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JPH0779684B2 - ビフィズス菌増殖促進組成物 - Google Patents

ビフィズス菌増殖促進組成物

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JPH0779684B2
JPH0779684B2 JP1048297A JP4829789A JPH0779684B2 JP H0779684 B2 JPH0779684 B2 JP H0779684B2 JP 1048297 A JP1048297 A JP 1048297A JP 4829789 A JP4829789 A JP 4829789A JP H0779684 B2 JPH0779684 B2 JP H0779684B2
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lactoferrin
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iron
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康夫 福渡
博 宮川
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Morinaga Milk Industry Co Ltd
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Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、ビフィズス菌の増殖促進組成物に関する。本
発明の組成物は、ビフィズス菌の大量培養や、生菌数測
定培地での収量向上のための培地成分として使用するこ
とができる。
［技術の背景及び従来技術の説明］ ビフィズス菌は、人あるいは動物の腸内に棲息する有用
細菌であり、下痢症、便秘症及び感染症等の予防や治療
ならびに腸内の有害細菌の増殖抑制等、その有用性が臨
床的に明らかにされつつある。ビフィズス菌の増殖促進
物質としては、これまでにＮ−アセチルグルコサミン、
パンテチン類、ペプチド類および核酸関連物質等の他
に、胃酸で分解されず、ビフィズス菌が利用できる糖類
（例えばラクチュロース）等が報告されている。
本発明は、上述したビフィズス菌増殖促進物質とは全く
異なる、牛ラクトフェリン、牛アポラクトフェリン及び
牛ラクトフェリン鉄からなる群から選ばれた物質を有効
成分とすることを特徴とするビフィズス菌増殖促進組成
物を提供するものである。
ラクトフェリンは、鉄結合性蛋白質であって、生体内で
は涙、唾液、末梢血及び乳汁に含まれている。牛乳にお
けるラクトフェリン含量は、人乳中のそれの約1/10程度
であるが、大腸菌、カンジダ菌及びクロストリジウム菌
等の有害微生物に対して抗菌効果を示すことが知られて
いる。［ウエルシュ・ジェー・ケーアンドジェー・ティ
ー・メイ：ジャーナル・オブ・ペディアトリクス（Wels
h J.K.＆J.T.May:Journal of Pediatrics）第94巻、第
１頁、（1979年）］ 牛乳由来の牛ラクトフェリンを脱鉄することによって得
られる牛アポラクトフェリンが、合成培地を用いた実験
において、0.5〜30mg/mlの添加量で、大腸菌、ブドウ球
菌及び腸球菌等の有害微生物の増殖を抑制することが知
られている。［ノンネッケ・ビー・ジェーアンドケー・
エル・スミス：ジャーナル・オブ・デイリー・サイエン
ス（Nonnecke B.J.＆K.L.Smith:Journal of Dairy Scie
nce）第67巻、第３頁、（1984年）］ 一般に、アポラクトフェリンの抗菌性は、鉄要求性の高
い菌種に対して、鉄をキレート化することにより、その
増殖を抑制すると考えられている。
一方、人乳中に存在する人ラクトフェリンに鉄を飽和さ
せた人ラクトフェリン鉄は、ビフィズス菌の増殖を促進
することが知られている。（児玉：日本小児科学会誌、
