JPH0812185B2 - 薄層クロマトグラムの物質ステインの可視化の為のデバイス - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〈技術分野〉 本発明は薄層クロマトグラムの物質ステイン（substa
nce stain）の可視化の為のデバイスに関する。

〈従来技術〉 薄層クロマトグラフィは複雑な物質混合物を分析の為
に及び準備の為に分離する為の通常の方法である。本発
明において薄層クロマトグラフィとは、固定相が事実上
２次元模様を呈する全てのクロマトグラフィ法を意味す
る。薄層クロマトグラフィは主として細粒物質で構成さ
れている分離薄層（固定相）が平面状のキャリアの上に
位置している物理−化学的な分離工程である。通常この
キャリアはガラス板又はアルミニウム又はポリアミドか
ら成るフォイルである。

分離すべき混合物は溶解した状態でスポット又はバン
ドの形で板の一端、いわゆる出発端に施し、この板は通
常次に出発端を適当な溶媒（移動相）を含んだ特別な堅
く嵌まり込んだチャンバーに入れられる。キャピラリ力
によってこの溶媒は出発端から始まって板の反対端の方
向に広がって行く。この場合、施された物質は個々の条
件の下に各物質の特性で定まる距離移動する。固定相に
対する物質の親和度が低いほど板の上で移動相によって
移動される距離は大きくなる。

このいわゆる展開工程に続いて、板は乾燥され、個々
の物質のステイン（stain）がマークされる。これは、
各成分が自己の色を呈する場合には容易に行い得る。元
来この場合は非常に希なので、物質のステインを何等か
の方法で染色し又は蛍光を有する形に変換するか、或い
はこれらを別の方法で固定相の表面の残余の部分と目立
たせる様に特別な方法で確認しなければならない。

通常の方法は、いわゆる蛍光インジケータを固定相に
加える事である。蛍光は適当な波長の紫外線によって可
視化される。物質がこの蛍光を失わせるならば、この物
質のステインは明るい背景の上の暗い領域として見られ
る。

しかし元来、全ての物質がインジケータの蛍光を失わ
せる事は出来ないので、物質ステインの染色乃至蛍光化
合物への変換は少なくとも同程度の重要度の役割しか持
っていない。展開が生じた後、クロマトグラフィ板には
試薬をスプレイするか、試薬の溶液にデイップされる。

第１にスプレイ法が困難である、と言うのは、これは
しばしば毒性のある、又は腐食性の物質を使用して作業
しなければならず、作業者又は研究室の汚染を完全に防
止する事は不可能である。その上の困難性は、板全体を
試薬で一様にスプレイする事は不可能であり、そのため
クロマトグラムの定量的なアセスメントは劣化する。デ
イッピング法は、比較的大量の試薬溶液が必要で、繰り
返しての使用の後の溶液が不良試薬になると言う危険性
があると言う欠点を有する。

〈発明の開示〉 従って、展開されたクロマトグラフィ板上の物質ステ
インを可視化する可能性を提供する事が本発明の目的で
あり、本発明は上述のような欠点を見せず、例えば、毒
性のある乃至腐食性のスプレイを行うことなく、比較的
少量の試薬を必要とするのみであり、それにも拘らず試
薬と固定相の全面とが一様な接触を持つ様にする事であ
る。

驚くべきことに、この目的は、物質のステインの可視
化の為の１種又はそれ以上の試薬を有する少なくとも一
つの層を有するフォイルによって達成される。

使用中、フォイルは、必要な場合加圧及び加熱の下に
固定相と表面接触をさせる。試薬はフォイルから固定相
の中に拡散によって移動することが出来、そこで特徴的
な染色反応を行う。逆の行程も又可能である、即ち、可
視化すべき物質はデバイスに拡散によって到達してそこ
で染色反応が生じる。両者の反応が平行して生じると言
うのが疑いなくこの場合のことであろう。

本発明の好ましい実施例によれば、デバイスがクロマ
トグラフィ板の固定相の表面に固着させ得る様に作られ
る。

この目的の為に、使用に当って固定相に接触させる少
なくとも１層は感圧接着剤、ホットメルト接着剤、或い
はプラスチック又は熱プラスチックから成るものであ
る。

その最も簡単な実施例においては、デバイスは単一層
でよい。

しかし、本発明の好ましい実施例によれば、フォイル
は多層であり、キャリアフォイルからの積層であり、少
なくとも一つの別のフォイル層を有する。この場合、キ
ャリアフォイルは試薬無しであり、試薬はキャリアフォ
イルに接続された１又は若干数の別の層を有する。

