JPH0856652A - 環状Ｓ−α−アミノカルボン酸およびＲ−α−アミノカルボキサミドの生物工学的製造方法 - Google Patents
環状Ｓ−α−アミノカルボン酸およびＲ−α−アミノカルボキサミドの生物工学的製造方法Info
- Publication number
- JPH0856652A JPH0856652A JP7140684A JP14068495A JPH0856652A JP H0856652 A JPH0856652 A JP H0856652A JP 7140684 A JP7140684 A JP 7140684A JP 14068495 A JP14068495 A JP 14068495A JP H0856652 A JPH0856652 A JP H0856652A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- aminocarboxamide
- formula
- alpha
- acid
- microorganisms
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
- C12P17/12—Nitrogen as only ring hetero atom containing a six-membered hetero ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/006—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/22—Klebsiella
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/38—Pseudomonas
- C12R2001/39—Pseudomonas fluorescens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/38—Pseudomonas
- C12R2001/40—Pseudomonas putida
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/852—Klebsiella
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
- Y10S435/876—Pseudomonas fluorescens
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
- Y10S435/877—Pseudomonas putida
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/878—Rhizobium
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 一般式Ｉ
〔式中、Ａは、−ＮＨおよび−ＣＨ−とともに、場合に
より置換された、５員または６員の飽和複素環式環を形
成する。〕のα−アミノカルボキサミドからの、一般式
ＩＩ のＳ−α−アミノカルボン酸の製造。 【構成】 α−アミノカルボキサミドをそのラセミ化合
物またはその光学活性異性体の形態で、唯一の窒素源と
して利用する能力がある微生物を利用する。
より置換された、５員または６員の飽和複素環式環を形
成する。〕のα−アミノカルボキサミドからの、一般式
ＩＩ のＳ−α−アミノカルボン酸の製造。 【構成】 α−アミノカルボキサミドをそのラセミ化合
物またはその光学活性異性体の形態で、唯一の窒素源と
して利用する能力がある微生物を利用する。
Description
【０００１】本発明は、一般式
【０００２】
【化６】
【０００３】〔式中、Ａは、−ＮＨおよび−ＣＨ−とと
もに、場合により置換された、５員または６員の飽和複
素環式環を形成する。〕のラセミ化合物またはその光学
活性異性体の形態の、α−アミノカルボキサミドを唯一
の窒素源として利用することができ、かつ、上に定義し
た式Ｉの（ＲＳ）−α−アミノカルボキサミドを、一般
式
もに、場合により置換された、５員または６員の飽和複
素環式環を形成する。〕のラセミ化合物またはその光学
活性異性体の形態の、α−アミノカルボキサミドを唯一
の窒素源として利用することができ、かつ、上に定義し
た式Ｉの（ＲＳ）−α−アミノカルボキサミドを、一般
式
【０００４】
【化７】
【０００５】〔式中、Ａは前述した意味をもつ。〕のＳ
−α−アミノカルボン酸に転化する能力を有する新規な
微生物に関する。これらの微生物およびそれらの細胞を
除いた酵素は、Ｓ−α−アミノカルボン酸（式II）およ
び（または）一般式
−α−アミノカルボン酸に転化する能力を有する新規な
微生物に関する。これらの微生物およびそれらの細胞を
除いた酵素は、Ｓ−α−アミノカルボン酸（式II）およ
び（または）一般式
【０００６】
【化８】
【０００７】〔式中、Ａは前述した意味をもつ。〕のＲ
−α−アミノカルボキサミドを製造する新規な方法に使
用される。
−α−アミノカルボキサミドを製造する新規な方法に使
用される。
【０００８】式IIのＳ−α−アミノカルボン酸、たとえ
ばＳ−α−ピペコール酸は、多数の生物活性化合物、た
とえば、チオリダジンまたはピプラドール（Ng-Youn-Ch
enet al., J. Org. Chem., Vol.59, No.8, 1994）を製
造するための、重要な中間体である。
ばＳ−α−ピペコール酸は、多数の生物活性化合物、た
とえば、チオリダジンまたはピプラドール（Ng-Youn-Ch
enet al., J. Org. Chem., Vol.59, No.8, 1994）を製
造するための、重要な中間体である。
【０００９】（ＲＳ）−ピペコール酸およびその誘導体
のラセミ化合物の分割について、多数の化学的な方法に
加えて、生物工学的なラセミ化合物分割法も知られてい
る。たとえば、Huh et al.（Biosci., Biotech. Bioche
m., 56(12), 2081-2082)が、（ＲＳ）−ピペコール酸の
ラセミ化合物を、Ｒ−アミノ酸オキシダーゼを用いて分
割する方法を記述している。 これは、Ｒ−異性体のΔ
1 −ピペリジン−２−カルボン酸への特殊な酸化、結果
的としてＳ−ピペコール酸を与える酸化を意味する。
Δ1−ピペリジン−２−カルボン酸の（ＲＳ)−ピペコー
ル酸への化学的な還元の後、Ｒ−アミノ酸オキシダーゼ
を作用させれば、結果的に再びＳ−ピペコール酸にな
る。 これはＲ−ピペコール酸の含有量がたえず減少す
ることを伴う。 これに類似のＳ−プロリンの製造方法
が、J. Ferm. Bioeng., 74, 189-190, 1992 に記述され
ている。 しかしながら、これら二つの方法には、工業
的な規模では実施可能でない、という不利益がある。
もうひとつの不利益は、精製したＲ−アミノ酸オキシダ
ーゼを用いなければならないということである。
のラセミ化合物の分割について、多数の化学的な方法に
加えて、生物工学的なラセミ化合物分割法も知られてい
る。たとえば、Huh et al.（Biosci., Biotech. Bioche
m., 56(12), 2081-2082)が、（ＲＳ）−ピペコール酸の
ラセミ化合物を、Ｒ−アミノ酸オキシダーゼを用いて分
割する方法を記述している。 これは、Ｒ−異性体のΔ
1 −ピペリジン−２−カルボン酸への特殊な酸化、結果
的としてＳ−ピペコール酸を与える酸化を意味する。
Δ1−ピペリジン−２−カルボン酸の（ＲＳ)−ピペコー
ル酸への化学的な還元の後、Ｒ−アミノ酸オキシダーゼ
を作用させれば、結果的に再びＳ−ピペコール酸にな
る。 これはＲ−ピペコール酸の含有量がたえず減少す
ることを伴う。 これに類似のＳ−プロリンの製造方法
が、J. Ferm. Bioeng., 74, 189-190, 1992 に記述され
ている。 しかしながら、これら二つの方法には、工業
的な規模では実施可能でない、という不利益がある。
もうひとつの不利益は、精製したＲ−アミノ酸オキシダ
ーゼを用いなければならないということである。
【００１０】さらに、ラセミ体のピペコールエステル
は、アスペルギルス・ニゲルから得られるリパーゼの作
用により、Ｓ−ピペコール酸およびＲ−ピペコールエス
テル（Ng-Youn-Chenet al., 1994, ibid）に転化され
る。 しかしながら、この方法には、Ｓ−ピペコール酸
がｅｅ＝９３％のエナンチオマー純度でしか得られない
という不利益がある。
は、アスペルギルス・ニゲルから得られるリパーゼの作
用により、Ｓ−ピペコール酸およびＲ−ピペコールエス
テル（Ng-Youn-Chenet al., 1994, ibid）に転化され
る。 しかしながら、この方法には、Ｓ−ピペコール酸
がｅｅ＝９３％のエナンチオマー純度でしか得られない
という不利益がある。
【００１１】本発明の目的は、環状Ｓ−α−アミノカル
ボン酸を製造することができる、簡単で、工業的に実施
可能な生物工学的製法であって、高いエナンチオマー純
度で生成物を分離することができる製造方法を提供する
ことにある。
ボン酸を製造することができる、簡単で、工業的に実施
可能な生物工学的製法であって、高いエナンチオマー純
度で生成物を分離することができる製造方法を提供する
ことにある。
【００１２】この目的は、請求項１に記載の微生物を使
用し、請求項５の方法を用いることにより達成される。
用し、請求項５の方法を用いることにより達成される。