第87巻、第1000頁、1983年） 以上のように、従来から牛ラクトフェリン、牛アポラク
トフェリンの有害微生物に対する抗菌性及び人ラクトフ
ェリン鉄のビフィズス菌に対する増殖促進効果は知られ
ていた。
本発明者は、ラクトフェリンについて研究を続け、その
研究において牛ラクトフェリン、牛ラクトフェリンから
鉄を除去して得た牛アポラクトフェリン及び牛ラクトフ
ェリンに鉄をキレート結合させた牛ラクトフェリン鉄の
ビフィズス菌に対する増殖促進効果が、人ラクトフェリ
ン鉄のそれよりも大きいことを見い出し、この知見に基
づいて本発明に到達した。
［発明の目的及び発明の要約］ 本発明の目的は、ビフィズス菌に対して強力な増殖促進
効果を有する組成物を提供することにある。さらに詳し
くは、ビフィズス菌大量培養用培地、ビフィズス菌の生
菌数測定用培地等に添加し、ビフィズス菌の生菌数を増
加させ、あるいはビフィズス菌の生残性を改善すること
のできる組成物を提供することにある。
本発明は、牛ラクトフェリン、牛アポラクトフェリン及
び牛ラクトフェリン鉄からなる群から選ばれた物質を有
効成分とすることを特徴とするビフィズス菌増殖促進組
成物に関するものである。
本発明の牛ラクトフェリン、牛アポラクトフェリン及び
牛ラクトフェリン鉄は、固体または液体の不活性担体、
または増量剤との混合により製剤とすることができ、そ
の製剤の形態において本組成物とすることもできる。
本発明の組成物は、ビフィズス菌の増殖を顕著に促進す
る作用を有する。
［発明の具体的な説明］ 本発明の牛アポラクトフェリンは、牛乳に由来する牛ラ
クトフェリンから鉄を除去して得られる。また、牛ラク
トフェリン鉄は、牛ラクトフェリンに鉄を飽和結合する
ことによって得られる。
牛ラクトフェリンの供給源は、初乳、移行乳、常乳、末
期乳、更にこれらの加工品、また加工余剰物であるチー
ズホエー等、牛ラクトフェリンを含むものであればいか
なるものであっても良い。これら牛ラクトフェリンの供
給源を、イオン交換クロマトグラフ法により処理して牛
ラクトフェリンを分離、精製し、その牛ラクトフェリン
をクエン酸水溶液に溶解し、鉄を除去して鉄フリーの牛
アポラクトフェリンを調製する。また、牛ラクトフェリ
ンを硫酸鉄水（溶媒）溶液と反応させ、その反応生成物
を限外過して、牛ラクトフェリン鉄を得ることができ
る。牛ラクトフェリン、牛アポラクトフェリン及び牛ラ
クトフェリン鉄は、液状又は乾燥した粉末状において、
ビフィズス菌増殖促進物質として使用することができ
る。これを液体、粉体又は固体の不活性担体あるいは増
量剤更に食品素材又は医薬品素材などとの混合によりビ
フィズス菌増殖促進組成物とすることもできる。
以下において、試験例及び実施例により本発明を更に詳
しく説明する。
試験例１ 牛ラクトフェリン、牛アポラクトフェリン、牛ラクトフ
ェリン鉄及び人ラクトフェリン鉄のビフィズス菌増殖促
進効果について試験した。
（１）試料の調製 （１−１）牛ラクトフェリンの調製 特開昭63-152400号公報の実施例８と同様にして牛ラク
トフェリンを調製した。
（１−２）牛アポラクトフェリンの調製 前記（１−１）の牛ラクトフェリン90gを精製水2100ml
に溶解した後、10％クエン酸水溶液を添加してそのpHを
2.5に調整し、室温において１時間反応させた。この反
応生成物を限外過し、そのケーキを凍結乾燥して牛ア
ポラクトフェリン87gを調製した。
（１−３）牛ラクトフェリン鉄の調製 前記（１−１）の牛ラクトフェリン30gを精製水700mlに
溶解し、これを2.6mM硫酸鉄水溶液と室温において24時
間反応させた。この反応生成物を限外過し、そのケー
キを凍結乾燥して牛ラクトフェリン鉄26gを調製した。
（１−４）人ラクトフェリン鉄の調製 児玉の方法（日本小児科学会誌、第87巻、第1000頁、19
83年）により、人ラクトフェリン鉄を調製した。
