JPH07179493A - 抗原ペプチド化合物および免疫学的測定方法 - Google Patents
抗原ペプチド化合物および免疫学的測定方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 下記式（１）又は（２）に示されるアミノ酸
配列を有する抗原ペプチド化合物と、Ｃ型肝炎ウィルス
（ＨＣＶ）抗体との特異的結合性を利用して、イムノア
ッセイ法により検体中のＨＣＶ抗体を測定する。 Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉ
ｌｅ- Ｖａｌ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｖａ
ｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ
- Ｇｌｕ ・・・・・・・（１） Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖ
ａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａ
ｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ
- Ｇｌｕ・・・・・・・・・・（２） 【効果】 交叉反応ないし非特異反応を抑制しつつ検体
のserotypeを簡便且つ正確に判定することが可能とな
り、インターフェロン治療の効果を予め正確に予測する
こと、あるいはＣ型肝炎の治癒ないし治療経過を簡便に
観察することが可能となる。
配列を有する抗原ペプチド化合物と、Ｃ型肝炎ウィルス
（ＨＣＶ）抗体との特異的結合性を利用して、イムノア
ッセイ法により検体中のＨＣＶ抗体を測定する。 Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉ
ｌｅ- Ｖａｌ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｖａ
ｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ
- Ｇｌｕ ・・・・・・・（１） Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖ
ａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａ
ｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ
- Ｇｌｕ・・・・・・・・・・（２） 【効果】 交叉反応ないし非特異反応を抑制しつつ検体
のserotypeを簡便且つ正確に判定することが可能とな
り、インターフェロン治療の効果を予め正確に予測する
こと、あるいはＣ型肝炎の治癒ないし治療経過を簡便に
観察することが可能となる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウィ
ルス）関連抗体の測定に有用な抗原ペプチド化合物およ
び免疫学的測定方法に関する。
ルス）関連抗体の測定に有用な抗原ペプチド化合物およ
び免疫学的測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】地球上には種々のウィルスが存在してお
り、そのうちの幾つかは病原体である。例えば、ウィル
ス性肝炎の原因となる肝炎ウィルスは、輸血、注射ある
いは出産等の際に感染することが知られている。
り、そのうちの幾つかは病原体である。例えば、ウィル
ス性肝炎の原因となる肝炎ウィルスは、輸血、注射ある
いは出産等の際に感染することが知られている。
【０００３】輸血はヒトの生命維持のための重要な一手
段であるが、この輸血によってウィルス性肝炎が発症し
た例が、現在まで数多く報告されている。このウィルス
性肝炎は、一般にＡ型、Ｂ型および非Ａ非Ｂ型に分類さ
れている。
段であるが、この輸血によってウィルス性肝炎が発症し
た例が、現在まで数多く報告されている。このウィルス
性肝炎は、一般にＡ型、Ｂ型および非Ａ非Ｂ型に分類さ
れている。
【０００４】従来においては、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢ
Ｖ）も輸血時のウィルス性肝炎の原因として知られてい
た。近年このＨＢＶの存在を検出する検査試薬が開発さ
れ、輸血前に簡便にＨＢＶの存在を確認することが可能
となったため、輸血によるＨＢＶ感染者は皆無となっ
た。一方、明らかにウィルス性でありながら、それまで
肝炎を起こす原因として考えられていたＡ型肝炎ウィル
ス（ＨＡＶ）によるＡ型でもＨＢＶによるＢ型でもない
肝炎（非Ａ非Ｂ型；nonAnonB型）の存在も知られていた
が、その発生源（ウィルス）を確認することは、従来は
困難とされていた。
Ｖ）も輸血時のウィルス性肝炎の原因として知られてい
た。近年このＨＢＶの存在を検出する検査試薬が開発さ
れ、輸血前に簡便にＨＢＶの存在を確認することが可能
となったため、輸血によるＨＢＶ感染者は皆無となっ
た。一方、明らかにウィルス性でありながら、それまで
肝炎を起こす原因として考えられていたＡ型肝炎ウィル
ス（ＨＡＶ）によるＡ型でもＨＢＶによるＢ型でもない
肝炎（非Ａ非Ｂ型；nonAnonB型）の存在も知られていた
が、その発生源（ウィルス）を確認することは、従来は
困難とされていた。
【０００５】１９８９年に、Choo, Q-L.ら（Science,
244 , 359-362, 1989 ）および Kuo,G.ら（Science, 2
44 , 362-364, 1989 ）によって、非Ａ非Ｂ型肝炎ウィ
ルスの存在が明らかにされた。この肝炎ウィルスはＨＣ
Ｖ（Ｃ型肝炎ウィルス）と命名されたが、このＨＣＶは
ヒトとチンパンジ−のみに感染することが、以前から報
告されていた。
244 , 359-362, 1989 ）および Kuo,G.ら（Science, 2
44 , 362-364, 1989 ）によって、非Ａ非Ｂ型肝炎ウィ
ルスの存在が明らかにされた。この肝炎ウィルスはＨＣ
Ｖ（Ｃ型肝炎ウィルス）と命名されたが、このＨＣＶは
ヒトとチンパンジ−のみに感染することが、以前から報
告されていた。
【０００６】上記文献においては、以下のような実験が
記載されている。すなわち、患者に投与されて非Ａ非Ｂ
型肝炎を発症させた血液凝固第VIII因子製剤と同じ製剤
をチンパンジ−No. １に投与し、非Ａ非Ｂ型肝炎を発症
させた。更に該チンパンジ−の肝臓からの抽出物をチン
パンジ−No. ２に投与し、同様に非Ａ非Ｂ型肝炎を発症
させた後、チンパンジ−No. ２の血漿を抽出した。ま
た、このチンパンジ−No. ２の血漿を更にチンパンジ−
No. ３に投与し、非Ａ非Ｂ型肝炎の発症を確認した。こ
の発症が確認された血漿に対して、目的とするウィルス
をフラビノウィルスと想定してウィルス粒子の濃縮操作
(Bradley, D. W.ら: Gastroenterology,88 : 773-779,
1989) を行い、ウィルスのＲＮＡを抽出した。このよ
うにして得たＲＮＡに基づいてｃＤＮＡを合成し、λgt
11ライブラリ−を作製した。このλgt11ライブラリ−に
対して、回復期のチンパンジ−血清や非Ａ非Ｂ型慢性肝
炎患者血清を用いたイムノスクリ−ニングを行い、反応
するクロ−ンの選択を行った。この結果、5-1-1 と称さ
れるクロ−ンのみがＨＣＶに由来するｃＤＮＡ断片であ
ることが確認された。
記載されている。すなわち、患者に投与されて非Ａ非Ｂ
型肝炎を発症させた血液凝固第VIII因子製剤と同じ製剤
をチンパンジ−No. １に投与し、非Ａ非Ｂ型肝炎を発症
させた。更に該チンパンジ−の肝臓からの抽出物をチン
パンジ−No. ２に投与し、同様に非Ａ非Ｂ型肝炎を発症
させた後、チンパンジ−No. ２の血漿を抽出した。ま
た、このチンパンジ−No. ２の血漿を更にチンパンジ−
No. ３に投与し、非Ａ非Ｂ型肝炎の発症を確認した。こ
の発症が確認された血漿に対して、目的とするウィルス
をフラビノウィルスと想定してウィルス粒子の濃縮操作
(Bradley, D. W.ら: Gastroenterology,88 : 773-779,
1989) を行い、ウィルスのＲＮＡを抽出した。このよ
うにして得たＲＮＡに基づいてｃＤＮＡを合成し、λgt
11ライブラリ−を作製した。このλgt11ライブラリ−に
対して、回復期のチンパンジ−血清や非Ａ非Ｂ型慢性肝
炎患者血清を用いたイムノスクリ−ニングを行い、反応
するクロ−ンの選択を行った。この結果、5-1-1 と称さ
れるクロ−ンのみがＨＣＶに由来するｃＤＮＡ断片であ
ることが確認された。
【０００７】上述した操作は、特公平２−５００８８０
号公報にも記載されており、遺伝子配列も明らかにされ
ている。また、日本でもＨＣＶの遺伝子配列に関する報
告がなされている（Journal of virology, 65(3) , 11
05〜1113, 1991）。
号公報にも記載されており、遺伝子配列も明らかにされ
ている。また、日本でもＨＣＶの遺伝子配列に関する報
告がなされている（Journal of virology, 65(3) , 11
05〜1113, 1991）。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】１９９０年６月の日本
肝臓学会において、ＨＣＶ構造領域の遺伝子配列が自治
医科大学の岡本らによって明らかにされた（第２６回日
本肝臓学会予稿集、１９９０年）。１９９０年７月の日
本癌学会においては、岡本らと同様に、ＨＣＶの構造領
域の遺伝子配列が明らかされた（第４９回日本癌学会予
稿集、１９９０年）。これらの発表を比較すると、ＨＣ
Ｖコア領域に関しては遺伝子の変異がほとんどないが、
ＨＣＶエンベロ−ブ領域の遺伝子配列に関しては、両者
間で若干の相違が認められる。
肝臓学会において、ＨＣＶ構造領域の遺伝子配列が自治
医科大学の岡本らによって明らかにされた（第２６回日
本肝臓学会予稿集、１９９０年）。１９９０年７月の日
本癌学会においては、岡本らと同様に、ＨＣＶの構造領
域の遺伝子配列が明らかされた（第４９回日本癌学会予
稿集、１９９０年）。これらの発表を比較すると、ＨＣ
Ｖコア領域に関しては遺伝子の変異がほとんどないが、
ＨＣＶエンベロ−ブ領域の遺伝子配列に関しては、両者
間で若干の相違が認められる。
【０００９】その後、ＨＣＶ構造領域のコア抗原とＨＣ
Ｖ非構造領域の抗原部位とを組み合わせた抗体検査が提
案され（臨床病理, 40(12), 1245-1251,1992）、このよ
うな抗体検査により、ほぼ完全にＨＣＶ抗体陽性者のス
クリーニングを行うことが可能となった。
Ｖ非構造領域の抗原部位とを組み合わせた抗体検査が提
案され（臨床病理, 40(12), 1245-1251,1992）、このよ
うな抗体検査により、ほぼ完全にＨＣＶ抗体陽性者のス
クリーニングを行うことが可能となった。
【００１０】一方、ＨＣＶ検査と平行してＣ型肝炎のイ
ンターフェロンによる治療が行われるようになったが、
ＨＣＶの遺伝子型(genotype)の種類により、インターフ
ェロン治療の効果が異なること判明している。このgeno
typeの分類は、Okamoto H.:肝胆膵, 24, 7-14（1992）
によって明らかにされており、Ｉ型（Proc. Natl. Aca
d. Sci. USA, 88, 2451-2455, 1991 ）、II型（Journal
of virology, 65(3), 1105〜1113, 1991）、III 型
（Journal of General Virology, 72, 2697-2704,199
1）およびIV型（Virology, 188 , 331-341, 1992 ）に
分類されている。１９９３年６月に行われた日本肝臓学
会では、genotypeＩ型およびII型（インターフェロン治
療：２０％有効）は、genotypeIII 型およびIV型（イン
ターフェロン治療：８０％有効）に比べ、インターフェ
ロンの治療効果が低いことが報告された（第２９回日本
肝臓学会予稿集、第５５頁、１９９３年）。
ンターフェロンによる治療が行われるようになったが、
ＨＣＶの遺伝子型(genotype)の種類により、インターフ
ェロン治療の効果が異なること判明している。このgeno
typeの分類は、Okamoto H.:肝胆膵, 24, 7-14（1992）
によって明らかにされており、Ｉ型（Proc. Natl. Aca
d. Sci. USA, 88, 2451-2455, 1991 ）、II型（Journal
of virology, 65(3), 1105〜1113, 1991）、III 型
（Journal of General Virology, 72, 2697-2704,199
1）およびIV型（Virology, 188 , 331-341, 1992 ）に
分類されている。１９９３年６月に行われた日本肝臓学
会では、genotypeＩ型およびII型（インターフェロン治
療：２０％有効）は、genotypeIII 型およびIV型（イン
ターフェロン治療：８０％有効）に比べ、インターフェ
ロンの治療効果が低いことが報告された（第２９回日本
肝臓学会予稿集、第５５頁、１９９３年）。
【００１１】インターフェロンの投与は脱毛や発熱など
の強い副作用が伴うことが多く、患者への負担が大きい
ため、治療前のＨＣＶgenotypeの判定はインターフェロ
ン投与効果の予測に極めて重要である。しかしながら、
従来のgenotype判定法においては、「患者検体中のＨＣ
ＶのＲＮＡ抽出、これに対応するｃＤＮＡの合成、該ｃ
ＤＮＡのＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）法による増
幅、電気泳動法を用いる増幅ｃＤＮＡのバンドの確認」
という、通常４８時間以上にもおよぶ複雑な工程を経て
genotypeが決定されていたため、長い時間と高いコスト
とが必要とされていた。
の強い副作用が伴うことが多く、患者への負担が大きい
ため、治療前のＨＣＶgenotypeの判定はインターフェロ
ン投与効果の予測に極めて重要である。しかしながら、
従来のgenotype判定法においては、「患者検体中のＨＣ
ＶのＲＮＡ抽出、これに対応するｃＤＮＡの合成、該ｃ
ＤＮＡのＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）法による増
幅、電気泳動法を用いる増幅ｃＤＮＡのバンドの確認」
という、通常４８時間以上にもおよぶ複雑な工程を経て
genotypeが決定されていたため、長い時間と高いコスト
とが必要とされていた。
【００１２】一方、遺伝子組み替えの方法を用いて製造
