JPH09502184A

JPH09502184A - 体液性免疫の持続性抑制方法

Info

Publication number: JPH09502184A
Application number: JP7508266A
Authority: JP
Inventors: ノエル，ランドルフ・ジェイ; フォイ，テレサ・エム
Original assignee: Dartmouth College
Current assignee: Dartmouth College
Priority date: 1993-09-02
Filing date: 1994-09-02
Publication date: 1997-03-04
Anticipated expiration: 2013-12-24
Also published as: DK0742721T3; AU734853B2; EP0742721A1; NO321037B1; IL110852A0; JP2840131B2; AU7643094A; NZ273208A; FI960979L; DE69418349T2; AU2004240180B2; GR3030762T3; WO1995006480A1; ES2134954T3; CN1137758A; AU1422099A; DE69418349D1; AU2004240180A1; ATE179616T1; CN1137726C

Abstract

(57)【要約】胸腺依存性（ＴＤ）抗原に対する体液性免疫応答の抑制方法が開示されている。該方法は、接触依存性ヘルパーエフェクター機能を媒介する分子であるアンタゴニストとともにＴＤ抗原を被験者へ投与することを特徴とする。好ましい具体例においては、該アンタゴニストは、ｇｐ３９のアンタゴニストである。一次および二次体液性免疫応答を抑制することができ、抑制は持続性である。

Description

【発明の詳細な説明】体液性免疫の持続性抑制方法発明の背景免疫系は、外来性抗原に対する２つのタイプの抗原特異的応答を引き起こす能力がある。細胞性免疫とは、Ｔリンパ球によって媒介される免疫系のエフェクター機能をいう場合に用いられる語句である。体液性免疫とは、Ｂリンパ球による抗原特異的抗体の産生をいう場合に用いられる語句である。ほとんどの抗原に対する体液性免疫の展開には、抗体産生Ｂリンパ球ばかりでなく、ヘルパーＴ（以後、Ｔｈという）リンパ球の関与が必要であることが長い間認識されている。ミチソンの「Eur.J.Immunol.」，１：１８〜２５（１９７１年）；クラマンおよびチャパーロンの「Transplant Rev.」，１：９２〜１１９（１９６９年）；カッツらの「Proc.Natl.Acad.Sci.USA」,７０：２６２４〜２６２９（１９７３年）；ラッフらの「Nature」，２２６：１２５７〜１２６０（１９７０年）を参照。特定のシグナルもしくは“ヘルプ”は、胸腺依存性（thymus-dependent,以後、ＴＤという）抗原による刺激に応答してＴｈ細胞によって提供される。幾つかのＢリンパ球のヘルプは、Ｔｈ細胞によって放出される可溶性分子（たとえばＩＬ −４およびＩＬ−５などのリンホカイン）によって媒介されるが、Ｂ細胞の活性化には、Ｂ細胞とＴｈ細胞間の接触依存性相互作用も必要である。ヒロハタらの「J.Immunol.」，１４０：３７３６〜３７４４（１９８８年）；バートレットらの「J.Immunol.」，１４３：１７４５〜１７５４（１９８９年）を参照。これは、Ｂ細胞の活性化には、Ｂ細胞とＴｈ細胞上の細胞表面分子間の絶対的相互作用が必要であることを示す。このような相互作用は、活性化されたＴ細胞の単離形質膜がＢ細胞の活性化に必要なヘルパー機能を提供し得るという観察によってさらに支持される。ブライアンの「Proc.Natl.Acad.Sci.USA」，８５：５６４〜５６８（１９８８年）；ホッジキンらの「J.Immunol.」，１４５：２０２５〜２０３４（１９９０年）；ノエルらの「J.Immunol.」，１４６：１１１８〜１１２４（１９９１年）を参照。細胞表面分子ＣＤ４０は未成熟および成熟Ｂリンパ球の表面上で同定されており、抗体と架橋したときにＢ細胞の増殖を誘導する。バルら、Ｅur.Ｊ.Ｉmmunol .、１９：１４６３〜１４６７（１９８９）；ゴードンら、Ｊ.Ｉmmunol.、１４０：１４２５〜１４３０（１９８８）；グルーバーら、Ｊ.Ｉmmunol.、１４２：４１４４〜４１５２（１９８９）。ＣＤ４０は分子レベルでクローニングされ、特徴付けられている。スタメンコビッチら、ＥＭＢＯＪ.、８：１４０３〜１４１０（１９８９）。ＣＤ４０のリガンドであるｇｐ３９（ＣＤ４０リガンドまたはＣＤ４０Ｌとも称する）もまた分子レベルでクローニングされ、特徴付けられている。アーミテージら、Ｎature、３５７：８０〜８２（１９９２）；レーダーマンら、Ｊ.Ｅxp.Ｍed.、１７５：１０９１〜１１０１（１９９２）；ホーレンバーフら、ＥＭＢＯＪ.、１１：４３１３〜４３１９（１９９２）。ｇｐ３９タンパク質は活性化されたＣＤ４⁺Ｔｈ細胞では発現されるが、休止のＣＤ４⁺Ｔｈ細胞では発現されない。スプリッグスら、Ｊ.Ｅxp.Ｍed.、１７６：１５４３〜１５５０（１９９２）；レインら、Ｅur.Ｊ.Ｉmmunol.、２２：２５７３〜２５７８（１９９２）；ロイら、Ｊ.Ｉmmunol.、１５１：１〜１４（１９９３）。ｇｐ３９遺伝子でトランスフェクトされ細胞表面上にｇｐ３９タンパク質を発現する細胞はＢ細胞の増殖を誘導することができ、他の刺激性シグナルとともに抗体の産生を誘導することができる。アーミテージら、Ｎature、３５７：８０〜８２（１９９２）；ホーレンバーフら、ＥＭＢＯＪ.、１１：４３１３〜４３１９（１９９２）。体液性免疫応答の誘発は重要な宿主防御メカニズムであるが、特定の抗原に対する抗体産生を抑制することが有益である状況も考えられる。たとえば、アレルゲンに対する体液性応答の抑制することによって、個体におけるアレルギー反応を予防または軽減することができる。さらに、治療用抗体を投与する場合、該抗体に対する体液性応答を抑制することによって、抗体の治療的効能を持続性にすることができる。発明の要約体液性免疫を抑制するためのひとつのアプローチは、Ｂ細胞の活性化を阻害することである。本発明は、Ｂ細胞を刺激するＴｈ細胞の能力を阻害し、それによってＢ細胞の活性化および抗体の産生を妨害する、インビボにおけるＴＤ抗原に対する体液性免疫応答を阻害する方法に関する。本発明は少なくとも幾分かは、Ｂ細胞の活性化のためのＴｈ細胞上のｇｐ３９とＢ細胞上のＣＤ４０の間のインビボ相互作用の必要性に基づいている。インビボにおいてｇｐ３９とＣＤ４０の間の相互作用を阻害するのに有効であるｇｐ３９のアンタゴニストをＴＤ抗原とともに被験者に投与してＴＤ抗原に対する体液性免疫を抑制する。投与されるｇｐ３９アンタゴニストはｇｐ３９に結合する抗体である。好ましい具体例において、ｇｐ３９アンタゴニストは、抗ヒトｇｐ３９抗体または抗マウスｇｐ３９抗体 (たとえばＭＲ１)などのモノクローナル抗体である。キメラ抗体、ヒト型抗体および抗体フラグメントもまた本発明の範囲に包含される。本発明の別の態様においては、ｇｐ３９アンタゴニストは、ｇｐ３９のリガンドであるＣＤ４０の可溶性形態である。ＣＤ４０の可溶性融合タンパク質もまた本発明に包含される。本発明方法によって阻害される体液性免疫応答は、抗原に対する最初の接触である場合には一次体液性免疫応答であり、あるいは先に遭遇した抗原に対する再接触である場合には二次体液性免疫応答である。たとえば、本明細書に記載された方法を用い、抗原特異的ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＤ抗体および／またはＩｇＥ抗体の産生を阻害することができる。さらに、本発明方法によって、インビボにおいて体液性免疫応答の抑制を持続性にすることができる。本発明の別の態様は、ＴＤ抗原に対する体液性免疫応答を阻害する法である。本発明において取り扱う抗原は、特異的抗体を産生するためにｇｐ３９とＢ細胞の表面上にあるリガンド（たとえばＣＤ４０）との相互作用を必要とする抗原である。通常、ＴＤ抗原はタンパク様の抗原である。本発明の好ましい具体例においては、該抗原は、治療用抗体、薬物、アレルゲンまたは外来性細胞である。本発明方法は、胸腺非依存性ＩＩ型（以後、ＴＩ−２という）抗原に対する体液性免疫応答は残しながらも、ＴＤ抗原に対する体液性免疫応答を阻害するのに有効である。本発明のさらに別の態様は、ｇｐ３９アンタゴニストを投与してｇｐ３９とＢ細胞の表面上にあるリガンド（たとえばＣＤ４０）との相互作用を妨害することによって、インビボにおいて活性化されたＴｈ細胞のヘルパー機能を特異的に阻害する方法である。本発明にしたがって、Ｔｈ細胞の機能を消滅あるいはアネルギー化することなく、インビボにおいて活性化Ｔｈ細胞のヘルパー機能を阻害することができる。さらに本発明は、ｇｐ３９アンタゴニストをその他の免疫抑制剤とを組み合わせて投与することによって、体液性免疫応答をインビボにおいて阻害する方法を提供する。ｇｐ３９アンタゴニストとともに投与しうる他の免疫抑制剤は、サイトカイン疎外剤、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４Ｔ細胞共同刺激経路インヒビターまたは免疫抑制薬物などである。さらに本発明の別の態様は、抗原がＴＤまたはＴＩ−２抗原のどちらであるかを決定する方法である。これは、インビボにおける該抗原に対する体液性免疫応答がｇｐ３９アンタゴニストの投与によって阻害されるかどうかによって決定できる。図面の簡単な説明図１Ａは、インビボにおける抗ｇｐ３９処置による一次抗ＳＲＢＣＩｇＭ抗体産生の抑制を表す棒グラフである。図１Ｂは、インビボにおける短期間の抗ｇｐ３９処置後の一次抗ＳＲＢＣＩｇＭ抗体産生の持続性の抑制を表すグラフである。図２Ａは、インビボにおける抗ｇｐ３９処置による二次抗ＫＬＨ抗体産生（各種イソタイプ）の抑制を表す棒グラフである。抗体力価は抗原投与の７日後に測定した。図２Ｂは、インビボにおける抗ｇｐ３９処置による二次抗ＫＬＨ抗体産生（各種イソタイプ）の抑制を表す棒グラフである。抗体力価は抗原チャレンジの１４日後に測定した。