本発明によるフォイルはフレキシブルで、好ましくは
更に引伸し可能であり、又、実際問題として、デバイス
の、使用した後にクロマトグラフィ板の上に残る部分は
透明でなければならない。

試薬を含んでいるフォイル又はフォイル層として適当
な材料は、試薬と共存可能の全てのフォイル形成ポリ
マ、感圧接着性形成物、ホットメルト封着物、熱可塑性
プラスチックス、及びエラストマである。例示すると、
天然ゴム、ポリイソブチレン、ポリエチレン、ポリプロ
ピレン、ポリアクリル酸誘導体、ポリウレタン、酢酸ポ
リビニル及びその部分的に鹸化させた誘導体、ポリビニ
ルアルコール、ポリシロキサン、ポリアミド、スチレン
及びその他の脂肪族オレフィン化合物のブロックポリ
マ、及びエチレン、酢酸ビニル、及びアクリル酸誘導体
のコポリマを主成分とする形造物が挙げられる。

試薬含有層を保護するため、特にフォイルの保存を容
易にするために、使用の前に当然取外さねばならない保
護フォイルでカバーすることが出来る。フォイルが、そ
の製造後にロールとして巻上げられ、貯蔵される場合に
は、キャリアフォイルの非接着性の上面は保護フォイル
の機能を持っていてもよい。

使用する時に薄層クロマトグラムの表面に直接に接触
状態にあるフォイル層が自己接着性である場合には、前
記保護フォイルは、実際問題として、例えばシリコーン
処理によって取り外し自在となされているべきである。
その他の取り外し自在保護層は、ポリテトラフルオロエ
チレン、処理紙、セロファンなどである。

キャリアフォイルと保護層とはフレキシブル又は非フ
レキシブルな材料で成っていてもよく、単層又は多層に
作ってもよい。その製造に適当する材料は、例えば、ポ
リエチレン、ポリプロピレン、塩化ポリビニル、ポリエ
ステル、ポリアクリル酸誘導体、及びポリアミド、の様
なポリメリック材料である。その他の材料としては、金
属フォイル、例えばアルミニウムフォイルを、単独で又
はポリメリック材料で被覆して使用することもできる。

一種又は複数種の試薬を唯一つの層に含ませることも
出来るが、しかし、フォイルの試薬含有部分を多層に作
り、個々の層に別々の試薬を含ませる事も可能である。
これは、個々の成分の間の共存性に問題があるか、或い
は試薬がその効果を順番に発揮しなければならない時に
適している。この後者が必要な場合、本発明による２フ
ォイルが順番に採用される。実際問題として、この場
合、最初に使用されるデバイスのキャリアフォイルは、
若しこれが不透明であって、第２装置の試薬に対して透
過性が無いとすれば、若し存在する場合には除去すべき
である。若し、次に露出されるフォイル層が自己接着性
ならば、この場合のみ、同様に、最初に使用される装置
のキャリアフォイルは取り除くことが適当である。

試薬それ自体は各種の形式でフォイル中に取入れるこ
とができる。例えば、これらは、分子的に分散して溶解
して、結晶化して、或いはマイクロカプセル化して置く
ことが可能である。併置された状態で若干数の試薬があ
る場合、これらも各種の形態で組込み可能である。本発
明による装置は、薄層クロマトグラム上の物質ステイン
の可視化のプロセスに、装置を薄層クロマトグラムの固
定相表面と接触状態に、所望ならば加圧又は加熱の下に
持ち来して使用されるが、このプロセス自体も本発明の
主題である。

デバイスは自己接着性であるとしてはいるものの、加
圧と加熱とは固定相に対して緊密な接触をもたらすし、
又、ほとんどの場合、加熱は染色反応を急速化する。

〈実施例〉 以下、本発明を第１図乃至第３図と実施例によって図
示説明するが、これは限定の意味を有するものではな
い。

第１図によれば、熱可塑性フォイル（11）は物質ステ
インの可視化の為に必要な、一様な分配された試薬（1
2）を有する。使用する場合には、フォイルは展開され
て乾燥されたクロマトグラフィ板、即ち薄層板の上に設
置されて、次に薄層板とフォイルとの複合体は加熱され
る。薄層板自体が固定相（14）の為の、及び固定相自体
のキャリア板（15）又はキャリアフォイルから成る。溶
融又は加熱によって、フォイルが固定相（15）に組合わ
され、フォイルの試薬は固定相の物質ステインに拡散に
よって到着する。しかし、上述した様に可視化すべき物
質も又フォイルの中に拡散し得、その為にフォイル内に
色彩が発生し得る。