した抗原（約３００個のアミノ酸からなる）を用いて、
患者血清中のＨＣＶ抗体が２つのタイプに分類できるこ
とが報告されている（肝胆膵、２２、８８３〜８８９、
１９９１年）が、この分類は、上記した（インターフェ
ロン治療の判定に重要な）genotypeとの対応の点におい
て必ずしも充分ではなかった。
した抗原（約３００個のアミノ酸からなる）を用いて、
患者血清中のＨＣＶ抗体が２つのタイプに分類できるこ
とが報告されている（肝胆膵、２２、８８３〜８８９、
１９９１年）が、この分類は、上記した（インターフェ
ロン治療の判定に重要な）genotypeとの対応の点におい
て必ずしも充分ではなかった。
【００１３】上述したように、インターフェロン投与に
は多額の費用がかかるが、このインターフェロン投与の
前提となる上記genotypeの判定にも多額の費用がかかる
という欠点があった。治療前にＨＣＶのgenotype判定を
簡便に行うことが可能であれば、インターフェロン投与
効果を簡便に予測することが可能となり、インターフェ
ロンの投与方法や治療指針を計画的に策定することがで
き、更には患者への精神的、肉体的、並びに経済的負担
を軽減することができるため、簡便なＨＣＶのgenotype
判定が切望されていた。
は多額の費用がかかるが、このインターフェロン投与の
前提となる上記genotypeの判定にも多額の費用がかかる
という欠点があった。治療前にＨＣＶのgenotype判定を
簡便に行うことが可能であれば、インターフェロン投与
効果を簡便に予測することが可能となり、インターフェ
ロンの投与方法や治療指針を計画的に策定することがで
き、更には患者への精神的、肉体的、並びに経済的負担
を軽減することができるため、簡便なＨＣＶのgenotype
判定が切望されていた。
【００１４】したがって本発明の目的は、ＨＣＶのgeno
typeＩ型およびII型と、genotypeIII 型およびIV型との
区別が可能なＨＣＶ抗体の簡便な測定を可能とするＨＣ
Ｖ抗体測定用抗原を提供することにある。
typeＩ型およびII型と、genotypeIII 型およびIV型との
区別が可能なＨＣＶ抗体の簡便な測定を可能とするＨＣ
Ｖ抗体測定用抗原を提供することにある。
【００１５】本発明の他の目的は、ＨＣＶのgenotypeＩ
型およびII型と、genotypeIII 型およびIV型との区別が
可能で、しかも交叉反応ないし非特異反応が抑制された
ＨＣＶ抗体の測定を可能とするＨＣＶ抗体測定用抗原を
提供することにある。
型およびII型と、genotypeIII 型およびIV型との区別が
可能で、しかも交叉反応ないし非特異反応が抑制された
ＨＣＶ抗体の測定を可能とするＨＣＶ抗体測定用抗原を
提供することにある。
【００１６】本発明の更に他の目的は、ＨＣＶのgenoty
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型との区
別が可能なＨＣＶ抗体の簡便な測定法を提供することに
ある。
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型との区
別が可能なＨＣＶ抗体の簡便な測定法を提供することに
ある。
【００１７】本発明の更に他の目的は、ＨＣＶのgenoty
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型との区
別が可能で、しかも交叉反応ないし非特異反応が抑制さ
れたＨＣＶ抗体の測定法を提供することにある。
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型との区
別が可能で、しかも交叉反応ないし非特異反応が抑制さ
れたＨＣＶ抗体の測定法を提供することにある。
【００１８】本発明の更に他の目的は、ＨＣＶのgenoty
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型との区
別が可能な低コストのＨＣＶ抗体の測定法を提供するこ
とにある。
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型との区
別が可能な低コストのＨＣＶ抗体の測定法を提供するこ
とにある。
【００１９】
【課題を解決するための手段】本発明者は鋭意研究の結
果、ＨＣＶ抗原部位に基づく特定のアミノ酸配列（少な
くとも６個のアミノ酸を含む配列）を用いてＨＣＶ抗体
型（serotype）の判定を行うことが、ＨＣＶのgenotype
Ｉ型およびII型と、genotypeIII 型およびIV型との簡便
な区別を可能とするのみならず、抗原−抗体反応に伴う
交叉反応ないし非特異反応を効果的に抑制して、上述し
た目的の達成に極めて効果的であることを見出した。
果、ＨＣＶ抗原部位に基づく特定のアミノ酸配列（少な
くとも６個のアミノ酸を含む配列）を用いてＨＣＶ抗体
型（serotype）の判定を行うことが、ＨＣＶのgenotype
Ｉ型およびII型と、genotypeIII 型およびIV型との簡便
な区別を可能とするのみならず、抗原−抗体反応に伴う
交叉反応ないし非特異反応を効果的に抑制して、上述し
た目的の達成に極めて効果的であることを見出した。
【００２０】本発明の抗原ペプチド化合物は上記知見に
基づくものであり、より詳しくは、下記式（１）で示さ
れる配列に含まれるアミノ酸配列であって、連続した少
なくとも６個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴
とするものである。
基づくものであり、より詳しくは、下記式（１）で示さ
れる配列に含まれるアミノ酸配列であって、連続した少
なくとも６個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴
とするものである。
【００２１】 Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ- Ｖａｌ- Ｐｒｏ - Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ - Ａｓｐ- Ｇｌｕ ・・・・・・・（１） 本発明によれば、更に、下記式（２）で示される配列に
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
【００２２】 Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ - Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ - Ａｓｐ- Ｇｌｕ・・・・・・・・・・（２） 本発明によれば、更に、下記式（３）で示される配列に
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
【００２３】 Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ｓｅｒ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ - Ａｌａ- Ａｓｐ- Ｌｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ - Ｔｒｐ- Ａｒｇ・・・・・・・・・・（３） 本発明によれば、更に、下記式（４）で示される配列に
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
【００２４】 Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ａｌａ- Ｔｙｒ- Ａｓｐ - Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ｍｅｔ- Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｐｈｅ - Ｍｅｔ- Ｇｌｙ・・・・・・・・・・・ （４） 本発明によれば、更に、下記式（５）で示される配列に
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
【００２５】 Ｇｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ - Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ - Ｇｌｙ- Ｍｅｔ・・・・・・・・・・・ （５） 本発明によれば、更に、下記式（６）で示される配列に
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
【００２６】 Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ - Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ａｌａ- Ｌｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ - Ｇｌｙ- Ｇｌｎ・・・・・・・・・・・ （６） 本発明によれば、更に、下記式（７）で示される配列に
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
【００２７】 Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｌａ - Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｔｈｒ- Ｔｒｐ- Ａｌａ - Ｇｌｎ- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （７） 本発明によれば、更に、下記式（８）で示される配列に
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
【００２８】 Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｓｐ - Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｓｅｒ- Ｔｈｒ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ｓｅｒ- Ｔｒｐ- Ｇｌｙ - Ｌｙｓ- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （８） 本発明によれば、更に、下記式（９）で示される配列に
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６
個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原
ペプチド化合物が提供される。
【００２９】 Ｉｌｅ- Ｉｌｅ- Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ - Ｖａｌ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｎ - Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ａｌａ - Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ｇｌｙ - Ｍｅｔ- Ｇｌｎ- Ｌｅｕ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （９）（ckk-n1(40)） （一文字表記：ＩＩＬＳＧ ＲＰＡＩＶ ＰＤＲＥＬ ＬＹＱＥＦ ＤＥＭＥＥ ＣＡＳＨＬ ＰＹＩＥＱ ＧＭＱＬＡ） 本発明によれば、更に、下記式（１０）で示される配列
に含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも
６個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗
原ペプチド化合物が提供される。
に含まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも
６個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗
原ペプチド化合物が提供される。
【００３０】 Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ - Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ - Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ａｌａ - Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ａｌａ- Ｌｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ - Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｉｌｅ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （１０）（ckk-n2(40)） （一文字表記：ＬＨＶＮＱ ＲＡＶＶＡ ＰＤＫＥＶ ＬＹＥＡＦ ＤＥＭＥＥ ＣＡＳＲＡ ＡＬＩＥＥ ＧＱＲＩＡ） 本発明によれば、更に上記式（１）〜（１０）のいずれ
かに記載の抗原ペプチドを担体に結合させ、抗原−抗体
反応を利用して該ペプチドに検体中のＨＣＶ抗体を結合
させ、更に抗原−抗体反応を利用して該ＨＣＶ抗体に標
識リガンドを結合させることにより、上記検体中のＨＣ
Ｖ抗体を測定することを特徴とするＨＣＶ抗体の免疫学
的測定法が提供される。
かに記載の抗原ペプチドを担体に結合させ、抗原−抗体
反応を利用して該ペプチドに検体中のＨＣＶ抗体を結合
させ、更に抗原−抗体反応を利用して該ＨＣＶ抗体に標
識リガンドを結合させることにより、上記検体中のＨＣ
Ｖ抗体を測定することを特徴とするＨＣＶ抗体の免疫学
的測定法が提供される。
【００３１】ここに、「リガンド」とは、抗原および／
又は抗体に対して特異的な結合性を有する物質（例えば
抗体および／又は抗原）をいう。
又は抗体に対して特異的な結合性を有する物質（例えば
抗体および／又は抗原）をいう。
【００３２】
【作用】上述した従来のgenotype判定においては、ＨＣ
Ｖ遺伝子の配列自体を利用してＨＣＶの型判定を行って
いるが、本発明においては、ＨＣＶに固有の抗原部位に
対する抗体の型（serotype）を利用してＨＣＶの型判定
を行っている。このような抗体型の判定は、従来のgeno
type判定（ＨＣＶのＲＮＡ抽出→ｃＤＮＡの合成→該ｃ