【００１３】本発明の微生物は、土壌サンプル、汚泥ま
たは廃水から、常用の微生物学的技術の助けを借りて単
離することができる。 これらの微生物は、本発明に従
って ａ）α−アミノカルボキサミド（式Ｉ）をラセミ化合物
またはその光学活性異性体の形態で、唯一の窒素源とし
て、適当な炭素源とともに含む培養基中で、常用の方法
に従ってそれらの微生物を培養し、 ｂ）その後、培養により得られた培養物から、安定であ
って（ＲＳ）−α−アミノカルボキサミド（式Ｉ）をＳ
−α−アミノカルボン酸（式II）へ転化することができ
る微生物を選択すること、によって単離される。
たは廃水から、常用の微生物学的技術の助けを借りて単
離することができる。 これらの微生物は、本発明に従
って ａ）α−アミノカルボキサミド（式Ｉ）をラセミ化合物
またはその光学活性異性体の形態で、唯一の窒素源とし
て、適当な炭素源とともに含む培養基中で、常用の方法
に従ってそれらの微生物を培養し、 ｂ）その後、培養により得られた培養物から、安定であ
って（ＲＳ）−α−アミノカルボキサミド（式Ｉ）をＳ
−α−アミノカルボン酸（式II）へ転化することができ
る微生物を選択すること、によって単離される。
【００１４】従って、これらとくにＳ−アミノ酸アミダ
ーゼを含む微生物を、すべて使用することができる。
ピペラジンカルボキサミドまたはピペコールアミドを、
ラセミ化合物またはその光学活性異性体の形態で、唯一
の窒素源として利用する微生物を選択することが望まし
い。 とくに、Ｓ−ピペラジンカルボキサミドまたはＳ
−ピペコールアミドを唯一の窒素源として利用する微生
物を選択することが好ましい。
ーゼを含む微生物を、すべて使用することができる。
ピペラジンカルボキサミドまたはピペコールアミドを、
ラセミ化合物またはその光学活性異性体の形態で、唯一
の窒素源として利用する微生物を選択することが望まし
い。 とくに、Ｓ−ピペラジンカルボキサミドまたはＳ
−ピペコールアミドを唯一の窒素源として利用する微生
物を選択することが好ましい。
【００１５】これら微生物は、炭素源として、たとえ
ば、糖、シュガーアルコール、カルボン酸またはアルコ
ールを、成長基として利用することができる。 使用で
きる糖は、ヘキソースたとえばグルコース、またはペン
トースである。 使用できるカルボン酸は、ジカルボン
酸またはトリカルボン酸またはそれらの塩、たとえば、
クエン酸またはコハク酸またはそれらの塩である。 ア
ルコールとしては、三価アルコール、たとえばグリセロ
ールを使用することができる。 グリセロールのような
三価アルコールを炭素源として使用することが好まし
い。
ば、糖、シュガーアルコール、カルボン酸またはアルコ
ールを、成長基として利用することができる。 使用で
きる糖は、ヘキソースたとえばグルコース、またはペン
トースである。 使用できるカルボン酸は、ジカルボン
酸またはトリカルボン酸またはそれらの塩、たとえば、
クエン酸またはコハク酸またはそれらの塩である。 ア
ルコールとしては、三価アルコール、たとえばグリセロ
ールを使用することができる。 グリセロールのような
三価アルコールを炭素源として使用することが好まし
い。
【００１６】選択用培養基および培養基は、当業者が通
常使用しているもの、たとえば、Kulla et al（Arch. M
icrobiol., 135, 1-7, 1983)のミネラル塩基や、後に示
す表１に掲げたものが使用可能である。 表１に掲げた
ものを使用することが好ましい。
常使用しているもの、たとえば、Kulla et al（Arch. M
icrobiol., 135, 1-7, 1983)のミネラル塩基や、後に示
す表１に掲げたものが使用可能である。 表１に掲げた
ものを使用することが好ましい。
【００１７】微生物の活性酵素は、培養および選択の間
に誘導されるのが好都合である。酵素誘導物としては、
たとえば、ピペラジンカルボキサミド、ピペコールアミ
ドまたはアセトアミドを使用することができる。
に誘導されるのが好都合である。酵素誘導物としては、
たとえば、ピペラジンカルボキサミド、ピペコールアミ
ドまたはアセトアミドを使用することができる。
【００１８】培養および選択が好都合に行なわれるの
は、温度は１５℃〜５０℃の範囲であって、２０℃〜４
５℃が好ましく、ｐＨは５〜１０の間、とくに６〜９の
間が好ましい。
は、温度は１５℃〜５０℃の範囲であって、２０℃〜４
５℃が好ましく、ｐＨは５〜１０の間、とくに６〜９の
間が好ましい。
【００１９】特定のＳ−アミノ酸アミダーゼ活性をもつ
好ましい微生物は、ピペラジンカルボキサミドを利用す
るクレブシエラ属の微生物で、とくに寄託番号ＤＳＭ９
１７５およびＤＳＭ９１７６のクレブシエラ・ニューモ
ニア種または寄託番号ＤＳＭ９１７４のクレブシエラ・
テリゲナ種、ならびにそれらの機能的に等価の変種およ
び突然変異種である。 これらの微生物は、ブダペスト
条約に従い、ブラウンシュヴァイク Ｄ−３８１２４ マ
シェロダーヴェク １ｂ の、ドイチェ・ザムルング・フ
ォン・ミクロオルガニズメン・ウント・ツェルクルトゥ
レン・ＧｍｂＨに、１９９４年４月２５日に寄託され
た。
好ましい微生物は、ピペラジンカルボキサミドを利用す
るクレブシエラ属の微生物で、とくに寄託番号ＤＳＭ９
１７５およびＤＳＭ９１７６のクレブシエラ・ニューモ
ニア種または寄託番号ＤＳＭ９１７４のクレブシエラ・
テリゲナ種、ならびにそれらの機能的に等価の変種およ
び突然変異種である。 これらの微生物は、ブダペスト
条約に従い、ブラウンシュヴァイク Ｄ−３８１２４ マ
シェロダーヴェク １ｂ の、ドイチェ・ザムルング・フ
ォン・ミクロオルガニズメン・ウント・ツェルクルトゥ
レン・ＧｍｂＨに、１９９４年４月２５日に寄託され
た。
【００２０】さらに好適な微生物は、ピペコールアミド
を利用するシュードモナス属の微生物で、とくに寄託番
号ＤＳＭ９９２３のシュードモナス・プチダ種または寄
託番号ＤＳＭ９９２４のシュードモナス・フルオレセン
ス種、ならびにそれらの機能的に等価の変種および突然
変異種である。 これらの微生物は、ブダペスト条約に
従い、ブラウンシュヴァイク Ｄ−３８１２４ マシェロ
ダーヴェク １ｂ の、ドイチェ・ザムルング・フォン・
ミクロオルガニズメン・ウント・ツェルクルトゥレン・
ＧｍｂＨ に、１９９４年４月２０日に寄託された。
を利用するシュードモナス属の微生物で、とくに寄託番
号ＤＳＭ９９２３のシュードモナス・プチダ種または寄
託番号ＤＳＭ９９２４のシュードモナス・フルオレセン
ス種、ならびにそれらの機能的に等価の変種および突然
変異種である。 これらの微生物は、ブダペスト条約に
従い、ブラウンシュヴァイク Ｄ−３８１２４ マシェロ
ダーヴェク １ｂ の、ドイチェ・ザムルング・フォン・
ミクロオルガニズメン・ウント・ツェルクルトゥレン・
ＧｍｂＨ に、１９９４年４月２０日に寄託された。
【００２１】「機能的に等価の変種および突然変異種」
の語句は、もとの微生物と同じ特性および機能を本質的
にもつ微生物を意味する。 このタイプの変種および突
然変異種は、偶然に、たとえばＵＶ照射によって生じ
る。
の語句は、もとの微生物と同じ特性および機能を本質的
にもつ微生物を意味する。 このタイプの変種および突
然変異種は、偶然に、たとえばＵＶ照射によって生じ
る。
【００２２】 クレブシエラ・ニューモニアとして同定された微生物ＤＳＭ９１７５の科学的 な記述 株の特性 細胞形状 棒状 幅 μｍ ０．８〜１．０ 長さ μｍ １．０〜３．０ 運動性 − グラム反応 − ３％ＫＯＨによるリーシス ＋ アミノペプチダーゼ(Cerny) ＋ 胞子 − オキシダーゼ − カタラーゼ ＋ 成長 嫌気的 ＋ (ＯＦテスト）からの酸 グルコース好気的 ＋ グルコース嫌気的 ＋ グルコースからのガス ＋ (ＡＳＡ）からの酸 グルコース ＋ フルクトース ＋ キシロース ＋ エリトリトール − アドニトール ＋ Ｄ−マンノース ＋ Ｌ−ラムノース ＋ ズルシトール − イノシトール ＋ ソルビトール ＋ α−メチル−Ｄ−グルコシド ＋ セロビオース ＋ マルトース ＋ ラクトーゼ ＋ Ｌ−ソルボース ＋ Ｌ−フコース − Ｄ−アラビトール ＋ ＯＮＰＧ ＋ ＡＤＨ − ＬＤＣ ＋ ＯＤＣ − ＶＰ ＋ インドール − Ｈ2Ｓ生成 − シモンズクエン酸 ＋ フェニルアラニンデアミナーゼ − 短縮形 ウレアーゼ − ＡＳＡ＝アセチルサリチル酸 ゼラチンの加水分解 − ＯＦ＝酸化発酵 ＤＮＡ − ＯＮＰＧ＝Ｏ−ニトロフェニルガラク トシダーゼ ＡＤＨ＝アルコールデヒドロゲナーゼ ＶＰ＝フォゲス プロスカウアー。
【００２３】クレブシエラ・ニューモニアとして同定さ
れた微生物ＤＳＭ９１７６の科学的な記述 株の特性 細胞形状 棒状 幅 μｍ ０．８〜１．０ 長さ μｍ １．０〜３．０ 運動性 − グラム反応 − ３％ＫＯＨによるリーシス ＋ アミノペプチダーゼ(Cerny) ＋ 胞子 − オキシダーゼ − カタラーゼ ＋ 成長 嫌気的 ＋ (ＯＦテスト）からの酸 グルコース好気的 ＋ グルコース嫌気的 ＋ グルコースからのガス ＋ (ＡＳＡ）からの酸 グルコース ＋ フルクトース ＋ キシロース ＋ エリトリトール − アドニトール ＋ Ｄ−マンノース ＋ Ｌ−ラムノース ＋ ズルシトール − イノシトール ＋ ソルビトール ＋ α−メチル−Ｄ−グルコシド ＋ セロビオース ＋ マルトース ＋ ラクトーゼ ＋ Ｌ−ソルボース − Ｌ−フコース ＋ Ｄ−アラビトール ＋ ＯＮＰＧ ＋ ＡＤＨ − ＬＤＣ ＋ ＯＤＣ − ＶＰ ＋ インドール − Ｈ2Ｓ生成 − シモンズクエン酸 ＋ フェニルアラニンデアミナーゼ − ウレアーゼ − ゼラチンの加水分解 − ＤＮＡ −。