第２図に示す好ましい実施例は、どちらも好ましくは
プラスチック、熱可塑性プラスチック、又はメルタブル
（meltable）であるキャリアフォイル（21）、実質的な
試薬フォイル（22）と、使用前に取外される補助的保護
フォイル（23）とから成る。

シリコーン化キャリアフォイルを使用すると、これは
使用後取外されて、従ってこれは必然的に透明で無くて
も良い。本発明の特に好ましい実施例によれば、クロマ
トグラフィ板の固定相と接触する事となる試薬含有層は
ホットメルトコーテイングである、と言うのは、この場
合固定相と固定相に含まれている可視化すべき物質への
接触が特に強いからである。この場合、固定相はいわゆ
る試薬層によって浸透される。

第３図によれば、キャリアフォイルの上面がそれ自体
で保護フォイルの機能を有する。

例.1. アミノ酸及びアミノ糖の可視化の為の非自己接着性デ
バイス 107gのエチレン／酢酸ビニルコポリマ（塩化メチレン
中20％） （ATOCHEM社エバタン（Evatan）33.400） 17.2gのパラフィン（引火点51−53℃）（ヘキサン中2
5％） 1gのニンヒドリン又はイサチン（できるだけ少ない量
のメチルエチルケトンに溶解） を混合、均質化の上厚み100μのシリコーン化ポリエ
ステルフォイル上に100μ厚のフィルムとして施し、50
℃で15分間乾燥した。

貯蔵の目的のために、試薬層は保護フォイルとして作
用する別のポリエステルフォイルでカバーするが、この
保護フォイルは、可能ならば、キャリアフォイルよりも
更に強くシリコーン化しておく。

このデバイスは次の様に使用する：使用に当っては適
当な断片を保存すべき薄層クロマトグラフィ板の上に置
き、約80℃で加圧する（加熱板上又は乾燥炉中で）。溶
融の後（加熱板上で約30分）、冷却し、シリコーン化ポ
リエステルは除去する。

物質ステインの色彩は10−20秒後約80℃で観察可能で
ある。

例.2. アミノ酸及びアミノ糖の可視化の為の自己接着性デバ
イス 33gのポリイソブチレン（粘度10 9Pa＊s,20℃）（例
えば、BASF社オッパノール（Oppanol）B100）ベンジン
中20％ 66gのポリイソブチレン（粘度25Pa＊s,20℃）（例え
ば、BASF社オッパノール（Oppanol）B3）をベンジン中2
0％に溶解し、10mlの塩化メチレン中0.25gのニンヒドリ
ン を混合、均質化の上厚み100μのシリコーン化ポリエ
ステルフォイル上に100μ厚のフィルムとして施し、50
℃で15分間乾燥した。

次に、厚み10μのポリエステルフォイルを積層する。
使用に当っては、厚み100μのシリコーン化ポリエステ
ルフォイルを適当な大きさの断片から除去し、試薬層を
展開の上乾燥したTLC板上に接着する。暫く加熱の後、
物質ステインはその特徴的な色彩で見る事が出来る様に
なった。

例.3. 塩基性物質の可視化のためのデバイス 107gのエチレン／酢酸ビニルコポリマ （アトケム（ATOCHEM）社エバテーン（Evatene）33.4
00） 43gのパラフィン（引火点:51−53℃）0.2gのメチール
レッド を一緒に溶融し、100μｍ厚のシリコーン化ポリエス
テルフォイルを厚み100μｍのこの物質の上に被覆す
る。使用に当っては、適当な大きさの断片を保存すべき
TLC板上に置き、ほぼ100℃で加圧する（加熱板上又は乾
燥炉で）。溶融後（加熱板上で約１分）、冷却し、シリ
コーン化ポリエステルフォイルを除去する。物質ステイ
ンは濃赤のバックグラウンド上に黄色を有する。