ＤＮＡのＰＣＲ法による増幅→電気泳動法を用いた増幅
バンドの確認）に比べて著しく短時間で行うことがで
き、しかも作業工程も単純であるため、本発明によれ
ば、簡便且つ低コストのＨＣＶ型（genotype）の判定方
法を提供することができる。
Ｖ遺伝子の配列自体を利用してＨＣＶの型判定を行って
いるが、本発明においては、ＨＣＶに固有の抗原部位に
対する抗体の型（serotype）を利用してＨＣＶの型判定
を行っている。このような抗体型の判定は、従来のgeno
type判定（ＨＣＶのＲＮＡ抽出→ｃＤＮＡの合成→該ｃ
ＤＮＡのＰＣＲ法による増幅→電気泳動法を用いた増幅
バンドの確認）に比べて著しく短時間で行うことがで
き、しかも作業工程も単純であるため、本発明によれ
ば、簡便且つ低コストのＨＣＶ型（genotype）の判定方
法を提供することができる。
【００３３】更には、上記した従来の血清型判定法（約
３００個のアミノ酸からなる抗原を用いる）と比較し
て、本発明においては、抗原−抗体反応に伴う交叉反応
ないし非特異反応が効果的に抑制されている。
３００個のアミノ酸からなる抗原を用いる）と比較し
て、本発明においては、抗原−抗体反応に伴う交叉反応
ないし非特異反応が効果的に抑制されている。
【００３４】以下、本発明を詳細に説明する。本明細書
においては、アミノ酸配列の表記においては、Ｎ末端
（左側）からＣ末端（右側）へ記載する（例えば、以下
のアミノ酸配列（１）においては、ＬｅｕがＮ末端、Ｇ
ｌｕがＣ末端である）。また、本明細書においては、下
記に示すアミノ酸表記を用いる。
においては、アミノ酸配列の表記においては、Ｎ末端
（左側）からＣ末端（右側）へ記載する（例えば、以下
のアミノ酸配列（１）においては、ＬｅｕがＮ末端、Ｇ
ｌｕがＣ末端である）。また、本明細書においては、下
記に示すアミノ酸表記を用いる。
【００３５】 （アミノ酸の一文字表記および三文字表記） ＜略号＞ ＜名称＞ ＜略号＞ ＜名称＞ Ａｓｐ Ｄ アスパラギン酸 Ｖａｌ Ｖ バリン Ａｓｎ Ｎ アスパラギン Ｍｅｔ Ｍ メチオニン Ｔｈｒ Ｔ トレオニン Ｉｌｅ Ｉ イソロイシン Ｓｅｒ Ｓ セリン Ｌｅｕ Ｌ ロイシン Ｇｌｕ Ｅ グルタミン酸 Ｔｙｒ Ｙ チロシン Ｇｌｎ Ｑ グルタミン Ｐｈｅ Ｆ フェニルアラニン Ｐｒｏ Ｐ プロリン Ｔｒｐ Ｗ トリプトファン Ｇｌｙ Ｇ グリシン Ｌｙｓ Ｋ リジン Ａｌａ Ａ アラニン Ｈｉｓ Ｈ ヒスチジン Ｃｙｓ Ｃ システイン Ａｒｇ Ｒ アルギニン （抗原ペプチド化合物）本発明の抗原ペプチド化合物
は、下記式（１）又は（２）で示される配列（アミノ酸
２０個）に含まれる配列であって、少なくとも６個の連
続したアミノ酸からなる配列を有するペプチド化合物で
ある。
は、下記式（１）又は（２）で示される配列（アミノ酸
２０個）に含まれる配列であって、少なくとも６個の連
続したアミノ酸からなる配列を有するペプチド化合物で
ある。
【００３６】 Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ- Ｖａｌ- Ｐｒｏ - Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ - Ａｓｐ- Ｇｌｕ ・・・・・・・（１）（ckk-n5；NS4L2-1 、ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＬＳＧＲＰＡＩＶＰＤＲＥＶＬＹＱＥＦＤＥ） Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ - Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ - Ｐｈｅ- Ａｓｐ・・・・・・・・・・（２）（ckk-n6；NS4L2-2 、ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＶＮＱＤＲ ＡＶＶＡＰＤＫＥＶＬＹＥＡＦＤ） 本発明者の知見によれば、上記式（１）又は（２）で示
されるアミノ酸２０個からなる配列を構成する種々の長
さのアミノ酸配列であって、少なくとも６個の連続した
アミノ酸を含む配列は、本発明においてペプチド（１）
および／又は（２）と同様に、抗原として好適に使用可
能である。
されるアミノ酸２０個からなる配列を構成する種々の長
さのアミノ酸配列であって、少なくとも６個の連続した
アミノ酸を含む配列は、本発明においてペプチド（１）
および／又は（２）と同様に、抗原として好適に使用可
能である。
【００３７】このような種々の長さのアミノ酸配列（ア
ミノ酸６個以上２０個以下）としては、例えば、下記の
配列が挙げられる。
ミノ酸６個以上２０個以下）としては、例えば、下記の
配列が挙げられる。
【００３８】上記ペプチド化合物（１）に含まれるアミ
ノ酸配列
ノ酸配列
【００３９】
【表１】
【００４０】上記ペプチド化合物（２）に含まれるアミ
ノ酸配列
ノ酸配列
【００４１】
【表２】
【００４２】本発明者の知見によれば、上記した（１）
又は（２）の配列を含むペプチド（アミノ酸２１個以上
からなる）も上記（１）又は（２）と同様に抗原として
好適に使用可能である。このようなペプチドを構成する
アミノ酸の数は、化学的に合成する場合には４０個以下
であることが好ましく、リコンビナント法を用いて得る
場合には１００個以下であることが好ましい。
又は（２）の配列を含むペプチド（アミノ酸２１個以上
からなる）も上記（１）又は（２）と同様に抗原として
好適に使用可能である。このようなペプチドを構成する
アミノ酸の数は、化学的に合成する場合には４０個以下
であることが好ましく、リコンビナント法を用いて得る
場合には１００個以下であることが好ましい。
【００４３】上述した抗原ペプチド化合物（少なくとも
６個のアミノ酸を含むペプチド化合物）を得る方法は特
に制限されない。該ペプチド化合物は化学的に合成して
もよく、また遺伝子工学的手法（例えば遺伝子組替え技
術、すなわちリコンビナント法）を用いて製造してもよ
い。化学的手法を用いる場合、中間生成物の精製等が容
易な点からは、固相法によりアミノ酸を連結することが
好ましく、更には自動ペプチド合成機（例えば、アプラ
イド・バイオシステムズ社製の４３０Ａペプチド合成
機）を用いて合成することが好ましい。
６個のアミノ酸を含むペプチド化合物）を得る方法は特
に制限されない。該ペプチド化合物は化学的に合成して
もよく、また遺伝子工学的手法（例えば遺伝子組替え技
術、すなわちリコンビナント法）を用いて製造してもよ
い。化学的手法を用いる場合、中間生成物の精製等が容
易な点からは、固相法によりアミノ酸を連結することが
好ましく、更には自動ペプチド合成機（例えば、アプラ
イド・バイオシステムズ社製の４３０Ａペプチド合成
機）を用いて合成することが好ましい。
【００４４】（抗原ペプチド化合物の抗原性の確認）上
記したペプチド化合物（１）および（２）の配列は、Ｈ
ＣＶのＮＳ４領域のアミノ酸配列からの抗原部位の抽出
に基づいて見出したものである（後述の実施例１を参
照）。本発明者は、更に、これらのペプチド化合物
（１）および（２）を用いた酵素免疫測定法（ＥＬＩＳ
ＡないしＥＩＡ）によりＨＣＶgenotypeの検査を行い、
別途ＨＣＶgenotypeの判定を行った患者の検体を用い
て、その特異性を確認した（後述の実施例４および５を
参照）。
記したペプチド化合物（１）および（２）の配列は、Ｈ
ＣＶのＮＳ４領域のアミノ酸配列からの抗原部位の抽出
に基づいて見出したものである（後述の実施例１を参
照）。本発明者は、更に、これらのペプチド化合物
（１）および（２）を用いた酵素免疫測定法（ＥＬＩＳ
ＡないしＥＩＡ）によりＨＣＶgenotypeの検査を行い、
別途ＨＣＶgenotypeの判定を行った患者の検体を用い
て、その特異性を確認した（後述の実施例４および５を
参照）。
【００４５】（他の抗原ペプチド化合物）上述したペプ
チド化合物（１）および（２）（いずれもＨＣＶのＮＳ
４領域に対応する配列である）を用いることにより、後
述するようにserotypeの判定が可能であるが、serotype
判定の精度向上ないし適用範囲拡大の点からは、上記ペ
プチド化合物（１）および／又は（２）と、他の抗原ペ
プチド化合物とを組合わせることが好ましい。このよう
な「他の抗原ペプチド化合物」としては、下記のペプチ
ド（３）〜（８）が挙げられる。
チド化合物（１）および（２）（いずれもＨＣＶのＮＳ
４領域に対応する配列である）を用いることにより、後
述するようにserotypeの判定が可能であるが、serotype
判定の精度向上ないし適用範囲拡大の点からは、上記ペ
プチド化合物（１）および／又は（２）と、他の抗原ペ
プチド化合物とを組合わせることが好ましい。このよう
な「他の抗原ペプチド化合物」としては、下記のペプチ
ド（３）〜（８）が挙げられる。
【００４６】 Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ｓｅｒ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ - Ａｌａ- Ａｓｐ- Ｌｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ - Ｔｒｐ- Ａｒｇ・・・・・・・・・・（３）（ckk-n3；NS5L2-1 、ＮＳ５領域に対応） （一文字表記：ＣＴＴＨＨＶＳＰＤＡＤＬＩＥＡＮＬＬＷＲ） Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ａｌａ- Ｔｙｒ- Ａｓｐ - Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ｍｅｔ- Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｐｈｅ - Ｍｅｔ- Ｇｌｙ・・・・・・・・・・・ （４）（ckkーn4；NS5L2-2 、ＮＳ５領域に対応） （一文字表記：ＣＴＴＨＧＫＡＹＤＶＤＭＶＤＡＮＬＦＭＧ） Ｇｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ - Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ - Ｇｌｙ- Ｍｅｔ・・・・・・・・・・・ （５）（ckk-n1；NS4L3-1 、ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＱＥＦＤＥＭＥＥＣＡ ＳＨＬＰＹＩＥＱＧＭ） Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ - Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ａｌａ- Ｌｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ - Ｇｌｙ- Ｇｌｎ・・・・・・・・・・・ （６）（ckk-n2；NS4L3ー2 、ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＥＡＦＤＥＭＥＥＣＡＳＲＡＡＬＩＥＥＧＱ） Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｌａ - Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｔｈｒ- Ｔｒｐ- Ａｌａ - Ｇｌｎ- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （７）（ckk-c1；core-1、ｃｏｒｅ領域に対応） （一文字表記：ＧＲＲＱＰＩＰＫＡＲＲＰＥＧＲＴＷＡＱＰ） Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｓｐ - Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｓｅｒ- Ｔｈｒ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ｓｅｒ- Ｔｒｐ- Ｇｌｙ - Ｌｙｓ- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （８）（ckk-c2；core-2、ｃｏｒｅ領域に対応） （一文字表記：ＧＲＲＱＰＩＰＫＤＲＲＳＴＧＫＳＷＧＫＰ） Ｉｌｅ- Ｉｌｅ- Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ - Ｖａｌ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｎ - Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ａｌａ - Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ｇｌｙ - Ｍｅｔ- Ｇｌｎ- Ｌｅｕ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （９）（ckk-n1(40)、ＮＳ４領 域に対応） （一文字表記：ＩＩＬＳＧ ＲＰＡＩＶ ＰＤＲＥＬ ＬＹＱＥＦ ＤＥＭＥＥ ＣＡＳＨＬ ＰＹＩＥＱ ＧＭＱＬＡ） Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ - Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ - Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ａｌａ - Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ａｌａ- Ｌｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ - Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｉｌｅ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （１０）（ckk-n2(40)、ＮＳ４ 領域に対応） （一文字表記：ＬＨＶＮＱ ＲＡＶＶＡ ＰＤＫＥＶ ＬＹＥＡＦ ＤＥＭＥＥ ＣＡＳＲＡ ＡＬＩＥＥ ＧＱＲＩＡ） 上記ペプチド（３）〜（１０）についても、ＮＳ４領域
対応のペプチド（１）および（２）の場合と同様にし
て、抗原性の確認、製造等を行うことができる。
対応のペプチド（１）および（２）の場合と同様にし
て、抗原性の確認、製造等を行うことができる。
【００４７】また、本発明者の知見によれば、上記式
（３）〜（１０）で示されるアミノ酸２０個からなる配