れた微生物ＤＳＭ９１７６の科学的な記述 株の特性 細胞形状 棒状 幅 μｍ ０．８〜１．０ 長さ μｍ １．０〜３．０ 運動性 − グラム反応 − ３％ＫＯＨによるリーシス ＋ アミノペプチダーゼ(Cerny) ＋ 胞子 − オキシダーゼ − カタラーゼ ＋ 成長 嫌気的 ＋ (ＯＦテスト）からの酸 グルコース好気的 ＋ グルコース嫌気的 ＋ グルコースからのガス ＋ (ＡＳＡ）からの酸 グルコース ＋ フルクトース ＋ キシロース ＋ エリトリトール − アドニトール ＋ Ｄ−マンノース ＋ Ｌ−ラムノース ＋ ズルシトール − イノシトール ＋ ソルビトール ＋ α−メチル−Ｄ−グルコシド ＋ セロビオース ＋ マルトース ＋ ラクトーゼ ＋ Ｌ−ソルボース − Ｌ−フコース ＋ Ｄ−アラビトール ＋ ＯＮＰＧ ＋ ＡＤＨ − ＬＤＣ ＋ ＯＤＣ − ＶＰ ＋ インドール − Ｈ2Ｓ生成 − シモンズクエン酸 ＋ フェニルアラニンデアミナーゼ − ウレアーゼ − ゼラチンの加水分解 − ＤＮＡ −。
【００２４】クレブシエラ・テリゲナとして同定された
微生物ＤＳＭ９１７４の科学的な記述 株の特性 細胞形状 棒状 幅 μｍ ０．８〜１．０ 長さ μｍ １．０〜２．０ 運動性 − グラム反応 − ３％ＫＯＨによるリーシス ＋ アミノペプチダーゼ(Cerny) ＋ 胞子 − オキシダーゼ − カタラーゼ ＋ 成長 嫌気的 ＋ (ＯＦテスト）からの酸 グルコース好気的 ＋ グルコース嫌気的 ＋ グルコースからのガス ＋ (ＡＳＡ）からの酸 グルコース ＋ フルクトース ＋ キシロース ＋ エリトリトール − アドニトール ＋ Ｄ−マンノース ＋ Ｌ−ラムノース ＋ ズルシトール − イノシトール ＋ ソルビトール ＋ α−メチル−Ｄ−グルコシド ＋ セロビオース ＋ マルトース ＋ ラクトーゼ ＋ Ｌ−ソルボース ＋ Ｌ−フコース ＋ Ｄ−アラビトール ＋ ５−ケトグルトネート ＋ ＯＮＰＧ ＋ ＡＤＨ − ＬＤＣ ＋ ＯＤＣ ＋ ＶＰ ＋ インドール − Ｈ2Ｓ生成 − シモンズクエン酸 ＋ フェニルアラニンデアミナーゼ − ウレアーゼ − ゼラチンの加水分解 − ＤＮＡ −。
微生物ＤＳＭ９１７４の科学的な記述 株の特性 細胞形状 棒状 幅 μｍ ０．８〜１．０ 長さ μｍ １．０〜２．０ 運動性 − グラム反応 − ３％ＫＯＨによるリーシス ＋ アミノペプチダーゼ(Cerny) ＋ 胞子 − オキシダーゼ − カタラーゼ ＋ 成長 嫌気的 ＋ (ＯＦテスト）からの酸 グルコース好気的 ＋ グルコース嫌気的 ＋ グルコースからのガス ＋ (ＡＳＡ）からの酸 グルコース ＋ フルクトース ＋ キシロース ＋ エリトリトール − アドニトール ＋ Ｄ−マンノース ＋ Ｌ−ラムノース ＋ ズルシトール − イノシトール ＋ ソルビトール ＋ α−メチル−Ｄ−グルコシド ＋ セロビオース ＋ マルトース ＋ ラクトーゼ ＋ Ｌ−ソルボース ＋ Ｌ−フコース ＋ Ｄ−アラビトール ＋ ５−ケトグルトネート ＋ ＯＮＰＧ ＋ ＡＤＨ − ＬＤＣ ＋ ＯＤＣ ＋ ＶＰ ＋ インドール − Ｈ2Ｓ生成 − シモンズクエン酸 ＋ フェニルアラニンデアミナーゼ − ウレアーゼ − ゼラチンの加水分解 − ＤＮＡ −。
【００２５】本発明の、一般式
【００２６】
【化９】
【００２７】〔式中、Ａは前述した意味をもつ。〕のＳ
−α−アミノカルボン酸のおよび（または）一般式
−α−アミノカルボン酸のおよび（または）一般式
【００２８】
【化１０】
【００２９】〔式中、Ａは前述した意味をもつ。〕のＲ
−α−アミノカルボキサミドの製造方法は、一般式
−α−アミノカルボキサミドの製造方法は、一般式
【００３０】
【化１１】
【００３１】〔式中、Ａは前述した意味をもつ。〕の
（ＲＳ）−α−アミノカルボキサミド中のＳ−α−アミ
ノカルボキサミドを、上に記述した特定の微生物を利用
して、またはこれらの微生物からの細胞を除いた酵素を
利用して、Ｓ−α−アミノカルボン酸に転化させ、生物
的転換の結果である、Ｓ−α−アミノカルボン酸のみな
らず適切であれば単離されるＲ−α−アミノカルボキサ
ミドをも含む生成物を分離することによって行なわれ
る。
（ＲＳ）−α−アミノカルボキサミド中のＳ−α−アミ
ノカルボキサミドを、上に記述した特定の微生物を利用
して、またはこれらの微生物からの細胞を除いた酵素を
利用して、Ｓ−α−アミノカルボン酸に転化させ、生物
的転換の結果である、Ｓ−α−アミノカルボン酸のみな
らず適切であれば単離されるＲ−α−アミノカルボキサ
ミドをも含む生成物を分離することによって行なわれ
る。
【００３２】一般式
【００３３】
【化１２】
【００３４】〔式中、Ａは、−ＮＨおよび−ＣＨととも
に、場合により置換された、５員または６員の飽和複素
環式環を形成する。〕の前駆体（ＲＳ）−α−アミノカ
ルボキサミドは、対応する芳香族アミドから、当業者に
は知られている水素化によって得ることができる。
に、場合により置換された、５員または６員の飽和複素
環式環を形成する。〕の前駆体（ＲＳ）−α−アミノカ
ルボキサミドは、対応する芳香族アミドから、当業者に
は知られている水素化によって得ることができる。
【００３５】使用することができる、一般式Ｉの５員ま
たは６員の飽和複素環式環をもつアミノカルボキサミド
は、場合により置換されたプロリンアミド、ピラゾリジ
ンカルボキサミド、イミダゾリジンカルボキサミド、オ
キサゾリジンカルボキサミド、イソキサゾリジンカルボ
キサミド、チアゾリジンカルボキサミドまたはトリアゾ
リジンカルボキサミドである。 インドリンアミドは、
たとえば、置換されたプロリンアミドとして使用するこ
とができる。
たは６員の飽和複素環式環をもつアミノカルボキサミド
は、場合により置換されたプロリンアミド、ピラゾリジ
ンカルボキサミド、イミダゾリジンカルボキサミド、オ
キサゾリジンカルボキサミド、イソキサゾリジンカルボ
キサミド、チアゾリジンカルボキサミドまたはトリアゾ
リジンカルボキサミドである。 インドリンアミドは、
たとえば、置換されたプロリンアミドとして使用するこ
とができる。
【００３６】使用することができる、一般式Ｉの５員ま
たは６員の飽和複素環式環をもつアミノカルボキサミド
は、ピペラジンカルボキサミド、ピペコールアミド、モ
ルフォリンカルボキサミド、パーヒドロキノリンカルボ
キサミド（キノリナンカルボキサミド）、パーヒドロイ
ソキノリンカルボキサミド（イソキノリナンカルボキサ
ミド）、パーヒドロキノキサリンカルボキサミド（キノ
キサリナンカルボキサミド）であり、それらは同様に場
合により置換されている。 置換された５員または６員
の飽和複素環式環をもつアミノカルボキサミドの代表例
としては、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル置換、たとえば４−メチ
ルピペコールアミド、Ｈ2Ｎ−ＣＨ2−置換、たとえば４
−アミノメチルピペコールアミド、または４−シアノピ
ペコールアミドのようなＣＮ置換が可能である。 ピペ
ラジンカルボキサミド、ピペコールアミドまたは４−メ
チルピペコールアミドを使用することが好ましい。
たは６員の飽和複素環式環をもつアミノカルボキサミド
は、ピペラジンカルボキサミド、ピペコールアミド、モ
ルフォリンカルボキサミド、パーヒドロキノリンカルボ
キサミド（キノリナンカルボキサミド）、パーヒドロイ
ソキノリンカルボキサミド（イソキノリナンカルボキサ
ミド）、パーヒドロキノキサリンカルボキサミド（キノ
キサリナンカルボキサミド）であり、それらは同様に場
合により置換されている。 置換された５員または６員
の飽和複素環式環をもつアミノカルボキサミドの代表例
としては、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル置換、たとえば４−メチ
ルピペコールアミド、Ｈ2Ｎ−ＣＨ2−置換、たとえば４
−アミノメチルピペコールアミド、または４−シアノピ
ペコールアミドのようなＣＮ置換が可能である。 ピペ
ラジンカルボキサミド、ピペコールアミドまたは４−メ
チルピペコールアミドを使用することが好ましい。
【００３７】細胞を含まないシステムの酵素は、当業者
によく知られた微生物の破壊によって得ることができ
る。 この目的のために、たとえば、超音波、フレンチ
プレスまたはリゾチーム法を使用することが可能であ
る。 これらの細胞を除いた酵素を、適切な担体上に固
定することも可能である。
によく知られた微生物の破壊によって得ることができ
る。 この目的のために、たとえば、超音波、フレンチ
プレスまたはリゾチーム法を使用することが可能であ
る。 これらの細胞を除いた酵素を、適切な担体上に固
定することも可能である。
【００３８】前述した特定の微生物でこの工程にとくに
適切なものは、クレブシエラ・テリゲナ種（ＤＳＭ９１
７４）、クレブシエラ・ニューモニア種（ＤＳＭ９１７
５およびＤＳＭ９１７６）、シュードモナス・プチダ種
（ＤＳＭ９９２３）およびシュードモナス・フルオレセ
ンス種（ＤＳＭ９９２４）ならびにそれらの細胞を除い
た酵素である。 この工程はとくに、クレブシエラ・テ
リゲナ種（ＤＳＭ９１７４)、クレブシエラ・ニューモ
ニア種（ＤＳＭ９１７５およびＤＳＭ９１７６)で実施
される。 同様に適切なのは、前述の微生物の機能的に
等価な変種および突然変異種である。
適切なものは、クレブシエラ・テリゲナ種（ＤＳＭ９１
７４）、クレブシエラ・ニューモニア種（ＤＳＭ９１７