図３は、インビボにおける抗ｇｐ３９処置による一次抗ＣｈｉＬ６ＩｇＭ抗体産生（左）および二次抗ＣｈｉＬ６ＩｇＧ１抗体産生（右）の抑制を表す２つの棒グラフである。図４Ａは、ＴＮＰ−ＳＲＢＣでの免疫感作およびインビボにおける抗ｇｐ３９処置による一次抗ＴＮＰＩｇＭ抗体産生の抑制を表す棒グラフである。図４Ｂは、ＴＮＰ−Ｆicollでの免疫感作およびインビボにおける抗ｇｐ３９処置による一次抗ＴＮＰＩｇＭ抗体産生の抑制を表す棒グラフである。図５は、非処置マウスに対して養子移入を行う際に、前以てインビボ抗ｇｐ３９処置に付したＴ細胞の無傷のヘルパー活性を表す棒グラフであり、抗ｇｐ３９投与がＴｈ細胞の機能を消滅させないことを示している図６Ａは、インビボ投与の７、１４および２１日後の血清中に存在する抗ｇｐ３９抗体を表すウエスタンブロットである。図６Ｂは、インビボ投与の７、１４および２１日後の血清中の残存抗ｇｐ３９活性のパーセントを表すグラフである。図７Ａ、７Ｂおよび７Ｃは、ＣＤ４０Ｉｇ（パネルＡ）、ｍＡｂ４Ｄ９−８（パネルＢ）またはｍＡｂ４Ｄ９−９（パネルＣ）のいずれかによる６時間活性化ヒト末梢血リンパ球の染色を示すフローサイトメトリープロフィールである。図８Ａ、８Ｂおよび８Ｃは、ｍＡｂ４Ｄ９−８（パネルＡ）、ｍＡｂ４Ｄ９− ９（パネルＢ）またはＣＤ４０Ｉｇ（パネルＣ）のいずれかで染色し、シクロスポリンＡの存在下で培養した６時間活性化ヒト末梢血リンパ球の染色を示すフローサイトメトリープロフィールである。図９Ａおよび９Ｂは、非標識ｍＡｂ４Ｄ９−８（パネルＡ）または非標識ｍＡｂ４Ｄ９−９（パネルＢ）の存在下、ＣＤ４０Ｉｇによる６時間活性化ヒト末梢血リンパ球の染色を示すフローサイトメトリープロフィールである。図１０は、細胞を抗ヒトｇｐ３９ｍＡｂ４Ｄ９−８、４Ｄ９−９、２４−３１、２４−４３、８９−７６または８９−７９の存在下で培養した場合の、可溶性ｇｐ３９およびＩＬ−４によって誘導されたヒトＢ細胞増殖の抑制を示すグラフである。図１１は、細胞を抗ヒトｇｐ３９ｍＡｂ２４−３１または８９−７９の存在下で培養した場合の、アロ特異的混合リンパ球応答の抑制を示すグラフである。発明の詳細な記載胸腺依存性（ＴＤ）抗原に対する体液性免疫の生成には、抗原に対する特異的抗体を産生しうるＢリンパ球だけでなく、Ｂリンパ球の活性化に必要なＴｈ細胞からの寄与も要求される。Ｂ細胞の活性化のためのＴｈ細胞の必要性は、外来性のサイトカインをＢ細胞に供しても取り去ることはできない。むしろ、Ｂ細胞とＴｈ細胞間の接触依存性で、細胞膜媒介性の相互作用は、体液性応答を誘発するために絶対必要なものである。この相互作用に関与する受容体−リガンドの対、ＣＤ４０およびｇｐ３９が同定されている。ＣＤ４０はＢ細胞上に存在し、ｇｐ３９に結合する能力を持っており、ｇｐ３９は活性化したＴｈ細胞上に誘発されてＢ細胞を刺激し、最終的に特異的抗体が産生される。ＣＤ４０−ｇｐ３９相互作用を分断することが、特異的体液性免疫応答の生成を妨害する手段として提供される。このように、本発明は、インビボにおいてＴＤ抗原に対する体液性免疫応答を阻害する方法を提供する。体液性免疫応答は、接触依存性ヘルパーエフェクター機能を媒介するＴｈ細胞上の分子とＢリンパ球の表面上のそのリガンドとの相互作用を妨害することによって阻害される。好ましい具体例においては、インビボにて被験者にｇｐ３９アンタゴニストを投与しながらＢ細胞をＴＤ抗原に接触させてＴ細胞上のｇｐ３９とＢ細胞上のＣＤ４０との相互作用を妨害することによって体液性免疫応答を阻害する。ひとつの具体例においては、インビボにてｇｐ３９アンタゴニストとともにＴＤ抗原を投与することによってＢ細胞をＴＤ抗原に接触させる。好ましくは、このＴＤ抗原は治療剤（治療用抗体または薬物など）であり、この抗原を治療処置のために患者に投与し、これに対する体液性免疫応答を阻害することによって、該薬剤の治療上の効能を持続性にすることができる。他の具体例においては、該ＴＤ抗原は、被験者が環境的に接触する抗原（たとえばアレルゲンなど）であり、この場合、体液性免疫応答は被験者にとって有害である（アレルギー反応が引き起こされるなど）。この状況においては、体液性免疫応答を抑制することは、被験者にとって治療的に有益なことである。Ｉ．ｇｐ３９アンタゴニスト：本発明の方法によれば、ｇｐ３９アンタゴニストを被験者に投与して、Ｔ細胞上のｇｐ３９とＢ細胞上のｇｐ３９リガンドとの相互作用を妨害する。ｇｐ３９アンタゴニストとは、この相互作用を妨害する分子として定義される。ｇｐ３９アンタゴニストは、ｇｐ３９に対して向けられた抗体（たとえば、ｇｐ３９に対するモノクローナル抗体）、ｇｐ３９に対して向けられた抗体のフラグメントまたは誘導体（たとえば、ＦａｂまたはＦ(ａｂ')２フラグメント、キメラ抗体またはヒト型抗体）、可溶性形態のｇｐ３９リガンド（たとえば、可溶性ＣＤ４０）、可溶性形態のｇｐ３９リガンドの融合タンパク質（たとえば、可溶性ＣＤ４０Ｉｇ）、またはｇｐ３９−ＣＤ４０相互作用を破壊または妨害する薬剤であってよい。Ａ．抗体哺乳動物（たとえば、マウス、ハムスター、またはウサギ）は、該哺乳動物において抗体応答を引き起こす免疫原の形態のｇｐ３９タンパク質またはタンパク質断片（たとえば、ペプチド断片）で免疫することができる。その表面にｇｐ３９を発現する細胞もまた免疫原として用いることができる。他の免疫原としては、精製したｇｐ３９タンパク質またはタンパク質断片が挙げられる。ｇｐ３９の精製は、標準精製法によりｇｐ３９発現細胞から行うことができる。ｇｐ３９ｃＤＮＡ（アーミテージら、Ｎature、３５７：８０〜８２（１９９２）；レーダーマンら、Ｊ.Ｅxp.Ｍed.、１７５：１０９１〜１１０１（１９９２）；ホーレンバーフら、ＥＭＢＯＪ.、１１：４３１３〜４３１９（１９９２））を宿主細胞、たとえば細菌または哺乳動物細胞株中で発現させ、ｇｐ３９タンパク質を精製することができる。ｇｐ３９ペプチドは、ｇｐ３９のアミノ酸配列（アーミテージら、Ｎature、３５７：８０〜８２（１９９２）；レーダーマンら、Ｊ.Ｅxp .Ｍed.、１７５：１０９１〜１１０１（１９９２）；ホーレンバーフら、ＥＭＢＯＪ.、１１：４３１３〜４３１９（１９９２）に開示）に基づき、合成することができる。タンパク質に免疫原性を付与する技術としては、担体への結合、または当該技術分野でよく知られた他の方法が挙げられる。たとえば、タンパク質をアジュバントの存在下で投与することができる。免疫の進行は、血漿または血清中の抗体力価の検出によりモニターすることができる。抗体レベルを評価するため、抗原として免疫原を用いた標準ＥＬＩＳＡまたは他のイムノアッセイを用いることができる。免疫後、抗血清を得ることができ、所望ならポリクローナル抗体を該血清から単離することができる。モノクローナル抗体を産生するには、抗体産生細胞（リンパ球）を免疫動物から回収し、標準体細胞融合法によりミエローマ細胞と融合させてこれら細胞を不死化し、ハイブリドーマ細胞を得る。かかる技術は当該技術分野においてよく知られている。たとえば、コーラーおよびミルシュテインにより最初に開発されたハイブリドーマ法（Ｎature（１９７５）２５６：４９５〜４９７）、並びにヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（コズバー（Ｋozbar）ら、Ｉm munol.Ｔoday（１９８３）４：７２）、ヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶ−ハイブリドーマ法（コール（Ｃole）ら、Ｍonoclonal Ａntibodies i n Ｃancer Ｔherapy（１９８５）（アレン・アール・ブリス、７７〜９６頁））、および結合（combinatorial）抗体ライブラリーのスクリーニング（ヒューズ（Ｈuse）ら、Ｓcience（１９８９）２４６：１２７５）などの他の方法。該タンパク質またはペプチドに特異的に反応する抗体の産生についてハイブリドーマ細胞を免疫化学的にスクリーニングし、モノクローナル抗体を単離することができる。本明細書において用いる抗体なる語は、ｇｐ３９タンパク質またはそのペプチドまたはｇｐ３９融合タンパク質と特異的に反応するフラグメントをも包含する。抗体は常法によりフラグメントとすることができ、全抗体について記載したのと同様にしてフラグメントを有用性についてスクリーニングすることができる。たとえば、Ｆ(ａｂ')₂フラグメントは抗体をペプシンで処理することにより生成させることができる。得られたＦ(ａｂ')₂フラグメントは、ジスルフィド架橋を還元すべく処理してＦａｂ'フラグメントとすることができる。本発明の抗体はさらに、抗ｇｐ３９部分を有する２特異的分子およびキメラ分子を包含する。非ヒト被験者において産生された抗体をヒトの治療に用いる場合には、これら抗体は種々の程度で外来のものとして認識され、該患者において免疫応答が生じるかもしれない。この問題を最小限に抑えまたは排除する（一般的な免疫抑制に好ましい）一つの方法は、キメラ抗体誘導体、すなわち非ヒト動物の可変領域とヒトの定常領域とを組み合わせた抗体分子を作製することである。キメラ抗体分子としては、たとえば、マウス、ラットまたは他の種からの抗体の抗原結合ドメインをヒト定常領域と組み合わせたものが挙げられる。種々のキメラ抗体の作製法が記載されており、ｇｐ３９を認識する免疫グロブリン可変領域を含むキメラ抗体を作製するのに用いることができる。たとえば、モリソン（Ｍorrison）ら、Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ８１：６８５１（１９８５）；タケダ（Ｔak eda）ら、Ｎature ３１４：４５２（１９８５）、カビリー（Ｃabilly）ら、米国特許第４,８１６,５６７号；ボス（Ｂoss）ら、米国特許第４,８１６,３９７号；タナグチ（Ｔanaguchi）ら、ヨーロッパ特許出願公開ＥＰ１７１４９６号；ヨーロッパ特許出願公開第０１７３４９４号、英国特許第ＧＢ２１７７０９６Ｂ号を参照。かかるキメラ抗体は、対応する非キメラ抗体に比べてヒト被験者にける免疫原性が小さいことが期待される。