列を構成する種々の長さのアミノ酸配列であって、少な
くとも６個の連続したアミノ酸を含む配列は、本発明に
おいてペプチド（３）、（４）、（５）、（６）、
（７）、（８）、（９）、および／又は（１０）のいず
れかと同様に、抗原ペプチドとして好適に使用可能であ
る。
（３）〜（１０）で示されるアミノ酸２０個からなる配
列を構成する種々の長さのアミノ酸配列であって、少な
くとも６個の連続したアミノ酸を含む配列は、本発明に
おいてペプチド（３）、（４）、（５）、（６）、
（７）、（８）、（９）、および／又は（１０）のいず
れかと同様に、抗原ペプチドとして好適に使用可能であ
る。
【００４８】このような種々の長さのアミノ酸配列（ア
ミノ酸６個以上２０個以下）としては、例えば、下記の
配列が挙げられる。
ミノ酸６個以上２０個以下）としては、例えば、下記の
配列が挙げられる。
【００４９】上記ペプチド化合物（３）に含まれるアミ
ノ酸配列
ノ酸配列
【００５０】
【表３】
【００５１】上記ペプチド化合物（４）に含まれるアミ
ノ酸配列
ノ酸配列
【００５２】
【表４】
【００５３】上記ペプチド化合物（５）に含まれるアミ
ノ酸配列
ノ酸配列
【００５４】
【表５】
【００５５】上記ペプチド化合物（６）に含まれるアミ
ノ酸配列
ノ酸配列
【００５６】
【表６】
【００５７】本発明者の知見によれば、上記した（３）
ないし（１０）のいずれか配列を含むペプチド（アミノ
酸２１個以上からなる）も上記（３）ないし（１０）の
配列を有するペプチドと同様に、抗原として好適に使用
可能である。このようなペプチドを構成するアミノ酸の
数は、化学的に合成する場合には４０個以下であること
が好ましく、リコンビナント法を用いて得る場合には１
００個以下であることが好ましい。
ないし（１０）のいずれか配列を含むペプチド（アミノ
酸２１個以上からなる）も上記（３）ないし（１０）の
配列を有するペプチドと同様に、抗原として好適に使用
可能である。このようなペプチドを構成するアミノ酸の
数は、化学的に合成する場合には４０個以下であること
が好ましく、リコンビナント法を用いて得る場合には１
００個以下であることが好ましい。
【００５８】本発明者の知見によれば、上記ペプチド化
合物（１）〜（１０）をそれぞれ単独で抗原として用い
る場合、serotype判定の精度の点から、抗原として好ま
しい順は以下の通りである（この欄の記載においては、
「（１）および／又は（２）」をまとめて「ＮＳ４−
１」と表し、「（３）および／又は（４）」をまとめて
「ＮＳ５」と表し、「（５）および／又は（６）」をま
とめて「ＮＳ４−２」と表し、「（９）および／又は
（１０）」をまとめて「ＮＳ４−４０」と表し、
「（７）および／又は（８）」をまとめて「ｃｏｒｅ」
と表す）。
合物（１）〜（１０）をそれぞれ単独で抗原として用い
る場合、serotype判定の精度の点から、抗原として好ま
しい順は以下の通りである（この欄の記載においては、
「（１）および／又は（２）」をまとめて「ＮＳ４−
１」と表し、「（３）および／又は（４）」をまとめて
「ＮＳ５」と表し、「（５）および／又は（６）」をま
とめて「ＮＳ４−２」と表し、「（９）および／又は
（１０）」をまとめて「ＮＳ４−４０」と表し、
「（７）および／又は（８）」をまとめて「ｃｏｒｅ」
と表す）。
【００５９】好ましい順： ＮＳ４−１＞ＮＳ５＞ＮＳ
４−２＞ｃｏｒｅ 一方、上記ペプチド化合物ＮＳ４−１、ＮＳ５、ＮＳ４
−２、およびｃｏｒｅのいずれか２種類を組合わせて抗
原として用いる場合、serotype判定の精度の点から、抗
原として好ましい順は以下の通りである 好ましい順：（ＮＳ４−１）＋（ＮＳ５）＞（ＮＳ４−
２）＋（ＮＳ５）＞（ＮＳ４−１）＋（ｃｏｒｅ）＞
（ＮＳ４−２）＋（ｃｏｒｅ）＞（ＮＳ５）＋（ｃｏｒ
ｅ） また、上記ペプチド化合物ＮＳ４−１、ＮＳ５、ＮＳ４
−２、およびｃｏｒｅのいずれか３種類を組合わせて抗
原として用いる場合、serotype判定の精度の点から、抗
原として好ましい順は以下の通りである 好ましい順： （ＮＳ４−１）＋（ＮＳ５）＋（ｃｏｒ
ｅ）＞（ＮＳ４−２）＋（ＮＳ５）＋（ｃｏｒｅ） 前記ペプチド化合物「ＮＳ４−４０」（アミノ酸数＝４
０）は、上記した組合せにおいて、「ＮＳ４−１」の代
わりに好適に使用可能である。このように「ＮＳ４−４
０」を用いた場合には、「ＮＳ４−１」を用いた場合に
比べ、より高い判定率（＝（判定出来た検体数）／（総
検体数））を得ることができる。
４−２＞ｃｏｒｅ 一方、上記ペプチド化合物ＮＳ４−１、ＮＳ５、ＮＳ４
−２、およびｃｏｒｅのいずれか２種類を組合わせて抗
原として用いる場合、serotype判定の精度の点から、抗
原として好ましい順は以下の通りである 好ましい順：（ＮＳ４−１）＋（ＮＳ５）＞（ＮＳ４−
２）＋（ＮＳ５）＞（ＮＳ４−１）＋（ｃｏｒｅ）＞
（ＮＳ４−２）＋（ｃｏｒｅ）＞（ＮＳ５）＋（ｃｏｒ
ｅ） また、上記ペプチド化合物ＮＳ４−１、ＮＳ５、ＮＳ４
−２、およびｃｏｒｅのいずれか３種類を組合わせて抗
原として用いる場合、serotype判定の精度の点から、抗
原として好ましい順は以下の通りである 好ましい順： （ＮＳ４−１）＋（ＮＳ５）＋（ｃｏｒ
ｅ）＞（ＮＳ４−２）＋（ＮＳ５）＋（ｃｏｒｅ） 前記ペプチド化合物「ＮＳ４−４０」（アミノ酸数＝４
０）は、上記した組合せにおいて、「ＮＳ４−１」の代
わりに好適に使用可能である。このように「ＮＳ４−４
０」を用いた場合には、「ＮＳ４−１」を用いた場合に
比べ、より高い判定率（＝（判定出来た検体数）／（総
検体数））を得ることができる。
【００６０】（ＨＣＶ抗体の測定方法）上記した抗原ペ
プチド化合物のＨＣＶ抗体との特異的結合性を利用し
て、試料ないし検体中のＨＣＶ抗体を免疫学的に測定す
ることが可能である。本発明において使用する免疫学的
測定法は特に制限されないが、例えば、公知のイムノア
ッセイ法を特に制限なく使用することが可能である。こ
のようなイムノアッセイ法としては、例えば、酵素免疫
測定法、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法
（ＦＩＡ）等が使用できる。このイムノアッセイにおい
ては公知の測定技術（例えば、競合法、二抗体法、サン
ドイッチ法等）を特に制限なく使用することが可能であ
る。このような公知の測定技術に関しては、文献（ＥＩ
Ａに関しては、例えば、石川榮治「酵素免疫測定法」
（第３版）、１８０頁、医学書院）を参照することがで
きる。
プチド化合物のＨＣＶ抗体との特異的結合性を利用し
て、試料ないし検体中のＨＣＶ抗体を免疫学的に測定す
ることが可能である。本発明において使用する免疫学的
測定法は特に制限されないが、例えば、公知のイムノア
ッセイ法を特に制限なく使用することが可能である。こ
のようなイムノアッセイ法としては、例えば、酵素免疫
測定法、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法
（ＦＩＡ）等が使用できる。このイムノアッセイにおい
ては公知の測定技術（例えば、競合法、二抗体法、サン
ドイッチ法等）を特に制限なく使用することが可能であ
る。このような公知の測定技術に関しては、文献（ＥＩ
Ａに関しては、例えば、石川榮治「酵素免疫測定法」
（第３版）、１８０頁、医学書院）を参照することがで
きる。
【００６１】本発明によれば、上記抗原ペプチド化合物
を用いてＨＣＶ抗体を免疫学的に測定することにより、
検体のＨＣＶ抗体の種類（serotype）を判定することが
できる（例えば後述するように、ＨＣＶのserotypeがgr
oup I であるか、group IIであるか判定できる）。後述
するように、ＨＣＶserotypeのgroup I はＨＣＶgenoty
pe IおよびIIに対応し、ＨＣＶserotypeのgroup IIはＨ
ＣＶgenotype IIIおよびIVに対応するため、簡便なＨＣ
Ｖgenotypeの判定が可能となる。
を用いてＨＣＶ抗体を免疫学的に測定することにより、
検体のＨＣＶ抗体の種類（serotype）を判定することが
できる（例えば後述するように、ＨＣＶのserotypeがgr
oup I であるか、group IIであるか判定できる）。後述
するように、ＨＣＶserotypeのgroup I はＨＣＶgenoty
pe IおよびIIに対応し、ＨＣＶserotypeのgroup IIはＨ
ＣＶgenotype IIIおよびIVに対応するため、簡便なＨＣ
Ｖgenotypeの判定が可能となる。
【００６２】上記イムノアッセイにおいては、必要に応
じて、上記抗原ペプチド化合物を担体（ないし支持体）
に結合ないし固相化して、そのＨＣＶ抗体との特異的結
合性を利用して、ＨＣＶ抗原に対する抗体の種類（すな
わちＨＣＶのserotype）を判定することができる。この
際の担体ないし支持体としては、ウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）、好ましくは分子量５万から１０万程度のポ
リペプチド、マイクロプレ−トのウェル、好ましくは直
径０．１μｍから６ｍｍ程度のポリスチレンボ−ル（な
いしポリスチレンビーズ）等が好ましく用いられる。
じて、上記抗原ペプチド化合物を担体（ないし支持体）
に結合ないし固相化して、そのＨＣＶ抗体との特異的結
合性を利用して、ＨＣＶ抗原に対する抗体の種類（すな
わちＨＣＶのserotype）を判定することができる。この
際の担体ないし支持体としては、ウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）、好ましくは分子量５万から１０万程度のポ
リペプチド、マイクロプレ−トのウェル、好ましくは直
径０．１μｍから６ｍｍ程度のポリスチレンボ−ル（な
いしポリスチレンビーズ）等が好ましく用いられる。
【００６３】上記ペプチド（１）〜（８）は、上述した
ようにＨＣＶ抗体測定に好適に用いることができるが、
更には、例えばＨＣＶに対するワクチン製造用の抗原な
いし免疫原として用いることも可能である。この場合の
ワクチンは、例えば、遺伝子工学的手法を用いて作製す
ることができる（リコンビナント法）。
ようにＨＣＶ抗体測定に好適に用いることができるが、
更には、例えばＨＣＶに対するワクチン製造用の抗原な
いし免疫原として用いることも可能である。この場合の
ワクチンは、例えば、遺伝子工学的手法を用いて作製す
ることができる（リコンビナント法）。
【００６４】以下、実施例に基づき本発明を更に具体的
に説明する。
に説明する。
【００６５】
【実施例】実施例１ （Hydrophilicity Valueによる抗原部位の特定）Geoffr
ey RS, Nature, 302 , 490-495 （1983）で合成された
抗原性を有するペプチドの配列と、ＨＣＶの遺伝子配列
（第２６回日本肝臓学会予稿集、１９９０年；第４９回
日本癌学会予稿集、１９９０年；Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA,88, 2451-2455, 1991 ；Journal of virology,
65(3) , 1105〜1113, 1991；Journal of General Viro
logy, 72, 2697-2704,1991；Virology, 188 , 331-34
1,1992 ）とに基づき、ＨＣＶの非構造領域および構造
領域のアミノ酸配列を決定した。
ey RS, Nature, 302 , 490-495 （1983）で合成された
抗原性を有するペプチドの配列と、ＨＣＶの遺伝子配列
（第２６回日本肝臓学会予稿集、１９９０年；第４９回
日本癌学会予稿集、１９９０年；Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA,88, 2451-2455, 1991 ；Journal of virology,
65(3) , 1105〜1113, 1991；Journal of General Viro
logy, 72, 2697-2704,1991；Virology, 188 , 331-34
1,1992 ）とに基づき、ＨＣＶの非構造領域および構造
領域のアミノ酸配列を決定した。
【００６６】このように求めたアミノ酸配列に基づき、
その抗原部位をHopp TP, Proc. Natl. Acad. Sci. 78,
3824-3828 （1981）の方法で算出した。より具体的に
は、各アミノ酸のHydrophlicity Value を用い、以下の
ようにして行った。
その抗原部位をHopp TP, Proc. Natl. Acad. Sci. 78,
3824-3828 （1981）の方法で算出した。より具体的に
は、各アミノ酸のHydrophlicity Value を用い、以下の
ようにして行った。
【００６７】上記により求めたＨＣＶを構成するアミノ
酸配列に基づき、連続する６個のアミノ酸の Hyrdrophi
licity Valueを合計した。この計算をＨＣＶアミノ酸配
列の全領域について行い、親水性および疎水性の強度を
算出した。親水性が高い部分を、抗原性を示す部位とし
た。
酸配列に基づき、連続する６個のアミノ酸の Hyrdrophi
licity Valueを合計した。この計算をＨＣＶアミノ酸配
列の全領域について行い、親水性および疎水性の強度を
算出した。親水性が高い部分を、抗原性を示す部位とし
た。
【００６８】この際、Jack K., Mol. Biol. 157, 105
（1982）に示されている HydropathyValue や Alan M
S., Science, 227, 429（1985）に示されている Antige
nicityValue 等も、上記Hydrophilicity Valueと同様に
算出することが可能であった。上記Hydrophilicity Val
ueを用いた計算により求めた結果を図１（ｃｏｒｅ領
域）、図２（ＮＳ４領域）および図３（ＮＳ５領域）の
グラフに示す（上記Hydropathy ValueおよびAntigenici
ty Valueを用いた結果をも併せて示す）。
（1982）に示されている HydropathyValue や Alan M
S., Science, 227, 429（1985）に示されている Antige
nicityValue 等も、上記Hydrophilicity Valueと同様に
算出することが可能であった。上記Hydrophilicity Val
ueを用いた計算により求めた結果を図１（ｃｏｒｅ領
域）、図２（ＮＳ４領域）および図３（ＮＳ５領域）の
グラフに示す（上記Hydropathy ValueおよびAntigenici
ty Valueを用いた結果をも併せて示す）。