５およびＤＳＭ９１７６）、シュードモナス・プチダ種
（ＤＳＭ９９２３）およびシュードモナス・フルオレセ
ンス種（ＤＳＭ９９２４）ならびにそれらの細胞を除い
た酵素である。 この工程はとくに、クレブシエラ・テ
リゲナ種（ＤＳＭ９１７４)、クレブシエラ・ニューモ
ニア種（ＤＳＭ９１７５およびＤＳＭ９１７６)で実施
される。 同様に適切なのは、前述の微生物の機能的に
等価な変種および突然変異種である。
【００３９】生物的転換は、常法に従った微生物の培養
の後で、休眠細胞（成長せず、また、もはや炭素または
エネルギー源を必要としなくなった細胞）または成長細
胞を用いて実施される。
の後で、休眠細胞（成長せず、また、もはや炭素または
エネルギー源を必要としなくなった細胞）または成長細
胞を用いて実施される。
【００４０】休眠細胞を用いる本プロセスの培養基とし
ては、当業者に知られたもの、たとえば、前述の Kulla
et al., 1983 (ibid)のミネラル塩、低モルリン酸塩緩
衝液、HEPES 緩衝液または表１に記述した培養基を使用
することができる。 通常、炭素源および窒素源を含む
培養基、たとえば市場で手に入る培養基、または表１に
掲げる培養基が、成長細胞を用いる本プロセスのために
使用されている。 本プロセスは、表１に示した培養基
で実施することが好ましい。
ては、当業者に知られたもの、たとえば、前述の Kulla
et al., 1983 (ibid)のミネラル塩、低モルリン酸塩緩
衝液、HEPES 緩衝液または表１に記述した培養基を使用
することができる。 通常、炭素源および窒素源を含む
培養基、たとえば市場で手に入る培養基、または表１に
掲げる培養基が、成長細胞を用いる本プロセスのために
使用されている。 本プロセスは、表１に示した培養基
で実施することが好ましい。
【００４１】生物的転換は、（ＲＳ）−α−アミノカル
ボキサミドを、培養基中の（ＲＳ）−α−アミノカルボ
キサミドの濃度が２０％重量を超えないように、好まし
くは１０％重量を超えないように、１回で、または連続
的に添加して実施することが好ましい。
ボキサミドを、培養基中の（ＲＳ）−α−アミノカルボ
キサミドの濃度が２０％重量を超えないように、好まし
くは１０％重量を超えないように、１回で、または連続
的に添加して実施することが好ましい。
【００４２】培養基のｐＨは、ｐＨ５〜１０の範囲で可
能であり、好ましくはｐＨ７〜１０である。
能であり、好ましくはｐＨ７〜１０である。
【００４３】生物的転換は、温度２５〜６５℃で実施す
るのが好都合であり、３０〜６０℃が好ましい。
るのが好都合であり、３０〜６０℃が好ましい。
【００４４】通常の反応時間１〜１００時間の後、式Ｉ
のＳ−α−アミノカルボキサミドは、完全にＳ−α−ア
ミノカルボン酸に転化され、同様に生成するＲ−α−ア
ミノカルボキサミドがこれに伴う。
のＳ−α−アミノカルボキサミドは、完全にＳ−α−ア
ミノカルボン酸に転化され、同様に生成するＲ−α−ア
ミノカルボキサミドがこれに伴う。
【００４５】この方法で得られるＳ−α−アミノカルボ
ン酸および（または）Ｒ−α−アミノカルボキサミド
は、常用の仕上げ方法、たとえば、酸性化、クロマトグ
ラフィーまたは抽出によって分離することができる。
ン酸および（または）Ｒ−α−アミノカルボキサミド
は、常用の仕上げ方法、たとえば、酸性化、クロマトグ
ラフィーまたは抽出によって分離することができる。
【００４６】〔実施例〕 〔実施例１〕 ａ）ピペラジンカルボキサミドのラセミ体を唯一の窒素
源として利用することができる微生物の単離 表１に示した組成の培養基１を使用し、ラセミピペラジ
ンカルボキサミドを唯一の窒素源として利用することが
できる微生物を単離した。 この培養基１００mlを３０
０mlのエルレンマイヤーフラスコに容れ、ロンザＡＧの
工場があるスイス国内のヴィスプ地域からの、種々の土
壌サンプル（２ｇ）を加えた。 このフラスコを撹拌せ
ずに５日間３０℃で培養した。 その後、この培養基Ａ
１mlを、同じ培養基を容れた新しいフラスコに接種し
た。 このフラスコを引き続き同じ条件のもとで培養し
た。 この富化サイクルは、合計５回繰り返した。 富
化物を寒天培養基（培養基Ａに１６ｇ／ｌ寒天培養基を
添加したもの）上で画線培養し、ひとつのコロニーを得
た。
源として利用することができる微生物の単離 表１に示した組成の培養基１を使用し、ラセミピペラジ
ンカルボキサミドを唯一の窒素源として利用することが
できる微生物を単離した。 この培養基１００mlを３０
０mlのエルレンマイヤーフラスコに容れ、ロンザＡＧの
工場があるスイス国内のヴィスプ地域からの、種々の土
壌サンプル（２ｇ）を加えた。 このフラスコを撹拌せ
ずに５日間３０℃で培養した。 その後、この培養基Ａ
１mlを、同じ培養基を容れた新しいフラスコに接種し
た。 このフラスコを引き続き同じ条件のもとで培養し
た。 この富化サイクルは、合計５回繰り返した。 富
化物を寒天培養基（培養基Ａに１６ｇ／ｌ寒天培養基を
添加したもの）上で画線培養し、ひとつのコロニーを得
た。
【００４７】単離した微生物を、立体選択的アミダーゼ
のための、下記の定量試験にかけてしらべた。 １箇の
コロニーを使用して、３００mlのエルレンマイヤーフラ
スコ中の培養基Ａ１００mlに接種した。 これらのフラ
スコを、シェーカー上で３日間、３０℃で培養し、その
わずか１日後に培養物を完全に展開した。 細胞を除い
た培養上澄み液は薄層クロマトグラフィーにかけて（シ
リカゲル、移動相：エタノール１１部、ＣＨＣｌ3６
部、ＮＨ4ＯＨ（２５％）６部、ニンヒドリンを用いた
検出）、ピペラジンカルボン酸およびピペラジンカルボ
キサミドの量を求めた。（ＲＳ）−ピペラジンカルボキ
サミドの使用量の半分を転化した微生物を生化学的な調
査に使用し、どの株がＳ−特化アミダーゼを含むかを確
認した。
のための、下記の定量試験にかけてしらべた。 １箇の
コロニーを使用して、３００mlのエルレンマイヤーフラ
スコ中の培養基Ａ１００mlに接種した。 これらのフラ
スコを、シェーカー上で３日間、３０℃で培養し、その
わずか１日後に培養物を完全に展開した。 細胞を除い
た培養上澄み液は薄層クロマトグラフィーにかけて（シ
リカゲル、移動相：エタノール１１部、ＣＨＣｌ3６
部、ＮＨ4ＯＨ（２５％）６部、ニンヒドリンを用いた
検出）、ピペラジンカルボン酸およびピペラジンカルボ
キサミドの量を求めた。（ＲＳ）−ピペラジンカルボキ
サミドの使用量の半分を転化した微生物を生化学的な調
査に使用し、どの株がＳ−特化アミダーゼを含むかを確
認した。
【００４８】ｂ）Ｓ−特化アミダーゼを与える微生物を
同定する生化学的調査 タンパク質の粗生成抽出物を製造するために、細胞を１
リットルの培養基Ａ中で３０℃で成長させ、採取して洗
浄した。 細胞５ｇ（湿重量）を１０mlの６９ｍＭリン
酸塩緩衝液、ｐＨ７．０中に再懸濁し、ＦＲＥＮＣＨ
（登録商標）プレスを用いて破壊した。 粗生成抽出物
を、４０，０００Ｇで２時間、遠心分離機にかけ、いく
つかの部分に分けて−２０℃で冷凍した。 立体選択性
を決定するために、Ｒ−プロリンアミドおよびＳ−プロ
リンアミドの加水分解速度を比較した。 つぎの酵素分
析をこの目的のために使用した：分析量１ml、６９ｍＭ
リン酸塩を含み、ｐＨ７．０、１００〜８００μｍのタ
ンパク質粗生成抽出物、２mgのＳ−またはＲ−プロリン
アミド・ＨＣｌ、培養時間１〜２４時間、培養温度３０
℃、薄層クロマトグラフィー（上記参照）後のニンヒド
リンを用いた検出。これらＤＳＭ９１７４株、ＤＳＭ９
１７５株およびＤＳＭ９１７６株のアミダーゼは、Ｒ−
プロリンアミドをごくゆっくりと加水分解することがわ
かった。 これらの株を使用して、光学活性な環状α−
アミノ酸誘導体を製造した。
同定する生化学的調査 タンパク質の粗生成抽出物を製造するために、細胞を１
リットルの培養基Ａ中で３０℃で成長させ、採取して洗
浄した。 細胞５ｇ（湿重量）を１０mlの６９ｍＭリン
酸塩緩衝液、ｐＨ７．０中に再懸濁し、ＦＲＥＮＣＨ
（登録商標）プレスを用いて破壊した。 粗生成抽出物
を、４０，０００Ｇで２時間、遠心分離機にかけ、いく
つかの部分に分けて−２０℃で冷凍した。 立体選択性
を決定するために、Ｒ−プロリンアミドおよびＳ−プロ
リンアミドの加水分解速度を比較した。 つぎの酵素分
析をこの目的のために使用した：分析量１ml、６９ｍＭ
リン酸塩を含み、ｐＨ７．０、１００〜８００μｍのタ
ンパク質粗生成抽出物、２mgのＳ−またはＲ−プロリン
アミド・ＨＣｌ、培養時間１〜２４時間、培養温度３０
℃、薄層クロマトグラフィー（上記参照）後のニンヒド
リンを用いた検出。これらＤＳＭ９１７４株、ＤＳＭ９
１７５株およびＤＳＭ９１７６株のアミダーゼは、Ｒ−
プロリンアミドをごくゆっくりと加水分解することがわ
かった。 これらの株を使用して、光学活性な環状α−
アミノ酸誘導体を製造した。
【００４９】ＤＳＭ９１７５株およびＤＳＭ９１７６株
の粗生成抽出物が、同じ条件の下で、（ＲＳ）−ピペラ
ジンカルボキサミドおよび（ＲＳ）−ピペコールアミド
を加水分解した。 分析溶液の培養温度およびｐＨを変
えることによって、アミダーゼの特定の活性は、温度３
０〜６０℃およびｐＨ７〜１０の間で最高であったこと
が見出された。
の粗生成抽出物が、同じ条件の下で、（ＲＳ）−ピペラ
ジンカルボキサミドおよび（ＲＳ）−ピペコールアミド
を加水分解した。 分析溶液の培養温度およびｐＨを変
えることによって、アミダーゼの特定の活性は、温度３
０〜６０℃およびｐＨ７〜１０の間で最高であったこと
が見出された。
【００５０】表 １ 培養基Ａ：この培養基は、下記の最小限培養基を、２ｇ