ヒトの治療目的に用いる場合、可変領域の一部、とりわけ抗原結合ドメインの保存されたフレームワーク領域をヒト由来のものとし、超可変領域のみを非ヒト由来のものとしたヒト定常部キメラを作成することによって、ｇｐ３９タンパク質またはペプチドに特異的に反応するモノクローナル抗体またはキメラ抗体をさらにヒト型することができる。かかる改変免疫グロブリン分子は当該技術分野で知られた幾つかの技術（たとえば、テングら、Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ、８０：７３０８〜７３１２（１９８３）；コズバーら、Ｉmmunology Ｔoday、４：７２７９（１９８３）；オルソンら、Ｍeth.Ｅnzymol.、９２：３〜１６（１９８２））のいずれによっても作製することができ、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０６１９３号またはＥＰ０２３９４００号の教示に従って作成するのが好ましい。ヒト型抗体は、たとえば、スコットジェン・リミテッド、グレートブリテン、ミドルセックス、トゥイッケナム、ホリー・ロード２番によって商業的に製造することができる。ｇｐ３９タンパク質またはペプチドに対して特異的に反応する特異的抗体、または抗体フラグメントの他の作製方法は、細菌中に発現された免疫グロブリン遺伝子またはその一部をコードする発現ライブラリーをｇｐ３９タンパク質またはペプチドでスクリーニングすることである。たとえば、ファージ発現ライブラリーを用い、完全なＦａｂフラグメント、ＶＨ領域およびＦＶ領域を細菌中で発現させることができる。たとえば、ウォードら、Ｎature、３４１：５４４〜５４６：（１９８９）；ヒューズら、Ｓcience、２４６：１２７５〜１２８１（１９８９）；およびマクファーティら、Ｎature、３４８：５５２〜５５４（１９９０）を参照。かかるライブラリーを、たとえばｇｐ３９ペプチドを用いてスクリーニングすることにより、ｇｐ３９に反応性の免疫グロブリンフラグメントを同定することができる。別法として、ＳＣＩＤ−ｈｕマウス（ジェンファームより入手可能）を用いて抗体またはそのフラグメントを作製することができる。Ｂ．ｇｐ３９の可溶性リガンド体液性免疫を抑制するために投与しうる他のｇｐ３９アンタゴニストは、可溶性形態のｇｐ３９リガンドである。可溶性ＣＤ４０などのｇｐ３９の１価可溶性リガンドはｇｐ３９に結合することができ、それによってｇｐ３９とＢ細胞上のＣＤ４０との相互作用を抑制する。「可溶性」なる語は、リガンドが細胞膜に永久的に結合していないことを示す。可溶性ｇｐ３９リガンドは、化学合成によって、または好ましくは組換えＤＮＡ法によって作製することができる。好ましい可溶性ｇｐ３９リガンドは可溶性ＣＤ４０である。別の態様として、可溶性ｇｐ３９リガンドはまた融合タンパク質の形態であってもよい。かかる融合タンパク質は、第二の分子に結合した少なくとも一部のｇｐ３９リガンドを含む。たとえば、ＣＤ４０は免疫グロブリンとの融合タンパク質（すなわち、ＣＤ４０Ｉｇ融合タンパク質）として発現させることができる。一つの態様において、Ｃγ１のヒンジ領域、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域に対応する配列のアミノ酸残基に結合したＣＤ４０分子の細胞外ドメイン部分のアミノ酸残基からなる融合タンパク質を作製してＣＤ４０Ｉｇ融合タンパク質を生成する（たとえば、リンスレイら（１９９１）Ｊ.Ｅxp.Ｍed.１７８３：７２１〜７３０；カポンら（１９８９）Ｎa ture ３３７、５２５〜５３１；およびカポン米国特許第５,１１６,９６４号を参照）。融合タンパク質は、化学合成によって、または好ましくはＣＤ４０のｃＤＮＡに基づいて組換えＤＮＡ法によって作製することができる（スタメンコビッチら、ＥＭＢＯＪ.、８：１４０３〜１４１０（１９８９））。ＩＩ．体液性免疫が抑制される抗原本発明は、Ｔｈ細胞によってもたらされる接触依存性ヘルパー機能を必要とする、抗原に対する体液性免疫に関する。胸腺依存性（ＴＤ）抗原と称されるクラスの抗原が本発明に包含される。Ｔｈ細胞からの接触依存性“ヘルプ”が必要となるのは、Ｔ細胞上のｇｐ３９とＢ細胞上のＣＤ４０間の相互作用における必要性に由来する。本発明で用いる定義において、語句“ＴＤ抗原”とは、抗原に対する体液性免疫応答を誘発するために、Ｔ細胞とＢ細胞の間のｇｐ３９−ＣＤ４０相互作用を必要とする抗原を意味する。本発明に包含されるＴＤ抗原の他の形体は、タンパク質に結合したハプテンと称される分子である。この場合、タンパク質は、ハプテンに対する体液性免疫応答を誘発するためにＴ細胞のヘルプを誘発するための担体として働く。本発明においては、ＴＤ抗原を可溶性形態で被験者に投与することができる（可溶性タンパク質の注射など）。あるいはＴＤ抗原は、細胞表面タンパク質などの細胞の表面上に存在するものであってもよい。該ＴＤ抗原を、ｇｐ３９アンタゴニストとともに被験者に投与することができ、あるいは被験者をＴＤ抗原に環境的に接触させてもよい（アレルゲンなど）。好ましい具体例において、ＴＤ抗原は、治療の目的で被験者に投与された薬剤である。この薬剤はたとえば、治療用抗体またはＴＤ抗原である他の形態の治療剤であってよい。被験者中のたとえば治療用抗体のクリアランスを妨害することによって、該治療用抗体に対する体液性免疫応答をインビボにおいて阻害する効能を持続性にすることができる。治療剤として働く小さい分子（ハプテンとして機能する）は、Ｂ細胞を活性化するＴ細胞ヘルパー機能を誘発するタンパク質または他の担体とともに投与されるならば、これらの分子もまた体液性免疫応答を抑制する対象となる標的抗原になりうる；これらの治療剤に対する体液性免疫の抑制もまた同様に、その効能を持続性にすることができる。本発明は、胸腺非依存性ＩＩ型（ＴＩ−２）抗原に対する応答性に影響を与えることなくＴＤ抗原に対する体液性免疫応答を抑制する方法を提供する。ＴＩ− ２抗原には、ポリクローナル手法でＢ細胞を非特異的に活性化する多糖および脂質が包含される。本発明で用いる定義において、語句“ＴＩ−２抗原”とは、抗原に対する体液性免疫応答を誘発するためにＴ細胞とＢ細胞の間のｇｐ３９−ＣＤ４０相互作用を必要としないすべての抗原を意味する。本発明は、抗原に対する体液性免疫応答がｇｐ３９アンタゴニストによって阻害されるかどうかを測定することによって、抗原が本発明の定義におけるＴＤ抗原であるかＴＩ−２抗原であるかを同定する方法を提供する。 III．体液性免疫の抑制本発明は、ＴＤ抗原に対する体液性免疫応答を阻害する方法に関する。体液性免疫応答は、ＴＤ抗原に対して最初の接触である場合には一次体液性免疫応答であり、あるいは該抗原に対する再接触である場合には二次体液性免疫応答である。１種または２種以上のイソタイプ抗体の産生を阻害することができる。一次体液性免疫応答の場合、優先的に産生される抗体はＩｇＭであり、ＩｇＭの産生が優占的に抑制される。二次体液性免疫応答の場合、ＩｇＭ、ＩｇＧおよびＩｇＥなどの数種のイソタイプの抗体の産生が抑制される。本発明は、ＴＤ抗原に対する体液性免疫の持続性抑制方法を提供する。ここで用いる“持続性”とは、ＴＤ抗原に対する抗体の産生の抑制が、インビボにおけるｇｐ３９アンタゴニストの投与が終了した後も持続することを意味する。ＩＶ．ｇｐ３９アンタゴニストの投与本発明方法にしたがって、ＴＤ抗原に接触させた被験者にｇｐ３９アンタゴニストを投与することにより、ＴＤ抗原に対する体液性免疫応答を阻害することができる。ひとつの具体例において、ＴＤ抗原とともにｇｐ３９アンタゴニストを投与する。ｇｐ３９アンタゴニストはＴＤ抗原と同時に投与されるのが好ましいが、ＴＤ抗原がＢ細胞の活性化を誘発する前にｇｐ３９アンタゴニストが投与される限りは、ＴＤ抗原を投与する前またはＴＤ抗原の投与後に投与されてもよい。その他の具体例においては、被験者を環境的に抗原に接触させる。この場合、抗原に接触させた後、Ｂ細胞の活性化を予防するに十分なだけすばやく、ｇｐ３９アンタゴニストがインビボ投与されるべきである。本発明のアンタゴニストは、体液性免疫を抑制するため、インビボの医薬投与に適した生物学的に両立しうる形態にて被験者に投与する。「インビボの医薬投与に適した生物学的に両立しうる形態」とは、該タンパク質の治療効果が毒性作用より重視されるように投与されるアンタゴニストの形態をいう。被験者なる語は、免疫応答を引き起こしうる生物、たとえば哺乳動物を包含する。被験者の例としては、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、およびこれらのトランスジェニック種が挙げられる。ｇｐ３９とＣＤ４０との相互作用を妨害するアンタゴニストの投与は、任意に医薬的に許容しうる担体中にて薬理学的形態で行うことができる。治療学的に活性な量の本発明の治療用組成物の投与とは、所望の結果を達成するのに必要な投与量および時間にて有効な量と定義される。たとえば、ｇｐ３９とＣＤ４０の相互作用を妨害するアンタゴニストの治療学的に活性な量は、個体の疾患状態、年齢、性および体重、および該アンタゴニストが該個体において所望の応答を引き起こす能力に従って変わってよい。投与計画は最適の治療応答をもたらすように調節する。たとえば、幾つかの分割投与量を毎日投与することができるし、または治療状況の緊急性によって示されるように比例して投与量を減らしていくこともできる。活性化合物（たとえば、アンタゴニスト）の投与は、注射（皮下、静脈内など）、経口投与、吸入、経皮投与、または直腸投与などの常法により行うことができる。投与経路に応じて、活性化合物を不活化する酵素、酸または他の天然の条件から該化合物を保護するために該化合物を物質中にコーティングすることができる。非経口以外の投与によりｇｐ３９とＣＤ４０の相互作用を妨害するアンタゴニストを投与するには、不活化を防ぐ物質で該アンタゴニストをコーティングするかまたは該物質と該アンタゴニストとを同時に投与する必要がある。たとえば、アンタゴニストは、適当な担体または希釈剤中にて、または酵素阻害剤とともにまたはリポソームなどの適当な担体中にて一緒に投与することができる。薬理学的に許容しうる希釈剤としては、食塩および水性緩衝液が挙げられる。酵素阻害剤としては、膵臓トリプシンインヒビター、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＥＰ）およびトラシロール（trasylol）が挙げられる。