JPH09286727A - グルタミン酸拮抗剤及び神経細胞死予防剤 - Google Patents
グルタミン酸拮抗剤及び神経細胞死予防剤Info
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- JPH09286727A JPH09286727A JP12641996A JP12641996A JPH09286727A JP H09286727 A JPH09286727 A JP H09286727A JP 12641996 A JP12641996 A JP 12641996A JP 12641996 A JP12641996 A JP 12641996A JP H09286727 A JPH09286727 A JP H09286727A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 テアニンを有効成分として含有するグルタミ
ン酸拮抗剤、及びテアニンを有効成分として含有し、グ
ルタミン酸受容体遮断作用を特徴とする神経細胞死予防
剤。 【効果】 テアニンは、グルタミン酸の毒性を有効に抑
制し、神経細胞死の拡大を停止できると共に、ＮＭＤＡ
型グルタミン酸受容体を遮断することができる。また、
テアニンは血液脳関門を通過しやすく、しかも腸管吸収
率も高いという特徴があり、さらに現在食品添加物とし
て認可され、日常的に摂取されている物質である。した
がって、グルタミン酸に起因する脳障害、例えば脳梗塞
や脳出血などの脳卒中、脳手術や脳損傷に伴う脳虚血の
治療、及び予防に有効である。
ン酸拮抗剤、及びテアニンを有効成分として含有し、グ
ルタミン酸受容体遮断作用を特徴とする神経細胞死予防
剤。 【効果】 テアニンは、グルタミン酸の毒性を有効に抑
制し、神経細胞死の拡大を停止できると共に、ＮＭＤＡ
型グルタミン酸受容体を遮断することができる。また、
テアニンは血液脳関門を通過しやすく、しかも腸管吸収
率も高いという特徴があり、さらに現在食品添加物とし
て認可され、日常的に摂取されている物質である。した
がって、グルタミン酸に起因する脳障害、例えば脳梗塞
や脳出血などの脳卒中、脳手術や脳損傷に伴う脳虚血の
治療、及び予防に有効である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、グルタミン酸に起
因する脳障害、例えば脳梗塞や脳出血などの脳卒中、脳
手術や脳損傷に伴う脳虚血の治療及び予防に有効なグル
タミン酸拮抗剤及び神経細胞死予防剤に関する。
因する脳障害、例えば脳梗塞や脳出血などの脳卒中、脳
手術や脳損傷に伴う脳虚血の治療及び予防に有効なグル
タミン酸拮抗剤及び神経細胞死予防剤に関する。
【０００２】
【従来の技術と発明が解決しようとする課題】グルタミ
ン酸は、通常は脳神経細胞において興奮性神経伝達物質
としてグルタミン酸受容体に作用し記憶や学習に関与す
る反面、過剰に存在した場合には神経細胞の過剰な興奮
をもたらし神経細胞に対する毒性を発揮することが知ら
れている。例えば、脳卒中に代表される脳虚血時には、
死んだ神経細胞から多量のグルタミン酸が流出し、グル
タミン酸の毒性によって周囲の神経細胞が連鎖的に死ん
でしまうことが確認されている。
ン酸は、通常は脳神経細胞において興奮性神経伝達物質
としてグルタミン酸受容体に作用し記憶や学習に関与す
る反面、過剰に存在した場合には神経細胞の過剰な興奮
をもたらし神経細胞に対する毒性を発揮することが知ら
れている。例えば、脳卒中に代表される脳虚血時には、
死んだ神経細胞から多量のグルタミン酸が流出し、グル
タミン酸の毒性によって周囲の神経細胞が連鎖的に死ん
でしまうことが確認されている。
【０００３】このグルタミン酸の毒性を軽減し得るグル
タミン酸拮抗剤として従来は、クモの毒成分から抽出し
た物質（特公平７−９４４１９号など）や、新規なポリ
アミン化合物（特開平２−２５６６５６号など）をグル
タミン酸受容体遮断剤として用いる発明が開示されてい
る。また、亜セレン及び亜セレンの塩をグルタミン酸拮
抗剤として用いる発明も開示されている（特開平４−２
４７０３３号など）。
タミン酸拮抗剤として従来は、クモの毒成分から抽出し
た物質（特公平７−９４４１９号など）や、新規なポリ
アミン化合物（特開平２−２５６６５６号など）をグル
タミン酸受容体遮断剤として用いる発明が開示されてい
る。また、亜セレン及び亜セレンの塩をグルタミン酸拮
抗剤として用いる発明も開示されている（特開平４−２
４７０３３号など）。
【０００４】一方、本発明者らは、特願平６−２１２６
７３号において、神経細胞内のＣａ2+濃度を上昇させる
ことによって神経細胞の長期増強現象を含むシナプスの
可塑性を増加させ、もって神経細胞乃至回路網の可塑的
変化をもたらすことができる脳機能改善剤として、テア
ニンを有効成分とする脳機能改善剤を提案した。
７３号において、神経細胞内のＣａ2+濃度を上昇させる
ことによって神経細胞の長期増強現象を含むシナプスの
可塑性を増加させ、もって神経細胞乃至回路網の可塑的