例.4. 重金属陽イオンの可視化の為のデバイス 100gのポリアクリレート接着剤（40％） 例えばナショナルスターチ（National Starch）社デ
ユロタック（DUROTAK）280−2516 1.5gのニトリロトリエタノール 1gのチオアセトアミド を混合し、均質化し、100μのシリコン化ポリエステ
ルフォイルに100μ厚のフィルムとして施し、50℃で15
分間乾燥する。次にフイルムに10μの厚みのシリコーン
化されていない透明なポリエステルフォイルを被覆す
る。その後の取扱いは例.3.に記載のそれと対応する。

例.5. ２価陽イオンの可視化の為のデバイス 100gのポリアクリレート接着剤（40％） 例えばナショナルスターチ（National Starch）社デ
ユロタック（DUROTAK）280−2516 塩基基を有するポリアクリレートポリマ、例、20gの
エウドラジット（Eudragit）E100（レームファルマ（Ro
hm Parma）社）、酢酸エステル内40％ 0.1gのアリザリンＳ を混合し、均質化し、100μのシリコン化ポリエステ
ルフォイルに100μ厚のフィルムとして施し、50℃で15
分間乾燥する。次にフイルムに10μの厚みのシリコーン
化されていない透明なポリエステルフォイルを被覆す
る。その後の取扱いは例.3.に記載のそれと対応する。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の最も簡単な実施例、単一層、試薬含有
フォイル、を示し、第２図は好ましい多層フォイルを示
し、第３図はキャリアと接着性試薬含有層とで作られ
た、本発明による好ましい２重層フォイルを示す。 11:熱可塑性フォイル、12:試薬、14:固定相、15:固定相
キャリア板、21:キャリアフォイル、22:試薬フォイル、
23:保護フォイル

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】クロマトグラフィ板上にある薄層クロマト
   グラムの上ではそれ自体は無色な物質ステインを物質検
   出のための薄層クロマトグラムに応用可能な試薬によっ
   て可視化するためのデバイスにおいて、少なくとも１つ
   の層を有するキャリアシートと、物質ステイン可視化の
   ために必要な試薬を一様に分布して含む少なくとも１つ
   の別の層とからなり、且つ展開及び乾燥されたクロマト
   グラフィ板に貼付又は固着可能なる積層体であることを
   特徴とする物質ステインを可視化するデバイス。
2. 【請求項２】前記少なくとも１つの別の層に含まれる１
   種又は複数種の試薬が、キャリアシートには該試薬が含
   まれていないことを特徴とする請求項１に記載の物質ス
   テインを可視化するデバイス。
3. 【請求項３】前記少なくとも１つの別の層は自己接着性
   であることを特徴とする請求項１または２に記載の物質
   ステインを可視化するデバイス。
4. 【請求項４】前記少なくとも１つの別の層はホットメル
   トプラスチックを有するか又はホットメルトプラスチッ
   クで成ることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１
   項に記載の物質ステインを可視化するデバイス。
5. 【請求項５】前記少なくとも１つの別の層は熱可塑性で
   あることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項に
   記載の物質ステインを可視化するデバイス。
6. 【請求項６】前記キャリアシートは、ポリエチレン、ポ
   リプロピレン、ポリアミド、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸
   ビニル、ポリウレン、ポリビニルアルコール、ポリエス
   テル、ポリシロキサン、ポリアクイレート、ポリイソブ
   チレン、ポリスチレンのポリマー材料または上述のポリ
   マーの基礎となる個々のモノマーの基礎となる個々のモ
   ノマーのブロックモノマー若しくはコポリマー、又は必
   要に応じてはポリマーをコーティングしたアルミニウム
   からなることを特徴とする請求項１または２に記載の物
   質ステインを可視化するデバイス。
7. 【請求項７】前記少なくとも１つの試薬マイクロカプセ
   ル化されて存在することを特徴とする請求項１乃至４の
   いずれか１項に記載の物質ステインを可視化するデバイ
   ス。
8. 【請求項８】異なる試薬は各異なる層に含有することを
   特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項に記載の物質
   ステインを可視化するデバイス。
9. 【請求項９】薄層クロマトグラムに接触することになる
   側には、少なくとも１層から成り、且つ取り外し可能な
   保護シートを有することを特徴とする請求項１または２
   に記載の物質ステインを可視化するデバイス。
10. 【請求項１０】前記キャリアシートが取り外し可能であ
    ることを特徴とする請求項１または２に記載の物質ステ
    インを可視化するデバイス。