（２）供試菌株 ビフィドバクテリウム・ビフィダム （Bifidobacterium bifidum ATCC 15696） ビフィドバクテリウム・インファンティス （Bifidobacterium infantis ATCC 15697） ビフィドバクテリウム・ブレーバ （Bifidobacterium breve ATCC 15700） ビフィドバクテリウム・ロンガム （Bifidobacterium longum ATCC 15707） ビフィドバクテリウム・シュードロンガム （Bifidobacterium pseudolongum ATCC 25526） ビフィドバクテリウム・アニマリス （Bifidobacterium animalis ATCC 25527） （３）試験方法 （３−１）供試菌株の前培養液の調製 保存スラントから供試菌株１白金耳を採り、これをGAM
寒天培地（日水製薬）に塗抹した後、このGAM寒天培地
を35℃において16時間、嫌気的に培養した。GAM寒天培
地上に生育したコロニーを白金耳でかきとり、滅菌生理
食塩水にその濁度が2.0（波長:660nm）になるように懸
濁して、供試菌株の前培養液を調製した。
（３−２）増殖促進効果の試験 GAMブイヨン培地（日水製薬）を記載通り精製水に溶解
し、115℃において15分間滅菌した。この基本培地に、
滅菌フィルターで除菌した前記（１）の試料溶液を、基
本培地中の濃度が0.05％になるように加えて試験培地を
調製した。
この試験培地に、前記（３−１）の供試菌株の前培養液
を１％接種し、その濁度を測定した後、35℃において16
時間、嫌気的に培養した。そして、その培養液の濁度を
測定した。
対照として、前記（１）の試料溶液の代わりに精製水を
基本培地に加えた以外は前記と同様にして、培養液の濁
度を測定した。
上記の培養液の濁度の測定結果から、次式によってそれ
ぞれの試料について、それぞれの供試菌株に対する増殖
促進率を算出した。
T16:16時間培養後の試験培養液の濁度 T0 :培養前の試験培養液の濁度 C16:16時間培養後の対照培養液の濁度 C0 :培養前の対照培養液の濁度 （４）試験の結果 第１表に示す通りであった。
第１表によると、供試したビフィズス菌６株に対して、
牛ラクトフェリン、牛アポラクトフェリン及び牛ラクト
フェリン鉄は、人ラクトフェリン鉄よりも非常に高い増
殖促進効果を示すことがわかる。また、人ラクトフェリ
ン鉄は、動物由来のビフィズス菌、ビフィドバクテリウ
ム・シュードロンガム及びビフィドバクテリウム・アニ
マリスに対しては、増殖促進効果を示さなかった。
試験例２ 牛ラクトフェリン、牛アポラクトフェリン及び牛ラクト
フェリン鉄の量がビフィズス菌に対する増殖促進効果に
及ぼす影響について試験を行なった。
（１）試料の調製 （１−１）牛ラクトフェリンの調製 試験例１の（１−１）と同様にして、牛ラクトフェリン
を調製した。
（１−２）牛アポラクトフェリンの調製 試験例１の（１−２）と同様にして、牛アポラクトフェ
リンを調製した。
（１−３）牛ラクトフェリン鉄の調製 試験例１の（１−３）と同様にして、牛ラクトフェリン
鉄を調製した。
（２）供試菌株 試験例１と同じものを使用した。
（３）試験方法 試験例１の（３−２）における基本培地中の試料の牛ラ
クトフェリン、牛アポラクトフェリン及び牛ラクトフェ
リン鉄の量を、第２表に示す量としたこと以外は試験例
１と同様にして試験を行い、それぞれの増殖促進率
（％）を算出した。
（４）試験の結果 第２表に示す通りであった。
第２表によると、牛ラクトフェリン、牛アポラクトフェ
リン及び牛ラクトフェリン鉄のいずれもが、30ppmの量
において、供試菌株６株のすべてに対して増殖促進効果
があること、その量が増えると増殖促進効果が高くなる
こと、更に、その量が250〜500ppmで最大の増殖促進効
果が得られることがわかる。また、効果としては牛アポ
ラクトフェリンが最も高く、次いで牛ラクトフェリン、
牛ラクトフェリン鉄の順であった。
実施例１ 酵母エキス1.0％、肉エキス1.5％、カジトン1.0％、リ
ン酸１カリウム0.1％、リン酸２カリウム0.1％、酢酸ナ
トリウム0.7％、乳糖３％、シスチン0.04％、（いずれ
も重量）からなるビフィズス菌大量培養培地（pH6.8）
を2L調製し、115℃で15分間滅菌した。
次に、試験例１で得た牛ラクトフェリン1gを100mlの精