【００６９】上記図１ないし図３で得られた結果に基づ
いてＣ型肝炎の抗原となり得る領域を抽出し、更に、こ
のようにして求めた領域のうち、genotype Iおよびgeno
typeIIで共通のアミノ酸配列を有する領域と、genotype
IIIおよび genotype IVで共通のアミノ酸配列を有する
領域とを求めた。この結果、このような条件を満たした
抗原のアミノ酸配列として、ＮＳ４領域に関して下記の
ckk-n5およびckk-n6が求められた。
いてＣ型肝炎の抗原となり得る領域を抽出し、更に、こ
のようにして求めた領域のうち、genotype Iおよびgeno
typeIIで共通のアミノ酸配列を有する領域と、genotype
IIIおよび genotype IVで共通のアミノ酸配列を有する
領域とを求めた。この結果、このような条件を満たした
抗原のアミノ酸配列として、ＮＳ４領域に関して下記の
ckk-n5およびckk-n6が求められた。
【００７０】 Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ- Ｖａｌ- Ｐｒｏ - Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ - Ａｓｐ- Ｇｌｕ ・・・・・・・（ckk-n5） Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ - Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ - Ａｓｐ- Ｇｌｕ・・・・・・・・・・（ckk-n6） 同様の手法により、抗原のアミノ酸配列として、ＮＳ５
領域に関して下記のckk-n3およびckk-n4が求められた。
領域に関して下記のckk-n3およびckk-n4が求められた。
【００７１】 Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ｓｅｒ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ - Ａｌａ- Ａｓｐ- Ｌｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ - Ｔｒｐ- Ａｒｇ・・・・・・・・・・（ckk-n3） Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ａｌａ- Ｔｙｒ- Ａｓｐ - Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ｍｅｔ- Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｐｈｅ - Ｍｅｔ- Ｇｌｙ・・・・・・・・・・・ （ckkーn4） 同様の手法により、抗原のアミノ酸配列として、ＮＳ４
領域に関して下記のckk-n1およびckk-n2が求められた。
領域に関して下記のckk-n1およびckk-n2が求められた。
【００７２】 Ｇｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ - Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ - Ｇｌｙ- Ｍｅｔ・・・・・・・・・・・ （ckk-n1） Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ - Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ａｌａ- Ｌｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ - Ｇｌｙ- Ｇｌｎ・・・・・・・・・・・ （ckk-n2） 同様の手法により、抗原のアミノ酸配列として、ｃｏｒ
ｅ領域に関して下記のckk-c1およびckk-c2が求められ
た。
ｅ領域に関して下記のckk-c1およびckk-c2が求められ
た。
【００７３】 Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｌａ - Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｔｈｒ- Ｔｒｐ- Ａｌａ - Ｇｌｎ- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （ckk-c1） Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｓｐ - Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｓｅｒ- Ｔｈｒ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ｓｅｒ- Ｔｒｐ- Ｇｌｙ - Ｌｙｓ- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （ckk-c2）実施例２ （Ｃ型肝炎の抗原の作製）上記したＨＣＶの抗原ペプチ
ド化合物（ckk-n5）および（ckk-n6）を以下に示す方法
で合成した。
ド化合物（ckk-n5）および（ckk-n6）を以下に示す方法
で合成した。
【００７４】ペプチドの合成は、自動ペプチド合成機Ap
plied Biosystems 430A Peptide Synthesizer を用い、
t-Boc アミノ酸の対称性無水物を試薬として用いて行っ
た。得られた合成ペプチドをアニソ−ル・ジメチルサル
ファイド・パラチオクレゾ−ル内に溶解した後、フッ化
水素酸の存在下で、０〜５℃で１時間反応させて脱保護
を行った（S. Sakakibara, Bull. Chem. Soc. Jpn. 4
0, 2164（1967）参照）。
plied Biosystems 430A Peptide Synthesizer を用い、
t-Boc アミノ酸の対称性無水物を試薬として用いて行っ
た。得られた合成ペプチドをアニソ−ル・ジメチルサル
ファイド・パラチオクレゾ−ル内に溶解した後、フッ化
水素酸の存在下で、０〜５℃で１時間反応させて脱保護
を行った（S. Sakakibara, Bull. Chem. Soc. Jpn. 4
0, 2164（1967）参照）。
【００７５】脱保護により得られた粗結晶を２Ｎ酢酸に
溶解してエーテルで抽出し、抽出物を凍結乾燥した。こ
の凍結乾燥物をＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィ
ー）を用いて精製した。
溶解してエーテルで抽出し、抽出物を凍結乾燥した。こ
の凍結乾燥物をＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィ
ー）を用いて精製した。
【００７６】このＨＰＬＣ精製は、カラム（SISEIDO カ
プセルパックＣ18ＳＧ１２０、直径４６ｍｍ、長さ２５
０ｍｍ）を用い、純水中に０．１％トリフルオロ酢酸
（Trifluoroacetic acid；ＴＦＡ）と５％アセトニトリ
ル（ＣＨ3 ＣＮ）が含まれる溶液と、純水中に０．１％
ＴＦＡと５０％アセトニトリルが含まれる溶液とを用
い、流量１２ｍｌ／ｍｉｎで移動相にグラジェントをか
けることによって行った。
プセルパックＣ18ＳＧ１２０、直径４６ｍｍ、長さ２５
０ｍｍ）を用い、純水中に０．１％トリフルオロ酢酸
（Trifluoroacetic acid；ＴＦＡ）と５％アセトニトリ
ル（ＣＨ3 ＣＮ）が含まれる溶液と、純水中に０．１％
ＴＦＡと５０％アセトニトリルが含まれる溶液とを用
い、流量１２ｍｌ／ｍｉｎで移動相にグラジェントをか
けることによって行った。
【００７７】この際に得られたクロマトグラムを図４に
示す。図４中に示したメインピ−クが本実施例の合成抗
原ペプチドckk-n5である。
示す。図４中に示したメインピ−クが本実施例の合成抗
原ペプチドckk-n5である。
【００７８】上記と同様にして合成抗原ペプチドckk-n6
をＨＰＬＣを用いて精製した。この際に得られたクロマ
トグラムを図５に示す。図５中に示したメインピ−クが
本実施例の合成抗原ペプチドckk-n6である。
をＨＰＬＣを用いて精製した。この際に得られたクロマ
トグラムを図５に示す。図５中に示したメインピ−クが
本実施例の合成抗原ペプチドckk-n6である。
【００７９】上記と同様にして、上記した６種類の合成
抗原ペプチドckk-n3、ckk-n4、ckk-n1、ckk-n2、ckk-c
1、およびckk-c2を合成した。
抗原ペプチドckk-n3、ckk-n4、ckk-n1、ckk-n2、ckk-c
1、およびckk-c2を合成した。
【００８０】それぞれの精製時のＨＰＬＣクロマトグラ
ムを図６（ckk-n3）、図７（ckk-n4）、図８（ckk-n
1）、図９（ckk-n2）、図１０（ckk-c1）、および図１
１（ckk-c2）に示す。
ムを図６（ckk-n3）、図７（ckk-n4）、図８（ckk-n
1）、図９（ckk-n2）、図１０（ckk-c1）、および図１
１（ckk-c2）に示す。
【００８１】上記と同様にして、下記２種類の抗原ペプ
チドckk-n1（40）、およびckk-n2（40）を合成した。
チドckk-n1（40）、およびckk-n2（40）を合成した。
【００８２】 Ｉｌｅ- Ｉｌｅ- Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ - Ｖａｌ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｎ - Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ａｌａ - Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ｇｌｙ - Ｍｅｔ- Ｇｌｎ- Ｌｅｕ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （９）（ckk-n1(40)） Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ - Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ - Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ａｌａ - Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ａｌａ- Ｌｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ - Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｉｌｅ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （１０）（ckk-n2(40)） それぞれの精製時のＨＰＬＣクロマトグラムを図１２
（ckk-n1(40)）、および図１３（ckk-n2(40)）に示す。
（ckk-n1(40)）、および図１３（ckk-n2(40)）に示す。
【００８３】実施例３ （ELISA 用プレートの作製）実施例２で得た抗原ペプチ
ドckk-n5を、０．１５ＭＮａＣｌ−０．１０ＭＮａ2 Ｈ
ＰＯ4 - ＮａＨ2 ＰＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ緩衝液（ＰＢＳ）
ｐＨ７．０に、 ０．０４ｇ／ｍｌの濃度となるように溶
解した。このペプチド溶液を、９６−ウエルマイクロプ
レート（商品名：ELISA PLATE 68667 、ＮＵＮＣ社製）
に１ウエルあたり１００μｌずつ分注し、３７℃で６０
分間静置して上記抗原ペプチドをマイクロプレートに固
相化した。
ドckk-n5を、０．１５ＭＮａＣｌ−０．１０ＭＮａ2 Ｈ
ＰＯ4 - ＮａＨ2 ＰＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ緩衝液（ＰＢＳ）
ｐＨ７．０に、 ０．０４ｇ／ｍｌの濃度となるように溶
解した。このペプチド溶液を、９６−ウエルマイクロプ
レート（商品名：ELISA PLATE 68667 、ＮＵＮＣ社製）
に１ウエルあたり１００μｌずつ分注し、３７℃で６０
分間静置して上記抗原ペプチドをマイクロプレートに固
相化した。
【００８４】余剰の前記ペプチド溶液を除去した後、マ
イクロプレートを０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で３
回洗浄した。洗浄液を除去した後、濃度０．１％のゼラ
チンの０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）溶液を１ウエル
あたり３００μｌずつ分注し、３７℃６０分間静置して
ゼラチンをプレート上にコーティングした。余剰の前記
ゼラチン溶液を除去した後、濃度０．０５％のＴｗｅｅ
ｎ２０を含有する０．０１ＭＰＢＳ溶液（ｐＨ７．０）
で３回洗浄した。
イクロプレートを０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で３
回洗浄した。洗浄液を除去した後、濃度０．１％のゼラ
チンの０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）溶液を１ウエル
あたり３００μｌずつ分注し、３７℃６０分間静置して
ゼラチンをプレート上にコーティングした。余剰の前記
ゼラチン溶液を除去した後、濃度０．０５％のＴｗｅｅ
ｎ２０を含有する０．０１ＭＰＢＳ溶液（ｐＨ７．０）
で３回洗浄した。
【００８５】このようにしてゼラチンをコーティングし
たプレートを２５℃で６時間乾燥した後、４℃で検体分
析時まで保存した。
たプレートを２５℃で６時間乾燥した後、４℃で検体分
析時まで保存した。
【００８６】実施例４ （検体の分析）検体（約１００種類）は、予め株式会社
エスアールエル八王子ラボラトリーにおいて、前記文献
記載（Okamoto H.、肝胆膵, 24, 7-14（1992））のＰＣ
Ｒを用いる方法ＨＣＶ genotype の検査を行い、ＨＣＶ
genotypeの判定を得た。
エスアールエル八王子ラボラトリーにおいて、前記文献
記載（Okamoto H.、肝胆膵, 24, 7-14（1992））のＰＣ
Ｒを用いる方法ＨＣＶ genotype の検査を行い、ＨＣＶ
genotypeの判定を得た。
【００８７】このようにしてＰＣＲ法によりＨＣＶgeno
typeの判定を行った検体を用いて、以下のようにして実
施例２で得た抗原ペプチドの特異性を確認した。この検
討においては、実施例３で作製した抗原ペプチド固相化