変化をもたらすことができる脳機能改善剤として、テア
ニンを有効成分とする脳機能改善剤を提案した。
【０００５】本発明は、上記のテアニンについて更に研
究を進めた結果なしたものであり、一次的又は継続的な
脳虚血などにより脳内グルタミン酸の著しい上昇が生じ
た際のグルタミン酸の毒性を有効に抑制することができ
る新たなグルタミン酸拮抗剤、及びグルタミン酸の毒性
を抑制するためにグルタミン酸受容体を遮断することが
できる神経細胞死予防剤を提供せんとするものである。
究を進めた結果なしたものであり、一次的又は継続的な
脳虚血などにより脳内グルタミン酸の著しい上昇が生じ
た際のグルタミン酸の毒性を有効に抑制することができ
る新たなグルタミン酸拮抗剤、及びグルタミン酸の毒性
を抑制するためにグルタミン酸受容体を遮断することが
できる神経細胞死予防剤を提供せんとするものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らがテアニンに
ついて鋭意研究した結果、新たにテアニンにはグルタミ
ン酸の毒性を抑制する作用とグルタミン酸受容体を遮断
する作用があることを見い出し、本発明に到達したもの
である。
ついて鋭意研究した結果、新たにテアニンにはグルタミ
ン酸の毒性を抑制する作用とグルタミン酸受容体を遮断
する作用があることを見い出し、本発明に到達したもの
である。
【０００７】すなわち、本発明は、テアニンを有効成分
として含有するグルタミン酸拮抗剤を提供すると共に、
テアニンを有効成分として含有し、グルタミン酸受容体
遮断作用を特徴とする神経細胞死予防剤をも提供する。
として含有するグルタミン酸拮抗剤を提供すると共に、
テアニンを有効成分として含有し、グルタミン酸受容体
遮断作用を特徴とする神経細胞死予防剤をも提供する。
【０００８】ここで、本発明におけるテアニンとは、Ｌ
−グルタミン酸−γ−エチルアミド、又はＬ−グルタミ
ン酸−γ−エチルアミド及びこの誘導体の混合物をい
う。Ｌ−グルタミン酸−γ−エチルアミドの誘導体は、
例えば
−グルタミン酸−γ−エチルアミド、又はＬ−グルタミ
ン酸−γ−エチルアミド及びこの誘導体の混合物をい
う。Ｌ−グルタミン酸−γ−エチルアミドの誘導体は、
例えば
【０００９】
【化１】
【００１０】
【化２】
【００１１】などである。テアニンは、グルタミンによ
く似た構造を有するアミノ酸であるが、他のアミノ酸が
血液脳関門をほとんど通過しないのに対し、テアニンは
血液脳関門を通過しやすく、さらに腸管吸収率も高いこ
とが知られている。これは、テアニンが構造内にエチル
基を有しており脂溶性であるからであると考えられる。
また、テアニンは現在食品添加物として認可され、日常
的に摂取されている物質であるから副作用が少ないこと
が期待できる。
く似た構造を有するアミノ酸であるが、他のアミノ酸が
血液脳関門をほとんど通過しないのに対し、テアニンは
血液脳関門を通過しやすく、さらに腸管吸収率も高いこ
とが知られている。これは、テアニンが構造内にエチル
基を有しており脂溶性であるからであると考えられる。
また、テアニンは現在食品添加物として認可され、日常
的に摂取されている物質であるから副作用が少ないこと
が期待できる。
【００１２】このテアニンは、既に公知となっている各
種方法によって入手することが可能である。すなわち、
植物又は微生物などの培養法により生合成することも、
茶葉中から抽出することも、或いは化学合成することも
できる。例えば、工業的に入手するには、Ｌ−グルタミ
ン酸を加熱して得られるＬ−ピロリドンカルボン酸を銅
塩とした後、無水エチルアミンと反応させて、最後に脱
銅して得ることもできる。
種方法によって入手することが可能である。すなわち、
植物又は微生物などの培養法により生合成することも、
茶葉中から抽出することも、或いは化学合成することも
できる。例えば、工業的に入手するには、Ｌ−グルタミ
ン酸を加熱して得られるＬ−ピロリドンカルボン酸を銅
塩とした後、無水エチルアミンと反応させて、最後に脱
銅して得ることもできる。
【００１３】本発明のグルタミン酸拮抗剤及び神経細胞
死予防剤は、例えば、テアニンをそのまま精製水又は生
理食塩水などに溶解して投与することもでき、賦形剤、
結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤などを添
加し、周知の方法で、例えば錠剤、カプセル剤、か粒
剤、散剤、シロップ剤、ドリンク剤又は注射剤に成形し
て投与すればよい。また、投与形態としては、テアニン
が血液脳関門を通過しやすいことから、経口的に投与し
ても、非経口的に投与しても有効であるが、テアニンは
腸管吸収率も高いことから、特に経口的に投与した場合
には、他のアミノ酸を有効成分とする経口投与剤に比べ
て顕著な効果を奏することが期待できる。
死予防剤は、例えば、テアニンをそのまま精製水又は生
理食塩水などに溶解して投与することもでき、賦形剤、
結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤などを添
加し、周知の方法で、例えば錠剤、カプセル剤、か粒
剤、散剤、シロップ剤、ドリンク剤又は注射剤に成形し
て投与すればよい。また、投与形態としては、テアニン
が血液脳関門を通過しやすいことから、経口的に投与し
ても、非経口的に投与しても有効であるが、テアニンは
腸管吸収率も高いことから、特に経口的に投与した場合
には、他のアミノ酸を有効成分とする経口投与剤に比べ
て顕著な効果を奏することが期待できる。
【００１４】投与量は、特願平７−２５６６１５号の実
験１の結果より、静脈注射した場合には、体重１ｋｇに
対して０．１７４ｍｇのテアニンを投与すれば脳内に吸
収され有効に作用することが認められていることから、
本発明においても、注射剤として投与する場合には体重
１ｋｇに対して０．１７４ｍｇのテアニンを投与すれば
脳内に吸収されグルタミン拮抗作用及びグルタミン受容
体遮断作用を示すものと考えられる。
験１の結果より、静脈注射した場合には、体重１ｋｇに
対して０．１７４ｍｇのテアニンを投与すれば脳内に吸
収され有効に作用することが認められていることから、
本発明においても、注射剤として投与する場合には体重
１ｋｇに対して０．１７４ｍｇのテアニンを投与すれば
脳内に吸収されグルタミン拮抗作用及びグルタミン受容
体遮断作用を示すものと考えられる。
【００１５】
（実施例１）本実施例では、ラット大脳皮質初代培養神
経細胞にテアニンを単回投与し、蛍光性のＣａ2+感受性
色素であるｆｕｒａ−２を用いて当該細胞内Ｃａ2+濃度
の経時変化を測定することにより、神経細胞内のグルタ
ミン酸受容体、特にＮＭＤＡ型受容体に対するテアニン
の作用を検討した。
経細胞にテアニンを単回投与し、蛍光性のＣａ2+感受性
色素であるｆｕｒａ−２を用いて当該細胞内Ｃａ2+濃度
の経時変化を測定することにより、神経細胞内のグルタ
ミン酸受容体、特にＮＭＤＡ型受容体に対するテアニン
の作用を検討した。
【００１６】〔ラット大脳皮質細胞の培養〕妊娠１８日
目のラットから胎児を取り出し、この胎児の脳を開けて
大脳皮質部位を切り出し、切り出した大脳皮質部位（切
片）から海馬体と中脳を除去した。得られた切片をメス
でよく刻み、遠沈管に移してＤＭＥＭ培養液（ＤＭＥ
Ｍ：Dulbecco's Modified Eagle Medium１．３４％、Ｎ
ａＨＣＯ3 ０．１２％、Penicillin５０００Ｕ／ｌ、St
reptomycin０．００１％、Pyruvate０．０１％、使用時
に５％牛新生児血清および５％非働化馬血清を加え
る。）５ｍｌを加えて１〜２分間静置した。ついで上清
を除去してパパイン酵素溶液を５ｍｌ加え３７℃で５分
ごとに振盪しながら１５分間インキュベートした。これ
を二度繰り返した後、上清を除去して血清入りＤＭＥＭ
培養液５ｍｌを加えてピペッティングし、細胞を分散さ
せた。そして、滅菌済レンズペーパーフィルターを通し
て別の遠沈管に移し、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離
した。上清を除去して再度血清入りＤＭＥＭ培養液５ｍ
ｌを加えた。
目のラットから胎児を取り出し、この胎児の脳を開けて
大脳皮質部位を切り出し、切り出した大脳皮質部位（切
片）から海馬体と中脳を除去した。得られた切片をメス
でよく刻み、遠沈管に移してＤＭＥＭ培養液（ＤＭＥ
Ｍ：Dulbecco's Modified Eagle Medium１．３４％、Ｎ
ａＨＣＯ3 ０．１２％、Penicillin５０００Ｕ／ｌ、St
reptomycin０．００１％、Pyruvate０．０１％、使用時
に５％牛新生児血清および５％非働化馬血清を加え
る。）５ｍｌを加えて１〜２分間静置した。ついで上清
を除去してパパイン酵素溶液を５ｍｌ加え３７℃で５分
ごとに振盪しながら１５分間インキュベートした。これ
を二度繰り返した後、上清を除去して血清入りＤＭＥＭ
培養液５ｍｌを加えてピペッティングし、細胞を分散さ
せた。そして、滅菌済レンズペーパーフィルターを通し
て別の遠沈管に移し、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離
した。上清を除去して再度血清入りＤＭＥＭ培養液５ｍ
ｌを加えた。
【００１７】次に、０．５％トリパンブルー溶液にて染
色し、血球計算板にて計数した。また、８穴のシリコン
樹脂製の枠の底にカバーガラスをはりつけてプレートと
し、プレートの各穴（以下、この穴をウェルという。）
の中をポリエチレンイミンにてコーティングしておき
（１ウェルあたりの内径は縦×横＝８×１１ｍｍ）、上
記の単離した細胞をこのプレートの各ウェル内に一定濃
度まき数日毎に培養液を交換しながら培養した。
色し、血球計算板にて計数した。また、８穴のシリコン
樹脂製の枠の底にカバーガラスをはりつけてプレートと
し、プレートの各穴（以下、この穴をウェルという。）
の中をポリエチレンイミンにてコーティングしておき
（１ウェルあたりの内径は縦×横＝８×１１ｍｍ）、上
記の単離した細胞をこのプレートの各ウェル内に一定濃