／ｌの（ＲＳ）−ピペラジンカルボキサミドおよび１０
ｇの１０ｇ／ｌのグリセロールに加え混合することによ
り調整した。 培養基Ｂ：この培養基は、下記の最小限培養基を、１ｇ
／ｌの（ＲＳ）−ピペコールアミドおよび４ｇ／ｌのグ
ルコースに加え混合することによって調整した。 最小限培養基： 組成 濃度（ｍｇ／ｌ） イースト抽出物 ５００ Ｎａ2ＳＯ4 １００ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２０００ ＫＨ2ＰＯ4 １０００ ＮａＣｌ ３０００ ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ４００ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １４．５ ＦｅＣｌ3・６Ｈ2Ｏ ０．８ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １００×１０-3 ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ９０×１０-3 Ｈ3ＢＯ3 ３００×１０-3 ＣＯＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ２００×１０-3 ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １０×１０-3 ＮｉＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ２０×１０-3 NaMoO4・２Ｈ2Ｏ ３０×１０-3 ＥＤＴＡ Ｎａ2・２Ｈ2Ｏ ５ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ２。
／ｌの（ＲＳ）−ピペラジンカルボキサミドおよび１０
ｇの１０ｇ／ｌのグリセロールに加え混合することによ
り調整した。 培養基Ｂ：この培養基は、下記の最小限培養基を、１ｇ
／ｌの（ＲＳ）−ピペコールアミドおよび４ｇ／ｌのグ
ルコースに加え混合することによって調整した。 最小限培養基： 組成 濃度（ｍｇ／ｌ） イースト抽出物 ５００ Ｎａ2ＳＯ4 １００ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２０００ ＫＨ2ＰＯ4 １０００ ＮａＣｌ ３０００ ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ４００ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １４．５ ＦｅＣｌ3・６Ｈ2Ｏ ０．８ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １００×１０-3 ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ９０×１０-3 Ｈ3ＢＯ3 ３００×１０-3 ＣＯＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ２００×１０-3 ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １０×１０-3 ＮｉＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ２０×１０-3 NaMoO4・２Ｈ2Ｏ ３０×１０-3 ＥＤＴＡ Ｎａ2・２Ｈ2Ｏ ５ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ２。
【００５１】〔実施例２〜４〕 Ｓ−ピペラジンカルボン酸の製造 ＤＳＭ９１７４株、ＤＳＭ９１７５株およびＤＳＭ９１
７６株を用い、つぎの条件を選んでＳ−ピペラジンカル
ボン酸を製造した。 ｐＨコントロールユニットを備え
た、作業容積が１リットルで容量が１．５リットルの発
酵容器を使用して、生物的転換を行なった。 培養基Ａ
中の発酵に当っては、グリセロールの量を３０ｇ／ｌに
増加し、（ＲＳ）−ピペラジンカルボキサミドの量を２
０ｇ／ｌに増加した。 細胞をｐＨ７．０、温度３０
℃、通気率０．５ｌ／minで成長させた。 一例では
（実施例４）、細胞を初めにこれらの条件のもとで１６
時間成長させ、温度を４０℃に高め、培養基のｐＨを
８．０まで高めた。 所定の時間が経過した後、生成し
たＳ−ピペラジンカルボン酸の量を薄層クロマトグラフ
ィーで概算し、使用したおよそ半分のピペラジンカルボ
キサミドが反応したところで、発酵を３６〜７２時間後
に停止した。 この時点では、細胞懸濁液の６５０ｎｍ
における光学密度は、６から１０の間であった。 Ｓ−
ピペラジンカルボン酸を単離するために、細胞を除いた
溶液を、減圧下に１００mlに濃縮した。 その溶液を、
濃ＨＣｌを用いてｐＨ１．０まで酸性化し、酸をジハイ
ドロクロライドとして沈殿させた。 単離した酸を０．
１ＭＨＣｌ中で再結晶し、乾燥した。生成した酸のｅｅ
（エナンチオマーエクセス）を測定するために、酸を、
はじめに２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−
Ｄ−グルコピラノシルイソチオシアン酸塩を用いて誘導
体にし、毛管電気泳動（毛管電気泳動の条件については
表２を参照）によって分析した。 結果は表３に記載し
た。
７６株を用い、つぎの条件を選んでＳ−ピペラジンカル
ボン酸を製造した。 ｐＨコントロールユニットを備え
た、作業容積が１リットルで容量が１．５リットルの発
酵容器を使用して、生物的転換を行なった。 培養基Ａ
中の発酵に当っては、グリセロールの量を３０ｇ／ｌに
増加し、（ＲＳ）−ピペラジンカルボキサミドの量を２
０ｇ／ｌに増加した。 細胞をｐＨ７．０、温度３０
℃、通気率０．５ｌ／minで成長させた。 一例では
（実施例４）、細胞を初めにこれらの条件のもとで１６
時間成長させ、温度を４０℃に高め、培養基のｐＨを
８．０まで高めた。 所定の時間が経過した後、生成し
たＳ−ピペラジンカルボン酸の量を薄層クロマトグラフ
ィーで概算し、使用したおよそ半分のピペラジンカルボ
キサミドが反応したところで、発酵を３６〜７２時間後
に停止した。 この時点では、細胞懸濁液の６５０ｎｍ
における光学密度は、６から１０の間であった。 Ｓ−
ピペラジンカルボン酸を単離するために、細胞を除いた
溶液を、減圧下に１００mlに濃縮した。 その溶液を、
濃ＨＣｌを用いてｐＨ１．０まで酸性化し、酸をジハイ
ドロクロライドとして沈殿させた。 単離した酸を０．
１ＭＨＣｌ中で再結晶し、乾燥した。生成した酸のｅｅ
（エナンチオマーエクセス）を測定するために、酸を、
はじめに２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−
Ｄ−グルコピラノシルイソチオシアン酸塩を用いて誘導
体にし、毛管電気泳動（毛管電気泳動の条件については
表２を参照）によって分析した。 結果は表３に記載し
た。
【００５２】表 ２ 毛管電気泳動の条件 ＣＥ装置： ヒューレット−パッカード ＨＰ
3DＣＥ 検出器： ヒューレット−パッカード ダイ
オード列検出器 緩衝液： １０ｍＭリン酸水素ジナトリウ
ム，１０ｍＭホウ酸，１５０ｍＭドデシル硫酸ナトリウ
ム，ｐＨ９．０ 電解液： ９００mlの緩衝液プラス１００ml
のメタノール 毛管： ＨＰ Ｇ１６００−６１２１１ 電界： ２０ｋＶ 電流： 約２４〜３０μＡ オーブンの温度： ２０℃ 検出器設定： ２１０ｎｍ（帯域幅５ｎｍ） 移動時間： 約１７．１分（Ｓ酸） 約１７．７分（Ｒ酸）。
3DＣＥ 検出器： ヒューレット−パッカード ダイ
オード列検出器 緩衝液： １０ｍＭリン酸水素ジナトリウ
ム，１０ｍＭホウ酸，１５０ｍＭドデシル硫酸ナトリウ
ム，ｐＨ９．０ 電解液： ９００mlの緩衝液プラス１００ml
のメタノール 毛管： ＨＰ Ｇ１６００−６１２１１ 電界： ２０ｋＶ 電流： 約２４〜３０μＡ オーブンの温度： ２０℃ 検出器設定： ２１０ｎｍ（帯域幅５ｎｍ） 移動時間： 約１７．１分（Ｓ酸） 約１７．７分（Ｒ酸）。
【００５３】 表 ３ 実例例の株 粗生成物 再結晶物 収率 ｅｅ価 No.2 DSM9175 １２.８２ｇ １０.７４ｇ ６８.３％ ９９.６ No.3 DSM9174 １５.５３ｇ １３.１ ｇ ８３.３％ ９９.４ No.4 DSM9176 ２１.２３ｇ １１.３２ｇ ７２.０％ ９９.６。
【００５４】〔実施例５〕 クレブシエラを用いたＳ−ピペコール酸の製造 ＤＳＭ９１７５およびＤＳＭ９１７６のクレブシエラ・
ニューモニア株の休眠細胞は、２０ｇ／ｌの（ＲＳ）−
ピペコールアミドを、４７℃、ｐＨ８.０で、（Ｓ）−
酸に６時間以内に転化した。
ニューモニア株の休眠細胞は、２０ｇ／ｌの（ＲＳ）−
ピペコールアミドを、４７℃、ｐＨ８.０で、（Ｓ）−
酸に６時間以内に転化した。
【００５５】この転化をクレブシエラ・ニューモニア株
（ＤＳＭ９１７５）を用いて実施した場合には、Ｓ−ピ
ペコール酸がｅｅ９６．５％で得られた。
（ＤＳＭ９１７５）を用いて実施した場合には、Ｓ−ピ
ペコール酸がｅｅ９６．５％で得られた。
【００５６】〔実施例６〕 Ｓ−４−メチルピペコール酸の製造 この転化のために、ラセミ体の４−メチルピペコールア
ミド（基体物質）を、ＤＳＭ９１７５のクレブシエラ・
ニューモニアまたはＤＳＭ９１７４のクレブシエラ・テ
リジナから得られるタンパク質粗生成抽出物を利用し
て、実施例１ｂに類似の方法で転化した。 ｐＨ８．０