リポソームとしては、水中油中水懸濁液並びに通常のリポソーム（ストレジャン（Ｓtrejan）ら（１９８４）Ｊ.Ｎeuroimmunol ７：２７）が挙げられる。活性化合物はまた、非経口または腹腔内投与することもできる。グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれら混合物中、および油中で分散液を調製することもできる。通常の貯蔵および使用条件では、これら調製物には微生物の増殖を防ぐための保存剤が含まれる。注射用途に適した医薬組成物としては、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液および滅菌注射用溶液または分散液を即座に調製するための滅菌粉末が挙げられる。いずれの場合においても組成物は滅菌されていなければならず、容易な注射器操作が可能な程度に流体でなければならない。該組成物は製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、細菌や真菌などの混入微生物の作用から保護されていなければならない。担体は、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびこれらの適当な混合物を含む溶媒であるかまたは分散媒体であってよい。適当な流動性は、たとえば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散液の場合は必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持することができる。微生物の作用からの保護は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、たとえばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより行うことができる。多くの場合、等張剤、たとえば糖、ポリアルコール、たとえばマンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウムなどが組成物中に含まれているのが好ましいであろう。注射用組成物の持続吸収は、吸収を遅らせる薬剤、たとえばモノステアリン酸アルミニウムやゼラチンなどを組成物中に配合することにより行うことができる。滅菌注射用溶液の調製は、必要なら上記成分の１またはその組み合わせとともに所要量の活性化合物（たとえば、ｇｐ３９とＣＤ４０の相互作用を妨害するアンタゴニスト）を適当な溶媒中に配合し、ついで滅菌濾過することにより行うことができる。一般に分散液の調製は、基本的な分散媒体と上記から選ばれた必要な他の成分を含む滅菌ビヒクル中に活性化合物を配合することにより行う。滅菌注射溶液の調製のための滅菌粉末の場合は、好ましい調製法は真空乾燥および凍結乾燥であり、これにより活性成分（たとえば、アンタゴニスト）と前以て滅菌濾過した溶液からの所望の追加成分との粉末が得られる。上記のように活性化合物を適切に保護してある場合は、該タンパク質は、たとえば不活性な希釈剤または同化しうる食用担体とともに経口投与することができる。本明細書において「薬理学的に許容しうる担体」とは、溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などのすべてを包含する。薬理学的に活性な物質のためのかかる媒体および剤の使用は、当該技術分野でよく知られている。通常の媒体または剤が活性化合物と両立しない場合以外は、治療学的組成物中に使用することができる。補助的な活性化合物を該組成物中に配合することもできる。投与の容易および投与量の均一さのため、単位投与剤型で非経口組成物に調合するのが特に有利である。本明細書において単位投与剤型とは、治療すべき哺乳動物被験者に対する単位投与量として適した物理的に区別される単位をいう。各単位には、所要の薬理学的担体と組み合わせて所望の治療効果を奏するように計算された前以て決定された量の活性化合物が含まれる。本発明の単位投与剤型は、（ａ）活性化合物の独特の特性および達成しようとする特定の治療効果、および（ｂ）個体における治療感受性（treatment of sensitivity）のためにかかる活性化合物を調合する際の内在する技術的制約に直接依存して個々に特定される。Ｖ．ｇｐ３９アンタゴニストと他の免疫抑制剤との併用投与Ｔｈ細胞上の協同剌激分子であるＣＤ２８の可溶性ＣＴＬＡ−４がトリガーとなる妨害もまたＴＤ抗体反応を抑制し（３０）、異種移植片における拒絶反応を遮断する（３１）ことが解っている。抗ｇｐ３９投与と同様に、可溶性ＣＤは、持続性免疫抑制状態を誘発する。抗ｇｐ３９およびＣＴＬＡ−４は、体液性免疫応答における別の段階においてそれらの免疫抑制効果を媒介するので、これらの２つの免疫抑制剤の併用投与によって、相加的または相乗的免疫抑制効果が得られる。アレルギー反応はＩｇＥ抗体によって媒介される。ＩｇＥ応答が産生されるには、サイトカインＩＬ−４が必要である。ＴＤ抗原に対するＩｇＥ応答の阻害は、ｇｐ３９アンタゴニストとＩＬ−４の阻害剤（抗ＩＬ−４抗体など）とを併用投与することによって、より効果的に行われる。次に述べる実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれによって限定されるものではない。本明細書に引用されたすべての引例文献および発行された特許出願の内容が、本発明の参考文献である。ランドルフ・ジェイ・ノエルらの名称で同日付で出願された特許出願の内容および“抗原特異的Ｔ細胞寛容の誘発方法”と題する文献も本発明の参考文献である。実施例においては以下の方法を用いた。材料および方法実験動物：この実験におけるインビボ実験用に６〜８週齢の雌のＢalb/cマウス(ジャクソン・ラボラトリーズ，バー・ハーバー，ＭＥ)を用いた。実験動物はダートマス・メディカル・スクールにおいて特別な病原体フリーの動物用施設で飼育された。ヘルパーＴ細胞クローン（Ｔｈ１）：ウスターのユニバーシティ・オブ・マサチューセッツから、Ｄ１.６、すなわちＩ−Ａ^d制限されたウサギＩｇ特異的Ｔｈ１クローン(２１)を入手した。本明細書中では、Ｄ１.６をＴｈ１と表記する。試薬および抗体：ＭＲ１、すなわちハムスター抗マウスｇｐ３９ｍＡｂ（１６）は、腹水をＤＥＡＥＨＰＬＣにて精製して得た。対照抗体として用いたハムスターＩｇ（ＨＩｇ）は、ハムスター血清（アキュレイト・ケミカル・アンド・サイエンティフィック・コーポレイション，ウエストビューティ，ＮＹ）から同様にして得た。ＲＧ７／７.６.ＨＬ、すなわちマウス抗ラットκ鎖（ハムスター κ鎖と強い交差反応性がある）抗体（ＲＧ７と表記）（２２）をＨＲＰＯまたはＦＩＴＣと結合させ、ＭＲ１およびＨＩｇを検出するための第２試薬として用いた。アフィニティー精製ヤギ抗マウスＩｇＭ、ＩｇＧ₁、ＩｇＧ_2a、ＩｇＧ_2bおよびＩｇＧ₃（サザン・バイオテクノドジー，バーミンガム，Ａｌ）を抗原特異的ＥＬＩＳＡおよびＩｇＭおよびＩｇＧ₁合同ＥＬＩＳＡにおいて検出抗体として用いた。Ｂ１Ｅ３、すなわちモノクローナル抗マウスＩｇＥ（ユニバーシティ・オブ・アイオワのＴ．ウォルドシュミット博士から提供を受けた）をＩｇＥ抗ＫＬＨＥＬＩＳＡにおける検出抗体として用いた。キメラ−Ｌ６（Ｃｈｉ−Ｌ６と表記）、すなわち腫瘍抗原Ｌ６に対して特異的なヒト型ＩｇＧ₁（２３）は、ブリストル−マイヤーズ・スクイブ・ファーマシュティカル・リサーチ・インスティチュート，シアトル，ＷＡから提供を受けた。抗ＣＤ４、すなわちＧＫ１.５（２４）は、腹水のＨＰＬＣ精製によって調製した。ヒツジ赤血球細胞（ＳＲＢＣ）は、コロラド・セイラム・コーポレイション（デンバー，ＣＯ）から購入した。抗ＳＲＢＣプラークアッセイ用のシー・プラーク（Ｓea Ｐlaque）寒天は、ＦＭＣ・コーポレイション（ロックランド，ＭＡ）から入手した。乳児ウサギ補体は、セダーレイン（ホーンビイ，オンタリオ，カナダ）から購入した。ＫＬＨ、すなわちキーホールリンペットヘモシアニン（Megathura crenulata由来）は、カルビオケム（ラジョラ，ＣＡ）から購入した。免疫感作用の完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）は、シグマ・ケミカル・コーポレイション（セントルイス，ＭＯ）から入手した。ＴＮＰ−ＳＲＢＣ、ＴＮＰ−ＫＬＨおよびＴＮＰ−ＢＳＡは、文献（２５）の記載に従って調製した。インビボ一次および二次抗体反応の産生のための免疫感作：一次免疫応答：ＳＲＢＣまたはＴＮＰ−ＳＲＢＣに対する一次抗体反応を引き起こすために、マウスを２００μlの１％ＳＲＢＣまたはＴＮＰ−ＳＲＢＣ懸濁液（静脈注射）で免疫感作した。ジャーンのプラークアッセイ（２６）に変更を加え、抗原投与後第５日にＩｇＭの抗ＳＲＢＣ応答をアッセイした。第６日にＥＬＩＳＡを行ってＩｇＭの抗ＴＮＰ応答を測定した。１００μgのＣｈｉ−Ｌ６／ミョウバン／マウスの腹腔内免疫感作によって、異種の免疫グロブリンＣｈｉ−Ｌ６に対する一次応答を産生した。血清ＩｇＭ抗Ｃｈｉ−Ｌ６抗体反応を第７日に測定した。２５μgのＴＮＰ−Ｆicollの腹腔内免疫感作によって、ＴＮＰ −Ｆicollに対する一次免疫応答を産生した。ＩｇＭの抗ＴＮＰ応答をＥＬＩＳＡによって第６日に測定した。二次免疫応答：ＫＬＨに対する二次体液性応答を産生するために、ＫＬＨ／ＣＦＡ（５０μg，腹腔内）で実験動物を免疫感作した。続いて３カ月後に、マウスを１０μgの可溶性ＫＬＨ（腹腔内）にチャレンジさせた。イソタイプ特異的ＥＬＩＳＡを用いて免疫感作マウスの血清中の抗ＫＬＨ抗体反応を第７日に測定した。Ｃｈｉ−Ｌ６免疫感作マウスを１０μgの可溶性Ｃｈｉ−Ｌ６（腹腔内）にチャレンジさせることによって、Ｃｈｉ−Ｌ６に対する二次抗体反応を産生した。血清ＩｇＧ₁抗Ｃｈｉ−L６抗体反応を第７日に測定した。抗ｇ３９処置：各実験において指示した免疫感作またはチャレンジ後第０日、第２日および第４日に、滅菌したＨＰＬＣ精製抗ｇ３９（ＭＲ１）またはＨＩｇ（抗体対照として）を投与した（腹腔内）。