度まき数日毎に培養液を交換しながら培養した。
【００１８】〔テアニン投与〕培養１５日目で培養細胞
の培地をＭｇ2+０．８ｍＭ含む緩衝液に換えた後、先
ず、培養細胞の培地０．８ｍＭＭｇ2+を含むＢＳＳ溶液
（ＮａＣｌ１３０ｍＭ，ＫＣｌ５．４ｍＭ，ＣａＣｌ2
１．８ｍＭ，Glucose ５．５ｍＭ及びHEPES ２０ｍＭを
ＮａＯＨでＰＨ７．４に調製した。）に換え、細胞内に
ｆｕｒａ−２を取り込ませ、１９８６年にＫｕｄｏらの
開発した細胞内Ｃａ2+濃度多点同時観察装置を用いて細
胞内Ｃａ2+濃度の経時変化を測定した。次に、当該ｆｕ
ｒａ−２を取り込ませた培養細胞にテアニン（市販品；
純度９９％）を８００μＭ添加して、神経細胞内Ｃａ2+
濃度変動を測定した。他方、当該ｆｕｒａ−２を取り込
ませた培養細胞にＮＭＤＡ型受容体の特異的な阻害剤と
して知られているＤ−ＡＰＶを５０μＭ添加して予めＮ
ＭＤＡ型受容体に結合させた後、テアニンを８００μＭ
添加して神経細胞内Ｃａ2+濃度の経時変化を測定した。
その後さらに、神経細胞内から添加したＤ−ＡＰＶ及び
テアニンを一旦除去した後、再度テアニンを８００μＭ
添加して神経細胞内Ｃａ2+濃度変動を測定した。これら
の測定結果を図１及び図２に示した。
の培地をＭｇ2+０．８ｍＭ含む緩衝液に換えた後、先
ず、培養細胞の培地０．８ｍＭＭｇ2+を含むＢＳＳ溶液
（ＮａＣｌ１３０ｍＭ，ＫＣｌ５．４ｍＭ，ＣａＣｌ2
１．８ｍＭ，Glucose ５．５ｍＭ及びHEPES ２０ｍＭを
ＮａＯＨでＰＨ７．４に調製した。）に換え、細胞内に
ｆｕｒａ−２を取り込ませ、１９８６年にＫｕｄｏらの
開発した細胞内Ｃａ2+濃度多点同時観察装置を用いて細
胞内Ｃａ2+濃度の経時変化を測定した。次に、当該ｆｕ
ｒａ−２を取り込ませた培養細胞にテアニン（市販品；
純度９９％）を８００μＭ添加して、神経細胞内Ｃａ2+
濃度変動を測定した。他方、当該ｆｕｒａ−２を取り込
ませた培養細胞にＮＭＤＡ型受容体の特異的な阻害剤と
して知られているＤ−ＡＰＶを５０μＭ添加して予めＮ
ＭＤＡ型受容体に結合させた後、テアニンを８００μＭ
添加して神経細胞内Ｃａ2+濃度の経時変化を測定した。
その後さらに、神経細胞内から添加したＤ−ＡＰＶ及び
テアニンを一旦除去した後、再度テアニンを８００μＭ
添加して神経細胞内Ｃａ2+濃度変動を測定した。これら
の測定結果を図１及び図２に示した。
【００１９】〔結果〕先ず、培養細胞に何も添加しない
培地だけの状態では、細胞内Ｃａ2+濃度に変化は見られ
なかった（図１）。テアニンを８００μＭ添加すると、
大きな一過性の細胞内Ｃａ2+濃度の上昇が見られた（図
２）。しかし、予めＤ−ＡＰＶを添加してＮＭＤＡ型受
容体に結合させた後にテアニンを添加すると、図１とほ
ぼ同様の結果となり細胞内Ｃａ2+濃度の上昇は認められ
なかった。さらに、神経細胞内からＤ−ＡＰＶ及びテア
ニンを一旦除去した後、再度テアニンを添加すると、図
２と同様の結果となり細胞内Ｃａ2+濃度の上昇が認めら
れた。これより、テアニンは、神経細胞内のグルタミン
酸受容体、ことにＮＭＤＡ型受容体と可逆的に結合して
細胞内Ｃａ2+濃度の上昇を引き起こし、シナプスの可塑
的変化をもたらし、記憶や学習に効果的に作用し得るこ
とが判明した。
培地だけの状態では、細胞内Ｃａ2+濃度に変化は見られ
なかった（図１）。テアニンを８００μＭ添加すると、
大きな一過性の細胞内Ｃａ2+濃度の上昇が見られた（図
２）。しかし、予めＤ−ＡＰＶを添加してＮＭＤＡ型受
容体に結合させた後にテアニンを添加すると、図１とほ
ぼ同様の結果となり細胞内Ｃａ2+濃度の上昇は認められ
なかった。さらに、神経細胞内からＤ−ＡＰＶ及びテア
ニンを一旦除去した後、再度テアニンを添加すると、図
２と同様の結果となり細胞内Ｃａ2+濃度の上昇が認めら
れた。これより、テアニンは、神経細胞内のグルタミン
酸受容体、ことにＮＭＤＡ型受容体と可逆的に結合して
細胞内Ｃａ2+濃度の上昇を引き起こし、シナプスの可塑
的変化をもたらし、記憶や学習に効果的に作用し得るこ
とが判明した。
【００２０】（実施例２）本実施例では、ラット大脳皮
質初代培養神経細胞にグルタミン酸又はグルタミン酸と
テアニンの混和液を曝露し、曝露から所定時間経過後の
細胞内Ｃａ2+濃度変動を測定することにより、グルタミ
ン酸の毒性に対するテアニンの拮抗作用を検討した。
質初代培養神経細胞にグルタミン酸又はグルタミン酸と
テアニンの混和液を曝露し、曝露から所定時間経過後の
細胞内Ｃａ2+濃度変動を測定することにより、グルタミ
ン酸の毒性に対するテアニンの拮抗作用を検討した。
【００２１】〔ラット大脳皮質細胞の培養〕上記実施例
１と同様に行った。
１と同様に行った。
【００２２】〔グルタミン酸及びテアニンの曝露〕培養
１５日目の上記培養細胞にグルタミン酸２００μＭ、グ
ルタミン酸２００μＭ＋テアニン（市販品；純度９９
％）２０μＭ、グルタミン酸２００μＭ＋テアニン１０
０μＭ、またはグルタミン酸２００μＭ＋テアニン１ｍ
Ｍにそれぞれ調製した水溶液を曝露し、曝露開始後１６
