（Ｃｌ）が有意に変動することはなかった。図２は、ＤＴＣ１０１を投与してから１時間後に測定した最大脳室シタラビン濃度（図Ａ）、及び脳脊髄液の薬剤被爆量（ＡＵＣ、図Ｂ）を、脳室に投与した用量の関数として示す。白丸及び黒丸は、それぞれ、合計シタラビン濃度及び遊離シタラビン濃度を示す。データの各点は、３回以上のコースから得られた平均値であり、誤差バーは、平均の標準誤差を示す。これらの薬物動態学上のパラメータと用量との間には線形の関係があり、調べた範囲の用量では、クリアランスの過程が飽和することはないことが示唆された。ａｒａ−Ｕの合計ＡＵＣは、脳脊髄液中のシタラビンの合計ＡＵＣの、平均で３．７±０．９％（ＳＥＭ）であった。血漿では、どの時点でもシタラビンもａｒａ−Ｕも検出されなかった（シタラビン及びａｒａ−Ｕの検出限界−０．２５μｇ／ｍｌ）。腰椎の脳脊髄液試料は、最大許容量（７５ｍｇ）のＤＴＣ１０１を脳室に投与した後に、２名の患者での５回のコースの間に採取を行った。図３では、脳室の薬剤濃度及びＤＴＣ１０１の粒子数を、腰椎のクモ膜下腔の値と比較している。図には、脳室（黒丸）及び腰椎（白丸）のシタラビン濃度の比較（図Ａ及びＢは、それぞれ合計シタラビン濃度と遊離シタラビン濃度）と、ならびにＤＴＣ１０１の粒子数との比較（図Ｃ）を、ＤＴＣ１０１を脳室内に投与してから経過した時間の関数として行っている。初期脳室内遊離シタラビン濃度は、半減期６．８時間で指数的に減少し、腰椎脳脊髄液ではシタラビンが１．２５時間後に検出可能となり、倍加時間０．５３時間で急激に上昇した。その後、腰椎及び脳室の遊離及び合計のシタラビン濃度は並行して減少し、腰椎の薬剤濃度は、減衰曲線の末期相を通じて、脳室内の薬剤濃度と同程度のままであった。脳室及び腰椎内の脳脊髄液試料は、ＤＴＣ１０１を腰椎穿刺によって鞘内に投与した４名の患者から採取した。図４には、脳室の脳脊髄液で遊離シタラビンの治療有効濃度（＞０．１μｇ／ｍ１）が腰椎穿刺による鞘内投与の後３−６日間にわたって保持され、腰椎内投与後１４日間にわたって、脳室の脳脊髄液で有意な合計シタラビン濃度が検出されたことが示されている。ＤＴＣ１０１を腰椎に投与してから経過した時間の関数としての脳室の脳脊髄液のシタラビン濃度（実線）、３分及び１４日経過後の腰椎の脳脊髄液のシタラビン濃度（破線）。白四角及び白丸は合計シタラビン濃度を示し、黒四角及び黒丸は遊離シタラビン濃度を示す。腰椎内への投与の後、腰椎のクモ膜下腔では、１４日以上にわたって遊離シタラビンの治療有効濃度が保持された。表３には、ＤＴＣ１０１による毒性を用量の関数として示す。毒性は一過性であり、ＤＴＣ１０１を下記の量投与しても薬剤に関連した毒性によって治療に遅延が生じることはなかった。１２５ｍｇのＤＴＣ１０１を脳室内に投与してから３６時間経過後に発症した毒性脳障害に起因する死亡例が１例あった。この患者は、脳の基底部での脳脊髄液の流れを部分的に遮断するための脳全体への照射（５回に分けて２０Ｇｙ）も同時に受けていた。ＤＴＣ１０１を投与する２カ月前に自己骨髄移植を受けていた患者１名を除き、ＤＴＣ１０１によると思われる血液学的毒性は認められなかった。ＤＴＣ１０１の最大許容量は７５ｍｇであり、用量制限的毒性は用量を１２５ｍｇとした際に生じ、この用量では、過度の嘔吐及び脳障害が認められた。表４には、２−４ｍｇの用量のデキサメタゾンの１日２回の経口投与が、ＤＴＣ１０１に関連する毒性を緩和する上で大きな効果を有していたことが示されている。発熱、頭痛、吐き気／嘔吐はいずれも抑制された。３名の患者にデキサメタゾンを経口投与しつつＤＴＣ１０１を投与し、またデキサメタゾンの経口投与を行わずに同量のＤＴＣ１０１を投与した。３名の患者は、いずれもデキサメタゾンの投与を行わない場合には毒性を呈し、デキサメタゾンの投与を同時に行った場合には毒性がほぼ完全に抑制された。脳室内投与と腰椎内投与とを組み合わせて行った。４名の患者を、ＤＴＣ１０１を腰椎の鞘内に投与して治療した。