および４７℃で２４時間培養した後、０．２％濃度の培
養基溶液中の、使用されたアミドの約５０％が転化した
（ＴＬＣ分析で測定）。
ミド（基体物質）を、ＤＳＭ９１７５のクレブシエラ・
ニューモニアまたはＤＳＭ９１７４のクレブシエラ・テ
リジナから得られるタンパク質粗生成抽出物を利用し
て、実施例１ｂに類似の方法で転化した。 ｐＨ８．０
および４７℃で２４時間培養した後、０．２％濃度の培
養基溶液中の、使用されたアミドの約５０％が転化した
（ＴＬＣ分析で測定）。
【００５７】〔実施例７〕 ピペコールアミドを唯一の窒素源として利用する微生物
の単離 培養基Ｂ１００mlを３００mlのエルレンマイヤーフラス
コに容れ、土壌サンプルをおよそ２ｇ加えた。 このフ
ラスコを、撹拌せずに室温で３日間培養した。
の単離 培養基Ｂ１００mlを３００mlのエルレンマイヤーフラス
コに容れ、土壌サンプルをおよそ２ｇ加えた。 このフ
ラスコを、撹拌せずに室温で３日間培養した。
【００５８】その後、同じ培養基を容れた新しいフラス
コに、上述の培養基のうち２mlを移し、撹拌せずに３０
℃で４日間培養した。 この富化サイクルを、合計３回
繰り返し、最後の２回のサイクルは滅菌条件のもとで実
施した。 最終の工程を、シェーカー上で１４０ｒｐｍ
で、追加的に実施した。 その後、その富化物を、寒天
培養基（培養基Ｂに１６ｇ／ｌ寒天培養基を添加したも
の）上で画線培養し、ひとつのコロニーを得た。 （Ｒ
Ｓ）−ピペコールアミドをピペコール酸に転化する特性
が安定しているコロニーを選択した。 この目的のため
に、培養物を栄養寒天培養基上で画線培養し、２〜３日
間成長させた後、再び栄養寒天培養基板からピペコール
アミド／グルコース板上に画線培養した。 グラム染色
および２０ＮＥ−ＡＰＩ片を用いたオキシダーゼ試験の
後、所要の安定した特性を見せた二つの株を特定した。
二つのシュードモナス種が特定された：ＤＳＭ９９２
３のシュードモナス・プチダおよびＤＳＭ９９２４のシ
ュードモナス・フルオレセンス。
コに、上述の培養基のうち２mlを移し、撹拌せずに３０
℃で４日間培養した。 この富化サイクルを、合計３回
繰り返し、最後の２回のサイクルは滅菌条件のもとで実
施した。 最終の工程を、シェーカー上で１４０ｒｐｍ
で、追加的に実施した。 その後、その富化物を、寒天
培養基（培養基Ｂに１６ｇ／ｌ寒天培養基を添加したも
の）上で画線培養し、ひとつのコロニーを得た。 （Ｒ
Ｓ）−ピペコールアミドをピペコール酸に転化する特性
が安定しているコロニーを選択した。 この目的のため
に、培養物を栄養寒天培養基上で画線培養し、２〜３日
間成長させた後、再び栄養寒天培養基板からピペコール
アミド／グルコース板上に画線培養した。 グラム染色
および２０ＮＥ−ＡＰＩ片を用いたオキシダーゼ試験の
後、所要の安定した特性を見せた二つの株を特定した。
二つのシュードモナス種が特定された：ＤＳＭ９９２
３のシュードモナス・プチダおよびＤＳＭ９９２４のシ
ュードモナス・フルオレセンス。
【００５９】〔実施例８〕 Ｓ−ピペコール酸の製造 実施例７で単離した株を使用して、１％のピペコールア
ミドの生物的転換（培養基濃度１％）を、０．１ｍＭリ
ン酸塩緩衝液中で、ｐＨ７．０、３０℃、１３０ｒｐｍ
で実施した。 前培養物のバイオマスを濃縮し、ｐＨ
７.０の０.１Ｍリン酸塩緩衝液中に取り入れ、バイオマ
ス濃度ＯＤ650nm ＝１０を得た。 その混合物を、シェ
ーカー上１３０ｒｐｍで、３０℃において培養し、種々
の時間においてサンプルを取り出した。 細胞を除いた
上澄み液は薄層クロマトグラフィーにかけ（シリカゲ
ル、移動相：エタノール１１部、ＣＨＣｌ3６部、２５
％ＮＨ4ＯＨ６部）、残りのアミドおよび形成されたピ
ペコール酸の量を測定した。 その後、細胞を除いた上
澄み液は、ＨＰＣＬ測定（イソチオシアン酸塩誘導）に
かけ、生成したピペコール酸のエナンチオマー純度を調
べた。 シュードモナス・プチダおよびシュードモナス
・フルオレセンスが、Ｓ−ピペコール酸を９０％以上の
光学的純度で産出した、という結果が得られた。 シュ
ードモナス・プチダの生物的転換の最適条件は、ｐＨ
８．０、温度３０℃、また、シュードモナス・フルオレ
センスはｐＨ８．０で５０℃であった。 シュードモナ
ス・プチダで生物的転換を実施したとき、Ｓ−ピペコー
ル酸がｅｅ９５％で得られ、シュードモナス・フルオレ
センスで生物的転換を実施したときは、Ｓ−ピペコール
酸がｅｅ９７．３％で得られた。
ミドの生物的転換（培養基濃度１％）を、０．１ｍＭリ
ン酸塩緩衝液中で、ｐＨ７．０、３０℃、１３０ｒｐｍ
で実施した。 前培養物のバイオマスを濃縮し、ｐＨ
７.０の０.１Ｍリン酸塩緩衝液中に取り入れ、バイオマ
ス濃度ＯＤ650nm ＝１０を得た。 その混合物を、シェ
ーカー上１３０ｒｐｍで、３０℃において培養し、種々
の時間においてサンプルを取り出した。 細胞を除いた
上澄み液は薄層クロマトグラフィーにかけ（シリカゲ
ル、移動相：エタノール１１部、ＣＨＣｌ3６部、２５
％ＮＨ4ＯＨ６部）、残りのアミドおよび形成されたピ
ペコール酸の量を測定した。 その後、細胞を除いた上
澄み液は、ＨＰＣＬ測定（イソチオシアン酸塩誘導）に
かけ、生成したピペコール酸のエナンチオマー純度を調
べた。 シュードモナス・プチダおよびシュードモナス
・フルオレセンスが、Ｓ−ピペコール酸を９０％以上の
光学的純度で産出した、という結果が得られた。 シュ
ードモナス・プチダの生物的転換の最適条件は、ｐＨ
８．０、温度３０℃、また、シュードモナス・フルオレ
センスはｐＨ８．０で５０℃であった。 シュードモナ
ス・プチダで生物的転換を実施したとき、Ｓ−ピペコー
ル酸がｅｅ９５％で得られ、シュードモナス・フルオレ
センスで生物的転換を実施したときは、Ｓ−ピペコール
酸がｅｅ９７．３％で得られた。
【００６０】〔実施例９〕 Ｓ−ピペラジンカルボン酸の製造 実施例７で記述した、ピペコールアミド生産のための２
種の単離された株を使用して、１％のピペラジンカルボ
キサミドの生物的転換を、ｐＨ７．０、３０℃、１３０
ｒｐｍで実施した。 細胞を除いた上澄み液を同様に薄
層クロマトグラフィーにかけて、残存するピペラジンカ
ルボキサミドおよび生成したピペラジンカルボン酸の量
を測定した。 ＨＰＣＬ分析でピペラジンカルボン酸の
光学的純度を調べた。 シュードモナス・プチダで生物
的転換を実施した場合は、Ｓ−ピペラジンカルボン酸が
ｅｅ７３．９％で得られ、シュードモナス・フルオレセ
ンスで生物的転換を実施した場合は、Ｓ−ピペラジンカ
ルボン酸がｅｅ５９．５％で得られた。
種の単離された株を使用して、１％のピペラジンカルボ
キサミドの生物的転換を、ｐＨ７．０、３０℃、１３０
ｒｐｍで実施した。 細胞を除いた上澄み液を同様に薄
層クロマトグラフィーにかけて、残存するピペラジンカ
ルボキサミドおよび生成したピペラジンカルボン酸の量
を測定した。 ＨＰＣＬ分析でピペラジンカルボン酸の
光学的純度を調べた。 シュードモナス・プチダで生物
的転換を実施した場合は、Ｓ−ピペラジンカルボン酸が
ｅｅ７３．９％で得られ、シュードモナス・フルオレセ
ンスで生物的転換を実施した場合は、Ｓ−ピペラジンカ
ルボン酸がｅｅ５９．５％で得られた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:39） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:40） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:22） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:40） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:39） (72)発明者 イェルク コール スイス国 カントン・ヴァリス ラーロン ハウス シエスタ（番地なし) (72)発明者 ニコラス ショウ スイス国 カントン・ヴァリス ヴィスプ ヴァインガルテンヴェク 14
Claims (9)
- 【請求項１】 一般式 【化１】 〔式中、Ａは、−ＮＨおよび−ＣＨとともに、場合によ
り置換された、５員または６員の飽和複素環式環を形成
する。〕のラセミ化合物またはその光学活性異性体の形
態のα−アミノカルボキサミドを唯一の窒素源として利
用することができ、かつ、上に定義した式Ｉの（ＲＳ）
−α−アミノカルボキサミドを、一般式 【化２】 〔式中、Ａは前述の意味をもつ。〕のＳ−α−アミノカ
ルボン酸に転化する能力を有することを特徴とする微生
物。 - 【請求項２】 ラセミ化合物またはその光学活性異性体
の形態のピペコールアミドまたはピペラジンカルボキサ
ミドを、唯一の窒素源として利用することができる請求
項１の微生物。 - 【請求項３】 クレブシエラ属またはシュードモナス属
に属する請求項２の微生物。 - 【請求項４】 シュードモナス・プチダ種（ＤＳＭ９９
２３）、シュードモナス・フルオレセンス種（ＤＳＭ９
９２４）、クレブシエラ・テリゲナ種（ＤＳＭ９１７
４）、およびクレブシエラ・ニューモニア種（ＤＳＭ９
１７５および９１７６）ならびにそれらの機能的に等価
な変種および突然変異種である請求項３の微生物。 - 【請求項５】 一般式 【化３】 〔式中、Ａは前述した意味をもつ。〕のＳ−α−アミノ
カルボン酸および（または）一般式 【化４】 〔式中、Ａは前述した意味をもつ。〕のＲ−α−アミノ
カルボキサミドの製造方法であって、一般式 【化５】 〔式中、Ａは前述した意味をもつ。〕の（ＲＳ）−α−