時間経過した神経細胞を一旦塩溶液で洗浄した後、再び
塩溶液で満たし、それぞれの細胞内にｆｕｒａ−２を取
り込ませて当該細胞内Ｃａ2+濃度を測定した。また、無
処理の神経細胞を用意し（以下、この無処理ものをコン
トールという。）、これについても同様に当該細胞内Ｃ
ａ2+濃度を測定した。神経細胞内のＣａ2+濃度変動は、
上記実施例１と同様に、１９８６年にＫｕｄｏらの開発
した細胞内Ｃａ2+濃度多点同時観察装置を用いて測定
し、この結果を以下の表１に示した。
１５日目の上記培養細胞にグルタミン酸２００μＭ、グ
ルタミン酸２００μＭ＋テアニン（市販品；純度９９
％）２０μＭ、グルタミン酸２００μＭ＋テアニン１０
０μＭ、またはグルタミン酸２００μＭ＋テアニン１ｍ
Ｍにそれぞれ調製した水溶液を曝露し、曝露開始後１６
時間経過した神経細胞を一旦塩溶液で洗浄した後、再び
塩溶液で満たし、それぞれの細胞内にｆｕｒａ−２を取
り込ませて当該細胞内Ｃａ2+濃度を測定した。また、無
処理の神経細胞を用意し（以下、この無処理ものをコン
トールという。）、これについても同様に当該細胞内Ｃ
ａ2+濃度を測定した。神経細胞内のＣａ2+濃度変動は、
上記実施例１と同様に、１９８６年にＫｕｄｏらの開発
した細胞内Ｃａ2+濃度多点同時観察装置を用いて測定
し、この結果を以下の表１に示した。
【００２３】
【表１】
【００２４】〔結果〕コントロールでは全ウエルにおい
て細胞内Ｃａ2+濃度変動が見られたが、グルタミン酸の
みを投与した場合には半分のウエルにしか細胞内Ｃａ2+
濃度変動が見られなかった。一方、グルタミン酸とテア
ニンとを同時に投与すると、グルタミン酸単独投与に比
して多くのウエルで細胞内Ｃａ2+濃度変動が見られ、特
にグルタミン酸２００μＭに対してテアニン１００μＭ
となるように調製した混和液を投与した場合には９割弱
のウエルにおいて細胞内Ｃａ2+濃度変動が見られた。こ
れより、テアニンにはグルタミン酸の毒性を抑制する作
用があることが判明した。
て細胞内Ｃａ2+濃度変動が見られたが、グルタミン酸の
みを投与した場合には半分のウエルにしか細胞内Ｃａ2+
濃度変動が見られなかった。一方、グルタミン酸とテア
ニンとを同時に投与すると、グルタミン酸単独投与に比
して多くのウエルで細胞内Ｃａ2+濃度変動が見られ、特
にグルタミン酸２００μＭに対してテアニン１００μＭ
となるように調製した混和液を投与した場合には９割弱
のウエルにおいて細胞内Ｃａ2+濃度変動が見られた。こ
れより、テアニンにはグルタミン酸の毒性を抑制する作
用があることが判明した。
【００２５】（実施例３）本実施例では、ラット大脳皮
質初代培養神経細胞にグルタミン酸、グルタミン酸とテ
アニンの混和液をそれぞれ一定時間曝露した後、当該神
経細胞からグルタミン酸を取り除き、その後の細胞内Ｃ
ａ2+濃度変動を経時的に測定することにより、グルタミ
ン酸の毒性がもたらす遅発性神経細胞死に対するテアニ
ンの拮抗作用を検討した。
質初代培養神経細胞にグルタミン酸、グルタミン酸とテ
アニンの混和液をそれぞれ一定時間曝露した後、当該神
経細胞からグルタミン酸を取り除き、その後の細胞内Ｃ
ａ2+濃度変動を経時的に測定することにより、グルタミ
ン酸の毒性がもたらす遅発性神経細胞死に対するテアニ
ンの拮抗作用を検討した。
【００２６】〔ラット大脳皮質細胞の培養〕上記実施例
１と同様に行った。
１と同様に行った。
【００２７】〔グルタミン酸及びテアニンの曝露〕培養
７日目の大脳皮質細胞の培養液を、無添加、グルタミン
酸１００μＭ、グルタミン酸１００μＭ＋テアニン（市
販品；純度９９％）１００μＭ、またはグルタミン酸１
００μＭ＋テアニン１０００μＭの４系列を設定して１
時間曝露した。曝露後それぞれの培養液で２回洗浄した
後、再び培養液に戻し、その後それぞれについて当該細
胞内Ｃａ2+濃度を経時的に測定すると共に、曝露後１週
間経過後にそれぞれの培養神経細胞を免疫組織化学的に
染色しその状態を観察した。
７日目の大脳皮質細胞の培養液を、無添加、グルタミン
酸１００μＭ、グルタミン酸１００μＭ＋テアニン（市
販品；純度９９％）１００μＭ、またはグルタミン酸１
００μＭ＋テアニン１０００μＭの４系列を設定して１
時間曝露した。曝露後それぞれの培養液で２回洗浄した
後、再び培養液に戻し、その後それぞれについて当該細
胞内Ｃａ2+濃度を経時的に測定すると共に、曝露後１週
間経過後にそれぞれの培養神経細胞を免疫組織化学的に
染色しその状態を観察した。
【００２８】〔神経細胞内Ｃａ2+濃度変動の測定〕上記
実施例１と同様、培養細胞の培地を塩溶液に換え、細胞
内にｆｕｒａ−２を取り込ませ、１９８６年にＫｕｄｏ
らの開発した細胞内Ｃａ2+濃度多点同時観察装置を用い
て、神経細胞の細胞内Ｃａ2+濃度変動を測定した。この
結果を、以下の表２に示した。なお、表２における単位
は×１０-2Ｈｚ。
実施例１と同様、培養細胞の培地を塩溶液に換え、細胞
内にｆｕｒａ−２を取り込ませ、１９８６年にＫｕｄｏ
らの開発した細胞内Ｃａ2+濃度多点同時観察装置を用い
て、神経細胞の細胞内Ｃａ2+濃度変動を測定した。この
結果を、以下の表２に示した。なお、表２における単位
は×１０-2Ｈｚ。
【００２９】
【表２】
【００３０】〔神経細胞の免疫組織化学的染色〕培養細
胞を４％パラフォルムアルデヒドにて固定後、メタノー
ル酢酸溶液処理して細胞膜を破壊し、非特異的結合部位
を４％ＢＳＡにてマスキングした。これにまず希釈した
一次抗体を加え３７℃で１〜２時間インキュベートして
反応させた後、希釈した二次抗体を加えて同条件で反応
させ、更に発色剤を加えて同条件で反応させた。これに
カバーガラスをかけて封入剤を充填し、遮光して−４℃
にて乾燥させ、それぞれ顕微鏡写真（図３〜図６）を撮
影した。以下の表３には今回用いた抗原と抗体及び発色
剤との組合せを示す。
胞を４％パラフォルムアルデヒドにて固定後、メタノー
ル酢酸溶液処理して細胞膜を破壊し、非特異的結合部位
を４％ＢＳＡにてマスキングした。これにまず希釈した
一次抗体を加え３７℃で１〜２時間インキュベートして
反応させた後、希釈した二次抗体を加えて同条件で反応
させ、更に発色剤を加えて同条件で反応させた。これに
カバーガラスをかけて封入剤を充填し、遮光して−４℃
にて乾燥させ、それぞれ顕微鏡写真（図３〜図６）を撮
影した。以下の表３には今回用いた抗原と抗体及び発色
剤との組合せを示す。
【００３１】
【表３】
【００３２】〔結果〕表２の結果より、グルタミン酸１
００μＭ曝露した神経細胞では、洗浄後も時間経過とと
もにＣａ2+濃度変動の頻度が減少したのに比べ、グルタ
ミン酸１００μＭ＋テアニン１０００μＭを曝露した神
経細胞は、Ｃａ2+濃度変動頻度の減少が顕著に抑えられ
ている。
００μＭ曝露した神経細胞では、洗浄後も時間経過とと
もにＣａ2+濃度変動の頻度が減少したのに比べ、グルタ
ミン酸１００μＭ＋テアニン１０００μＭを曝露した神
経細胞は、Ｃａ2+濃度変動頻度の減少が顕著に抑えられ
ている。
【００３３】また、顕微鏡写真（図３〜図６）の結果よ
り、コントロールでは神経細胞は突起を良く伸ばし神経
回路網を形成していることが確認できる（図３）。グル
タミン酸のみ曝露したものは細胞の輪郭がはっきりせ
ず、かなりダメージを受けている様子が観察できる（図
４）。これに対し、グルタミン酸１００μＭ＋テアニン
１００μＭを曝露した神経細胞にダメージは見られない
（図５）。また、グルタミン酸１００μＭ＋テアニン１
０００μＭを曝露した神経細胞は突起も良く伸びてお
り、神経回路網が良く形成されていることが分かった
（図６）。なお、表２の結果の中ではグルタミン酸１０
０μＭ＋テアニン１００μＭを曝露した神経細胞では、
Ｃａ2+濃度変動頻度が減少してしまっているが、上述の
ように図５を見れば、形態的にはグルタミン酸の毒性を
抑制していることが分かる。
り、コントロールでは神経細胞は突起を良く伸ばし神経
回路網を形成していることが確認できる（図３）。グル
タミン酸のみ曝露したものは細胞の輪郭がはっきりせ
ず、かなりダメージを受けている様子が観察できる（図
４）。これに対し、グルタミン酸１００μＭ＋テアニン
１００μＭを曝露した神経細胞にダメージは見られない
（図５）。また、グルタミン酸１００μＭ＋テアニン１
０００μＭを曝露した神経細胞は突起も良く伸びてお
り、神経回路網が良く形成されていることが分かった
（図６）。なお、表２の結果の中ではグルタミン酸１０
０μＭ＋テアニン１００μＭを曝露した神経細胞では、
Ｃａ2+濃度変動頻度が減少してしまっているが、上述の
ように図５を見れば、形態的にはグルタミン酸の毒性を
抑制していることが分かる。
【００３４】このことから、グルタミン酸曝露時にテア
ニンが同時に存在すると、グルタミン酸１００μＭに対
しテアニン１００μＭ程度でグルタミン酸の神経毒性を
抑制できる。すなわち、テアニンにはグルタミン酸の遅
発性毒性に対する抑制作用がり、遅発性神経細胞死から
神経細胞を救うことができ、さらに、グルタミン酸１０
０μＭに対しテアニン１０００μＭ添加した場合には、
前述の効果に加えて神経細胞や神経膠細胞の生存維持に
まで貢献し、神経回路網の損傷を修復して正常な神経回
路網に戻す効果があることが分かった。
ニンが同時に存在すると、グルタミン酸１００μＭに対
しテアニン１００μＭ程度でグルタミン酸の神経毒性を
抑制できる。すなわち、テアニンにはグルタミン酸の遅
発性毒性に対する抑制作用がり、遅発性神経細胞死から
神経細胞を救うことができ、さらに、グルタミン酸１０
０μＭに対しテアニン１０００μＭ添加した場合には、
前述の効果に加えて神経細胞や神経膠細胞の生存維持に
まで貢献し、神経回路網の損傷を修復して正常な神経回
路網に戻す効果があることが分かった。
【００３５】
【発明の効果】以上の結果より、脳虚血などにより脳内
グルタミン酸の著しい上昇が生じた場合に、本発明のグ
ルタミン酸拮抗剤を経口投与、血中投与、直接投与その
他の手段により脳神経細胞に投与すれば、グルタミン酸
の毒性を有効に抑制することができ、特に死んだ細胞か
ら流出したグルタミン酸の毒性がもたらす遅発性神経細
胞死を抑制することができるから神経細胞死の拡大を停