マイクロプレートを用い、以下のような手順で分析を行
った。
typeの判定を行った検体を用いて、以下のようにして実
施例２で得た抗原ペプチドの特異性を確認した。この検
討においては、実施例３で作製した抗原ペプチド固相化
マイクロプレートを用い、以下のような手順で分析を行
った。
【００８８】上記した各検体をそれぞれ０．０１％ＢＳ
Ａおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する０．０１
ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で５０倍に希釈して、各ウエル
に１００μｌずつ分注して、上記抗原ペプチドと３７℃
で６０分間反応させた（抗原ペプチド−ＨＣＶ抗体の反
応）。
Ａおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する０．０１
ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で５０倍に希釈して、各ウエル
に１００μｌずつ分注して、上記抗原ペプチドと３７℃
で６０分間反応させた（抗原ペプチド−ＨＣＶ抗体の反
応）。
【００８９】反応後、マイクロプレートを０．０５％Ｔ
ｗｅｅｎ２０含有０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で５
回洗浄し、洗浄液を除去した後、濃度０．１μｇ／２０
ｍｌのペルオキシダ−ゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体（ＫＰＬ
社製）を１００μｌずつ各ウェルに注入し、３７℃で６
０分間反応させた（ＨＣＶ抗体−ＰＯＤ標識抗ヒトＩｇ
Ｇ抗体の反応）。
ｗｅｅｎ２０含有０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で５
回洗浄し、洗浄液を除去した後、濃度０．１μｇ／２０
ｍｌのペルオキシダ−ゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体（ＫＰＬ
社製）を１００μｌずつ各ウェルに注入し、３７℃で６
０分間反応させた（ＨＣＶ抗体−ＰＯＤ標識抗ヒトＩｇ
Ｇ抗体の反応）。
【００９０】反応後、マイクロプレートを０．０５％Ｔ
ｗｅｅｎ２０含有０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で５
回洗浄し、洗浄液を除去した後、各ウェルに０．０２３
％過酸化水素、および０．００５％ｏ−フェニレンジア
ミン（ＯＰＤ）を含有する０．１Ｍクエン酸−Ｎａ2 Ｈ
ＰＯ4 緩衝液を１００μｌずつ分注し３７℃で３０分間
反応させた（ペルオキシダ−ゼの活性測定反応）。反応
後、５Ｎ硫酸を５０μｌずつ添加して反応を停止させ、
波長４９１ｎｍの吸光度（ＡＢＳないしＯＤ）を分光光
度計（商品名：プレ−トリ−ダ−、日本インターメッド
社製ＮＪ−２００１）で測定した。
ｗｅｅｎ２０含有０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で５
回洗浄し、洗浄液を除去した後、各ウェルに０．０２３
％過酸化水素、および０．００５％ｏ−フェニレンジア
ミン（ＯＰＤ）を含有する０．１Ｍクエン酸−Ｎａ2 Ｈ
ＰＯ4 緩衝液を１００μｌずつ分注し３７℃で３０分間
反応させた（ペルオキシダ−ゼの活性測定反応）。反応
後、５Ｎ硫酸を５０μｌずつ添加して反応を停止させ、
波長４９１ｎｍの吸光度（ＡＢＳないしＯＤ）を分光光
度計（商品名：プレ−トリ−ダ−、日本インターメッド
社製ＮＪ−２００１）で測定した。
【００９１】実施例５ （抗原ペプチドckk-n2を用いた検体の測定）実施例３で
用いた抗原ペプチドckk-n5に代えて、実施例２で得た抗
原ペプチドckk-n6を用いた以外は、実施例３と同様にし
て抗原ペプチドckk-n6を固相化したマイクロプレートを
作製した。このようにして得たマイクロプレートを用い
た以外は実施例４と同様にして、予めＨＣＶgenotypeの
判定を行った検体（７８種類）を分析した。
用いた抗原ペプチドckk-n5に代えて、実施例２で得た抗
原ペプチドckk-n6を用いた以外は、実施例３と同様にし
て抗原ペプチドckk-n6を固相化したマイクロプレートを
作製した。このようにして得たマイクロプレートを用い
た以外は実施例４と同様にして、予めＨＣＶgenotypeの
判定を行った検体（７８種類）を分析した。
【００９２】上記実施例４および５で得られた結果をま
とめて下記（表７）に示す。
とめて下記（表７）に示す。
【００９３】
【表７】
【００９４】上記表７において、第１列は検体番号を示
し、第２列は抗原ペプチドckk-n5（NS4L2-1 ）を用いた
場合の検体の吸光度（ＯＤ値）を示し、第３列は抗原ペ
プチドckk-n6（NS4L2-2 ）を用いた場合の検体の吸光度
を示し、第４列は予め求めておいたＰＣＲ法による判定
結果（genotype）を示し、第５列は本発明の方法による
判定結果（serotype）を示す。
し、第２列は抗原ペプチドckk-n5（NS4L2-1 ）を用いた
場合の検体の吸光度（ＯＤ値）を示し、第３列は抗原ペ
プチドckk-n6（NS4L2-2 ）を用いた場合の検体の吸光度
を示し、第４列は予め求めておいたＰＣＲ法による判定
結果（genotype）を示し、第５列は本発明の方法による
判定結果（serotype）を示す。
【００９５】本発明の方法によるserotype判定において
は、第１列の吸光度（ckk-n5）と、第２列の吸光度（ck
k-n6）とを比較して、いずれか一方の値が他方の値の
１．５倍以上であった場合に、吸光度の高い方のタイプ
（ckk-n5の方であればserotype１、ckk-n6の方であれば
serotype２）とした。
は、第１列の吸光度（ckk-n5）と、第２列の吸光度（ck
k-n6）とを比較して、いずれか一方の値が他方の値の
１．５倍以上であった場合に、吸光度の高い方のタイプ
（ckk-n5の方であればserotype１、ckk-n6の方であれば
serotype２）とした。
【００９６】上記実施例４および５で得られたserotype
判定の結果をまとめて、genotype判定結果と比較したと
ころ、以下の対応関係が得られた（Hepatology, 16(4)
,886, 1992参照）。
判定の結果をまとめて、genotype判定結果と比較したと
ころ、以下の対応関係が得られた（Hepatology, 16(4)
,886, 1992参照）。
【００９７】 （表中、「genotypeＶ」は、ＰＣＲ法によるgenotype判
定において型判定不能ないし不明（混在のものを含む）
のものを示す。）実施例６ （抗原ペプチドckk-n3およびckk-n4を用いた検体の測
定）実施例３で用いた抗原ペプチドckk-n1に代えて、実
施例２で得たＮＳ５領域の抗原ペプチドckk-n3およびck
k-n4をそれぞれ用いた以外は、実施例３と同様にしてそ
れぞれの抗原ペプチドを固相化したマイクロプレートを
作製した。このようにして得たマイクロプレートを用い
た以外は実施例４と同様にして、予めＨＣＶgenotypeの
判定を行った検体（４８種類）を分析した。
定において型判定不能ないし不明（混在のものを含む）
のものを示す。）実施例６ （抗原ペプチドckk-n3およびckk-n4を用いた検体の測
定）実施例３で用いた抗原ペプチドckk-n1に代えて、実
施例２で得たＮＳ５領域の抗原ペプチドckk-n3およびck
k-n4をそれぞれ用いた以外は、実施例３と同様にしてそ
れぞれの抗原ペプチドを固相化したマイクロプレートを
作製した。このようにして得たマイクロプレートを用い
た以外は実施例４と同様にして、予めＨＣＶgenotypeの
判定を行った検体（４８種類）を分析した。
【００９８】本実施例で得られた結果をまとめて下記
（表８）に示す。
（表８）に示す。
【００９９】
【表８】
【０１００】本実施例の方法によるserotype判定におい
ては、表７の場合と同様に、第１列の吸光度（ckk-n3；
NS5L2-1 ）と、第２列の吸光度（ckk-n2；NS5L2-2 ）と
を比較して、いずれか一方の値が他方の値の１．５倍以
上であった場合に、吸光度の高い方のタイプ（ckk-n3の
方であればserotype１、ckk-n4の方であればserotype
２）とした。
ては、表７の場合と同様に、第１列の吸光度（ckk-n3；
NS5L2-1 ）と、第２列の吸光度（ckk-n2；NS5L2-2 ）と
を比較して、いずれか一方の値が他方の値の１．５倍以
上であった場合に、吸光度の高い方のタイプ（ckk-n3の
方であればserotype１、ckk-n4の方であればserotype
２）とした。
【０１０１】本実施例で得られたserotype判定の結果を
まとめて、genotype判定結果と比較したところ、実施例
４および５の結果と同様に、以下の対応関係が得られ
た。
まとめて、genotype判定結果と比較したところ、実施例
４および５の結果と同様に、以下の対応関係が得られ
た。
【０１０２】 実施例７ （抗原ペプチドckk-n1およびckk-n2を用いた検体の測
定）実施例３で用いた抗原ペプチドckk-n5に代えて、実
施例２で得たＮＳ４領域の抗原ペプチドckk-n1およびck
k-n2をそれぞれ用いた以外は、実施例３と同様にしてそ
れぞれの抗原ペプチドを固相化したマイクロプレートを
作製した。このようにして得たマイクロプレートを用い
た以外は実施例４と同様にして、予めＨＣＶgenotypeの
判定を行った検体（４５種類）を分析した。
定）実施例３で用いた抗原ペプチドckk-n5に代えて、実
施例２で得たＮＳ４領域の抗原ペプチドckk-n1およびck
k-n2をそれぞれ用いた以外は、実施例３と同様にしてそ
れぞれの抗原ペプチドを固相化したマイクロプレートを
作製した。このようにして得たマイクロプレートを用い
た以外は実施例４と同様にして、予めＨＣＶgenotypeの
判定を行った検体（４５種類）を分析した。
【０１０３】本実施例で得られた結果をまとめて下記
（表９）に示す。
（表９）に示す。
【０１０４】
【表９】
【０１０５】本実施例の方法によるserotype判定におい
ては、表７の場合と同様に、第１列の吸光度（ckk-n1；
NS4L3-1 ）と、第２列の吸光度（ckk-n2；NS4L3-2 ）と
を比較して、いずれか一方の値が他方の値の１．５倍以
上であった場合に、吸光度の高い方のタイプ（ckk-n1の
方であればserotype１、ckk-n2の方であればserotype
２）とした。
ては、表７の場合と同様に、第１列の吸光度（ckk-n1；
NS4L3-1 ）と、第２列の吸光度（ckk-n2；NS4L3-2 ）と
を比較して、いずれか一方の値が他方の値の１．５倍以
上であった場合に、吸光度の高い方のタイプ（ckk-n1の
方であればserotype１、ckk-n2の方であればserotype
２）とした。
【０１０６】本実施例で得られたserotype判定の結果を
まとめて、genotype判定結果と比較したところ、実施例
４および５の結果と同様に、以下の対応関係が得られ
た。
まとめて、genotype判定結果と比較したところ、実施例
４および５の結果と同様に、以下の対応関係が得られ
た。
【０１０７】 実施例８ （抗原ペプチドckk-c1およびckk-c2を用いた検体の測
定）実施例３で用いた抗原ペプチドckk-n5に代えて、実
施例２で得たｃｏｒｅ領域の抗原ペプチドckk-c1および
ckk-c2をそれぞれ用いた以外は、実施例３と同様にして
それぞれの抗原ペプチドを固相化したマイクロプレート
を作製した。このようにして得たマイクロプレートを用
いた以外は実施例４と同様にして、予めＨＣＶgenotype
の判定を行った検体（４２種類）を分析した。
定）実施例３で用いた抗原ペプチドckk-n5に代えて、実
施例２で得たｃｏｒｅ領域の抗原ペプチドckk-c1および
ckk-c2をそれぞれ用いた以外は、実施例３と同様にして
それぞれの抗原ペプチドを固相化したマイクロプレート
を作製した。このようにして得たマイクロプレートを用
いた以外は実施例４と同様にして、予めＨＣＶgenotype
の判定を行った検体（４２種類）を分析した。
【０１０８】本実施例で得られた結果をまとめて下記
（表１０）に示す。
（表１０）に示す。
【０１０９】
【表１０】
【０１１０】本実施例の方法によるserotype判定におい
ては、表１の場合と同様に、第１列の吸光度（ckk-c1；
core-1）と、第２列の吸光度（ckk-c2；core-2）とを比
較して、いずれか一方の値が他方の値の１．５倍以上で
あった場合に、吸光度の高い方のタイプ（ckk-c1の方で
あればserotype１、ckk-c2の方であればserotype２）と
した。
ては、表１の場合と同様に、第１列の吸光度（ckk-c1；
core-1）と、第２列の吸光度（ckk-c2；core-2）とを比
較して、いずれか一方の値が他方の値の１．５倍以上で
あった場合に、吸光度の高い方のタイプ（ckk-c1の方で
あればserotype１、ckk-c2の方であればserotype２）と
した。
【０１１１】本実施例で得られたserotype判定の結果を
まとめて、genotype判定結果と比較したところ、実施例
４および５の結果と同様に、以下の対応関係が得られ
た。
まとめて、genotype判定結果と比較したところ、実施例
４および５の結果と同様に、以下の対応関係が得られ
た。
【０１１２】 上記実施例４〜８で得られたserotype判定の結果をまと
めて図１４に示す。
めて図１４に示す。
【０１１３】図１４において、それぞれの集合を示す円
の中の数字は、それぞれの領域の抗原ペプチドを用いた
際に識別できた検体の数を示す。各集合の共通部分は、
それぞれの領域の抗原ペプチドを用いた際に共通に識別
できた検体の数を示す。
の中の数字は、それぞれの領域の抗原ペプチドを用いた
際に識別できた検体の数を示す。各集合の共通部分は、
それぞれの領域の抗原ペプチドを用いた際に共通に識別
できた検体の数を示す。
【０１１４】上述したように、genotypeＩおよび genot
ype IIは serotype Ｉと良く相関し、一方、genotype I
IIおよび genotype IVは serotype IIと良く相関してい
た。
ype IIは serotype Ｉと良く相関し、一方、genotype I
IIおよび genotype IVは serotype IIと良く相関してい
た。
【０１１５】上述したＮＳ４領域（ＮＳ４−１およびＮ
Ｓ４−２を合せたもの）、ＮＳ５領域、およびｃｏｒｅ
領域の抗原ペプチド化合物を用いたserotype判定結果を