製水に溶解し、滅菌フィルターで除菌した後、この培地
に40ml添加し（培地中の牛ラクトフェリン濃度は196pp
m）、更に試験例１の（３−１）と同様の方法により調
製したビフィドバクテリウム・ロンガムの前培養液を１
％接種し、嫌気的に37℃で16時間培養した。培養後、培
養液の生菌数を測定した。対照として、牛ラクトフェリ
ン溶液の代わりに滅菌精製水を添加したこと以外は前記
と同様にして培養し、培養液の生菌数を測定した。結果
は第３表に示す通りであった。牛ラクトフェリンを添加
した培地は、ビフィズス菌の生菌数が約50％増加した。
実施例２ 実施例１において、牛ラクトフェリンの代わりに試験例
１で得た牛アポラクトフェリンを用いたこと以外は実施
例１と同様にして培養し、培養液の生菌数を測定した
（培地中の牛アポラクトフェリン濃度は196ppm）。結果
は第４表に示す通りであった。牛アポラクトフェリンを
添加した培地は、ビフィズス菌の生菌数が約66％増加し
た。
実施例３ 実施例２において、ビフィドバクテリウム・ロンガムの
前培養液の代わりに、試験例１の（３−１）と同様な方
法で調製したビフィドバクテリウム・シュードロンガム
の前培養液を用いた以外は実施例２と同様にして培養
し、培養液の生菌数を測定した（培地中の牛アポラクト
フェリン濃度は196ppm）。結果は第５表に示す通りであ
った。牛アポラクトフェリンを添加した培地は、ビフィ
ズス菌の生菌数が約62％増加した。
実施例４ 実施例１において、牛ラクトフェリンの代わりに試験例
１で得た牛ラクトフェリンと牛アポラクトフェリンで等
量混合物を調製し、これを用いた以外は実施例１と同様
にして培養し、培養液の生菌数を測定した（培地中の牛
ラクトフェリン濃度は98ppm、牛アポラクトフェリン濃
度は98ppm）。結果は第６表に示す通りであった。牛ラ
クトフェリンと牛アポラクトフェリンを併用した培地
は、ビフィズス菌の生菌数が約63％増加した。
実施例５ 80℃で10分間殺菌した脱脂乳1kgに、記載通りに調製し
た市販のヨーグルトスターター（クリスチャンハンセン
社、YB−15）を２％、実験例１で得た牛ラクトフェリン
0.2g、及び実施例１の対照で得られたビフィドバクテリ
ウム・ロンガムの培養液１％を添加混合し、100mlづつ
ヨーグルトカップに分注した後、40℃で５時間発酵させ
てヨーグルトを製造した（ヨーグルト中の牛ラクトフェ
リン濃度は200ppm）。対照として、牛ラクトフェリンを
除いた以外は前記と同様にしてヨーグルトを製造した。
これら試作ヨーグルトの発酵直後及び５℃で７日、10
日、14日保存したときのビフィズス菌と乳酸菌の生菌数
を測定した。結果は第７表に示す通りであった。牛ラク
トフェリンを添加したヨーグルトは発酵直後のビフィズ
ス菌数が高く、保存中のビフィズス菌の生残性も良好で
あった。
実施例６ 実施例５で、牛ラクトフェリンの代わりに、試験例１で
得た牛アポラクトフェリン0.3gを用いた以外は実施例５
と同様にしてヨーグルトを製造した（ヨーグルト中の牛
アポラクトフェリン濃度は300ppm）。これら試作ヨーグ
ルトの発酵直後及び５℃で７日、10日、14日保存したと
きのビフィズス菌と乳酸菌の生菌数を測定し結果を第８
表に示した。牛アポラクトフェリンを添加したヨーグル
トは発酵直後のビフィズス菌数が高く、保存中のビフィ
ズス菌の生残性も良好であった。
実施例７ 実施例６で、ビフィドバクテリウム・ロンガムの代わり
に、実施例３の対照で得られたビフィドバクテリウム・
シュードロンガムを用いた以外は実施例６と同様にして
ヨーグルトを製造した（ヨーグルト中の牛アポラクトフ
ェリン濃度は300ppm）。これら試作ヨーグルトの発酵直
後及び５℃で７日、10日、14日保存したときのビフィズ
ス菌と乳酸菌の生菌数を測定し結果を第９表に示した。
牛アポラクトフェリンを添加したヨーグルトは発酵直後
のビフィズス菌数が高く、保存中のビフィズス菌の生残
性も良好であった。
実施例８ 実施例５で、牛ラクトフェリン0.2gの代わりに、試験例
１で得た牛ラクトフェリン0.1g及び牛アポラクトフェリ
ン0.1gを添加した以外は実施例５と同様にしてヨーグル