毒性は、９サイクル中の４サイクルでグレード１−２の軽い背中の痛みが認められた以外は、ＤＴＣ１０１を脳室内に投与した後に観察されるものと類似していた。１２名の患者のうち９名は、治療直前の脳脊髄液の細胞学的所見が陽性であった。細胞学的評価を行うことが可能なこれらの９名の患者のうちの７名では、ＤＴＣ１０１での治療によって脳脊髄液の悪性細胞がなくなった（表５）。応答の持続期間は２−２６週にわたっており、中央値は１６週であった。応答を示さない患者のうちの１名はエイズ関連非ホジキンリンパ腫に罹患しており、もう１名の患者は原発性の脳腫瘍に罹患していた。検討を行った全患者の生存期間は、３ −６４週の範囲であった（中央値：２１週）。１２名の患者のうち３名は、ＣＴ又はＭＲＩスキャンで調べると新生物性髄膜炎の兆候を示していたものの、治療前の脳脊髄液の細胞学的所見が陰性であったので、細胞学的応答について評価することはできなかった。しかし、これらの３名の患者のいずれも、治療中に脳脊髄液が陽性の細胞学的所見を示すことはなかった。驚くべきことに、細胞学的応答は全ての用量レベルで認められ、用量が多い場合に限定されてはいなかった。多発性骨髄腫の患者１名は、ＤＴＣ１０１の２５ｍｇの用量レベルで最初に細胞学的に応答した後に再発し、ＤＴＣ１０１の用量を増やすと（３７．５ｍｇ）再度応答した。頭痛を示す５名の患者のうち３名は、ＤＴＣ１０１の治療に対して応答した。治療の開始時に病巣性の神経性欠陥（眼筋麻痺若しくは不全対麻痺）又は散在性の神経性欠陥（急性錯乱状態）を有していた患者では、臨床上の改善点は認められなかった。本発明のいくつかの実施態様について記載した。しかし、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく各種の改変を行うことも、また可能であると理解されるであろう。したがって、本発明は特定の具体的に示した実施態様によって限定されるのではなく、添付した請求の範囲によってのみ限定されると理解すべきである。

Claims

【特許請求の範囲】１．疾患を有するヒトの脳脊髄液（脳脊髄液）に、分散系に含有させた治療上有効な量の治療用薬剤を、薬剤が疾患を軽減するうえで十分な時間脳室腔内に存在しつづけるように投与する神経学的疾患の軽減方法。２．神経学的疾患が細胞増殖性疾患である請求の範囲第１項に記載の方法。３．細胞増殖性疾患が良性腫瘍である請求の範囲第２項に記載の方法。４．細胞増殖性疾患が悪性腫瘍である請求の範囲第２項に記載の方法。５．悪性腫瘍が原発性腫瘍である請求の範囲第４項に記載の方法。６．悪性腫瘍が転移性腫瘍である請求の範囲第４項に記載の方法。７．転移性腫瘍が新生物性髄膜炎である請求の範囲第６項に記載の方法。８．神経学的疾患が感染性疾患である請求の範囲第１項に記載の方法。９．感染性疾患が、ウイルスによってひきおこされるものである請求の範囲第８項に記載の方法。 10．ウイルスが遅発ウイルスである請求の範囲第９項に記載の方法。 11．ウイルスがレトロウイルスである請求の範囲第９項に記載の方法。 12．レトロウイルスがレンチウイルスである請求の範囲第９項に記載の方法。 13．レンチウイルスが、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−ＩＩ、ＨＩＶ−１及びＨＩＶ −２からなる群から選ばれるものである請求の範囲第１２項に記載の方法。 14．感染性疾患が、原核生物によってひきおこされるものである請求の範囲第８項に記載の方法。 15．原核生物が細菌である請求の範囲第１４項に記載の方法。 16．細菌が、ヘモフィルス・インフルエンゼ(Hemophilus influenzae)、ナイセリア・メニンギティディス(Neisseria meningitidis)、ストレプトコッカス・ニューモニア(Streptcoccus pneumonia)、シュードモナス・エルギノーサ(Pseudom onas aeruginosa)、エッシェリヒア・コリ(Escherichia coli)、クレブシエラ・エンテロバクター(Klebsiella Enterobacter)、プロテウス・エスピー(Proteus spp.)、マイコバクテリウム・ツベルクローシス(Mycobacterium tuberculosis) 、スタフィロコッカス・アウレウス(Staphylococcus aureus)、及びリステリア・モノサイトゲネス(Listeria monocytogenes)からなる群から選ばれるものである請求の範囲第１５項に記載の方法。 17．感染症が、真核生物によってひきおこされるものである請求の範囲第８項に記載の方法。 18．真核生物が真菌である請求の範囲第１７項に記載の方法。 19．真菌が、クリプトコッカス(Cryptococcus)、コクシディオイデス・イミチス (Coccidioides immitis)、ヒストプラズマ(Histoplasma)、カンジダ(Candida)、ノカルジア(Nocardia)、及びブラストミセスよりなる群から選ばれるものである請求の範囲第１８項に記載の方法。 20．神経学的疾患が、代謝不全によって代謝によりひきおこされるものである請求の範囲第１項に記載の方法。 21．代謝不全が自己免疫疾患である請求の範囲第２０項に記載の方法。 22．治療用薬剤が、抗腫瘍薬、抗細菌剤、及び抗ウイルス剤からなる群から選ばれるものである請求の範囲第１項に記載の方法。 23．抗腫瘍薬が、細胞周期相特異性薬剤である請求の範囲第２２項に記載の方法。 24．抗腫瘍薬が、細胞周期のＳ期に対して特異性である請求の範囲第２３項に記載の方法。 25．抗腫瘍薬がシタラビンである請求の範囲第２４項に記載の方法。 26．分散系が合成膜小胞である請求の範囲第１項に記載の方法。 27．合成膜小胞がリポソームである請求の範囲第２６項に記載の方法。 28．リポソームが複数の同心円状の空間を有している請求の範囲第２７項に記載の方法。 29．合成膜小胞が複数の非同心円状の空間を有している請求の範囲第２６項に記載の方法。 30．分散系が重合体マトリックスである請求の範囲第１項に記載の方法。 31．分散系が、脳脊髄液より比重が高いものである請求の範囲第１項に記載の方法。 32．分散系が、脳脊髄液より比重が高い分子を封入することによって分散液の比重を脳脊髄液より高くしたものである請求の範囲第３１項に記載の方法。 33．脳脊髄液より比重が高い分子が、ヨウ化された分子である請求の範囲第３２項に記載の方法。 34．ヨウ化分子が、イオヘキソール、イオジキサノール、及びメトリザミドからなる群から選ばれるものである請求の範囲第３３項に記載の方法。 35．脳脊髄液より比重が高い分子が、炭水化物である請求の範囲第３２項に記載の方法。 36．炭水化物が、スクロース、トレハロース、ならびにグルコースよりなる群から選ばれるものである請求の範囲第３５項に記載の方法。 37．分散系が、脳脊髄液より比重が低いものである請求の範囲第１項に記載の方法。 38．分散系が、標的特異性である請求の範囲第１項に記載の方法。 39．分散系が、解剖学的にターゲティングされている請求の範囲第３８項に記載の方法。 40．分散系が、機械的にターゲティングされている請求の範囲第３８項に記載の方法。 41．機械的ターゲティングが受動的なものである請求の範囲第４０項に記載の方法。 42．機械的ターゲティングが能動的なものである請求の範囲第４０項に記載の方法。 43．分散系が、糖、糖脂質及びタンパク質からなる群から選ばれる部分とのカップリングによって能動的にターゲティングされている請求の範囲第４２項に記載の方法。 44．上記タンパク質が抗体である請求の範囲第４３項に記載の方法。 45．分散系が脳室内に投与されるものである請求の範囲第１項に記載の方法。 46．分散系が腰椎内に投与されるものである請求の範囲第１項に記載の方法。 47．腰椎内投与が１回行われる請求の範囲第４６項に記載の方法。