組合わせた場合、genotypeで型判定できた検体のうち８
６％が本発明の方法によるserotype判定が可能であっ
た。
Ｓ４−２を合せたもの）、ＮＳ５領域、およびｃｏｒｅ
領域の抗原ペプチド化合物を用いたserotype判定結果を
組合わせた場合、genotypeで型判定できた検体のうち８
６％が本発明の方法によるserotype判定が可能であっ
た。
【０１１６】実施例９ （抗原ペプチドckk-n1（40）およびckk-n2（40）を用い
た検体の測定）実施例３で用いた抗原ペプチドckk-n5に
代えて、実施例２で得たＮＳ４領域の抗原ペプチドckk-
n1（40）およびckk-n2（40）（アミノ酸数４０）をそれ
ぞれ用いた以外は、実施例３と同様にしてそれぞれの抗
原ペプチドを固相化したマイクロプレートを作製した。
た検体の測定）実施例３で用いた抗原ペプチドckk-n5に
代えて、実施例２で得たＮＳ４領域の抗原ペプチドckk-
n1（40）およびckk-n2（40）（アミノ酸数４０）をそれ
ぞれ用いた以外は、実施例３と同様にしてそれぞれの抗
原ペプチドを固相化したマイクロプレートを作製した。
【０１１７】このようにして得たマイクロプレートを用
いた以外は実施例４と同様にして、予め実施例４（抗原
ペプチドckk-n5使用）、および実施例５（抗原ペプチド
ckk-n6使用）の方法でＨＣＶserotypeの判定を行った検
体（１００種類）を分析した。該１００種類の検体の内
訳は、ＣＡＨ（慢性活動型肝炎）患者の検体８３種類、
およびＣＰＨ（慢性持続性肝炎）患者の検体１７種類で
あった。
いた以外は実施例４と同様にして、予め実施例４（抗原
ペプチドckk-n5使用）、および実施例５（抗原ペプチド
ckk-n6使用）の方法でＨＣＶserotypeの判定を行った検
体（１００種類）を分析した。該１００種類の検体の内
訳は、ＣＡＨ（慢性活動型肝炎）患者の検体８３種類、
およびＣＰＨ（慢性持続性肝炎）患者の検体１７種類で
あった。
【０１１８】本実施例で得られた結果をまとめて下記
（表１１）に示す。表１１においては、実施例４および
５の方法（ＮＳ４抗原ペプチドとして、アミノ酸数が２
０のckk-n5およびckk-n6を使用）による判定結果を「Ｎ
Ｓ４（２０）」として表し、本実施例の方法（ＮＳ４抗
原ペプチドとして、アミノ酸数が４０のckk-n1(40)およ
びckk-n2(40)を使用）による判定結果を「ＮＳ４（４
０）」として表した。
（表１１）に示す。表１１においては、実施例４および
５の方法（ＮＳ４抗原ペプチドとして、アミノ酸数が２
０のckk-n5およびckk-n6を使用）による判定結果を「Ｎ
Ｓ４（２０）」として表し、本実施例の方法（ＮＳ４抗
原ペプチドとして、アミノ酸数が４０のckk-n1(40)およ
びckk-n2(40)を使用）による判定結果を「ＮＳ４（４
０）」として表した。
【０１１９】
【表１１】
【０１２０】本実施例の方法による上記serotype判定に
おいては、表１の場合と同様に、ckk-n1(40)を用いた場
合の吸光度と、ckk-n2(40)を用いた場合の吸光度とを比
較して、いずれか一方の値が他方の値の１．５倍以上で
あった場合に、吸光度の高い方のタイプ（ckk-n1(40)の
方であればserotype１、ckk-n2(40)の方であればseroty
pe２）とした。
おいては、表１の場合と同様に、ckk-n1(40)を用いた場
合の吸光度と、ckk-n2(40)を用いた場合の吸光度とを比
較して、いずれか一方の値が他方の値の１．５倍以上で
あった場合に、吸光度の高い方のタイプ（ckk-n1(40)の
方であればserotype１、ckk-n2(40)の方であればseroty
pe２）とした。
【０１２１】上記表１１に示したように、ＣＡＨの検体
（８３種類）ではＮＳ４（２０）の場合の判定率が６２
％（＝５２÷８３）であったものが、ＮＳ４（４０）の
場合の判定率８３％（＝６９÷８３）へと向上した。一
方、ＣＰＨの検体（１７種類）ではＮＳ４（２０）の場
合の判定率７５％（＝１３÷１７）であったものが、Ｎ
Ｓ４（４０）の場合の判定率８８％（＝１５÷１７）へ
と向上した。
（８３種類）ではＮＳ４（２０）の場合の判定率が６２
％（＝５２÷８３）であったものが、ＮＳ４（４０）の
場合の判定率８３％（＝６９÷８３）へと向上した。一
方、ＣＰＨの検体（１７種類）ではＮＳ４（２０）の場
合の判定率７５％（＝１３÷１７）であったものが、Ｎ
Ｓ４（４０）の場合の判定率８８％（＝１５÷１７）へ
と向上した。
【０１２２】実施例１０ ＣＨ２Ａ（慢性活動型肝炎ＣＡＨであって、後述するＣ
Ｈ２Ｂより進行していないもの）患者の検体４８種類、
ＣＨ２Ｂ（慢性活動型肝炎ＣＡＨであって、前記ＣＨ２
Ａより進行したもの）患者の検体３６種類、およびＣＰ
Ｈ（慢性持続性肝炎）患者の検体１７種類を用いて、se
rotypeの判定（実施例９と同様の方法で実施、下記表に
おいて「TYPE」として示す）、genotype（実施例４と同
様の方法で実施、下記表において「SUBTYPE 」として示
す）、およびインターフェロン（ＩＦＮ）の有効性の程
度（下記表において、Ｎ＝効果なし、Ｐ（partially ef
fective ）＝有効、およびＣ（completely effective）
＝著効）の判定を行った。
Ｈ２Ｂより進行していないもの）患者の検体４８種類、
ＣＨ２Ｂ（慢性活動型肝炎ＣＡＨであって、前記ＣＨ２
Ａより進行したもの）患者の検体３６種類、およびＣＰ
Ｈ（慢性持続性肝炎）患者の検体１７種類を用いて、se
rotypeの判定（実施例９と同様の方法で実施、下記表に
おいて「TYPE」として示す）、genotype（実施例４と同
様の方法で実施、下記表において「SUBTYPE 」として示
す）、およびインターフェロン（ＩＦＮ）の有効性の程
度（下記表において、Ｎ＝効果なし、Ｐ（partially ef
fective ）＝有効、およびＣ（completely effective）
＝著効）の判定を行った。
【０１２３】結果を下記（表１２）に示す。
【０１２４】
【表１２】
【０１２５】更に、上記表１２に示した検体と同じ検体
について、ＮＳ５領域抗原ペプチドを用いた方法（実施
例６の方法）、およびｃｏｒｅ領域抗原ペプチドを用い
た方法（実施例８の方法）によるserotype判定を併せて
行った。結果を下記（表１３）に示す（本実施例におけ
る上記「ＮＳ４領域抗原ペプチド」たるckk-n1(40)およ
びckk-n2(40)を用いた場合の判定結果は、「ＮＳ４」と
して示した）。
について、ＮＳ５領域抗原ペプチドを用いた方法（実施
例６の方法）、およびｃｏｒｅ領域抗原ペプチドを用い
た方法（実施例８の方法）によるserotype判定を併せて
行った。結果を下記（表１３）に示す（本実施例におけ
る上記「ＮＳ４領域抗原ペプチド」たるckk-n1(40)およ
びckk-n2(40)を用いた場合の判定結果は、「ＮＳ４」と
して示した）。
【０１２６】
【表１３】
【０１２７】なお、上記表１３中、ＣＨ２Ａ（４０検
体）およびＣＨ２Ｂ（２９検体）の検体数を合計した数
が、前記表１１のＮＳ４（４０）判定数（６９検体）に
対応している。
体）およびＣＨ２Ｂ（２９検体）の検体数を合計した数
が、前記表１１のＮＳ４（４０）判定数（６９検体）に
対応している。
【０１２８】上記実施例９〜１０で得られたserotype判
定の結果をまとめて図１５（ＣＰＨ検体）、図１６（Ｃ
ＡＨ２Ａ検体）、および図１７（ＣＡＨ２Ｂ検体）にそ
れぞれ示す。図１３〜１５では、「ＮＳ４領域抗原ペプ
チド」たるckk-n1(40)およびckk-n2(40)を用いた際の判
定結果は、「ＮＳ４」として示してある。
定の結果をまとめて図１５（ＣＰＨ検体）、図１６（Ｃ
ＡＨ２Ａ検体）、および図１７（ＣＡＨ２Ｂ検体）にそ
れぞれ示す。図１３〜１５では、「ＮＳ４領域抗原ペプ
チド」たるckk-n1(40)およびckk-n2(40)を用いた際の判
定結果は、「ＮＳ４」として示してある。
【０１２９】図１５〜１７において、それぞれの集合を
示す円の中の数字は、それぞれの領域の抗原ペプチドを
用いた際に識別できた検体の数を示す。各集合の共通部
分は、それぞれの領域の抗原ペプチドを用いた際に共通
に識別できた検体の数を示す。
示す円の中の数字は、それぞれの領域の抗原ペプチドを
用いた際に識別できた検体の数を示す。各集合の共通部
分は、それぞれの領域の抗原ペプチドを用いた際に共通
に識別できた検体の数を示す。
【０１３０】
【発明の効果】上述したように本発明によれば、ＨＣＶ
に固有の特定のアミノ酸配列を有する抗原ペプチド化合
物およびこれを用いるＨＣＶ抗体測定方法が提供され
る。
に固有の特定のアミノ酸配列を有する抗原ペプチド化合
物およびこれを用いるＨＣＶ抗体測定方法が提供され
る。
【０１３１】本発明によれば、交叉反応ないし非特異反
応を抑制しつつ検体のserotypeを簡便且つ正確に判定す
ることが可能となる。したがって本発明によれば、正確
且つ簡便なserotype判定に基づき、例えば、インターフ
ェロン治療の効果をあらかじめ予測することが可能とな
る。
応を抑制しつつ検体のserotypeを簡便且つ正確に判定す
ることが可能となる。したがって本発明によれば、正確
且つ簡便なserotype判定に基づき、例えば、インターフ
ェロン治療の効果をあらかじめ予測することが可能とな
る。
【０１３２】更には、本発明によるＨＣＶ抗体価測定に
基づき、Ｃ型肝炎の治癒ないし治療経過を簡便に観察す
ることが可能となる。
基づき、Ｃ型肝炎の治癒ないし治療経過を簡便に観察す
ることが可能となる。
【図１】実施例１において、ＨＣＶのｃｏｒｅ領域に関
しHydrophilicity Value、Hydropathy Value、およびAn
tigenicity Valueを計算により求めた結果を示すグラフ
である。
しHydrophilicity Value、Hydropathy Value、およびAn
tigenicity Valueを計算により求めた結果を示すグラフ
である。
【図２】実施例１において、ＨＣＶのＮＳ４領域に関し
Hydrophilicity Value、Hydropathy Value、およびAnti
genicity Valueを計算により求めた結果を示すグラフで
ある。
Hydrophilicity Value、Hydropathy Value、およびAnti
genicity Valueを計算により求めた結果を示すグラフで
ある。
【図３】実施例１において、ＨＣＶのＮＳ５領域に関し
Hydrophilicity Value、Hydropathy Value、およびAnti
genicity Valueを計算により求めた結果を示すグラフで
ある。
Hydrophilicity Value、Hydropathy Value、およびAnti
genicity Valueを計算により求めた結果を示すグラフで
ある。
【図４】実施例２において得られた抗原ペプチド化合物
（１）（ckk-n5）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマトグ
ラムである。
（１）（ckk-n5）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマトグ
ラムである。
【図５】実施例２において得られた抗原ペプチド化合物
（２）（ckk-n6）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマトグ
ラムである。
（２）（ckk-n6）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマトグ
ラムである。
【図６】実施例２において得られた抗原ペプチド化合物
（３）（ckk-n3）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマトグ
ラムである。
（３）（ckk-n3）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマトグ
ラムである。
【図７】実施例２において得られた抗原ペプチド化合物
（４）（ckk-n4）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマトグ
ラムである。
（４）（ckk-n4）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマトグ
ラムである。
【図８】実施例２において得られた抗原ペプチド化合物
（５）（ckk-n1）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマトグ
ラムである。
（５）（ckk-n1）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマトグ
ラムである。
【図９】実施例２において得られた抗原ペプチド化合物
（６）（ckk-n2）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマトグ
ラムである。
（６）（ckk-n2）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマトグ
ラムである。
【図１０】実施例２において得られた抗原ペプチド化合
物（７）（ckk-c1）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマト
グラムである。
物（７）（ckk-c1）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマト
グラムである。
【図１１】実施例２において得られた抗原ペプチド化合
物（８）（ckk-c2）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマト
グラムである。
物（８）（ckk-c2）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロマト
グラムである。
【図１２】実施例２において得られた抗原ペプチド化合
物（９）（ckk-n1(40)）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロ
マトグラムである。
物（９）（ckk-n1(40)）のＨＰＬＣ分析結果を示すクロ
マトグラムである。
【図１３】実施例２において得られた抗原ペプチド化合
物（１０）（ckk-n2(40)）のＨＰＬＣ分析結果を示すク
ロマトグラムである。
物（１０）（ckk-n2(40)）のＨＰＬＣ分析結果を示すク
ロマトグラムである。
【図１４】実施例４ないし８で得られたserotype判定結
果をまとめた集合を表す図である。
果をまとめた集合を表す図である。
【図１５】実施例９ないし１０で得られたＣＰＨ検体に
関するserotype判定結果をまとめた集合を表す図であ
る。
関するserotype判定結果をまとめた集合を表す図であ
る。
【図１６】実施例９ないし１０で得られたＣＡＨ２Ａ検
体に関するserotype判定結果をまとめた集合を表す図で
ある。
体に関するserotype判定結果をまとめた集合を表す図で
ある。
【図１７】実施例９ないし１０で得られたＣＡＨ２Ｂ検
体に関するserotype判定結果をまとめた集合を表す図で
ある。
体に関するserotype判定結果をまとめた集合を表す図で
ある。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/08 9161−4Ｂ Ｃ１２Ｑ 1/70 9453−4Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 33/576 Ｚ // Ａ６１Ｋ 39/395 Ｄ
Claims (18)
- 【請求項１】 下記式（１）で示される配列に含まれる
アミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個のアミ
ノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペプチド
化合物。 Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ- Ｖａｌ- Ｐｒｏ - Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ - Ａｓｐ- Ｇｌｕ ・・・・・・・（１）（ckk-n5） - 【請求項２】 下記式（２）で示される配列に含まれる
アミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個のアミ
ノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペプチド
化合物。 Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ - Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ - Ａｓｐ- Ｇｌｕ・・・・・・・・・・（２）（ckk-n6） - 【請求項３】 下記式（３）で示される配列に含まれる
アミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個のアミ
ノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペプチド
化合物。 Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ｓｅｒ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ - Ａｌａ- Ａｓｐ- Ｌｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ - Ｔｒｐ- Ａｒｇ・・・・・・・・・・（３）（ckk-n3） - 【請求項４】 下記式（４）で示される配列に含まれる
アミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個のアミ
ノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペプチド
化合物。 Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ａｌａ- Ｔｙｒ- Ａｓｐ - Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ｍｅｔ- Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｐｈｅ - Ｍｅｔ- Ｇｌｙ・・・・・・・・・・・ （４）（ckk-n4） - 【請求項５】 下記式（５）で示される配列に含まれる
アミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個のアミ
ノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペプチド
化合物。 Ｇｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ - Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ - Ｇｌｙ- Ｍｅｔ・・・・・・・・・・・ （５）（ckk-n1） - 【請求項６】 下記式（６）で示される配列に含まれる
アミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個のアミ
ノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペプチド
化合物。 Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ - Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ａｌａ- Ｌｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ - Ｇｌｙ- Ｇｌｎ・・・・・・・・・・・ （６）（ckk-n2） - 【請求項７】 下記式（７）で示される配列に含まれる
アミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個のアミ
ノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペプチド
化合物。 Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｌａ - Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｔｈｒ- Ｔｒｐ- Ａｌａ - Ｇｌｎ- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （７） - 【請求項８】 下記式（８）で示される配列に含まれる
アミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個のアミ
ノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペプチド
化合物。 Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｓｐ - Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｓｅｒ- Ｔｈｒ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ｓｅｒ- Ｔｒｐ- Ｇｌｙ - Ｌｙｓ- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （８） - 【請求項９】 下記式（９）で示される配列に含まれる
アミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個のアミ
ノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペプチド
化合物。 Ｉｌｅ- Ｉｌｅ- Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ - Ｖａｌ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｎ - Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ａｌａ - Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ｇｌｙ - Ｍｅｔ- Ｇｌｎ- Ｌｅｕ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （９）（ckk-n1(40)） - 【請求項１０】 下記式（１０）で示される配列に含ま
れるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個の
アミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペプ
チド化合物。 Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ - Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ - Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ａｌａ - Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ａｌａ- Ｌｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ - Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｉｌｅ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （１０）（ckk-n2(40)） - 【請求項１１】 化学的手法を用いて製造した請求項１
ないし１０のいずれかに記載の抗原ペプチド化合物。 - 【請求項１２】 遺伝子工学的手法を用いて製造した請
求項１ないし１０のいずれかに記載の抗原ペプチド化合
物。 - 【請求項１３】 請求項１ないし１０のいずれかに記載
の抗原ペプチドを担体に結合させ、抗原−抗体反応を利
用して該ペプチドに検体中のＨＣＶ抗体を結合させ、更
に抗原−抗体反応を利用して該ＨＣＶ抗体に標識リガン
ドを結合させることにより、上記検体中のＨＣＶ抗体を
測定することを特徴とするＨＣＶ抗体の免疫学的測定
法。 - 【請求項１４】 前記標識リガンドとして、酵素で標識
したリガンドを用いる請求項１３記載のＨＣＶ抗体の免
疫学的測定法。 - 【請求項１５】 前記標識リガンドとして、放射性物質
で標識したリガンドを用いる請求項１３記載のＨＣＶ抗
体の免疫学的測定法。 - 【請求項１６】 前記標識リガンドとして、蛍光物質で
標識したリガンドを用いる請求項１３記載のＨＣＶ抗体
の免疫学的測定法。 - 【請求項１７】 請求項１ないし１０のいずれかに記載
の抗原ペプチドから選択されたいずれか２以上の抗原ペ
プチドを用いて、ＨＣＶのセロタイプ（serotype）を判
定する請求項１３記載のＨＣＶ抗体の免疫学的測定法。 - 【請求項１８】 請求項１ないし１０のいずれかに記載
のＨＣＶのＮＳ４領域、ＮＳ５領域、およびｃｏｒｅ領
域に対応する抗原ペプチドから選択された、異なる領域
に対応する２以上の抗原ペプチドを用いて、ＨＣＶのセ
ロタイプ（serotype）を判定する請求項１３記載のＨＣ
Ｖ抗体の免疫学的測定法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP94931183A EP0729973A4 (en) | 1993-10-29 | 1994-10-28 | ANTIGENIC PEPTIDE COMPOUND AND IMMUNOLOGICAL ASSAY METHOD |
| PCT/JP1994/001823 WO1995011918A1 (fr) | 1993-10-29 | 1994-10-28 | Compose peptidique antigenique et methode de dosage immunologique |
| US08/617,929 US5885771A (en) | 1993-10-29 | 1994-10-28 | Antigenic peptide compound and immunoassay |
| AU80038/94A AU8003894A (en) | 1993-10-29 | 1994-10-28 | Antigen peptide compound and immunoassay method |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27286493 | 1993-10-29 | ||
| JP5-272864 | 1993-10-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07179493A true JPH07179493A (ja) | 1995-07-18 |
Family
ID=17519834
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20769594A Pending JPH07179493A (ja) | 1993-10-29 | 1994-08-31 | 抗原ペプチド化合物および免疫学的測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07179493A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997008198A1 (fr) * | 1995-08-31 | 1997-03-06 | Srl, Inc. | Composes a base de peptides antigeniques et procede de dosage immunologique |
-
1994
- 1994-08-31 JP JP20769594A patent/JPH07179493A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997008198A1 (fr) * | 1995-08-31 | 1997-03-06 | Srl, Inc. | Composes a base de peptides antigeniques et procede de dosage immunologique |
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Effective date: 20040817 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 |
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