トを製造した（ヨーグルト中の牛ラクトフェリン濃度は
100ppm、牛アポラクトフェリン濃度は100ppm）。これら
試作ヨーグルトの発酵直後及び５℃で７日、10日、14日
保存したときのビフィズス菌と乳酸菌の生菌数を測定し
結果を第10表に示した。
牛ラクトフェリン及び牛アポラクトフェリンを併用して
添加したヨーグルトは、発酵直後のビフィズス菌数が高
く、保存中のビフィズス菌の生残性も良好であった。
実施例９ 脱脂粉乳800gに、試験例１の（１−１）と同様にして調
製した牛ラクトフェリン200gを混合して、流動性のよい
本組成物1000gを得た。この組成物を、１〜２才令の健
康なホルスタイン種のメス牛５頭に、１回30gの投与量
において１日２回、２日間、朝夕の飼料と共に給餌し
た。給餌を受けたメス牛の糞便中の細菌数は、第11表に
示す通りであった。
第11表によると、牛ラクトフェリンの投与により、メス
牛の有害な腸内細菌は減少し、有用なビフィズス菌数は
顕著に増加した。
実施例10 脱脂粉乳850gに、試験例１の（１−２）と同様にして調
製した牛アポラクトフェリン150gを混合して、流動性の
よい本組成物1000gを得た。この組成物を、１〜２才令
の健康なホルスタイン種のメス牛５頭に、１回30gの投
与量において１日２回、２日間、朝夕の飼料と共に給餌
した。給餌を受けたメス牛の糞便中の細菌数は、第12表
に示す通りであった。
第12表によると、牛アポラクトフェリンの投与により、
メス牛の有害な腸内細菌は減少し、有用なビフィズス菌
数は顕著に増加した。
実施例11 脱脂粉乳700gに、試験例１の（１−３）と同様にして調
製した牛ラクトフェリン鉄300gを混合して、流動性のよ
い本組成物1000gを得た。この組成物を、１〜２才令の
健康なホルスタイン種のメス牛５頭に、１回30gの投与
量において１日２回、２日間、朝夕の飼料と共に給餌し
た。給餌を受けたメス牛の糞便中の細菌数は、第13表に
示す通りであった。
第13表によると、牛ラクトフェリン鉄の投与により、メ
ス牛の有害な腸内細菌は減少し、有用なビフィズス菌数
は顕著に増加した。
実施例12 脱脂粉乳800gに、試験例１の（１−１）と同様にして調
製した牛ラクトフェリン100g、及び試験例１の（１−
２）と同様にして調製した牛アポラクトフェリン100gを
混合して、流動性のよい本組成物1000gを得た。この組
成物を、１〜２才令の健康なホルスタイン種のメス牛５
頭に、１回30gの投与量において１日２回、２日間、朝
夕の飼料と共に給餌した。給餌を受けたメス牛の糞便中
の細菌数は、第14表に示す通りであった。
第14表によると、牛ラクトフェリン及び牛アポラクトフ
ェリンの同時投与により、メス牛の有害な腸内殺菌は減
少し、有用なビフィズス菌数は顕著に増加した。
［発明の効果］ （１）本発明は、ビフィズス菌に対して強力な増殖促進
効果を有する組成物を提供することができる。
（２）本発明のビフィズス菌増殖促進組成物は、培養用
培地等に添加することにより、ビフィズス菌の増殖を促
進し、更に保存中におけるビフィズス菌の生残性を改善
することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ 8828−4Ｂ (Ｃ１２Ｎ 1/38 Ｃ１２Ｒ 1:01） (56)参考文献 特開 昭61−145200（ＪＰ，Ａ)

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】牛ラクトフェリン、牛アポラクトフェリン
    及び牛ラクトフェリン鉄からなる群から選ばれた物質を
    有効成分として含有することを特徴とするビフィズス菌
    増殖促進培地。
  2. 【請求項２】前記有効成分が、少なくとも30ppm含有さ
    れている請求項１に記載のビフィズス菌増殖促進培地。
  3. 【請求項３】前記有効成分が、250〜500ppm含有されて
    いる請求項１に記載のビフィズス菌増殖促進培地。
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