止させることができる。したがって、グルタミン酸に起
因する脳障害、例えば脳梗塞や脳出血などの脳卒中、脳
手術や脳損傷に伴う脳虚血の治療に有効である。
グルタミン酸の著しい上昇が生じた場合に、本発明のグ
ルタミン酸拮抗剤を経口投与、血中投与、直接投与その
他の手段により脳神経細胞に投与すれば、グルタミン酸
の毒性を有効に抑制することができ、特に死んだ細胞か
ら流出したグルタミン酸の毒性がもたらす遅発性神経細
胞死を抑制することができるから神経細胞死の拡大を停
止させることができる。したがって、グルタミン酸に起
因する脳障害、例えば脳梗塞や脳出血などの脳卒中、脳
手術や脳損傷に伴う脳虚血の治療に有効である。
【００３６】また、本発明の神経細胞死予防剤は、ＮＭ
ＤＡ型グルタミン酸受容体を遮断することができ、グル
タミン酸の過剰な興奮が神経細胞に伝達するのを阻止す
ることができるから、これより神経細胞死を予防するこ
とができる。したがって、グルタミン酸に起因する脳障
害、例えば脳梗塞や脳出血などの脳卒中、脳手術や脳損
傷に伴う脳虚血の予防にも有効である。
ＤＡ型グルタミン酸受容体を遮断することができ、グル
タミン酸の過剰な興奮が神経細胞に伝達するのを阻止す
ることができるから、これより神経細胞死を予防するこ
とができる。したがって、グルタミン酸に起因する脳障
害、例えば脳梗塞や脳出血などの脳卒中、脳手術や脳損
傷に伴う脳虚血の予防にも有効である。
【００３７】これらの効果は、テアニンはグルタミン酸
と同様にＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体に対するアゴニ
スト作用をもつが、その作用はグルタミン酸に比べてか
なり弱いため、グルタミン酸とテアニンとが併存する場
合にはＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体に対して競争的に
作用し、グルタミン酸の神経毒性を抑制するものと考え
ることができる。また、テアニンの神経細胞並びにグリ
ア細胞に対する保護効果もこれに寄与しているものと考
えることができる。
と同様にＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体に対するアゴニ
スト作用をもつが、その作用はグルタミン酸に比べてか
なり弱いため、グルタミン酸とテアニンとが併存する場
合にはＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体に対して競争的に
作用し、グルタミン酸の神経毒性を抑制するものと考え
ることができる。また、テアニンの神経細胞並びにグリ
ア細胞に対する保護効果もこれに寄与しているものと考
えることができる。
【００３８】なお、テアニンは、現在食品添加物として
認可され、かつ日常的に摂取されているものであるか
ら、安全性に問題がないことも明らかである。
認可され、かつ日常的に摂取されているものであるか
ら、安全性に問題がないことも明らかである。
【図面の簡単な説明】
【図１】神経細胞に何も添加しない場合の神経細胞内Ｃ
ａ2+濃度の経時変化を示したグラフである。
ａ2+濃度の経時変化を示したグラフである。
【図２】神経細胞にテアニン８００μＭ添加した場合の
神経細胞Ｃａ2+濃度の経時変化を示したグラフである。
神経細胞Ｃａ2+濃度の経時変化を示したグラフである。
【図３】無添加の培養液で１時間曝露し、曝露後１週間
経過した神経細胞の状態を示した顕微鏡写真である。
経過した神経細胞の状態を示した顕微鏡写真である。
【図４】グルタミン酸１００μＭを添加した培養液で１
時間曝露し、曝露後１週間経過した神経細胞の状態を示
した顕微鏡写真である。
時間曝露し、曝露後１週間経過した神経細胞の状態を示
した顕微鏡写真である。
【図５】グルタミン酸１００μＭ＋テアニン１００μＭ
を添加した培養液で１時間曝露し、曝露後１週間経過し
た神経細胞の状態を示した顕微鏡写真である。
を添加した培養液で１時間曝露し、曝露後１週間経過し
た神経細胞の状態を示した顕微鏡写真である。
【図６】グルタミン酸１００μＭ＋テアニン１０００μ
Ｍを添加した培養液で１時間曝露し、曝露後１週間経過
した神経細胞の状態を示した顕微鏡写真である。
Ｍを添加した培養液で１時間曝露し、曝露後１週間経過
した神経細胞の状態を示した顕微鏡写真である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 坂根 巌 静岡県榛原郡相良町女神21 株式会社伊藤 園中央研究所内 (72)発明者 黒田 洋一郎 東京都武蔵野市関前５−21−５
Claims (4)
- 【請求項１】 テアニンを有効成分として含有するグル
タミン酸拮抗剤。 - 【請求項２】 経口投与剤としたことを特徴とする請求
項１に記載のグルタミン酸拮抗剤。 - 【請求項３】 テアニンを有効成分として含有し、グル
タミン酸受容体遮断作用を特徴とする神経細胞死予防
剤。 - 【請求項４】 経口投与剤としたことを特徴とする請求
項３に記載の神経細胞死予防剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12641996A JP3808130B2 (ja) | 1996-04-23 | 1996-04-23 | グルタミン酸拮抗剤及び神経細胞死予防剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12641996A JP3808130B2 (ja) | 1996-04-23 | 1996-04-23 | グルタミン酸拮抗剤及び神経細胞死予防剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09286727A true JPH09286727A (ja) | 1997-11-04 |
| JP3808130B2 JP3808130B2 (ja) | 2006-08-09 |
Family
ID=14934713
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12641996A Expired - Lifetime JP3808130B2 (ja) | 1996-04-23 | 1996-04-23 | グルタミン酸拮抗剤及び神経細胞死予防剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3808130B2 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0912454A (ja) * | 1995-06-27 | 1997-01-14 | Taiyo Kagaku Co Ltd | テアニン含有組成物 |
| JP2000229854A (ja) * | 1999-02-15 | 2000-08-22 | Ito En Ltd | 虚血性神経細胞死治療・予防用脳室内投与剤、血管性痴呆症治療・予防用脳室内投与剤、並びに脳内手術時投与剤 |
| WO2004002488A1 (ja) * | 2002-06-28 | 2004-01-08 | Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. | 脳出血治療剤 |
| JP2007204417A (ja) * | 2006-02-01 | 2007-08-16 | Shiseido Co Ltd | 不全角化抑制剤、毛穴縮小剤 |
| JP2008169143A (ja) * | 2007-01-11 | 2008-07-24 | Ito En Ltd | テアニン含有神経細胞新生促進組成物及び飲食物 |
| JP2018118928A (ja) * | 2017-01-26 | 2018-08-02 | 株式会社ファンケル | テアニンの吸収性が改善された組成物 |
| CN116672332A (zh) * | 2023-05-22 | 2023-09-01 | 浙江大学 | L-茶氨酸在制备血管新生促进剂中的应用 |
-
1996
- 1996-04-23 JP JP12641996A patent/JP3808130B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0912454A (ja) * | 1995-06-27 | 1997-01-14 | Taiyo Kagaku Co Ltd | テアニン含有組成物 |
| JP2000229854A (ja) * | 1999-02-15 | 2000-08-22 | Ito En Ltd | 虚血性神経細胞死治療・予防用脳室内投与剤、血管性痴呆症治療・予防用脳室内投与剤、並びに脳内手術時投与剤 |
| WO2004002488A1 (ja) * | 2002-06-28 | 2004-01-08 | Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. | 脳出血治療剤 |
| JP2007204417A (ja) * | 2006-02-01 | 2007-08-16 | Shiseido Co Ltd | 不全角化抑制剤、毛穴縮小剤 |
| JP2008169143A (ja) * | 2007-01-11 | 2008-07-24 | Ito En Ltd | テアニン含有神経細胞新生促進組成物及び飲食物 |
| JP2018118928A (ja) * | 2017-01-26 | 2018-08-02 | 株式会社ファンケル | テアニンの吸収性が改善された組成物 |
| CN116672332A (zh) * | 2023-05-22 | 2023-09-01 | 浙江大学 | L-茶氨酸在制备血管新生促进剂中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3808130B2 (ja) | 2006-08-09 |
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