アミノカルボキサミド中のＳ−α−アミノカルボキサミ
ドを、請求項１に記載の微生物を利用して、またはそれ
ら微生物からの細胞を除いた酵素を利用して、Ｓ−α−
アミノカルボン酸に転化させ、生物的転換の結果である
Ｓ−α−アミノカルボン酸のみならず、適切であれば単
離されるＲ−α−アミノカルボキサミドをも含む生成物
を分離することを特徴とする製造方法。 - 【請求項６】 生物的転換を、クレブシエラ・テリゲナ
種(ＤＳＭ９１７４)もしくはクレブシエラ・ニューモニ
ア種（ＤＳＭ９１７５および９１７６）の微生物を、ま
たはそれらの機能的に等価の変種および突然変異種を、
またはこれらの微生物からの細胞を除いた酵素を利用し
て実施することを特徴とする請求項５の製造方法。 - 【請求項７】 （ＲＳ）−ピペコールアミド、（ＲＳ）
−ピペラジンカルボキサミド、（ＲＳ）−４−メチルピ
ペコールアミドまたは（ＲＳ）−プロリンアミドを、
（ＲＳ）−α−アミノカルボキサミドとして使用するこ
とを特徴とする請求項５または６の製造方法。 - 【請求項８】 生物的転換を、（ＲＳ）−α−アミノカ
ルボキサミドを、培養基中の（ＲＳ）−α−アミノカル
ボキサミドの濃度が２０％重量を超えないように、１回
で、または連続的に添加して実施することを特徴とする
請求項５ないし７のいずれかの製造方法。 - 【請求項９】 生物的転換をｐＨ７〜１０、温度３０〜
６０℃で実施することを特徴とする請求項５ないし８の
いずれかの製造方法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH181394 | 1994-06-09 | ||
| CH1813/94-4 | 1994-07-13 | ||
| CH2231/94-9 | 1994-07-13 | ||
| CH223194 | 1994-07-13 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0856652A true JPH0856652A (ja) | 1996-03-05 |
| JP3694065B2 JP3694065B2 (ja) | 2005-09-14 |
Family
ID=25688747
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14068495A Expired - Fee Related JP3694065B2 (ja) | 1994-06-09 | 1995-06-07 | 環状Ｓ−α−アミノカルボン酸およびＲ−α−アミノカルボキサミドの生物工学的製造方法 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5622846A (ja) |
| EP (1) | EP0686698B1 (ja) |
| JP (1) | JP3694065B2 (ja) |
| AT (1) | ATE199743T1 (ja) |
| CA (1) | CA2150526C (ja) |
| CZ (2) | CZ282337B6 (ja) |
| DE (1) | DE59509085D1 (ja) |
| DK (1) | DK0686698T3 (ja) |
| ES (1) | ES2155104T3 (ja) |
| PT (1) | PT686698E (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8338142B2 (en) | 2007-02-19 | 2012-12-25 | Kaneka Corporation | Method for producing optically active 3-aminopiperidine or salt thereof |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0944730A1 (de) * | 1996-12-16 | 1999-09-29 | Lonza A.G. | Verfahren zur herstellung von d-prolinderivaten |
| CA2299324A1 (en) * | 1997-08-11 | 1999-02-18 | Lonza Ag | Method for producing cyclic .alpha.-amino acids free from enantiomers or their n-protected derivatives by means of a d-specific aminoacylase |
| WO2000012745A1 (de) * | 1998-08-26 | 2000-03-09 | Lonza Ag | Verfahren zur herstellung von (2r)-piperidinderivaten |
| US9453251B2 (en) * | 2002-10-08 | 2016-09-27 | Pfenex Inc. | Expression of mammalian proteins in Pseudomonas fluorescens |
| CA2553503C (en) | 2004-01-16 | 2015-12-29 | Dow Global Technologies Inc. | Expression of mammalian proteins in pseudomonas fluorescens |
| CN101031655A (zh) | 2004-07-26 | 2007-09-05 | 陶氏环球技术公司 | 通过株工程改进蛋白表达的方法 |
| JP5484041B2 (ja) * | 2007-02-23 | 2014-05-07 | 学校法人関西学院 | 蛋白質結晶化剤および蛋白質結晶化剤を用いた蛋白質結晶化方法 |
| US9394571B2 (en) | 2007-04-27 | 2016-07-19 | Pfenex Inc. | Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins |
| US9580719B2 (en) | 2007-04-27 | 2017-02-28 | Pfenex, Inc. | Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins |
| JP2015511586A (ja) | 2012-02-28 | 2015-04-20 | マローネ バイオ イノベーションズ，インコーポレイテッド | シュードモナス種ならびにそれらに由来する物質および組成物による植物病原性微生物の制御 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| LU74142A1 (ja) * | 1976-01-08 | 1977-07-22 | ||
| JPS6387998A (ja) * | 1986-09-30 | 1988-04-19 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | Ｄ−α−アミノ酸の製造法 |
| KR890701753A (ko) * | 1987-08-17 | 1989-12-21 | 원본미기재 | 아미노산 아미드의 라세미화 방법 |
| JPH01215297A (ja) * | 1988-02-23 | 1989-08-29 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | Ｌ−α−アミノ酸の製造法 |
| DK314989A (da) * | 1988-06-27 | 1989-12-28 | Asahi Chemical Ind | Fremgangsmaade til fremstilling af optisk aktive alfa-substituerede organiske syrer, samt mikroorganismer og enzymer anvendelige ved fremgangsmaaden |
| EP0383403A1 (en) * | 1989-02-16 | 1990-08-22 | Stamicarbon B.V. | Process for preparation of organic chemicals |
| NL9100038A (nl) * | 1991-01-11 | 1992-08-03 | Stamicarbon | Enzym-gekatalyseerde bereiding van optisch aktieve carbonzuren. |
-
1995
- 1995-05-30 CA CA002150526A patent/CA2150526C/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-07 DK DK95108740T patent/DK0686698T3/da active
- 1995-06-07 US US08/478,960 patent/US5622846A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-07 AT AT95108740T patent/ATE199743T1/de active