抗原特異的ＥＬＩＳＡ：イソタイプ特異的ＥＬＩＳＡを用いて、抗原特異的ＩｇＭ、ＩｇＧ₁、ＩｇＧ_2a、ＩｇＧ_2b、ＩｇＧ₃およびＩｇＥの抗体力価を測定した。要約すると、抗原（ＰＢＳ中の1mg/mlのＫＬＨ、Ｃｈｉ−Ｌ６、ＴＮＰ₁₆− ＢＳＡまたはＴＮＰ₂−ＢＳＡ）をフレキシブルポリビニルマイクロタイター皿の上に４℃で一夜吸着させる。プレートを洗浄し、ＰＢＳ−１％ＦＣＳ−アジ化ナトリウムでブロックする。希釈した血清サンプルを３７℃で２時間インキュベートする。サンプルを洗浄し、次のアルカリホスファターゼ結合検出抗体のひとつを用いて抗原特異的抗体力価を測定する：ヤギ抗マウスＩｇＭ、ＩｇＧ₁、ＩｇＧ_2a、ＩｇＧ_2b、ＩｇＧ₃（サザン・バイオテクノドジー，バーミンガム，Ａｌ）。ビオチン結合Ｂ１Ｅ３、次いでアルカリホスファターゼアビジン（サウス・サンフランシスコ，ＣＡ）を用いて、ＩｇＥ特異的ＥＬＩＳＡを検出した。すべてのＥＬＩＳＡを、アルカリホスファターゼとフォスファターゼ基質（シグマ・ケミカル・コーポレイション，セントルイス，ＭＯ）との反応によって展開した。ダイナテックＭＲ７００ＥＬＩＳＡリーダーを用い、４１０ｎｍにおいてプレートを分析した。単位は、標準免疫血清の滴定曲線に基づく任意値を表す。すべての実験グループを１：１００から１：１０００,０００の範囲で滴定し、多重点分析に基づいて力価を決定した。非チャレンジ対照における抗ＫＬＨ、抗Ｃｈｉ−Ｌ６および抗ＴＮＰ抗体の濃度を下記のようにして検出した。血清抗ｇｐ３９の検出：抗ｇｐ３９処置マウスの血清中の活性化していない抗ｇｐ３９の定量：７５０μgの抗ｇｐ３９を投与された（第０日、第２日および第４日に２５０μgずつ投与）マウスからの血清を、抗ｇｐ３９処置開始後第７日、第１４日および第２１日に採取した。非還元条件下で血清を７.５％ＳＤＳゲルに載せ、ニトロセルロースに転写し、ＨＲＰＯ結合ＲＧ７でブロットした。化学発光検出法を用いて、１５０〜１６５ｋＤａに対応する領域を走査し、アップル・スキャナーおよびイメージ４.１ソフトウェアプログラムを用いて計数化した。処置マウスの血清中の生物学的に活性な抗ｇｐ３９の分析：抗ＣＤ３活性化Ｔｈ１（ｇｐ３９を示す）を、７５０μgの抗ｇｐ３９投与マウス（第０日、第２日および第４日に２５０μgずつ投与）からの血清の希釈物で固定し、血清中に残る生物学的に活性なｇｐ３９を定量した。抗ｇｐ３９含有血清の滴定物をＴｈ１細胞クローンとともに４℃で３０分間インキュベートし、次いで洗浄し、続いてＦＩＴＣ−ＲＧ７とともに４℃で３０分間インキュベートした。精製抗ｇｐ３９を用いてＭＦＩに対する抗ｇｐ３９濃度の標準曲線を作成した。ベクトン・ディッキンソン・ＦＡＣスキャンでサンプルを分析し、標準曲線に基づいて血清中に残る抗ｇｐ３９のパーセントを求めた。第７日の抗ｇｐ３９の濃度パーセントを１００％と設定した。ヘルパーＴ細胞の養子移入：ＳＲＢＣ（２００μlの１％ＳＲＢＣ，静脈内）でマウスを免疫感作し、抗ｇｐ３９またはＨＩｇを投与した（第０日、第２日および第４日に２５０μgずつ投与）。第７日に非免疫感作あるいはＳＲＢＣ免疫感作マウスから脾細胞を取り出し、赤血球を除去し、洗浄し、免疫感作Ｂ細胞源としてＴＮＰ−ＫＬＨ感作（ＴＮＰ−ＫＬＨ−ＣＦＡ，５０μg，腹腔内）マウスの脾臓細胞５×１０⁶個を加えて、あるいは加えずに、照射宿主（６００ラド）に移入した（静脈内、５０×１０⁶個／マウス）。移入時に、マウスをＴＮＰ −ＳＲＢＣ（２００μlの１％ＴＮＰ−ＳＲＢＣ，静脈内）で免疫感作した。移入後第７日に血清ＩｇＧ₁抗ＴＮＰ力価を決定した。実施例１抗ｇｐ３９は赤血球抗原に対する一次抗体反応の産生を阻害するＨＩＭ患者において観察されたＴＤ免疫の減少、ならびに抗ｇｐ３９の潜在的阻害効果およびＴｈ依存性Ｂ細胞上のＣＤ４０−Ｉｇのインビトロ活性化が、インビボにおける体液媒介免疫に対する抗ｇｐ３９の潜在的免疫抑制効果の実験のための基準となった。一次ＴＤ体液性免疫応答におけるｇｐ３９−ＣＤ４０相互作用の役割を研究するために、ヒツジ赤血球細胞（ＳＲＢＣ）に抗ｇｐ３９を投与して、一次抗体反応における抗ｇｐ３９のインビボ投与の効果を測定した。実験動物をＳＲＢＣで免疫感作し、抗ｇｐ３９ｍＡｂ（または対照ＨＩｇ）を４日間投与した。第５日に、抗ｇｐ３９処置、ＨＩｇ処置をしたマウスおよび対照マウスの一次抗ＳＲＢＣ抗体反応を決定した。合計１.５ｍｇの抗ｇｐ３９を投与した（５００μg／マウスを第０日、第２日および第４日に投与）マウスのＩｇＭ抗ＳＲＢＣプラーク産生細胞（ＰＦＣ）応答は、対照またはＨＩｇ処置したマウスの抗ＳＲＢＣＰＦＣ応答と比べて９９％減少した（図１Ａ）。さらに、抗ｇｐ３９が、３００μg／マウス程度の投与（１００μg／マウスを第０日、第２日および第４日に投与）であっても抗ＳＲＢＣ−次免疫応答は６６％まで減少した。これらの実験結果から、ｇｐ３９処置がインビボにおける一次抗体反応を取り除くことが示される。続いて、ＳＲＢＣに対する一次体液性免疫応答における抗ｇｐ３９の免疫抑制効果の期間を測定した。ＳＲＢＣで免疫感作したマウスを抗ｇｐ３９で４日間処理し、処置後の種々の時点で一次抗ＳＲＢＣ応答を起こす能力をアッセイした。この実験においては、第０日にすべての実験動物をＳＲＢＣで免疫感作し、第０日、第２日および第４日に抗ｇｐ３９またはＨＩｇを投与した。さらなるＳＲＢＣ免疫感作グループを第７日または第１４日にＳＲＢＣにチャレンジさせた。各抗原チャレンジ後第５日（それぞれ第１２日および第１９日）に、ＩｇＭ抗ＳＲＢＣ応答を測定した。このような実験の結果を図１Ｂに示した。図１Ａに示されるように、一次抗ＳＲＢＣ応答は、抗ｇｐ３９投与開始後第５日で８０〜９０％阻害された。さらに、抗ｇｐ３９処置後第１２日および第１９日の一次抗ＳＲＢＣ応答もまた９０％以上阻害された。これらの結果から、短期間の抗ｇｐ３９処置によって一次抗体反応が持続的に阻害されることが示される。実施例２抗ｇｐ３９は二次ＫＬＨ抗体反応の産生を阻害する一次抗体反応を審査する実験は、一次体液性免疫の開始において、ｇｐ３９− ＣＤ４０相互作用が重大な役割を演じることを示唆している。しかし、これらの実験からは、ｇｐ３９依存性ＣＤ４０シグナリングにおいて二次抗体反応の発生が必要であるどうかについては明らかにはならない。したがって、可溶性ＫＬＨへのチャレンジに対する二次免疫応答における抗ｇｐ３９投与の効果をＫＬＨ免疫マウスにて測定した。一次抗ＳＲＢＣＰＦＣ応答を減少する抗ｇｐ３９投与スケジュールを用い、二次抗体反応における抗ｇｐ３９処置の効果を評価するための実験を設計した。これらの実験において、ＫＬＨ免疫マウス（ＣＦＡおよびＫＬＨ処置の３カ月前に免疫感作）を可溶性ＫＬＨにチャレンジさせた（１０μg／マウス／静脈内）。抗原チャレンジ当日（第０日）に、マウスに２５０μgの抗ｇｐ３９またはＨＩｇも与え、続いて第２日および第４日に抗ｇｐ３９またはＨＩｇを与えた。ＫＬＨチャレンジから第７日（図２Ａ）および第１４日（図２Ｂ）に、マウスから採血してＩｇＭ、ＩｇＧ₁、ＩｇＧ_2a、ＩｇＧ_2b、ＩｇＧ₃およびＩｇＥ抗ＫＬＨ抗体の力価を測定した。その結果から幾つかの点が実証される：１）可溶性ＫＬＨへのチャレンジは、１４日まで持続する持続性の二次免疫応答を誘発した；２）抗ｇｐ３９の投与は、等量のＨＩｇの投与と比較した場合、測定されたイソタイプの二次抗ＫＬＨ応答を有意に減少した；３）抗ｇｐ３９の免疫抑制効果は、抗ｇｐ３９処置の開始後少なくとも１４日間持続すると思われた。まとめて言えば、これらの実験の結果から、一次体液性免疫応答と同様に、抗ｇｐ３９によって二次体液性免疫の産生も遮断されることが証明される。実施例３抗ｇｐ３９は異種Ｉｇに対する抗体反応の産生を阻害する図１に示した実験は、免疫原性の強い抗原ＳＲＢＣに対する一次応答中の抗ｇｐ３９の免疫抑制活性を証明している。赤血球に独特である強い免疫応答誘発能力は、赤血球の細胞的性質によるものである。異種Ｉｇ分子は、免疫原性が高いというこの特性を分け持っており、したがって、一次および二次抗体反応の産生における抗ｇｐ３９処置の効果を審査するためのモデル抗原系がさらに提供される。異種Ｉｇ分子Ｃｈｉ−Ｌ６（ヒト型マウス抗腫瘍細胞ｍＡｂ）で実験動物を免疫感作し、抗ｇｐ３９または対照ＨＩｇで処置をした。７日後、血清を採取し、ＩｇＭ抗Ｃｈｉ−Ｌ６抗体の産生に対するアッセイを行った。最初の免疫感作および抗ｇｐ３９処置から１４日後、マウスをさらにＣｈｉ−Ｌ６にチャレンジさせ、第２１日におけるＩｇＧ₁抗Ｃｈｉ−Ｌ６抗体の産生に対するアッセイを行った。図３は、このような実験のひとつの結果を描いたものである。抗ｇｐ３９処置マウスにおけるＣｈｉ−Ｌ６に対する一次抗体反応は、ＨＩｇ処置マウスと比較した場合、９０％以上阻害される。さらにその上、Ｃｈｉ−Ｌ６に対する二次ＩｇＧ₁応答が同様に阻害される。これらの結果から、抗ｇｐ３９処置によって、２番目のタイプのＴＤ抗原、すなわち異種Ｉｇに対する一次および二次抗体反応も、赤血球および可溶性タンパク質抗原に対する応答が抑制されるのと同じく効果的に抑制されることが実証される。実施例４抗ｇｐ３９はＴ−非依存性ＩＩ型抗原、すなわちＴＮＰ−Ｆicollに対する一次抗体反応の産生を阻害しないこれまでの実験では抗ｇｐ３９がインビボにおいてＴＤ抗原に対する一次および二次抗体反応の産生を効果的に遮断することが実証されているが、ＴＩ抗原に対する体液性応答の開始においてｇｐ３９−ＣＤ４０相互作用がどのような役割を演じているかは明らかになっていない。添付の書類に記載したデータから、ＴＩ−ＩＩ型抗原、すなわちＴＮＰ−Ｆicollによる免疫感作の結果、インビボにおいてＴｈ細胞によってｇｐ３９が発現されることが示される。このＴＩ抗原に対する抗体反応の産生においてｇｐ３９−ＣＤ４０相互作用が必要であるかどうかを提示するために、ＴＮＰ−Ｆicollで免疫感作されたマウスにおける抗ｇｐ３９処置の影響を評価した。ＴＮＰ−ＦicollまたはＴＮＰ−ＳＲＢＣで免疫感作したマウスを抗ｇｐ３９またはＨＩｇで処置し、６日後にＩｇＭ抗ＴＮＰ抗体反応を測定した。図４Ａは、Ｔ抗原ＴＮＰ−ＳＲＢＣで免疫感作した実験動物が、有意の抗ＴＮＰ血清抗体反応を引き起こすことを示す。これまでの実験から予測されるように、抗ｇｐ３９処置はこれらのマウスに産生された一次抗ＴＮＰ反応を劇的に阻害する。反対に、ＴＮＰ−Ｆicollで免疫感作したマウスの抗ＴＮＰ抗体反応の力価は高い（図４Ｂ）；しかし、抗ｇｐ３９処置はＴＮＰ−Ｆicoll に対する抗体反応を阻害しない。これらの実験結果は、ＴＤ抗原に対する応答とは異なって、抗ｇｐ３９はＴＮＰ−Ｆicollに対する体液性応答の産生を遮断しないことを実証し、ＴＩ抗原に対する応答がｇｐ３９非依存性であることを示唆している。実施例５抗ｇｐ３９投与はＳＲＢＣ特異的Ｔｈを機能的には消去しないこれまでの実験から、抗ｇｐ３９がＴＤ体液性免疫の展開を妨害することがわかっている；しかし、抗ｇｐ３９処置が体液性応答を抑制するメカニズムは明らかではない。抗ｇｐ３９による免疫抑制は、１）ｇｐ３９産生Ｔ細胞の負シグナリングがＴｈアネルギーを引き起こすこと；２）ｍＡｂが媒介する抗ｇｐ３９の細胞毒性消去がＣＤ４⁺Ｔ細胞を産生すること；および／または３）ｇｐ３９の遮断物がＣＤ４０に結合することよって媒介される。これらのメカニズムのうちどれが、抗ｇｐ３９療法において観察された遅延型免疫抑制においてオペレーターとなりうるのかという洞察を得るために一連の実験を行った。抗ｇｐ３９療法によって抗原特異的Ｔｈが消去あるいはアネルギー化される可能性を調査するために、ｇｐ３９処置マウスからの抗原特異的Ｔｈ機能を養子移入によって測定した。簡単にいうと、マウスをＳＲＢＣで免疫感作し（ＳＲＢＣ特異的Ｔｈを感作するために）、次いで抗ｇｐ３９またはＨＩｇを投与した（マウス一匹当たり、第０日、第２日および第４日に２５０μgずつ投与）。第７日に非免疫感作マウスからの脾細胞あるいはＨＩｇ処置または抗ｇｐ３９処置マウスからのＳＲＢＣ免疫感作脾細胞を、ＴＮＰ感作Ｂ細胞源としてＴＮＰ−免疫感作脾細胞とともに宿主マウスに養子移入した。同時に、マウスをＴＮＰ−ＳＲＢＣにチャレンジさせ、ＩｇＧ₁抗ＴＮＰ力価を第５日に決定した。非免疫感作ドナーからの脾細胞を受容した宿主は、ＳＲＢＣ感作実験動物からの脾細胞を受容したマウスと比較した場合、実質的に低いＩｇＧ₁抗ＴＮＰを産生したという事実から示されるように、ＳＲＢＣ感作Ｔヘルパー細胞は、宿主マウスにおいて二次抗ＴＮＰ反応が誘発されることを必要とする（図５）。さらに重要なことに、これらの実験結果は、ＨＩｇ処置マウスおよび抗ｇｐ３９処置マウスからのＳＲＢＣヘルパー活性が類似していることを示し、抗ｇｐ３９処置がＴｈ機能を変えたり、Ｔｈの感作を遮断したりしないことを示した。さらにその上、抗原応答性Ｔｈが移入の際にヘルパーエフェクター機能を提供したように、抗ｇｐ３９処置の結果として抗原応答性Ｔｈが消去あるいはアネルギー化されるようなことはなかった。実施例６ハムスター抗ｇｐ３９のインビボにおけるクリアランスこれまでの研究によって、抗ｇｐ３９（ＭＲ１）が、ＣＤ４０に対するｇｐ３９の結合を遮断し（１５）することが確立されており、このことは、抗ｇｐ３９のインビボにおける免疫抑制効果がｇｐ３９−ＣＤ４０相互作用の遮断によるものであるという仮説をサポートしている。この仮説が正しいと仮定すれば、抗ｇｐ３９投与において観察された長期の免疫抑制には、宿主における抗ｇｐ３９の持続性が必要である。免疫抑制が明らかに現れているときに抗ｇｐ３９が検出されるかどうかを測定するために、抗ｇｐ３９の血清からのインビボクリアランス速度を測定した。マウスには４日間の実験期間中を通して抗体を処方し（３×２５０μgの抗ｇｐ３９）、抗体投与開始後第７日、第１４日および第２１日における血清中の抗ｇｐ３９濃度を測定した。変形されなかったＭＲＩに対するウエスタンブロット分析（１６０ｋｄ）は、抗体処置開始後少なくとも２１日間は無傷の血清抗ｇｐ３９を検出しうることを示した（図６Ａ）。抗体療法開始後７日に分析された実験動物の血清からもたらされたシグナルと比較した場合、第２１日における実験動物の抗ｇｐ３９の血清中濃度はおよそ５％であった（走査デンシトメトリーによる）。無傷の抗ｇｐ３９が血清中に存在することは測定されたけれども、抗ｇｐ３９が生物学的に活性であるかどうかを確認することもまた重要でる。したがって、４日間の実験期間中を通して３×２５０μgの抗ｇｐ３９を受容したマウスの血清を、ｇｐ３９産生Ｔｈを染色するために用いた。最後の注射から３日後（抗体処置開始から７日後）の血清抗ｇｐ３９濃度を１００％とした。抗体療法開始後第１４日には、およそ１０〜１５％の生物学的に活性な抗ｇｐ３９ｍＡｂが血清中に検出された。療法開始後第２１日では、２〜３％の抗ｇｐ３９が血清中に残っていた。したがって、ウエスタンブロッティングによる無傷の抗ｇｐ３９の測定および生物学的に活性な抗ｇｐ３９の測定の両方から、抗ｇｐ３９療法開始後２１日目には、およそ５％の抗ｇｐ３９が存在することが示された。これらの結果から、抗ｇｐ３９の半減期が約１２日であることが実証され、抗ｇｐ３９による体液性免疫応答の持続的抑制が、Ｔｈ機能の持続的遮断によるものであるという仮説と一致する証拠が提示される。本発明の研究は、インビトロにおいてｇｐ３９−ＣＤ４０相互作用を遮断する抗ｇｐ３９抗体をインビボ投与することがＴＤ抗原に対する一次および二次体液性免疫応答の両方を大いに阻害し、ＴＩ−ＩＩ型抗原に対する応答は阻害しないことを実証する。さらにこの研究は、抗ｇｐ３９処置が抗原感作Ｔｈ細胞の感作を遮断しないことを実証する。したがって、ｇｐ３９−ＣＤ４０というリガンド −受容体対を、体液性免疫応答を治療する際の標的として用いることができる。抗ｇｐ３９の体液性免疫におけるその免疫抑制効果がどのように作動するかという洞察を得るために、Ｔｈ機能における抗ｇｐ３９の直接的効果を提出した。データは、抗ｇｐ３９処置マウスのＳＲＢＣ免疫感作Ｔｈが、養子移入に際してのヘルプを提供することが完全に可能であったことを示し、抗ｇｐ３９処置がインビボにおいてＴｈの消去やアネルギー化を引き起こさないことを示唆している。これらの結果から、抗ｇｐ３９は、ＣＤ４０へのｇｐ３９の結合を遮断することによってその免疫抑制効果を媒介するのであり、ｇｐ３９産生Ｔｈの不活性化によるものではないという考察が導かれた。この仮説のサポートとして、抗ｇｐ３９がＣＤ４０のｇｐ３９への結合を遮断するというインビトロ研究が行われた（１６）。さらに、免疫抑制が現れている期間中に、生物学的に活性な抗ｇｐ３９を血清中で検出することができた。免疫抑制が明らかであるときに、血清中にはたった５％の抗ｇｐ３９しか存在しないけれども、血清中の抗ｇｐ３９の濃度と比較して、二次リンパ器官の特定の部位における抗ｇｐ３９の局部的組織中濃度は、より高く、そしてクリアランス速度はより低くなることが可能である。抗ｇｐ３９によるマウスの処置は、ＳＲＢＣおよび異種Ｉｇに対する一次免疫応答を９０％以上阻害し、その阻害は持続性であった。ｇｐ３９の機能を遮断することによって抗ｇｐ３９が阻害を媒介していると仮定すると、これらのデータは、ＴＤ抗原に対する一次免疫応答の展開に必須であるｇｐ３９−ＣＤ４０相互作用に関係してくる。免疫組織化学的分析によって、ｇｐ３９がＴＤ抗原による免疫感作の結果として誘発され、機能的に重要であることが確証される。ｇｐ３９発現のインシトゥ研究は、一次体液性免疫応答中のｇｐ３９−ＣＤ４０相互作用の開始部位が細動脈周囲リンパ球組織鞘（ＰＡＬＳ）の末梢部分および末端細動脈（ＴＡ）の周囲にあることを例証している。ｇｐ３９発現Ｔｈと抗原特異的Ｂ細胞間の複合体が並んでいるのが見られたのは、これらの部位においてであり、外層ＰＡＬＳが、一次体液性免疫応答中のＴ細胞−Ｂ細胞相互作用の主要部位であることがが示唆される。したがって、ＰＡＬＳは、抗ｇｐ３９がｇｐ３９発現Ｔｈ細胞と相互作用して最終的にＴ−Ｂ相互作用およびそれに続くＩｇの産生を阻害する部位である。一次免疫応答と同様に、ＣＦＡ中のＫＬＨで感作したマウスの二次体液性免疫応答もまた抗ｇｐ３９の投与によって阻害されることも示された。抗ｇｐ３９による抗ＳＲＢＣＰＦＣの減少と一致して、抗原チャレンジに対する血清中抗体力価の減少も観察された。測定された血清中の全抗ＫＬＨＩｇイソタイプ（ＩｇＭ、ＩｇＧ₁、ＩｇＧ_2a、ＩｇＧ_2b、ＩｇＧ₃およびＩｇＥ）の力価が、マウスの抗ｇｐ３９処置によって減少した。抗ｇｐ３９投与の効果は、第２の抗原チャレンジ後少なくとも１４日間現れ、抗ｇｐ３９による持続性免疫抑制を確証した。異種Ｉｇおよび異種赤血球に対する二次免疫応答もまた、抗ｇｐ３９療法によって阻害されるので、ＫＬＨに対する二次応答の抗ｇｐ３９による免疫抑制は、ＫＬＨに対してのみ見られるものではない。ｇｐ３９発現Ｔｈの解剖学的分布は、一次免疫感作において観察されるものと同じであったが、免疫感作脾臓中のｇｐ３９発現Ｔｈの頻度は一次免疫応答中に観察されるものより増加した。免疫感作脾臓の胚中心または小胞では、ｇｐ３９発現Ｔｈは発見されなかった。したがって、脾臓のＰＡＬＳおよびＴＡ中の活性化Ｔｈ細胞に応答してＢ細胞が触発され、その後に小胞および胚中心へ移動することが明らかである。本研究の焦点は、ＴＤ体液性免疫のコントロールにおける抗ｇｐ３９の潜在的用途を明らかにすることであった。抗ｇｐ３９を用いる簡便な治療処方によって、この治療用抗体の魅力的な属性である、持続性の抑制が得られた。特に興味深いことは、抗ｇｐ３９が、他の異種治療用抗体（Ｃｈｉ−Ｌ６など）に対する一次および二次体液性応答を予防する能力をもっていることである。このことによって、異種治療用抗体を患者に繰り返し投与できるようになる。実施例７抗ｇｐ３９抗体の産生および特徴付け実験１−ヒトｇｐ３９に対する抗体ヒト被験者において抗原特異的なＴ細胞寛容を誘導するには、ヒトｇｐ３９に対する抗体を投与するのが好ましい。マウス抗ヒトｇｐ３９モノクローナル抗体を作製するため、以下の方法を用いた。Ｂａｌｂ／ｃマウスを完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中の可溶性ｇｐ３９融合タンパク質、ｇｐ３９−ＣＤ８で免疫した。引き続き、マウスを不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中の可溶性ｇｐ３９−ＣＤ８で６週間後に攻撃した。二次免疫の４週間後に可溶性ｇｐ３９−ＣＤ８を可溶性の形態で与えた。ついで、２週間後にマウスを活性化ヒト末梢血リンパ球でブースター処理し、ついでさらに２週間後に活性化ｇｐ３９− ＣＤ８で最後のブースター処理を行った。最後の免疫から４日目に標準プロトコールに従って脾臓細胞をＮＳ−１融合相手と融合させた。抗ｇｐ３９抗体を産生する細胞を、複数スクリーニング法に基づいて選択した。クローンをまず、ｇｐ３９−ＣＤ８を用いたプレート結合アッセイによりスクリーニングした。ついで、陽性のクローンを対照のＣＤ８融合タンパク質であるＣＤ７２−ＣＤ８に対してスクリーニングした。ＣＤ８−ＣＤ７２プレート結合アッセイで陽性とされたクローンを排除した。残ったクローンを、引き続き休止および６時間活性化ヒト末梢血リンパ球（ＰＢＬ）上でスクリーニングし、ついでフローサイトメトリー分析を行った。活性化されたＰＢＬは染色するが休止ＰＢＬは染色しないハイブリドーマを陽性とした。最後に、残りのクローンをｇｐ３９の結合したプレートへのＣＤ４０Ｉｇの結合を阻止する能力について試験した。プレート結合アッセイにおいて、約３００クローンがｇｐ３９−ＣＤ８およびＣＤ７２−ＣＤ８に対して最初にスクリーニングされた。これらクローンのうち、３０のクローンはプレートに結合したｇｐ３９を検出するがＣＤ８は検出しないことがわかった。引き続き、これらクローンを活性化ヒトＰＢＬ上のｇｐ３９の検出についてスクリーニングした。約１５のクローンが活性化ＰＢＬ上の分子を検出したが、休止細胞上の分子は検出しなかった。これらクローンがプレートに結合したｇｐ３９のＣＤ４０Ｉｇ検出を阻止する能力を決定することにより特異性をさらに確認した。１０のクローンのうち３つのクローンが、このアッセイにおいてＣＤ４０Ｉｇ結合を阻止することが試験された。これらクローンは、３Ｅ４、２Ｈ５および２Ｈ８であった。かかるクローンは本発明の方法に使用するのに好ましい。活性化ＰＢＬでは陽性だが休止ＰＢＬでは陽性ではないと試験されたクローンを、活性化されたラットＴ細胞クローンであるＰＯＭＣ８との反応性についてもスクリーニングした。クローン２Ｈ８はこのラットＴ細胞株との交差反応性を示した。実験２−ヒトｇｐ３９に対する抗体実験１と同様の免疫手順を用い、ヒトｇｐ３９に対する別の抗体を産生させた。１匹のＢａｌｂ／ｃマウスをＣＦＡ中の可溶性ｇｐ３９−ＣＤ８で免疫し、ついで４週間後に６時間活性化ヒト末梢血リンパ球で攻撃した。脾臓細胞をＮＳ− １融合相手と標準プロトコールに従って融合させる４日前に、マウスを可溶性ｇｐ３９−ＣＤ８でブースター処理した。ハイブリドーマクローンのスクリーニングを６時間活性化ヒトＰＢＬのフローサイトメトリー染色により行った。活性化ヒトＰＢＬは染色するが休止ヒトＰＢＬは染色しないクローンを選択した。６つのクローン、４Ｄ９−８、４Ｄ９−９、２４−３１、２４−４３、８９−７６および８９−７９を選択し、さらに分析した。これら選択した抗体の特異性を幾つかのアッセイにより確認した。まず、フローサイトメトリー分析は、６つのすべてのｍＡｂが活性化末梢血Ｔ細胞を染色するが休止末梢血Ｔ細胞は染色しないことを示した（代表的な例について図７Ｂおよび７Ｃを参照、それぞれ、活性化Ｔ細胞の４Ｄ９−８および４Ｄ９−９による染色を示す）。これら６つの抗体のそれぞれによって認識される分子の発現は、活性化の４時間以内には検出可能であり、活性化の６〜８時間で最大であり、活性化の２４時間後には検出できない。６つのすべてのｍＡｂは活性化ＣＤ３⁺ＰＢＬ上に発現される分子（主としてＣＤ４＋表現型の）を認識するが、ＣＤ８⁺ Ｔ細胞の一部もまた該分子を発現する。これら６つのｍＡｂによって認識される分子の発現は、ｇｐ３９の発現と同様に培地中のシクロスポリンＡの存在によって抑制される（代表的な例について図８Ａおよび８Ｂを参照、それぞれ、シクロスポリン処理Ｔ細胞の４Ｄ９−８および４Ｄ９−９による染色を示す）。これら６つのｍＡｂによって認識される分子の発現の動力学および分布は、ヒトＣＤ４０Ｉｇの融合タンパク質によって検出されるようにｇｐ３９のものと同一である。加えて、これら６つのすべてのｍＡｂはＣＤ４０Ｉｇによるｇｐ３９の染色を阻止する（代表的な例について図９Ａおよび９Ｂを参照、それぞれ、４Ｄ９−８および４Ｄ９−９の存在下でのＣＤ４０Ｉｇによるｇｐ３９染色の抑制を示す）。ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、これら６つのすべてのｍＡｂは可溶性融合形態のｇｐ３９分子であるｇｐ３９−ＣＤ８を認識する。さらに、これら６つのすべてのｍＡｂは、³⁵Ｓ−メチオニン標識した活性化ヒトＰＢＬから約３６ｋｄの分子を免疫沈降させる。この免疫沈降した分子は、ヒトＣＤ４０Ｉｇ融合タンパク質によって沈降したものと同一である。上記６つのの選択したｍＡｂ（４Ｄ９−８、４Ｄ９−９、２４−３１、２４− ４３、８９−７６および８９−７９）の機能的活性を以下のようにしてアッセイした。まず、ＩＬ−４および可溶性ｇｐ３９とともに培養した精製ヒトＢ細胞の増殖をｍＡｂが抑制する能力を測定した。精製ヒトＢ細胞を、精製モノクローナル抗体またはＣＤ４０Ｉｇ（０〜１２．５μｇ／ｍｌの範囲の投与量）の存在下または不在下でｇｐ３９およびＩＬ−４とともに培養した。培養３日後にチミジン導入によりＢ細胞増殖を決定した。得られた結果（図１０に示す）は、６つのすべてのｍＡｂがｇｐ３９およびＩＬ−４によって誘導されるＢ細胞増殖を抑制しうることを示している。ｍＡｂ８９−７６および２４−３１は誘導Ｂ細胞増殖の抑制において最も効果的であった。つぎに、抗ＣＤ３抗体活性化Ｔ細胞およびＩＬ−２によって誘導されるＩｇ産生により測定されるように、Ｂ細胞分化をｍＡｂが抑制する能力を調べた。精製ＩｇＤ⁺ヒトＢ細胞をＦＡＣＳによる陽性選択により調製し、ついで精製抗ｇｐ３９モノクローナル抗体（０〜１０μｇ／ｍｌの範囲の投与量）の存在下または不在下、抗ＣＤ３抗体活性化ヒトＴ細胞（マイトマイシンＣ処理）およびＩＬ− ２とともに６日間培養した。ＩｇＭ、ＩｇＧおよびＩｇＡ産生を第６日目にＥＬＩＳＡにより評価した。得られた結果（下記表３に示す）は、ＩｇＭ、ＩｇＧおよびＩｇＡ産生によって測定されるように、これら６つのすべての抗体はＴ細胞依存性Ｂ細胞分化を抑制しうることを示している。実験３−マウスｇｐ３９に対する抗体本発明のひとつの具体例においては、ｇｐ３９アンタゴニストは抗マウスｇｐ３９モノクローナル抗体、ＭＲＩである。次の方法でＭＲＩモノクローナル抗体を産生し、それをｇｐ３９に対する他の抗体を産生するのに使用することができる。５−１０⁶の活性化Ｔｈ１細胞（ｄ１.６）を週に一回の間隔で６週間腹腔内投与して、ハムスターを免疫感作した。マウスＴｈ１に対する血清の力価が、約１：１０,０００より大きい場合、免疫感作ハムスターの脾細胞およびＮＳ−１を用いてポリエチレングリコールで細胞融合を行った。成長ハイブリドーマを含有するウエルの上清のフローサイトメトリーを行い、静止期および活性化Ｔｈ１をスクリーニングした。ＭＲ１を誘導するために、選択的に活性化Ｔｈを認識するＭａｂを産生する特別なハイブリドーマをさらに試験してサブクローニングを行った。腹水中でＭＲ１を産生し、イオン交換ＨＰＬＣにて精製した。ハイブリドーマＭＲ１は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託され、受託番号ＨＢ１１０４８を付与された。下記の文献は、実施例および発明の詳細な説明中に、番号で引用したものである。１.イナバＫ.、Ｍ.Ｄ.ウイットマー、Ｒ.Ｍ.シュタインマン（１９８４年） “インビトロにおける一次抗体反応中の樹枝状細胞、ヘルパーＴ細胞およびＢ細胞のクラスタ一形成”「J.Exp.Med.」１６０：８５８。２.イナバＫ.、Ｒ.Ｍ.シュタインマン（１９８５年）“樹枝状細胞によって開始されるタンパク質特異的ヘルパーＴリンパ球形成”「Science」２２９：４７５。３.ノエルＲ.Ｊ.、Ｅ.Ｃ.スノー（１９９１年）“ヘルパーＴ細胞およびＢ細胞の同種の相互作用”「Immunol.Tod.」１１：３６１。４.ゴードンＪ.、Ｍ.Ｊ.ミルサム、Ｇ.Ｒ.ガイ、Ｊ.Ａ.レッドベター（１９８７年）“新規なＢ細胞再刺激アッセイにおいて見られたインターロイキン４および抗Ｂｐ５０（ＣＤｗ４０）間の相乗的相互作用”「Eur.J.Immunol.」１７：１５３５。５.クラークＥ.Ａ.、Ｊ.Ａ.レッドベター（１９８６年）“２つの別個の細胞表面分化抗原によって媒介されたヒトＢ細胞の活性化”「Proc.Natl.Acad.Sci.U SA」８３：４４９４。６.スタメンコヴィックＩ.、Ｅ.Ａ.クラーク、Ｂ.シード（１９８９年）“神経成長因子需要体に関連し、がん腫中のサイトカインによって誘発されたＢリンパ球活性化分子”「ＥＭＢＯ」８：１４０３。７.ホーレンバーフＤ.、Ｌ.グロスメア、Ｃ.Ｄ.クラス、Ｎ.Ｊ.チャラップニー、Ｒ.Ｊ.ノエル、Ｉ.スタメンコヴィック、Ｊ.Ａ.レッドベター、Ａ.アルッフォ（１９９２年）“ＴＮＦ遺伝子ファミリーの一員であるヒトＴ細胞抗原ｐ３９は、ＣＤ受容体に対するリガンドである：Ｂ細胞共同剌激性活性化をともなうｇｐ３９の可溶性体の発現”「ＥＭＢＯ」１１：４３１３。８.アーミテージＲ.Ｊ.、Ｗ.Ｃ.ファンスロー、Ｌ.ストロックバイン、Ｔ.Ａ .サトウ、Ｋ.Ｎ.クリフォード、Ｂ.Ｍ.マクダッフ、Ｄ.Ｍ.アンダーソン、Ｓ.Ｄ .ギンペル、Ｔ.デイビス−スミス、Ｃ.Ｒ.マリセフスキー、Ｅ.Ａ.クラーク、Ｃ . 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Med.」１７２：１８６１。１２.バンシャルーＪ.、Ｆ.ルーッセット（１９９１年）“ＣＤ４０系における成長ヒトＢリンパ球”「Nature」３５３：６７８。１３.アーミテージＲ.Ｊ.、Ｔ.Ａ.サトウ、Ｂ.Ｍ.マクダッフ、Ｋ.Ｎ.クリフォード、Ａ.Ｒ.アルパート、Ｃ.Ａ.スミス、Ｗ.Ｃ.ファンスロー（１９９２年） “生物学的にかっせいなＣＤ４０リガンド源の同定”「Eur.J.Immunol.」２２：２０７１。１４.レインＰ.、Ａ．トラウネッカー、Ｓ.ヒューベル、Ｓ.イヌイ、Ａ.ランザベッキア、Ｄ.グレイ（１９９２年）“活性化ヒトＴ細胞は、Ｂリンパ球のＴ細胞依存性の活性化に関連するヒトＢ細胞関連抗原ＣＤ４０に対するリガンドを送り出す”「Eur.J.Immunol.」２２：２５７３。１５.ノエルＲ.Ｊ.、Ｊ.Ａ.レッドベター、Ａ.アルッフォ（１９９２年）“ ＣＤ４０とそのリガンド、胸腺依存性Ｂ細胞の活性化にとって必須のリガンド受容体ペア”「Immunol.Tod.」１３：４３１。１６.ノエルＲ.Ｊ.、Ｍ.ロイ、Ｄ.Ｍ.シェファード、Ｉ.スタメンコビッチ、Ｊ.Ａ.レッドベター、Ａ.アルッフォ（１９９２年）“活性化Ｔヘルパー細胞上の新規リガンドはＣＤ４０に結合し、Ｂ細胞の同種の活性化のための信号を変換する”「Proc.Natl.Acad.Sci.USA」８９：６５５０。１７.アレンＲ.Ｃ.、Ｒ.Ｊ.アーミテージ、Ｍ.Ｅ.コンリー、Ｈ.ローゼンブラット、Ｎ.Ａ.ジェンキンズ、Ｎ.Ｇ.コープランド、Ｍ.Ａ.ベデル、Ｓ.エデルホフ、Ｊ.ディステッチェ、Ｄ.Ｋ.シモーヌ、Ｗ.Ｃ.ファンスロー、Ｊ.べルモント、Ｍ.Ｋ.スプリッグス（１９９３，年）“Ｃ４０リガンド遺伝子におけるＸ染色体性高ＩｇＭ症候群に対する応答性の欠如”「Science」２５９：９９０。１８.アルッフォＡ.、Ｍ.ファーリントン、Ｄ.ホーレンバーフ、リーＸ.、Ａ.ミラトビッチ、Ｓ.ノノヤマ、Ｊ.バジョラス、Ｌ.Ｓ.グロスメア、Ｒ.ステンカンプ、Ｍ.ノイバウアー、Ｒ.Ｌ.ロバーツ、Ｒ.Ｊ.ノエル、レッドベター、Ｕ. Ｊ.Ａ.フランク、Ｈ.Ｄ.オークス（１９９３年）“Ｘ染色体性高ＩｇＭ症候群患者由来の活性化されたＴ細胞において、ＣＤ４０のリガンドであるｇｐ３９が欠如している”「Cell」７２：２９１。１９.ディサントＪ.Ｐ.、Ｊ.Ｙ.ボネフォイ、Ｊ.Ｆ.ゴーチャット、Ａ.フィッシャー、Ｇ.デセイントベイジル（１９９３年）“高ＩｇＭを伴うＸ染色体性免疫不全におけるＣＤ４０リガンド突然変異”「Nature」３６１：５４１。２０.コーサウアーＵ.、Ｄ.グラフ、Ｈ.Ｗ.マージス，Ｆ.ブライアース、Ｍ. パダヤッキー、Ｓ.マルコム、Ａ.Ｇ.ウガジオ、Ｌ.Ｄ.ノタランジェロ、Ｒ.Ｌ. レビンスキー、Ａ.クロチェク（１９９３年）“Ｔ細胞ＣＤ４０リガンドの発現欠損は、高ＩｇＭを伴うＸ染色体性免疫不全を引き起こす”「Nature」３６１：５３９。２１.カートージョーンズＥ.、Ｓ.ハンバーグ、Ｊ.オハラ、Ｗ.Ｅ.パウル、Ａ.Ｋ.アバス（１９８７年）“ヘルパー／インデューサ−Ｔリンパ球の異質性, Ｉ.リンホカインの産生”「J.Exp.Med.」１６６：１７７４。２２.スプリンガーＴ.Ａ.、Ａ.バッタチャリャ、Ｊ.Ｔ.カルドーザ、Ｆ.サンチェスーマドリッド（１９８２年）“ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂサブクラスに特異的なモノクローナル抗体およびκ鎖モノタイプおよびアロタイプ決定基：ラットモノクローナル抗体と共に用いる試薬”「Hybrid」１：２５。２３.ヘルストームＩ．（１９８６年）“ヒト肺がんに対して誘発されたモノクローナルマウス抗体”「Cans.Res.」４６：３９１７。２４.ウィルドＤ.Ｂ.、Ｐ.マラック、Ｊ.カプラー、Ｄ.Ｐ.ダイアリナス、Ｆ .Ｗ.フィッチ（１９８３年）“クラスＩＩＭＨＣ抗原反応性においてＬ３Ｌ４が関係している証拠：モノクローナル抗体ＧＫ１.５（抗Ｌ３Ｌ４ａ）がクラスＩＩＭＨＣ抗原特異的増殖、リンホカインの放出およびクローン化されたマウスヘルパーＴリンパ球株による結合を遮断する”「J.Immunol.」１３１：２１７８。２５.スノウＥ.Ｃ.、Ｒ.Ｊ.ノエル（１９８７年）“ハプテン特異的Ｂリンパ球の胸腺依存性抗原刺激”「Immunol.Rev.」９９：１７３。２６.ジャーンＮ.Ｋ.、Ｃ.へンリー、Ａ.Ａ.ノーディン、Ｈ.フジ、Ａ.Ｍ.コロスおよびＩ.レフコビッツ（１９７４年）“プラーク形成細胞：方法論および理論”「Transplant Rev.」１８：１３０。２７.オークスＨ.Ｄ.、Ｒ.Ｊ.ウエッジウッド（１９８９年）“Ｂ細胞系の疾患”「幼児および小児における免疫学的疾患」第３版、Ｅ.Ｒ.シュライム編（フィラデルフィア：Ｗ.Ｂ.ソンダース），ｐｐ２２６。２８.ノタランジェロＬ.Ｄ.、Ｍ.デュース、Ａ.Ｇ.ウガジオ（１９９２年） “高ＩｇＭ（ＨＩＭ）を伴う免疫不全”「Immunol.Rev.」３：１０１。２９.シズルＪ.Ａ.、Ｓ.Ａ.アルターズ、Ｃ.Ｇ.ファスマン（１９９２年）“ 療法における抗ＣＤ４モノクローナル抗体：非クラス的寛容の創製「Immunol.Re v.」１２９；１０３。３０.リンスリーＰ.Ｓ.、Ｐ.Ｍ.ウォーラス、Ｊ.ジョンソン、Ｍ.Ｇ.ギブソン、Ｊ.Ｌ.グリーン、Ｊ.Ａ.レッドベター、Ｃ.シン、Ｍ.Ａ.テッパー（１９９２年）“ＣＴＬＡ−４Ｔ細胞活性化分子の可溶性体によるインビボ免疫抑制”「 Science」２５７：７９２。３１.レンショウＤ.Ｊ.、Ｙ.ツェン、Ｊ.Ｒ.シスルスウェイト、Ａ.モンターグ、Ｗ.ブラディ、Ｍ.Ｇ.ギブソン、Ｐ.Ｓ.リンスリー、Ｊ.Ａ.ブルーストーン（１９９２年）“ＣＴＬＡ４１ｇによって誘導された異種膵島移植における長期生存”「Science」２５７：７８９。等価物当業者であれば、ルーチン実験のみを用いて、本発の特定の具体例に対する多数の等価物について認識し、理解し得るであろう。このような等価物も本発明の請求の範囲に包含されることを意図されている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．接触依存性ヘルパーエフェクター機能を媒介するＴｈ細胞上の分子のアンタゴニストとともにＴＤ抗原を被験者に投与することを特徴とするインビボにおけるＴＤ抗原に対する体液性免疫応答の抑制方法。２．接触依存性ヘルパーエフェクター機能を媒介するＴｈ細胞上の分子が、ｇｐ３９である請求項１記載の抑制方法。３．アンタゴニストが、抗ｇｐ３９抗体である請求項２記載の抑制方法。４．ｇｐ３９アンタゴニストとともにＴＤ抗原を被験者に投与することを特徴とするインビボにおけるＴＤ抗原に対する体液性免疫応答の抑制方法。５．体液性免疫応答が一次体液性免疫応答である請求項４記載の抑制方法。６．体液性免疫応答が二次体液性免疫応答である請求項４記載の抑制方法。７．ＴＤ抗原がタンパク質である請求項４記載の抑制方法。８．ＴＤ抗原が抗体である請求項４記載の抑制方法。９．ＴＤ抗原が細胞表面抗原である請求項４記載の抑制方法。１０．ＴＤ抗原が抗ｇｐ３９抗体である請求項４記載の抑制方法。１１．抗ｇｐ３９抗体がモノクローナル抗体２４−３１（ＡＴＣＣ受託番号）である請求項１０記載の抑制方法。１２．抗ｇｐ３９抗体がモノクローナル抗体８９−７６（ＡＴＣＣ受託番号）である請求項１０記載の抑制方法。１３．抗ｇｐ３９抗体がキメラモノクローナル抗体である請求項１０記載の抑制方法。１４．抗ｇｐ３９抗体がヒト型モノクローナル抗体である請求項１０記載の抑制方法。１５．ｇｐ３９アンタゴニストがｇｐ３９リガンドの可溶性体である請求項４記載の抑制方法。１６．ｇｐ３９リガンドがＣＤ４０である請求項１５記載の抑制方法。１７．ＣＤ４０が融合タンパク質である請求項１６記載の抑制方法。１８．ＴＩ−２抗原に対する体液性免疫応答が抑制されない請求項４記載の抑制方法。１９．ＴＤ抗原およびｇｐ３９アンタゴニストに接触させた被験者に投与することを特徴とするインビボにおけるＴＤ抗原に対する抗原特異的ＩｇＥ応答の抑制方法。２０．ｇｐ３９アンタゴニストが、抗ｇｐ３９抗体である請求項１９記載の抑制方法。２１．抗ｇｐ３９抗体がモノクローナル抗体２４−３１（ＡＴＣＣ受託番号）である請求項２０記載の抑制方法。２２．抗ｇｐ３９抗体がモノクローナル抗体８９−７６（ＡＴＣＣ受託番号）である請求項２０記載の抑制方法。２３．抗ｇｐ３９抗体がキメラモノクローナル抗体である請求項２０記載の抑制方法。２４．抗ｇｐ３９抗体がヒト型モノクローナル抗体である請求項２０記載の抑制方法。２５．ｇｐ３９アンタゴニストがｇｐ３９リガンドの可溶性体である請求項１９記載の抑制方法。２６．ｇｐ３９リガンドがＣＤ４０である請求項２５記載の抑制方法。２７．ＣＤ４０が融合タンパク質である請求項２６記載の抑制方法。２８．ｇｐ３９アンタゴニストとともに治療用薬剤を被験者に投与することを特徴とするインビボにおける治療用薬剤に対する体液性免疫応答の抑制方法。２９．治療用薬剤が抗体である請求項２８記載の抑制方法。３０．ｇｐ３９アンタゴニストが、抗ｇｐ３９抗体である請求項２８記載の抑制方法。３１．抗ｇｐ３９抗体がモノクローナル抗体２４−３１（ＡＴＣＣ受託番号）である請求項３０記載の抑制方法。３２．抗ｇｐ３９抗体がモノクローナル抗体８９−７６（ＡＴＣＣ受託番号）である請求項３０記載の抑制方法。３３．抗ｇｐ３９抗体がキメラモノクローナル抗体である請求項３０記載の抑制方法。３４．抗ｇｐ３９抗体がヒト型モノクローナル抗体である請求項３０記載の抑制方法。３５．ｇｐ３９アンタゴニストがｇｐ３９リガンドの可溶性体である請求項２８記載の抑制方法。３６．ｇｐ３９リガンドがＣＤ４０である請求項３５記載の抑制方法。３７．ＣＤ４０が融合タンパク質である請求項３６記載の抑制方法。３８．ｇｐ３９アンタゴニストをアレルゲンに接触させた被験者に投与することを特徴とするインビボにおけるアレルゲンに対する体液性免疫応答の抑制方法。３９．さらにＩＬ−４インヒビターを被験者に投与することを特徴とする請求項３８記載の抑制方法。４０．ＩＬ−４インヒビターが抗ＩＬ−４抗体である請求項３９記載の抑制方法。４１．ｇｐ３９アンタゴニストとともにＴＤ抗原を被験者に投与することを特徴とするインビボにおけるＴＤ抗原に対する体液性免疫応答の持続性抑制方法。４２．ｇｐ３９アンタゴニストとともにＴＤ抗原を被験者に投与することを特徴とする、ＴＩ−２抗原に対する体液性免疫応答を残したインビボにおけるＴＤ抗原に対する体液性免疫応答の持続性抑制方法。４３．ｇｐ３９アンタゴニストとともにＴＤ抗原を被験者に投与することを特徴とするインビボにおけるＴＤ抗原によって誘発された活性化Ｔｈ細胞の機能の免疫抑方法。４４．活性化Ｔｈ細胞を消滅させない請求項４３記載の免疫抑制方法。４５．活性化Ｔｈ細胞をアネルギー化しない請求項４３記載の免疫抑制方法。４６．（ａ）被検抗原をｇｐ３９アンタゴニストとともに被験者に投与し；（ｂ）該抗原に対する体液性免疫応答を測定し；および（ｃ）体液性免疫応答が無いことによって抗原がＴＤ抗原であることを決定するか、または体液性免疫応答が有ることによって抗原がＴＩ−２抗原であることを決定することを特徴とする抗原がＴＤ抗原またはＴＩ−２抗原のいずれであるかの決定方法。