- 1995-06-07 ES ES95108740T patent/ES2155104T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-07 EP EP95108740A patent/EP0686698B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-07 DE DE59509085T patent/DE59509085D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-07 JP JP14068495A patent/JP3694065B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-07 PT PT95108740T patent/PT686698E/pt unknown
- 1995-06-08 CZ CZ96668A patent/CZ282337B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-06-08 CZ CZ951507A patent/CZ282098B6/cs not_active IP Right Cessation
-
1996
- 1996-03-12 US US08/614,345 patent/US5766893A/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8338142B2 (en) | 2007-02-19 | 2012-12-25 | Kaneka Corporation | Method for producing optically active 3-aminopiperidine or salt thereof |
| JP5265513B2 (ja) * | 2007-02-19 | 2013-08-14 | 株式会社カネカ | 光学活性３−アミノピペリジン又はその塩の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE199743T1 (de) | 2001-03-15 |
| CZ150795A3 (en) | 1996-05-15 |
| US5622846A (en) | 1997-04-22 |
| JP3694065B2 (ja) | 2005-09-14 |
| US5766893A (en) | 1998-06-16 |
| EP0686698B1 (de) | 2001-03-14 |
| CA2150526C (en) | 2005-11-15 |
| CZ282337B6 (cs) | 1997-06-11 |
| CZ282098B6 (cs) | 1997-05-14 |
| ES2155104T3 (es) | 2001-05-01 |
| EP0686698A2 (de) | 1995-12-13 |
| EP0686698A3 (de) | 1997-05-02 |
| DE59509085D1 (de) | 2001-04-19 |
| CA2150526A1 (en) | 1995-12-10 |
| PT686698E (pt) | 2001-08-30 |
| CZ66896A3 (en) | 1996-12-11 |
| DK0686698T3 (da) | 2001-04-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH06343462A (ja) | 新規微生物、Ｌ−α−アミノ酸の製法、新規微生物の突然変異種及び変体の培養法、カルバモイラーゼ及び／又はヒダントイナーゼ及び／又はヒダントインラセマーゼをコードする遺伝子の獲得法、及びカルバモイラーゼ及び／又はヒダントイナーゼ及び／又はヒダントインラセマーゼをコードする遺伝子の微生物又は細胞中への挿入法 | |
| CS224624B2 (en) | Method for producing 2,5-diketo-d-gluconic acid or its salts | |
| US5622846A (en) | Biotechnological process for the preparation of cyclic-s-α-imino carboxylic acids and r-α-imino carboxamides | |
| US5360731A (en) | Bacteria capable of stereospecifically hydrolyzing R-(-)-2,2-dimethylcyclopropanecarboxamide | |
| JP3014171B2 (ja) | ４−ハロ−３−ヒドロキシブチルアミドの製造法 | |
| US5108914A (en) | Process for the synthesis of l-alpha-amino acids | |
| US6214604B1 (en) | Biotechnical production process of piperazine R-α-carboxylic acids and piperazine S-α-carboxylic acid amide | |
| EP0334358B1 (en) | Novel D-amidase and process for producing D-alpha-alanine and/or L-alpha-alanineamide | |
| EP0723586B1 (en) | Enzyme and its use in preparing (s)-pipecolic acid | |
| KR100229285B1 (ko) | 신규 고온성 바실러스 속 kls-01 및 이로부터 생산되는 내열성 d-알라닌 아미노트랜스퍼라아제, l-아스파테이트 아미노트랜스퍼라아제 및 알라닌라세마아제 | |
| US5258305A (en) | Manufacture of optically active 2-phenylpropionic acid and 2-phenylpropionamide from the nitrile using Rhodococcus equi | |
| US5252470A (en) | D-amidase and process for producing D-α-alanine and/or L-α-alanineamide | |
| US5496715A (en) | Process for preparing indigo | |
| KR100214828B1 (ko) | 6-히드록시피콜린산의 미생물학적 제조방법 | |
| KR100229287B1 (ko) | 신규 고온성 바실러스 속 미생물 및 이로부터 생산되는 내열성 l-아스파테이트 아미노트랜스퍼라아제, 알라닌 라세마아제 및 글루타메이트 라세마아제 | |
| Nakajima et al. | Production of 2-hydroxybutyric acid from 1, 2-butanediol by resting cells of Rhodococcus sp. strain TB-42 | |
| KR100260837B1 (ko) | 광학활성 카본산 및 그 거울상 이성체 에스테르의 제조방법 | |
| KR100229286B1 (ko) | 신규 고온성 바실러스 스테아로더모필러스 bcs-2 및 이로부터 생산되는 내열성 d-알라닌 아미노펩티다아제 및 l-아스파테이트 아미노트랜스퍼라아제 | |
| JPH08332094A (ja) | アルカリゲネス属の微生物を利用してヘテロ芳香族カルボン酸を製造する微生物学的方法 | |
| CA2257542A1 (en) | Process for preparation of d-proline derivatives by means of micro-organisms |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20040629 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20040929 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20041005 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20041224 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050125 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20050524 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20050623 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090701 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100701 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110701 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120701 Year of fee payment: 7 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |